Practica N 11

Fotosíntesis

Objetivos

- Extraer los pigmentos fotosintéticos y separarlos mediante técnicas

cromatografíca.
- Poner de manifiesto la presencia de clorofila
- demostrar la necesidad de luz para la fotosíntesis
- lograr la sustitución del magnesio por otros elementos

Materiales

Didácticos
- guía de practicas
- Apuntes de clase
- textos

De laboratorio

- balanza
- morteros
- Placas petri
- espatulas
- embudos
- hilo
- soporte de embudos
- proyector
- Lámpara U.V.
- vasos
- pipetas
- baguetas
toluol
- gradillas
- regla milimetrada
- lápiz
- etiquetas
- tijeras
- sulfato de cobre
- acido acético
- agua destilada
- papel filtro
- papel watman n° 1
- tubos
- solventes: etanol, acetona, éter, cloroformo, y

Biológicos

-hojas de espinaca
-hojas de maíz

Experimento N°43: separación de pigmentos vegetales por cromatografía sobre papel

- lavar la hojas de espinaca, retirar los nervios y ponerlas en un mortero, junto con
alcohol y una pequeña cantidad de carbonato de calcio (que evite la degradación
de los pigmentos fotosintéticos
- triturar la mezcla hasta que las hojas se decoloren y hasta que el disolvente
adquiere un verde intenso-
 - filtrar con un embudo y papel filtro
- colocar el filtrado en una placa petri y sobre ella poner un rectángulo de papel
whatman N° 1 de unos 15cm, de ancho x 10 cm. De alto doblado en V para q se
mantenga en pie sobre la placa petri
- dejar asi el montaje y esperar unas horas. Los pigmentos de separaran según su
absorción
- debe utilizarse 5g d hoja de espinaca y no más de 100ml de etanol agregando
silica-gel para triturar

Esquemas
Resultados:

Discusión:

Cuestionario:

1. ¿Por qué los pigmentos se separan en el papel cromatografico?

El extracto de pigmentos es arrastrado por un disolvente orgánico que

avanza por el papel al ser absorbido por capilaridad, de modo que cada
pigmento se separa de los demás según su mayor o menor solubilidad
en el disolvente y la diferente atracción por el sustrato (las mas solubles
se desplazaran a mayor velocidad, pues acompañaran más fácilmente al
disolvente a medida que este asciende, las menos solubles avanzaran
menos en el papel filtro).

2. ¿si se utilizan otros solventes el cromatograma sería igual o diferente?

Sería diferente debido a la existencia de solventes polares y no polares. Con el

etanol se extraen los compuestos polares y con el éter se extraen los componentes
no polares debido a que componentes polares (etanol) disuelven compuestos polares
(aminoácidos) y componentes no polares(éter) disuelven componentes no
polares(carotenos y vitaminas liposolubles).

3. ¿Cuáles son las diferencias químicas y físicas de los pigmentos que observo en esta
experiencia?

La clorofila a es un complejo magnesio-porfirínico compuesto por un

tetra pirrol cíclico (I a IV) que posee un anillo de cíclopentanora (V)
fusionado. Los cuatro átomos de N de los anillos pirríticos están
coordinados con un átomo de magnesio formando un complejo glanar
estable. La molécula de clorofila posee, además, una cadena terpenoide
constituida por el alcohol fitol, que se encuentra esterificando a un
residuo de propionato, sustituyente de uno de los anillos pirrilicos (IV).
Este alcohol de cadena larga, compuesto de cuatro unidades de
isopreno, confiere a la molécula de clorofila la característica de ser
altamente hidrofóbica. La clorofila b difiere de la clorofila a en que
contiene como sustituyente un grupo formilo (-CHO) en vez de mitilo (-
CH3) en el anillo pirrólico II.

Los carotenoides son tetraterpenoides, compuestos de 40 átomos de

carbono formados por ocho unidades isoprenoides unidas de forma que
la secuencia se invierte en el centro de la molécula.

Propiedades físico-químicas
Los carotenoides son compuestos lipídicos, aunque existen algunas
 excepciones, por lo que son insolubles en agua y solubles en disolventes
orgánicos como acetona, metanol, éter dietílico, hexano, cloroformo, etc.

Experimento N° 44: necesidad de luz para la fotosíntesis

Observar el color del extracto restante con luz emitida por lámpara ultravioleta o un
proyector

Esquemas

Cuestionario:

1.- ¿Cuáles son los pigmentos fotosintéticos que poseen fluorescencia y porque?

Clorofila A y B y los pigmentos accesorios. Cuando una molécula de clorofila

capta un fotón de luz, un electrón pasa de su estado basal a otro excitado, de
mayor nivel energético. Este estado excitado de la clorofila es estable por muy
poco tiempo (10-9 seg.) e inmediatamente pueden suceder una de estas tres
transiciones: transferir la energía a otra molécula de clorofila y así
sucesivamente hasta que se alcanza el centro de reacción del fotosistema
correspondiente (PSI o PSII).; retornar a su nivel básico emitiendo la energía en
forma de calor y no emitiendo ningún tipo de fotón, o en lugar de volver a su
estado básico emitiendo calor emitir un fotón de mayor longitud de onda que la
absorbida en un proceso que se conoce como fluorescencia (Lambers et al.
1998). Cualquiera de estas tres transiciones tiene como consecuencia la
disipación de la energía absorbida. La mayor parte de la fluorescencia que es
emitida por la clorofila proviene de la clorofila a del PSII. La cantidad de
fluorescencia emitida es una forma de medida de la eficiencia de la
transferencia de los electrones; ésta incrementa si la transferencia o el proceso
fotoquímico está limitado por algún factor o en condiciones de luz excesiva,
produciéndose una sobrecarga de electrones excitados cuyo destino puede ser
muy dañino para la propia célula.

Resultados

Discusión

Experimento N° 45: necesidad de luz para la fotosíntesis.

Hervir en alcohol hojas de procedentes de oscuridad y hojas procedentes de la luz cuando

dichas hijas estén totalmente decoloradas, someterlos a la reacción de lugar dentro de una
caja petri.

Esquemas

Resultados

Discusión

Experimento N° 46: sustitución del magnesio (mg)

Diluía el extracto alcohólico crudo con alcohol etílico de 95% hasta que colocado en un
tubo de ensayo aparezca un verde claro, bien transparente. Con esta disolución haga las
siguientes mezclas

1. 5ml del extracto + 1ml H2O (control)

2. 5ml del extracto + 1ml de acido acético glacial
3. 5ml del extracto + 1ml de sulfato de cobre al 5%
Esquemas

Resultados

Tubo Después de varias horas coloración

1
2
3

Discusión
Experimento N° 47: producción de oxigeno por la fotosíntesis

Llenar un tubo de ensayo con solución de bicarbonato de sodio concentrado que contiene
una hoja de una monocotiledonia C4(maíz). Sumergir todo este sistema dentro de un
depósito que contiene la misma solución. El tubo con la hoja de maíz debe ser introducido
en posición invertida

Esquemas

Resultados

Discusión