Elektroforesis gel protein adalah teknik laboratorium yang

memisahkan protein berdasarkan massanya. Teknik ini mirip

dengan menjalankan gel agarosa untuk memisahkan dan
memvisualisasikan molekul DNA yang berbeda. Berbeda
dengan DNA, sampel protein pertama-tama direbus dalam
buffer sampel yang mengandung SDS, yang membuka
polipeptida dan menutupinya dengan muatan negatif. Setelah
mendidih, sampel dimasukkan ke dalam gel poliakrilamida.
Arus listrik yang diterapkan memungkinkan protein yang
lebih kecil bermigrasi lebih jauh ke gel seperti saringan dan
memisahkannya dari yang lebih besar.
Setelah elektroforesis, protein yang tidak terlihat biasanya
divisualisasikan dengan pewarnaan gel dengan Coomassie,
yang menghasilkan pola gel protein khas pita biru. Namun,
ketika menjalankan sampel dengan banyak protein, seperti
seluruh ekstrak seluler, visualisasi protein individu bisa sangat
rumit karena ratusan atau ribuan protein lain dapat
mengaburkan pita protein yang Anda minati.
Dalam hal ini, Western blotting digunakan, teknik umum yang
memungkinkan deteksi spesifik hanya satu protein di antara
banyak protein dengan bantuan antibodi spesifik. Western
blotting adalah teknik rutin untuk menguji ekspresi protein
gen tertentu dalam sel.

REKAP SIMULASI

• Dalam simulasi ini Anda memperlakukan sampel kultur sel

Anda dengan bufer sampel SDS dan memanaskannya untuk
memastikan lisis sel dan denaturasi semua protein seluler.
SDS melapisi protein terdenaturasi dengan muatan negatif.
• Setelah memuat sampel dan kontrol Anda pada gel protein,
Anda memisahkan protein menurut berat molekulnya dengan
menerapkan arus listrik. Karena protein tidak terlihat, cari
bagian depan pewarna biru dan tangga protein yang mencapai
bagian bawah gel sebagai indikator kapan elektroforesis harus
dihentikan.
• Untuk memvisualisasikan pita protein Anda, SDS-PAGE
biasanya akan diikuti dengan pewarnaan Coomassie atau
langkah Western blot. Western blotting memastikan deteksi
spesifik protein yang Anda minati, sedangkan Coomassie
menodai semua protein.

pesan bawa pulang

1. hindari memanaskan sampel Anda dengan tutup tabung
terbuka karena buffer sampel akan mendidih, membuat
sampel Anda tidak dapat digunakan
2. Selalu pastikan Anda menambahkan buffer yang cukup di
kedua ruang kotak elektroforesis untuk mencapai sumur serta
bagian bawah gel. Ini memastikan bahwa arus listrik akan
mengalir untuk memisahkan protein bermuatan negatif
berdasarkan massa.
3. Lepaskan sisir dari sumur gel.
4. Anda dapat memeriksa apakah elektroforesis telah dimulai
dengan mencari gelembung di bagian bawah kotak
elektroforesis.
5. Jika Anda menghilangkan bagian depan biru dari gel, Anda
mungkin kehilangan protein yang Anda minati