Penggunaan enzim dalam aplikasi industri telah dibatasi oleh beberapa faktor:

- tingginya biaya enzim - ketidakstabilan - ketersediaan dalam jumlah kecil. - larut dalam media
berair dan sulit dan mahal untuk memulihkannya dari limbah reaktor pada akhir proses katalitik

Perkembangan teknologi di bidang biokatalis amobil dapat menawarkan kemungkinan eksploitasi

biokatalis yang lebih luas dalam industri, pengolahan limbah, obat-obatan, dan dalam
pengembangan perangkat pemantauan bioproses seperti biosensor

IMMOBILISASI

Definisi: Imobilisasi berarti bahwa biokatalis terbatas dalam bergerak karena perlakuan kimia atau
fisik  transformasi enzim menjadi bentuk yang tidak dapat larut atau dimasukkan ke ruang tertentu
 metode untuk digunakan kembali dan stabilisasi enzim  reaksi satu langkah - domain enzim
terimobilisasi Daya tarik dari enzim amobil dari sudut pandang analitis terutama adalah reuseability
mereka dan karenanya menghemat biaya, dan efisiensi yang lebih besar dan kontrol aktivitas
katalitik mereka (misalnya, berpotensi setengah hidup, laju peluruhan yang dapat diprediksi dan
reaksi multi-langkah yang lebih efisien).

ENZIM IMOBILISASI

Enzim amobil adalah enzim yang melekat pada bahan inert, tidak larut seperti kalsium alginat
(diproduksi dengan mereaksikan campuran larutan natrium alginat dan larutan enzim dengan
kalsium klorida).

Ini dapat meningkatkan resistensi terhadap perubahan kondisi seperti pH atau suhu.

 Ini juga memungkinkan enzim untuk ditahan di seluruh reaksi, setelah itu mereka mudah
dipisahkan dari produk dan dapat digunakan lagi - proses yang jauh lebih efisien dan banyak
digunakan dalam industri untuk reaksi.

Alternatif imobilisasi enzim adalah imobilisasi sel utuh

KEUNTUNGAN DARI ENZYME YANG DIMOBILISASI

- Pengembangan proses berkesinambungan yang memungkinkan lebih banyak organisasi ekonomi

dari operasi, otomatisasi, pengurangan tenaga kerja, dan rasio investasi / kapasitas. -Ketersediaan
produk dalam kemurnian yang lebih besar. Kemurnian produk sangat penting dalam pengolahan
makanan dan industri farmasi karena kontaminasi dapat menyebabkan masalah toksikologi,
sensorik, atau imunologi yang serius. - Kontrol yang lebih besar atas reaksi enzimatik serta
produktivitas volumetrik yang tinggi dengan waktu tinggal yang lebih rendah, yang sangat penting
dalam industri makanan, khususnya dalam pengolahan komoditas yang mudah rusak serta dalam
aplikasi lain yang melibatkan substrat labil, zat antara atau produk.

Penggunaan komersial

Enzim yang diimobilisasi sangat penting untuk penggunaan komersial karena mereka memiliki
banyak manfaat untuk biaya dan proses reaksi yang meliputi:

Kenyamanan: Sejumlah kecil protein larut dalam reaksi, sehingga pemeriksaan bisa lebih mudah.
Setelah selesai, campuran reaksi biasanya hanya mengandung produk pelarut dan reaksi.
Ekonomis: Enzim amobil mudah dihilangkan dari reaksi sehingga mudah untuk mendaur ulang
biokatalis.

Stabilitas: Enzim yang dimobilisasi biasanya memiliki stabilitas termal dan operasional yang lebih
besar daripada bentuk enzim yang dapat larut

Aspek prosedur imobilisasi:

1. Sifat-sifat enzim bebas. 2. Jenis dukungan yang digunakan. 3. Metode dukungan aktivasi dan
perlekatan enzim.

Sifat-sifat Enzim Bebas

 Sumber enzim

 Kemurnian (dan metode pemurnian)

 Aktivitas katalitik dan detail konstituen lain - - dll.

Informasi di atas memungkinkan perbandingan langsung enzim dari sumber yang berbeda.

2. Dukungan Enzim

Bahan pendukung dapat memiliki efek penting pada stabilitas enzim dan efisiensi imobilisasi enzim.

Persyaratan yang paling penting untuk bahan pendukung adalah bahwa bahan tersebut harus tidak
larut dalam air, memiliki kapasitas tinggi untuk mengikat enzim, bersifat inert secara kimia dan stabil
secara mekanis.

Kapasitas pengikatan enzim ditentukan oleh luas permukaan yang tersedia, baik internal (ukuran
pori) dan eksternal (ukuran manik-manik atau diameter tabung), kemudahan dengan mana
dukungan dapat diaktifkan dan kepadatan yang dihasilkan dari situs pengikatan enzim.

Parameter Imobilisasi Enzim

Efektif, mudah, murah, dapat diterima (tidak beracun dalam makanan dan aplikasi medis) Tingkat
dan hasil tergantung pada parameter yang terlibat (misalnya, jenis pembawa, konsentrasi, pH, suhu,
metode, waktu reaksi) Optimalisasi empiris Sifat permukaan protein eksternal ( misalnya, hidrofobik,
gugus ionik, gugus fungsional untuk ikatan kovalen) Rekayasa permukaan protein Pengenalan gugus
fungsional meningkatkan interaksi penjilidan, stabilitas (mis. partikel nano, melindungi molekul) dan
aktivitas (misalnya kofaktor)

Metode Enzim Immobilisasi

1. Adsorpsi pada kaca, manik-manik alginat atau matriks:

Enzim melekat pada bagian luar bahan inert. Secara umum, metode ini adalah yang paling lambat di
antara yang tercantum di sini. Karena adsorpsi bukan reaksi kimia, situs aktif enzim yang
diimobilisasi dapat dihambat oleh matriks atau manik, sehingga sangat mengurangi aktivitas enzim.

Muatan permukaan dan hidrofilisitas harus dipertimbangkan.

Adsorpsi

- Mengikat silika, tanah liat, atau bahan penukar ion melalui interaksi yang lemah (mis. Ionik,
elektrostatik, hidrofobik) - Bergantung pada kondisi proses (misalnya, pH, suhu, kekuatan ion,
hidrofobik) - Sederhana dan hemat biaya, dapat dibalikkan (distabilkan oleh cross-linking), tetapi
dapat menyebabkan enzim berlangsung

I n o r g a n i c Ca r r i e r s

Stability Stabilitas tekanan tinggi 􀂉 Dapat mengalami abrasi pada bejana yang diaduk 􀂉 Pembawa
berbasis SiO2 difungsikan dengan memasukkan gugus amino (mis., Memperlakukan dengan
aminopropyl triethoxysilane) 􀂉 Kaca berpori (Corning, Perairan, Schuller) 􀂉 Silika (Rahmat, Solvay,
Degussa) 􀂉 Mineral bahan (lempung) 􀂉 Celite - adsorpsi dan stabilisasi enzim dalam media organik 􀂉
Bentonit - kapasitas adsorpsi yang sangat baik (hingga 1,5 g protein per g bentonit) yang digunakan
untuk isolasi enzim dengan adsorpsi / desorpsi

O r g a n i c C r r i e r s f r o m Na t u r a l

􀂉 Kompatibilitas yang menguntungkan dengan protein 􀂉 Berbagai polisakarida dan turunannya

digunakan untuk imobilisasi 􀂉 Struktur jaringan yang luas 􀂉 Sifat hidrofilik - interaksi lemah dengan
protein 􀂉 Turunan selulosa 􀂉 selulosa DEAE (diethylaminoethyl-cellulose) 􀂉 CM-cellulose
(carboxymethyl-cellulose) 􀂉extext 􀂉 banyak digunakan untuk imobilisasi enzim 􀂉 diaktifkan oleh
sianogen bromida 􀂉 stabilitas mekanik terbatas 􀂉 polisakharida lainnya 􀂉 agarosa, pati, pektin dan
kitosan 􀂉 Protein (gelatin)

OrganicSyntheticCrriers

Stability Stabilitas kimia dan mekanik yang tinggi 􀂉 Berbagai macam pembawa dengan kapasitas baik
dan manipulasi sederhana 􀂉 resin (pertukaran ion) 􀂉 kopolimerisasi dengan gugus fungsional (mis.,
Nitrasi, sulfonasi, karboksilasi, epoksidasi)

Contoh: 􀂉 polystyrene 􀂉 polyvinylacetate 􀂉 polimer akrilik

2. Mengikat Covalent

􀂉 Stabilisasi enzim yang lebih baik pada pembawa 􀂉 Pengenalan kelompok fungsional (mis., Amino,
epoksi, tiol, sianida)

􀂉 Prinsip: 1. aktivasi (gunakan zat pengaktif seperti halida organik dan anorganik, glutaraldehida,
karbodiimida, berbagai agen bifunctional untuk mencapai imobilisasi enzim hasrat.) 2. derivatisasi
(fungsi kimia baru diperkenalkan pada pendukung) 3. pengikatan enzim
3. Tautan silang:

- Enzim terikat kovalen ke matriks melalui reaksi kimia.

- Metode ini sejauh ini merupakan metode yang paling efektif

-Sebagai reaksi kimia memastikan bahwa situs pengikatan tidak mencakup situs aktif enzim, aktivitas
enzim hanya dipengaruhi oleh imobilitas. Gunakan reagen yang biasanya memiliki 2 kelompok
fungsional yang identik  bereaksi dengan residu asam amino dari enzim

4. Jebakan Enzim terperangkap dalam manik-manik yang tidak larut atau mikrosfer, seperti manik-
manik kalsium alginat. Namun, zat yang tidak larut ini menghalangi kedatangan substrat, dan
keluarnya produk.

-jenis kisi (alginat, k-caragenan, Poliacrylamide)

jenis mikrokapsul

• Nilon • Poliurea • Etil selulosa • Polistiren • Kolodion • Nitroselulosa • Butil asetat selulosa

I n c l u s i o n i n t o Jaringan Polimer

􀂉 Salah satu metode yang paling mudah untuk imobilisasi sel utuh 􀂉 Masalah dengan diameter enzim
dan kebocoran partikel 􀂉 Kombinasi dengan ikatan silang

Teknik dan dukungan untuk imobilisasi

Sejumlah besar teknik dan dukungan sekarang tersedia untuk imobilisasi enzim atau sel pada
berbagai pendukung alami dan sintetis. Pilihan dukungan serta teknik tergantung pada sifat enzim,
sifat substrat dan aplikasi utamanya.

Oleh karena itu, tidak mungkin menyarankan metode imobilisasi universal apa pun. Hanya dapat
dikatakan bahwa pencarian harus dilanjutkan untuk matriks yang memberikan imobilisasi yang
lancar dan aman dengan interaksi yang baik dengan media, dan yang sesuai dengan bentuk, ukuran,
kerapatan, dan seterusnya untuk penggunaan yang dimaksudkan.

Perawatan harus diambil untuk memilih bahan pendukung serta reagen yang digunakan untuk
imobilisasi, yang memiliki status GRAS, terutama ketika aplikasi utama mereka adalah dalam industri
pengolahan makanan dan farmasi.

Konstituen makanan makromolekul, koloid, kental, lengket, padat atau partikulat atau aliran limbah
juga membatasi pilihan reaktor dan geometri pendukung.

Kesimpulan

Imobilisasi enzim adalah salah satu pendekatan yang paling menjanjikan untuk mengeksploitasi
proses berbasis enzim dalam biotransformasi, diagnostik, industri farmasi dan makanan.

Beberapa ratus enzim telah diimobilisasi dalam berbagai bentuk termasuk penisilin G asilase, lipase,
protease, invertase, dll. Dan saat ini digunakan sebagai katalis dalam berbagai proses skala besar

Perubahan Karakter Enzim Yang Diimobilisasi

1. Kegiatan

V1  Jumlah deaktivasi enzim karena imobilisasi V2  Kemungkinan untuk mengimobilisasi enzim

lebih atau kurang per unit volume katalis
Faktor-faktor yang mempengaruhi penurunan aktivitas: • Konfigurasi substrat tidak dapat
menghubungi situs aktif enzim • Kelompok reaktif pada situs aktif yang terikat pada matriks •
Konfigurasi tidak aktif terbentuk • Kondisi reaksi menyebabkan denaturasi

V1 (aktivitas relatif)  Proporsi aktivitas enzim terimobilisasi vs enzim terlarut dalam jumlah yang
sama V2 (Aktivitas spesifik absolut)  Laju reaksi per satuan berat atau satuan volume katalis

pH optimal pada enzim Imobilisasi yang disebabkan oleh perubahan pH:  distribusi ion H +, ion OH-
dan substrat bermuatan non homogen

Carrier dengan muatan negatif  pH optimum pada pH tinggi (alkali) CMC Maleac anhydride / etilen
Asam Galacturonic Asam Polyaspartic

Carrier b dengan muatan positif  pH optimum pada pH rendah (bersifat asam) DEAE-Celullose
Polymer polyornithyl

3. Stabilitas  Stabilitas operasi = t1 / 2 (paruh) = waktu dimana terjadi kehilangan 50% dari aktivitas
enzim semula. Stabilitas operasi ditentukan oleh: • Jenis enzim • Cara imobilisasi • Jenis reaktor

Bioreaktor Enzim Imobil

Reaktor Curah (Batch): • Sederhana • Viskositas tinggi & aktivitas enzim rendah

CSTR: • Pengontrolan lbh mudah • Cocok untuk kasus inhibisi (penghambatan) substrat •
Menghindari kontak enzim oleh substrat dan produk yang terlalu lama

Fixed-bed PFR (Unggun Diam / Terkemas): - Sinambung  paling sering digunakan - Aliran substrat
dpt dari atas, bawah atau daur-ulang

Fluidized-bed (Unggun Terfluidisasi): - Untuk viskositas tinggi & pembentukan gas - Laju fluidisasi
perlu diatur agar enzim tidak rusak

Unit Reaktor Kolom Daur Ulang Daur Ulang: - memungkinkan reaktor beroperasi pada kecepatan
fluida tinggi. - substrat yang tidak dapat diproses sepenuhnya pada satu lintasan

Imobilisasi Sel Mikroorganisme

􀂉 Contoh pertama pada tahun 1823, Acetobacter teradsorpsi ke serpihan kayu (produksi asetat) 􀂉
Sistem multienzim (mis., Produksi alkohol) 􀂉 Berlaku jika enzim sulit untuk diisolasi atau
menunjukkan stabilitas / aktivitas yang rendah di luar sel (misalnya, hidratase nitril dalam produksi
akrilamida ) 􀂉 Pemrosesan berkelanjutan dengan (re) sintesis enzim dalam sel hidup terimobilisasi 􀂉
Sebagian besar sel yang beristirahat - terbatas dalam pertumbuhan dengan mengendalikan C-, N-
atau Psources

Applications Aplikasi industri dari sel-sel yang dapat diimobilisasi: 1. maturasi bir dengan sel ragi 2.
sel mamalia yang bergantung pada Anchorage (produksi vaksin) 3. Teknologi lingkungan
menggunakan kultur campuran

Imobilisasi Sel Mikroorganisme

Keuntungan 􀂉 tidak ada isolasi dan pemurnian enzim 􀂉 reaksi kompleks multienzim 􀂉 regenerasi
kofaktor dalam sistem asli 􀂉 kultur campuran synthrophic
Keterbatasan stability stabilitas tidak mencukupi, resistensi rendah 􀂉 pembatasan transfer massa
reactions reaksi samping, degradasi produk 􀂉 produk sampingan dari lisis sel atau metabolit toksik 􀂉
produktivitas rendah

Aplikasi enzim amobil

Resolusi Asam Amino

Penggunaan industri pertama enzim amobil adalah asam amino asilase untuk resolusi campuran
rasemik dari asam amino yang disintesis secara kimia.

Asam amino asilase mengkatalisis deasetilasi bentuk L dari asam amino N-asetil yang meninggalkan
asam amino N-asetil-d yang tidak diubah, yang dapat dengan mudah dipisahkan, di raskan dan
didaur ulang.

Beberapa metode imobilisasi enzim yang digunakan untuk tujuan ini: - pengikatan ion dengan DEAE-
sephadex - terperangkap sebagai mikrodroplet larutan berairnya ke dalam serat selulosa triasetat. -
diimobilisasi pada manik-manik makropori yang terbuat dari bahan seperti flexiglass

Contoh: Produksi L-Metionin

Asam amino dibutuhkan oleh tubuh tetapi tidak diproduksi secara alami olehnya, L-Metionin dapat
diperoleh melalui diet dan suplemen yang tepat.

Metionin meningkatkan kemampuan tubuh untuk mensintesis protein otot. Ini adalah sumber
belerang yang diperlukan untuk sintesis zat-zat lain yang penting untuk produksi energi seperti kolin,
kreatin, dan karnitin

Secara komersial, metionin dihasilkan melalui reaksi kimia yang menghasilkan campuran rasemat
dari DL Metionin asetat  dipisahkan oleh aminoasilase amobil (menggunakan DEAE-Sephadex) 
dideasilasi L-metionin  L-metionin

Produksi Sirup Fruktosa Tinggi

Application Aplikasi enzim amobil yang paling penting dalam industri

Konversi sirup glukosa menjadi sirup fruktosa tinggi oleh enzim glukosa isomerase.  sebagian besar
persiapan komersial menggunakan teknik adsorpsi atau cross-linking.

Penerapan teknologi glukosa isomerase telah menjadi sangat penting, terutama di negara-negara
non-pertanian yang memiliki bahan baku pati berlimpah.

Produksi Susu Laktosa & Whey Rendah

Persiapan susu dan whey yang dihidrolisis laktosa, menggunakan β -galaktosidase (laktase)

Hidrolisis laktosa juga meningkatkan kemanisan dan kelarutan gula, dan dapat menemukan potensi
masa depan dalam persiapan berbagai produk susu.

Whey yang dihidrolisis laktosa dapat digunakan sebagai komponen minuman berbasis whey, agen
ragi, bahan pakan, atau dapat difermentasi untuk menghasilkan etanol dan ragi, sehingga mengubah
produk sampingan yang murah menjadi bahan makanan yang sangat bergizi dan berkualitas tinggi.

Sebuah teknik baru untuk menghilangkan laktosa dengan fermentasi susu yang heterogen
menggunakan sel-sel Kluyveromyces fragilis yang dapat diimobilisasi juga telah dikembangkan.
Produksi Asam L-Aspartik

L-Asam spartat banyak digunakan dalam industri makanan dan farmasi dan diperlukan untuk
produksi aspartam (pemanis berkalori rendah)

Enzim aspartase mengkatalis penambahan amonia ke ikatan rangkap asam fumarat  asam aspartat

Enzim telah diimobilisasi menggunakan seluruh sel Escherichia coli ke mis. resin fenolformal-dehid
untuk menyerap aspartase

Asam fumarat menggunakan Aspartik untuk asam aspartase

Produksi Asam Malat

- Fumarase amobil digunakan untuk produksi asam malat (untuk keperluan farmasi) dari asam
fumarat

- Proses-proses ini menggunakan sel-sel B. flavus yang tidak dapat bergerak yang diimobilisasi
sebagai sumber fumarase.

-Sebuah biokatalis aktif untuk sintesis asam L-malat dari asam fumarat diperoleh berdasarkan sel-sel
yang diimobilisasi dalam karagenan

PRODUKSI ANTIBIOTIK

Contoh: Produksi asam 6-aminopenicillanic (6-APA)

Produksi asam 6-aminopenicillanic (6-APA) oleh deasilasi rantai samping baik dalam penisilin G atau
V, menggunakan penisilin asilase (penicillin amidase).

6-APA + kelompok metil  α-metil benzil penisilin (= Ampisilin, antibiotik spektrum luas, terutama
untuk bakteri Gram (-))

BIOSENSOR

Biosensor dapat didefinisikan sebagai perangkat yang menggabungkan elemen penginderaan

biologis yang terhubung ke transduser untuk mengubah respons yang diamati menjadi sinyal yang
terukur, yang besarnya sebanding dengan konsentrasi bahan kimia tertentu atau serangkaian bahan
kimia.

Biosensor berbasis enzim terdiri dari biokatalis atau bahan yang tidak bergerak, dan transformasi
biokatalitik kemudian secara umum ditransduksi oleh elektroda optik dan elektronis.

Contoh Aplikasi: biosensor glukosa, laktat, dan kolesterol