GUIA N 4 - GENETICA GENERAL - SEGUNDO SEMESTRE 2001 MUTACIONES GNICAS. Profesor: Cristian Araneda T.

El material gentico puede ser alterado por agentes ambientales, y tambin en forma espontnea por procesos que normalmente afectan al ADN. Ud. ya conoci las aberraciones cromosmicas que se producen cuando el dao en el material gentico es de tal magnitud que puede romper cromosomas y alterar el cariotipo. Sin embargo, generalmente el dao en el ADN no afecta grandes extensiones cromosmicas, sino que, afecta uno o unos pocos nucletidos. Este tipo de mutaciones se denomina mutaciones gnicas o mutaciones puntuales. Una mutacin es todo cambio permanente en la secuencia del ADN de un organismo, esta debe ocurrir en la lnea germinal. La mutaciones gnicas ms comunes consisten en la sustitucin de un nucletido por otro, en la delecin o prdida de unos pocos nucletidos, o en la insercin o intercalacin de uno o varios nucletidos en la molcula de ADN. Todas mutaciones gnicas generan cambios en la informacin contenida en el gen afectado e implican la produccin de una protena distinta de la esperada, o incluso la no produccin de la protena. El cambio de un nucletido en la secuencia de un gen da lugar a un codn diferente y, en consecuencia, a la presencia en la protena de un aminocido que no corresponde (excepto cuando el nuevo codn originado por la mutacin es sinnimo, es decir, codifica para el mismo aminocido original) . Muchas veces el cambio en un slo aminocido en una molcula proteica altera totalmente la funcin de la protena, ya que el modificarse la estructura primaria, tambin se alteran las estructuras secundarias y terciarias. La delecin o la intercalacin de un nucletido en un gen modifica el marco de lectura desde el sitio de la mutacin hasta el codn de trmino. Esto suele traducirse en la produccin de una protena aberrante o ms frecuentemente en la interrupcin de la sntesis de la protena al aparecer un codn de terminacin antes del lugar que corresponde. En un organismo los blancos para las mutaciones pueden ser las clulas somticas o las clulas germinales. En el primer caso, si bien afectan al fenotipo de los individuos no pasan a la descendencia. Cuando la mutacin afecta las clulas germinales suelen transmitirse a la descendencia. Cuando el gen que codifica una protena involucrada en la morfognesis ha mutado, la consecuencia de la mutacin puede traducirse en malformaciones congnitas. En otros casos las protenas alteradas dan lugar a alteraciones funcionales, como ocurre con la hemoglobina S en la anemia de clulas falsiformes al cambiar un slo aminocido (valina en lugar de cido glutmico) en la estructura primaria de la protena. Tambin, pueden producirse trastornos metablicos, cuando se alteran enzimas de las distintos vas metablicas, los llamados errores congnitos del metabolismo. Finalmente, las mutaciones tambin pueden afectar genes imprescindibles para la supervivencia del organismo, llegando a ser letales; o afectar genes que involucrados en la proliferacin celular terminando en procesos cancerosos. En general las mutaciones son perjudiciales para el organismo portador, por lo tanto es importante tomar los resguardos correspondientes al trabajar con sustancias mutagnicas como los agroqumicos (malatin, paratin, etc.), no exponerse a ambientes con elevados niveles de radiaciones ionizantes (luz ultravioleta, rayos X o gamma) y no desarrollar hbitos riesgosos, por ejemplo, los hidrocarburos policclicos provenientes de la combustin del tabaco son altamente mutagnicos y por ende cancergenos. Desde el punto de vista de su origen las mutaciones se pueden clasificar en espontneas o inducidas por un mutgeno (agente fsico o qumico que aumenta la frecuencia de mutaciones en el ADN). Cuando una purina es reemplazada por una purina o una pirimidina reemplaza una pirimidina se habla de transicin. Por otra parte, cuando purina es reemplazada por pirimidina, o viceversa, se habla de transversin. SIEMPRE LA MUTACION OCURRE AL REPLICARSE EL ADN, POR LA INCORPORACION DE NUCLEOTIDOS ERRONEOS EN EL SITIO MUTADO. espontneas Mutaciones gnicas Inducidas Desaminacin Despurinacin Tautomera Cambio marco lectura por errores de replicacin

Anlogos de bases (5-Bu y 2-AP) Dao de las bases (Hidroxilamina y cido nitroso) Luz ultravioleta (Dmeros de pirimidinas )

MUTACIONES ESPONTANEAS.

Desaminacin. La desaminacin es un proceso normal en el que las bases nitrogenadas citosina y adenina pierden sus grupos amino (-NH2). Esto cambia la estructura de los enlaces puente de hidrgeno que la base puede formar, si el dao no es reparado cuando ocurra la duplicacin de ADN se producir la mutacin por apareamiento de la base mutada con otra base que no corresponde. La citosina se desamina a uracilo (C -> U) que puede aparearse ahora con la adenina. Como este es un proceso natural en la clula existe un mecanismo de reparacin, mediado por la enzima uracil ADN-glicosilasa, que elimina del desoxiuracilo de la molcula de ADN. Muchas veces el ADN es modificado en la clula por metilacin (agregando grupos metilos -CH3), la desaminacin de la 5-metil-citosina produce timina (5mC -> T), un componente normal del ADN que escapa a los mecanismos de reparacin produciendo una transicin desde GC a AT (GC --> AT).

La adenina tambin sufre desaminacin a Hipoxantina (A -> H), molcula que puede formar pareja con citosina, produciendo una transicin AT-->GC.

Despurinacin. La despurinacin ocurre cuando una purina se desprende de su desoxirribosa, de modo que el nucletido afectado pierde su base. Como consecuencia, queda en el gen un sitio apurinico, un nick, un sitio sin informacin a pesar de no haberse cortado el ADN.

Tautomera. Las bases nitrogenadas que conforman el ADN pueden existir en distintas formas qumicas denominadas tautomeros. Los tautomeros son isomeros que difieren en la posicin de sus tomos que forman los enlaces puente de hidrgeno. Los tautomeros de las bases nitrogenadas estn en equilibrio, el que se encuentra normalmente desplazado hacia las formas ceto (-C=O), sin embargo, en forma poco frecuente aparecen las formas imino (-C=N-H) o enol (-C-O-H). La forma imino de la citosina (denotada por C*) forma enlaces con la adenina, la forma enol de la timina (T*) forma enlaces con la guanina, la forma imino de la adenina (A*) forma enlaces con la citosina, y la forma enol de guanina forma enlaces con la timina. Las tautomeras producen mutaciones (transiciones) durante la replicacin del ADN, como se muestra en la figura.

Cambio marco lectura por errores de replicacin. Normalmente los cambios en el marco de lectura ocurren en secuencias repetidas al producirse emparejamientos errneos desplazados de las bases. Este tipo de emparejamiento produce deleciones, por desplazamiento de la hebra molde; o adiciones por desplazamiento de la hebra sintetizada.

MUTACIONES INDUCIDAS. Anlogos de Bases. Los anlogos de base son compuestos qumicos de estructura muy similar a las bases nitrogenadas normales y que forman enlaces distintos a las bases que han sustituido. Existen muchas purinas y pirimidinas naturales o sintetizadas en laboratorios, pero slo 5 estn presentes en la estructura de los cidos nucleicos. Los anlogos de base inducen transiciones luego de ser incorporados al ADN, al producirse la replicacin de la molcula alterada. El 5-bromo-uracilo (5-BU) es un anlogo de la timina, pero cambia frecuentemente a la forma enol (se tautomeriza) y se empareja as con la guanina. Si durante la replicacin del ADN se incorpora 5-BU depender del estado de isomerizacin de este compuesto (ceto 5-BU o enol 5BU*) que base se emparejar con l en la hebra sintetizada.

La 2-amino-purina (2-AP) es otro anlogo de base es un anlogo de la adenina que puede emparejarse indistintamente con timina o citosina. Nuevamente si durante la replicacin del ADN la 2-AP inducir transiciones.

Dao de las bases. Muchos agentes mutagnicos producen daos en las bases nitrogenadas, modificando su estructura qumica. La hidroxilamina o HA (NH2-OH) es un mutgeno efectivo que altera la estructura de la citosina de modo que se empareja con la adenina. As, la HA es un inductor especfico de transiciones GC --> AT.

Otro mutgeno que altera la estructura qumica de la adenina desaminandola a hipoxantina (H), es el cido nitroso o AN (HNO2). Como Ud. sabe la hipoxantina se emparejar con la citosina, induciendo transiciones AT --> GC.

Dmeros de pirimidina. La luz ultra violeta (uv) causa dimerizacin de pirimidinas adyacentes en el DNA al formarse entre ellas una unin covalente. Los dmeros timina-timina pueden considerarse como el principal producto de estas radiaciones. De manera ocasional, se pueden formar dmeros citosina-citosina o citosina-timina. Estas dimerizaciones interfieren con la replicacin normal del ADN, lo que conduce a mutaciones. Los dmeros de timina son normalmente removidos por un sistema especfico de enzimas existiendo dos mecanismos de reparacin. Reparacin directa por la enzima ADN fotoliasa que se une en la oscuridad a los dmeros de timina. En presencia de luz, la enzima rompe los enlaces del dmero utilizando energa lumnica, para luego liberarse del ADN. Reparacin por escisin o corte utilizando la escinucleasa ABC. Esta endonucleasa formada por subunidades codificadas por los genes uvrA, uvrB, uvrC; es capaz de detectar dmeros de timina realizando un corte en la cadena de ADN a ambos lados del dmero. El segmento que incluye al dmero es separado de la hebra normal del ADN por la ADN helicasa II (producto del gen uvrD). La reparacin se completa cuando la ADN polimerasa I y ADN ligasa se encargan de restaurar el trozo perdido colocando los nucletidos y uniendo los extremos de estos, respectivamente.

EJERCICIOS 1).- En la siguiente secuencia indique Cules son los puntos ms probables de dao por la luz u.v.?

3'- ATGCTTACGCGCAAGCTA-5' 5'- TACGAATGCGCGTTCGAT-3'

2).- En la siguiente secuencia seale el tipo de transicin que se produce en el DNA metilado luego de ocurrir desaminacin de la 5-metil-deoxi-citosina (5mC)y posterir replicacin del DNA.

3'-TAGGCTGA-5' metilacin 3'-TAGG5mCTGA-5' 5'-ATCCGACT-3' . 5'-ATCC G ACT-3'

3).- En las siguientes secuencias nucletdicas indique las transiciones ocurridas por efecto de la tautomera, luego de que cada molecula sufra: replicacin, destautomerizacin y nueva replicain del DNA.

a) 3'-ATGC*TACT-5' 5'-ATCG ATGA-3' c) 3'-GCTA*CTA-5' 5'-CGAT GAT-3'

b) 3'-TGCT*ACT-5' 5'-ACGA TGA-3' d) 3'-ATAG*CTA-5' 5'-TATC GAT-3'

4).- Las siguientes moleculas de ADN an incorporado mutgenos del tipo "anlogos de base". En cada uno de los siguientes casos indique el tipo de transicin que se producira luego de: tautomerizacin del 5-bromo uracilo (5BU) y posterior replicacin del ADN.

a) 3'-TGC5BUCAG-5' 5'-ACG G GTC-3'

b) 3'-TGC5BU*CAG-5' 5'-ACG G GTC-3'

En la siguiente molecula de DNA indique las posibles mutaciones inducidas por la 2-aminopurina (2AP).

c) 3'-GTA2APCGG C TAA2APTCG-5' 5'-CAT C GCC2APATT C AGC-3'

5).- Muchos compuestos qumicos inducen mutaciones al actuar sobre las bases nitrogenadas y transformarlas en anlogos de base que poseen otras propiedades para formar enlaces puente de hidrgeno. a) En la siguiente secuencia indique los posibles puntos de mutacin indicidos por el cido nitroso (HNO2) y la hidroxilamina (NH2-OH).

3'-ATTGCTCAGTCGTCTGCTA-5' 5'-TAACGAGTCAGCAGACGAT-3'
b) Elija un punto de mutacin (solo uno) por cido nitroso y haga el esquema de cmo ocurre la mutagnesis. c) Tambien, elija un punto de mutacin (solo uno) por hidroxilamina y haga el esquema de cmo ocurre la mutagnesis. 6).- La mayor parte de las mutaciones que ocurren a nivel molecular son producto del desplazamiento de la pauta de lectura debido a la insercin o prdida de nucletidos. En las siguientes secuencias, indique si existe probabilidad de sufrir mutacin por desplazamiento de la pauta de lectura.

a) 3'-CATGATAGATAGATAGATACTAA-5' 5'-GTACTATCTATCTATCTATGATT-5' b) 3'-ATCATCGTGAT-5' 5'-TAGTAGCACTA-3' c) 3'-CATGCGCGCGCGCGCGCGAAT-5' 5'-GTACGCGCGCGCGCGCGCTTA-5'