TUGAS MAKALAH

“GANGGUAN SISTEM HEMATOLOGY”

DI SUSUN OLEH

NAMA : RANI ODE

NPM : 1420119059

SEMESTER : III (TIGA)

MATA KULIAH : KEPERAWATAN MEDIKAL BEDAH 1

DOSEN PENGAJAR : Ns. ENDAH FITRIASARI,S.Kep.,M.Kep

PROGRAM STUDI S1 ILMU KEPERAWATAN

SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN

STIkes MALUKU HUSADA

AMBON

2021
 KATA PENGANTAR

Puji syukur kami panjatkan kehadiranTt TUHAN YANG MAHA ESA karena atas berkat
rahmat dan hidayah – NYA penulis bisa menyelesaikan penyusunan tugas makalah
KEPERAWATAN MEDIKAL BEDAH 1 dengan judul makalah “Spesies oksigen reaktif dalam
sel induk hematopoietik mempengaruhi hasil kultur dalam kondisi inflamasi”

Makalah ini penulis buat untuk memenuhi tugas dari dosen pengajar. Makalah ini masih jauh
dari kata sempurna. Oleh karena itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari pembaca untuk
kemajuan makalah ini di masa mendatang. Semoga makalah ini dapat bermanfaat akhir kata kami
ucapkan terima kasih.

AMBON, FEBRUARI 2021

PENULIS
 DAFTAR ISI

COVER

KATA PENGANTAR

DAFTAR ISI

BAB I PENDAHULUAN

1.1 LATAR BELAKANG

1.2 RUMUSAN MASALAH
1.3 TUJUAN

BAB II PEMBAHASAN

2.1 BAHAN DAN METODOLOGI

2.1.1 Isolasi sel CD347 manusia

2.1.2 Uji deteksi ROS

2.1.3 Budaya sel

2.1.4 anallisa aliran sitometri penanda permukaan sel

2.1.5 analisa statistik

2.2 HASIL DAN OBSERVASI

BAB III PENUTUP

3.1 KESIMPULAN

3.2 SARAN

DAFTAR PUSTAKA
 BAB 1

PENDAHULUAN

1.1 LATAR BELAKANG

Fungsi sel induk hematopoietik (HSC) diatur dengan ketat untuk memastikan hematopoiesis
normal seumur hidup dalam relung sumsum tulang (BM). Sementara status HSC diatur dengan
baik untuk menegakkannya, nasib HSC dapat diubah sebagai respons terhadap sinyal inflamasi
yang disebabkan oleh perubahan lingkungan. Pengaruh perubahan inflamasi pada HSC dalam
BM telah dieksplorasi; namun, bagaimana setiap sitokin inflamasi mempengaruhi pemeliharaan
atau diferensiasi HSC masih harus dijelaskan sepenuhnya. Mempertimbangkan studi terbaru
yang menunjukkan bahwa spesies oksigen reaktif (ROS) mempengaruhi nasib HSC, kami
melakukan analisis komprehensif dari efek tujuh sitokin inflamasi utama pada proliferasi,
diferensiasi, dan regulasi tingkat ROS di HSCs / sel induk hematopoietik / progenitor (HSPCs).
Studi kami menunjukkan bahwa sitokin inflamasi secara umum mendorong HSCs / HSPCs ke
dalam diferensiasi, tetapi bervariasi secara signifikan sehubungan dengan retensi sel primitif.
Dengan definisi imunofenotipe seluler, TNF-α, IFN-γ, dan IFN tipe I merangsang hilangnya
HSC, sedangkan TGF-β dan IL-6, dan mungkin juga IL-1β, menunjukkan potensi untuk
mempertahankannya. Yang perlu diperhatikan adalah bahwa tingkat ROS yang tidak berubah
kompatibel dengan retensi HSC, sementara perubahan drastis, baik peningkatan atau penurunan,
tingkat ROS menunjukkan kerugian HSC. Evaluasi rinci hubungan antara sitokin inflamasi dan
regulasi ROS tampaknya terbukti penting dalam memahami biologi HSC dan menerjemahkan
ilmu pengetahuan dasar ke dalam aplikasi klinis. Dengan definisi imunofenotipe seluler, TNF-α,
IFN-γ, dan IFN tipe I merangsang hilangnya HSC, sedangkan TGF-β dan IL-6, dan mungkin
juga IL-1β, menunjukkan potensi untuk mempertahankannya. Yang perlu diperhatikan adalah
bahwa tingkat ROS yang tidak berubah kompatibel dengan retensi HSC, sementara perubahan
drastis, baik peningkatan atau penurunan, tingkat ROS menunjukkan kerugian HSC. Evaluasi
rinci hubungan antara sitokin inflamasi dan regulasi ROS tampaknya terbukti penting dalam
memahami biologi HSC dan menerjemahkan ilmu pengetahuan dasar ke dalam aplikasi klinis.
Dengan definisi imunofenotipe seluler, TNF-α, IFN-γ, dan IFN tipe I merangsang hilangnya
HSC, sedangkan TGF-β dan IL-6, dan mungkin juga IL-1β, menunjukkan potensi untuk
mempertahankannya. Yang perlu diperhatikan adalah bahwa tingkat ROS yang tidak berubah
kompatibel dengan retensi HSC, sementara perubahan drastis, baik peningkatan atau penurunan,
tingkat ROS menunjukkan kerugian HSC. Evaluasi rinci hubungan antara sitokin inflamasi dan
regulasi ROS tampaknya terbukti penting dalam memahami biologi HSC dan menerjemahkan
ilmu pengetahuan dasar ke dalam aplikasi klinis.

Sel induk hematopoietik (HSC) dicirikan oleh potensinya untuk pembaharuan diri dan
diferensiasi multi-garis keturunan, membuatnya mampu mempertahankan hematopoiesis seumur
hidup. HSC berada di dalam relung sumsum tulang (BM). Mereka diatur secara ketat oleh isyarat
ekstrinsik untuk mempertahankan homeostasis hematopoietik [1]. HSC dalam kondisi mapan diam
[2], tetapi nasib mereka dapat diubah sebagai tanggapan atas perubahan lingkungan.

Studi terbaru telah melaporkan bahwa peradangan mungkin menjadi salah satu tekanan utama
pada HSC, mempengaruhi komitmen garis keturunan mereka, pembaruan, kemampuan homing, dan
kerentanan terhadap apoptosis [3-6]. Pada beberapa kelainan darah seperti keganasan hematopoietik,
kegagalan BM dilaporkan terkait dengan produksi sitokin inflamasi yang berlebihan.[3, 7]. Meskipun
seseorang dapat berspekulasi bahwa HSC dapat diatur untuk menunjukkan respons kompensasi
terhadap tekanan tertentu[8-10], masih belum jelas seberapa drastis lingkungan perubahan dapat
menyebabkan disregulasi fungsi HSC dan dengan demikian menyebabkan kelainan hematopoietik.
Oleh karena itu, analisis rinci tentang efek sitokin inflamasi pada fungsionalitas HSC diperlukan.
hematopoietik sel induk / progenitor (HSCs / HSPCs) dengan analisis komprehensif in vitro
menggunakan sel CD34 + manusia. Kami memilih 7 kandidat sitokin: Interleukin-1beta (IL-1β),
interleukin-6 (IL-6), tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), interferon-alpha (IFN-α), interferon-beta
(IFN- β), interferon-gamma (IFN-γ), dan transformasi faktor pertumbuhan-beta (TGF-β). Kami
menyelidiki bagaimana pengobatan dengan masing-masing sitokin mempengaruhi proliferasi dan
diferensiasi sel dengan adanya koktail sitokin dasar yang terdiri dari faktor sel induk (SCF),
trombopoietin (TPO), dan Flt3-ligan (FL). Kami juga menguji bagaimana sitokin inflamasi ini
memengaruhi tingkat seluler spesies oksigen reaktif (ROS), yang telah terbukti memengaruhi nasib
HSC.[11].

1.2RUMUSAN MASALAH
1. Bagaimana uji deteksi ROS
2. Bagaimana budaya sel spesies oksigen

1.3TUJUAN

Agar mahasiswa dapat mengetahui isolasi sel CD34+manusia dalam sistem hematologi dan dapat
menerapkan proses tersebut dalam lingkup kesehatan.
 BAB II

PEMBAHASAN

2.1 BAHAN DAN METODOLOGI

2.1.1 Isolasi sel CD34 + manusia

Unit darah tali pusat (UCB) yang diperoleh saat lahir disediakan dengan baik oleh Pusat
Darah Blok Kanto-Koshinetsu Palang Merah Jepang. Untuk mengisolasi sel mononuklear (MNC),
unit UCB dikenakan pemisahan kepadatan-gradien (Ficoll; Laboratorium Imuno-Biologi, Gunma,
Jepang). Sel CD34 + kemudian diisolasi dari MNC menggunakan Kit Microbead CD34 (Miltenyi
Biotech, Bergisch Gladbach, Jerman). streptomycin-glutamine (Life Technologies, Carlsbad, CA),
dan 50 ng / ml SCF manusia, TPO, dan FL (Peprotech, Rocky Hill, NJ). Sel dikultur pada suhu 37oC
dalam 5% CO2 selama 2 hari atau, dengan penambahan media segar pada hari ke-3, selama 5 hari.

2.1.2 Uji deteksi ROS

Sel yang dikumpulkan setelah 2 hari kultur diwarnai dengan HySOx, indikator ROS yang
baru dikembangkan (eksitasi: 555 nm, emisi: 575 nm; Goryo Chemical, Hokkaido, Jepang), selama 30
menit pada 37oC. Setelah pencucian, sel-sel dianalisis untuk akumulasi ROS dengan sitometri aliran
FACS Aria II (BD Biosciences, San Jose, CA). ROS seluler diukur dengan intensitas fluoresensi rata-
rata (MFI).

2.1.3 Budaya sel

Sel CD34 + di alikuotasikan pada 5 x 104 sel ke dalam sumur individu dari 96 sumur pelat
dasar datar yang berisi X-VIVO10 (Lonza, Basel, Swiss) ditambah dengan 1% serum albumin
manusia (CSL Behring, King of Prussia, PA), 1 % penisilin- streptomycin-glutamine (Life
Technologies, Carlsbad, CA), dan 50 ng / ml SCF manusia, TPO, dan FL (Peprotech, Rocky Hill, NJ).
Sel dikultur pada suhu 37oC dalam 5% CO2 selama 2 hari atau, dengan penambahan media segar
pada hari ke-3, selama 5 hari. Dalam beberapa percobaan, media kultur terkandung, untuk seluruh
periode salah satu dari sitokin inflamasi ini: IL-1β (10 ng / ml), TGF-β, TNF-α, IFN-γ, IFN-β, dan IL-
6 (semua 50 ng / ml; semua Peprotech), dan tipe universal I IFN-α (1.000 U / ml; PBL Assay Science,
Piscataway, NJ). Setelah kultur, sel dipanen untuk pengujian hilir, termasuk penentuan jumlah sel
menggunakan penghitung citra sel otomatis CYTOREGON (GE Health Science, Little Chalfont,
Inggris).

2.1.4 Analisis aliran sitometri penanda permukaan sel

Sel CD34 + yang dibudidayakan diwarnai dengan antibodi monoklonal berikut: phycoerythrin
(PE) -cyanine 7-conjugated anti-CD38 (eBioscience, San Diego, CA), allophycocyanin (APC) -
cyanine 7-conjugated anti-CD45, Pacific Blue-conjugated anti -CD34, dan reagen fluorescein
isothiocyanate (FITC) anti-manusia Lineage Cocktail (Biolegend, San Diego). Setelah pencucian, sel
menjadi sasaran aliran sitometri (FACS Aria II atau Canto, BD Biosciences). Semua data dianalisis
menggunakan software FlowJo (TreeStar, Ashland, OR).

2.1.5 Analisis statistik

 Pengujian One-Way-ANOVA digunakan untuk analisis statistik. Nilai masing-masing
kelompok dibandingkan dengan kelompok kontrol menggunakan uji post hoc Dunnett. Nilai p <0,05
dianggap signifikan secara statistik. Jumlah tanda bintang sesuai dengan derajat nilai P, dengan *: P
<0,05; **: P <0,01; ***: P <0,001; dan ****: P <0,0001.

2.2 HASIL DAN OBSERVASI

Untuk memeriksa efek inflamasi sitokin pada HSCs / HSPCs, kami menggunakan sel CD34 +
yang sangat dimurnikan yang diperoleh dari UCB manusia. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar
1A, kemurnian sel CD34 + secara rutin> 95%, dengan retensi pada frekuensi ~ 10% dari populasi sel
yang lebih primitif dengan fenotipe CD34 + / CD38. Sel-sel ini dibiakkan dalam media bebas serum
yang dilengkapi dengan koktail sitokin dasar yang mengandung SCF, TPO, dan FL. Respon
proliferatif mereka dinilai 5 hari setelah inisiasi kultur(Gambar 1A). Seperti yang ditunjukkan pada

Gambar 1: Pengaruh sitokin inflamasi pada proliferasi HSCs / HSPCs.

Gambar 1B, itu kondisi yang dinyatakan (hanya STF) nomor sel yang diperluas (50.000 sel input)
sebanyak ~ 10 kali. Penambahan setiap sitokin inflamasi mempengaruhi proliferasi HSC / HSPCs
secara keseluruhan. Dua interferon tipe I (IFN-α dan IFN-β) mempengaruhi hampir tidak ada
perubahan dalam jumlah sel dibandingkan hanya STF. Sitokin lain, bagaimanapun, secara umum
meningkatkan jumlah HSCs / HSPC yang dibiakkan. Ekspansi nomor sel oleh IL-1β, TNF-α, dan
IFN-γ mencapai signifikansi statistik.

(A) Representasi skematis percobaan untuk menguji efek sitokin inflamasi pada sel CD34-positif
manusia (CD34 +) yang berasal dari darah tali pusat (UCB). Sel CD34 + diperoleh melalui sel
mononuklear (lapisan MC) dengan menggunakan teknologi microbeads. Ditunjukkan adalah hasil
yang mewakili untuk mengkonfirmasi kemurnian tinggi sel untuk ekspresi CD34 dan keberadaan sub-
populasi yang signifikan dari sel yang tidak memiliki ekspresi CD38. Sel dibiakkan di 96 piring berisi
media bebas serum dengan berbagai kombinasi sitokin selama 2 atau 5 hari sebelum analisis. (B)
Jumlah sel absolut diperlihatkan untuk sel yang dikultur 5 hari setelah inisiasi kultur. Setiap media
berisi baik yang dilengkapi dengan sitokin basal saja (hanya STF) atau dengan salah satu sitokin uji.
Sel dihitung dengan pewarnaan Turki. Yang ditampilkan adalah nilai rata-rata ± SD (n = 3). Uji One-
Way-ANOVA digunakan untuk analisis statistik. Nilai tiap kelompok dibandingkan dengan nilai sel
yang hanya diberi STF (kelompok kontrol).
(B) Nilai p <0,05 dianggap signifikan secara statistik. Histogram yang ditampilkan dengan warna
biru mencerminkan nilai yang secara statistik lebih tinggi daripada yang ada di kontrol.
(C) *: P <0.05, **: P <0.01, ns: tidak signifikan.

Dalam budaya HSCs / HSPCs, beberapa sel mungkin memperbaharui diri, tetapi yang lain
diharapkan menjadi berkomitmen untuk diferensiasi menjadi garis keturunan tertentu. Proliferasi sel
dengan demikian harus dievaluasi dalam kombinasi dengan status diferensiasi serta dengan penanda
sel primitif fenotipe. Oleh karena itu kami memeriksa imunofenotipe dari HSCs / HSPC yang
dibiakkan. Untuk tujuan ini, ekspresi permukaan sel CD34 dan CD38 diselidiki bersama dengan
penanda garis keturunan (Lin)[12]. Ketika dikultur selama 5 hari dalam kondisi awal (hanya STF),
sebagian besar sel (~ 72,2%) kehilangan ekspresi CD34. Beberapa sel yang menunjukkan fenotipe
primitif bertahan (Lin-CD34 + CD38-; ~ 3,5%). Yang perlu diperhatikan adalah bahwa efek dari
setiap sitokin inflamasi pada ekspresi penanda permukaan sel sangat bervariasi(Gambar 2A). Semua
sitosin menurunkan persentase sel Lin versus hanya STF, yang berarti bahwa semua dapat
mempromosikan diferensiasi (Gambar 2B, Lin-). Tiga sitokin, TNF-α, IFN-γ, dan IL-6, meningkatkan
diferensiasi tersebut dengan kuat (P <0,0001).

Kami selanjutnya berfokus pada bagaimana sitokin inflamasi mempengaruhi pelestarian

populasi HSC / HSPC primitif. Seperti yang ditunjukkan padaGambar 2B (%) dan 2C (angka
absolut), sitokin inflamasi yang diuji terbagi menjadi dua kelompok. Satu peningkatan retensi sel
primitif (ditunjukkan dengan warna biru ketika signifikansi statistik diamati) dan yang lainnya
mengurangi pelestarian HSC / HSPC (ditunjukkan dengan warna merah). Di antara 3 sitokin dalam
kelompok sebelumnya, TGF-β, molekul ceruk kunci yang mampu memelihara HSC secara in
vivo[13], muncul paling banyak ampuh dalam mendukung sel primitif dengan kehilangan sel Lin
yang minimal, sedangkan IL-1β dan IL-6 memperluas jumlah sel primitif, tetapi hanya dengan
mengorbankan diferensiasi yang berlebihan. Sebaliknya, 4 sitokin lainnya menurunkan kedua
frekuensi secara signifikan(Gambar 2B) dan angka (Gambar 2C)dari sel Lin-CD34 + CD38 +. Dua
interferon tipe I (IFN-β dan IFN-β) menunjukkan efek yang sama pada diferensiasi, menunjukkan
pengurangan sel Lin-CD34 + CD38 + tetapi tidak ada kehilangan sel Lin-CD34 +(Gambar 2B dan
2C). Sebaliknya, TNF-α dan IFN-γ menurunkan frekuensi sel Lin-CD34 +(Angka 2B) secara
signifikan, menunjukkan bahwa mereka lebih banyak ampuh dalam mendorong diferensiasi daripada
interferon tipe I. Efek IFN-γ sangat mencolok, dengan hampir tidak ada sel Lin-CD34 + CD38 + yang
tersisa dalam kultur, tetapi membangkitkan respon proliferatif tertinggi yang diamati pada kedua
total(Gambar 1B) dan Lin- (Gambar 2C) penilaian sel.

α Untuk lebih menggambarkan efek sitokin ini pada HSCs / HSPC, kami berusaha untuk
mengukurnya Akumulasi ROS di HSCs / HSPCs. ROS dikenal sebagai pengatur HSC / HSPC yang
penting dan tingkat akumulasi ROS kemungkinan besar akan mengubah nasib HSC / HSPC. Kami
kemudian menentukan level ROS menggunakan HySOx[14] dalam sel 2 hari setelah kultur, untuk
menguji apakah status ROS hari ke-2 memprediksi hasil kultur akhir pada hari ke-5. Ketika dikultur
dengan IL-1β atau TNF-α, kadar ROS sel meningkat secara signifikan dibandingkan sel yang hanya
diberi STF (Gambar 3A dan 3B, ditampilkan di batang biru). Sebaliknya, budaya IFN-γ menghasilkan
sel dengan tingkat ROS yang berkurang secara signifikan, sedangkan interferon tipe I menghasilkan
penurunan ROS yang sederhana (Gambar 3A dan 3B). Dari catatan adalah bahwa meskipun kesamaan
keseluruhan dalam efek TNF- dan IFN-γ (Gambar 2B dan 2C), pengaruhnya pada regulasi tingkat
ROS di HSCs / HSPCs berbeda tajam (Gambar 3B, ditunjukkan dengan warna biru untuk TNF-α dan
merah untuk IFN-γ). Kita juga harus mencatat bahwa pengawet sel induk yang kuat, yaitu TGF-β dan
IL-6, tidak menyebabkan perubahan yang signifikan pada tingkat ROS.

Gambar 2: Sitokin inflamasi memodulasi sifat diferensiasi HSCs / HSPCs.

(A) Hasil sitometri aliran representatif dari penilaian penanda permukaan sel pada sel uji setelah
kultur 5 hari. Dua gambar ditampilkan untuk setiap kondisi budaya: Plot garis keturunan vs FSC
(sebaran maju), kiri, dan plot CD38 vs CD34, kanan. Angka mewakili frekuensi (%) sel dalam
gerbang yang sesuai. (BC) Persentase (B) dan angka absolut (C) dari populasi sel yang ditunjukkan di
setiap kultur (hari 5) ditampilkan sebagai nilai rata-rata ± SD (n = 3). Lin-: penanda garis-negatif,
Lin-CD34 +: penanda garis-negatif / CD34-positif, Lin-CD34 + CD38-: penanda garis-negatif /
CD34-positif / CD38-negatif. Pengujian One-Way-ANOVA digunakan dalam analisis statistik. Nilai
masing-masing kelompok dibandingkan dengan kelompok STF saja (kontrol) menggunakan uji post
hoc Dunnett. Nilai p <0,05 dianggap signifikan secara statistik.

**: P <0,01, ***: P <0,001, ****: P <0,0001, ns: tidak signifikan.

HSC dilindungi dalam relung BM, di mana mereka dikendalikan oleh berbagai sinyal yang
mempertahankan fungsi selulernya. Meskipun gagasan bahwa kelebihan sitokin inflamasi
mempengaruhi nasib HSCs telah dieksplorasi, masih banyak yang harus diklarifikasi tentang
bagaimana inflamasi memodulasi HSCs. Yang juga penting adalah mengetahui bagaimana aktivitas
sitokin inflamasi harus diatur dalam kultur HSC / HSPC untuk memaksimalkan manfaat manipulasi
sel ex vivo untuk tujuan klinis. Untuk tujuan ini, kami melakukan analisis komprehensif terhadap efek
dari 7 sitokin inflamasi utama pada HSCs / HSPC yang dibiakkan, mengikuti kriteria penting bahwa
sitokin yang berbeda dibandingkan pada platform eksperimental yang sama, untuk mengecualikan
variabel tambahan seperti komposisi media, perbedaan lot sitokin dasar, dan seterusnya.

Ketika diuji dalam pengaturan kultur bersama dengan 3 sitokin sel induk (SCF, TPO, dan
FL), tidak ada sitokin inflamasi yang menyebabkan kematian sel masif, sehingga tampak tidak sangat
toksik terhadap HSCs / HSPCs. Dalam semua kondisi kultur, termasuk kondisi dasar dari 3 uji sitokin
saja, berbagai penurunan dalam% Lin-sel terlihat, yang berarti bahwa di semua diferensiasi HSC /
HSPC dipromosikan.

Efek pada pelestarian / perluasan sel primitif (Lin-CD34 + CD38-), bagaimanapun, bervariasi
secara signifikan di antara sitokin inflamasi. Tiga sitokin, yaitu, TGF-β, IL-6, dan IL-1β,
meningkatkan retensi sel primitif, sedangkan 4 sitokin lainnya, yaitu dua IFN tipe I, TNF-α, dan IFN-
γ, merangsang hilangnya sel primitif tersebut. sel. Pengaruh yang menguntungkan dari TGF-β pada
retensi HSC konsisten dengan laporan kami sebelumnya[13, 15]. Efek positif IL-6 pada biakan HSC
sudah di ketahui, seperti yang dicontohkan oleh penggunaannya dalam sitokin.

koktail dalam uji klinis [16-17] di mana perluasan sel CD34 + manusia adalah tujuannya.
Bahwa IL-1β meningkatkan retensi sel primitif adalah pengamatan yang tidak terduga mengingat efek
negatif yang dilaporkan pada kemampuan rekonstitusi HSC.[18]. Eksperimen transplantasi akan
diperlukan untuk membuktikan kegunaan IL-1β untuk ekspansi HSC. Karena teknologi baru-baru ini
berkembang, dengan perkembangan seperti sistem kultur bebas serum, untuk mengevaluasi kembali
efek sitokin "lama" dalam kultur HSC mungkin bermanfaat.
Gambar 3: Berbagai sitokin inflamasi mempengaruhi tingkat ROS 2 hari setelah kultur.

(A) Ditunjukkan adalah hasil representatif dari analisis sitometri aliran tingkat ROS dalam sel
CD34-positif manusia yang dikultur selama 2 hari. HySOx digunakan sebagai indikator ROS. (B)
Representasi grafis dari nilai intensitas fluoresensi rata-rata (MFI) yang ditentukan dengan analisis
aliran cytometry. Nilai rata-rata ± SD ditampilkan (n = 3). Pengujian One-Way-ANOVA digunakan
dalam analisis statistik. Nilai masing-masing kelompok dibandingkan dengan sel yang terpapar STF
saja (kelompok kontrol) menggunakan uji post hoc Dunnett. Nilai p <0,05 dianggap signifikan secara
statistik. Histogram yang ditampilkan dalam warna berarti nilai statistik yang lebih tinggi (biru) atau
lebih rendah (merah) daripada yang ada di grup kontrol.
(B) *: P <0.05, **: P <0.01, ***: P <0.001, ns: tidak signifikan.

Akumulasi ROS dilaporkan mengganggu aktivitas HSC [19-21]. Di sisi lain, penelitian terbaru
menunjukkan bahwa ROS memainkan peran penting dalam diferensiasi HSC, terutama selama tahap
awal pemulihan hematopoietik setelah transplantasi.[22-23]. Pengamatan ini menunjukkan bahwa
tingkat ROS seluler harus diatur secara ketat untuk mempertahankan fungsi HSC normal dalam
homeostasis[24]. Kami menyelidiki hubungan yang sebelumnya tidak teridentifikasi antara sitokin
inflamasi dan tingkat ROS di HSC. Dalam penelitian kami, kami menggunakan indikator ROS yang
baru dikembangkan, HySOx[14]. Kami juga menguji dichlorofluorescein-diacetate (DCF-DA), probe
yang banyak digunakan yang mampu mendeteksi berbagai macam ROS.[25], tapi menghentikan
penggunaannya karena kegagalan karena alasan yang tidak diketahui untuk mendapatkan hasil yang
konsisten dengan sistem kultur HSC / HSPC spesifik kami (data tidak ditampilkan). HySOx awalnya
dilaporkan cocok untuk pencitraan fagosit secara real-time karena dua sifat utamanya: 1) Kekhususan
untuk spesies ROS tunggal HOCl, dan 2) resistensi terhadap autoksidasi dan photobleaching.
Meskipun minat dalam hubungan antara ROS dan fungsi seluler sangat besar, tidak ada laporan yang
menjelaskan peran seluler dari masing-masing jenis ROS, seperti superoksida, radikal hidroksil,
oksigen singlet, dan oksida nitrat, karena keduanya memengaruhi fenomena biologis tertentu.[11, 26-
27]. Hal ini kemungkinan besar karena kurangnya set lengkap indikator ROS yang mampu membedah
setiap jenis ROS dari yang lain.
 Meskipun signifikansi HOCl sendiri sebagai penanda fenotipik masih belum pasti, hasil kami
menunjukkan bahwa HOCl dapat memprediksi nasib seluler dalam hubungannya dengan stimulasi
oleh sitokin inflamasi. Pengembangan reagen baru akan membantu mencapai gambaran umum
tentang dampak pada fungsi seluler yang dimiliki setiap jenis ROS.

Dalam sistem kami, TNF-α dan IFN-γ mempengaruhi HSCs / HSPCs dengan cara yang sama,
selama 5 hari kultur merangsang hilangnya sel yang menunjukkan imunofenotipe seluler primitif.
Sebaliknya, tingkat ROS seluler 2 hari setelah stimulasi sangat berbeda, meningkat dengan TNF-α
dan menurun dengan IFN-γ. Faktanya, laporan sebelumnya menunjukkan efek yang tumpang tindih
dan berbeda pada sel untuk kedua sitokin ini. Seperti diberitakan sebelumnya[28-31], peningkatan
kadar TNF-α tampaknya mengganggu kapasitas populasi kembali HSC, mungkin dengan
menyebabkan mereka kelelahan [32]. Di sisi lain, meskipun TNF-α ditahan untuk mengganggu
homeostasis di HSC, pendekatan in vivo menggunakan tikus knockout reseptor TNF membuat para
peneliti menyimpulkan bahwa tingkat yang tepat dari TNF-α mungkin diperlukan untuk pemeliharaan
fungsi HSC jangka panjang.[33-34]. IFN-γ telah dilaporkan untuk menghambat pembaruan diri HSC
sambil mendorong diferensiasi bias myeloid [4, 35]. Dalam laporan lain, stimulasi kronis dengan IFN-
γ terbukti memicu kegagalan BM[36], sementara tingkat IFN-γ tertentu terbukti diperlukan untuk
regulasi yang tepat dari aktivitas HSC [37]. Dalam kasus tipe sel lain, TNF-α, seperti IL-1 dan IL-8,
diketahui mengaktifkan sel dendritik, makrofag, dan neutrofil, sedangkan IFN-γ, seperti IL-2 dan IFN
tipe I, telah ditunjukkan untuk mengaktifkan sel T dan sel NK[3].

Studi dekat imunofenotipe produk titik akhir menemukan perbedaan yang signifikan antara sel
yang dikultur dengan TNF-α dan sel yang dikultur dengan IFN-γ (lihat Gambar 2A). Sementara yang
terakhir menghasilkan populasi besar dengan fenotipe CD38-bright / CD34-negatif, yang pertama
mempertahankan populasi dengan fenotipe CD38-dim / CD34-dim. Hal ini menunjukkan bahwa dua
sitokin secara berbeda mempengaruhi nasib HSCs / HSPCs untuk diferensiasi, meskipun ada
kesamaan yang dinyatakan dalam efek negatifnya pada pengawetan sel primitif. Meskipun
penyelidikan lebih lanjut diperlukan, kami mengusulkan bahwa perubahan tingkat ROS lebih awal
setelah kultivasi mungkin menjadi penentu nasib sel dalam diferensiasi dalam konteks HSCs / HSPCs
dan sitokin inflamasi. Sebaliknya, tingkat ROS yang relatif tidak berubah dapat menunjukkan kondisi
kultur yang baik, seperti dengan TGF-β, IL-6, dan IL-1β, yang mendukung pelestarian / perluasan sel
primitif. Karena HSC sebagian besar terletak di dalam relung BM di mana produksi ROS dibatasi
pada tingkat yang rendah, sehingga terlindung dari stres ROS.[22-23]. Studi kami menunjukkan
bahwa sitokin inflamasi mempengaruhi tingkat ROS di HSCs / HSPCs, sehingga mungkin mengubah
nasib sel. Gagasan ini menambah wawasan baru untuk studi terbaru yang berfokus pada hubungan
antara peradangan dan regulasi fungsi HSC[3, 38]. Lebih banyak penelitian harus dilakukan, dan
mudah-mudahan pada akhirnya akan mengarah pada pengembangan strategi untuk memodulasi
sitokin inflamasi di HSC atau di lingkungan sekitarnya serta bermanfaat bagi pasien yang menderita
situasi klinis di mana regulasi hematopoiesis yang tepat diperlukan, seperti infeksi parah dan beberapa
gangguan hematologis.

HSC - sel induk hematopoietik

HSPCs - sel induk hematopoietik dan progenitor

BM - sumsum tulang
ROS - spesies oksigen reaktif

IL-1β - interleukin-1beta

IL-6 - interleukin-6

TNF-α - tumor necrosis factor-alpha

IFN-α - interferon-alpha

IFN-β - interferon-beta

IFN-γ - interferon-gamma

TGF-β - mengubah faktor pertumbuhan-beta

HOCl - asam hipoklorit

 BAB III

PENUTUP

3.1 KESIMPUAN

Studi kami menunjukkan bahwa sitokin inflamasi mengubah tingkat ROS di HSCs / HSPC
dengan berbagai cara. Kami juga mendemonstrasikan kemungkinan bahwa tingkat ROS dapat
menunjukkan konsekuensi nasib sel, yaitu apakah mempertahankan sel primitif atau terutama untuk
menghasilkan sel dewasa. Pemahaman mendalam tentang hubungan antara setiap sinyal sitokin
inflamasi dan tingkat ROS akan membantu dalam memahami HSC dengan lebih tepat. Banyak jenis
tekanan kemungkinan mengubah dinamika relung BM dan dengan demikian mempengaruhi HSC
secara drastis di luar kemampuan kompensasi mereka. Stres kemungkinan juga mengganggu fungsi
normal HSC primitif. Memperhatikan pengamatan ini dapat membantu dalam pemahaman yang lebih
baik tentang biologi HSC, dengan perbaikan manajemen untuk gangguan hematopoietik.

3.2 SARAN
 DAFTAR PUSTAKA

[1] Trumpp A, Essers M, Wilson A. Awakening sel induk hematopoietik yang tidak aktif. Nat Rev
Immunol. 2010; 10: 201-9. http://dx.doi.org/10.1038/nri2726

[2] Wilson A, Laurenti E, Oser G, van der Wath RC, Blanco-Bose W, Jaworski M, Offner S, Dunant
CF, Eshkind L, Bockamp E, Lió P, Macdonald HR, Trumpp A. Sel punca hematopoietik secara
reversibel beralih dari dormansi ke pembaruan diri selama homeostasis dan perbaikan. Sel. 2008;
135: 1118-29. http://dx.doi.org/10.1016/j.cell.2008.10.048

[3] Raja KY, Goodell MA. Modulasi inflamasi sel induk hematopoietik: melihat sel induk
hematopoietik sebagai fondasi untuk respon imun. Nat Rev Immunol. 2011; 11: 685-92.
http://dx.doi.org/10.1038/nri3062

[4] de Bruin AM, Voermans C, Nolte MA. Dampak dari

interferon-gamma pada hematopoiesis. Darah. 2014; 124: 2479-86.
http://dx.doi.org/10.1182/blood-2014-04-568451

[5] Mirantes C, Passegué E, Pietras EM. Pro-sitokin inflamasi: pemain baru mengatur fungsi HSC
dalam keadaan normal dan sakit hematopoiesis. Exp Sel Res. 2014; 329: 248-54.
http://dx.doi.org/10.1016/j.yexcr.2014.08.017

[6] Hestdal K, Ruscetti FW, Chizzonite R, Ortiz M, Gooya JM, Longo DL, Keller JR. Interleukin-1
(IL-1) secara langsung dan tidak langsung mempromosikan hematopoietik pertumbuhan sel
Melalui reseptor IL-1 tipe I. Darah. 1994; 84: 125-32.