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IV.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

EXPERIMENTO 1:

CURVA DE CALIBRACION PARA EL AMONIACO

a)

Se preparo 6 tubos de ensayo y coloco cantidades apropiadas solucin sulfato de amonio 0.1 M para obtener:

TUBO

CONCENTRACION nM 50 100 150 200 250 300

CONCENTRACION mL 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

1 2 3 4 5 6

b) c)

Se completo cada tubo con agua destilada hasta obtener un volumen de 4.6 ml. Se mezclo bien y aadi 0.4 mL de reactivo de Nessler, se espero un tiempo aproximado de 10 min para completar la reaccin a temperatura ambiente. Se obtiene la lectura del espectrofotmetro, contra un blanco de n agua destilada, con longitud de onda 415 nm. SISTEMA DE TUBOS DE ENSAYO COMPONENTES sulfato de amonio 1 0.1 2 0.2 3 0.3 4 0.4 5 0.5 6 0.6

d)

agua destilada reactivo de Nessler

4.5 0.4

4.4 0.4

4.3 0.4

4.2 0.4

4.1 0.4

4.0 0.4

e)

Se mezclo uniformemente cada tubo, prepare 4.6 de agua destilada mas 0.4 de reactivo de Nessler.

f) Se mezclo y dejo en reposo por 10 min.

SISTEMA DE TUBOS DE ENSAYO COMPONENTES sulfato de amonio agua destilada 1 0.1 4.5 2 0.2 4.4 3 0.3 4.3 4 0.4 4.2 5 0.5 4.1 6 0.6 4.0

RESULTADOS EXPERIMENTALES Y EJERCICIOS PROPUESTOS

CUADRO 1: DE ABSORBANCIAS Y CONCENTRACIONES

TUBOS

ABSORBANCIA R L

CONCENTRACION CONCENTRACION DE SULFATO DE AMONIACO AMONIO 0.1 0.1 0.1 0.1 0.2 0.3

1 2 3

0.0 0.196 0.335

0.0 0.181 0.320

4 5 6 7

0.484 0.614 0.746 0.833

0.458 0.597 0.735 0.874

0.1 0.1 0.1 0.1

0.4 0.5 0.6

GRAFICA 1

Promedio

DE simple 0,0065 0,0627 0,0231 0,0604

IC superior 0,14514 0,41286 0,49915 0,739554

IC inferior 0,12441 0,21208 0,42554 0,547045

CV

BC

CE

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4

0,134775 0,312975 0,46235 0,6433

0,00651633 0,06278388 0,02313576 0,06049931

4,834969 20,06019 5,003949 9,404525

6.96% 22.68% 5.85% 12.87%

93.04% 77.32% 94.14% 87.71%

Obtenidos estos datos, se puede hacer una curva de Regresin lineal.

Concentracin mg/mL 0,5 1 1,5

Absorbancia (460 nm) 0,134775 0,312975 0,46235

0,6433

y = 0,335x - 0,0304 R2 = 0,9987 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 0,5 1 1,5 2 2,5

460

Serie1 Lineal (Serie1)

Con el valor de k se puede construir una nueva recta. La variable incgnita ser la Absorbancia. A= 0.303075 x0.5 y A1= 0.1515 A= 0.303075 x 1.0 y A2= 0.303075 A= 0.303075 x 1.5 y A3= 0.4546 A= 0.303075 x 2.0 y A4= 0.60615 A= 0.303075 x 2.5 y A5= 0.010617 A= 0.303075 x 3.0 y A6= 0.36061 A= 0.303075 x 3.5 y A7= 0.54865

 Tubo 1:  Tubo 2:  Tubo 3:  Tubo 4:  Tubo 5:  Tubo 6:  Tubo 7:

EXPERIMENTO 2:

EFECTO DE LA CONCENTRACION DE LA ENZIMA UREASA SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCION

I.

OBJETIVO:

Comprobar el efecto de la concentracin de la enzima sobre la Vr. el mtodo a seguir es usar diferentes concentraciones de enzima ureasa, manteniendo estables los parmetros que afectan la velocidad.

II. 1.

PROCEDIMIENTO: Pre incubar 5 tubos a 37 C por 5 min. Y luego agregar solucin de ureasa en los volmenes siguientes:

COMPONENTE

SISTEMA DE TUBOS 1 2 0.4 2.56 40 3 0.4 2.54 60 4 0.4 2.52 80 5 0.4 2.50 100

urea Buffer fosfato Ureasa uL

0.4 2.58

Bf+EDTA 20

2.

Incube la enzima a 37 por 15 min. el tiempo cero es cuando se adiciona la enzima .

3.

Completado el tiempo se coloco los tubos de ensayo en un vaso de precipitacin que contena hielo. Se retiro alicotas de 0.3 ml de cada tubo y recibi en otros tubos de igualmente enumerados, los cuales contuvieron 4,3 ml de agua destilada helada. Inmediatamente se agrego a cada tubo 0.5 ml de reactivo de nessler .se espero 10 min a temperatura ambiente.

4.

5.

Se lee en espectrofotmetro a 415 nm observando inicialmente la absorvancia cero de un tubo de agua destilada en blanco. Con los datos obtenidos represente el efecto de la concentracin de enzima sobre la velocidad de reaccin en un papel milimetrado.

COMPONENTE

SISTEMA DE TUBOS

1 Agua destilada 4.6

2 4.6 0.02ml

3 4.6 0.02ml

4 4.6 0.02= 20ul

5 4.6 0.02

Incubado sustrato 0.02 ml +e Reactivo nessler de 0.4

0.4

0.4

0.4

0.4

III.

RESULTADOS EXPERIMENTALES Y EJERCICIOS PROPUESTOS

CUADRO 1: DE ABSORBANCIAS Y CONCENTRACIONES

TUBOS

ABSORBANCIA R L

CONCENTRACION AMONIACO 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1

1 2 3 4 5 6

0.0 0.199 0.438 0.623 0.885 0.969

0.51146 0.3564 0.333654 0.12321 0.21112 0.3321

GRAFICA 1

Calculamos volmenes.

Regresin lineal
0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 0,5 1 1,5 2

y = 0,335x - 0,0304 R2 = 0,9987

Absorbacia (460 nm)

Serie1 Lineal (Serie1)

2,5

Concentracin mg/mL

IMAGEN

EXPERIMENTO 3:

EFECTO DE LA CONCENTRACION DE LA ENZIMA UREASA SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCION

Es el mismo procedimiento que el experimento dos solo que en este caso ser en funcin a otra variable.los procedimientos los veremos grficamente.

1 USO DE ENZIMA

2 LOS TUBOS A USAR

3 bao mara

4uso

de las micropipetas

6El cuadro de elementos participantes:

COMPONENTE

SISTEMA DE TUBOS 1 2 4.6 0.02ml 3 4.6 0.02ml 4 4.6 0.02= 20ul 5 4.6 0.02

Agua destilada

4.6

Incubado sustrato 0.02 ml +e Reactivo nessler de 0.4

0.4

0.4

0.4

0.4

6 paso es colocar los tubos en orden

7 colocar el reactivo de Nessler

Comparacin

de

tubos

de Mantenerlos a Temperatura fra

mayor a menor [C]

Leer la absorbancia:

RESULTADOS EXPERIMENTALES Y EJERCICIOS PROPUESTOS

CUADRO 1: DE ABSORBANCIAS Y CONCENTRACIONES

TUBOS

ABSORBANCIA R L

CONCENTRACION CONCENTRACION DE SULFATO DE AMONIACO AMONIO 0.09 0.09 0.09 0.09 0.09 0.09 0.09 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1

1 2 3 4 5 6 7

0.0 0.198 0.621 0.658 0.710 0.712 0.820

0.51146 0.3564 0.333654 0.12321 0.21112 0.3321 0. 2321

IMGENES

DISCUSION Y ANALISIS:

 La velocidad de formacin del producto guarda relacin con la velocidad de descomposicin del sustrato, siendo importante conocer la velocidad de la reaccin sin el aumento de concentracin y compararla con la que si muestra un incremento en la concentracin enzimtica.  La temperatura es un facto externo importante para el desarrollo normal de la reaccin, pero como sabemos no todas las reacciones son dependientes de este factor, pero en el caso enzimtico si ya dinamizan las molculas de la solucin creada.  La concentracin de amoniaco ante el espectrofotmetro aumenta la absorvancia, debido a que los cuerpos qumicos de esta solucin son afines a la captura de luz aumentando el nmero o capacidad de absorvancia. CONCLUSIONES:

 Cuando el sustrato inicial se encuentra en una porcin mnima, la velocidad inicial es directamente proporcional a la concentracin de sustrato, y por tanto, la reaccin es de primer orden.  Las graficas de la velocidad de reaccin frente a la concentracin de sustrato pueden presentarse de dos formas tanto en hiprbola como sigmoidea.  Muchas la naturaleza de la enzima cuenta ya que puede ser alosterica, si es que obedece a la ecuacin de Michaelis-Menten.

 A mayor concentracin de la enzima, la velocidad de reaccin aumenta, ya que esta disminuye el umbral de accin o la energa de la activacin del la sustancia en mencin.  La concentracin de la enzima posee efecto catalizador ante una reaccin, la cual debido a su concentracin puede aumentar o disminuir la velocidad con que se efectu una reaccin biolgica-qumica.  Esta relacin nos aporta una explicacin sobre las razones que hacen de la KM un parmetro cintico importante.  La temperatura ordinaria las reaccin que no requieren un reajuste de enlaces suelen ser rpidas, caso contrario sucede con las reaccin que tienen finalidad de formacin de nuevos productos, como lo son as las que hemos desarrollado en esta prctica.  La constante de velocidad en la reaccin qumica est influenciada por factores externos netamente dirigidos a las condiciones en que se trabaja.