Disciplina de Biocincias ( DB-110 ) Aula Prtica 3

Caracterizao de Aminocidos e Protenas

I - Reao de Heller ou Xantoprotica: O cido ntrico ( HNO3 ) reage com aminocidos contendo radical aromtico, ou protenas contendo estes aminocidos formando compostos nitro ou nitrosos de cor amarela. Obs: O 1,0 mL do HNO3 concentrado j se encontrano tubos pr numerados. (CUIDADO TXICO)

Tubos 1 2 3 4

Solues 1,0 mL de H2O 1,0 mL de saliva no centrifugada 1,0 mL de saliva centrifugada 1,0 mL de clara de ovo a 10%

cido ntrico concentrado 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL

Observe e anote os resultados

Anotaes:

II - Reao de Sulfidrilos: Usada na caracterizao de aminocidos contendo grupo sulfidrlico.

Aminocidos ou protenas contendo grupo sulfidrilico Acetato de Pb NaOH
TUBOS Solues NaOH 20% 1 2 3 4 5

2 SH + Pb PbS2 (cor escura)

0,5 mL gua dd
0,5 mL

0,5 mL de saliva no centrifugada

0,5 mL

0,5 mL de saliva centrifugada

0,5 mL

0,5 mL de Clara de ovo 10%

0,5 mL

0,5 mL de cisteina 0,4%

0,5 mL

Acrescente 5 gotas de acetato de chumbo 5% a cada tubo Colocar em Banho Maria Fervente por 5 minutos. Observe e explique. Resultados

Anotaes:

III- Reao de Biureto: Caracteriza proteinas. O Reativo de Biureto contm Cu 2+ que se liga aos grupos amina de cadeias polipeptidicas adjacentes. O ... C R O R ...
Tubos 1 2 3 Solues 1,0 mL de H2O 1,0 mL saliva centrifugada 1,0 mL clara de ovo 10% Reativo de Biureto 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL

C C C NH H NH H Cu2+

cor violeta

Compare as cores e explique

Anotaes:

...

NH H NH H C C C C ... O R O R

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IV - Desnaturao pelo calor: O tubo de ensaio enumerado Exp. IV j contem 1,0 mL de clara de ovo concentrado devendo apenas ser colocado por 3 minutos em Banho Maria fervente. Observe o ocorrido em funo do tempo, anote os resultados e explique.
Anotaes:

V - Desnaturao por reagentes dos alcalides: Enumere 3 tubos de ensaios. Ao tubo 1, adicione 1,0 mL de H2O e acrescente, gota a gota, 1,0 mL de TCA 10%. Ao tubo 2, adicione 1,0 mL de clara de ovo a 10% e acrescente, gota a gota, 1,0 mL de TCA 10%. Ao tubo 3, adicione 1,0 mL de clara de ovo a 10% e 0,5 mL de NaOH 20%. Agitar e ento acrescentar, gota a gota, 1,0 mL de TCA 10%. Observe, anote os resultados e explique.
Anotaes:

VI - Desnaturao por sais de metais pesados

Tubos Solues acetato de chumbo 5% Anotaes: 1 1,0 mL de H2O 1,0 mL 2 1,0 mL saliva mista centrifugada 1,0 mL 3 1,0 mL clara de ovo 10% 1,0 mL

Observe, anote os resultados e explique.

VII - Precipitao por solventes orgnicos

Tubos Solues Etanol 1 1,0 mL de H2O 2,0 mL 2 1,0 mL de clara de ovo a 10% 2,0 mL

Observe, anote os resultados e explique. VIII - Precipitao por aumento de fora inica
A um tubo de ensaio 1 e a um tubo de centrfuga 2, transfira 1,0 mL de clara de ovo 10%. Acrescente a cada tubo 1,0 mL de sulfato de amnio saturado. Observe e explique. Ao tubo de ensaio 1, adicione H 2O destilada ( 2 mL) at a redissoluo do precipitado e explique. Centrifugue o tubo 2. Transfira o sobrenadante para um tubo de ensaio 3 e acrescente a este 1,0 mL de sulfato de amnio. Explique. No prprio tubo de centrfuga 2, analise o precipitado pela Reao de Biureto, acrescentando 1,0 mL de Reativo de Biureto e se necessrio adicione NaOH 20% (cerca de 5 gotas).

Perguntas para a discusso:

1. 2. 3. 4. 5. Quais aminocidos esto presentes nas protenas analisadas no experimento I (Reao de Heller). Identifique a estrutura destes aminocidos responsveis pela reao Na reao de sulfidrilos, por que os tubos so colocados no banho-maria fervente? Considerando que o produto de reao o sulfeto de Pb, quais aminocidos da estrutura das protenas so responsveis pela reao? Qual a importancia da temperatura na desnaturao das protenas para a pratica clinica? Explique porque etanol ou acetona provoca nas protenas uma desnaturao reversvel e explique o mecanismo? Qual a importncia da reao VI, do ponto de vista de poluio ambiental?

Prof. Dr. Jaime A. Cury Prof.a. Dra. Cnthia P. M. Tabchoury

Tcs. Sr. Waldomiro V. Filho Sr. Jos Alfredo de Silva

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