Machine Translated by Google

Jurnal Bahan Berbahaya 368 (2019) 149–155

Daftar isi tersedia di ScienceDirect

Jurnal Bahan Berbahaya

beranda jurnal: www.elsevier.com/locate/jhazmat

Selubung sel adalah situs kunci untuk reduksi Cr(ÿ) oleh T

Oceanobacillus oncorhynchi W4, bakteri pereduksi Cr(ÿ) yang baru diisolasi
Qiang Zenga , Yuting Hua, Yiran Yanga , Liang Hua, Hui Zhongb,ÿ , Zhiguo Hea,ÿ
Sekolah Pengolahan Mineral dan Bioteknologi, Laboratorium Kunci MOE Biohydrometallurgy, Central South University, Changsha, 410083, Cina
sebuah

b
School of Life Sciences, Central South University, Changsha, 410083, Cina

INFORMASI ARTIKEL ABSTRAK

Kata kunci: Cara penghilangan Cr(ÿ) dan situs pereduksi Cr(ÿ) dari Oceanobacillus oncorhynchi W4, bakteri pereduksi Cr(ÿ) baru,
Cr(ÿ) reduksi diselidiki dalam penelitian ini. Hasil menunjukkan bahwa sekitar 74,2% Cr(ÿ) dihilangkan dari larutan dengan
Gliserin menumbuhkan sel dalam waktu 72 jam. Selain itu, sel istirahat yang mati akibat pemanasan memiliki kapasitas
Cr(ÿ) reduktase
penyisihan Cr(ÿ) yang kecil, yang secara signifikan lebih rendah daripada sel istirahat, yang mencapai tingkat
Analisis XPS
penyisihan hampir 80%, menunjukkan bahwa cara penghilangan Cr(ÿ) terutama mengandalkan reduksi biologis
Oceanobacillus oncorhynchi W4
daripada daripada biosorpsi. Dan reduksi Cr(ÿ) ditemukan meningkat secara signifikan oleh beberapa donor elektron,
terutama gliserin, yang selanjutnya memverifikasi reduksi biologis yang dimediasi enzim sebagai cara untuk
menghilangkan Cr(ÿ). Eksperimen penghilangan Cr(ÿ) oleh sel permeabel menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan
yang signifikan dalam reduksi kromium antara sel yang tidak permeabel dan sel yang permeabel. Fraksi selubung sel
memiliki tingkat penyisihan Cr(ÿ) sebesar 82,9%, tampaknya lebih tinggi dari fraksi sitoplasma (11,1%), menunjukkan
bahwa selubung sel adalah lokasi utama untuk reduksi Cr(ÿ), yang selanjutnya ditunjukkan oleh Scanning Electron
Mikroskop dan mikroskop elektron Transmisi ditambah analisis EDS. Selanjutnya, analisis spektroskopi fotoelektron
sinar-X menunjukkan bahwa gugus C]O, C-OH dan C-OeC pada permukaan memainkan peran utama dalam korelasi dengan spes

1. Perkenalan
Perkembangan industri peleburan, bahan kimia dan kulit telah menyebabkan
senyawa terkait kromium dilepaskan ke lingkungan, menjadikan kromium sebagai
jenis polutan yang serius [1]. Kromium ada terutama dalam bentuk trivalen dan
heksavalen [2]. Cr(ÿ) telah menarik perhatian komprehensif karena kelarutannya
yang tinggi dan mobilitasnya yang tinggi, toksisitas yang tinggi, mutagenisitas dan
karsinogenisitas yang tinggi [3,4]. Sebaliknya, Cr(ÿ) memiliki fluiditas dan toksisitas
yang rendah. Dengan demikian, strategi remediasi terutama berfokus pada
pengurangan Cr(ÿ) menjadi Cr (III). Dibandingkan dengan metode remediasi
lainnya, bioremediasi dianggap sebagai cara yang ramah lingkungan, biaya rendah
dan penyelesaian yang baik untuk memulihkan polusi Cr(ÿ) [5–7]. Mekanisme
bioremediasi pencemaran Cr(ÿ) meliputi reduksi Cr(ÿ) yang dimediasi oleh enzim,
akumulasi intraseluler, biosorpsi dan pembentukan metabolit Cr [8-10]. Dan posisi
reaksi reduksi Cr(ÿ) berkaitan erat dengan lokasi kromium reduktase. Mekanisme
yang tepat pada bioreduksi Cr
resistensi dan pengurangan kapasitas telah berhasil diisolasi dan diidentifikasi.
Strain Oceanobacillus oncorhynchi sebelumnya ditemukan di usus manusia [12],
danau garam [13], pasir laut [14], sedimen laut dalam [15], tanah hutan mangrove
[16], makanan [17], saltern [18] dan lumpur aktif [19], yang memiliki ketahanan
alkali atau halofilisme. Namun demikian, resistensi Cr(ÿ), kapasitas penghilangan
atau reduksi Cr(ÿ) dan lokasi reaksi reduksi tidak dilaporkan.
Pada penelitian sebelumnya, kami telah mempelajari sifat dasar dan kapasitas
penyisihan Cr(ÿ) dari O.oncorhynchi W4, namun mekanisme yang terlibat dalam
reduksi Cr(ÿ) masih belum jelas. Tujuan utama dari pekerjaan ini adalah untuk
menyelidiki cara yang tepat dari penghapusan Cr(ÿ) oleh Oceanobacillus
oncorhynchi W4, untuk mengidentifikasi lokasi reduksi Cr(ÿ) dan mencoba untuk
mengungkapkan kelompok fungsional sel yang berinteraksi dengan elemen
kromium.
2. Bahan-bahan dan metode-metode

(ÿ) masih belum diklarifikasi meskipun ada beberapa penelitian [11]. 2.1. Reagen dan budidaya mikroorganisme
Kami sebelumnya telah mempelajari distribusi mikroorganisme dalam tumpukan
terak krom dan beberapa strain bakteri pereduksi Cr(ÿ) termasuk Oceanobacillus Semua bahan kimia yang digunakan adalah murni analitis dan tidak memerlukan
oncorhynchi W4 [3] dengan Cr(ÿ) tinggi pemurnian lebih lanjut. Strain axenic dari Oceanobacillus oncorhynchi W4

Penulis yang sesuai.

Alamat email: 35406719@qq.com (H. Zhong), zghe@csu.edu.cn (Z. Dia).

https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2019.01.031
Diterima 21 Oktober 2018; Diterima dalam bentuk revisi 10 Januari 2019; Diterima 11 Januari 2019
Tersedia online 12 Januari 2019 0304-3894/ © 2019 Elsevier BV Hak cipta dilindungi undang-undang.
Machine Translated by Google
Q.Zeng dkk.
(KC122928), diisolasi dari tanah yang terkontaminasi kromium [3], digunakan dalam
penelitian ini. Lokasi pengambilan sampel tanah terletak di kromium
pabrik Changsha, yang dibangun pada tahun 1976. Sampel tanah yang terkontaminasi
Cr(VI) dikumpulkan dari 5 cm teratas tanah. Itu
Nilai pH dan kadar air sampel tanah diukur sebagai 10,07 dan
35,24%, masing-masing. Kandungan logam berat sampel tanah adalah
ditunjukkan pada tabel S1. Proses isolasi dan identifikasi bakteri dijelaskan seperti
pekerjaan sebelumnya [3]. Bakteri diokulasi dalam medium yang mengandung pepton
10,0 g L-1 , ekstrak ragi
5.0 g Lÿ1 , NaCl 5.0 g Lÿ1 , MgSO47•H2O 0,2 g Lÿ1 , dan K2HPO4
0,05 g L-1 [20]. Kemudian, nilai pH media diatur menjadi 9 .
dan dibudidayakan pada 180 rpm dan 30ÿ.
2.2. Penghapusan Cr(ÿ) dengan menumbuhkan sel
2 mL kultur bakteri fase pertumbuhan eksponensial diinokulasi
ke dalam media kultur steril (100 mL) dengan konsentrasi Cr(ÿ) yang diinginkan (200
mg/L) dengan menambahkan larutan induk Cr(ÿ). Dan kemudian
campuran diinkubasi pada 30 dengan pengocokan pada 180 rpm. Pada interval
waktu, campuran (3 mL) ditarik untuk menganalisis kepadatan sel
(OD600) dan konsentrasi Cr(ÿ). Konsentrasi Cr(ÿ) dalam
supernatan kultur ditentukan oleh 1,5-diphenylcarbazide
metode pada 540 nm.
2.3. Reduksi Cr(ÿ) oleh sel-sel istirahat
Oceanobacillus oncorhynchi W4 ditanam dalam cairan yang diautoklaf
fase log sedang hingga akhir dan sel kemudian dipanen dengan sentrifugasi pada
10.000 rpm selama 20 menit. Supernat (media kultur
bebas sel) dicadangkan untuk menganalisis apakah terjadi reduksi kromat abiotik.
Pelet sel dicuci tiga kali dengan 25 mM TrisÿHCl buffer
(pH 9.0) untuk menghilangkan kotoran. Pelet sel 0,4 g (berat basah) disuspensikan
kembali dalam larutan buffer 20 mL dan dibagi menjadi dua bagian yang sama.
Satu bagian dari suspensi sel istirahat diinkubasi pada 65 selama 15 menit
[21,22] dan yang lainnya tidak dipanaskan. Konsentrasi Cr(ÿ) awal yang diinginkan
(10 mg/L) diperoleh dalam suspensi dengan menambahkan tertentu
volume Cr(ÿ) cairan induk. Kemudian, campuran diinkubasi pada suhu 30ÿ
dan 180rpm. Konsentrasi Cr(ÿ) diuji pada interval waktu yang teratur.
2.4. Pengaruh donor elektron dan kepadatan sel pada reduksi Cr(ÿ) oleh
sel istirahat
Donor elektron yang berbeda [23] (NADH, sitrat, asetat, format,
laktosa, glukosa, laktat, gliserin) di bawah konsentrasi tertentu adalah
ditambahkan ke dalam suspensi dengan konsentrasi Cr(ÿ) yang diinginkan (20 mg/L) hingga
menyelidiki pengaruhnya terhadap reduksi Cr(ÿ). Campurannya adalah
diinkubasi pada 30 dan 180 rpm dan konsentrasi Cr (ÿ) diuji pada
waktu yang telah ditentukan.
2.5. Analisis kinetika
Data reduksi Cr(ÿ) oleh sel-sel istirahat dalam kondisi yang berbeda diproses
dengan model kinetik orde pertama semu, sebagai
disajikan dalam Persamaan. (1).
ln(Ct/C0) = kt
dimana C0 adalah konsentrasi awal Cr(ÿ), Ct adalah konsentrasi Cr
(ÿ) pada waktu reaksi (h), k mewakili konstanta laju (hÿ1 ).
2.6. Pengurangan Cr(ÿ) oleh sel permeabel dan fraksi sel
Suspensi sel (diperoleh seperti di atas) dibagi menjadi tiga sama besar
bagian. Sel permeabel diperoleh dengan memperlakukan salah satu sampel
dengan 0,01% (v/v) Toluena dan 0,2% (v/v) Triton X-100 selama 10 menit. Sebagai
Jurnal Bahan Berbahaya 368 (2019) 149–155
kontrol, suspensi sel lain mempertahankan integritas sel. Sel-sel yang tidak permeabel
dan sel-sel yang permeabel segera digunakan untuk mengevaluasi
Performa reduksi Cr(ÿ). Konsentrasi Cr(ÿ) awal dari
10 mg L-1 dipilih dalam percobaan dan campuran dikubus pada 30 di bawah
pengocokan (180 rpm) selama 48 jam.
Suspensi ketiga diperlakukan dengan menggunakan Ultrasonic Probe
(Rivotek, frekuensi 30 KHz ± 3 KHz) pada 200 W dengan 3 s pulsa pada 2 s
interval selama 100 detik [21]. Homogenat yang dihasilkan kemudian disentrifugasi
pada 8000 rpm selama 10 menit pada 4 untuk menghilangkan puing-puing sel dan minyak mentah
ekstrak (supernatan) diperoleh. Ekstrak kasar disentrifugasi
pada 12.000 rpm selama 30 menit pada 4 untuk mendapatkan fraksi membran
(pelet) dan fraksi sitoplasma (supernatan) [22,24], yang
segera digunakan untuk mengevaluasi kinerja reduksi Cr(ÿ) mereka. Itu
kondisi percobaan sama dengan percobaan reduksi Cr(ÿ) oleh sel permeabel.
2.7. Karakterisasi residu kromium
Bakteri dikultur dalam media LB (nilai pH 9,0) dengan
200 mg/L Cr(ÿ) pada 30 selama 48 jam. Suspensi sel dioleskan ke
slide kaca dan dikeringkan. Sampel sel amobil disiapkan sebagai:
dijelaskan oleh penelitian lain [25,26]. Setelah disemprot dengan emas, spesimen
diperiksa menggunakan Mikroskop Elektron Pemindaian XL 30 ESEM
dilengkapi dengan spektroskopi sinar-X Energy Dispersive (ED S). Mikroskop elektron
transmisi (TEM) digunakan untuk menyelidiki
struktur mikro bakteri dan distribusi spasial produk reduksi kromat untuk kemampuan
resolusi tinggi mereka [27]. Sel
pelet yang diperoleh seperti di atas diimobilisasi dengan menggunakan glutaraldehida
(larutan 1%) dan paraformaldehyde (2%) [25,28]. Setelah diperbaiki untuk
12–18 jam, pewarnaan sel yang disuspensi ulang dilakukan menggunakan os mium
tetraoksida (1%) selama 20 menit pada 4 . Sel-sel dehidrasi diperoleh
dari pembilasan larutan aseton digunakan untuk mempersiapkan bagian ultrathin
dengan menggunakan ultramikrotom. Bagian yang diperoleh selanjutnya diwarnai
dengan alkohol uranil asetat (10 menit) dan timbal sitrat (10 menit). Itu
bagian ultrathin yang diwarnai dilihat menggunakan TEM yang dilengkapi dengan
spektroskopi sinar-X Energi Dispersive (EDS). Analisis fotoelektron spec troscopy
(XPS) sinar-X digunakan untuk menentukan lebih lanjut variasi keadaan valensi Cr,
C, N dan O yang terkait dengan Oceanobacillus
sel sp.W4.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1. Penghapusan Cr(ÿ) dari larutan oleh Oceanobacillus sp. W4
Penghilangan Cr(ÿ) dari larutan oleh Oceanobacillus sp.W4 dilakukan pada
medium dengan 200 mg/L Cr(ÿ) dan hasilnya ditunjukkan pada
Gambar 1. Bakteri terus tumbuh dan konsentrasi Cr(ÿ) dalam larutan
menurun seiring waktu. Sekitar 74,2% Cr(ÿ) dihilangkan dari larutan setelah 72 jam.
Tidak ada penurunan yang jelas dalam konsentrasi Cr(ÿ)
untuk kontrol yang menunjukkan bahwa komponen media tidak dapat diputar
peran penting untuk penghapusan Cr(ÿ) [29].
3.2. Kapasitas penghilangan Cr(ÿ) dari larutan dengan mengistirahatkan sel
Gambar 2 menunjukkan bahwa Cr(ÿ) secara bertahap dihilangkan dari larutan dengan
istirahat sel dengan perpanjangan waktu. Dibandingkan dengan mendekati nol
(1) tingkat penghapusan Cr(ÿ) oleh sel-sel yang dimatikan panas, sel-sel istirahat memiliki yang lebih baik
Laju penyisihan Cr(ÿ) hampir 80% pada konsentrasi Cr(ÿ) awal
10 mg/L. Hasilnya menunjukkan bahwa cara utama penghilangan Cr(ÿ)
adalah reduksi biologis yang dimediasi enzim. Chirayu dkk juga menemukan
bahwa suspensi sel Bacillus sp. menunjukkan penghilangan Cr(ÿ) yang baik
kemampuan [30]. Dalam penelitian ini, tidak ada aktivitas penghilangan Cr(ÿ) yang
diamati untuk sel yang dimatikan karena panas, yang seharusnya dikaitkan dengan
aktivasi kromium reduktase setelah perlakuan pemanasan. Bisa juga
disimpulkan dari data penyisihan Cr(ÿ) dengan sel mati panas yang
biosorpsi Cr(ÿ) hampir tidak teramati karena
150
Machine Translated by Google
Q.Zeng dkk.
Gambar 1. Pertumbuhan dan Reduksi Cr(ÿ) O. Oceanobacillus sp. W4 dalam medium
dengan 200 mg/L Cr(ÿ).
Gbr. 2. Penghapusan Cr(ÿ) oleh sel istirahat, sel mati panas dan media kultur bebas
sel dalam larutan dengan 10 mg/L Cr(ÿ).
2ÿ
tolakan elektrostatik antara permukaan sel dan kondisi CrO4 di bawah alkali
(nilai pH 9). Untuk media kultur yang bebas sel, tidak ada aktivitas pereduksi
Cr(ÿ) yang diamati yang menunjukkan bahwa reduksi Cr(ÿ) oleh O. oncorhynchi
W4 bukan karena reduksi tidak langsung oleh metabolit sel atau mensekresi
enzim [29]. Oleh karena itu, reduksi Cr(ÿ) terutama disebabkan oleh reduksi
biologis yang dimediasi oleh enzim.
3.3. Efek donor elektron dan kepadatan sel pada reduksi Cr(ÿ) oleh sel yang
beristirahat
Ada rantai transpor elektron dalam sel mikroba, yang terdiri dari serangkaian
gugus prostetik dan kompleks enzim. Elektron dari koenzim organik atau
tereduksi dapat diangkut ke akseptor elektron, seperti O2, NO3 dan Cr(ÿ), yang
secara signifikan dapat meningkatkan efisiensi reduksi akseptor.
Dalam studi ini, berbagai donor elektron diterapkan untuk mengevaluasi
efeknya pada reduksi Cr(ÿ) oleh O. oncorhynchi W4. Seperti ditunjukkan pada
Gambar. 3, laktosa dan asam format menghambat reduksi Cr(ÿ). Sementara
donor elektro lainnya secara signifikan mempromosikan pengurangan Cr(ÿ), di
antaranya, gliserin diidentifikasi sebagai elektron yang paling efisien.
151
Jurnal Bahan Berbahaya 368 (2019) 149–155
Gambar 3. Pengaruh donor elektron eksogen pada reduksi Cr(ÿ) oleh sel-sel O.
Oceanobacillus sp. W4.(Cr(ÿ) awal konsentrasi 10 mg/L, nilai pH 9 dan suhu 30 ).
Gambar 4. Reduksi Cr(ÿ) oleh fraksi sel yang berbeda dari O. Oceanobacillus sp.
W4. (Cr(ÿ) awal konsentrasi 10 mg/L, nilai pH 9 dan suhu 30 ).
donor dengan tingkat reduksi Cr(ÿ) maksimum 72,3% diperoleh. Tingkat reduksi
Cr(ÿ) untuk NADH, glukosa, laktat, sitrat dan asetat masing-masing adalah 54%,
47,5%, 40,4%, 35,8% dan 19,6%. Hasil ini lebih lanjut menunjukkan bahwa cara
penghilangan Cr(ÿ) dari larutan oleh O. oncorhynchi W4 adalah reduksi yang
melibatkan mikroba. Proses reduksi kromium oleh bakteri melibatkan transpor
elektron dari potensial redoks yang lebih rendah sebagai donor elektron (seperti
sumber karbon) ke zat potensial redoks yang lebih tinggi [31] (Cr(ÿ)). Oleh
karena itu, laju reduksi Cr(ÿ) dipercepat dengan menambahkan beberapa donor
elektron. Namun, strain bakteri yang berbeda mungkin memiliki struktur dan
jalur metabolisme yang beragam. Jadi, hanya sebagian kecil dari sumber karbon
yang dapat digunakan oleh strain bakteri tertentu. Satarupa dkk. menemukan
bahwa gliserin adalah sumber karbon terbaik untuk reduksi Cr(ÿ) oleh
Corynebacterium paurometabolum juga [32]. Sementara reduksi Cr(ÿ) dapat
dipromosikan secara signifikan untuk Bacillus sphaericus [33], Serratia sp. [31]
dan Pseudomonas Aeruginosa [34] dengan adanya glukosa, yang dikaitkan
dengan oksidasi glukosa yang mudah [35].
Berdasarkan hasil bahwa gliserol memiliki efek promosi terbaik pada reduksi
Cr(ÿ) oleh O. oncorhynchi W4, pengaruh konsentrasi gliserol terhadap reduksi
Cr(ÿ) dipelajari lebih lanjut. Seperti yang diamati dalam
Machine Translated by Google
Q.Zeng dkk.
Gambar 5. Citra SEM dan Analisis EDS O. Oceanobacillus sp. W4 diobati dengan 200 mg/L Cr(ÿ) setelah 48 jam.
Gambar S2(a), ketika konsentrasi gliserol berada pada kisaran 0–3 g/L, laju
reduksi Cr(ÿ) meningkat secara signifikan dari 6,4% menjadi 72,43% dalam
waktu 24 jam. Sedangkan pada penurunan Cr(ÿ) tidak terdapat perbedaan
yang nyata, ketika konsentrasi gliserol berada pada kisaran 3–6 g/L. Model
orde pertama semu digunakan agar sesuai dengan data eksperimen [36].
Dapat dilihat bahwa model sangat cocok untuk reduksi Cr (ÿ) dengan sel
istirahat karena nilai koefisien linier yang tinggi, seperti yang ditunjukkan pada
Gambar. S2(b) dan Tabel S2. Dan konstanta laju reduksi secara bertahap
meningkat dari 0,003 h-1 menjadi 0,061 h-1 ketika konsentrasi gliserol
meningkat dari 0 menjadi 3 g/L. Ini seharusnya karena fakta bahwa efek
percepatan lebih signifikan selama transportasi elektron pada konsentrasi
donor elektron yang tinggi.
Selain itu, efek kepadatan sel dalam larutan pada reduksi Cr(ÿ) dipelajari
lebih lanjut (seperti yang ditunjukkan pada Gambar. S3 dan Tabel S3). Seperti
yang diharapkan, laju reduksi Cr(ÿ) secara bertahap meningkat dengan
meningkatnya kepadatan sel. Dan proses reduksi Cr(ÿ) sesuai dengan kinetika
orde satu semu (R2 = 0,962-0,986). Hasil menunjukkan bahwa 74,8% Cr(ÿ)
berkurang dalam waktu 28 jam dan konstanta laju reduksi adalah 0,058 jam-1
ketika kepadatan sel adalah 20 mg/mL. Sedangkan laju reduksi Cr(ÿ) dan
konstanta laju reduksi meningkat masing-masing menjadi 91% dan 0,0963 h-1
pada densitas sel 35 mg/mL.
152
Jurnal Bahan Berbahaya 368 (2019) 149–155
3.4. Lokalisasi reduksi Cr(ÿ)
Dianggap bahwa reduksi biologis yang dimediasi enzim harus menjadi
peran kunci meskipun ada beragam donor elektron yang berpartisipasi dalam
reaksi reduksi Cr(ÿ) [33]. Namun lokasi yang tepat dari reaksi reduksi Cr(ÿ)
masih belum jelas untuk O. oncorhynchi W4. Jadi, aktivitas reduksi Cr (ÿ)
dipelajari secara komparatif antara sel yang tidak permeabel dan sel yang
permeabel. Hasil (Gbr. S4) menunjukkan bahwa pengurangan Cr(ÿ) meningkat
seiring waktu dan tidak ada perbedaan nyata yang diamati antara sel permeabel
dan sel impermeabel O. oncorhynchi W4. Tingkat pengurangan Cr(ÿ) untuk sel
kedap air dan sel permeabel masing-masing mencapai 75,9 dan 76,9% dalam
waktu 6 jam. Beberapa penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa reduksi
Cr(ÿ) oleh sel permeabel seperti Brevibacterium [37] sp., Stenotrophomonas
[37] sp. dan Bacillus [30] sp. telah ditemukan lebih efektif daripada sel-sel yang
tidak permeabel, karena peningkatan penetrasi sel yang memungkinkan lebih
banyak Cr(ÿ) masuk ke sitoplasma kemudian direduksi oleh zat pereduksi
intraseluler setelah perawatan permeabilitas. Namun, tidak ada peningkatan
reduksi Cr(ÿ) oleh sel permeabel O. oncor hynchi W4 dalam penelitian ini
menunjukkan bahwa reaksi reduksi Cr(ÿ) mungkin terjadi terutama pada fraksi
selubung sel.
Untuk memverifikasi lebih lanjut deduksi ini, eksperimen reduksi Cr(ÿ) oleh
fraksi sel yang berbeda dilakukan lebih lanjut. Seperti yang ditunjukkan pada
Gambar. 4, tingkat reduksi Cr(ÿ) meningkat seiring waktu dan fraksi selubung sel
Machine Translated by Google

Q.Zeng dkk. Jurnal Bahan Berbahaya 368 (2019) 149–155

Gambar 6. Gambar TEM dan Analisis EDS O. Oceanobacillus sp. W4 diobati dengan 200 mg/L Cr(ÿ) setelah 48 jam.

Gambar 7. Survei spektrum XPS (a) dan spektrum Cr 2p XPS (b) dari O. Oceanobacillus sp. W4 diobati dengan 200 mg/L Cr(VI) selama 48 jam.

lebih efisien untuk reduksi Cr(ÿ) daripada fraksi sitoplasma. Tingkat reduksi Cr(ÿ)
untuk fraksi selubung sel dan fraksi sitoplasma masing-masing mencapai 82,9
dan 11,1% setelah 6 jam. Hasil penelitian menunjukkan bahwa reduksi Cr(ÿ)
untuk O. oncorhynchi W4 terutama terletak di selubung sel, bukan di sitoplasma.
Sementara, penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa lokasi reduksi Cr(ÿ)
berada di intraseluler untuk sebagian besar bakteri lain yang diteliti, seperti
Cellulosimicrobium funkei [38], Acinetobacter sp. [39] dan M. thermoautotrophicus
[40], yang melibatkan pengangkutan Cr(ÿ) ke dalam sitoplasma dan kemudian
reduksi intraseluler.
Sepengetahuan kami, jarang dilaporkan bahwa reaksi reduksi Cr(ÿ) terutama
terjadi pada selubung sel, menunjukkan bahwa reduksi Cr(ÿ) oleh O. oncorhynchi
W4 dikaitkan dengan protein terkait membran [21].
3.5. Analisis SEM dan TEM-EDS
Seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 5, sel-sel tidak terputus dan
morfologinya kira-kira setelah perlakuan Cr(ÿ). Dapat dilihat bahwa partikel-partikel kecil

153
Machine Translated by Google
Q.Zeng dkk.
zat amorf bola dikumpulkan pada permukaan sel, dan EDS kemudian dilakukan untuk
mengkonfirmasi posisi komposisi unsur-unsur kimia dari partikel pada permukaan sel.
Spektrum EDS menunjukkan bahwa puncak karakteristik Cr diamati, yang seharusnya
disebabkan oleh spesies kromium yang tereduksi dari Cr(ÿ). Beberapa unsur kimia
yang hidup berdampingan, seperti C, O, Na, Mg, Si dan Ca, juga diamati [38]. Hasil ini
mengkonfirmasi pembentukan endapan Cr(ÿ) pada permukaan sel melalui reduksi
bakteri dan pengendapan dalam kondisi basa [41]. Hasil serupa juga ditemukan pada
reduksi Cr(ÿ) oleh mikroorganisme lain, seperti Ochrobactrum anthropi [42].
Untuk mengidentifikasi apakah reduksi biologis Cr(ÿ) juga dapat terjadi di
sitoplasma, TEM irisan tipis konvensional bersama dengan EDS dilakukan lebih lanjut.
Seperti yang diamati pada Gambar. 6, meskipun sebagian partikel halus terletak di
dalam sel, mereka terutama terikat pada sisi interior selubung, yang selanjutnya
menunjukkan bahwa reduksi Cr(ÿ) terutama terletak pada selubung sel dan Cr(ÿ)
intraseluler. reduksi tidak memainkan peran penting untuk O. oncorhynchi W4.
3.6. Analisis XPS
Hasil di atas menunjukkan bahwa reduksi Cr(ÿ) oleh O. oncorhynchi W4 terutama
terjadi pada selubung sel. Untuk menyelidiki lebih lanjut gugus fungsi kimia dalam sel
yang terlibat dalam interaksi dengan kromium selama reduksi Cr(ÿ), XPS kemudian
digunakan.
Dari survei spektrum XPS (seperti yang ditunjukkan pada Gambar 7) produk
reduksi kromium, diamati lima puncak utama pada energi ikat 284,62 eV, 531,29 eV,
399,24 eV, 1071,05 eV, dan 198,42 eV, yang ditetapkan ke C 1 s , O 1 s, N 1 s, Na 1
s dan Cl 2p, masing-masing [43].
Selain itu, puncak lemah Cr 2p dan Cr 3p pada energi ikat 578,19 eV dan 45,19 eV
terdeteksi, menunjukkan bahwa kromium telah terdeposit pada permukaan O.
oncorhynchi W4. Dan kandungan kromium adalah 0,57% dihitung dari luas puncak,
seperti yang ditunjukkan pada tabel S4. Hasil dari dua puncak yang berbeda pada
energi ikat 577,38 eV (Cr 2p3/2) dan 586,38 eV (Cr 2p1/2) yang diperoleh dari spektrum
Cr lebih lanjut mengungkapkan bahwa ikatan kromium ke permukaan sel terutama
direpresentasikan Cr(ÿ), dan bentuk yang ada termasuk Cr(OH)3 dan kompleks organik
[39].
Variasi spektrum C1, O1s dan N1s dari sel yang diberi perlakuan Cr(ÿ),
dinormalisasi pada 284,6 eV, ditunjukkan pada Gambar. S5. Spektrum C1 dipasang
pada tiga puncak. Puncak pada energi ikat 284,6 eV, 285,9 eV dan 287,8 eV mewakili
(C–I) CeC dan C–H (karbon grafit), (CeII) gugus C–O (fenolik, alkohol dan eter) dan (C-
III) C]O dan OeC]O kelompok (keton, karboksil dan ester) [44,45], masing-masing.
Dalam kasus oksigen, puncak pas pada energi ikat 531,1 eV, 532,1 eV dan 533,1 eV,
sesuai dengan (OeI) gugus C]O (keton, lakton, ester dan karboksil), (OeII) gugus OeH
pada 532,1 eV dan (O-III)
Gugus C–OH atau C–OeC pada 533,1 eV [45,46]. Setelah perlakuan Cr(ÿ), rasio luas
puncak C-ÿ dan C-ÿ masing-masing meningkat menjadi 33,8% dan 18%. Dan rasio
luas puncak OI dan O-III masing-masing turun menjadi 41,2% dan 19,6%. Sebaliknya,
rasio luas puncak O-II meningkat menjadi 39,2%. Semua variasi di atas menunjukkan
bahwa gugus C]O, C-OH atau C-OeC memainkan peran penting dalam korelasi dengan
unsur kromium dalam kondisi basa. Spektrum nitrogen diidentifikasi sebagai (NeI)
NeH pada 398,2 eV, (NeII) CONHe kelompok pada 399,6 eV dan (N-III) C NH2
kelompok pada 400,4 eV [46,47], yang menunjukkan bahwa banyak gugus amino ada.
Namun, tidak ada variasi yang jelas dari rasio area yang diamati, menunjukkan bahwa
NeH, CONHe dan CeNH2 tidak berpartisipasi dalam proses korelasi kromium [48].
4. Kesimpulan
Karya ini menyelidiki kapasitas penyisihan Cr(ÿ) dari O. oncorhynchi W4. Lokasi
reduksi Cr(ÿ) dan gugus fungsi kimia sel yang berinteraksi dengan kromium kemudian
dipelajari secara sistemik. Hasilnya menunjukkan bahwa sekitar 74,2% Cr(ÿ) adalah
154
Jurnal Bahan Berbahaya 368 (2019) 149–155
dihilangkan dari larutan dengan menumbuhkan sel dalam waktu 72 jam ketika pada
konsentrasi Cr (ÿ) awal 200 mg/L. Cara penyisihan Cr(ÿ) oleh O.oncorhynchi W4
adalah reduksi biologis menyeluruh, dan efisiensi reduksi Cr(ÿ) secara signifikan
ditingkatkan oleh beberapa elektron, terutama oleh gliserin. Selubung sel adalah situs
kunci untuk reduksi Cr(ÿ) dan produk reduksi diidentifikasi sebagai Cr(OH)3 dan
kompleks organik Cr(ÿ). Selama proses reduksi Cr(ÿ), gugus C]O, C–OH dan C–OeC
pada permukaan memainkan peran utama dalam korelasi dengan spesies kromium.
Ucapan Terima Kasih
Para penulis mengucapkan terima kasih atas dukungan keuangan dari National
Natural Science Foundation of China (Proyek No. 51774339 dan 31500091).
Lampiran A. Data tambahan
Materi tambahan terkait artikel ini dapat ditemukan, dalam versi online, di doi:https://doi.org/
10.1016/j.jhazmat.2019.01.031.
Referensi
[1] Ar. Pal, S. Datta, AK Paul, Pengurangan kromium heksavalen oleh sel-sel Bacillus
sphaericus DAN 303, Braz. Lengkungan. Biol. teknologi. 56 (2013) 505–512.
[2] C. Han, Y. Jiao, Q. Wu, W. Yang, H. Yang, X. Xue, Kinetika dan mekanisme
penghilangan kromium heksavalen dengan terak tungku oksigen dasar, J. Environ. Sci.-
Cina 46 (2016) 63–71.
[3] Z. He, S. Li, L. Wang, H. Zhong, Karakterisasi lima bakteri penghilang kromium yang
diisolasi dari tanah yang terkontaminasi kromium, Pencemaran Tanah Air Udara. 225 (2014).
[4] Z. He, Y. Hu, Z. Yin, Y. Hu, H. Zhong, Keragaman mikroba tanah yang terkontaminasi
kromium dan karakterisasi enam bakteri penghilang kromium, J.
Mengepung. Mengelola. 57 (2016) 1319–1328.
[5] X. Guo, Z. Peng, D. Huang, P. Xu, G. Zeng, S. Zhou, X. Gong, M. Cheng, R. Deng, H. Yi,
H. Luo, X. Yan , T. Li, Biotransformasi polutan gabungan kadmium-sulfametazin di
lingkungan berair: phanerochaete chrysosporium membawa optimisme yang hati-hati,
Chem. Ind. J.347 (2018) 74–83.
[6] D. Huang, X. Guo, Z. Peng, G. Zeng, P. Xu, X. Gong, R. Deng, W. Xue, R. Wang, H. Yi,
C. Liu, Jamur pelapuk putih dan bioteknologi gabungan canggih dengan bahan nano:
alat yang menjanjikan untuk biotransformasi senyawa pengganggu endokrin, Crit. Pdt.
Bioteknologi. 38 (2018) 671–689.
[7] D. Pradhan, LB Sukla, M. Sawyer, PKSM Rahman, Bioreduksi terbaru dari hex avalent
chromium dalam pengolahan air limbah: review, J. Ind.Eng. Kimia 55 (2017) 1–20.
[8] D. Pradhan, LB Sukla, BB Mishra, N. Devi, Biosorpsi untuk menghilangkan kromium
heksavalen menggunakan mikroalga Scenedesmus sp, J. Clean. Melecut. 209 (2019) 617–629.
[9] D. Pradhan, LB Sukla, Bioreduksi kromium heksavalen menggunakan mikroalga, dalam:
LB Sukla, E. Subudhi, D. Pradhan (Eds.), Peran Mikroalga dalam Pengolahan Air Limbah,
Diterbitkan oleh Springer-Nature, 2018, hlm. 65–73, , https://doi.org/10.
1007/978-981-13-1586-2_5.
[10] D. Pradhan, N. Devi, LB Sukla, Biosorpsi kromium heksavalen menggunakan biomassa
mikroalga Scenedesmus SP, Int. J. Eng. teknologi. 7 (3.29) (2018) 558–563.
[11] JK Zhang, ZH Wang, Y. Ye, Resistensi logam berat dan penghilangan krom dari strain
pseudomonad pereduksi Cr(VI) baru yang diisolasi dari sirkulasi air pendingin pabrik besi
dan baja, Appl. Biokimia. Bioteknologi. 180 (2016) 1328–1344.
[12] S. Khelaifia, J.-C. Lagier, F. Bibi, EI Azhar, O. Croce, R. Padmanabhan, AA Jiman Fatani,
M. Yasir, C. Robert, C. Andrieu, P.-E. Fournier, D. Raoult, Kulturomik mikroba untuk
memetakan bakteri halofilik dalam usus manusia: urutan genom dan deskripsi
Oceanobacillus jeddahense sp. nov, OMICS 20 (2016) 248–258.
[13] MA Amoozegar, M. Bagheri, A. Makhdoumi, MM Nikou, SAS Fazeli,
P. Schumann, C. Spröer, C. Sánchez-Porro, A. Ventosa, Oceanobacillus halophilus sp.
nov., bakteri halofilik moderat baru dari danau hipersalin, Int. J.
Sistem Evolusi Mikrobiol. 66 (2016) 1317-1322.
[14] W. Kim, J.-H. Kim, A. Sukhoom, C. Siamphan, Oceanobacillus arenosus sp. nov., bakteri
halofilik sedang yang diisolasi dari pasir laut, Int. J. Sistem. Evolusi
Mikrobiol. 65 (2015) 2943–2948.
[15] C. Yu, S. Yu, Z. Zhang, Z. Li, XH Zhang, Oceanobacillus pacificus sp. nov., diisolasi dari
sedimen laut dalam, Int. J. Sistem. Evolusi Mikrobiol. 64 (2014) 1278-1283.
[16] J. Tang, G. Yang, Y. Wang, C. Wu, S. Zhou, Oceanobacillus halophilum sp. nov.
Terisolasi dari tanah hutan bakau, Curr. Mikrobiol. 68 (2014) 629–634.
[17] S.-J. Jang, Y.J. Kim, S.H. Lee, Y.-S. Park, J.-M. Park, D.-H. Bai, Oceanobacillus
gochujangensis sp. nov., diisolasi dari gochujang makanan fermentasi tradisional
Korea , J. Microbiol. 52 (2014) 1050–1055.
[18] SY Lee, TK Oh, W. Kim, JH Yoon, Oceanobacillus locisalsi sp. nov., diisolasi dari marine
solar saltern, Int. J. Sistem. Evolusi Mikrobiol. 60 (2010) 2758–2762.
[19] JY Yang, YY Huo, XW Xu, FX Meng, M. Wu, CS Wang, Oceanobacillus neu tripphilus sp.
nov., diisolasi dari lumpur aktif dalam bioreaktor, Int. J. Sistem. Evolusi
Mikrobiol. 60 (2009) 2409–2414.
[20] Z. He, F. Gao, T. Sha, Y. Hu, C. He, Isolasi dan karakterisasi Cr(VI)-
Machine Translated by Google
Q.Zeng dkk.
reduksi Ochrobacterum sp. saring CSCr-3 dari TPA kromium, J. Hazard.
ibu. 163 (2009) 869–873.
[21] DJ Opperman, E. van Heerden, reduksi Aerobic Cr(VI) oleh Thermus scotoductus
regangan SA-01, J. Appl. Mikrobiol. 103 (2007) 1907–1913.
[22] SK Soni, R. Singh, A. Awasthi, M. Singh, A. Kalra, Pengurangan Cr(VI) in vitro oleh ekstrak
sel bebas bakteri pereduksi kromat yang diisolasi dari tanah irigasi limbah penyamakan
kulit, Environ. Sci. polusi. Res. Int. 20 (2013) 1661–1674.
[23] D. Salamanca, N. Strunk, K.-H. Engesser, Pengurangan kromat dalam sistem anaerobik oleh
strain bakteri Pseudomonas aeruginosa CRM100, Chem. Inggris Teknologi. 85 (2013)
1575–1580.
[24] MZ Alam, A. Malik, resistensi Kromat, transportasi dan bioreduksi oleh
Exiguobacterium sp. ZM-2 diisolasi dari tanah pertanian irigasi dengan limbah
penyamakan kulit, J. Basic Microbiol. 48 (2008) 416–420.
[25] Z. Lin, Y. Zhu, TL Kalabegishvili, NY Tsibakhashvili, H.-Y. Holman, Efek dari
aksi kromat pada morfologi bakteri yang menghuni basal, Mater. Sci. Ind. C 26 (2006) 610–
612.
[26] SK Garg, M. Tripathi, SK Singh, A. Singh, Deklorinasi Pentachlorophenol dan reduksi Cr6+
simultan oleh Pseudomonas putida SKG-1 MTCC (10510): karakterisasi produk deklorinasi
PCP, struktur bakteri, dan gugus fungsi, Lingkungan. Sci. polusi. Res. Int. 20 (2013) 2288–
2304.
[27] KL Andrew, L. Neala, Tyrone L. Daulton, Joanne Jones-Meehan, Brenda J. Little, Keadaan
oksidasi kromium yang terkait dengan permukaan sel Shewanella oneidensis
selama reduksi kromat, Appl. Berselancar. Sci. 202 (2002) 150–159.
[28] ZA Zakaria, Z. Zakaria, S. Surif, WA Ahmad, Reduksi kromium heksavalen oleh Acinetobacter
haemolyticus yang diisolasi dari air limbah yang terkontaminasi logam berat, J.
Bahaya. ibu. 146 (2007) 30–38.
[29] A. Bhattacharya, A. Gupta, Evaluasi Acinetobacter sp. B9 untuk Cr (VI) resistensi dan
detoksifikasi dengan aplikasi potensial dalam bioremediasi air limbah industri yang kaya
logam berat , Environ. Sci. polusi. Res. Int. 20 (2013) 6628–6637.
[30] C. Desai, K. Jain, D. Madamwar, Evaluasi potensi pengurangan Cr(VI) in vitro dalam ekstrak
sitosol dari tiga Bacillus sp. diisolasi dari TPA industri tercemar Cr(VI), Bioresour. teknologi.
Rep. 99 (2008) 6059–6069.
[31] PS Gonzalez, LF Ambrosio, CE Paisio, MA Talano, MI Medina, E. Agostini, remediasi
Chromium (VI) oleh strain asli: pengaruh kondisi lingkungan dan mekanisme penghilangan
yang terlibat, Environ. Sci. polusi. Res. Int. 21 (2014) 13551–13559.
[32] S. Dey, A. Kanti Paul, Penilaian toleransi logam berat dan krom heksavalen
potensi pereduksi mium Corynebacterium paurometabolum SKPD 1204 yang diisolasi
dari rembesan tambang kromit, AIMS Bioeng. 3 (2016) 337–351.
[33] A. Pal, S. Dutta, AK Paul, Pengurangan kromium heksavalen dengan ekstrak sel bebas
Bacillus sphaericus DAN 303 diisolasi dari tanah serpentine, Curr. Mikrobiol. 51 (2005)
327–330.
[34] C. Kang, P. Wu, Y. Li, B. Ruan, L. Li, L. Tran, N. Zhu, Z. Dang, Memahami peran mineral
lempung dalam bioremoval krom(VI) oleh Pseudomonas aeruginosa CCTCC AB93066
dalam kondisi pertumbuhan: mikroskopis, spektroskopi dan kinetik
155
Jurnal Bahan Berbahaya 368 (2019) 149–155
analisis, Dunia J. Microbiol. Bioteknologi. 31 (2015) 1765–1779.
[35] S. Murugavelh, K. Mohanty, Isolasi, identifikasi dan karakterisasi Cr(VI) pereduksi Bacillus
cereus dari tanah yang terkontaminasi kromium, Chem. Ind. J. 230 (2013) 1–9.
[36] S. Tadishetty Hanumanth Rao, NK Papathoti, R. Gundeboina, YK Mohamed,
GR Mudhole, H. Bee, Reduksi kromium heksavalen dari sampel polutan oleh Achromobacter
xylosoxidans SHB 204 dan studi kinetikanya, Indian J. Microbiol. 57 (2017) 292–298.
[37] S. Ge, S. Ge, M. Zhou, X. Dong, Bioremediasi kromat heksavalen menggunakan
Brevibacterium sp. dan Stenotrophomonas sp. sel, J.Lingkungan.
Mengelola. 157 (2015) 54–59.
[38] C. Karthik, S. Barathi, A. Pugazhendhi, VS Ramkumar, NBD Thi, PI Arulselvi, Evaluasi
mekanisme reduksi Cr(VI) dan penghilangan oleh Cellulosimicrobium funkei strain AR8,
bakteri haloalkaliphilic baru, J. Hazard. ibu. 333 (2017) 42–53.
[39] R. Jin, B. Wang, G. Liu, Y. Wang, J. Zhou, J. Wang, Bioreduksi Cr(VI) oleh
Acinetobacter sp. WB-1 selama proses nitrifikasi/denitrifikasi simultan, J.
Kimia teknologi. Bioteknologi. 92 (2017) 649–656.
[40] R. Singh, H. Dong, D. Liu, L. Zhao, AR Mart, E. Farquhar, DL Tierney,
CB Almquist, BR Briggs, Reduksi kromium heksavalen oleh metanogen termofilik
Methanothermobacter thermautotrophicus, Geochim. Cosmochim.
Acta 148 (2015) 442–456.
[41] RK Mohapatra, PK Parhi, H. Thatoi, CR Panda, Bioreduksi heksavalen
chromium oleh Exiguobacterium indicum strain MW1 diisolasi dari air laut Pelabuhan
Paradip, Odisha, India, Chem. Ekol. 33 (2017) 114–130.
[42] DP Bin Li, Jinsheng Zheng, Yangjian Cheng, Xiaoyan Ma, Feng Huang, Zhang Lin,
Penyelidikan mikroskopis mekanisme penyerapan Cr(VI) dari Ochrobacterium anthropi
hidup, Langmuir 24 (2008) 9630–9635.
[43] Y. Wang, L. Chai, Q. Liao, C. Tang, Y. Liao, B. Peng, Z. Yang, Struktural dan genetik
keragaman bakteri tahan kromium heksavalen di tanah yang terkontaminasi,
Geomicrobiol. J.33 (2015) 222–229.
[44] G. Zhao, J. Li, X. Ren, C. Chen, X. Wang, nanosheets graphene oxide sedikit berlapis
sebagai sorben superior untuk manajemen polusi ion logam berat, Environ. Sci. teknologi.
45 (2011) 10454-10462.
[45] G. Zhang, S. Sun, D. Yang, J.-P. Dodelet, E. Sacher, Karakter analitis permukaan
akterisasi serat karbon difungsikan dengan perlakuan H2SO4/HNO3, Karbon 46 (2008)
196-205.
[46] J. Shen, W. Huang, L. Wu, Y. Hu, M. Ye, Sifat termo-fisika epoksi dan nokomposit
diperkuat dengan tabung nano karbon berdinding multi-fungsi amino , Compos. Bagian
A-Aplikasi. Sci. 38 (2007) 1331–1336.
[47] RJJ Jansen, HV Bekkum, XPS gugus fungsi yang mengandung nitrogen pada ac
karbon aktif, Karbon 33 (1995) 1021–1027.
[48] N. Li, Y. Pan, N. Zhang, X. Wang, W. Zhou, Bio-reduksi kromat dengan
reduktase periplasma menggunakan strain terisolasi baru Pseudoalteromonas sp.
CF10-13, RSC Adv. 6 (2016) 106600–106607.