HIGH PERFORMANCE

LIQUID CHROMATOGRAPHY
(HPLC)
PEMISAHAN KIMIA

Nama : Devira Agustin

Dosen Pengampu :
NIM : 06101282025026 Drs. Jejem Mujamil, M. Si
Kelas : B/ Inderalaya
 1. Pengertian HPLC

Kromatografi cair berperforma tinggi (high performance

liquid chromatography, (HPLC) merupakan salah satu
teknik kromatografi untuk zat cair yang biasanya
disertai dengan tekanan tinggi. HPLC pelarutnya
menetes melalui kolom dibawa pengaruh gravitasi,
terdapat pompa yang dapat memberikan tekanan tinggi
sampai dengan 400 atm.
 Adapun prinsip kerja dari KCKT adalah suatu tekhnik yang mana solut
atau zat terlarut terpisah perbedaan kecepatan elusi, dikarenakan
solut-solut inl melewati suatu kolom kromatografi. Pemisahan solut-
solut ini diatur oleh distribusi solut dalam fase gerak dan fase diam.
Kerja HPLC pada prinsipnya adalah pemisahan analit-analit

2. Prinsip berdasarkan kepolarannya, alatnya terdiri dari kolom (sebagai fasa

diam) dan larutan tertentu sebagai fasa geraknya. Yang paling

Kerja HPLC membedakan HPLC dengan kromatografl lainnya adalah pada HPLC
digunakan tekanan tinggi untuk mendorong fasa gerak. Campuran
analit akan terpisah berdasarkan kepolarannya, dan kecepatannya
untuk sampai ke detektor (waktu retensinya) akan berbeda, hal ini
akan teramati pada spektrum yang puncak-puncaknya terpisah.
Urutan skala polaritas golongan fluorocarbon < golongan hictokarbon
< senyawa terhalogenasi < golongan eter < golongan ester < golongan
keton < golongan alkohol< golongan asam.
3. Jenis-jenis 01 Kromatografi Adsorbsi

HPLC
02
Kromatografi fase terikat

Kromatografi penukar ion

03

Kromatografi Pasangan ion

Pemisahan dengan HPLC dapat dilakukan
dengan fase normal (jika fase diamnya
04
lebih polar dibanding dengan fase
geraknya) atau fase terbalik (jika fase Kromatografi Eksklusi Ukuran
diamnya kurang non polar dibanding 05
dengan fase geraknya). Berdasarkan pada
kedua pemisahan ini, sering kali HPLC
Kromatografi Afinitas
dikelompokkan menjadi HPLC fase normal 06
dan HPLC fase terbalik
4. Komponen
dasar dan bagian-
bagian HPLC
5. Derivatisasi pada
HPLC

Tujuan utama penggunaan

derivatisasi pada HPLC adalah untuk ;

a. Meningkatkan deteksi.

b. Merubah struktur molekul atau polaritas analit sehingga

akan menghasilkan puncak kromatografi yang lebih baik.

c. Merubah matriks sehingga diperoleh pemisahan yang

lebih baik.

d. Menstabilkan analit yang sensitif.

 Berikut beberapa cara perawatan
HPLC agar tetap dapat digunakan
6. Perawatan HPLC secara efisien.

a. Stabilitas pH
b.Teknik Stabilitas
c. Eluen
d. Penyimpanan Kolom

7. Kegunaan dari HPLC

1. HPLC dengan prinsip kromatografi banyak digunakan pada industri farrmasi dan pestisida.

2. Zat- zat dengan kepolaran berbeda yaitu antara sedikit polar sampai polar

dapat dipisahkan dengan HPLC berdasarkan partisi cair-cair.

3. Asam-asam nukleat dapat dipisahkan dengan kolom penukar ion yang dikombinasikan dengan
kolom butiran berlapis zat berpori.

4. Morfin, heroin dan semacamnya telah dapat dipisahkan dengan rezin ZipaxSAX.

5. Dapat memisahkan vitamin- vitamin yang larut dalam air.

6. Digunakan untuk menentukan berat molekul polimer dan masalah-masalah

7. biokimia.

8. Dapat digunakan untuk memurnikan dan mengidentifikasi suatu senyawa

8. Kelebihan HPLC
1. Mampu memisahkan molekul-molekul dari
suatu campuran dengan daya memisah yang
tinggi.

2. Dapat dihindari terjadinya dekomposisi /

kerusakan bahan analisis.

3. Dapat digunakan bermacan-macam detektor

dengan kepekaan yang tinggi.

4. Kolom dapat digunakan kembali.

5. Waktu analisa cukup singkat.

6. HPLC dapat digunakan untuk isolasi zat yang

tidak mudah menguap dan zat yang tidak stabil.

7. Dapat menganalisis sampel yang kecil

kuantitasnya.

8. Teknik HPLC dapat dilakukan pada suhu

kamar.
9. KEKURANGAN HPLC

1. Harga sebuah alat HPLC yang mahal

2. Sering ada larutan standar yang tertinggal di
injektor
3. Pada kolom dengan diameter rata-rata partikel
fase diam dengan ukuran 5 dan 3 mikrometer
sela-sela partikel lebih mudah tertutup oleh
kotoran, jadi harus seringkali dicuci dan kemurnian
larutan harus dijaga
Terima kasih!