Cromatografa en capa fina

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

OBJETIVOS a) Conocer la tcnica de cromatografa en capa fina, c.c.f., sus caractersticas y los factores que en ella intervienen. b) Calcular valores de r.f. de varias sustancias y correlacionarlo a la seleccin adecuada del eluyente y deducir la relacin que existe entre la polaridad de las sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados. c) Aplicar la tcnica de c.c.f. como criterio de pureza e identificacin de sustancias. ANTECEDENTES a) Concepto de cromatografa. Tipos de cromatografa. Cromatografa de adsorcin y cromatografa de particin. Ejemplos. b) La cromatografa en capa fina. Sus caractersticas y aplicaciones. c) Eluyentes, soportes y reveladores ms comunes para cromatografa en capa fina. d) Factores que influyen en una separacin por cromatografa de capa fina. INFORMACIN CONCEPTO DE CROMATOGRAFA. La cromatografa se define como la separacin de una mezcla de dos o mas compuestos por distribucin entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase mvil. Varios tipos de cromatografa son posibles, dependiendo de la naturaleza de las dos fases involucradas: slido-liquido (capa fina, papel o columna), liquido-liquido y gases-liquido ( fase vapor ). Todas las tcnicas cromatogrficas dependen de la distribucin de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase mvil, llamada tambin activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relacin con la otra, denominada fase estacionaria. La fase mvil puede ser un lquido o un gas y la estacionaria puede ser un slido o un lquido. Todos los slidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie; y, similarmente, todas las sustancias pueden ser adsorbidas, unas con ms facilidad que otras. Este fenmeno de adsorcin selectiva es el principio fundamental de la cromatografa.

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CONCEPTO DE R.F. Rf es el registro y se define como: Rf = distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicacin / distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de adsorbente, eluyente, as como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de saturacin, etc.). Tiene una reproducibilidad de 20%, por lo que es mejor correr duplicados de la misma placa. CROMATOGRAFA EN CAPA FINA. En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascender, por capilaridad, por la placa y arrastrar los componentes a lo largo de sta produciendo manchas de los componentes. Se usan lminas de: vidrio como soporte del adsorbente, plstico (ej: acetato) metlicos (ej: aluminio). Los tamaos de la placa para CCf convencional son: 20 x 20; 10 x 20 y 5 x 2. Hay placas que contienen un indicador de fluorescencia, para facilitar la identificacin de las muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos se requerirn tcnicas de revelado. Eluyentes ms comunes para cromatografa en capa fina. -ter de petrleo -tolueno -dietil-ter, t-butil-ter -diclorometano -acetato de etilo -n-pentano, n-hexano -ciclohexano -tetracloruro de carbono -ter dietlico -cloroformo -acetona -iso-propanol -etanol -metanol -cido actico

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REVELADORES MS COMUNES PARA CROMATOGRAFA EN CAPA FINA Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras pueden revelarse mediante: Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F254 F366), el nmero que aparece como subndice nos indica la longitud de onda de excitacin del indicador utilizado. La introduccin de la placa en vapores de yodo. El roco con una solucin de agua/H2SO4 1:1 (dentro de un compartimiento especialmente protegido y bajo una campana de extraccin de gases). Despus calentar intensamente, por ejemplo, con un mechero hasta carbonizar los compuestos. ADSORBENTES MS COMUNES PARA CROMATOGRAFA EN CAPA FINA. a) b) c) d) Silica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones) xido de Aluminio Almina (cida, neutra bsica) Celulosa (Nativa o micro-cristalina) Poliamidas

Para la seleccin del adsorbentes deber tomar las siguientes consideraciones: a) b) a. b. c) d) Polaridad Tamao de partcula Dimetro rea Superficial Homogeneidad Pureza

FACTORES QUE INFLUYEN EN UNA SEPARACIN POR CROMATOGRAFA DE CAPA FINA. a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la fase estacionaria. b) La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de aire. c) Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa o agentes plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequea escala, stas deben limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y despus dejar secar completamente antes de aplicar la muestra. d) Pureza de los disolventes.

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DESARROLLO EXPERIMENTAL MATERIAL POR ALUMNO Placas para cromatografa (portaobjetos) Matraces Erlenmeyer de 10 mL o viales Pipeta graduada de 10 mL Probeta de 25 mL Frasco cmara Agitador de vidrio Capilares Lmpara de luz ultravioleta SUSTANCIAS Y REACTIVOS p-Hidroxiacetanilida m-Nitroclorobenceno Benzoina Hexano Metanol Etanol Nipasol Nipagin PROCEDIMIENTO EXPERIMENTO 1: POLARIDAD DE LAS SUSTANCIAS. Es un experimento comparativo en el que se desea saber cul sustancia es ms polar y cul menos polar. Para ello se le proporcionar a usted las soluciones 1 y 2. Prepare 3 cromatoplacas (Nota 1) y aplique estas soluciones en cada una de ellas (Nota 2), de tal manera que queden como se indica en la siguiente figura: Acetona Acetato de etilo Yodo Sulfato de sodio anhidro Acetominofen Acido acetilsalicilico Cafeina (6) (5) (2) (1) (5) (1) (3) (1) 6 5 2 1 5 1 3 1

Solucin 1

Solucin 2

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Eluya la primera cromatoplaca con hexano, la segunda con ACOEt y la tercera con MeOH. En cada caso, una vez que se ha eludo cada placa, sacar de la cmara de elucin y dejar evaporar el eluyente para posteriormente revelar con luz ultravioleta y posteriormente con yodo, observe y anote sus resultados (Nota 3), luego revele con yodo, observe nuevamente (Nota 4). Con base en los resultados obtenidos, conteste: a) Cul es el eluyente adecuado? por qu? b) Cul es la sustancia ms polar (solucin 1 2)? por qu? c) Cul es la sustancia menos polar (solucin 1 2)? por qu? EXPERIMENTO 2: PUREZA DE LAS SUSTANCIAS. Se desea saber cul sustancia es pura y cul es impura. Para ello se le proporcionar a usted las soluciones 3 y 4. Prepare una cromatoplaca y aplique en ella ambas soluciones por separado, como en el experimento anterior. Eluya entonces con AcOEt. Revele con luz U.V. y posteriormente con yodo. Anote sus observaciones. Conteste: Cul es la sustancia pura (solucin 3 4)? , cul es la impura? , Cul es el Rf de cada componente? EXPERIMENTO 3: INFLUENCIA DE LA CONCENTRACIN. Se desea saber cul es el efecto de la concentracin de una sustancia en c.c.f. Para ello se le proporcionar a usted la solucin 5. Prepare una cromatoplaca y en ella haga 3 aplicaciones de esta solucin en orden creciente de concentracin como se indica en la siguiente figura:

1a. aplicacin, 1 gota 2a. aplicacin, 3 gotas 3a. aplicacin, 6 gotas

Eluya entonces con AcOEt. Revele con luz U.V y. posteriormente con yodo. En cada caso observe la intensidad de la coloracin de las manchas. Cul es la relacin que existe entre la intensidad de la coloracin de las manchas y la concentracin de la sustancia, en cada caso?

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EXPERIMENTO 4: LA C.C.F. COMO CRITERIO PARCIAL DE IDENTIFICACIN (SELECCIONAR UNA OPCIN) 1. Se desea identificar los componentes de una mezcla, por medio de su comportamiento c.c.f. y comparndolo con el de sus sustancias testigo bajo las mismas condiciones experimentales. Para sto, se le proporcionar a usted las soluciones 6A y 6B, (Nota 5). Prepare dos cromatoplacas y en ambas haga las siguientes aplicaciones:

Solucin 6A Solucin mezcla (1:1) de 6A + 6B Solucin 6B

Luego eluya una de las cromatoplacas con AcOEt revelando con luz U.V. y despus con yodo. Anote sus observaciones.. La otra cromatoplaca elyala varias veces (4 por lo menos) con un eluyente menos polar, por ejemplo una mezcla de hexano-AcOEt (4:1), dejando secar la placa entre una elucin y otra. Observe la placa a la luz U.V. despus de cada elucin. Si despus de la cuarta elucin la mezcla no se separa, siga eluyendo hasta la separacin. Finalmente revele con yodo. Anote sus observaciones. 2. Se desea identificar el principio activo de un medicamento comercial, por medio de su comportamiento en c.c.f., comparndolo con un estndar bajo las mismas condiciones experimentales. Para esto, se le proporcionar una muestra problema de de un analgsico comercial, el cual se identificar por comparacin con las siguientes soluciones estndar: A (cido acetilsaliclico), B (cafeina) y C (acetaminofen) (Nota 5). Prepare dos cromatoplacas, aplique los estndares de dos en dos y eluya con hexano, con ACOEt y con hexano-AcOEt (1:3) y revele con luz U.V. o con yodo. Calcule el Rf de cada una de ellas, y seleccione el eluyente ideal

Solucin estndar A Solucin estndar B Solucin estndar C

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Prepare tres cromatoplacas, aplique cada estndar y su muestra problema, como se muestra:

Estndar A

Muestra problema

Eluya cada placa con el eluyente ideal y revele con luz U.V. y posteriormente con yodo. Anote sus observaciones. Finalmente identifique que compuesto contiene el producto comercial que se le proporciono. Notas: 1) Para preparar las cromatoplacas se introducen dos portaobjetos juntos, limpios y secos, en una suspensin de gel de slice al 35% en AcOEt. Para mayor facilidad se pueden usar cromatofolios comerciales. 2) Para aplicar las soluciones a las cromatoplacas utilice capilares, que previamente deber ser estirados en la flama del mechero con el fin de que tengan el dimetro adecuado. Ver figura. 3) Precaucin, nunca mire directamente la luz ultravioleta, sta puede causar daos severos al ojo. Una vez revelada la placa, marque ligeramente con un lpiz el contorno de las manchas para mejor ubicacin de las mismas. 4) Para mayor claridad de los resultados, incluya en su informe los dibujos de las cromatoplacas de todos los experimentos de esta prctica. Hgala del mismo tamao de las placas. 5) En este caso son soluciones estndar de productos puros.

Preparacin de las micropipetas

Aplicacin de la muestra en la cromatoplaca

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Placa Papel filtro Punto de aplicacin Disolvente Frente del eluyente Frasco de elucin

Revelado con luz UV

MANEJO DE RESIDUOS Los residuos generados en este experimento son: RESIDUOS D1. Hexano D2. Acetona D3. Metanol D4. Acetato de etilo D5. AcOEt-Hexano D6 Capilares D7. Silica gel de placa CANTIDAD

D1 a D5: Guardar los disolventes para recuperarlos por destilacin D6: Empacar cuidadosamente para incineracin. D7: Se puede recuperar para su reuso, previo lavado y secado CUESTIONARIO a) En el experimento 1, cul de las dos sustancias, la ms polar o la menos polar, recorre mayor distancia en la placa a partir del punto de aplicacin? Porqu? b) En ese mismo experimento, calcular los valores r.f. y contestar cul de las dos sustancias tiene r.f. mayor y cul menor?
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c) Qu significa que una sustancia tenga: a) rf < 0.5 ? b) rf = 0.5 ? c) rf > 0.5 ? d) En el experimento 4, cul de las dos formas de elucin permiti mayor separacin de la mezcla?, a qu se debe esto? e) Porqu la c.c.f. es un criterio parcial y no total de identificacin? f) Cul ser el resultado de los siguientes errores en cromatografa en capa fina? a) Aplicacin de solucin muy concentrada. b) Utilizar eluyente de alta polaridad. c) Emplear gran cantidad de eluyente en la cmara de cromatografa. g) Una serie de colorantes es separada por cromatografa en capa fina. Calcular los valores de Rf de cada colorante de acuerdo a la siguiente tabla. Colorantes Distancia Recorrida (mm) Eluyente 66.0 Rojo de metilo 56.0 Rodamina B 38.0 Rojo Congo 0.5 h) Qu tratamiento es necesario darle a la alumina para reutilizarla? BIBLIOGRAFA a) CLEMENT B. Organic Chemistry Laboratory Manual. Texas A&M University, USA, 2002 Pag. 143-146 b) HAMMOND C. Experimental Organic Techniques. Freeman & Co. USA, 1999 c) AULT A. Techniques and Experiments for Organic Chemistry. University Science Books. USA 1998 Pag.113-121 d) ROBERTS R.M. Modern Experimental Organic Chemistry. 3rd. Ed. Holt. Rinehart Winston, N.Y., 1979 e) ABBOT D. y Andrews R.S. Introduccin a la Cromatografa. 3a. Ed. Alhambra, Madrid, 1970. f) AVILA. Qumica Orgnica: experimentos con un enfoque ecolgico. UNAM, 2000

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