ESCUELA POLITCNICA NACIONAL

FACULTAD DE INGENIERA QUMICA Y AGROINDUSTRIA

IMPLEMENTACIN DE UN SISTEMA DE VALIDACIN DE MTODOS FSICO-QUMICOS PARA ANLISIS DE: ALCALINIDAD TOTAL, CONDUCTIVIDAD, DBO5 Y SLIDOS TOTALES DISUELTOS EN MUESTRAS DE AGUA

PROYECTO PREVIO A LA OBTENCIN DEL TTULO DE INGENIERA QUMICA

MARA FERNANDA VALAREZO BASTIDAS

mafer_1462@hotmail.com

DIRECTOR: ING. LUIS JARAMILLO

luis.jaramillo@.epn.edu.ec

Quito, Noviembre 2009

 Escuela Politcnica Nacional 2009 Reservados todos los derechos de reproduccin

DECLARACIN
Yo, Mara Fernanda Valarezo Bastidas, declaro que el trabajo aqu descrito es de mi autora; que no ha sido previamente presentado para ningn grado o calificacin profesional; y, que he consultado las referencias bibliogrficas que se incluyen en este documento. La Escuela Politcnica Nacional puede hacer uso de los derechos

correspondientes a este trabajo, segn lo establecido por la Ley de Propiedad Intelectual, por su Reglamento y por la normativa institucional vigente.

-------------------------------------------Mara Fernanda Valarezo Bastidas

CERTIFICACIN
Certifico que el presente trabajo fue desarrollado por Mara Fernanda Valarezo Bastidas, bajo mi supervisin.

----------------------------------------Ing. Luis Jaramillo DIRECTOR DEL PROYECTO

DEDICATORIA
A mis padres, Julio y Gladys, por el apoyo, la confianza y el amor que siempre me han brindado, a quienes les debo todo lo que soy. A mis hermanos, Pavel, Alexandra y Roberto por su cario y su amistad, por compartir juntos los buenos y malos momentos. A mis sobrinos Fabia Valentina, Paulo Issac, y aquellos que vienen en camino, por llenar mi vida de felicidad. A mis amigas de la infancia Angy, Diana y Tati que a pesar de la distancia siempre me han brindado su amistad incondicional. A mi ojitos precisos, Csar Maldonado, por su apoyo y tolerancia durante este ao. TA.

AGRADECIMIENTOS
A mi Papito Dios, porque L es mi gua, mi fuerza y mi nica verdad. Al Ing. Luis Jaramillo, la Ing. Carola Fierro y al Quim. Csar Yambay quienes fueron las personas que me apoyaron durante el desarrollo de esta investigacin, gracias por brindarme sus conocimientos, experiencias y sobre todo gracias por brindarme su amistad. A todo el personal del Centro de Investigaciones y Control Ambiental, por su desinteresada colaboracin. A mis amigas que siempre estuvieron presentes en los buenos y malos momentos, compartiendo las alegras y las dificultades que fueron parte de este aprendizaje, especialmente a Naty, Cris, Verito C., Gaby P., Verito A., Gaby L., Verito T., Majito, Jessy y Moni , a mis amigos Santy, Maurito, Luis y Gabriel.

NDICE DE CONTENIDO
RESUMEN ........................................................................................................................ xvi INTRODUCCIN .......................................................................................................... xviii ABREVIATURAS ............................................................................................................. xx GLOSARIO...................................................................................................................... xxii 1 REVISIN BIBLIOGRFICA ................................................................................. 1 1.1 Sistema de Gestin de la Calidad ............................................................................ 1

1.1.1 Calidad ............................................................................................................... 1 1.1.1.1 Antecedentes Histricos de la Normalizacin .......................................... 2 1.1.1.2 Norma ISO 9000:2005 .............................................................................. 3 1.1.2 Calidacin .......................................................................................................... 4 1.1.2.1 Definicin .................................................................................................. 4 1.1.2.2 Parmetros de Validacin ......................................................................... 5 1.1.2.3 Contraste de significacin ....................................................................... 15 1.1.2.4 Datos anmalos ....................................................................................... 28 1.1.2.5 Grficos de Control ................................................................................. 30 1.1.3 Incertidumbre................................................................................................... 36 1.1.3.1 Definicin ................................................................................................ 36 1.1.3.2 Incertidumbre y otros conceptos relacionados ........................................ 36 1.1.3.3 Clculo de la Incertidumbre de medida................................................... 41 1.1.3.4 Ejemplos de clculo de las diferentes contribuciones a la incertidumbre en funcin de la informacin disponible habitualmente. ......................................................................................... 59 1.1.4 Materiales de Referencia Certificados (MRC) ................................................ 61 1.1.4.1 Definicin ................................................................................................ 61 1.1.4.2 Propiedades de los Materiales de Referencia Certificados ..................... 63 1.1.5 Calibracin ...................................................................................................... 64 1.1.5.1 Definicin ................................................................................................ 64 1.1.5.2 Sistema de Calibracin ............................................................................ 65 1.1.6 Trazabilidad ..................................................................................................... 67 1.1.6.1 Definicin ................................................................................................ 67 1.1.6.2 Elementos que conforman la trazabilidad ............................................... 67 1.1.6.3 Trazabilidad en los anlisis qumicos ..................................................... 69 1.1.7 Norma NTE INEN ISO/IEC 17025:2006 ..................................................... 71

ii

METODOLOGA...................................................................................................... 73 2.1 Puesta a punto de los mtodos.............................................................................. 73 Necesidad analtica .......................................................................................... 73 Mtodo ............................................................................................................. 74

2.1.1 2.1.2

2.1.3 Procedimientos de anlisis .............................................................................. 74 2.1.3.1 Pruebas previas........................................................................................ 74 2.1.3.2 Procedimiento del mtodo para la determinacin de la Alcalinidad Total ........................................................................................................ 76 2.1.3.3 Procedimiento de mtodo para la determinacin de la Conductividad ......................................................................................... 80 2.1.3.4 Procedimiento para la determinacin de la Demanda Bioqumica de Oxgeno ................................................................................................... 82 2.1.3.5 Procedimiento para la determinacin de los Slidos Totales Disueltos .................................................................................................. 92 2.1.4 Instructivo de calibracin de los equipos utilizados ........................................ 94 2.1.4.1 Instructivo de calibracin del Medidor de Conductividad ...................... 95 2.1.5 Preparacin de los objetos de ensayo .............................................................. 97 2.1.5.1 Preparacin de los elementos que se disponen para la validacin .......... 97 2.1.5.2 Preparacin de los equipos utilizados ..................................................... 98 2.2 Sistema de validacin de los mtodos ................................................................... 99 Eleccin de los parmetros de validacin........................................................ 99 Fijacin de objetivos para los parmetros de validacin ................................. 99

2.2.1 2.2.2

2.2.3 Diseo experimental y estadstico ................................................................. 103 2.2.3.1 Diseo experimental y estadstico del mtodo para la determinacin de la Alcalinidad Total .......................................................................... 104 2.2.3.2 Diseo experimental y estadstico del mtodo para la determinacin de la Conductividad............................................................................... 105 2.2.3.3 Diseo experimental y estadstico para el mtodo de DBO5 ................ 106 2.2.3.4 Diseo experimental y estadstico para el mtodo de Slidos Totales Disueltos ................................................................................... 107 2.2.4 3 Ejecucin de los ensayos diseados .............................................................. 108

RESULTADOS Y DISCUSIONES ........................................................................ 109 3.1 Tratamiento estadstico de datos obtenidos ......................................................... 109 Contrastes de significacin realizados en las pruebas previas ...................... 109

3.1.1

iii

3.1.2 Clculo de los parmetros de validacin ....................................................... 110 3.1.2.1 Determinacin de la Veracidad (% de Recuperacin) .......................... 110 3.1.2.2 Determinacin de la Precisin (% CVr y % CVR) ................................ 110 3.1.2.3 Determinacin de la Incertidumbre del Mtodo ................................... 111 3.1.2.4 Determinacin del Lmite de Deteccin ............................................... 144 3.1.2.5 Determinacin del Lmite de Cuantificacin ........................................ 144 3.1.2.6 Determinacin del Intervalo de trabajo ................................................. 144 3.2 Discusin de resultados ....................................................................................... 144

3.2.1 Pruebas previas .............................................................................................. 144 3.2.1.1 Resultados de las pruebas previas realizadas para el mtodo de alcalinidad total ..................................................................................... 145 3.2.1.2 Resultados de las pruebas previas realizadas para el mtodo de DBO5 ..................................................................................................... 149 3.2.1.3 Resultados de las pruebas previas realizadas para el mtodo de STD ....................................................................................................... 153 3.2.2 Parmetros de validacin ............................................................................... 156 3.2.2.1 Resultados de los parmetros de validacin obtenidos en el mtodo de alcalinidad total ................................................................................ 157 3.2.2.2 Resultados de la calibracin del medidor de conductividad ................. 161 3.2.2.3 Resultados de los parmetros de validacin obtenidos en el mtodo de conductividad ................................................................................... 162 3.2.2.4 Resultados de los parmetros de validacin obtenidos en el mtodo de DBO5 ................................................................................................ 164 3.2.2.5 Resultados de los parmetros de validacin obtenidos en el mtodo de STD .................................................................................................. 168 3.3 4 Elaboracin del informe y declaracin del mtodo validado .............................. 170

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES .................................................... 176 4.1 4.2 Conclusiones ....................................................................................................... 176 Recomendaciones ................................................................................................ 184

BIBLIOGRAFA ............................................................................................................. 186 ANEXOS .......................................................................................................................... 190

iv

NDICE DE TABLAS
Tabla 1.1: Ejemplo del ordenamiento de los grupos muestrales ........................................ 23 Tabla 1.2: Expresiones para el clculo del ANOVA de un factor...................................... 24 Tabla 1.3: Valores de para 95,45% ............................................................. 58

Tabla 2.1: Parmetros y objetivos de validacin del mtodo para la determinacin de la Alcalinidad Total, rango bajo................................................................. 101 Tabla 2.2: Parmetros y objetivos de validacin del mtodo para la determinacin de la Alcalinidad Total, rango alto ................................................................. 101 Tabla 2.3: Parmetros y objetivos de validacin del mtodo para la determinacin de la Conductividad ........................................................................................ 102 Tabla 2.4: Parmetros y objetivos de validacin del mtodo para la determinacin de DBO5 .......................................................................................................... 102 Tabla 2.5: Parmetros y objetivos de validacin del mtodo para la determinacin de Slidos Totales Disueltos........................................................................... 103 Tabla 3.1: Valores obtenidos de los estadsticos y en el contraste de

significacin entre el anlisis en un sistema abierto y cerrado para el mtodo de alcalinidad total .......................................................................... 146 Tabla 3.2: % de Recuperacin obtenidos en la determinacin del nivel bajo de concentracin para el mtodo de alcalinidad total ....................................... 147 Tabla 3.3: Valores obtenidos de los estadsticos y en el contraste de significacin entre el MRC y el MRi para el mtodo de alcalinidad total ............................................................................................................... 148 Tabla 3.5: % de Recuperacin obtenidos en la determinacin del nivel bajo de concentracin para el mtodo de DBO5 ....................................................... 151 Tabla 3.6: Valores obtenidos de los estadsticos y en el contraste de significacin entre el MRC y el MRi para el mtodo de DBO5 ................... 152 Tabla 3.7: Valores obtenidos en la determinacin del tiempo de enfriamiento de los crisoles para el mtodo de STD .............................................................. 153 Tabla 3.8: % de Recuperacin obtenidos en la determinacin del nivel bajo de concentracin para el mtodo de STD ......................................................... 154

Tabla 3.9: Valores obtenidos de los estadsticos

en el contraste de

significacin entre el MRC y el MRi para el mtodo de STD ..................... 155 Tabla 3.10: Resultados de la veracidad (% de Recuperacin) obtenidos en el mtodo de alcalinidad total .......................................................................... 157 Tabla 3.11: % de Recuperacin obtenidos de una muestra real fortificada en el mtodo de alcalinidad total .......................................................................... 158 Tabla 3.12: Resultados de la precisin (% CVr y %CVR) obtenidos en el mtodo de alcalinidad total ............................................................................................ 159 Tabla 3.13: Resultados de la incertidumbre expandida obtenidos en el mtodo de alcalinidad total ............................................................................................ 160 Tabla 3.14: Resultados de la incertidumbre de calibracin de uso obtenidos para el medidor de conductividad ............................................................................ 161 Tabla 3.15: Resultados del criterio de aceptacin de la incertidumbre de calibracin de uso obtenidos para el medidor de conductividad .................................... 161 Tabla 3.16: Resultados de la veracidad (% de Recuperacin) obtenidos en el mtodo de conductividad ............................................................................. 162 Tabla 3.17: Resultados de la precisin (% CVr y %CVR) obtenidos en el mtodo de conductividad ............................................................................................... 163 Tabla 3.18: Resultados de la incertidumbre expandida obtenidos en el mtodo de conductividad ............................................................................................... 164 Tabla 3.19: Resultados de la veracidad (% de Recuperacin) obtenidos en el mtodo de DBO5 .......................................................................................... 165 Tabla 3.20: % de Recuperacin obtenidos de una muestra real fortificada en el mtodo de DBO5 .......................................................................................... 165 Tabla 3.21: Resultados de la precisin (% CVr y %CVR) obtenidos en el mtodo de DBO5 ............................................................................................................ 166 Tabla 3.22: Resultados de la incertidumbre expandida obtenidos en el mtodo de DBO5 ............................................................................................................ 166 Tabla 3.23: Resultados del blanco para la determinacin del lmite de deteccin del mtodo de DBO5 .......................................................................................... 167 Tabla 3.24: Resultados de la veracidad (% de Recuperacin) obtenidos en el mtodo de STD............................................................................................. 168

vi

Tabla 3.25: % de Recuperacin obtenidos de una muestra real fortificada en el mtodo de STD............................................................................................. 168 Tabla 3.26: Resultados de la precisin (% CVr y %CVR) obtenidos en el mtodo de STD .............................................................................................................. 169 Tabla 3.27: Resultados de la incertidumbre expandida obtenidos en el mtodo de STD .............................................................................................................. 170 Tabla II.1: Material volumtrico ocupado en la estandarizacin de la solucin de cido sulfrico .............................................................................................. 194 Tabla III.1: Material volumtrico ocupado en la estandarizacin de la solucin de tiosulfato sdico ........................................................................................... 199 Tabla IV.1: Material volumtrico utilizado en la preparacin de las soluciones patrn para la validacin del mtodo de la alcalinidad total ........................ 201 Tabla IV.2: Material volumtrico utilizado en la preparacin de las soluciones patrn para la validacin del mtodo de DBO5 ............................................ 202 Tabla IV.3: Material volumtrico utilizado para tomar el volumen de muestra de acuerdo a la tcnica de dilucin del mtodo de DBO5 ................................. 203 Tabla IV.4: Material volumtrico utilizado en la preparacin de las soluciones patrn para la validacin del mtodo de STD .............................................. 204 Tabla VIII.1: Valores experimentales obtenidos en la puesta a punto del mtodo de alcalinidad total .......................................................................................... 211 Tabla VIII.2: Valores experimentales obtenidos en la determinacin del nivel bajo de concentracin del mtodo de alcalinidad total ...................................... 212 Tabla VIII.3: Valores experimentales obtenidos en el contraste de significacin del MRC y MRi del mtodo de alcalinidad total ............................................. 213 Tabla IX.1: Valores experimentales obtenidos en la puesta a punto del mtodo de DBO5 ............................................................................................................ 214 Tabla IX.2: Valores experimentales obtenidos en la determinacin del nivel bajo de concentracin del mtodo de DBO5 ............................................................. 215

vii

Tabla IX.3: Valores experimentales obtenidos en el contraste de significacin del MRC y el MRi del mtodo de DBO5 ........................................................... 216 Tabla X.1: Valores experimentales obtenidos en la determinacin del nivel bajo de concentracin del mtodo de STD ............................................................... 217 Tabla X.2: Valores experimentales obtenidos en el contraste de significacin del MRC y el MRi del mtodo de STD.............................................................. 218 Tabla XI.1: Valores obtenidos en la valoracin de las soluciones de cido sulfrico utilizadas en la validacin del mtodo de alcalinidad total ......................... 220 Tabla XI.2: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 5 mgCaCO3/L para la validacin del mtodo de alcalinidad total .................................................. 221 Tabla XI.3: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 25 mgCaCO3/L para la validacin del mtodo de alcalinidad total............................................... 222 Tabla XI.4: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 49,9 mgCaCO3/L para la validacin del mtodo de alcalinidad total............................................... 223 Tabla XI.5: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 50 mgCaCO3/L para la validacin del mtodo de alcalinidad total............................................... 224 Tabla XI.6: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 100 mgCaCO3/L para la validacin del mtodo de alcalinidad total............................................... 225 Tabla XI.7: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 250 mgCaCO3/L para la validacin del mtodo de alcalinidad total............................................... 226 Tabla XI.8:Valores experimentales obtenidos en la determinacin del % de Recuperacin de una muestra fortificada para el mtodo de alcalinidad total rango bajo ............................................................................................ 227 Tabla XI.9:Valores experimentales obtenidos en la determinacin del % de Recuperacin de una muestra fortificada para el mtodo de alcalinidad total rango alto ............................................................................................. 228 Tabla XI.10: Clculo de la precisin en el nivel de 5 mgCaCO3/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de alcalinidad total ............................................................................................ 229

viii

Tabla XI.11: Clculo de la precisin en el nivel de 25 mgCaCO3/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de alcalinidad total ............................................................................................ 230 Tabla XI.12: Clculo de la precisin en el nivel de 49,9 mgCaCO3/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de alcalinidad total ............................................................................................ 231 Tabla XI.13: Clculo de la precisin en el nivel de 50 mgCaCO3/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de alcalinidad total ............................................................................................ 232 Tabla XI.14: Clculo de la precisin en el nivel de 100 mgCaCO3/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de alcalinidad total ............................................................................................ 233 Tabla XI.15: Clculo de la precisin en el nivel de 250 mgCaCO3/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de alcalinidad total ............................................................................................ 234 Tabla XI.16: Valores para el clculo de los coeficientes de sensibilidad para el mtodo de alcalinidad total .......................................................................... 235 Tabla XI.17: Clculo de los coeficientes de sensibilidad para el mtodo de alcalinidad total ............................................................................................ 236 Tabla XI.18: Clculo de la incertidumbre de la concentracin del cido Tabla XI.19: Clculo de la incertidumbre del volumen del cido, volumen de muestra, para el

mtodo de alcalinidad total .......................................................................... 237 y del

para el mtodo de alcalinidad total .................... 238

Tabla XI.20: Clculo de la incertidumbre en la medida de la alcuota,

/

y en la medida del volumen preparado,

para el mtodo de alcalinidad total .............................................................. 238 Tabla XI.21: Clculo de la incertidumbre del MRC, Tabla XI.22: Clculo de la incertidumbre del procedimiento, Tabla XI.23: Clculo de la incertidumbre combinada, para el mtodo de parel para el mtodo de alcalinidad total ............................................................................................ 239 mtodo de alcalinidad total .......................................................................... 239

alcalinidad total ............................................................................................ 239

ix

Tabla XI.24: Clculo del nmero efectivo de grados de libertad, Tabla XI.25: Clculo de la Incertidumbre Expandida,

para el

mtodo de alcalinidad total ...................................................................... 240 para el mtodo de alcalinidad total........................................................................................ 240 Tabla XII.1: Valores experimentales obtenidos en la calibracin del medidor de conductividad ............................................................................................. 241 Tabla XII.2: Datos del medidor de conductividad ........................................................... 241 Tabla XII.3: Clculo de la incertidumbre combinada de calibracin, Tabla XII.4: Clculo del nmero efectivo de grados de libertad, Tabla XII.5: Clculo de la Incertidumbre Expandida de Uso,

para el medidor de conductividad .............................................................. 241 para el

medidor de conductividad .......................................................................... 242 para el medidor de conductividad ........................................................................................ 242 Tabla XIV.1: Valores obtenidos en la valoracin de las soluciones de tiosulfato de sodio utilizadas en la validacin del mtodo de DBO5 ............................. 248 Tabla XIV.2: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 2 mg/L para la validacin del mtodo de DBO5................................................................ 249 Tabla XIV.3: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 200 mg/L para la validacin del mtodo de DBO5................................................................ 250 Tabla XIV.4: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 500 mg/L para la validacin del mtodo de DBO5................................................................ 253 Tabla XIV.5: Valores experimentales obtenidos en la determinacin del % de Recuperacin de una muestra fortificada para el mtodo de DBO5 ......... 256 Tabla XIV.6: Clculo de la precisin en el nivel de 2 mg/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de DBO5 ................. 258 Tabla XIV.7: Clculo de la precisin en el nivel de 200 mg/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de DBO5 ................. 259 Tabla XIV.8: Clculo de la precisin en el nivel de 500 mg/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de DBO5 ................. 260 Tabla XIV.9: Valores para el clculo de los coeficientes de sensibilidad para el mtodo de DBO5 ....................................................................................... 261

Tabla XIV.10: Clculo de los coeficientes de sensibilidad para el mtodo de DBO5 ..... 262 Tabla XIV.11: Clculo de la incertidumbre en la medida de OD, volumen de aforo, dilucin, y en la medida del volumen de , medida del

para el mtodo de DBO5 .................................................. 263 y en la medida del volumen preparado,

Tabla XIV.12: Clculo de la incertidumbre en la medida de la alcuota,

/ /

para el mtodo de DBO5 ....................................................................... 263 Tabla XIV.13: Clculo de la incertidumbre del factor de la solucin valorante, para el mtodo de DBO5 ..................................................................... 264 Tabla XIV.14: Clculo de la incertidumbre del MRC, Tabla XIV.15: Clculo de la incertidumbre del procedimiento, Tabla XIV.16: Clculo de la incertidumbre combinada, para el mtodo de para del mtodo para el para el DBO5 ....................................................................................................... 264 el mtodo de DBO5 .................................................................................. 265

DBO5 ....................................................................................................... 265 Tabla XIV.17: Clculo del nmero efectivo de grados de libertad, Tabla XIV.18: Clculo de la Incertidumbre Expandida, mtodo de DBO5...................................................................................... 265 para el mtodo de DBO5 ..... 266 Tabla XIV.19: Clculo de lmite de deteccin a partir de los valores obtenidos del blanco para el mtodo de DBO5 .............................................................. 266 Tabla XV.1: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 50 mg/L para la validacin del mtodo de STD................................................................... 268 Tabla XV.2: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 500 mg/L para la validacin del mtodo de STD................................................................... 268 Tabla XV.3: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 1000 mg/L para la validacin del mtodo de STD................................................................... 269 Tabla XV.4: Valores experimentales obtenidos en la determinacin del % de Recuperacin de una muestra fortificada para el mtodo de STD............. 270 Tabla XV.5: Clculo de la precisin en el nivel de 50 mg/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de STD .................... 271

xi

Tabla XV.6: Clculo de la precisin en el nivel de 500 mg/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de STD .................... 272 Tabla XV.7: Clculo de la precisin en el nivel de 1000 mg/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de STD ........ 273 Tabla XV.8: Valores para el clculo de los coeficientes de sensibilidad para el mtodo de STD .......................................................................................... 274 Tabla XV.9: Clculo de los coeficientes de sensibilidad para el mtodo de STD ........... 274 Tabla XV.10: Clculo de la incertidumbre en la medida de la alcuota, y en la medida del volumen preparado,
/ /

para el mtodo

de STD ....................................................................................................... 275 Tabla XV.11: Clculo de la incertidumbre en la medida de masa, del volumen de muestra, Tabla XV.12: Clculo de la incertidumbre del MRC, y en la medida para el mtodo de STD............................... 275 para el mtodo de STD ...... 275 para para el mtodo de

Tabla XV.13: Clculo de la incertidumbre del procedimiento, Tabla XV.14: Clculo de la incertidumbre combinada,

el mtodo de STD ...................................................................................... 276

STD ............................................................................................................ 276 Tabla XV.15: Clculo del nmero efectivo de grados de libertad, Tabla XV.16: Clculo de la Incertidumbre Expandida, para el mtodo de STD .......................................................................................... 276 para el mtodo de STD ......... 276

xii

NDICE DE FIGURAS
Fig 1.1: Relacin entre los distintos tipos de error y los correspondientes conceptos cualitativos............................................................................................................... 8 Fig 1.2: Esquema para el anlisis de varianza de un factor ................................................ 22 Fig 1.3: Errores de Tipo I y II ............................................................................................. 27 Fig 1.4: Errores de Tipo I y II al aumentar el tamao de muestra ...................................... 28 Fig 1.5: Lneas de aviso y de control en un grfico de control (parte derecha), y su relacin con la distribucin de la muestra de control ............................................ 32 Fig 1.6: Cambios en el procedimiento analtico que se pueden detectar con los grficos de control ................................................................................................. 34 Fig 1.7: Diferencia entre precisin e incertumbre ............................................................... 38 Fig 1.8: Relacin de la incertidumbre con la tolerancia...................................................... 40 Fig 1.9: Caractersticas de la Distribucin Normal ............................................................. 49 Fig 1.10: Caractersticas de la Distribucin Rectangular .................................................... 50 Fig 1.11: Caractersticas de la Distribucin Triangular ...................................................... 51 Fig 1.12: Relacin entre la pirmide metrolgica y diversas referencias utilizadas en medidas qumicas para verificar la trazabilidad .................................................. 70 Fig 2.1: Curva de titulacin para una mezcla hidrxidos-carbonato .................................. 77 Fig 2.2: Ejemplo de apreciacin para el criterio de medida................................................ 79 Fig 2.3: Equipo de filtracin al vaco .................................................................................. 93 Fig 3.1: Diagrama causa-efecto para identificar las fuentes de incertidumbre del mtodo para la determinacin de la alcalinidad total ........................................ 112 Fig 3.2: Diagrama causa-efecto para identificar las fuentes de incertidumbre de calibracin del medidor de conductividad ........................................................ 125 Fig 3.3: Diagrama causa-efecto para identificar las fuentes de incertidumbre para la determinacin de la conductividad ................................................................... 128 Fig 3.4: Diagrama causa-efecto para identificar las fuentes de incertidumbre de calibracin del medidor de conductividad ........................................................ 130

xiii

Fig 3.5: Diagrama causa-efecto para identificar las fuentes de incertidumbre del mtodo para la determinacin de la alcalinidad total ........................................ 140 Fig V.1: Ejemplo de clculo del estadstico ................................................................... 205 Fig V.2: Ejemplo de clculo del estadstico ................................................................... 206 Fig V.3: Ejemplo de clculo del estadstico ................................................................... 206 Fig VI.1: Ejemplo de clculo del estadstico ................................................................. 207 Fig VI.2: Ejemplo de clculo del estadstico ................................................................. 208 Fig VI.3: Ejemplo de clculo del estadstico ................................................................. 208 Fig VII.1: Ejemplo de clculo del ANOVA de un factor ................................................. 209 Fig VII. 2: Ejemplo de clculo del ANOVA de un factor ................................................ 210 Fig VII.3: Ejemplo de clculo del ANOVA de un factor ................................................. 210

xiv

NDICE DE ANEXOS
ANEXO I VALORACIN DE LA SOLUCIN DE CIDO SULFRICO PARA LA DETERMINACIN DE LA ALCALINIDAD TOTAL................................................... 191 ANEXO II MTODO 4500-O C. MODIFICACIN DE AZIDA PARA LA DETERMINACIN DE OD .......................................................................................... 195 ANEXO III VALORACIN DE LA SOLUCIN DE TIOSULFATO SDICO PARA LA DETERMINACIN DEL OD .......................................................................................... 197 ANEXO IV PREPARACIN DE LAS SOLUCIONES PATRN PARA EL DESARROLLO DE VALIDACIN DE CADA MTODO ....................................................................... 200 ANEXO V EJEMPLO DE CLCULO DEL ESTADSTICO CON AYUDA DE EXCEL ............ 205 ANEXO VI EJEMPLO DE CLCULO DEL ESTADSTICO ANEXO VII EJEMPLO DE CLCULO DEL ANOVA DE UN FACTOR CON AYUDA DE EXCEL ......................................................................................................................... ANEXO XVIII VALORES EXPERIMENTALES OBTENIDOS EN LAS PRUEBAS PREVIAS DEL MTODO DE ALCALINIDAD TOTAL ................................................................ 211 209 CON AYUDA DE EXCEL ........... 207

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ANEXO IX VALORES EXPERIMENTALES OBTENIDOS EN LAS PRUEBAS PREVIAS DEL MTODO DE DBO5 ................................................................................................ 214 ANEXO X VALORES EXPERIMENTALES OBTENIDOS EN LAS PRUEBAS PREVIAS DEL MTODO PARA STD ............................................................................................. 217 ANEXO XI VALORES OBTENIDOS EN LA VALIDACIN DEL MTODO PARA LA DETERMINACIN DE LA ALCALINIDAD TOTAL................................................... 219 ANEXO XII VALORES OBTENIDOS EN LA CALIBRACIN DEL MEDIDOR DE CONDUCTIVIDAD.......................................................................................................... 241 ANEXO XIII VALORES OBTENIDOS EN LA VALIDACIN DEL MTODO PARA LA DETERMINACIN DE LA CONDUCTIVIDAD........................................................... 243 ANEXO XIV VALORES OBTENIDOS EN LA VALIDACIN DEL MTODO PARA LA DETERMIANCIN DE DBO5 ......................................................................................... 247 ANEXO XV VALORES OBTENIDOS EN LA VALIDACN DEL MTODO PARA LA DETERMINACIN DE STD ........................................................................................... 267 ANEXO XVI CERTIFICADOS DE CALIBRACIN ............................................................................ 277

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RESUMEN
El presente proyecto forma parte de una serie de acciones que el Centro de Investigaciones y Control Ambiental (CICAM) de la Escuela Politcnica Nacional, se encuentra realizando para el mejoramiento de la calidad de sus servicios as como del incremento en la competitividad del laboratorio. Actualmente mantiene la acreditacin otorgada por el Organismo de Acreditacin Ecuatoriano (OAE). El objetivo de la presente investigacin fue establecer metodologas de validacin fcilmente aplicables, para desarrollar los mtodos APHA: 2320 B. Mtodo de Titulacin para la determinacin del alcalinidad, 2510 B. Mtodo Potenciomtrico para la determinacin de la conductividad, 2540 C. Slidos Totales Disueltos secados a 180 para la determinacin de los STD y 5210 B. Demanda C Bioqumica de Oxgeno por el Mtodo Winkler DBO 5-das, para la determinacin de DBO5 en el laboratorio del CICAM, basndose en el sistema de gestin de calidad de la norma NTE INEN ISO/IEC 17025:2006. Se realizaron pruebas previas para la puesta a punto de los mtodos, la determinacin del nivel bajo de concentracin y la determinacin de las diferencias significativas entre el MRC y el MRi para los controles de calidad, con base en los resultados obtenidos de los contrastes de significancia respectivamente. Se establecieron los parmetros y objetivos de validacin para cada uno de los mtodos, en base a la experiencia del laboratorio, referente a las auditoras realizadas por la OAE como ente regulador, a sus requerimientos y exigencias, as como a las necesidades del cliente. Posteriormente se desarroll el diseo experimental y estadstico de cada mtodo en funcin de los parmetros y objetivos establecidos. Finalmente se ejecutaron los ensayos diseados obtenindose los datos experimentales a partir de los cuales se calcularon los parmetros de validacin y en funcin del cumplimiento de los objetivos propuestos, definir la aceptacin y

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posterior declaracin de validacin de los mtodos desarrollados en la presente investigacin. Los resultados obtenidos en cada mtodo fueron: Mtodo para la determinacin de la de Alcalinidad Total rango bajo: %CVR = 0,74% - 3,04%; %U = 1,61% - 8,13%; %CVr = 0,61% - 3,04% % de Recuperacin = 94,81% 104,24%

Mtodo para la determinacin de la Alcalinidad Total rango alto: %CVR = 0,45% - 1,26%; %U = 1,13% - 3,26%; %CVr = 0,38% - 1,04% % de Recuperacin = 96,08% 98,27%

Mtodo para la determinacin de la Conductividad: Estndar de 147 S/cm %CVR = 0,26%; %U = 2,03% ; Estndar de 12,8 mS/cm %CVR = 0,20%; %U = 4,44%; %CVr = 0,19% % de Recuperacin = 100,60% %CVr = 0,24% % de Recuperacin = 99,37%

Mtodo para la determinacin de la Demanda Bioqumica de Oxgeno, DBO): %CVR = 3,12% - 8,44%; %U = 6,16% - 16,16%; %CVr = 2,90% - 7,90% % de Recuperacin = 95,16% 105,91%

Mtodo para la determinacin de los Slidos totales Disueltos: %CVR = 1,36% - 8,84%; %U = 2,92% - 21,08%; %CVr = 1,28% - 8,74% % de Recuperacin = 99,27% 107,73%

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INTRODUCCIN
Desde hace varias dcadas ha existido una creciente preocupacin por el impacto de la actividad humana sobre el medio ambiente, en su calidad de receptor de los residuos de las actividades humanas y de proveedor de los recursos materiales y energticos requeridos. Gran parte de los esfuerzos actuales de control ambiental estn destinados a combatir la contaminacin provocada por la accin humana. La reduccin de emisiones de residuos slidos, lquidos y gaseosos, de origen industrial, urbano-domstico y agrcola, representan uno de los pilares fundamentales de la normativa ambiental. En este sentido, los gobiernos han adoptado medidas de carcter normativo y poltico para minimizar los efectos negativos y garantizar el cumplimiento de las normas sobre calidad ambiental (Zaror, 2000). Es as, como de acuerdo a la Resolucin N 003 La Direccin del Distrito Metropolitana de Medioambiente considerando que: Que el Municipio del Distrito Metropolitano de Quito tiene como misin proporcionar el mejoramiento continuo de la calidad de vida de la comunidad, para lo cual aplicar los principios: Precaucin, Reduccin en la fuente, Responsabilidad Integral y Quien contamina paga. As tambin, considerando que: El Municipio del Distrito Metropolitano de Quito, como integrante del Sistema Nacional Descentralizado de Gestin Ambiental (SNDGA), con competencia en prevencin y control de la contaminacin ambiental, debe disponer de los sistemas de control necesarios para exigir el cumplimiento del Reglamento a la Ley de Gestin Ambiental y sus normas tcnicas. En la mayora de casos, para la obtencin de unos buenos niveles de calidad dentro de la diversidad de actividades desarrolladas en las empresas es necesaria la realizacin de medidas sobre el producto. La calidad de estas medidas depende en gran parte de la calidad global de un laboratorio, ya sea exterior o interior a la empresa. Consecuentemente, los laboratorios precisan demostrar que sus mtodos analticos proporcionan resultados fiables y adecuados para la finalidad o propsito perseguidos, esto permite elaborar

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conclusiones para cualquier accin administrativa o legal que se deba tomar por parte de la organizacin, ya que muchas de las decisionesg que se tomen por parte de las organizaciones, estn basadas en la informacin que estos resultados proporcionan (Isol, 2002). Acorde con esta realidad, el laboratorio del Centro de Investigaciones y Control Ambiental (CICAM), siendo un laboratorio Acreditado por la Organizacin de Acreditacin del Ecuador (OAE), y conforme a la norma NTE INEN ISO/IEC 17025:2006 que indica: El laboratorio debe utilizar los mtodos de ensayo o de calibracin, incluidos los de muestreo, que satisfagan las necesidades del cliente y que sean apropiados para los ensayos o las calibraciones que realiza, incluye en sus actividades, la validacin de cuatro de sus mtodos de anlisis para la determinacin de: Alcalinidad Total, Conductividad, Demanda Bioqumica de Oxgeno y Slidos Totales disueltos, que son el propsito de la presente investigacin (NTE INEN ISO/IEC 17025:2006).

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ABREVIATURAS
ANOVA APHA BIPM CVr CVR Anlisis de la Varianza American Public Health Association Oficina Internacional de Pesas y Medidas Coeficiente de varianza por repetibilidad Coeficiente de varianza por reproducibilidad Coeficiente de sensibilidad Diferencias cuadrticas medias entre grupos Diferencias cuadrticas medias dentro del grupo Diferencia cuadrtica total Estadstico de contraste de las varianzas GUM Gua para la expresin de la Incertidumbre de Medida Hiptesis nula Hiptesis alternativa INEN ISO INS k MRC MRi Instituto Ecuatoriano de Normalizacin Organizacin Internacional de Estandarizacin Instituto Nacional de Salud Factor de cobertura Grupos muestrales Material de referencia certificado Material de referencia interno Nmero de magnitudes de entrada Tamao muestral OAA OAE Organismo Argentino de Acreditacin Organismo de Acreditacin Ecuatoriana Probabilidad Nmero de observaciones Diferencias cuadrticas entre grupos Diferencias cuadrticas dentro del grupo Diferencias cuadrticas total Desviacin por reproducibilidad

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Desviacin estndar de repetibilidad Combinacin de la repetibilidad y reproducibilidad Desviacin estndar Estadstico de contraste de las medias Incertidumbre del analista Incertidumbre estndar de calibracin

Incertidumbre estndar de correccin Incertidumbre estndar del criterio de medida Incertidumbre estndar combinada del mtodo Incertidumbre estndar del material de referencia certificado Incertidumbre estndar del procedimiento

Incertidumbre estndar de resolucin Incertidumbre estndar de temperatura Incertidumbre estndar Incertidumbre estndar combinada Incertidumbre expandida Incertidumbre de uso

VIM

Vocabulario valor muestral

Internacional

de

trminos

fundamentales

generales de Metrologa Magnitud de entrada Media muestral Magnitud de salida Valor verdadero Grados de libertad Grados efectivos de libertad Nivel de significacin

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GLOSARIO
Ajuste: Conjunto de operaciones realizadas sobre un sistema de medida para que proporcione indicaciones prescritas, correspondientes a valores dados de la magnitud a medir (CEM, 2008). Cadena de trazabilidad: Sucesin de patrones y calibraciones que relacionan un resultado de medida con una referencia (CEM, 2008). Contribuciones a la incertidumbre: Declaracin de una incertidumbre de medida y las componentes de esa incertidumbre, junto con su clculo y combinacin (CEM, 2008). Correccin: Compensacin de un efecto sistemtico estimado (CEM, 2008). Deriva instrumental: Variacin continua o incremental de una indicacin a lo largo del tiempo, debida a variaciones de las caractersticas metrolgicas de un instrumento de medida (CEM, 2008). Factor de cobertura: Nmero mayor que uno por el que se multiplica una incertidumbre tpica combinada para obtener una incertidumbre expandida (CEM, 2008). Factor de conversin entre unidades: Relacin entre dos unidades de medida correspondientes a magnitudes de la misma naturaleza (CEM, 2008). Intervalo de cobertura: Intervalo que contiene el conjunto de valores verdaderos de un mensurando con una probabilidad determinada, basada en la informacin disponible (CEM, 2008). Instrumento de medida: Dispositivo utilizado para realizar mediciones, solo o asociado a uno o varios dispositivos suplementarios (CEM, 2008). Magnitud: Propiedad de un fenmeno, cuerpo o sustancia, que puede expresarse cuantitativamente mediante un nmero y una referencia (CEM, 2008).

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Magnitud de entrada: Magnitud que debe ser medida, o magnitud cuyo valor puede obtenerse de otra manera, para calcular un valor medido de un mensurando (CEM, 2008). Magnitud de influencia: Magnitud que, en una medicin directa, no afecta a la magnitud que realmente se est midiendo, pero s afecta a la relacin entre la indicacin y el resultado de medida (CEM, 2008). Magnitud de salida: Magnitud cuyo valor medido se calcula mediante los valores de las magnitudes de entrada en un modelo de medicin (CEM, 2008). Medicin: Proceso que consiste en obtener experimentalmente uno o varios valores que pueden atribuirse razonablemente a una magnitud (CEM, 2008). Mensurando: Magnitud que se desea medir (CEM, 2008). Modelo de medicin: Relacin matemtica entre todas las magnitudes conocidas que intervienen en una medicin (CEM, 2008). Principio de medida: Fenmeno que sirve como base de una medicin (CEM, 2008). Probabilidad de cobertura: Probabilidad de que el conjunto de los valores verdaderos de un mensurando est contenido en un intervalo de cobertura especificado (CEM, 2008). Propiedad cualitativa, cualidad: Propiedad de un fenmeno, cuerpo o sustancia, que no puede expresarse cuantitativamente (CEM, 2008). Resolucin: Mnima variacin de la magnitud medida que da lugar a una variacin perceptible de la indicacin correspondiente. Indicacin: Valor proporcionado por un instrumento o sistema de medida (CEM, 2008). Resultado de medida, Resultado de una medicin: Conjunto de valores de una magnitud atribuidos a un mensurando, acompaados de cualquier otra informacin relevante disponible (CEM, 2008).

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Valor de una magnitud: Conjunto formado por un nmero y una referencia, que constituye la expresin cuantitativa de una magnitud (CEM, 2008). Verificacin: Aportacin de evidencia objetiva de que un elemento satisface los requisitos especificados (CEM, 2008).

1
1.1
1.1.1

REVISIN BIBLIOGRFICA

SISTEMA DE GESTIN DE LA CALIDAD

CALIDAD

La poca actual se caracteriza por grandes cambios, tecnolgicos, econmicos, industriales y sociales. Estos cambios han introducido a las empresas de bienes y servicios en un ambiente de gran competencia comercial, creando as una nueva necesidad llamada calidad (Jaramillo et al., 2006). La palabra calidad proviene de la etimologa latina qualitas, que significa cualidad, manera de ser, propiedad de las cosas. A partir de esta raz, muchos autores han desarrollado y caracterizado este concepto; para algunos la calidad es una filosofa, otros la definen como una tcnica y algunos ms la asocian a una forma de vida y de pensamiento (Smano, 2000). El concepto calidad se ha modificado con el tiempo y con base en el enfoque desde el cual se analiza y al alcance que se desea, clasificndose manera en tres grandes grupos: Calidad como conformidad.- Se asocia a la calidad con el cumplimiento de las expectativas de normas o especificaciones de diseo bajo las cuales fue creado. Calidad como diferenciacin.- En esta definicin el enfoque est puesto en el producto mismo y en las diferencias que tiene contra otros productos similares, incluyendo la satisfaccin del cliente como un factor importante. Calidad como fin.- Esta definicin abarca tanto la fabricacin del producto, su desarrollo, diseo, manufactura y la satisfaccin del cliente, definiendo como cliente a todos los individuos involucrados en el diseo, fabricacin y consumo del producto; enfatizando que la satisfaccin del cliente se logra a travs de las caractersticas de un producto o servicio y la falta de deficiencias (Smano, 2000). de esta

Segn la gua ISO 9000 la calidad se define como, Grado en el que un conjunto de caractersticas inherentes cumple con los requisitos, definiendo a su vez requisitos como, necesidad o expectativa establecida, generalmente implcita u obligatoria (ISO 9000:2005). Sin embargo, la calidad no slo es un concepto terico optimista, de moda o un ideal a alcanzar, sino un presente, una til herramienta que aplicada a numerosos procesos de diferentes mbitos, permite mejorar las caractersticas de un elemento para satisfacer las necesidades explcitas e implcitas. En todos estos mbitos, la calidad genera una mayor productividad y una mayor participacin en el mercado, lo cual se traduce en mayores ingresos y mayor rentabilidad para todas las organizaciones (Smano, 2000).

1.1.1.1

Antecedentes Histricos de la Normalizacin

Desde hace tiempo se ha hecho presente un proceso de globalizacin econmica, el cual exige a las empresas redefinir sus estrategias y sus procesos, con la finalidad de lograr un uso eficiente de sus recursos y el aumento de su productividad, de modo que puedan competir con xito en el mercado actual. Esta necesidad, dio la pauta a la creacin de diversas normas o certificaciones, que garanticen a los que adquieren los productos o servicios, que todo se va a hacer siempre igual o tendr las mismas propiedades y caractersticas (Jaramillo et al., 2006). Se entiende por normalizacin, la actividad que tiene por objeto establecer ante problemas reales o potenciales, disposiciones destinadas a usos comunes y repetidos con el fin de obtener un nivel de ordenamiento ptimo en un contexto dado, que puede ser tecnolgico poltico o econmico. As mismo, promueve la creacin de un idioma tcnico comn a todas las organizaciones y es una contribucin importante para la libre circulacin de los productos industriales (Jaramillo et al., 2006). La Organizacin Internacional para la Normalizacin (ISO), (cuyo nombre corresponde a sus siglas en ingls, International Organization for Standarization),

tiene sus orgenes en la Federacin Internacional de Asociaciones Nacionales de Normalizacin (1926-1939). El Comit Coordinador de las Naciones Unidas para la Normalizacin (UNSCC) actu como organizacin interina para la formacin de grupos en beneficio de la calidad de 1943 a 1946. En octubre de 1946, en Londres, se acord por representantes de veinticinco pases el nombre de Organizacin Internacional para la Normalizacin (Jaramillo et al., 2006). La ISO, celebra su primera reunin en junio de 1947 en Zurich, Suiza, su sede se encuentra ubicada en Ginebra. Tiene como finalidad principal, promover el desarrollo de estndares internacionales y actividades relacionadas, incluyendo la conformidad de los estatutos para facilitar el intercambio de bienes y servicios en todo el mundo. Est constituida por delegaciones gubernamentales y no gubernamentales que representan a ms de 100 pases subdivididos en una serie de miembros, encargados de desarrollar las guas que contribuirn al mejoramiento ambiental. (Jaramillo et al., 2006)

1.1.1.2

Norma ISO 9000:2005

Entre las normas publicadas por la ISO, la ms conocida internacionalmente desde su aparicin en 1987, es la familia de Normas ISO 9000. Es un conjunto de normas internacionales y guas de calidad, elaboradas para asistir a las organizaciones, de todo tipo y tamao, en la implementacin y la operacin de sistemas de gestin de la calidad eficaces (Jaramillo et al., 2006). La Norma define el sistema de gestin de la calidad como, sistema de gestin para dirigir y controlar una organizacin con respecto a la calidad. El sistema de gestin de calidad responde de manera genrica a los procesos necesarios para el funcionamiento de una organizacin (ISO 9000:2005). El conjunto de normas que integran la familia ISO 9000 se citan a continuacin: La Norma ISO 9000 describe los fundamentos de los sistemas de gestin de la calidad y especifica la terminologa para los sistemas de gestin de la calidad.

La Norma ISO 9001 especifica los requisitos para los sistemas de gestin de la calidad aplicables a toda organizacin que necesite demostrar su capacidad para proporcionar productos que cumplan los requisitos de sus clientes y los reglamentarios que le sean de aplicacin, y su objetivo es aumentar la satisfaccin del cliente.

La Norma ISO 9004 proporciona directrices que consideran tanto la eficacia como la eficiencia del sistema de gestin de la calidad. El objetivo de esta norma es la mejora del desempeo de la organizacin y la satisfaccin de los clientes y de otras partes interesadas.

La Norma ISO 19011 proporciona orientacin relativa a las auditoras de sistemas de gestin de la calidad y de gestin ambiental (ISO 9000:2005).

Todas estas normas juntas forman un conjunto coherente de normas de sistemas de gestin de la calidad que facilitan la mutua comprensin en el comercio nacional e internacional. El enfoque a travs de un sistema de gestin de la calidad, puede ayudar a las organizaciones a aumentar la satisfaccin de sus clientes. Proporciona confianza tanto a la organizacin como a sus clientes, de su capacidad para proporcionar productos que satisfagan los requisitos de forma coherente (ISO 9000:2005).

1.1.2 1.1.2.1

VALIDACIN Definicin

La norma NTE NEN-ISO/IEC 17025:2006 en el literal 5.4.5.1 define, validacin es la confirmacin, a travs del examen y el aporte de evidencias objetivas, de que se cumplen los requisitos particulares para un uso especfico previsto (NTE INEN-ISO/IEC 17025:2006). En la actualidad, se requieren mtodos analticos fiables para cumplir con las normativas nacionales e internacionales en todas las reas de anlisis. Es as como la validacin de mtodos, se convierte en un componente esencial de las medidas que un laboratorio debe implementar, para obtener resultados tcnicamente vlidos, exactos y confiables. La realizacin de estas actividades

de validacin de los mtodos de ensayo utilizados por el propio laboratorio, contemplan la satisfaccin de las necesidades del cliente y la adecuacin para realizar los ensayos previstos [Castelluci, 2005; OAA, 2003].

1.1.2.2 1.1.2.2.1

Parmetros de Validacin Selectividad/Especificidad

La selectividad se define como la propiedad de un sistema de medida, empleando un procedimiento de medida especificado, por la que el sistema proporciona valores medidos para uno o varios mensurandos, que son independientes entre s o de otras magnitudes existentes en el fenmeno, cuerpo o sustancia en estudio. En qumica, la selectividad de un sistema de medida generalmente se obtiene para magnitudes con componentes seleccionadas en concentraciones con intervalos determinados. Otra definicin la describe como la capacidad de un mtodo para cuantificar el analito con precisin en presencia de interferentes, es decir, la habilidad de un procedimiento analtico para diferenciar entre varias sustancias presentes en las muestras. Idealmente, la selectividad debera evaluarse para todos los interferentes importantes susceptibles de estar presentes. Sin embargo, puede no ser viable considerar o probar cada uno de los interferentes potenciales; en cuyo caso, se deben comprobar los casos probablemente peores (Castelluci, 2005; CEM, 2008). La especificidad es la capacidad de evaluar inequvocamente el analito en presencia de componentes que se puede esperar que estn presentes, en otras palabras, sugiere que ningn compuesto excepto el analito contribuye al resultado de un ensayo. Para demostrar la especificidad de un mtodo existen varias posibilidades tales como: Agregar el componente que interfiere en cantidades sucesivas y evaluar su influencia. Probar un estndar certificado de la matriz con cantidades conocidas del analito. Si se encuentra el valor correcto, el procedimiento es especfico (OAA, 2003).

Algunos autores consideran que la selectividad y la especificidad son dos trminos equivalentes, y se definen como la capacidad de un mtodo para medir exacta y especficamente el analito, sin interferencias de otras sustancias que puedan estar en la propia muestra. Salvo en el caso, de estar validando un mtodo completamente desarrollado por el laboratorio, estos parmetros de validacin se resuelven bibliogrficamente, ya que lo mtodos seleccionados, de reconocida aplicacin, cuentan con informacin sobre su selectividad, especificidad y las interferencias que se conocen (Muoz, 2001). 1.1.2.2.2 Exactitud / veracidad

El trmino exactitud se utiliz durante cierto tiempo para referirse nicamente a la componente ahora denominada veracidad, pero como se explica a continuacin, este trmino debe indicar el desplazamiento total de un resultado con respecto a su valor de referencia, debido tanto a los efectos aleatorios como a los sistemticos (Barlandas et al., 2008). Para conocer el valor de una magnitud se emplea un procedimiento de medicin, y los resultados que se obtienen son una estimacin del valor del mensurando, tal estimacin contiene un error de medida. Tradicionalmente, se ha considerado que el error de medida posee dos componentes; una componente aleatoria y una componente sistemtica [CEM, 2008; Gonzlez, 2002]. El error aleatorio es la componente del error de medida que, en mediciones repetidas, vara de manera impredecible. El valor de referencia del error aleatorio, es la media que se obtendra de un nmero infinito de mediciones repetidas del mismo mensurando. El error aleatorio del resultado de una medicin no puede ser compensado por el incremento del nmero de mediciones, pero este puede normalmente ser disminuido por tal incremento. Es igual a la diferencia entre el error de medida y el error sistemtico [CEM, 2008; Gonzlez, 2002]. El error sistemtico es la componente del error de medida que, en mediciones repetidas, permanece constante o vara de manera predecible, es decir, puede ser independiente del valor del mensurando, o puede variar

con el valor del mismo. El valor de referencia del error sistemtico, es un valor verdadero, un valor medido de un patrn cuya incertidumbre de medida es despreciable, o un valor convencional. Es independiente del nmero de mediciones realizadas y no puede por tanto ser reducido incrementando el nmero de mediciones. El error sistemtico es igual a la diferencia entre el error de medida y el error aleatorio [CEM, 2008; Gonzlez, 2002]. Los errores aleatorios y sistemticos pueden ocurrir independientemente unos de otros y surgir en diferentes etapas del procedimiento. El error aleatorio es ms fcil de detectar que el sistemtico, ya que el segundo no se puede apreciar con la sola repeticin de mediciones y, a menos que se conozca de antemano el valor verdadero del mensurando, podran existir errores sistemticos muy grandes, que pasen inadvertidos si no se aplican sistemas de control de calidad interno. La imposibilidad de conocer el valor verdadero hace que el error sistemtico de un procedimiento solamente pueda ser estimado. El error sistemtico total es denominado el sesgo de la medida y es igual al valor medio, repetibilidad menos el valor verdadero, ecuacin 1.1 [CEM, 2008; Gonzlez, 2002]. [1.1] El valor que es sumado algebraicamente al resultado no corregido de una medicin, para compensar el error sistemtico se denomina correccin. La correccin es igual al negativo del error estimado (INS, 2008). El VIM define veracidad como, la proximidad entre la media de un nmero infinito de valores medidos repetidos y un valor de referencia. La veracidad es una propiedad metrolgica cualitativa que no tiene valor numrico. Se cuantifica mediante el error sistemtico con el que se relaciona de manera inversa, pero no est relacionada con el error aleatorio. En otras palabras, la veracidad se relaciona con la presencia de errores de tipo sistemticos, tambin llamado sesgo o desviacin, que puede expresarse como un valor absoluto o relativo al valor verdadero (CEM, 2008). que resultara de un nmero infinito de mediciones del mismo mensurando bajo condiciones de del mensurando, de acuerdo a la

La exactitud de un resultado segn el VIM se define como, la proximidad entre un valor medido y un valor verdadero de un mensurando. Por tanto, adems de considerar los errores sistemticos, la exactitud considera tambin los errores aleatorios ya que estos siempre estn presentes en el resultado de una medida. Es decir, la exactitud es la suma de dos conceptos: veracidad y precisin (CEM, 2008). En resumen, la precisin describe errores aleatorios, el sesgo describe errores sistemticos, y la exactitud, es decir, la proximidad al verdadero valor de una medida individual o un valor medio, incorpora ambos tipos de error. Por lo anterior mencionado, el trmino general de exactitud se usa en esta investigacin para referirse conjuntamente, a la veracidad y a la precisin. En la figura 1.1 se muestra la relacin entre los distintos tipos de error y los correspondientes conceptos cualitativos [Barlandas et al., 2008; Miller y Miller, 2002].

Fig 1.1: Relacin entre los distintos tipos de error y los correspondientes conceptos cualitativos.
(Barlandas et al., 2008)

La evaluacin de la veracidad puede realizarse por medio del error relativo. Se realiza utilizando un material de referencia certificado (MRC) o un material de referencia (MR), con un valor conocido del analito, considerado el valor asignado a ste como el valor verdadero. El clculo del porcentaje de error relativo, se realiza aplicando la ecuacin 1.2. Entre menor sea el porcentaje de error relativo mayor ser la veracidad del mtodo. %

100

[1.2]

Otra forma de calcular la veracidad es mediante el porcentaje de recuperacin. Se puede utilizar material de referencia certificado o un material de referencia (MR). El material se somete a examen y se estima la concentracin media del analito y con el valor obtenido se determina el porcentaje de recuperacin aplicando la ecuacin 1.3 (Barlandas et al., 2008). % Donde: Valor promedio obtenido del anlisis Valor de referencia (terico) del MRC 1.1.2.2.3 Precisin 100 [1.3]

La precisin segn el VIM se define como, proximidad entre valores medidos obtenidos en mediciones repetidas de un mismo objeto, o de objetos similares, bajo condiciones especificadas. La precisin depende exclusivamente de la dispersin del error aleatorio y vara inversamente a ste. La precisin es una propiedad cualitativa y no tiene valor numrico por lo que la variabilidad debido a fluctuaciones aleatorias se cuantifica mediante otro concepto distinto: la imprecisin. Cuanto mayor sea la dispersin de los resultados obtenidos mayor ser la imprecisin del procedimiento de medida. La imprecisin es la desviacin tpica , la varianza o el coeficiente de variacin de un conjunto de mediciones de una magnitud bajo las condiciones especificadas. La precisin se utiliza para definir la repetibilidad de medida, la precisin intermedia y la reproducibilidad [CEM, 2008; Gonzlez, 2002]. 1.1.2.2.3.1 Repetibilidad ( )

La repetibilidad es la concordancia entre los resultados de mediciones sucesivas del mismo mensurando efectuadas en las mismas condiciones de medida denominadas condiciones de repetibilidad. Las Condiciones de repetibilidad son aquellas que se producen cuando en las distintas mediciones se utiliza el mismo procedimiento de medida, el mismo observador, el mismo instrumento de medida

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utilizado en las mismas condiciones, el mismo lugar y una repeticin de las mediciones a lo largo de un corto periodo de tiempo, es decir, las condiciones de repetibilidad vienen a ser aquellas que se producen dentro de una serie de mediciones. Se considera una serie metrolgica al conjunto de mediciones realizadas con un mismo sistema de medida entre dos momentos previamente delimitados. La repetibilidad se expresa cuantitativamente mediante la desviacin tpica o el coeficiente de variacin, que en este caso se denominan desviacin tpica de repetibilidad y coeficiente de variacin de repetibilidad [CEM, 2008; Gonzlez, 2002]. 1.1.2.2.3.2 Precisin intermedia ( :

La precisin en condiciones intermedias es aquella que se refiere a la calculada cuando se producen cambios en alguno de las condiciones de medida del procedimiento. En general existen cuatro factores dentro de las condiciones de medida de un laboratorio que se consideran que son la principal contribucin a la variabilidad de las mediciones. Estos cuatro factores son: tiempo, calibracin, operador y equipamiento. La precisin en condiciones intermedias hace referencia a aquella precisin en la que se han cambiado uno o ms de los factores mencionados. La calibracin usada en este contexto no se refiere a aquella que es requerida como una parte integrante de procedimiento para obtener los resultados, sino que se refiere a aquel proceso de calibracin que se produce a intervalos regulares de tiempo entre grupos de menciones dentro de un laboratorio [CEM, 2008; Gonzlez, 2002]. 1.1.2.2.3.3 Reproducibilidad ( ):

Es la precisin de medida bajo un conjunto de condiciones de reproducibilidad. La reproducibilidad es la concordancia entre los resultados de las mediciones del mismo mensurando realizadas haciendo variar las condiciones de medida. Las condiciones que se pueden variar son: el principio o mtodo de medida, el observador, el instrumento de medida, el lugar, las condiciones de uso y el tiempo. El concepto definido por este trmino viene a ser el equivalente al de precisin entre laboratorios. La reproducibilidad se expresa cuantitativamente

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mediante la desviacin tpica o el coeficiente de varianza denominados en este caso desviacin tpica de reproducibilidad o el coeficiente de variacin de reproducibilidad [CEM, 2008; Gonzlez, 2002]. Resumiendo, la precisin es el grado de concordancia entre ensayos independientes obtenidos bajo unas condiciones estipuladas. Estas condiciones dependen de los factores que se varen entre cada uno de los ensayos. Las dos medidas de precisin extremas son la reproducibilidad (que proporciona la mayor variabilidad ya que los ensayos se obtienen por diferentes laboratorios) y la repetibilidad (que proporciona la menor variabilidad ya que los ensayos se obtienen en intervalos cortos de tiempo sin variar ningn factor). Pero cuando un laboratorio obtiene los ensayos variando todos los factores que puedan afectar a un resultado, este caso, se obtiene la precisin intermedia ya que (como su propio nombre indica) se obtiene en unas condiciones que estn entre medio de las condiciones de repetibilidad y de reproducibilidad. La precisin intermedia es, por tanto, un parmetro muy importante ya que proporciona una idea de la variabilidad que pueden tener los resultados dentro de un laboratorio (Maroto et al.,2001). El estudio de la precisin se puede realizar calculando, a travs del anlisis simple de varianza, las desviaciones estndar de repetibilidad ( ) y de reproducibilidad ( ) para cada uno de los niveles de ensayo, a partir de las ecuaciones 1.4 y 1.5 respectivamente. [1.4] [1.5] El denominar es igual al nmero de observaciones que se realizan cada da (en ). Los valores de adelante. La combinacin de 0, debe asumirse , 0 (normalmente y son

cada nivel) Si por efectos aleatorios debe cumplirse que se explican ms

obtenidos del clculo del ANOVA de un factor. Su significado y forma de clculo la repetibilidad, y reproducibilidad, , se obtiene como la raz cuadrada de la suma de varianzas de

12

repetibilidad (conocida como variacin interna promedio) y reproducibilidad (conocida como variabilidad entre condiciones), de acuerdo a la ecuacin 1.6. [1.6] A partir de los valores y , se calcula el porcentaje de los coeficientes de ) y el coeficiente de variacin en funcin de la ) de acuerdo a las ecuaciones

variacin de repetibilidad ( 1.7 y 1.8 respectivamente. % % 1.1.2.2.4 100 100

combinacin de repetibilidad y reproducibilidad (

[1.7] [1.8]

Lmite de deteccin (LD)

Es la cantidad ms pequea de analito en una muestra que puede ser detectada por una nica medicin, con un nivel de confianza determinado, pero no necesariamente cuantificada con un valor exacto. Es comnmente expresado como concentracin del analito. Tambin se puede definir el lmite de deteccin de un analito, como aquella concentracin que proporciona una seal en el instrumento significativamente diferente de la seal del blanco o seal de fondo con cierto nivel de confianza especificado [Muoz, 2001; OAA, 2003]. En la prctica no hay acuerdo entre los profesionales en la manera de calcularlo, ya que esta definicin no es concreta. Los procedimientos de determinacin posible son: a) veces la dispersin, expresada como desviacin estndar, a partir de mediciones repetidas del blanco (vlido solamente para procedimientos con blanco), o de soluciones del analito en agua pura, de acuerdo a la ecuacin 1.9. 3 [1.9]

13

Donde: Valor promedio del blanco Desviacin estndar del blanco b) 2, 5 a 5 veces la relacin/ruido del instrumento de medida a utilizar (OAA, 2003). Cuando se considere necesario, los valores obtenidos para el lmite de deteccin deben ser confirmados experimentalmente, fortificando muestras de la misma matriz a los niveles de concentracin respectivos y efectuando su anlisis con el mismo nmero de replicados que en la validacin correspondiente (OAA, 2003). 1.1.2.2.5 Lmite de cuantificacin (LC)

Es la cantidad ms pequea de analito en una muestra que puede ser cuantitativamente determinada con una incertidumbre asociada, para un nivel de confianza dado. Es un parmetro del anlisis cuantitativo para niveles bajos de compuestos en matrices de muestra y se usa particularmente para impurezas y productos de degradacin. Se expresa como concentracin del analito. En esencia se encuentran en la literatura dos formas para determinarlo: a) De manera anloga al lmite de deteccin, en el cual el lmite de cuantificacin es como mnimo tres veces el lmite de deteccin, segn cada caso, de acuerdo a la siguiente expresin. 3 [1.10]

b) Por determinacin de una incertidumbre de los resultados mxima permisible (dada como dispersin relativa del 30%, por ejemplo) por medio de la determinacin de la concentracin ms pequea que se pueda medir, con este valor mximo. Este lmite de cuantificacin es, por lo tanto, dependiente de las exigencias de la incertidumbre (OAA, 2003).

14

1.1.2.2.6

Linealidad

Es la capacidad (dentro de un intervalo dado) del procedimiento analtico de obtener resultados de prueba que sean directamente proporcionales a la concentracin de analito en la muestra. La linealidad involucra una serie de muestras de concentracin conocida o una serie de diluciones conocidas de muestras altamente concentradas. Las mediciones o los valores de las pruebas reportadas son comparados con los valores asignados o los valores de dilucin. Se grafica respuesta (rea o relacin de reas en el caso de utilizar patrn interno) en funcin de la concentracin de la dilucin utilizada y se efecta el tratamiento estadstico de los datos, determinando: ordenada al origen, pendiente (sensibilidad), coeficiente de correlacin y coeficiente de variacin porcentual para cada nivel de concentracin (Barlandas et al., 2008). La linealidad es la parte de la funcin de calibracin, en la que la seal obtenida para el analito responde linealmente a la concentracin. Se verifica mediante la obtencin del coeficiente de correlacin que debe ser preferentemente mayor o igual a 0,995 (aunque puede encontrarse entre 0,98 y 0,99 segn el mtodo analtico) [Muoz, 2001; OAA, 2003]. 1.1.2.2.7 Robustez Es la medida de la capacidad de un procedimiento analtico de permanecer inafectado por pequeas pero deliberadas variaciones en los parmetros del mtodo y provee una indicacin de su fiabilidad en condiciones de uso normales. En otras palabras, es la resistencia al cambio en los resultados obtenidos por un mtodo analtico, cuando se realizan desviaciones menores a partir de las condiciones experimentales descritas en el procedimiento. El objetivo de la prueba de robustez es optimizar el mtodo analtico y describir que bajo las condiciones establecidas (incluidas sus tolerancias) se pueden obtener resultados suficientemente exactos con una alta seguridad, de manera que el procedimiento funcione confiablemente si se utiliza en otros laboratorios o despus de intervalos largos de tiempo. Un mtodo es ms robusto entre menos dependan los

15

resultados del ensayo de una modificacin en las condiciones de ste [Castelluci, 2005; OAA, 2003]. 1.1.2.2.8 Intervalo de trabajo

Es el conjunto de los valores de magnitudes de una misma naturaleza que un instrumento o sistema de medida dado puede medir con una incertidumbre instrumental especificada, en unas condiciones determinadas. Es el intervalo entre la menor y la mayor concentracin de analito en la muestra (incluyendo stas concentraciones) para las cuales se ha demostrado que el procedimiento analtico tiene el nivel adecuado de precisin, exactitud y linealidad. Es importante comprender que este intervalo no es necesariamente idntico al intervalo til de calibrado. Mientras que el calibrado puede cubrir un amplio intervalo de concentraciones, el resto de la validacin (normalmente una parte mucho ms importante en trminos de incertidumbre) cubre un intervalo ms restringido [CEM, 2008; Isol, 2002]. 1.1.2.2.9 Incertidumbre

La incertidumbre es junto con la trazabilidad, uno de los conceptos de metrologa fundamentales, su definicin, su relacin con otros conceptos, as como los aspectos relevantes para el clculo de este parmetro se explican en el literal 1.1.3.

1.1.2.3

Contraste de significacin

Una de las propiedades ms importantes de un mtodo analtico es que se encuentre libre de errores sistemticos. Esto significa que el valor dado para la cantidad de analito debera ser el valor verdadero. Esta propiedad de un mtodo analtico se puede contrastar al aplicar el mtodo a una muestra de ensayo estndar que contenga una cantidad conocida de analito. Sin embargo, incluso si no existieran errores sistemticos, los errores aleatorios hacen poco probable que la cantidad medida sea exactamente igual que la cantidad patrn conocida. Para decidir si la diferencia entre la cantidad medida y la cantidad conocida se puede

16

atribuir a estos errores aleatorios, se puede aplicar una prueba estadstica denominada contraste de significacin (tambin conocida como prueba de significancia). Como su nombre lo indica, esta aproximacin contrasta si son significativas las diferencias entre los dos resultados, o si se pueden justificar slo por variaciones aleatorias. Los contrastes de significacin se utilizan ampliamente en la evaluacin de los resultados experimentales (Miller y Miller, 2002). 1.1.2.3.1 Comparacin de una media experimental con un valor conocido

Al hacer un contraste de significacin se prueba la veracidad de una hiptesis denominada hiptesis nula denotada por . Si se refiere al prrafo anterior, la hiptesis nula adoptada es aquella mediante la cual un mtodo analtico no est sujeto a errores sistemticos. El trmino nulo se emplea para indicar que no hay otra diferencia entre el valor observado y el conocido que la atribuible a la variacin aleatoria. Suponiendo que esta hiptesis nula es verdadera, la teora estadstica se puede emplear para calcular la probabilidad de que la diferencia observada (o una superior a ella) entre la media muestral, , y el valor verdadero, , se deba solamente a un errores aleatorios. Cuanto ms pequea sea la probabilidad de que la diferencia observada ocurra por azar, menos probable ser que la hiptesis nula sea verdadera (Miller y Miller, 2002). Normalmente la hiptesis nula se rechaza cuando la probabilidad de que dicha diferencia observada ocurra por azar es menor que 1 de cada 20 veces (es decir, 0,05 5%). En este caso se dice que la diferencia es significativa al nivel de 0,05 ( 5%). Utilizando este nivel de significacin se rechaza, en promedio, la hiptesis nula, aunque sea de hecho verdadera, 1 de cada 20 veces. El nivel de significacin se indica escribiendo, por ejemplo, P (es decir, la probabilidad) = 0,05 y proporciona la probabilidad de rechazar una hiptesis nula cuando esta es verdadera. Es importante tener en cuenta que si se acepta la hiptesis nula no significa que se haya probado que sea verdadera, slo que no se ha demostrado que sea falsa (Miller y Miller, 2002).

17

la media de la poblacin = , se calcula el estadstico segn la ecuacin 1.11.

Para decidir si la diferencia entre

es significativa, es decir para contrastar

[1.11]

Donde: Tamao muestral Si | | (es decir, el valor calculado de sin tener en cuenta su signo) es mayor que para

un cierto valor crtico entonces se rechaza la hiptesis nula. El valor crtico bibliografa aqu citada (Miller y Miller, 2002). 1.1.2.3.2 Comparacin de dos medias experimentales

un nivel de significacin concreto se puede encontrar en tablas, de la misma

Los resultados de un mtodo analtico nuevo se pueden contrastar mediante comparacin con los obtenidos utilizando un segundo mtodo (quizs un mtodo de referencia). Se dispone de dos medias mustrales necesita probar si y . Se toma como hiptesis : , se nula que los dos mtodos proporcionan el mismo resultado, es decir

difiere significativamente de cero. Si las dos muestras

tienen desviaciones estndar que no son significativamente diferentes, se puede desviaciones estndar individuales s y s (Miller y Miller, 2002). Se decide si la diferencia entre dos medias muestrales, decir, se contrasta la hiptesis nula, utilizando la ecuacin 1.12. En la ecuacin, desviaciones estndar iguales (Miller y Miller, 2002).

calcular una estimacin conjunta de la desviacin estndar, , a partir de la dos

es significativa, es 2 grados de

, mediante el clculo del estadstico tiene

libertad. El mtodo supone que las muestras se extraen de poblaciones con

[1.12]

Donde

de calcula a partir de la ecuacin 1.13

18

[1.13] Cuando sea poco probable que las desviaciones estndar de las poblaciones sean iguales, no es muy apropiado mezclar las desviaciones estndar muestrales para dar una estimacin global o conjunto de la desviacin estndar. Cuando no puede suponerse que las dos muestras proceden de poblaciones con desviaciones estndar iguales, se contrasta ecuacin 1.14

, calculando el estadstico

a partir de la

[1.14]

El nmero de grados de libertad se calcula a partir de la ecuacin 1.15

[1.15]

1.1.2.3.3 Contraste de una y dos colas Los mtodos analizados en los literales anteriores, se refieren al contraste de la diferencia entre dos medias en cualquier direccin. El mtodo descrito en el literal 1.1.2.3.1 contrasta si existe diferencia significativa entre el resultado experimental y el valor conocido para el material de referencia, sin tener en cuenta el signo de la diferencia. En muchas situaciones, el analista no tiene una idea preconcebida, previa a las mediciones experimentales, en cuanto a si la diferencia entre la media experimental y el valor de referencia ser positiva o negativa. Por ello, el contraste utilizado debe cubrir cualquier posibilidad. Dicho contraste se denomina de dos colas (o bilateral). Sin embargo, en algunos casos puede ser apropiado otro tipo de contraste diferente. Si se considera por ejemplo, un experimento en el que se espera aumentar la velocidad de reaccin aadiendo un catalizador; en este caso, es evidente que antes de empezar el experimento el nico resultado que interesa es si la nueva velocidad es mayor que la anterior, y por lo tanto, slo es necesario contrastar un aumento. Este tipo de contraste se llama de una cola (o unilateral) (Miller y Miller, 2002).

19

El uso de valores crticos de tablas estadsticas en contrastes de significacin fue adoptado a que antiguamente era demasiado tedioso calcular la probabilidad de que superara al valor experimental. Las computadoras han alterado tal situacin, y normalmente los programas estadsticos proporcionan los resultados de los contrastes de significacin en trminos de una probabilidad. As, tambin, si el contraste se lleva a cabo con la computadora, ser necesario indicar si este es un contraste uni o bilateral (Miller y Miller, 2002). 1.1.2.3.4 El contraste F para la comparacin de desviaciones estndar

Los contrastes de significacin hasta ahora descritos se utilizan para comparar medias y, por lo tanto, para detectar errores sistemticos. En muchos casos, es tambin importante comparar las desviaciones estndar, es decir, los errores aleatorios de dos conjuntos de datos. Esta comparacin, como en el caso de los contrastes de medias, puede tomar dos formas. Se puede pretender probar si el Mtodo A es ms preciso que el Mtodo B (es decir, la prueba de una cola) o si los mtodos A y B difieren en su precisin (o sea, un contraste de dos colas). El contraste F considera la razn de las dos varianzas muestrales, es decir, la razn de los cuadrados de las desviaciones estndar Mediante el clculo del estadstico que : (Miller y Miller, 2002).

de acuerdo a la ecuacin 1.16, se prueba si

es significativa la diferencia entre dos varianzas muestrales. Esto es, se prueba

[1.16] sea siempre 1y 1. El 2,

Donde 1 y 2 se disponen en la ecuacin de modo que

nmero de grados de libertad del numerador y denominador son las muestras son normales.

respectivamente. El contraste supone que las poblaciones de donde se extraen

Si la hiptesis nula fuese verdadera, la relacin de varianzas debera ser prxima a 1. Las diferencias respecto de 1 se deben a variaciones aleatorias, pero si la diferencia es demasiado grande no se podr atribuir a esta causa. Si el valor calculado de F supera un cierto valor (obtenido de tablas), entonces se rechaza la

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hiptesis nula. Este valor crtico de F depende del tamao de las dos muestras, del nivel de significacin y del tipo de contraste realizado. En el caso de realizar este contraste en Excel, se debe tener en cuenta que este slo proporciona el contraste de una cola, siendo necesario introducir la muestra con la varianza ms grande como primera muestra. (Miller y Miller, 2002). 1.1.2.3.5 Anlisis de la Varianza

En el literal 1.1.2.3.2 se describi un mtodo para comparar dos medias y contrastar si diferan significativamente. En el trabajo analtico se suelen presentar a menudo comparaciones en las que intervienen ms de dos medias. El anlisis de la varianza (ANOVA) es una potente herramienta estadstica, de gran utilidad tanto en la industria, para el control de procesos, como en el laboratorio de anlisis, para el control de mtodos analticos. Los ejemplos de aplicacin son mltiples, pudindose agrupar, segn el objetivo que persiguen, en dos principalmente: la comparacin de mltiples columnas de datos y la estimacin de los componentes de variacin de un proceso. Para esta investigacin se tratar el primer caso (Boqu y Maroto, 2004). 1.1.2.3.5.1 Comparacin de mltiples poblaciones

La comparacin de diversos conjuntos de resultados es habitual en los laboratorios analticos. Por ejemplo, puede interesar comparar diversos mtodos de anlisis con diferentes caractersticas, diversos analistas entre s, o una serie de laboratorios que analizan una misma muestra con el mismo mtodo (ensayos colaborativos). Otro caso sera, cuando se desea analizar una muestra que ha estado sometida a diferentes tratamientos o ha estado almacenada en diferentes condiciones. En todos estos ejemplos hay dos posibles fuentes de variacin: una es el error aleatorio en la medida y la otra es lo que se denomina factor controlado (tipo de mtodo, diferentes condiciones, analista o laboratorio, etc) (Boqu y Maroto, 2004). Una de las herramientas estadsticas ms utilizadas que permite la separacin de las diversas fuentes de variacin es el anlisis de la varianza (ANOVA, del ingls Analysis of Variance). Se puede utilizarse tambin en situaciones donde ambas

21

fuentes de variacin son aleatorias. Un ejemplo de este caso, sera el anlisis de algn compuesto de un vino almacenado en un depsito. Supngase que las muestras se toman aleatoriamente de diferentes partes del depsito y se realizan diversos anlisis replicados. Aparte de la variacin natural en la medida se tendr una variacin en la composicin del vino de las diferentes partes del depsito. Cuando se tiene un factor, controlado o aleatorio, aparte del error propio de la medida, se hablara del ANOVA de un factor (Boqu y Maroto, 2004). En el caso, por ejemplo, de que se estuviese desarrollando un nuevo mtodo colorimtrico y se quisiera investigar la influencia de diversos factores independientes sobre la absorbancia, tales como la concentracin de reactivo A y la temperatura a la que tiene lugar la reaccin, entonces se hablara de un ANOVA de dos factores. En los casos donde se tiene dos o ms factores que influyen, se realizan los experimentos para todas las combinaciones de los factores estudiados, seguido del ANOVA. Se puede deducir entonces, si cada uno de los factores o una interaccin entre ellos tienen influencia significativa en el resultado (Boqu y Maroto, 2004). Para utilizar el ANOVA de forma satisfactoria deben cumplirse tres tipos de hiptesis, aunque se aceptan ligeras desviaciones de las condiciones ideales: 2. Cada conjunto de datos debe ser independiente del resto. 3. Los resultados obtenidos para cada conjunto deben seguir una distribucin normal. 4. Las varianzas de cada conjunto de datos no deben diferir de forma significativa (Boqu y Maroto, 2004). ANOVA de un factor Como ya se indic, el ANOVA puede utilizarse para comparar entre s las medias de los resultados obtenidos por diversos laboratorios, analistas, mtodos de anlisis, etc. El ANOVA de un factor contrasta la existencia de diferencias significativas entre medias cuando estn presentes ms de dos muestras. Se sabe que debido al error aleatorio, incluso si el valor verdadero que se quiere medir no ha variado, la media muestral puede variar de una muestra a otra. El

22

mtodo ANOVA contrasta si la diferencia entre las medias muestrales es demasiado grande para explicar mediante errores aleatorios (Boqu y Maroto, 2004). Se va a suponer, que se desea comparar las medias de k grupos muestrales, el tamao respectivo (todos iguales), de cada grupo muestral k, siendo k k y 1 cada uno de los cuales se supone que tiene la misma varianza. Se toma , como el A cada valor muestral , se le

nmero total de elementos muestrales simo grupo, donde 1

asignan dos subndices , de manera que,

, designar el -simo valor en el -

. El procedimiento para contrastar la

hiptesis de igualdad de medias en este contexto se denomina anlisis de varianza de un factor. El esquema para el anlisis de varianza de un factor para este caso se presenta el en la figura 1.2 (Boqu y Maroto, 2004).

Fig 1.2: Esquema para el anlisis de varianza de un factor

(Boqu y Maroto, 2004)

El primer paso entonces, es calcular las medias de cada grupo muestral. Las medias de cada grupo muestral estarn definidas entonces por la ecuacin 1.17.

La hiptesis nula especifica que los k grupos muestrales tienen una media comn.

[1.17]

Asimismo, la media general estar definida por la ecuacin 1.18

[1.18]

23

Las observaciones (repeticiones) se ordenarn normalmente, tal como se puede observar en la tabla 1.1. Tabla 1.1: Ejemplo del ordenamiento de los grupos muestrales
GRUPO MUESTRAL Repeticiones 1 2 1 2 k 1 k

En funcin de la hiptesis nula adoptada, el objetivo del ANOVA, es comparar los diversos valores medios para determinar si alguno de ellos difiere significativamente del resto. Para ello se utiliza una estrategia lgica: si los resultados proporcionados en los grupos muestrales, no contienen errores sistemticos, los valores medios respectivos no diferirn mucho los unos de los otros y su dispersin, debida a los errores aleatorios, ser comparable a la dispersin presente individualmente en cada grupo (Boqu y Maroto, 2004) El secreto est en descomponer la variabilidad total de los datos en dos fuentes de variacin. La primera es la variabilidad en torno a las medias individuales dentro de los grupos o suma de diferencias cuadrticas dentro del grupo muestrales de los k grupos de observaciones, la cual se denomina variabilidad . . . ms

La segunda es la variabilidad entre las medias de los k grupos. sta se denomina variabilidad entre grupos o suma de diferencias cuadrticas entre grupos ( su media global, se denomina suma de diferencias cuadrticas total Matemticamente, esta tima es igual a la suma dentro de los grupos la suma entre grupos (Boqu y Maroto, 2004). La suma de las discrepancias de todas las observaciones muestrales respecto de

24

Como se mencion al inicio, el contraste de igualdad de medias est basado en el supuesto de que los k grupos muestrales tienen una varianza comn. Si la cuadrados, y , pueden ser utilizadas como base para una estimacin . Se hiptesis nula de igualdad de las medias es cierta, cada una de las sumas de

de la varianza comn. Para obtener estas estimaciones, se divide la suma de las diferencias cuadrticas para el nmero apropiado de grados de libertad de dividir para puede demostrar que una estimacin insesgada de la varianza poblacional resulta cuadrtica dentro del grupo k), la estimacin resultante se denomina diferencia . Otra estimacin insesgada de la varianza

poblacional se obtiene dividiendo

para (k 1), la cantidad resultante se . La diferencia cuadrtica total 1, y se

denomina diferencia cuadrtica entre grupos denomina con las iniciales

se obtiene dividiendo la suma de diferencias cuadrticas total para

. En la tabla 1.2, se presenta el resumen de

todas las ecuaciones necesarias para anlisis del ANOVA, que han sido mencionadas (Boqu y Maroto, 2004). Tabla 1.2: Expresiones para el clculo del ANOVA de un factor
ANLISIS SIMPLE DE LA VARIANZA Origen de la varianza Entre grupos (Between) Grados de libertad ( ) k 1 k 1 Sumas de diferencias cuadrticas (SDC) Diferencias cuadrticas medias (DCM = SDC/ ) k 1 k

Dentro del Grupo (Within)

Total

Finalmente, si la hiptesis nula es cierta, se est en posesin de dos estimaciones insesgadas de la misma cantidad, la varianza poblacional comn. Entonces, sera razonable esperar que estas estimaciones sean muy cercanas la una de la otra. A mayor discrepancia entre ambas, permaneciendo todo lo dems igual, mayor ser

25

la sospecha de que la hiptesis nula no es cierta. El contraste de la hiptesis nula estar basado en el cociente de los dos cuadrados medios, de acuerdo a la ecuacin 1.19 (Boqu y Maroto, 2004). [1.19] Si este cociente se aproxima a 1, no habr duda de que la hiptesis nula de igualdad de medias es cierta. Sin embargo, si la variabilidad entre grupos es grande en comparacin con la variabilidad dentro de los grupos, el cociente antes mencionado 1 ser considerablemente mayor que 1. La hiptesis nula ser rechazada para grandes valores de ese cociente. Un contraste formal se sigue del hecho de que si la hiptesis nula de igualdad de medias fuese cierta, la variable aleatoria correspondiente a 1 seguir una distribucin libertad en el numerador y ( con (k 1) grados de

que las distribuciones poblacionales son normales (Boqu y Maroto, 2004). Un contraste a nivel

k) grados en el denominador, con el supuesto de

de significacin quedar determinado por la regla de si: [1.20]

decisin, de acuerdo a la expresin 1.20. Rechazar

El

se lo determina para distintos grados de libertad y

0,05. Se puede y

decir entonces, si no existe diferencia estadsticamente significativa entre

, la presencia de errores aleatorios ser la causa predominante de la discrepancia entre los valores medios. Si, por el contrario, existe algn error sistemtico, ser mucho mayor que , con lo cual el valor calculado de para el nivel de significacin ser mayor que el valor tabulado

escogido y los grados de libertad mencionados (Boqu y Maroto, 2004). Para hacer claro los principios en los que se apoya el mtodo ANOVA de un factor, se han descrito en este literal los clculos necesarios. Sin embargo, en la prctica, dichos clculos se pueden realizar mediante el uso de herramientas de anlisis de datos que proporciona el programa de hoja de clculo de Microsoft

26

Excel. De igual manera, el clculo de los estadstico en Excel eligiendo la opcin adecuada. 1.1.2.3.6

pueden ser realizados

Conclusiones a partir de los contrastes de significacin

Como ya se ha indicado, un contraste de significacin, por ejemplo, al nivel 0,05 supone un riesgo del 5% de que se rechazar una hiptesis nula incluso aunque sea verdadera. Este tipo de error se le denomina error de Tipo I. el riesgo de tal error se puede reducir al alterar el nivel de significacin del contraste a 0,01 o incluso a 0,001. Sin embargo, ste no es el nico tipo de error posible: es posible tambin mantener una hiptesis nula aun cuando sea falsa. Este es el denominado error tipo II. Para calcular la probabilidad de este tipo de error es necesario postular una alternativa a la hiptesis nula conocida como hiptesis alternativa, (Miller y Miller, 2002).

Para entender se presenta un ejemplo, considrese un producto qumico del cual se piensa que contiene el 3% de fsforo por pesada. Se tiene la impresin de que esta proporcin se ha incrementado y para contrastar esto se ha analizado la composicin empleando un mtodo estndar con una desviacin estndar conocida del 0,036%. Se supone que se toman cuatro medidas y se realiza un contraste de significacin al nivel 3,0% (Mille -r y Miller, 2002). 0,05. Es necesario que dicho contraste sea : de una cola, ya que solo interesa un incremento. La hiptesis nula es:

La lnea continua de la figura 1.3, indica la distribucin muestral de la media si H estndar (es decir, error estndar de la media) muestral cae por encima del valor critico indicado,

fuese verdadera. Esta distribucin muestral tiene una media 3,0 y una desviacin , la hiptesis nula se rechaza. 0,034%. Si la media

Por tanto, la regin sombreada, con rea 0,05, representa la probabilidad de un error de Tipo I. Suponer ahora que se tiene la hiptesis alternativa: 3,05 %. La lnea punteada de la figura 1.3, muestra la distribucin muestral de la media si la hiptesis alternativa fuese verdadera. Incluso si este fuese el caso se aceptar la hiptesis nula si la media muestral cae por debajo de (Miller y Miller, 2002).

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Fig 1.3: Errores de Tipo I y II

(Miller y Miller, 2002)

La probabilidad de este error tipo II se presenta por el rea rayada. El diagrama pone de manifiesto la interdependencia de los dos tipos de error. Por ejemplo, si se cambia el nivel de significacin a de Tipo I, 0,01 para reducir un riesgo de un error aumentar y el riesgo de un error de Tipo II aumentar tambin.

Recprocamente, una disminucin en el riesgo de un error de Tipo II slo puede lograrse a expensas de un incremento en la probabilidad de un error de Tipo I. El nico camino por el que pueden reducirse ambos errores (para una hiptesis alternativa dada) es aumentar el tamao de la muestra (Miller y Miller, 2002). El efecto de incrementa (hasta 9 por ejemplo), se ilustra en la figura 1.4. La . La probabilidad de que una

disminucin resultante en el error tpico de la media producir una disminucin de ambos tipo de error, para un valor dado de hiptesis nula falsa se rechace se denomina la potencia de un contraste. Esto es, la potencia de un contraste es (1 - probabilidad de un error de Tipo II). En el ejemplo expuesto es funcin de la media especificada en la hiptesis alternativa. Esto depende tambin del tamao de muestra, el nivel de significacin del contraste y si el contraste es de una o dos colas. En aquellas circunstancias donde se dispone de dos o ms contrastes para contrastar la misma hiptesis, puede ser til comparar las potencias de los contrastes con el fin de decidir cul es el ms adecuado (Miller y Miller, 2002).

28

Fig 1.4: Errores de Tipo I y II al aumentar el tamao de muestra

(Miller y Miller, 2002)

Los errores de Tipo I y II son tambin relevantes cuando se aplican secuencialmente contrastes de significacin. Un ejemplo de esta situacin es la aplicacin del contraste primer lugar el contraste a la diferencia entre dos medias, despus de utilizar en para decidir si se pueden juntar o no las varianzas de inicial, y

las muestras. Los dos errores de Tipo I y II puede surgir del contraste para el subsiguiente contraste

si ocurre alguno de ellos querr decir que los niveles de significacin establecidos son incorrectos, debido a la forma incorrecta en que el contraste ha sido aplicado (Miller y Miller, 2002).

1.1.2.4

Datos anmalos

Es muy frecuente que las personas que realizan experimentos se enfrenten a la situacin en que uno (o posiblemente ms) de los resultados obtenidos en una serie de medidas difiera del resto de manera inexplicable. Estas medidas se denominan resultados anmalos. En algunos casos, un resultado puede atribuirse a un error humano. El contraste de Dixon (a veces llamado contraste ) es un contraste popular para datos anmalos debido a que el clculo es simple. Para pequeas muestras (tamaos de 3 a 7) el contraste evala una medida sospechosa comparando la diferencia entre ella y la medida ms prxima en tamao, con el intervalo de las medidas. Para usar el contraste de Dixon para un valor anmalo, esto es, para probar : todas las medidas proceden de la misma poblacin, se

29

calcula el estadstico valores crticos de 2002).

| |

de acuerdo a la ecuacin 1.21. Este contraste es vlido 0,05 se pueden encontrar en tablas. Si el valor de

para tamaos de muestras de 3 a 7 y supone que la poblacin es normal. Los para calculado supera el valor crtico, se rechaza el valor sospechoso (Miller y Miller,

[1. 21]

Otro contraste utilizado frecuentemente para datos anmalos es el contraste de Grubbs, que compara la desviacin entre el valor sospechoso y la media muestral, con la desviacin estndar de la muestra. Este contraste es recomendado por ISO preferentemente al de Dixon. Para usar el contraste de Grubbs para un valor anmalo, esto es, para probar ecuacin 1.22 (Miller y Miller, 2002). | Donde | para [1.22] 0,05 se encuentran en : todas las medidas de acuerdo a la proceden de la misma poblacin, se calcula el estadstico

se calcula incluyendo el valor sospechoso. El contraste supone que la

poblacin es normal. Los valores crticos de tablas. Si el valor de

calculado supera al valor crtico, se rechaza la hiptesis de

que el dato sospechoso no es anmalo. Es importante tener en cuenta que para un nivel de significacin del 5% hay todava un 5% de riesgo, o 1 de cada 20, de rechazar incorrectamente el valor sospechoso. Esto puede tener un efecto considerable a la hora de estimar la precisin de un experimento (Miller y Miller, 2002). Cuando las medidas se repiten solo unas pocas veces (lo que es normal en un trabajo analtico), el rechazo de un valor origina una gran variacin sobre la media y sobre la desviacin estndar. En concreto, el hecho de tomar tres medidas y rechazar la que difiere ms de las otras dos debe evitarse. Se puede demostrar que se obtiene una estimacin ms fiable de la media, en promedio, utilizando el valor que est en medio de los tres que utilizando la media de los dos que no fueron rechazados (Miller y Miller, 2002).

30

1.1.2.5

Grficos de Control

Como ya se ha mencionado, uno de los principales parmetros a verificar en la validacin de un mtodo analtico es la exactitud de los resultados proporcionados por dicho mtodo. La exactitud, suma de la veracidad y la precisin, se comprueba asegurando la trazabilidad de los resultados proporcionados por el mtodo analtico a una referencia. Por lo tanto, mediante la comparacin a una referencia se puede saber si existe trazabilidad a la referencia utilizada en el momento de la comparacin. Pero la comparacin a una referencia, como por ejemplo los materiales de referencia certificados (MRC) o los ejercicios interlaboratorio, no se efecta de una forma rutinaria en el laboratorio, y pueden pasar meses entre la comparacin entre dos referencias. Por lo tanto, los laboratorios de anlisis necesitan algn tipo de herramienta para asegurar sistemticamente la trazabilidad de los resultados que proporcionan. Una de las herramientas ms utilizadas son los grficos (o cartas) de control (Riu, 2005). 1.1.2.5.1 Construccin de los Grficos de Control Los grficos para el control de productos industriales fueron desarrollados inicialmente por W. Shewhart en 1931, con el principal objetivo de investigar si un proceso se encuentra bajo control estadstico. El elemento clave en los grficos de control es la muestra de control, que servir para construir el grfico y monitorizar el estado del procedimiento analtico. Esta muestra, que tiene que ser estable con el tiempo, puede ser: una sustancia patrn, una muestra sinttica adicionada, un material de referencia, un material de referencia certificado o una muestra real. En la mayora de estos tipos de muestras el valor de la concentracin o propiedad que se desea monitorizar ya viene dado (en las sustancias patrn, materiales de referencia o materiales de referencia certificados), o bien se lo conoce de una forma muy exacta (en el caso de muestras sintticas fortificadas). Pero en el tipo de muestras de control ms utilizado (una muestra real), se desconoce este valor de la concentracin o propiedad a controlar. En este tipo de muestras la estimacin de la concentracin o propiedad a monitorizar se debe llevar a cabo analizando la muestra de control

31

con el mtodo analtico una vez que se ha acabado de verificar la trazabilidad del mismo (Riu, 2005). El fundamento de los grficos de control se basa en la asuncin de la normalidad de los resultados de medida: cuando se lleva a cabo algn proceso (por ejemplo, un mtodo de anlisis) de forma sistemtica, es decir, bajo las mismas fuentes de influencia o variacin, el proceso se ver afectado por errores aleatorios que conducirn a una distribucin normal de los resultados. Esta afirmacin es una consecuencia del teorema del lmite central. Se dir que el mtodo analtico est bajo control si los resultados obtenidos con este mtodo siguen las caractersticas de una distribucin normal (Riu, 2005). En la figura 1.5 (izquierda) se puede observar que aproximadamente el 67% de los resultados han de encontrarse dentro del intervalo: valor de la muestra de control muestra de control con el procedimiento que se desea monitorizar), 1 (donde s es la desviacin estndar asociada a los anlisis de la 2 y aproximadamente el 99% de los

aproximadamente el 95% de los resultados han de encontrarse dentro del intervalo: valor de la muestra de control 3 (Riu, 2005). resultados han de encontrarse dentro del intervalo: valor de la muestra de control

Cuando los resultados de los anlisis de la muestra de control a lo largo del tiempo se encuentran dentro de los lmites aceptados, se dice que el sistema se encuentra bajo control estadstico. Cuando se encuentran puntos fuera de los lmites especificados, o se encuentran tendencias, se dice que el sistema se encuentra fuera de control. En la construccin de un grfico de control se pueden distinguir las siguientes etapas: 1.1.2.5.1.1 Etapa de aprendizaje

En esta etapa se obtienen los resultados iniciales con la muestra de control. En el caso de utilizar una muestra real, se debera comprobar la normalidad y la presencia de resultados discrepantes (anmalos) y su eliminacin. Con los resultados iniciales de la muestra de control se establece el valor de la lnea central. Este valor debera obtenerse con un mnimo de 15- 30 anlisis de la

32

muestra de control. Los diferentes lmites suelen establecerse a una distancia del valor central de control). Estas lneas pueden observarse en la figura 1.5 (derecha) (Riu, 2005). 2 (lnea de aviso), y a una distancia del valor central 3 (lnea

Fig 1.5: Lneas de aviso y de control en un grfico de control (parte derecha), y su relacin con la distribucin de la muestra de control
(Riu, 2005)

Los lmites de aviso y de control situados a unas distancias de

respectivamente, pueden construirse utilizando los valores 2 y 3 cuando el valor promedio de la muestra de control ha sido encontrado con un nmero suficientemente grande de repeticiones (alrededor de 30). En este caso se asume que se conocen los valores reales de los parmetros (promedio y desviacin estndar). Si se tienen menos repeticiones, se aconseja considerar que los valores reales de estos parmetros son desconocidos, y se deben efectuar correcciones sobre la asuncin de distribucin normal. Esto implica utilizar valores tabulados en lugar de los valores 2 y 3. Normalmente un laboratorio empieza considerando como desconocidos los valores de los parmetros, hasta que se han recogido suficientes datos como para poder considerar estos parmetros como conocidos (Riu, 2005). 1.1.2.5.1.2 Etapa de control

En esta etapa se representan frente al tiempo los diversos resultados de la muestra de control con el objetivo de detectar tendencias y situaciones fuera de control. El grfico de control representado en la Figura 1.5, se denomina un grfico de valores individuales, y en ella se efecta un solo replicado de la

33

muestra de control cada vez que sta se analiza. El grfico de valores individuales es quiz el ms empleado, pero hay otras variaciones: Grfico de promedios.- cada vez que se analiza la muestra de control se efectan rplicas (siempre el mismo nmero de rplicas), y se representa 3 , siempre que se el valor medio de estas rplicas. En este caso, los lmites de aviso y de 2 y

control se encuentran respectivamente a

consideren como conocidos los parmetros del valor promedio y de la construccin de los lmites de aviso y control que en el grfico de valores individuales cuando se tienen pocos datos y no se pueden considerar los parmetros promedio y desviacin estndar como verdaderos. Grfico de intervalos mviles.- se mide el intervalo entre un par consecutivo

desviacin estndar. En estos grficos se aplica el mismo comentario para la

de valores en un grfico de valores individuales. De esta manera se pueden controlar saltos en el procedimiento analtico. Grfico de intervalos.- cuando se establece el control de los promedios, su distribucin puede medirse por el intervalo (valor mximo valor mnimo) de los valores utilizados para cada promedio, y controlar as esta dispersin (Riu, 2005). Existen otros ms complejos, como el grfico de control de sumas acumuladas (CUSUM, el cual es ms sensible y rpido para la deteccin de derivas) o el grfico de control de medias mviles exponencialmente ponderadas (EWMA, el cual al dar ms peso al punto ms actual representa mejor el estado del procedimiento) (Riu, 2005). 1.1.2.5.2 Uso de los grficos de control

Los grficos de intervalos son especialmente efectivos para detectar dispersiones anmalas o saltos, por lo que se recomienda que se utilicen tanto los grficos de valores individuales como los grficos de promedios conjuntamente con los grficos de intervalos, ya que este ltimo tipo de grficos son efectivos para controlar desviaciones a partir del valor promedio, tendencias y modelos anmalos. Como se puede observar, los dos tipos de grficos

34

(intervalos/intervalos

mviles

promedios/valores

individuales),

son

complementarios entre s (Riu, 2005). La confirmacin sobre si el sistema se encuentra bajo control estadstico se obtiene por lo tanto, mediante la observacin visual del grfico de control: si los puntos representados en el grfico se encuentran distribuidos de una forma aproximadamente aleatoria, se dice que el sistema se encuentra bajo control estadstico. Por ejemplo, en los grficos de promedios o valores individuales, la probabilidad de que un punto caiga fuera de los lmites de aviso es aproximadamente del 5%, pero la probabilidad de que dos puntos consecutivos, o dos de tres puntos consecutivos caigan fuera de los lmites de aviso es muy baja. Por lo tanto, cuando esto ocurre, tenemos una indicacin de que el procedimiento debera ser inspeccionado. La figura 1.6 muestra algunos efectos que los grficos de control pueden ayudar a detectar: Aparicin de un sesgo: cuando una serie consecutiva de valores se distribuye a un lado de la lnea central, pero sin variar la precisin del procedimiento. Esto provoca un cambio en el valor promedio, tal como se puede observar en la figura 1.6 a. Aparicin de una progresiva tendencia a obtener valores crecientes o decrecientes: deriva, como se observa en la figura 1.6 b. Cambios cclicos o peridicos, de acuerdo a la figura 1.6 c (Riu, 2005).

Fig 1.6: Cambios en el procedimiento analtico que se pueden detectar con los grficos de control
(Riu, 2005)

35

Cuando los grficos de control se utilizan de esta manera, son muy adecuados para detectar sesgos muy significativos, o un incremento en las fluctuaciones aleatorias, pero no son muy efectivos para detectar pequeos sesgos o derivas lentas del procedimiento. Existen una serie de reglas muy conocidas para evaluar si un sistema se encuentra bajo control estadstico utilizando los grficos de promedios o de valores individuales. Estas reglas son las reglas de la Western Electric, y para utilizarlas es conveniente dividir el grfico de control en tres zonas: Zona central: de Zona de aviso: de 1 a 1 a 1 2 y de 1 a 2

Zona de control: de

2 a

3 y de

2 a

3 (Riu, 2005).

Se considera que el procedimiento analtico se encuentra fuera de control, o que ha cambiado significativamente, cuando hay: 1 punto ms all de la zona de control: se estima que la probabilidad de que pase esto es suficientemente baja (de hecho es inferior al 0,3%) como para sospechar que el sistema est fuera de control. de 3 puntos consecutivos en la zona de control: similar al caso anterior, ya que la probabilidad de que esto suceda es inferior al 0,0625%. 6 puntos consecutivos en lnea ascendente o descendente: se considera que el sistema sigue una tendencia no aleatoria. 9 puntos consecutivos a un lado de la lnea central (ya sea por encima de ella o por debajo): este caso suele constituir un desplazamiento del promedio o del valor central, generalmente debido a un cambio significativo en el sistema. 14 puntos consecutivos alternando arriba o abajo: fenmeno cclico o series temporales. 15 puntos consecutivos en la zona de control: esto implica una mejora de la precisin y una menor desviacin estndar asociada. Se tendran que volver a recalcular los lmites de aviso y de control. 4 de 5 puntos consecutivos en la zona de aviso o ms all. 8 puntos consecutivos por encima y por debajo de la zona de control: 2 poblaciones diferentes (Riu, 2005).

36

1.1.3 1.1.3.1

INCERTIDUMBRE Definicin

La incertidumbre de medicin (frecuentemente denominada en forma abreviada incertidumbre) es un parmetro que constituye un indicador comparativo de la calidad de la medicin, a la vez que permite la obtencin de un intervalo de confianza aproximado para el valor verdadero del mensurando. La incertidumbre de la medicin es una forma de expresar el hecho de que para un mensurando y su mensurando y su resultado de medicin dados, no hay un solo valor, sino un nmero infinito de valores dispersos alrededor de resultado, que son consistentes con todas las observaciones datos y conocimientos que se tengan del mundo fsico, y que con distintos grados de credibilidad pueden ser atribuidos al mensurando. El Vocabulario Internacional de Metrologa define a la incertidumbre como, parmetro asociado al resultado de una medicin, que caracteriza la dispersin de los valores que podran ser razonablemente atribuidos al mensurando [CEM, 2008; Schmid y Lazos, 2004].

1.1.3.2 1.1.3.2.1

Incertidumbre y otros conceptos relacionados Incertidumbre, exactitud y trazabilidad

El trmino exactitud, tal como se ha indicado, implica una combinacin de componentes aleatorios y un error sistemtico o sesgo. Por tanto, la exactitud se expresa como suma de dos trminos: la precisin (que tiene en cuenta la variabilidad de los resultados) y la veracidad (es decir, que los resultados no tengan un error sistemtico). En la prctica, la veracidad de los resultados se comprueba utilizando referencias adecuadas: materiales de referencia certificados (MRC), mtodos de referencia, etc. Es aqu, donde se une el concepto de veracidad con el de trazabilidad y, por tanto, el de exactitud con el de trazabilidad (Boqu et al., 2001). La trazabilidad no se puede establecer si no se conoce la incertidumbre asociada a cada uno de los pasos de la cadena ininterrumpida de comparaciones.

37

Asimismo, tampoco tiene sentido calcular la incertidumbre si previamente no se ha verificado la trazabilidad del mtodo analtico. Si no se ha verificado la trazabilidad del mtodo, no se puede asegurar que se hayan corregido o tenido en cuenta todos los posibles errores sistemticos del mtodo y, por tanto, es imposible asegurar que el intervalo de valores contenga al valor considerado verdadero. Por tanto, se puede ver que incertidumbre y trazabilidad son conceptos muy relacionados entre s (Maroto et al., 2001). 1.1.3.2.2 Incertidumbre y precisin

Segn lo indicado en el concepto de precisin, esta se utiliza para definir la repetibilidad de medida, la precisin intermedia y la reproducibilidad, siendo la precisin intermedia la de mayor importancia ya que proporciona una idea de la variabilidad que pueden tener los resultados dentro de un laboratorio. Es fcil pensar entonces, que la precisin intermedia y la incertidumbre estn relacionadas entre s, ya que la incertidumbre debe considerar todas las fuentes de variabilidad que afecten a los resultados. Por tanto, se puede afirmar que la precisin intermedia es un componente muy importante de la incertidumbre. Sin embargo, la incertidumbre siempre es mayor que la precisin intermedia, ya que la incertidumbre tambin debe incluir como mnimo un trmino asociado a la verificacin de la trazabilidad. Adems, tambin puede ser necesario incluir en la incertidumbre otros trminos asociados, por ejemplo, a la heterogeneidad de la muestra o a tratamientos previos realizados sobre sta. Es aqu, donde se demuestra la diferencia ms importante entre precisin e incertidumbre, mientras la trazabilidad est muy relacionada con la incertidumbre, la precisin no lo est. Es decir, la precisin de un mtodo puede calcularse sin verificar la trazabilidad. Sin embargo, no tiene sentido calcular la incertidumbre si previamente no hemos verificado la trazabilidad del mtodo. En la figura 1.7 se muestran los resultados de analizar un material de referencia certificado (MRC) cuyo valor de referencia es para ilustrar la diferencia entre la precisin y la incertidumbre (Boqu et

al.,2001).

38

Fig 1.7: Diferencia entre precisin e incertumbre

(Boqu et al., 2001)

En los casos 1 y 2, el MRC se ha analizado con el mismo mtodo analtico (dos ensayos independientes con el mismo mtodo) mientras que en el caso 3 se ha utilizado otro mtodo ms preciso para analizar el MRC. En todos los casos se puede observar, que la incertidumbre es mayor que el intervalo de confianza asociado a la precisin. Adems, tambin se observa que el intervalo asociado a la incertidumbre contiene siempre al valor de referencia mientras que el intervalo asociado a la precisin slo lo contiene en uno de los casos. Esto es debido a que la precisin no considera el trmino asociado a la verificacin de la trazabilidad mientras que la incertidumbre s lo considera. Por ltimo, el caso 3 muestra que, normalmente, cuanto ms preciso es el mtodo, menor es la incertidumbre de los resultados (Boqu et al., 2001).

39

1.1.3.2.3

Incertidumbre y error

En general todo procedimiento de medicin tiene imperfecciones que dan lugar a un error en el resultado de la medicin, lo que provoca que el resultado sea slo una aproximacin o estimado del valor del mensurando. Es importante distinguir entre error e incertidumbre. El Vocabulario de Metrologa Internacional define el error como, la diferencia entre un valor medido de una magnitud y un valor verdadero. Es decir, que el error es un simple valor. En principio el valor de un error conocido puede ser aplicado como una correccin al resultado de una medicin. El valor verdadero del mensurando es aquel que caracterizara idealmente al resultado de la medicin, o sea, el que resultara de una medicin perfecta. Por tanto, el error es un concepto idealizado y los errores no pueden ser conocidos exactamente. La incertidumbre por otro lado, toma la forma de un rango, y, si es estimada para un procedimiento de medicin, puede aplicarse a todas las determinaciones descritas en dicho procedimiento. En general, el valor de la incertidumbre no puede utilizarse para corregir el resultado de una medicin (Boqu et al., 2001). Para ilustrar la diferencia, puede darse el caso de que un resultado tenga un error despreciable ya que, por casualidad, este resultado puede estar muy prximo al valor considerado verdadero. Sin embargo, la incertidumbre de este resultado puede ser muy elevada simplemente porque el analista est inseguro del resultado que ha obtenido debido al gran nmero de fuentes de error que puede tener el mtodo analtico. Por otro lado, el error cometido al analizar varias veces una muestra con un mtodo analtico no es siempre el mismo ya que los errores aleatorios hacen que el error cometido en cada uno de los anlisis sea diferente. Sin embargo, la incertidumbre de todos los resultados obtenidos al analizar esa muestra es siempre la misma ya que se utiliza el mismo mtodo analtico. Por tanto, si la incertidumbre se ha calculado para un mtodo analtico y un tipo de muestra determinado, todas las muestras de ese tipo que se analicen con ese mtodo tendrn la misma incertidumbre pero no tienen por qu tener el mismo error asociado (Boqu et al.,2001).

40

Las diferencias entre error e incertidumbre se muestran en la Figura 1.7. Se puede observar que el error cometido en el caso 1 es mucho mayor que el cometido en el caso 2 pero que la incertidumbre asociada a analizar el MRC en ambos casos es la misma porque hemos utilizado el mismo mtodo analtico (Boqu et al., 2001). 1.1.3.2.4 Incertidumbre y tolerancia

La incertidumbre juega un papel muy importante al momento de afirmar, si un producto cumple o no con unas determinadas especificaciones. Para ello, se debe comprobar si el resultado analtico est dentro o no de una tolerancia o intervalo de valores definido en las especificaciones. En la Figura 1.8, se muestran cuatro situaciones que pueden ocurrir cuando se quiere comprobar si el resultado (estimacin + incertidumbre asociada) est dentro o no de la tolerancia (Boqu et al., 2001).

Fig 1.8: Relacin de la incertidumbre con la tolerancia

(Boqu et al., 2001).

En el caso 1 de la figura 1.8, el producto es vlido ya que tanto la estimacin del valor como su incertidumbre estn dentro de la tolerancia. En el caso 2, el producto es claramente no vlido porque ni la estimacin ni su incertidumbre estn dentro de la tolerancia. Pero, en el caso 3, la estimacin del valor est fuera de la tolerancia pero hay una parte de la incertidumbre que est dentro de la tolerancia. Por tanto, se dira que el resultado es dudoso. En el caso 4 el resultado

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tambin se lo calificara de dudoso, ya que, si bien la estimacin est dentro de la tolerancia, hay parte de la incertidumbre que cae fuera de la tolerancia. Normalmente, en estos dos ltimos casos se rechazara el producto. (Boqu et al., 2001).

1.1.3.3

Clculo de la Incertidumbre de medida

El objetivo de una medicin es determinar el valor de la magnitud que se desea medir, denominada mensurado. Durante la realizacin de una medicin intervienen una serie de factores que determinan su resultado. Adems del propio mensurando, el resultado de la medicin est afectado por las denominadas magnitudes de influencia. En un sentido amplio se considera que las magnitudes de influencia incluyen no solo las que se refieren a las condiciones ambientales, como son la temperatura, la presin baromtrica y la humedad, sino tambin fenmenos tales como las fluctuaciones breves de los instrumentos de medicin, valores asociados con patrones de medicin y datos de referencia de los cuales puede depender el resultado de la medicin (Lazos y Schmid, 2004). Una medicin comienza con una especificacin apropiada del mensurando, del mtodo de medicin y de los procedimientos de medicin. El mtodo de medicin es la secuencia lgica de operaciones, generalmente descritas, usada en la ejecucin de las mediciones de acuerdo con un principio de medicin determinado. El procedimiento de medicin es el conjunto de operaciones, descritas de forma especfica, utilizadas en la ejecucin de mediciones particulares, de acuerdo a un mtodo de medicin determinado. El procedimiento de medicin se registra en un documento y contiene un nivel suficiente de detalle, que le permite a un operador realizar la medicin sin informacin adicional. El principio de medicin es el fundamento cientfico del mtodo de medicin. El conocimiento del principio de medicin permite al metrlogo dominar la medicin, esto es, modificarla, disear otra, evaluar su conveniencia, etc., adems es indispensable para estimar la incertidumbre de la medicin (Lazos y Schmid, 2004).

42

El principio, el mtodo y el procedimiento de medicin son determinantes en el valor de la incertidumbre de la medicin. Un conocimiento insuficiente de ellos muy probablemente conducir a una estimacin equivocada, o incompleta en el mejor de los casos, de la incertidumbre de la medicin (Lazos y Schmid, 2004). 1.1.3.3.1 Especificacin del mensurando

Modelo fsico Un modelo fsico de la medicin consiste en el conjunto de suposiciones sobre el propio mensurando y las variables fsicas o qumicas relevantes para la medicin. Estas suposiciones usualmente incluyen: Relaciones fenomenolgicas entre variables; Consideraciones sobre el fenmeno como conservacin de cantidades, comportamiento temporal, comportamiento espacial, simetras; Consideraciones sobre propiedades de la sustancia como homogeneidad e isotropa. Una medicin fsica, por simple que sea, tiene asociado un modelo que slo aproxima el proceso real (Lazos y Schmid, 2004). Modelo matemtico El modelo fsico se representa por un modelo descrito con lenguaje matemtico. El modelo matemtico supone aproximaciones originadas por la representacin imperfecta o limitada de las relaciones entre las variables involucradas. Considerando a la medicin como un proceso, se identifican magnitudes de entrada denotadas por el conjunto , expresin en la cual el ndice toma valores entre 1 y el nmero de magnitudes de entrada . La relacin entre las

representa como una funcin como se observa en la ecuacin 1.23, representada por una tabla de valores correspondientes, una grfica o una ecuacin. , , [1.23]

magnitudes de entrada y el mensurando Y como la magnitud de salida se

43

Se denota con

al mejor estimado de las magnitudes de entrada

. Los valores

de las magnitudes de entrada pueden ser resultados de mediciones recientes realizadas por el usuario o tomados de fuentes como certificados, literatura, manuales, etc. El mejor estimado calcular el valor de la funcin de entrada , , del valor del mensurando es el resultado de evaluada en el mejor estimado de cada magnitud

, como se observa en la ecuacin 1.24 [1.24] como el promedio de

En algunas ocasiones se toma el mejor estimado de varios valores valores 1.1.3.3.2

del mensurando, obtenidos a partir de diversos conjuntos de

de las magnitudes de entrada (Lazos y Schmid, 2004). Identificacin de las fuentes de incertidumbre

Una vez determinados el mensurando, el principio, el mtodo y el procedimiento de medicin, se identifican las posibles fuentes de incertidumbre. stas provienen de los diversos factores involucrados en la medicin, como por ejemplo: La incertidumbre propia de la calibracin de los instrumentos utilizados en los ensayos La incertidumbre del patrn o del material de referencia La repetibilidad de las lecturas La reproducibilidad de las mediciones por cambio de observadores, instrumentos u otros elementos Caractersticas del propio instrumento, como resolucin, histresis, deriva, etc. Variaciones de las condiciones ambientales La definicin del propio mensurando El modelo particular de la medicin Variaciones en las magnitudes de influencia.

El diagrama de causa-efecto, es una forma muy conveniente de listar las fuentes de incertidumbre, mostrando cmo se relaciona cada una e indicando su

44

influencia en la incertidumbre del resultado. Adems, ayuda a evitar que se dupliquen las fuentes al considerarlas nuevamente (Lazos y Schmid, 2004). 1.1.3.3.3 Cuantificacin de las fuentes de incertidumbre

Una vez que han sido identificadas las fuentes de incertidumbre, para su estimacin puede ser necesario tomar cada fuente de incertidumbre y tratarla separadamente para obtener la contribucin de cada fuente. Cada una de las contribuciones separadas a la incertidumbre es referida como una componente de incertidumbre. Se distinguen dos mtodos principales para cuantificar las fuentes de incertidumbre: El Mtodo de Evaluacin Tipo A, basado en un anlisis estadstico de una serie de mediciones, y el Mtodo de Evaluacin Tipo B, que comprende todas las dems maneras de estimar la incertidumbre (Lazos y Schmid, 2004). Es importante mencionar que esta clasificacin, no significa que exista alguna diferencia en la naturaleza de los componentes que resultan de cada uno de los dos tipos de evaluacin, puesto que ambos tipos estn basados en distribuciones de probabilidad. La nica diferencia es que en una evaluacin tipo A, se estima esta distribucin basndose en mediciones repetidas obtenidas del mismo proceso de medicin; mientras, en el caso de tipo B, se supone una distribucin con base en experiencia o informacin externa al analista (Lazos y Schmid, 2004). Evaluacin tipo A Una incertidumbre estndar de tipo A se puede obtener por cualquier mtodo estadstico que ofrezca un estimado vlido de la dispersin de los datos. Primer caso.- La incertidumbre de una magnitud de entrada en la dispersin de los resultados individuales. Si mediciones independientes, resultando en valores de para el valor de la ecuacin 1.25. , obtenida a partir

de observaciones repetidas bajo condiciones de repetibilidad, se estima con base , se determina mediante , , el mejor estimado

es la media de los resultados individuales, de acuerdo a

45 . La dispersin de los resultados de la medicin entrada la ecuacin 1.26. . La desviacin estndar experimental de la media, para la cuantificacin de la incertidumbre estndar, 1.27.

[1 25] , , , para la magnitud de , de acuerdo a

se expresa por su desviacin estndar experimental

[1 26] , es la estadstica utilizada de , segn la ecuacin

[1.27]

Donde: Es la llamada incertidumbre estndar tipo A As, la incertidumbre estndar de . resulta finalmente de la ecuacin 1.28 [1.28] depende de las condiciones y exigencias

El nmero ideal de las repeticiones

(meta para la incertidumbre) de cada medicin especfica. No se puede dar una recomendacin general, sin embargo se pueden tener presente las siguientes consideraciones: Aumentar el nmero de repeticiones resulta en una reduccin de la incertidumbre por repetibilidad, la cual es proporcional a 1 . -

Un nmero grande de repeticiones aumenta el tiempo de medicin, que puede ser contraproducente, si las condiciones ambientales u otras magnitudes de entrada no se mantienen constantes en este tiempo.

46

En pocos casos se recomienda o se requiere calibraciones de alta exactitud.

mayor de 10. Por ejemplo

cuando se caracterizan instrumentos o patrones, o se hacen mediciones o Para determinar el impacto que tiene en la incertidumbre expandida puede

estimarse su influencia en el nmero de grados efectivos de libertad, de ser aplicable este concepto (Lazos y Schmid, 2004). Segundo caso.- Es la evaluacin de la incertidumbre de la medicin mediante el anlisis estadstico de los datos obtenidos de un diseo experimental. Este es el caso, ms complejo que el primero, del llamado Anlisis de la Varianza (ANOVA), que si bien persigue otros objetivos tambin permite las evaluaciones Tipo A de las componentes de la incertidumbre, mediante el diseo de secuencias anidadas de mediciones del mensurando variando los valores de las magnitudes de entrada de las que depende. Existen diferentes modelos incluidos bajo el nombre general de ANOVA y son utilizados exitosamente en muchas situaciones de mediciones encontradas en la prctica, sin embargo, es poco probable lograr la variacin de todas las magnitudes de entrada debido a las limitaciones en tiempo y recursos, por lo que normalmente, se evalan solo algunas componentes de incertidumbre utilizando estos mtodos (ECA, 2004). Tercer caso.- Este caso es el ajuste por el mtodo de los mnimos cuadrados de una curva a partir de datos experimentales. La varianza y la

incertidumbre estndar de los parmetros que caracterizan la curva y de cualquier punto predicho, se calculan tambin mediante los procedimientos estadsticos asociados a las tcnicas ANOVA (ECA, 2004). Cuarto caso.- Es la incertidumbre estndar mancomunada o histrica. En el caso de mediciones que se realicen bajo control estadstico en el cual est determinada una desviacin estndar del comportamiento de las mediciones mancomunadas o histricas ( ), como incertidumbre de la medicin realizada podra utilizare la siguiente expresin:

[1.29]

47

Donde

es el nmero de mediciones repetidas para evaluar

, segn la ecuacin

1.25, mientras

se determin por un nmero distinto de mediciones. La

incertidumbre estndar mancomunada tiene una especial importancia en los niveles ms bajos de la cadena de calibracin, donde los patrones de referencia constituyen prcticamente valores verdaderos al ser calibrados en Laboratorios Nacionales o Primarios, de manera que la incertidumbre del resultado de la calibracin comprende una sola componente y es la incertidumbre estndar de tipo A calculada a partir de la desviacin estndar mancomunada del procedimiento de medicin Evaluacin tipo B En una evaluacin tipo B de la incertidumbre de una magnitud de entrada se usa informacin externa un obtenida por experiencia. Las fuentes de informacin pueden ser: Certificados de calibracin. Manuales del instrumento de medicin, especificaciones del instrumento. Normas o literatura. Valores de mediciones anteriores. Conocimiento sobre las caractersticas o el comportamiento del sistema de medicin (Lazos y Schmid, 2004). El uso adecuado del conjunto de informacin disponible para una evaluacin tipo B de la incertidumbre de la medicin, depende de la experiencia y el conocimiento del evaluador que se afianzan con la prctica. Se debe reconocer que una evaluacin tipo B de la incertidumbre estndar puede ser tan confiable como una de tipo A, sobre todo cuando el nmero de observaciones es pequeo (ECA, 2004). Distribuciones de probabilidad La cuantificacin de una fuente de incertidumbre incluye la asignacin de un valor y la determinacin de la distribucin a la cual se refiere este valor. Las distribuciones que aparecen ms frecuentemente son: (ECA, 2004).

48

a) Distribucin normal Los resultados de una medicin repetida afectada por magnitudes de influencia que varan aleatoriamente, generalmente siguen en buena aproximacin una distribucin normal. En particular, la distribucin de la media de una serie de mediciones repetidas se aproxima a una normal independientemente de la distribucin de las lecturas individuales. Tambin la incertidumbre indicada en certificados de calibracin se refiere generalmente a una distribucin normal (Lazos y Schmid, 2004). b) Distribucin rectangular En una distribucin rectangular cada valor en un intervalo dado tiene la misma probabilidad, o sea la funcin de densidad de probabilidad es constante en este intervalo. Ejemplos tpicos son la resolucin de un instrumento digital o la informacin tcnica sobre tolerancias de un instrumento. En general, cuando exclusivamente hay conocimiento de los lmites superior e inferior del intervalo de variabilidad de la magnitud de entrada, lo ms conservador es suponer una distribucin rectangular (Lazos y Schmid, 2004). c) Distribucin triangular: Si adems del conocimiento de los lmites superior e inferior hay evidencia de que la probabilidad es ms alta para valores en el centro del intervalo y se reduce hacia los lmites, puede ser ms adecuado basar la estimacin de la incertidumbre en una distribucin triangular (Lazos y Schmid, 2004). 1.1.3.3.4 Determinacin de las incertidumbres estndar

Con el fin de combinar contribuciones de la incertidumbre que tienen distribuciones diferentes, es necesario representar los valores de las incertidumbres originales como incertidumbres estndar. Para ello se determina la desviacin estndar de la distribucin asignada a cada fuente.

49

a) Distribucin normal La desviacin estndar experimental de la media calculada a partir de los resultados de una medicin repetida segn la ecuacin 1.26 ya representa la incertidumbre estndar. Cuando se dispone de valores de una incertidumbre expandida y la distribucin del mensurando es o se supone normal, como los entre el factor presentados por ejemplo en certificados de calibracin, se divide dado de acuerdo a la ecuacin 1.30 (Lazos y Schmid, 2004). [1.30] En la figura 1.9, se resumen las caractersticas de la distribucin normal.

de cobertura , obtenido ya sea directamente o a partir de un nivel de confianza

Fig 1.9: Caractersticas de la Distribucin Normal

(Eurachem, 2000)

b) Distribucin rectangular Si la magnitud de entrada superior y el lmite inferior la ecuacin 1.31. [1.31] La incertidumbre estndar se calcula por la ecuacin 1.32 tiene una distribucin rectangular con el lmite , el mejor estimado del valor de est dado por

50

[1.32] , es decir,

Si los lmites superior e inferior son simtricos con respecto a la ecuacin 1.33.

2 , entonces, la incertidumbre estndar de

se calcula de acuerdo a

[1.33]

Una aplicacin tpica es la resolucin de un instrumento digital. Tambin la incertidumbre relacionada con el nmero finito de cifras significativas de datos tomados de la literatura puede ser tratada con esta distribucin (siempre y cuando no haya indicios que la incertidumbre en realidad es mayor que la incertidumbre relacionada con la ltima cifra significativa). Si se aplica a la resolucin o a datos tomados de la literatura, corresponde al ltimo dgito significativo o a la ltima cifra significativa respectivamente (Lazos y Schmid, 2004). En la figura 1.10, se resumen las caractersticas de la distribucin rectangular.

Fig 1.10: Caractersticas de la Distribucin Rectangular

(Eurachem, 2000)

c) Distribucin triangular Como en una distribucin rectangular, para una magnitud de entrada una distribucin triangular con los lmites de est dado por la ecuacin 1.31. y que tiene

, el mejor estimado para el valor

51

[1.31] La incertidumbre estndar se calcula en este caso por la ecuacin 1.34.

[1.34] , es decir,

Si los lmites superior e inferior son simtricos con respecto a la ecuacin 1.35 (Lazos y Schmid, 2004)

2 , entonces, la incertidumbre estndar de

se calcula de acuerdo a

[1.35]

En la figura 1.11, se resumen las caractersticas de la distribucin triangular.

Fig 1.11: Caractersticas de la Distribucin Triangular

(Eurachem, 2000)

1.1.3.3.5

Combinacin (Incertidumbre Estndar Combinada

El resultado de la combinacin de las contribuciones de todas las fuentes es la incertidumbre estndar combinada . La contribucin de cada fuente a de la la incertidumbre combinada depende de la incertidumbre estndar

propia fuente y del impacto de la fuente sobre el mensurando. Es posible encontrar que una pequea variacin de alguna de las magnitudes de influencia tenga un impacto importante en el mensurando, y viceversa. Se determina

52

por el producto de

y su coeficiente de sensibilidad

(o factor de

sensibilidad) de acuerdo a la ecuacin 1.36. [1.36]

El coeficiente de sensibilidad describe qu tan sensible es el mensurando con respecto a variaciones de la magnitud de entrada correspondiente. Si el modelo matemtico para el mensurando magnitud de entrada a coeficiente de sensibilidad suficientemente bien mediante una relacin funcional, el se calcula por la derivada parcial de con respecto , ,, describe la influencia de la

, de acuerdo a la ecuacin 1.37 (Lazos y Schmid, 2004).

, ,

[1.37]

Propagacin de la incertidumbre para magnitudes de entrada no correlacionadas En el caso de magnitudes de entrada no correlacionadas, la incertidumbre combinada se calcula por la suma geomtrica de las contribuciones particulares, de acuerdo a la ecuacin 1.38. [1 38]

Considerando las ecuaciones 1.36 y 1.37 resulta finalmente la ecuacin 1.39

[1 39]

La regla presentada en la ecuacin 1.39 es llamada ley de propagacin de incertidumbre. Cuando se dispone de la relacin funcional entre y se aplica la ltima expresin en esta ecuacin. La ley de propagacin de incertidumbre se debe aplicar exclusivamente para combinar incertidumbres estndar. De ninguna manera se debe utilizar para combinar intervalos de confianza [JCGM, 2008; Schmid y Lazos, 2004].

53

Magnitudes de entrada relacionadas con ms de una fuente de incertidumbre En la mayora de los casos una magnitud de entrada es afectada por varias

fuentes de incertidumbre, que pueden ser por ejemplo la resolucin del instrumento, la dispersin de datos obtenidas por mediciones repetidas y la incertidumbre de la calibracin del instrumento. En este caso hay dos maneras equivalentes de calcular la incertidumbre combinada. a) Como primera alternativa, se calcula la incertidumbre total (combinada) relacionada con cada magnitud de entrada por la suma geomtrica de las incertidumbres individuales, de acuerdo a la ecuacin 1.40. donde nmero [1.40] es la incertidumbre estndar de la fuente de incertidumbre de la fuentes relacionadas con la magnitud de entrada en la ecuacin 1.39. .

Despus se introducen los valores de

b) Si uno est interesado en ver el efecto particular que tiene cada una de las fuentes en la incertidumbre combinada de entrada , cada fuente puede entrar individualmente en la ecuacin 1.39, sustituyendo el nmero de magnitudes en la suma por el nmero total de fuentes de incertidumbre. es igual para todas las , Cabe mencionar que el coeficiente de sensibilidad de acuerdo a la ecuacin 1.41.

fuentes de incertidumbre relacionadas con la misma magnitud de entrada

[1.41] es cero o cuando la funcin no admite

Cuando el coeficiente de sensibilidad intervalo

una representacin lineal adecuada (nicamente con la primera derivada) en el es conveniente e indispensable considerar trminos de segundo

54

orden (que dependen de las segundas derivadas) [CEM, 2008; Lazos y Schmid, 2004]. Clculo con incertidumbres relativas Si el modelo matemtico se compone de productos de las magnitudes de entrada , de acuerdo a la ecuacin 1.42. ,, donde es una constante y los exponentes [1 42] son constantes reales

(positivas o negativas), el clculo (numrico) de la incertidumbre combinada se facilita utilizando incertidumbres relativas. Los coeficientes de sensibilidad en este caso son , y la ley de propagacin de incertidumbre representada por la
,

ecuacin 1.39 para calcular la incertidumbre combinada relativa simplifica de acuerdo a la ecuacin 1.43.
,

se

[1.43] son +1 o -1, o sea

Un caso particular muy comn es que todos los exponentes

es un producto o cociente de las magnitudes de entrada. Puesto que en este caso los coeficientes de sensibilidad son 1, la incertidumbre combinada relativa de entrada, como indica la ecuacin 1.44 [CEM, 2008; Lazos y Schmid, 2004].
, ,

es la suma geomtrica de las incertidumbres relativas de las magnitudes

Incertidumbre expandida

[1.44]

1.1.3.3.6

La forma de expresar la incertidumbre como parte de los resultados de la medicin depende de la conveniencia del usuario. A veces se comunica simplemente como la incertidumbre estndar combinada, otras ocasiones como un cierto nmero de veces tal incertidumbre, algunos casos requieren se exprese en trminos de un nivel de confianza dado, etc. En cualquier caso, es

55

indispensable comunicar sin ambigedades la manera en que la incertidumbre est expresada (Lazos y Schmid, 2004). Factor de cobertura y nivel de confianza La incertidumbre estndar tiene un valor igual a la desviacin estndar de la de

funcin de distribucin del mensurando. El intervalo centrado en el mejor estimado del mensurando contiene el valor verdadero con una probabilidad 68% aproximadamente, bajo la suposicin de que los posibles valores del mensurando siguen una distribucin normal. Generalmente se desea una probabilidad mayor de 68%, lo que se obtiene expandiendo este intervalo por un factor La incertidumbre expandida confianza, que representa una fraccin tomar el mensurando. El valor de , llamado factor de cobertura. El resultado se llama incertidumbre expandida , su clculo se realiza a partir de la ecuacin 1.45. [1.45] indica entonces un intervalo, llamado intervalo de de los valores que puede probablemente es llamado el nivel de confianza y puede ser

elegido a conveniencia. En el medio industrial, a menudo se elige el nivel de confianza de manera tal que corresponda a un factor de cobertura como un nmero entero de desviaciones estndar en una distribucin normal. Por ejemplo, = 1 corresponde a = 68,27 %, = 2 corresponde a = 95,45% y =3a = 99,73 %. La relacin entre el factor de cobertura distribucin rectangular =57,74 % si y el nivel de confianza

depende de la distribucin de probabilidad del mensurando. Por ejemplo, en una =1, y para logar un nivel de confianza de 95,45 % se requiere multiplicar por Distribucin de Student Frecuentemente, los valores del mensurando siguen una distribucin normal. Sin embargo, el mejor estimado del mensurando, la media (obtenida por muestreos de mediciones repetidas) dividida entre su desviacin estndar, sigue una de Student, la cual refleja las limitaciones de la informacin distribucin llamada =1,65. (Schmid y Lazos, 2004).

disponible debidas al nmero finito de mediciones. Esta distribucin coincide con

56

la distribucin normal en el lmite cuando considerablemente de ella cuando La distribucin es pequeo.

tiende a infinito, pero difiere

de Student es caracterizada por un parmetro

llamado nmero

de grados de libertad. Por lo anterior, el intervalo correspondiente al nivel de confianza , dado antes por la ecuacin 1.45, se calcula ahora por la ecuacin 1.46. El factor [1.46] indica los lmites del intervalo correspondiente al nivel de confianza (tomado de

de la distribucin y su valor siempre es mayor o igual que el factor la distribucin normal).

Cuando se combinan las fuentes de incertidumbre con sus respectivas distribuciones para obtener la incertidumbre combinada del mensurando, el Teorema del Lmite Central permite aproximar la distribucin resultante por una distribucin normal. La aproximacin ser mejor mientras ms grande sea el nmero de fuentes de incertidumbre y sus contribuciones sean similares, independientemente de la forma particular de sus distribuciones. Nuevamente, la disponibilidad limitada de informacin hace necesario el uso de la distribucin de Student para determinar la incertidumbre expandida de manera rigurosa (con la suposicin de que los valores del mensurando obedecen una distribucin normal) (Lazos y Schmid, 2004). Grados de libertad De cierta manera el nmero de una magnitud ( de grados de libertad asociado a una distribucin la estimacin de la

o ) puede considerarse una medida de incertidumbre de la

incertidumbre de esa magnitud. Entre mayor sea incertidumbre ser ms confiable. El nmero efectivo de grados de libertad de grados de libertad

del mensurando considera el nmero

de cada fuente de incertidumbre. El nmero efectivo de

grados de libertad se calcula segn la ecuacin de Welch-Satterthwaite. Esta

57

ecuacin puede escribirse en trminos de la relacin entre la contribucin de la fuente valor de y la incertidumbre combinada como se indica en la ecuacin 1.47. Si el resultante no es entero, generalmente se considera como el

entero menor ms prximo. [1.47]

En la estimacin de incertidumbres por el mtodo tipo A,

depende directamente

del nmero de datos considerados y disminuye conforme el nmero de parmetros estimados a partir de los mismos datos. La repetibilidad de una medicin, estimada por la desviacin estndar experimental de de 1 grados de libertad. Una regresin lineal de parmetros tiene lecturas tiene puntos mediante una ecuacin

grados de libertad. Si la incertidumbre se estima

por un mtodo tipo B, la determinacin del nmero de grados de libertad implica el criterio del metrlogo soportado por su experiencia. Es posible tomar los grados de libertad de contribuciones tipo B como infinitos (), es decir sus valores son conocidos con un valor de certeza muy alto [CEM, 2008; Lazos y Schmid, 2004]. Un anlisis de la ecuacin 1.46 muestra el dominio de las fuentes con pocos grados de libertad en el clculo de , sobre todo de aquellas cuyas contribuciones son grandes a la incertidumbre combinada. De hecho una fuente cuya contribucin es alta y con pocos grados de libertad, es determinante del valor de . Por todo ello, la frmula para hallar los grados efectivos de libertad se reduce a la ecuacin 1.48. [1.48]

Resumiendo, si la funcin de distribucin de probabilidad del mensurando 1.45, se calcula como se indica en la ecuacin 1.49

es

normal, de manera rigurosa la incertidumbre expandida calculada con la ecuacin

[1.49]

58

Donde: Factor derivado de la distribucin Grados de libertad Comparando la ecuacin 1.45 con la ecuacin 1.49, es evidente que el factor de cobertura cuando de la ecuacin 1.45 corresponde al valor de . Frecuentemente, de Student a un nivel de confianza

es suficientemente grande, no se encuentra diferencia significativa en dado de de la distribucin normal para

los resultados numricos obtenidos con la ecuacin 1.49 para un aqullos obtenidos con la ecuacin 1.45 tomando el mismo 1.1.3.3.7 [CEM, 2008; Lazos y Schmid, 2004]. Expresin de la incertidumbre

Es difcil asegurar un valor preciso de la incertidumbre debido a las mltiples aproximaciones realizadas durante su estimacin. Por ello, generalmente los valores de para para = 95% se aproximan por los que corresponden a 95,45% se muestran en la 95,45%
9 2,32 10 2,28 20 2,13 50 2,05 100 2,025 2,00

= 95,45% con el fin de obtener un valor de para

= 2,00 en el lmite de una

distribucin normal. Los valores de tabla 1.3. Tabla 1.3: Valores de

1 13,97 (Lazos 2 4,53 3 3,31 4 2,87 5 2,65 6 2,52 7 2,43

para
8 2,37

y Schmid, 2004) incluye su indicacin como un

La expresin de la incertidumbre expandida intervalo centrado en el mejor estimado

del mensurando, la afirmacin de que

es del 95% (o el valor elegido) aproximadamente y el nmero efectivo de grados de libertad, cuando sea requerido. Una manera de expresar el resultado de la medicin es de acuerdo a la ecuacin 1.50. [1.50]

59

El nmero de cifras significativas en la expresin de la incertidumbre es generalmente uno, o dos cuando la exactitud es alta (si la primera cifra significativa es uno o dos, cabe la posibilidad de usar un dgito ms para evitar la prdida de informacin til). Adems debe asegurarse que el nmero de cifras significativas del valor del mensurando sea consistente con el de la incertidumbre (Lazos y Schmid, 2004).

1.1.3.4

Ejemplos de clculo de las diferentes contribuciones a la incertidumbre en funcin de la informacin disponible habitualmente.

Certificado de calibracin Se utiliza la informacin del certificado de calibracin del equipo (o del patrn). En el certificado debe figurar el valor del error como de la incertidumbre expandida, , para cada uno de los puntos del campo de medida donde se ha realizado la calibracin. La incertidumbre debida a la calibracin de un equipo se calcula a partir de la ecuacin 1.51 (Garca y Surez, 2005).

[1.51]

Donde: Incertidumbre expandida que aparece en el certificado de calibracin Factor de cobertura En caso de no aplicar la correccin del certificado a los valores obtenidos por el equipo, existe otra componente, la incertidumbre de correccin, calcula de acuerdo a la ecuacin 1.52 (Garca y Surez, 2005).

que se

[1.52]

Donde: Correccin que aparece en el certificado de calibracin (o error, ya que se toma en valor absoluto).

60

Deriva Inicialmente, cuando todava se desconoce sta, se puede sustituir por la exactitud del instrumento de medida (accuracy, clase, etc.) que viene dada por el fabricante, en algunos casos, como deriva en un perodo, y se interpreta como la mxima variacin de sus caractersticas de medida a lo largo de un tiempo por todas las causas no especificadas de otra forma. Por su carcter de lmite de acuerdo a la ecuacin 1.53.

desviacin estndar asociada se calcular como la exactitud divida para 3 de

[1.53]

Cuando se tiene suficiente historia de un equipo, la exactitud puede ser sustituida por la mxima deriva, estimada como la diferencia entre dos certificados sucesivos, de acuerdo a la ecuacin 1.54.
| |

[1.54]

Donde: Mayor de las diferencias entre correcciones de calibraciones consecutivas del equipo. Esta resta debe hacerse teniendo en cuenta los signos de las correcciones. Una vez hecha la resta, se toma su valor absoluto (Garca y Surez, 2005). Temperatura Incertidumbre debida a la diferencia entre la temperatura de calibracin (o especificacin del fabricante) y la de trabajo. Si no viene expresamente definida por el fabricante, ni se conoce o espera algn tipo de influencia, no se considera como contribucin, siempre que se trabaje dentro de los mrgenes de temperatura para los que est garantizado. Su contribucin a la incertidumbre se considerar como un lmite mximo, salvo que se especifique de otra forma, y por lo tanto se divide para 3. En muchos casos el fabricante lo que da es un

61

coeficiente mximo de variacin de la sensibilidad con la temperatura. En este caso el lmite mximo se estima de acuerdo a la ecuacin 1.55.

[1.55]

Donde: Deriva de sensibilidad Diferencia mxima entre la temperatura de calibracin del equipo y la Valor medido por el instrumento de la magnitud de entrada. Resolucin En los equipos digitales se considera como resolucin el dgito menos significativo que pueda ser claramente ledo por el operador. De acuerdo con la definicin de resolucin, se asigna una distribucin rectangular. Su contribucin se calcula de acuerdo a la ecuacin 1.56.

temperatura al momento en que se realiza la medida.

[1.56]

En equipos anlogos se considera como la fraccin ms pequea de una escala de divisin que pueda ser estimada. En general, puede estar considerada en la del operador y criterio de medida, relacionada con su apreciacin de la divisin de escala.

1.1.4 1.1.4.1

MATERIALES DE REFERENCIA CERTIFICADOS (MRC) Definicin

Uno de los principales parmetros a verificar en la validacin de un mtodo analtico es la exactitud de los resultados proporcionados por dicho mtodo. La exactitud, suma de la veracidad y la precisin, se comprueba asegurando la trazabilidad de los resultados proporcionados por el mtodo analtico a una referencia. Por lo tanto, un elemento clave en el aseguramiento de la trazabilidad

62

de los resultados es la utilizacin de una correcta referencial. Desde un punto de vista prctico, la mejor referencia posible la constituyen los materiales de referencia certificados (Riu, 2004). Los materiales de referencia (MR) y los materiales de referencia certificados (MRC) hacen posible la transferencia de los valores de las magnitudes asignadas o medidas (fsica, qumica, biolgica o tcnica), entre un lugar y otro. Son ampliamente usados para la calibracin de los instrumentos de medicin, para la evaluacin o verificacin de los mtodos de ensayo anlisis, para el aseguramiento de la calidad de las mediciones, etc. Todas las clases de MR y MRC juegan un papel importante y creciente en las actividades de la normalizacin nacional e internacional, en los ensayos de aptitud y en la acreditacin de laboratorios (Riu, 2004). Segn el Vocabulario Internacional de Metrologa, un material de referencia (MR) es un material suficientemente homogneo y estable con relacin a una o ms propiedades, usado en calibracin, en la asignacin de un valor a otro material, o en el aseguramiento de la calidad. Asimismo, define a un material de referencia certificado como, material de referencia acompaado por los documentos emitidos por una autoridad, con referencia a procedimientos vlidos para obtener un valor de la propiedad especificada con incertidumbre y trazabilidad (CEM, 2008). La principal diferencia entre un MR y un MRC es el certificado asociado al MRC emitido por un organismo competente. Este certificado garantiza que un MRC sea, desde un punto de vista prctico, la mejor referencia posible en la verificacin de la trazabilidad de un mtodo analtico. Por lo tanto, un MRC es un material, parecido a las muestras reales que estamos analizando en nuestro laboratorio, del cual un organismo competente nos certifica y garantiza la cantidad del mensurando (por ejemplo concentracin de un determinado analito) que queremos analizar con nuestro mtodo analtico (Riu, 2004).

63

1.1.4.2 1.1.4.2.1

Propiedades de los Materiales de Referencia Certificados Trazabilidad

El MRC debe ser trazable a patrones de referencia nacionales o internacionales. Esto debe quedar perfectamente reflejado en el certificado que aporte el organismo productor. Desde un punto de vista prctico, no existe un procedimiento normalizado para asegurar la trazabilidad de los parmetros de inters en un MRC, y cada organismo de certificacin tiene sus propios mtodos de trabajo. Sin embargo, la trazabilidad de un MRC exige la utilizacin de varios mtodos independientes, es decir, que se encuentre el valor de la propiedad que se desea certificar utilizando diversos mtodos analticos cuyos principios de medida sean completamente distintos (Riu, 2004). 1.1.4.2.2 Homogeneidad

ste es un requisito indispensable, y significa que un MRC ha de presentar el mismo valor de la propiedad certificada dentro de una misma unidad y entre todas las unidades del MRC. Desde un punto de vista prctico, un MRC puede ser suficientemente homogneo respecto a la propiedad de inters aunque no lo sea respecto a otras propiedades (siempre y cuando esta falta de homogeneidad no suponga una influencia significativa en la incertidumbre asociada a la propiedad de inters). Obviamente, los lquidos y gases presentan menos problemas de homogeneidad que los materiales slidos, lo que no es inconveniente para encontrar en el mercado (Riu, 2004). 1.1.4.2.3 Estabilidad

El material debe ser estable durante las condiciones de envo, y el usuario debe conocer durante cunto tiempo permanece estable el MRC desde su recepcin y desde que se abre el recipiente. La estabilidad tiene que referirse tanto a las propiedades certificadas como a la matriz. Algunos MRC pueden verse afectados por numerosos factores como la luz, la temperatura o la exposicin a la atmsfera, por lo que el fabricante deber indicar las condiciones de transporte, manejo y almacenamiento recomendadas para el material (Riu, 2004).

64

1.1.4.2.4

Similitud con las muestras reales

El MRC ha de ser lo ms parecido posible, tanto en la composicin de la matriz como en el valor de la propiedad a determinar, a las muestras reales que sern posteriormente analizadas con nuestro mtodo analtico. Como un MRC que se asemeje exactamente a las muestras generalmente ser imposible de encontrar, se puede utilizar un MRC que sea parecido (Riu, 2004). 1.1.4.2.5 Incertidumbre

Los valores certificados de la propiedad deseada en el MRC deben ir acompaados por sus valores de incertidumbre. El nivel de incertidumbre asociado tambin informa de la calidad de un MRC en concreto (Riu, 2004).

1.1.5 1.1.5.1

CALIBRACIN Definicin

De acuerdo con el Vocabulario de Metrologa Internacional, la calibracin es la operacin que bajo condiciones especificadas, en una primera etapa establece una relacin entre los valores de la magnitud y sus incertidumbres de medida obtenidos de los patrones de medida y las correspondientes indicaciones con sus incertidumbres asociadas, y, en una segunda etapa, usa esta informacin para establecer una relacin que permita obtener un resultado de medicin a partir de una indicacin (CEM, 2008). Una calibracin puede expresarse por una declaracin, una funcin de calibracin, un diagrama de calibracin, una curva de calibracin o una tabla de calibracin. En algunos casos puede dar lugar a una correccin aditiva o multiplicativa de la indicacin con su respectiva incertidumbre (Atienza et al., 2001).

65

1.1.5.2 1.1.5.2.1

Sistema de Calibracin Objetivo

El objetivo bsico de la calibracin es la determinacin del grado de incertidumbre de las medidas efectuadas con el equipo. 1.1.5.2.2 Alcance de la calibracin

El material que es sometido a calibracin se clasifica en: 1.1.5.2.2.1 Patrones y materiales de referencia

Este material es de la mxima calidad metrolgica disponible en el laboratorio. Es calibrado y/o certificado por entidades externas que garanticen la trazabilidad de dichas calibraciones a patrones nacionales e internacionales. Dicho material slo ser empleado para la calibracin, verificacin interna del equipamiento y/o validacin de mtodos analticos. 1.1.5.2.2.2 Equipos y/o instrumentacin destinada al anlisis

Es calibrado bien con los patrones y/o materiales de referencia que posea el Laboratorio, o bien externamente cuando no se disponga de stos (como en el caso anterior, por entidades que aseguren la trazabilidad de las calibraciones) (Atienza et al., 2001). 1.1.5.2.3 Procedimiento de calibracin.

Se elaboran procedimientos especficos para todos aquellos equipos que se han de calibrar internamente. La estructura de los documentos de calibracin y/o verificacin deben contener los siguientes apartados: Periodicidad Materiales de referencia Patrones Reactivos

66

Preparacin de reactivos y de patrones de trabajo a partir de los patrones o materiales de referencia correspondientes Instrumentos necesarios Procedimiento (en el cual se debe indicar, si es preciso, las condiciones previas al proceso, tales como tiempo de estabilizacin, necesidad de limpieza o ajustes preliminares).

As mismo, el proceso de calibracin implica los siguientes puntos: Seleccin de los puntos del rango de medida del instrumento en los que se va a realizar la calibracin. Comparacin del valor obtenido con el equipo en cada uno de los puntos seleccionados y del proporcionado por el patrn o material de referencia que posea el Laboratorio. Realizacin de varias repeticiones para cada una de las medidas. Clculo de la incertidumbre en cada uno de los puntos. Emisin del certificado de calibracin correspondiente. Identificacin del estado de calibracin del equipo, segn los resultados obtenidos en sta (Atienza et al., 2001). 1.1.5.2.4 Certificado de Calibracin

Cuando el personal del laboratorio realiza la calibracin, se genera un Certificado de Calibracin que debe archivarse de acuerdo con las instrucciones especficas contenidas en el Sistema de Calidad del laboratorio. Si un organismo ajeno al laboratorio extiende algn documento o certificado de calibracin, este debe contener la misma informacin, completando este, si fuera necesario con un documento auxiliar elaborado por el laboratorio (Atienza et al., 2001). 1.1.5.2.5 Periodicidad de calibracin

La periodicidad de la calibracin de un determinado equipo debe especificarse en la correspondiente ficha de equipo. Para seleccionar el intervalo entre calibraciones se deben tener en cuenta las instrucciones del fabricante, la legislacin vigente, las recomendaciones, la bibliografa y la propia experiencia. El

67

responsable tcnico del equipo puede determinar la conveniencia de calibraciones adicionales por circunstancias no contempladas en el plan de calibracin (Atienza et al., 2001). 1.1.5.2.6 Periodicidad de verificacin

La periodicidad de las operaciones de verificacin se debe especificar en la correspondiente ficha de equipo. Para el establecimiento de los periodos de verificacin se tienen en cuenta los mismos criterios que para la calibracin. La verificacin generalmente es ms frecuente que la calibracin, pudiendo suprimirse en determinados equipos. Por otra parte, es intil realizar una verificacin si el equipo no est en uso (Atienza et al., 2001).

1.1.6 1.1.6.1

TRAZABILIDAD Definicin

El Vocabulario de Metrologa Internacional (VIM) define la trazabilidad como, propiedad de un resultado de medicin por la cual el resultado puede ser relacionado a una referencia establecida mediante una cadena ininterrumpida y documentada de calibraciones, cada una de las cuales contribuye a la incertidumbre de medida. Esta cadena de comparaciones permite tener confianza en los resultados obtenidos ya que, como nuestros resultados son comparables a una referencia, podemos asegurar que no se comete ningn error sistemtico significativo en ninguna de las etapas del mtodo analtico. Adems, la verificacin de la trazabilidad permite asegurar que nuestros resultados son comparables a los obtenidos por otros laboratorios [CEM, 2008; Maroto, 2002].

1.1.6.2

Elementos que conforman la trazabilidad

La trazabilidad de los resultados de las mediciones se caracteriza a travs de seis elementos esenciales:

68

1.1.6.2.1

Una cadena ininterrumpida de comparaciones.

Se remite a referencias determinadas aceptables para las partes, por lo general un patrn nacional o internacional. 1.1.6.2.2 Incertidumbre de la medicin

La incertidumbre de medicin para cada paso de la cadena de trazabilidad se deber calcular o estimar de acuerdo con mtodos acordados (establecidos en la GUM) y se deber declarar de modo que se pueda calcular o estimar una incertidumbre total para la cadena completa. 1.1.6.2.3 Documentacin

Cada paso de la cadena se debe realizar de acuerdo con procedimientos documentados y generalmente reconocidos; los resultados se debern registrar. 1.1.6.2.4 Competencia Tcnica

Los laboratorios u organismos que ejecuten uno o ms pasos de la cadena debern presentar evidencias de su competencia tcnica (por ejemplo, demostrar que estn acreditados). 1.1.6.2.5 Referencia a las unidades del SI

La cadena de comparaciones terminar en los patrones primarios para la realizacin de las unidades del SI; donde sea posible. 1.1.6.2.6 Intervalos de calibracin

Las calibraciones se debern repetir a intervalos apropiados; la duracin de estos intervalos depende de una serie de variables (por ejemplo, la incertidumbre requerida, la frecuencia y modo de uso, la estabilidad de los equipos, entre otros) (OAE, 2008).

69

1.1.6.3

Trazabilidad en los anlisis qumicos

El resultado de medida qumico se obtiene normalmente como la suma de diversas etapas que pueden ir desde la toma de muestra hasta los clculos finales. Entonces, se debera tener la trazabilidad en todas las etapas, pero frecuentemente es imposible determinar la trazabilidad de cada etapa. Esto contrasta con los resultados de tipo fsico. En el campo de las medidas fsicas, la trazabilidad se consigue mediante el uso de patrones certificados e instrumentos calibrados que se interconectan entre si hasta llegar al patrn fsico fundamental, por ejemplo: el kilogramo, el metro o el segundo. No obstante, en el anlisis qumico es muy difcil llegar a travs de una cadena ininterrumpida de comparaciones a la unidad fundamental de materia en el sistema internacional (SI) de unidades, el mol, ya que en la mayora de los procedimientos analticos no es posible asegurar la trazabilidad de cada una de sus etapas. Esto es debido a que el tipo de muestra puede afectar mucho a los resultados. Adems, la naturaleza de los errores es diferente en medidas qumicas y fsicas: en las fsicas predominan los errores sistemticos mientras que en las qumicas predominan los aleatorios. La alternativa en el anlisis qumico consiste en trazar globalmente los resultados obtenidos con el procedimiento analtico a un valor de referencia y evaluar si los resultados obtenidos con dicho procedimiento son comparables a los proporcionados por la referencia utilizada [Boqu et al., 2001; Maroto, 2002]. 1.1.6.3.1 Patrones adecuados

La trazabilidad de los resultados analticos se suele verificar globalmente utilizando un valor de referencia. Este valor de referencia puede ser, por ejemplo, la concentracin de un material de referencia certificado (MRC), el valor de consenso obtenido en un ejercicio interlaboratorio o la concentracin encontrada con un mtodo de referencia. Cada una de estas referencias tiene, tericamente, un nivel de trazabilidad a la unidad fundamental, el mol [Boqu et al., 2001; Maroto, 2002]. En la figura 1.12, se puede observar una clasificacin de referencias y la conexin de cada una de ellas con la pirmide metrolgica. Como se puede observar, la

70

mejor referencia la constituyen los mtodos definitivos o absolutos. Es decir, la mejor forma de verificar la trazabilidad de los resultados, es comparar los resultados del anlisis de una muestra representativa utilizando el procedimiento analtico (con el que se realizar los anlisis sobre futuras muestras desconocidas en el laboratorio), con los resultados del anlisis de la misma muestra empleando un mtodo definitivo. Los mtodos definitivos son aquellos que por definicin se pueden trazar directamente al mol, es decir, estn directamente ligados al sistema internacional de unidades. Los mtodos definitivos se utilizan muy poco en la prctica para verificar la trazabilidad. La siguiente referencia en orden de importancia metrolgica, son los material de referencia certificados (MRC). Los principales inconvenientes de los materiales de referencia son su elevado precio (Boqu et al., 2001).

Fig 1.12: Relacin entre la pirmide metrolgica y diversas referencias utilizadas en medidas qumicas para verificar la trazabilidad
(Maroto, 2002)

La siguiente referencia en orden de importancia lo constituyen los ejercicios interlaboratorio. Existen tres tipos principales de ejercicios interlaboratorio, de acuerdo a los objetivos que quieren conseguirse: los ensayos de aptitud, los ejercicios colaborativos y los ejercicios de certificacin de materiales de referencia. Los ms utilizados son los ensayos de aptitud, los cuales evalan el buen funcionamiento de los laboratorios para obtener una visin general de los

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errores en un grupo de laboratorios, miden la calidad de un laboratorio individual, aseguran que cada grupo de laboratorios consiguen una exactitud aceptable y que los errores estn bajo control estadstico y estimulas el inters en la calidad de los datos. En los ejercicios colaborativos, el objetivo es la evaluacin de un mtodo de anlisis, y en los ejercicios de certificacin se intenta asignar un valor a un material de referencia (Boqu et al., 2001). En un nivel inferior de jerarqua de referencias, se encuentras los mtodos de referencia. En este caso, la verificacin de la trazabilidad se lleva a cabo comparando los resultados obtenidos analizando una muestra representativa mediante el procedimiento de ensayo que se desea validar con los obtenidos analizando la misma muestra mediante un mtodo de referencia, que suele ser un mtodo normalizado o un mtodo oficial de anlisis (validado por alguna organizacin, generalmente de reconocido prestigio). Las cuatro referencias hasta ahora mencionadas, constituyen las mejores referencias que pueden ser utilizadas en el proceso de verificacin de la trazabilidad de los resultados. Una de las referencias ms utilizadas, a pesar de encontrarse en uno de los niveles inferiores dentro de la escala de referencias. Esta tcnica consiste en analizar una muestra representativa a la cual se le ha aadido una cantidad conocida del analito en estudio. La trazabilidad se verifica a travs del porcentaje de analito recuperado, es decir, la relacin entre la cantidad encontrada y la cantidad adicionada. Existen diferentes modalidades, puesto que la muestra adicionada puede contener o no de antemano el analito en cuestin. Adems, la adicin puede hacerse a uno o varios niveles de concentracin (Boqu et al., 2001).

1.1.7

NORMA NTE INEN ISO/IEC 17025:2006

Con la finalidad de promover el aseguramiento de la calidad en los laboratorios dentro de la Unin Europea (UE) se lleg al establecimiento de la norma EN 45001 referente a los criterios tcnicos generales para el funcionamiento de los laboratorios de ensayo (Isol, 2002). La elaboracin de la nueva norma ISO/IEC 17025 es producto de la experiencia acumulada en la aplicacin de la Gua ISO/IEC 25 y la Norma Europea EN 45001,

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a las cuales anula y sustituye. En ella describe todos los requisitos que los laboratorios de ensayo y calibracin deben cumplir para demostrar que poseen un sistema de gestin, son tcnicamente competentes y son capaces de generar resultados tcnicamente vlidos. Esta norma seala, el creciente uso de los sistemas de gestin ha producido un aumento de la necesidad de asegurar que los laboratorios que forman parte de organizaciones mayores o que ofrecen otros servicios, puedan funcionar de acuerdo con un sistema de gestin de la calidad que se considera que cumple la Norma ISO 9001 as como esta Norma Internacional (NTE INEN-ISO/IEC 17025:2006). Aunque la ISO 17025 incluye muchas de las caractersticas y requerimientos de la ISO 9001, su enfoque es especfico en competencia tcnica para verificacin y calibracin, es decir, requiere de un mayor grado de competencia tcnica que los requisitos impuestos por ISO 9001. Esta norma representa, para los organismos de evaluacin de la conformidad u organismos de acreditacin, organismos de calibracin o ensayos, entidades de inspeccin, etc., lo que la serie ISO 9000 representa para empresas. Sin embargo, la ISO 17025 requiere de un mayor grado de competencia tcnica que los requisitos impuestos por ISO 9001 (Isol, 2002). Es importante resaltar, que la aceptacin de los resultados de ensayo y de calibracin entre pases resultar, ms fcil si los laboratorios cumplen esta Norma Internacional, y, obtienen la acreditacin de organismos que han firmado acuerdos de reconocimiento mutuo con organismos equivalentes que utilizan esta Norma Internacional en otros pases. El uso de esta Norma Internacional facilitar la cooperacin entre los laboratorios y otros organismos y ayudar al intercambio de informacin y experiencia, as como a la armonizacin de normas y procedimientos (NTE INEN-ISO/IEC 17025:2006). Esta Norma se constituye como la gua para la evaluacin de la conformidad de los requisitos para calidad y competencia aplicable a todos los laboratorios, independientemente de la naturaleza del ensayo y/o calibracin que se realice. Proporciona herramientas y la estructura para que el laboratorio pueda generar confianza a sus clientes mejorando su competitividad y productividad.

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2 METODOLOGA
2.1
2.1.1

PUESTA A PUNTO DE LOS MTODOS

NECESIDAD ANALTICA

El anlisis se considera hoy en da un proceso mediante el cual se obtiene informacin. Se realizan millones de anlisis cada da en el mundo en los mbitos ms variados: anlisis de productos, manufacturados, anlisis medioambientales, anlisis clnicos, qumico y fsicos, etc., en todos ellos se requiere una confianza en los resultados obtenidos. La validacin de las metodologas analticas, junto con otras actividades englobadas en el rea del aseguramiento de la calidad, permite demostrar a los laboratorios, que sus mtodos analticos proporcionan resultados fiables y adecuados para su finalidad o propsito perseguidos; es decir, permiten conseguir calidad, otorgando un grado elevado de confianza necesaria entre los resultados de los anlisis qumicos. Desde el punto de vista econmico, los costes asociados al proceso analtico suelen ser elevados y surgen costes adicionales ligados a las decisiones que se toman sobre la base de los resultados obtenidos. La validacin es el proceso que establece, mediante estudios de laboratorio, que los parmetros de desempeo del mtodo de ensayo cumplen las especificaciones relacionadas con el uso previsto de los resultados del ensayo. Con este referente, el laboratorio del Centro de Investigaciones y Control Ambiental (CICAM), advirti la necesidad de satisfacer las expectativas de los clientes en cuanto a la calidad de los ensayos, razn por la cual, incluy en sus actividades la validacin de cuatro de sus mtodos de anlisis para la determinacin de: Alcalinidad Total, Conductividad, Demanda Bioqumica de Oxgeno y Slidos Totales disueltos, que fueron el propsito de la presente investigacin.

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2.1.2

MTODO

Para la seleccin de los mtodos de anlisis a validar, se consider como referencia bibliogrfica el Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 21th edition, libro del que dispone el laboratorio para la ejecucin de sus anlisis. Asimismo, de acuerdo con la norma NTE INEN - ISO 17025:2006 que indica en la Nota 3 del literal 5.4.5.3, La validacin es siempre un equilibrio entre los costos, los riesgos y las posibilidades tcnicas, se consider adems, la disponibilidad de los recursos instrumentales con los que cuenta el laboratorio. Los mtodos seleccionados con la respectiva codificacin con la que se encuentran en la referencia bibliogrfica se presentan a continuacin: Alcalinidad Total, 2320 B. Mtodo de Titulacin Conductividad, 2510 B. Mtodo Potenciomtrico DBO5, 5210 B. Demanda Bioqumica de Oxgeno por el Mtodo Winkler STD, 2540 C. Slidos Totales Disueltos secados a 180 C

2.1.3 2.1.3.1

PROCEDIMIENTOS DE ANLISIS Pruebas previas

La validacin es una actividad que se debe llevar a cabo sobre la versin final del mtodo bajo condiciones de operacin definidas, de aqu la necesidad de realizar la puesta a punto del mtodo. La puesta a punto de un mtodo es una actividad previa a la validacin que debe realizar el laboratorio para llegar a tener un conocimiento general del mismo. Con esta actividad se consigue que el mtodo funcione dando unas respuestas razonablemente aceptables y consistentes. Con ayuda de la experiencia del laboratorio en la ejecucin de los anlisis y fundamentados en la bibliografa que la presente investigacin demand, se realiz la puesta a punto previa a la validacin de cada mtodo. Es importante que se entienda, que no se est hablando de un cambio en el procedimiento establecido en la bibliografa, sino, por el contrario, se trata de ser ms especficos en el mismo, a fin de reflejar las condiciones reales de la aplicacin de

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los mtodos en el laboratorio y lograr su adecuado funcionamiento. Tampoco se debe confundir esta actividad, con la optimizacin del mtodo, que no fue el motivo de esta investigacin. Las pruebas previas para la puesta a punto que se realiz en cada mtodo para cumplir con lo mencionado se describen a continuacin: En el ensayo para la determinacin de la alcalinidad total, la formacin de cido carbnico en la muestra debido a la posible solubilidad del Dixido de Carbono (presente en el aire) durante el desarrollo del ensayo en un sistema abierto, podra reducir el pH de la muestra y consecuentemente alterar el resultado. Para determinar si existen diferencias significativas entre los resultados, al realizar el anlisis en un sistema abierto o un sistema cerrado, se realiz un contraste de significacin de los datos obtenidos a partir de una solucin preparada de 62,5 mgCaCO3/L de concentracin. Se obtuvieron tres lecturas de la solucin analizadas en un sistema abierto y tres lecturas analizadas en un sistema cerrado. La modificacin del sistema consisti en colocar un tapn en el vaso de titulacin durante el desarrollo del ensayo. Con las lecturas obtenidas se calcul los estadstico y para determinar la existencia de diferencias significativas (APHA et al., 2005). En el ensayo para la determinacin de DBO5, el uso de agua del machngara para la preparacin del inculo supone la necesidad de utilizar un inhibidor de nitrificacin en el anlisis, para todas las muestras sin importar su procedencia, debido a la naturaleza del inculo utilizado para el anlisis. Para determinar la necesidad del uso o no del inhibidor, se realiz un contraste de significacin de los datos obtenidos de una solucin de 20 mg/L de concentracin. Se tomaron tres lecturas de la solucin empleando el inhibidor de nitrificacin (piridina), y tres lecturas sin adicin del inhibidor. Con las lecturas obtenidas se calcul los estadsticos y para determinar la existencia de diferencias significativas.

En el ensayo para la determinacin de los slidos totales disueltos, el enfriamiento de los crisoles en el desecador es un factor importante del ensayo, ya que este influye en el peso de los de los crisoles y posteriormente en el clculo de los

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resultados. Para determinar el tiempo adecuado de enfriamiento de los crisoles en el desecador, se sacaron los crisoles de la estufa y se colocaron en el desecador; se tomaron los pesos de los crisoles cada media hora de enfriamiento. La seleccin del tiempo adecuado de enfriamiento, se bas en un criterio lgico, las medidas obtenidas deban mostrar una estabilizacin en el peso del crisol. En el ensayo para la determinacin de la conductividad, no fue necesario realizar ninguna prueba previa, debido a la simplicidad del anlisis, el mismo que no presenta interferencias tal como se puede observar en su procedimiento descrito ms adelante. A partir de los resultados obtenidos en estas pruebas, los cuales se presentan en el captulo 3, se estableci para cada mtodo lo siguiente: realizar el anlisis de alcalinidad total en un sistema abierto. Utilizar el inhibidor de nitrificacin (piridina) para todas las muestras sin importar su procedencia en el ensayo de DBO y para el ensayo de STD emplear 2 horas y media en el enfriamiento de lo crisoles, antes de pesarlos. A continuacin se detallan los procedimientos establecidos para cada uno de los mtodos de anlisis en funcin de lo establecido.

2.1.3.2 2.1.3.2.1

Procedimiento del mtodo para la determinacin de la Alcalinidad Total Fundamento terico

La alcalinidad de un agua puede definirse como su capacidad para neutralizar cidos, su capacidad para reaccionar con iones hidrgeno, su capacidad para aceptar protones o como la medida de su contenido total de sustancias alcalinas tres clases de compuestos: carbonatos, bicarbonatos e hidrxidos. En algunas aguas es posible encontrar otras clases de compuestos (boratos, silicatos, fosfatos, etc.) que contribuyen a su alcalinidad; sin embargo, en la prctica la contribucin de stos es insignificante y puede ignorarse (Romero, 2002). OH . En aguas naturales, la alcalinidad se debe generalmente a la presencia de

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2.1.3.2.2

Principio del mtodo

La alcalinidad del agua se determina por titulacin con cido sulfrico 0,02 N y se expresa como mgCaCO3/L, equivalente a la alcalinidad determinada. Los iones libres y los disociados por concepto de la hidrlisis de carbonatos y bicarbonatos presentes en la muestra. Las reacciones de hidrolizacin 2.1, 2.2 y neutralizacin 2.3, 2.4 y 2.6 se presentan a continuacin: HCO H CO H O OH CO H O HCO HCO H O H CO OH OH [2.1] [2.2] [2.3] [2.4] [2.5] H procedentes de la solucin 0,02 N de H2SO4 neutralizan los iones OH

HCO

H CO

Fig 2.1: Curva de titulacin para una mezcla hidrxidos-carbonato

(Romero, 2002)

La titulacin se efecta en dos etapas sucesivas, definidas por los puntos de equivalencia para los carbonatos y el cido carbnico. Del anlisis de la curva de titulacin que se muestra en la figura 2.1, se puede observar lo siguiente: la de pH a un valor mayor de 8,3. La mitad de los carbonatos se neutraliza a pH 8,3 concentracin de iones OH libres se neutraliza cuando ocurre el cambio brusco y la totalidad a pH 4,5, y finalmente los bicarbonatos son neutralizados a pH 4,5.

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Por tanto, el pH de punto final para la determinacin de la alcalinidad total es 4,5 (Romero, 2002). 2.1.3.2.3 Interferencias del mtodo

Los jabones, las materias oleosas y los slidos en suspensin o precipitados pueden recubrir el electrodo de vidrio y causar una respuesta retardada. Dejar un tiempo adicional entre las adiciones del reactivo para permitir que el electrodo recupere el equilibrio (APHA et al., 2005). 2.1.3.2.4 Materiales y equipos

pHmetro calibrado Matraz erlenmeyer de 125 mL Agitador magntico. Barra de agitacin Bureta de 10 mL, calibrada Matraces volumtricos de 25 y 100 mL, calibrados Reactivos

2.1.3.2.5 -

Solucin de cido Sulfrico 0,02 N: Diluir 1,67 mL de una solucin de cido sulfrico 6 N preparada previamente. Valorar la solucin de cido sulfrico frente a una solucin de NaOH de la misma normalidad. El procedimiento de valoracin se describe en el anexo I.

2.1.3.2.6

Procedimiento del mtodo

a) Seleccionar el volumen de muestra de acuerdo a su contenido de alcalinidad. Para muestras con alcalinidades menores o iguales a 49,9 mgCaCO3/L analizar 100 mL de muestra. Para alcalinidades mayores o iguales a 50 mg CaCO3/L analizar 25 mL de muestra. No se debe filtrar, diluir, concentrar o alterar la muestra. Ajustar la muestra a temperatura ambiente si es necesario. b) Verter la muestra en el vaso de titulacin, manteniendo la punta del matraz cerca del fondo del vaso de titulacin.

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c) Agitar continua y lentamente la muestra. d) Enjuagar con agua destilada y secar el electrodo. e) Introducir el electrodo en la muestra, debiendo quedar este a un tercio de la superficie del lquido para un volumen de muestra de 100 mL, y a un lado del vaso para un volumen de 25 mL, evitando que la barra de agitacin golpee al electrodo. f) Realizar la titulacin con la solucin de H2SO4 0,02 N hasta pH 4,5. Dejar un tiempo adicional entre las adiciones del reactivo para permitir que el electrodo recupere el equilibrio. g) Registrar el gasto del reactivo y realizar el clculo de la alcalinidad. Criterio de medida para reportar el gasto de la solucin valorante: Si al observar el menisco en la bureta, ste se encontrara entre la fraccin ms pequea de una escala de divisin segn la apreciacin del analista, (situacin que se muestra en la figura 2.1), se podr reportar valores del gasto de la solucin valorante correspondiente a 0,025 mL, as por ejemplo, se est en capacidad de reportar valores iguales a 1,175 mL.

Fig 2.2: Ejemplo de apreciacin para el criterio de medida

(Romero, 2002)

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2.1.3.2.7
/

Clculo [2.6]

Donde: = Concentracin del analito, mgCaCO3/L = Volumen de la solucin de cido sulfrico gastado, mL = Concentracin de la solucin de cido sulfrico, 1000 mgCaCO3/L = Volumen de muestra analizado, mL NOTA: La concentracin de cido sulfrico, normalidad del cido valorado, 50.000 2.1.3.3 2.1.3.3.1 Procedimiento de mtodo para la determinacin de la Conductividad Fundamento terico mgCaCO3/Eq, de acuerdo a la ecuacin 2.7. [2.7] se calcula a partir del valor de la

y el factor de conversin igual a 50.000

La conductividad es una expresin numrica de la capacidad de una solucin para transportar una corriente elctrica. Esta capacidad depende de la presencia de iones y de su concentracin total, de su movilidad, valencia y concentraciones relativas, as como de la temperatura de la medicin (Romero, 2002). 2.1.3.3.2 Principio del mtodo

La forma ms usual de medir la conductividad en aguas es mediante instrumentos comerciales de lectura directa en mho/cm a 25 La conductividad leda es C. igual a la conductividad elctrica de la muestra medida entre caras opuestas de un cubo de 1 cm. Como se demuestra a continuacin. La resistencia especfica de un conductor es funcin de sus dimensiones y puede expresarse como:

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[2.8] Donde: Resistencia especfica, ohmio cm Resistencia, ohmio rea de la seccin transversal del conductor, cm2, y Longitud del conductor, cm En otras palabras, es la conductividad de un conductor de 1 cm de longitud y una seccin transversal de 1 cm2, por tanto, numricamente es igual a la conductividad. Como en aguas el valor de la conductividad es muy pequeo, se expresa en mho/cm o en unidades del sistema internacional siemens/cm tomando en cuenta que 1 mho = 1 siemens (Romero, 2002). 2.1.3.2.1 Material y equipos

Medidor de Conductividad calibrado. Vaso de precipitacin Procedimiento del mtodo

2.1.3.2.2

a) Tomar un volumen de muestra en el vaso de precipitacin (suficiente para cubrir completamente el electrodo del medidor de conductividad). Ajustar la muestra a temperatura ambiente si es necesario. b) Enjuagar con agua destilada y secar el electrodo. c) Introducir el electrodo en la muestra, agitar ligeramente (para eliminar las burbujas en el electrodo) y esperar hasta que el equipo de la lectura. Evitar reclinar el electrodo en la base o a los costados del vaso. d) Reportar la conductividad de la muestra con el valor ledo por el equipo. 2.1.3.2.3 Clculo [2.9]

82

2.1.3.4

Procedimiento para la determinacin de la Demanda Bioqumica de Oxgeno

2.1.3.4.1

Fundamento terico

La oxidacin microbial o mineralizacin de la materia orgnica descrita en la ecuacin 2.9, es una de las principales reacciones que ocurren en los cuerpos naturales de agua y constituye una de las demandas de oxgeno, ejercida por los microorganismos heterotrficos, que se debe cuantificar (Romero, 2002). [2.10] La Demanda Biolgica de Oxgeno (DBO) es un parmetro que permite medir la cantidad de oxgeno requerido para la oxidacin de la materia orgnica biodegradable presente en una muestra de agua como resultado de la oxidacin bioqumica aerobia (Romero, 2002). 2.1.3.4.2 Principio del mtodo

C La prueba de DBO5 se determina incubando por cinco das a 20 en la oscuridad, la muestra de agua residual o natural, o una dilucin conveniente de la misma. La disminucin de la concentracin de oxgeno disuelto (OD), medida por el mtodo Winkler, durante el periodo de incubacin, produce una medida de la DBO. Las muestras para la determinacin de la DBO se deben analizar con prontitud; si no es posible, refrigerarlas a una temperatura cercana al punto de congelacin (4 ya que se pueden degradar durante el almacenamiento, dando C), como resultado valores bajos. Sin embargo, es necesario mantenerlas el mnimo tiempo posible en almacenamiento, incluso si se llevan a bajas temperaturas (APHA et al., 2005).

83

2.1.3.4.3

Interferencias del mtodo

Existen numerosos factores que afectan la prueba de la DBO, entre ellos la relacin de la materia orgnica soluble, la materia orgnica suspendida, los slidos sedimentables, los flotables, la presencia de hierro en su forma oxidada o reducida, la presencia de compuestos azufrados y las aguas no bien mezcladas. Al momento no existe una forma de corregir o ajustar los efectos de estos factores. La oxidacin de las formas reducidas del nitrgeno como amoniaco y nitrgeno orgnico, mediada por los microorganismos, ejercen una demanda nitrogencea, que es considerada como una interferencia en la prueba; sin embargo, esta puede ser eliminada con la adicin de inhibidores qumicos. Cuando se inhiba la demanda nitrogencea de oxgeno, se debe reportar los resultados como demanda bioqumica de oxgeno carboncea (DBOC5); cuando no se inhiba, reportar los resultados como DBO5 (APHA et al., 2005). 2.1.3.4.4 Materiales y equipos

Incubadora de aire, calibrada a 20 C Aireador Botellas de incubacin (winkler de 300 mL) Probetas de 1000 mL, calibradas Pipetas volumtricas, calibradas Matraces volumtricos, calibrados Pipetas serolgicas, calibradas Botelln de 20 L de capacidad Varilla tipo mbolo Reactivos

2.1.3.4.5 -

Solucin tampn de fosfato: Disolver 8,5 g de KH2PO4, 21,75 g de K2HPO4, 33,4 g de Na2HPO4.7H2O, y 1,7 g de NH4Cl en aproximadamente 500 mL de agua destilada y diluir a 1 L. El pH debe ser 7,2 sin posteriores ajustes. Si se presenta alguna seal de crecimiento biolgico, descartar este o cualquiera de los otros reactivos.

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Solucin de sulfato de magnesio: Disolver 22,5 g de MgSO4.7H2O en agua destilada y diluir a 1 L. Solucin de cloruro de calcio: Disolver 27,5 g de CaCl2 en agua destilada y diluir a 1L. Solucin de cloruro frrico: Disolver 0,25 g de FeCl3.6H2O en agua destilada, diluir a 1L Soluciones cida y alcalina, 1 N, para neutralizacin de muestras custicas o cidas. cido: A un volumen apropiado de agua destilada agregar muy lentamente y mientras se agita, 28 mL de cido sulfrico concentrado; diluir a 1 L. lcali: Disolver 40 g de hidrxido de sodio en agua destilada y diluir a 1 L.

Solucin de sulfito de sodio: Disolver 1,575 g de Na2SO3 en 1000 mL de agua destilada. Esta solucin no es estable y se debe preparar diariamente.

Inhibidor de nitrificacin: 2-cloro-6-(triclorometil) piridina, slido. Solucin de cloruro de amonio: Disolver 1,15 g de NH4Cl en 500 mL de agua destilada, ajustar el pH a 7,2 con solucin de NaOH, y diluir a 1 L. La solucin contiene 0,3 mg de N/mL.

2.1.3.4.6 2.1.3.4.6.1

Procedimiento del mtodo Preparacin del inculo.

a) Colocar 50 mL del sobrenadante del agua del machngara (decantado por al menos 1 hora) en un vaso plstico b) Aadir 10 gotas de la muestra a analizar (previamente regulado su pH entre 6,5 y 7,5 con las soluciones cida o lcali 1 N). Incubar a 20 C durante 30 min. c) Aadir 5 gotas de la muestra e incubar durante 1 hora. d) Aadir 5 gotas de la muestra e incubar a 20 C por 24 horas.

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2.1.3.4.6.2

Tcnica de dilucin

Las diluciones deben ser tales, que permitan obtener al cabo de los 5 das de incubacin, un oxgeno residual de al menos 1 mg/L y una captacin de oxgeno de al menos 2 mg/L, en otras palabras, se espera un consumo de aproximadamente 4 mg/L del OD presente en la botella al inicio de la prueba. Para estar en estos rangos, es necesario emplear una fraccin volumtrica adecuada, que permita realizar los clculos de las tres diluciones necesarias para la ejecucin del anlisis. Esta fraccin se calcula a partir de la relacin entre los valores de DBO y DQO, esta relacin es un indicativo de la biodegradabilidad de la materia contaminante. En bibliografa se encuentra, que el valor terico de DBO es la mitad del valor del DQO presente en la muestra, es decir, la relacin de DBO/DQO es de 0,5. Sin embargo, esta relacin no es fija. En aguas residuales, se interpreta un valor de la relacin DBO/DQO menor de 0,2 para un vertido de tipo inorgnico, mientras que para un vertido tipo orgnico (fcilmente biodegradable) se considera una relacin mayor de 0,6. Para las aguas domsticas, la relacin DBO/DQO oscila entre 0,4 y 0,8. Las aguas estabilizadas biolgicamente tienen una relacin DBO/DQO = 0,12. Es necesario antes de realizar el anlisis, tener un conocimiento previo de la procedencia de la muestra, para determinar con criterio la DBO esperada de la muestra. Para el ejemplo de clculo de la fraccin volumtrica se parte de la ecuacin 2.10, con las debidas consideraciones que esta relacin tiene de acuerdo al tipo de muestra analizada.

0,5

[2.11]

Entonces, la fraccin volumtrica de la muestra se calcula con la ecuacin 2.11

[2.12]

Puesto que la ecuacin 2.11 depende del DBO esperado en la muestra, basado en el criterio del analista, es necesario comprender un amplio rango donde se encuentre la DBO real de la muestra, para lo cual se toma el 0,5 y 1,5 de la fraccin volumtrica calculada. El volumen de la muestra de cada dilucin se calcula multiplicando estos valores por el volumen de aforo (probeta de 1000 mL

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donde se realizan las diluciones), tal como se indica en las ecuaciones 2.12, 2.13 y 2.14 2 1 1000 1000, 0,5, [2.13] [2.14] [2.15]

1000

1,5,

Para valores de DBO menores o iguales a 4 mg/L, no se realizar diluciones de la muestra, debido al volumen total que se requerira de acuerdo a los clculos arriba descritos. 2.1.3.4.6.3 Preparacin del agua de dilucin.

Para muestras que requieren dilucin a) Se realizan tres diluciones por cada muestra, cada dilucin se prepara en una probeta de 1000 mL, ms aproximadamente 600 mL necesarios para el blanco, por tanto, se requieren preparar al menos 4 litros de agua de dilucin para el procedimiento de anlisis. Colocar la cantidad de agua destilada necesaria en el botelln. b) Aadir por cada litro de agua destilada (referirse al paso anterior), mL de cada una de las siguientes soluciones (tambin denominadas nutrientes): solucin tampn, sulfato de magnesio, cloruro de calcio y cloruro frrico. c) Llevar el agua a 20 antes de su uso. Saturarla por burbujeo de aire C filtrado libre de materia orgnica, durante 30 min y dejar estabilizar por 30 min. d) Adicionar 0,5 mL del inculo por cada litro de agua destilada. e) Aadir 10 mg de inhibidor de nitrificacin por cada litro de agua luego de su estabilizacin. Es posible que el inhibidor se disuelva lentamente. Para muestras que no requieren dilucin a) Se requiere preparar al menos 2 litros de agua de dilucin. Esto debido a que se llenarn seis botellas de DBO (3 para el OD inicial y tres para el OD final de la muestra), por tanto, se requieren preparar al menos 2 litros de

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agua de dilucin para el procedimiento de anlisis. El nmero de rplicas puede variar segn el criterio del analista. Colocar la cantidad de muestra necesaria en el botelln. b) Regular el pH de la muestra entre 6,5 y 7,5 con una solucin de NaOH o H2SO4 1 N (la cantidad de reactivo adicionado, no debe diluir la muestra en ms de 0,5%). Regular la temperatura de la muestra a 20 si es C necesario. c) Aadir por cada litro de muestra (referirse al litera a)), 1 mL de cada una de las siguientes soluciones (tambin denominadas nutrientes): solucin tampn, sulfato de magnesio, cloruro de calcio y cloruro frrico. d) Aadir 0,5 mL del inculo por cada mL de muestra. e) Saturar la muestra por burbujeo de aire filtrado libre de materia orgnica, durante 30 min y dejar estabilizar por 30 min. f) Aadir 10 mg de inhibidor de nitrificacin por cada litro de muestra luego de su estabilizacin. Es posible que el inhibidor se disuelva lentamente. NOTA: Proceder de la misma manera si el volumen requerido para la dilucin (referirse a la tcnica de dilucin) supera el 60% del volumen de la probeta donde se realizan las diluciones, es decir, para valores de DBO esperado que sean menores a 4 mg/L. El analista deber decidir si para valores cercanos a 4 mg/L, se realiza el anlisis sin dilucin de la muestra en funcin de los resultados obtenidos de los clculos de la tcnica de dilucin, debido al volumen total requerido. 2.1.3.4.6.4 Tratamiento previo de la muestra

Muestras con compuestos residuales de cloro Evitar las muestras que contengan cloro residual; para ello se recomienda tomar la muestra antes del proceso de cloracin; si la muestra ha sido clorada pero no presenta cloro residual detectable, realizar el inculo; si hay cloro residual, declorar la muestra y proceder a realizar el inculo. En algunas muestras, el cloro se elimina si se deja la muestra 1 o 2 h a la luz, lo cual puede suceder durante el transporte y manejo de la muestra. Para muestras en las cuales el cloro residual

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no se disipa en un tiempo razonablemente corto, eliminar el cloro residual por adicin de la solucin de Na2SO3. El volumen de Na2SO3 requerido se determina en una porcin de 100 a 1.000 mL de la muestra, previamente neutralizada, por la adicin de 10 mL de cido actico 1 + 1 o H2SO4 1 + 50, 10 mL (relacin de volmenes) de solucin de yoduro de potasio (10 g KI/100 mL), por cada 1000 mL de muestra; el volumen resultante se titula con la solucin de Na2SO3 hasta su punto final, determinado por el indicador almidn-yodo. Se agrega a la muestra neutralizada, el volumen relativo de solucin de Na2SO3 determinado, se mezcla bien y se deja en reposo cerca de 10 a 20 minutos. Ensayar la muestra para determinar el cloro residual. (Un exceso de Na2SO3 en la muestra, consume oxgeno y reacciona con ciertas cloraminas orgnicas que pueden estar presentes en muestras tratadas) (APHA et al., 2005). Muestras contaminadas con sustancias txicas Las muestras de aguas residuales provenientes de industrias, por ejemplo electroqumicas, contienen metales txicos. Estas muestras requieren de estudios especiales y deben ser tratadas antes de medirles la DBO (APHA et al., 2005). Muestras sobresaturadas con OD En muestras procedentes de aguas muy fras o de aguas en que la produccin primaria es alta, los valores de OD a 20C suelen ser mayores de 9 mg de OD/L. Para prevenir prdidas de oxgeno durante la incubacin, llevar la temperatura de la muestra a 20 3C en una botella parcialmente llena, mientras se sacude fuertemente o se burbujea aire (APHA et al., 2005). 2.1.3.4.6.5 Anlisis de la muestra

Para muestras que requieren dilucin a) Seleccionar el volumen de muestra necesario para el ensayo, (referirse a la tcnica de dilucin). Regular el pH de la muestra entre 6,5 y 7,5 con una solucin de NaOH o H2SO4 1 N, (la cantidad de reactivo adicionado, no debe diluir la muestra en ms de 0,5%).

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b) Regular la temperatura de la muestra a 20 antes de realizar el ensayo. C c) Trasvasar el agua de dilucin cuidadosamente mezclada, hasta llenar la mitad de la probeta de 1000 mL, procurando burbujear lo menos posible, para ello, se recomienda colocar la llave del botelln pegado a la pared de la probeta para que el agua se deslice por la pared y evitar la entrada de aire. d) Agregar la cantidad de muestra correspondiente al volumen necesario para la dilucin 1 (referirse a la tcnica de dilucin), completar el volumen de la probeta con agua de dilucin procurando introducir en el sistema la menor cantidad de aire posible, tanto al agregar la muestra como el agua de dilucin (tener la misma consideracin de llenado que en el literal c)). e) Mezclar con ayuda de una varilla tipo mbolo, llevando la varilla de arriba hacia abajo, por al menos 10 veces, evitando la entrada de aire. f) Trasvasar la dilucin de la probeta a dos botellas de DBO, teniendo el mismo cuidado de evitar la entrada de aire. Dejar estabilizar por 15 min antes de tapar las botellas. g) Llenar dos botellas de DBO con agua de dilucin, estas botellas constituyen los blancos, que permiten verificar la calidad del agua de dilucin a travs del consumo de oxgeno disuelto del blanco. Dejar estabilizar por 15 min antes de tapar las botellas. h) Repetir los pasos c, d e y f para las dos diluciones restantes de la muestra (referirse a la tcnica de dilucin). En total se tendrn 2 botellas de DBO por cada dilucin (una para el oxgeno disuelto (OD) inicial y la otra para el final), 6 botellas en total ms dos botellas para el blanco (para el OD inicial y la para el final). i) Determinar el oxgeno disuelto inicial de las muestras y del blanco determina utilizando el mtodo yodomtrico de azida e incubar por 5 das a 20C las restante tres botellas y el blanco. El OD se modificado establecido en el Standar Methods, su procedimiento se detalla en el anexo II. (La solucin de tiosulfato de sodio empleada en la determinacin del OD debe ser valorada siguiendo el procedimiento descrito en el anexo III). j) Determinar el OD final de la muestra y del blanco transcurrido los 5 das de incubacin ( 4 horas) como se describe en el anexo II.

90

k) Registrar los valores y realizar el clculo de DBO5. Reportar el promedio de las tres diluciones como resultado final. Para muestras que no requieren dilucin a) Trasvasar el agua de dilucin (preparada segn el procedimiento descrito para la preparacin de agua de dilucin cuando la muestra no requiere dilucin) a seis botellas de DBO procurando burbujear lo menos posible, para ello se recomienda colocar la llave del botelln pegado a la pared del winkler para que el agua se deslice por la pared y evitar la entrada de aire. Dejar estabilizar por 15 min antes de tapar las botellas. b) Determinar el OD inicial de tres botellas, e incubar las otras tres por 5 das a 20 El OD se determina de acuerdo al procedimiento descrito en el C. anexo II. c) Para determinar el consumo de OD del blanco, preparar un litro de agua de dilucin (de acuerdo al procedimiento descrito para la preparacin de agua de dilucin para muestras que requieren dilucin). d) Trasvasar el agua de dilucin a dos botellas de DBO con las mismas indicaciones del literal a) para evitar la entrada de aire. e) Determinar el OD inicial del blanco e incubar por 5 das a 20 la otra C botella. Seguir el mismo procedimiento descrito en el anexo II para la determinacin del OD. f) Determinar el OD final de las muestra y de blanco transcurrido los 5 das de incubacin ( 4 horas) como se describe en el anexo II. (La solucin de tiosulfato de sodio empleada en la determinacin del OD debe ser valorada siguiendo el procedimiento descrito en el anexo III). g) Registrar los valores y realizar el clculo de DBO5. Reportar el promedio de las tres mediciones como resultado final. Criterio de medida para reportar el gasto de la solucin valorante: Emplear el mismo criterio de medida descrito en el mtodo para la determinacin de la alcalinidad total.

91

NOTA: El consumo de OD del blanco no debe ser mayor que 2 mg/L, si superara este valor, mejorar la preparacin del agua de dilucin, prestando atencin a la limpieza del material utilizado, as como tambin, al agua del machngara empleada para la preparacin del inculo, la misma que debe mantenerse en refrigeracin a 4 y cambiada constantemente. C 2.1.3.4.7 Clculo

Cuando no se realiza dilucin de la muestra

[2.16]

Donde: OD de la muestra antes de la incubacin, mg/L OD de la muestra despus de la incubacin, mg/L OD antes de la incubacin del blanco, mg/L OD del blanco despus de la incubacin, mg/L Factor de la solucin valorante Cuando se realiza dilucin de la muestra

[2.17]

Donde: Volumen de aforo donde se realiza la dilucin (volumen de la probeta), mL Volumen de dilucin, mL NOTA: El factor de la solucin valorante, , se obtiene del cociente entre la y la

normalidad de la solucin valorante (solucin que estar ser valorada), normalidad terica igual a 0,025 N, de acuerdo a la ecuacin 2.18.
,

[2.18]

92

2.1.3.5 2.1.3.5.1

Procedimiento para la determinacin de los Slidos Totales Disueltos Fundamento terico

Los procedimientos usados en la determinacin del contenido de slidos son mtodos gravimtricos, y como tales requieren la determinacin del peso de los crisoles con residuos o sin ellos. Por tanto, es importante usar recipientes previamente acondicionados y de peso constante, con el fin de no introducir errores en la determinacin (Romero, 2002). 2.1.3.5.2 Principio del mtodo

Para la determinacin de los slidos totales disueltos se filtra una muestra bien mezclada por un filtro estndar de fibra de vidrio; posteriormente, se toma un volumen del filtrado y se evapora hasta que se seque en un crisol, previamente tarado a 180 El aumento del peso en el crisol representan los slidos totales C. disueltos (APHA et al., 2005). 2.1.3.5.3 Interferencias del mtodo

Las aguas excesivamente mineralizadas con un contenido considerable de silicio, magnesio, cloruros y/o sulfatos, pueden ser higroscpicas y exigir un secado prolongado, un grado de desecacin adecuado y un pesado rpido. Las muestras ricas en bicarbonato requieren un secado cuidadoso y, probablemente, prolongado, para asegurar la conversin completa de bicarbonato a carbonato (APHA et al., 2005). 2.1.3.1.1 Materiales y equipos

Horno de Mufla Estufa calibrada a 180 C Crisoles de porcelana, 50 mL de capacidad Matraz volumtrico de 50 mL, calibrado Desecador, provisto de slica gel Filtros de fibra de vidrio sin aglutinante orgnico Equipo de filtracin

93

Bomba para succin Procedimiento del mtodo Preparacin de los crisoles previo la realizacin del ensayo

2.1.3.1.2 2.1.3.1.2.1

a) Colocar el crisol en la mufla a 550 por 30 min (para eliminar cualquier C residuo orgnico presente). b) Tarar el crisol en la estufa a 180 durante 2 horas. C c) Enfriar el crisol en el desecador por un lapso de 2 horas y media. Pesar el crisol. d) Mantener el crisol en el desecador hasta ser utilizado. 2.1.3.1.2.2 Anlisis de la muestra

a) Armar el equipo de filtracin de acuerdo a la figura 2.3. b) Filtrar la muestra, previamente homogeneizada. c) Tomar 50 mL de la solucin filtrada y verterla en el crisol previamente pesado, siguiendo el procedimiento completo de preparacin del crisol. d) Colocar el crisol en la estufa para evaporar la muestra, dejar la muestra en la estufa mnimo 15 horas para asegurar la completa evaporacin. e) Enfriar el crisol en el desecador por un lapso de 2 horas y media y pesarlo. f) Registrar los pesos y realizar el clculo de los slidos totales disueltos.

Fig 2.3: Equipo de filtracin al vaco

(Romero, 2002)

94

NOTA: Si se realiza el anlisis de STD de varias muestras, es decir, si se requiere el uso de gran espacio del desecador en donde varios crisoles a 180 requieren C ser enfriados, se recomienda cambiar el tiempo de enfriamiento a 3 horas antes de pesar los crisoles. 2.1.3.1.3
/

Clculo: [2.19]

Donde: Peso de residuo seco + peso del crisol, g Peso del crisol, g 1000000 2.1.4 volumen de muestra, mL Factor de conversin mg*L/g*L

INSTRUCTIVO DE CALIBRACIN DE LOS EQUIPOS UTILIZADOS

Para el desarrollo de esta investigacin, la calibracin de los equipos constituy un requerimiento indispensable, debido, a que los datos de calibracin formaban parte de los clculos de la incertidumbre de medida, tal como se indic en el captulo uno. Debido a esta necesidad, el laboratorio solicit al Instituto Ecuatoriano de Normalizacin (INEN), la calibracin de aquellos equipos necesarios para el desarrollo de cada mtodo, descritos en el literal 2.1.3. Por lo cual se cont con los siguientes equipos calibrados: Estufa, LINBERG/BLUE, calibrada a 180 C Incubadora, MEMMERT, calibrada a 20 C Balanza analtica, METTLER TOLEDO Material Volumtrico, LMS y GLASWERK WERTHEIM

Los certificados de calibracin entregados por el INEN, se presentan en el anexo XVI de donde se tomaron los datos para los clculos correspondientes.

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Asimismo, se cont con el medidor de pH, ORION, calibrado por el personal del laboratorio, cuyo certificado de calibracin se encuentra en el anexo XVI. El medidor de conductividad, fue el nico equipo que requiri de calibracin interna como parte de esta investigacin. A continuacin se describe el proceso de calibracin y verificacin desarrollado para este equipo.

2.1.4.1 2.1.4.1.1

Instructivo de calibracin del Medidor de Conductividad Objetivo

Se tiene por objeto describir el procedimiento para la calibracin interna y la verificacin del conductivmetro HACH modelo 54500-23. 2.1.4.1.2 2.1.4.1.2.1 Descripcin Identificacin del instrumento a calibrar y verificar

Conductivmetro HACH modelo 54500-23 Reactivos 1 S/cm 0,2 mS/cm

2.1.4.1.2.2 -

Solucin patrn certificada de 147 S/cm, Solucin patrn certificada de 12,8 mS/cm, Preparacin de los elementos requeridos Soluciones para la calibracin

2.1.4.1.3 2.1.4.1.3.1 -

Las soluciones certificadas deben ser almacenadas de acuerdo a las indicaciones establecidas en su certificado. Al momento de ser utilizadas se debe evitar su contaminacin.

2.1.4.1.3.2 -

Ajuste del Equipo

Seguir los pasos a), b) y c) descrito en el literal 2.1.3.2.6 (procedimiento del mtodo para la determinacin de la conductividad) tomando como muestra las soluciones certificadas.

96

Para ajustar el equipo, presionar la tecla funcional CAL que aparece en la parte baja e izquierda de la pantalla. CAL ? y 1.0001/cm aparecern en la parte superior de la pantalla. Si el equipo ha sido ajustado, este valor aparecer en la pantalla.

Utilizar el teclado numrico para ingresar el valor de la conductividad de la solucin certificada a 25 empleada y presionar ENTER. C

2.1.4.1.4

Proceso de calibracin

Realizar cinco lecturas de cada solucin patrn, siguiendo el procedimiento completo descrito en el literal 2.1.3.2.6. 2.1.4.1.5 Tratamiento estadstico

Calcular la incertidumbre de calibracin, presentar resultados y anexos de clculos. 2.1.4.1.6 Criterios de aceptacin y rechazo

Aceptar la calibracin si la incertidumbre obtenida es menor o igual que dos veces la exactitud del equipo ms la incertidumbre del patrn. De acuerdo al manual del equipo, el valor de la exactitud es igual a 5% en cada rango. As, para el estndar de 147 S/cm el valor de la incertidumbre de calibracin debe ser menor o igual a 2,47 S/cm, mientras que para el estndar de 12,8 mS/cm, el valor de la incertidumbre de calibracin debe ser menor o igual a 0,33 mS/cm. Los valores de incertidumbre de cada estndar, corresponden a los ya mencionados en los reactivos en el literal 2.1.4.1.2.2. 2.1.4.1.7 Proceso de verificacin

Verificar cada vez que se utilice el conductivmetro. Realizar una lectura de la solucin patrn de 147 S/cm o 12,8 mS/cm, segn el valor que se espera obtener de la muestra analizada. Si se obtiene una lectura con un error relativo del 1%, aceptar la verificacin. Caso contrario, ajustar el equipo siguiendo el procedimiento descrito en el literal 2.1.4.1.3.2.

97

2.1.5 2.1.5.1

PREPARACIN DE LOS OBJETOS DE ENSAYO Preparacin de los elementos que se disponen para la validacin Soluciones patrn

2.1.5.1.1

Se prepararon a partir de las soluciones patrn certificadas (MRC) disponible en cada mtodo a los niveles de concentracin requeridos para el desarrollo de la validacin, de acuerdo al diseo experimental que se indica ms adelante en el literal 2.2.3; evitando la contaminacin de las soluciones. Para un patrn certificado slido, se prepar siguiendo las indicaciones del certificado, evitando igualmente su contaminacin. A partir de la solucin patrn certificada se prepararon las disoluciones (soluciones) ms diluidas, necesarias en cada mtodo de acuerdo a los niveles de concentracin requeridos para el desarrollo de la validacin. Para ello se emple la ley de las diluciones definido por la siguiente expresin [2.20] Donde: Concentracin de la solucin patrn certificada Alcuota tomada de la solucin patrn certificada Concentracin de la solucin final preparada Volumen de la solucin final preparada 2.1.5.1.2 Materiales de Referencia internos ( )

Se prepararon a partir de los reactivos con los que cuenta el laboratorio siguiendo las indicaciones establecidas en el Standar Methods, a los niveles de concentracin requeridos para los diferentes contrastes de significacin que se describen a lo largo del captulo dos.

98

2.1.5.1.3

Reactivos

Los reactivos necesarios para la ejecucin de cada mtodo se prepararon siguiendo las indicaciones del Standard Methods, los mismos que fueron descritos en el procedimiento de cada mtodo en el literal 2.1.3. 2.1.5.1.4 Muestras reales

Se eligi una muestra de agua residual conservada en refrigeracin a 4 para la C, determinacin del % de Recuperacin de acuerdo al procedimiento que se describe ms adelante en el diseo experimental.

2.1.5.2

Preparacin de los equipos utilizados

Previo a la realizacin de cada anlisis, se verificaron los equipos de acuerdo a su necesidad de uso para constatar el buen funcionamiento de los mismos. Se siguieron los procedimientos establecidos dentro del laboratorio, y se consideraron los criterios de aceptacin para aceptar la verificacin del equipo. Las acciones que se realizaron se resumen a continuacin: Verificacin del pHmetro utilizando las soluciones buffer de pH 4 y 7. Se acept la verificacin si el valor cumpla con los criterios de aceptacin establecidos de acuerdo al manual del equipo, es decir, slope entre 85% y 115%. Verificacin de la balanza utilizando la pesa de 10,0000 g. Se acept la verificacin si el valor pesado se encontr dentro de los criterios de aceptacin, que de acuerdo a bibliografa es de 0,0010g, sin embargo, el laboratorio ha adoptado en base a su experiencia como criterio de aceptacin un valor igual a 0,0007 g. Verificacin del material de vidrio, en este caso se seleccion el equipo de vidrio en buen estado que permita el correcto desarrollo de los mtodos. El principal criterio para la aceptacin del material fue la limpieza del mismo, que en el caso del material volumtrico ocupado se verific y acept siempre y cuando el llenado de este permaneciera uniformemente hmedo y el menisco

99

no present deformacin o distorsin en las orillas. De manera general se acept aquel material limpio, sin manchas y que no presentara puntas despostilladas.

2.2
2.2.1

SISTEMA DE VALIDACIN DE LOS MTODOS

ELECCIN DE LOS PARMETROS DE VALIDACIN

La validacin como ya se mencion, no es ms que el conocimiento del mtodo por determinacin de una serie de caractersticas del mismo, constituyendo estas caractersticas sus parmetros de validacin que definen el mtodo. As, para demostrar que un mtodo es adecuado para la aplicacin que se pretende es preciso determinar mediante estudios de laboratorio sus parmetros de desempeo. Esta caracterizacin del desempeo del mtodo es un proceso caro e inevitablemente puede ser acortado por el tiempo y consideraciones del costo. El Centro de Investigacin y Control Ambiental (CICAM), siendo un laboratorio acreditado, estableci los parmetros y objetivos de validacin del mtodo que necesitan caracterizarse para validar el mtodo, en base a la experiencia del laboratorio, referente a las auditoras realizadas por la OAE como ente regulador, a sus requerimientos y exigencias, as como a las necesidades del cliente. En el literal 2.2.2, se describen los parmetros seleccionados para cada mtodo, as como sus objetivos.

2.2.2

FIJACIN DE OBJETIVOS PARA LOS PARMETROS DE VALIDACIN

La Norma INEN-ISO/IEC 17025:2006 en la Nota 1 del literal 5.4.5.3 indica, La validacin incluye las especificaciones de los requisitos, la determinacin de las caractersticas de los mtodos, una verificacin de que los requisitos pueden satisfacerse utilizando el mtodo, y una declaracin sobre la validez. Estos requisitos establecidos a priori son los objetivos de validacin.

100

Como ya se indic en el literal anterior, el laboratorio estableci sus parmetros y objetivos de validacin para cada mtodo en funcin de su experiencia. Sin embargo, en funcin de esta experiencia, fue necesario establecer con ayuda de pruebas de laboratorio, el nivel bajo de concentracin del intervalo de trabajo. Estas pruebas se realizaron despus de las pruebas previas descritas en el literal 2.1.3.1 para la puesta a punto de los mtodos. Una vez establecido el procedimiento especfico de los mtodos, se realizaron pruebas para determinar el nivel bajo de concentracin. Las pruebas realizadas se describen a continuacin: Para la determinacin del nivel bajo de concentracin en el ensayo para la determinacin de la alcalinidad total, se realizaron tres lecturas de soluciones preparadas a 1, 3 y 5 mg CaCO3/L de concentracin. Mediante el clculo de la recuperacin de los resultados obtenidos, se estableci el valor del nivel bajo, el mismo que deba encontrarse dentro del valor de recuperacin establecido para la veracidad (80% - 120%). Para la determinacin del nivel bajo de concentracin en el ensayo para la determinacin de DBO, se realizaron tres lecturas de cada solucin, preparadas a 1 y 2 mg/L de concentracin. Mediante el clculo de la recuperacin de los resultados obtenidos, se estableci el valor del nivel bajo, el mismo que deba encontrarse dentro del valor de recuperacin establecido para la veracidad (80% 120%).

Para la determinacin del nivel bajo de concentracin en el ensayo para la determinacin de los STD, se realizaron tres lecturas de soluciones preparadas a 5, 10, 20 y 50 mg/L de concentracin. Mediante el clculo de la recuperacin de los resultados obtenidos, se estableci el valor del nivel bajo, el mismo que deba encontrarse dentro del valor de recuperacin establecido para la veracidad (80% 120%).

Para la determinacin de la conductividad, no se realiz esta prueba, ya que el nivel bajo de concentracin 147 S/cm estuvo definido por el valor de la solucin patrn que el laboratorio adquiri para la validacin del mtodo.

101

En las tablas 2.1, 2.2, 2.3, 2.4 y 2.5, se presentan los parmetros y objetivos de validacin para cada mtodo, establecidos en funcin de los resultados de las pruebas y de la experiencia del laboratorio. Tabla 2.1: Parmetros y objetivos de validacin del mtodo para la determinacin de la Alcalinidad Total, rango bajo
PARMETRO Linealidad/Funcin respuesta Lmite de Deteccin Lmite de Cuantificacin Precisin (repetibilidad y/o reproducibilidad) Veracidad (% de Recuperacin) Incertidumbre Intervalo de trabajo 5 OBJETIVO ESTABLECIDO No aplica No aplica 5 mgCaCO3/L CVr CVR 15 % 20 %

80% - 120% 35 %

49,9 mgCaCO3/L

Tabla 2.2: Parmetros y objetivos de validacin del mtodo para la determinacin de la Alcalinidad Total, rango alto
PARMETRO Linealidad/Funcin respuesta Lmite de Deteccin Lmite de Cuantificacin Precisin (repetibilidad reproducibilidad) OBJETIVO ESTABLECIDO No aplica No aplica 50 mgCaCO3/L y/o CVr CVR 15 % 20 %

Veracidad (% de Recuperacin) Incertidumbre Intervalo de trabajo

80% - 120% 35 %

50

250 mgCaCO3/L

102

Tabla 2.3: Parmetros y objetivos de validacin del mtodo para la determinacin de la Conductividad
PARMETRO Linealidad/Funcin respuesta Lmite de Deteccin Lmite de Cuantificacin Precisin (repetibilidad reproducibilidad) OBJETIVO ESTABLECIDO No aplica No aplica 147 y/o CVr CVR

15 % 20 % CVR

20 %

Veracidad (% de Recuperacin) Incertidumbre Intervalo de trabajo

80% - 120% 35 %

147

- 12,8

Tabla 2.4: Parmetros y objetivos de validacin del mtodo para la determinacin de DBO5
PARMETRO Linealidad/Funcin respuesta Lmite de Deteccin Lmite de Cuantificacin Precisin (repetibilidad reproducibilidad) Veracidad (% de Recuperacin) Incertidumbre Intervalo de trabajo 2 2 mg/L y/o CVr CVR OBJETIVO ESTABLECIDO No aplica 3 15 % 20 %

80% - 120% 35 %

500 mg/L

103

Tabla 2.5: Parmetros y objetivos de validacin del mtodo para la determinacin de Slidos Totales Disueltos
PARMETRO Linealidad/Funcin respuesta Lmite de Deteccin Lmite de Cuantificacin Precisin (repetibilidad reproducibilidad) Veracidad (% de Recuperacin) Incertidumbre Intervalo de trabajo OBJETIVO ESTABLECIDO No aplica No aplica 50 mg/L y/o CVr CVR 15 % 20 %

80% - 120% 35 % 50 - 1000 mg/L

2.2.3

DISEO EXPERIMENTAL Y ESTADSTICO

Se estableci un diseo experimental y estadstico para cada uno de los mtodos. Donde el diseo experimental, no es ms que los procedimientos que se desarrollaron para la obtencin de los parmetros de validacin, mientras que el estadstico, constituye los clculos realizados para la determinacin de estos parmetros. En las pruebas previas mencionadas en el captulo 2, se realizaron pruebas de contraste para determinar si los reactivos con los que cuenta y diariamente trabaja el laboratorio, no presentan diferencias significativas respecto al MRC empleado para la validacin. Pudiendo ser utilizados para los respectivos controles de calidad que el laboratorio debe realizar. El estadstico contrastes de significacin, as como el estadstico fue empleado para los . Los datos se obtuvieron a

partir de dos soluciones, una solucin preparada con el MRC de concentracin igual a la establecida como nivel bajo en el intervalo de trabajo de cada mtodo. La otra solucin preparada con los reactivos del laboratorio a la misma concentracin. Los reactivos empleados en esta prueba fueron: carbonato de

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sodio para el mtodo de alcalinidad total y el mtodo de slidos totales disueltos, as tambin cido glutmico y glucosa para el mtodo de DBO5. La preparacin de las soluciones patrn se detallan en el anexo IV. A continuacin se describe el diseo experimenta y estadstico para cada mtodo:

2.2.3.1

Diseo experimental y estadstico del mtodo para la determinacin de la Alcalinidad Total

2.2.3.1.1 -

Elementos que se dispone para la validacin

Solucin patrn certificada (MRC), 500 mgCaCO3/L de concentracin: preparar a tres niveles de concentracin en cada rango: Rango bajo: Nivel bajo: 5 mgCaCO3/L Nivel medio: 25 mgCaCO3/L Nivel alto: 49,9 mgCaCO3/L Rango alto: Nivel bajo: 50 mgCaCO3/L Nivel medio: 100 mgCaCO3/L Nivel alto: 250 mgCaCO3/L

Muestra real: escoger una muestra de agua residual. Procedimiento

2.2.3.1.2

a) Obtener cinco lecturas diarias (en condiciones de repetibilidad) de los tres niveles de concentracin del MRC, tanto para el rango bajo como el rango alto. Esto durante tres das distintos (en condiciones de reproducibilidad). Cada nivel de concentracin se debe preparar cada da, previo a la realizacin del anlisis. b) Obtener cinco lecturas de la muestra real en condiciones de repetibilidad. Adicionar a la muestra una cantidad de analito conocida del MRC y obtener cinco lecturas de la muestra adicionada.

105

2.2.3.1.3

Lectura

Tomar la lectura del gasto de la solucin de H2SO4 0,02 N hasta llevar la muestra analizada a un pH de 4,5. Cada muestra debe seguir el procedimiento completo. Realizar los clculos de la alcalinidad total. NOTA: Preparar la solucin tituladora por cada da de validacin, es decir, al menos tres soluciones de H2SO4 0,02 N. Valorar cada solucin siguiendo el procedimiento descrito en el anexo I. 2.2.3.1.4 Tratamiento estadstico

Calcular la veracidad (% de Recuperacin) en cada nivel con las lecturas obtenidas en el literal a) del procedimiento. Calcular el % de Recuperacin de los datos obtenidos en el literal b) Realizar el anlisis simple de la varianza de las lecturas obtenidas en el literal a). Determinar la precisin, %CVr y %CVR en cada nivel. Calcular la incertidumbre de medida asociada a cada nivel.

2.2.3.2

Diseo experimental y estadstico del mtodo para la determinacin de la Conductividad

2.2.3.2.1 -

Elementos que se dispone para la validacin

Soluciones patrn certificada (MRC), 147 S/cm y 12,8 mS/cm de conductividad.

2.2.3.2.2

Procedimiento

a) Obtener cinco lecturas diarias (en condiciones de repetibilidad) de los dos niveles de conductividad, esto durante tres das distintos (en condiciones de reproducibilidad).

106

2.2.3.2.3

Lectura

Tomar las lecturas del equipo. Cada muestra debe seguir el procedimiento completo. 2.2.3.2.4 Tratamiento estadstico

Calcular la veracidad (% de Recuperacin) en cada punto con las lecturas obtenidas. Realizar el anlisis simple de la varianza de las lecturas obtenidas para la determinacin de la precisin, %CVr y %CVR en cada punto. Calcular la incertidumbre de medida asociada a cada punto.

2.2.3.3 2.2.3.3.1 -

Diseo experimental y estadstico para el mtodo de DBO5 Elementos que se dispone para la validacin

Solucin patrn certificada (MRC), 200 mg/L de concentracin: preparar a tres niveles de concentracin: Nivel bajo: 2 mg/L Nivel medio: 200 mg/L Nivel alto: 500 mg/L

Muestra real: escoger una muestra de agua residual Procedimiento

2.2.3.3.2

a) Obtener cinco lecturas diarias (en condiciones de repetibilidad) de cada nivel de concentracin del MRC, esto durante tres das distintos (en condiciones de reproducibilidad). Cada nivel de concentracin se debe preparar cada da previo a la realizacin del anlisis. b) Obtener cinco lecturas de la muestra real en condiciones de repetibilidad. Adicionar a la muestra una cantidad de analito conocida del MRC y obtener cinco lecturas de la muestra adicionada.

107

2.2.3.3.3

Lectura

Tomar las lecturas del gasto de la solucin de tiosulfato 0,025 M. Cada muestra debe seguir el procedimiento completo. Calcular el DBO5 de las muestras analizadas. NOTA: Preparar la solucin tituladora por cada da de validacin, es decir, al menos tres soluciones de tiosulfato 0,025 M. Valorar cada solucin siguiendo el procedimiento descrito en el anexo III. 2.2.3.3.4 Tratamiento estadstico

Calcular la veracidad (% de Recuperacin) en cada nivel con las lecturas obtenidas en el literal a) del procedimiento. Calcular el % de Recuperacin de los datos obtenidos en el literal b) Realizar el anlisis simple de la varianza de las lecturas obtenidas en el literal a). Determinar la precisin, %CVr y %CVR en cada nivel. Calcular la incertidumbre de medida asociada a cada nivel.

2.2.3.4

Diseo experimental y estadstico para el mtodo de Slidos Totales Disueltos

2.2.3.4.1 -

Elementos que se dispone para la validacin

Solucin patrn certificada (MRC), 1000 mg/L de concentracin: preparar a dos niveles de concentracin: Nivel bajo: 50 mg/L Nivel medio: 500 mg/L Nivel alto: 1000 mg/L

Muestra real: escoger una muestra de agua residual.

108

2.2.3.4.2

Procedimiento

a) Obtener cinco lecturas diarias (en condiciones de repetibilidad) de cada nivel de concentracin del MRC, esto durante tres das distintos (en condiciones de reproducibilidad). Cada nivel de concentracin se debe preparar cada da previo a la realizacin del anlisis. b) Obtener cinco lecturas de la muestra real en condiciones de repetibilidad. Adicionar a la muestra una cantidad de analito conocida del MRC y obtener cinco lecturas de la muestra adicionada. 2.2.3.4.3 Lectura

Tomar las lecturas del peso inicial y final de los crisoles. Cada muestra debe seguir el procedimiento completo. Calcular los STD de las muestras analizadas. 2.2.3.4.4 Tratamiento estadstico

Calcular la veracidad (% de Recuperacin) en cada nivel con las lecturas obtenidas en el literal a) del procedimiento. Calcular el % de Recuperacin de los datos obtenidos en el literal b) Realizar el anlisis simple de la varianza de las lecturas obtenidas en el literal a). Determinar la precisin, %CVr y %CVR en cada nivel. Calcular la incertidumbre de medida asociada a cada nivel.

2.2.4

EJECUCIN DE LOS ENSAYOS DISEADOS

Una vez que se eligieron los mtodos de anlisis a validar, se establecieron los procedimientos que aseguren el buen funcionamiento de los mtodos, se establecieron los parmetros y objetivos de validacin, se calibraron los equipos necesarios, se prepararon los objetos de ensayo, y finalmente, se establecieron los diseos experimentales y estadsticos para cada uno de los mtodos, se dio inicio al proceso de validacin, es decir la ejecucin de los ensayos diseados.

109

3
3.1
3.1.1

RESULTADOS Y DISCUSIONES

TRATAMIENTO ESTADSTICO DE DATOS OBTENIDOS

CONTRASTES DE SIGNIFICACIN REALIZADOS EN LAS PRUEBAS PREVIAS

En el captulo dos se refiri del por qu la necesidad de las pruebas previas para la puesta a punto de los mtodos, para la determinacin del nivel bajo de concentracin y para la determinacin de las diferencias significativas entre el MRC y los reactivos utilizados por el laboratorio. A continuacin se resumen el tratamiento estadstico realizado con los datos experimentales obtenidos en cada prueba. Para la puesta a punto del mtodo, tanto para el mtodo de la alcalinidad total como para el DBO, se realiz el contraste de significacin para la comparacin de las medias muestrales y de las varianzas, mediante el clculo de los estadstico y respectivamente. Con los resultados obtenidos, se decidi si el ensayo se realiza en un sistema abierto o cerrado para el mtodo de la alcalinidad total, y se decidi el uso o no del inhibidor de nitrificacin para el anlisis de DBO. En el ensayo de STD, no se realiz ningn contraste de significacin, bast el criterio lgico para decidir el tiempo de enfriamiento de los crisoles. Finalmente, en el ensayo de la conductividad, no realiz ninguna prueba previa, debido a la simplicidad del anlisis como ya se indic. En cuanto a las pruebas previas realizadas para determinar el nivel bajo de concentracin, se calcul el % de Recuperacin de las muestras a diferentes concentraciones preparadas y en funcin de este resultado, se decidi el nivel bajo para cada mtodo La ltima prueba realizada, fue el contraste de significacin entre el MRC y el MRI (reactivos del laboratorio), en esta prueba se calcul igualmente los estadsticos y para determinar si existen o no diferencias significativas entre las medias y las varianzas.

110

Los estadsticos

fueron calculados mediante el uso de herramientas de y

anlisis de datos que proporciona el programa de hoja de clculo de Microsoft Excel. En los anexos V y VI se describe el ejemplo de clculo para literal 3.1.2. respectivamente. El clculo del % de Recuperacin se explica ms adelante en el

3.1.2 3.1.2.1

CLCULO DE LOS PARMETROS DE VALIDACIN Determinacin de la Veracidad (% de Recuperacin)

La determinacin de la veracidad se realiz calculando el % de Recuperacin, empleando la ecuacin 1.3 descrita en el captulo uno cuando se refiri al concepto de la exactitud. % 100 [1.3]

Para la muestra real fortificada, el % de Recuperacin se calcul de igual manera empleando la ecuacin 1.3, donde la expresin, , es igual a la diferencia entre el resultado obtenido de la muestra real (agua residual) fortificada y el resultado de la muestra sin adicin. La concentracin de analito adicionada para la determinacin del % de Recuperacin, correspondi a un valor cercano o igual al nivel bajo concentracin establecido en el intervalo de trabajo, al considerarse este el nivel como el ms crtico. Al cumplirse para este el objetivo de validacin establecido, es decir, que el valor del % de Recuperacin se encuentra entre 80 y 120%, se presumir que para los niveles ms altos del intervalo de trabajo del mtodo, el % de Recuperacin tambin se encontrar dentro del intervalo establecido.

3.1.2.2

Determinacin de la Precisin (% CVr y % CVR)

La determinacin de la precisin se caracteriz por el clculo de los porcentajes de los coeficientes de variacin % CVr y % CVR, empleando las ecuaciones 1.7 y 1.8 respectivamente, descritas en el captulo 1 en el concepto de precisin.

111 % % Los valores el captulo 1. [1.4] [1.6] Donde, [1.5] Los valores de y necesarios para el clculo de y , se obtuvieron 100 100 y

[1.7] [1.8] se calcularon a partir de las ecuaciones 1.4 y 1.5 descritas en

a partir de los resultados del ANOVA de un factor realizado con ayuda de Excel. Como se indic en el captulo 1, en la prctica, este contraste puede ser calculado con ayuda de una computadora, en donde Excel tiene una opcin que realiza el clculo del ANOVA de un factor, en el anexo VII se presenta un ejemplo de clculo.

3.1.2.3

Determinacin de la Incertidumbre del Mtodo

El clculo de la incertidumbre de medida, se realiz con base a la metodologa propuesta por la ISO (Guide to the Expression of Uncertainty in Measurement, GUM), explicado en el captulo uno. A continuacin se describe el modelo de clculo de la incertidumbre de medida para cada mtodo de validacin.

3.1.2.3.1 Clculo de la Incertidumbre del mtodo para la determinacin de la alcalinidad total A partir de los clculos realizados en este modelo de clculo, se realizar el clculo de la incertidumbre de medida de los mtodos restantes, donde se har

112

referencia a las ecuaciones desarrolladas en este mtodo si su modelo de clculo as lo requiere. El modelo de clculo de la incertidumbre de medida desarrollado para la determinacin de la alcalinidad total se detalla a continuacin: Se especific el mensurando a partir de la ecuacin 2.6 (descrita en el procedimiento del mtodo), que constituye el modelo matemtico para el clculo del mensurando.
/

[2.6]

Con ayuda del diagrama causa-efecto, se identificaron las fuentes de incertidumbre, tanto las asociadas al modelo matemtico del mensurando como aquellas que no aparecen explcitamente en ella, tal como se puede observar en la figura 3.1.

Fig 3.1: Diagrama causa-efecto para identificar las fuentes de incertidumbre del mtodo para la determinacin de la alcalinidad total Se evaluaron las fuentes de incertidumbre identificadas en el diagrama para evitar las duplicaciones al considerarlas nuevamente. De esta evaluacin se hallaron las siguientes observaciones: El volumen valorado tanto del cido sulfrico, solucin de NaOH, , como de la

, fueron volmenes iguales de 5 mL de

acuerdo con el procedimiento de valoracin descrito en el anexo I. Ambos volmenes fueron medidos utilizando el mismo material volumtrico, pipeta

113

volumtrica de 5 mL. Al evaluar la contribucin de cada componente, ambos se determinaran empleando la ecuacin 3.11 (descrita ms adelante en este modelo), y al tratarse del mismo material volumtrico utilizado, la contribucin de cada componente sera la misma. Con este reparo, slo se consider la contribucin debida al volumen del cido, manera la duplicacin de las fuentes de incertidumbre. El volumen gastado de la solucin de NaOH, solucin de ftalato cido de potasio, , como de la , que corresponden a los y evitar de esta

volmenes gastados en la estandarizacin del cido sulfrico y del NaOH respectivamente, fueron medidos empleando el mismo material volumtrico, una bureta de 10 mL de acuerdo con el procedimiento de estandarizacin descrito en el anexo I. Los volmenes gastados se esperaran sean iguales en las respectivas titulaciones (ya que ambas soluciones tienen la misma concentracin 0,02 N e igual volumen a titular de 5 mL, como se indic en el prrafo anterior). La contribucin de cada componente se calculara empleando la ecuacin 3.10 (descrita ms adelante), y, al tratarse nuevamente del mismo material volumtrico ocupado, las contribuciones seran idnticas. Por tanto, slo se consider la contribucin del volumen de KHP, , y evitar as la duplicacin de las fuentes de incertidumbre.

Una vez identificadas y evaluadas las fuentes de incertidumbre, se procedi a la cuantificacin de los componentes, expresados como incertidumbres estndar para su combinacin, tal como se indica a continuacin: A: Analista, Incertidumbre estndar tipo A, asociada a los errores aleatorios en la mediciones debido a la variabilidad de las condiciones ambientales y del propio analista. Se calcul a partir de la combinacin de la desviacin estndar de repetibilidad y de reproducibilidad expresada como asociada de acuerdo a la ecuacin 3.1 [3.1] . Se calcul la incertidumbre estndar

114

B: Procedimiento, Estuvo asociada a las contribuciones a la incertidumbre de los instrumentos de medida, utilizados para la estimacin del mensurando. La incertidumbre combinada del procedimiento se calcul aplicando la ley de propagacin de incertidumbre (de acuerdo a la ecuacin 1.39), al modelo matemtico para el clculo del mensurando definido por la ecuacin 2.6, obtenindose la siguiente expresin

[3.2]

Donde: Incertidumbre en la medida del volumen de cido Incertidumbre de la concentracin de cido Incertidumbre en la medida del volumen de muestra Derivando parcialmente la ecuacin 2.6 respecto a cada una de las variables, se obtuvieron los coeficientes de sensibilidad y posteriormente se determinaron las contribuciones de cada componente de incertidumbre: ecuacin 3.2. [3.3] , y de la

[3.4]

[3.5] B.1: Incertidumbre en la medida del volumen de cido, : Esta componente

estuvo relacionada con varias fuentes de incertidumbre, en funcin del instrumento de medida utilizado, una bureta de 10 mL. De acuerdo a la informacin disponible del material volumtrico, las contribuciones a la incertidumbre consideradas fueron las siguientes:

115

1) La incertidumbre de la calibracin del material volumtrico,

a que cualquier instrumento de medida debe ser calibrado para garantizar la trazabilidad de los resultados que proporciona. Su contribucin se calcul a partir de los datos de la incertidumbre expandida, la ecuacin 1.51, tomando el valor mximo de y del factor de cobertura, reportado en el certificado , proporcionados en el certificado de calibracin del instrumento, empleando de calibracin, para que la incertidumbre corresponda a cualquier lectura que se tome con el instrumento, obtenindose la siguiente expresin

. Debido

[3.6]

2) La incertidumbre de correccin,

. Debido a que no se aplic la ,

correccin del certificado a los valores obtenidos por el equipo. Su contribucin se calcul a partir de los datos de las correcciones, proporcionados en el certificado de calibracin, empleando la ecuacin 1.52, tomado el valor mximo de las correcciones reportadas en el certificado de calibracin, para que la incertidumbre corresponda a cualquier lectura que se tome con el instrumento, obtenindose la siguiente expresin

[3.7]

Para que la incertidumbre de ambos componentes,

corresponda a cualquier lectura que se tome con el instrumento, se consider tanto para la ecuacin 1.51 como para la ecuacin 1.52, el valor mximo de y de las correcciones reportadas en el certificado de calibracin. . Debido a la diferencia entre la

3) La incertidumbre de temperatura,

temperatura de calibracin del instrumento y la temperatura en que se realiz la medida. Su contribucin se calcul a partir de la ecuacin 1.55, donde el valor de Procedimiento , fue igual a 2,1 Especfico PEC/CICAM/05 10 . (Este valor fue tomado del del laboratorio, donde se

encontraba establecido). Para el valor de , la temperatura de calibracin se tom del certificado de calibracin y la temperatura de medida se consider igual a 20 (temperatura normal de trabajo reportada por el laboratorio). El C

116

valor de

correspondi al volumen del instrumento, en este caso fue igual al

volumen de la bureta, obtenindose as la siguiente expresin

[3.8] . Debido al criterio de medida

4) La incertidumbre del criterio de medida,

considerado en funcin de la apreciacin del analista al reportar la lectura del volumen de cido gastado, como se indic en el procedimiento del mtodo. Su contribucin se calcul considerando una distribucin triangular, debido a la evidencia de que la probabilidad es ms alta para los valores en el centro del intervalo (divisin de escala de la bureta). Por tanto, se calcul de acuerdo a la ecuacin 3.9.

[3.9] , se

La incertidumbre combinada asociada a la medida del volumen de cido, la ecuacin 1.40), obtenindose la siguiente expresin.

calcul por la suma geomtrica de las incertidumbres individuales (de acuerdo a

[3.10]

La expresin 3.10, se generaliz para el clculo de toda componente de incertidumbre, relacionada a una medida de volumen utilizando una bureta; tanto para el mtodo de alcalinidad total como para cualquier mtodo, que de acuerdo a su procedimiento emple este instrumento. B.2: Incertidumbre en la medida del volumen de muestra, componente al igual que en el clculo anterior para : Esta

, estuvo relacionada con

varias fuentes de incertidumbre, en funcin del instrumento de medida utilizado, un matraz aforado. De acuerdo a la informacin disponible del material volumtrico, para su clculo se tomaron las mismas contribuciones a la incertidumbre consideradas en el clculo de , esto implica, las mismas ecuaciones de clculo descritas, con las siguientes indicaciones:

117

La incertidumbre de calibracin del material volumtrico, ecuacin 1.51, la incertidumbre de correccin, correccin

empleando la ecuacin y de la

, empleado la

1.52. Para el clculo de estas componentes existe un valor nico de

, reportada en el certificado de calibracin del instrumento,

naturalmente debido a que un matraz aforado no tiene divisin de escala a diferencia de la bureta y finalmente la incertidumbre de temperatura, empleando la ecuacin 3.8. El valor de como ya se explic. El valor de criterio de medida , como el de , fueron calculados

, que corresponde al volumen del instrumento,

en este caso fue igual al volumen de aforo del matraz. La incertidumbre del no se consider para el clculo de esta incertidumbre, debido a la ausencia de escala en el instrumento. La incertidumbre combinada asociada a la medida del volumen de muestra, individuales, obtenindose la siguiente expresin. [3.11] ,

se calcul de igual manera por la suma geomtrica de las incertidumbres

La ecuacin 3.11 se generaliz para el clculo de toda componente de incertidumbre, relacionada a una medida de volumen utilizando un matraz aforado o pipeta volumtrica; tanto para el mtodo de alcalinidad total como para cualquier mtodo, que de acuerdo a su procedimiento emple este instrumento. Se entiende que los clculos se realizarn a partir de los datos proporcionados del respectivo certificado de calibracin de acuerdo al instrumento utilizado, pero con las mismas referencias descritas para esta ecuacin. B.3: Incertidumbre de la concentracin del cido, combinada asociada a la concentracin del cido, : La incertidumbre

, se calcul a partir de la

ecuacin 2.7 descrita en el procedimiento del mtodo, de donde se obtuvo la expresin 3.9 sin necesidad de aplicar la ley de propagacin de incertidumbre al modelo matemtico de donde evidentemente se hubiera obtenido la misma expresin.

118 50.000 Donde: Incertidumbre de la normalidad del cido B.3.1: Incertidumbre de la normalidad del cido, : La estandarizacin de la

[3.12]

solucin de cido sulfrico, se realiz en dos etapas de acuerdo al procedimiento descrito en el anexo I. Combinando las ecuaciones I.1 y I.3 se especific el modelo matemtico para el clculo de donde [3.13] En la evaluacin de las fuentes de incertidumbre de la figura 3.1, se explic que las contribuciones debidas al obtenindose la ecuacin 3.14. [3.14] La incertidumbre combinada asociadas a la normalidad del cido, , se calcul y al no se consideraron. Con estas observaciones, de la ecuacin 3.13 se eliminaron estos trminos obtenindose la siguiente expresin,

aplicando la ley de propagacin de incertidumbre al modelo matemtico.

[3.15]

Donde: Incertidumbre de la normalidad de la solucin de KHP Incertidumbre en la medida del volumen gastado de la solucin de KHP Incertidumbre en la medida del volumen del cido valorado

119

Derivando parcialmente la ecuacin 3.14 respecto a cada una de las variables y se obtuvieron los coeficientes de sensibilidad y posteriormente se calcul la contribucin de las componentes de incertidumbre: ecuacin 3.15. [3.16] , y de la

[3.17]

[3.18] B.3.1.1: Incertidumbre en la medida del volumen gastado de la solucin de KHP, : Esta componente se calcul de acuerdo a la ecuacin 3.10, ya que estuvo relacionada a una medida de volumen utilizando una bureta.

[3.19] :

B.3.1.2: Incertidumbre en la medida del volumen de cido valorado,

Esta componente se calcul de acuerdo a la ecuacin 3.11, ya que estuvo relacionada una medida de volumen utilizando una pipeta volumtrica.

[3.20] : La ,

B.3.1.3: Incertidumbre de la normalidad de la solucin de KHP, incertidumbre combinada asociada a la normalidad de la solucin de KHP,

se calcul aplicando la ley de propagacin de incertidumbre a la ecuacin I.2 (descrita en el anexo I) que constituye la expresin matemtica para el clculo de . [I.2] De la ecuacin I.2 se obtuvo la siguiente expresin

120

[3.21]

Donde: Incertidumbre en la pesada de KHP Incertidumbre en la medida del volumen preparado de KHP Derivando parcialmente la ecuacin I.2 respecto a cada una de las variables y se obtuvieron los coeficientes de sensibilidad y posteriormente se cuantific la contribucin de las componentes: y de la ecuacin 3.21.

[3.22]

[3.23] B.3.1.3.1: Incertidumbre en la pesada de KHP, : Esta componente estuvo

relacionada con varias fuentes de incertidumbre, en funcin del instrumento de medida utilizado, una balanza analtica, as como del patrn pesado. Las contribuciones a la incertidumbre consideradas fueron: 1. La incertidumbre de la calibracin de la balanza,

. Debido a que

cualquier instrumento de medida debe ser calibrado para garantizar la trazabilidad de los resultados que proporciona, tal como se indic en la incertidumbre de calibracin del material volumtrico. Su contribucin se calcul a partir de los datos de la incertidumbre expandida, cobertura, empleando la ecuacin 1.51.

y del factor de

, proporcionados en el certificado de calibracin de la balanza,

[1.51] , Debido a que la balanza se va

2. La incertidumbre de deriva,

descalibrando con el paso del tiempo, por lo cual, la correccin calculada en

121

la calibracin puede haber variado ya que con el paso del tiempo la balanza se va descalibrando. Su contribucin se calcul a partir de los valores obtenidos de las correcciones de los dos ltimos certificados de calibracin consecutivos de la balanza, para el valor de ecuacin 1.54.
| |

, empleando la

[1.54] . Debido a la diferencia entre la

3. La incertidumbre de temperatura,

temperatura de calibracin de la balanza y la temperatura en que se pes la muestra. Su contribucin se calcul a partir de la ecuacin 1.55, donde el valor de Procedimiento , fue igual a 2,0 Especfico PEC/CICAM/05 10 ( ). (Este valor fue tomado del del laboratorio, donde se

registros de la temperatura reportados en el cuarto de balanza del laboratorio). El valor de ecuacin

encontraba establecido). El valor de , fue igual a 3 (de acuerdo a los C, correspondi en este caso al peso de la masa

patrn igual a 10 g de acuerdo al certificado de calibracin, obtenindose la

[3.24] . Debido a que esta interviene en la

4. La incertidumbre de resolucin,

medida de la masa a determinar. Su contribucin se calcul a partir de la ecuacin 1.56. El valor de resolucin corresponde a valor del dgito menos significativo de la balanza igual a 0,001 g.

[3.25] . Su contribucin se calcul a , y del factor de cobertura, ,

La incertidumbre de la calibracin del patrn, partir de los datos de la incertidumbre expandida,

proporcionados en el certificado de calibracin del MRC, empleando la ecuacin 1.51. El valor de la incertidumbre proporcionada en el certificado est expresada en %, por tanto, la ecuacin 1.51 se multiplic por el peso de KHP, , para

122

obtener el resultado de esta contribucin en g como las dems contribuciones. Se obtuvo as la ecuacin 3.26 para el clculo de la incertidumbre del patrn,
%

. [3.26]

La incertidumbre combinada del peso de KHP,

, se calcul por la suma

geomtrica de las incertidumbre individuales, obtenindose la siguiente expresin.

[3.27]

La expresin 3.27, se emplear para el clculo de toda componente de incertidumbre, relacionada a una medida de masa; tanto para este mtodo de alcalinidad total, como para cualquier mtodo de acuerdo a su procedimiento. B.3.1.3.2: Incertidumbre en la medida del volumen preparado de KHP, :

Esta componente se calcul de acuerdo a la ecuacin 3.11, ya que estuvo relacionada a una medida de volumen utilizando un matraz aforado.

[3.28]

C: MRC, Estuvo asociada a las contribuciones a la incertidumbre debidas a la preparacin de la solucin patrn. Primero se especific el modelo matemtico para el clculo de la concentracin preparada a partir de la ecuacin 2.20 descrita en el literal 2.1.5, de la cual se obtuvo la siguiente expresin.

[3.29]

La incertidumbre combinada asociada a la preparacin de la solucin patrn, , se calcul aplicando la ley de propagacin de incertidumbre a la ecuacin 3.29, obtenindose la siguiente expresin.

123

[3.30]

Donde:

Incertidumbre de la concentracin de la solucin patrn certificada Incertidumbre en la medida de la alcuota tomada Incertidumbre en la medida del volumen preparado

Derivando parcialmente la ecuacin 3.29 respecto a cada una de las variables y se obtuvieron los coeficientes de sensibilidad y posteriormente se determin la contribucin de las componentes de incertidumbre:

de la ecuacin 3.30.

[3.31]

[3.32]

[3.33]

C.1: Incertidumbre de concentracin de la solucin patrn certificada,

: Se calcul a partir de los datos de la incertidumbre expandida,

,y

del factor de cobertura, , proporcionados en el certificado de calibracin del MRC, empleando la ecuacin 1.51. El valor de la incertidumbre proporcionada en el certificado est expresada en %, por tanto, la ecuacin 1.5| se multiplic por el valor de la concentracin, contribucin en mgCaCO3/L como las dems contribuciones. Se obtuvo as la ecuacin 3.34 para el clculo de la incertidumbre de concentracin,

, para obtener el resultado de esta .

124
%

[3.34]

C.2: Incertidumbre en la medida de la alcuota tomada,

: Esta

componente se calcul de acuerdo a la ecuacin 3.11, ya que estuvo relacionada a una medida de volumen utilizando un matraz aforado o una pipeta graduada segn el nivel de concentracin preparado de acuerdo al procedimiento descrito en el anexo IV.

[3.35] : Esta

C.3: Incertidumbre en la medida del volumen preparado,

componente se calcul de acuerdo a la ecuacin 3.11, ya que estuvo relacionada a una medida de volumen utilizando un matraz aforado segn el nivel de concentracin preparado de acuerdo al procedimiento descrito en el anexo IV.

[3.36]

Una vez cuantificados todos los componentes de incertidumbre de medida: , y , identificados en el diagrama causa-efecto mostrado

en la figura 3.1. Se calcul la incertidumbre combinada total del mtodo, ecuacin 1.39), obtenindose la siguiente expresin.

por la suma geomtrica de las componentes individuales (de acuerdo a la

[3.37] , empleando la

Se calcul el valor de nmero efectivo de grados de libertad, ecuacin 1.48. De la tabla 1.3 se tom el valor de , para

= 95,45%.

[1.48]

Finalmente, la incertidumbre expandida,

, se calcul empleando la ecuacin

1.48, considerando que el mensurando sigue una distribucin de Student.

125

[1.49]

3.1.2.3.2 Clculo de la incertidumbre de calibracin del medidor de conductividad Se especific el mensurando a partir de la expresin 2.9 (descrita en el procedimiento del mtodo), que constituye el modelo matemtica para el clculo del mensurando.

[2.9]

Con ayuda del diagrama causa-efecto, se identificaron las fuentes de incertidumbre, tanto las asociadas al modelo matemtica del mensurando como aquellas que no aparecen explcitamente en l, tal como se puede observar en la figura 3.2.

Fig 3.2: Diagrama causa-efecto para identificar las fuentes de incertidumbre de calibracin del medidor de conductividad Se evaluaron las fuentes de incertidumbre identificadas en el diagrama, concluyndose que no existe ninguna duplicacin. Se procedi entonces, a la cuantificacin de los componentes, expresados como incertidumbres estndar para su combinacin, tal como se indica a continuacin:

126

A: Analista, Incertidumbre estndar tipo A, asociada con los errores aleatorios en la mediciones debido a la variabilidad de las condiciones ambientales y del propio analista. Se calcul a partir de la desviacin estndar de repetibilidad empleando la ecuacin 1.27 obtenindose la siguiente expresin

[3.38]

B: Procedimiento, Estuvo asociada a las contribuciones a la incertidumbre del equipo de medida utilizado para la estimacin del mensurando. De acuerdo al modelo matemtico para su clculo definido por la expresin 2.9, la incertidumbre de conductividad de la muestra es igual a la incertidumbre de conductividad leda, esto es, igual a la lectura proporcionada por el equipo de medida, de acuerdo a ecuacin 3.39.

[3.39]

De acuerdo a la informacin que se tiene del equipo, se consider como contribucin a la incertidumbre escala digital. Esta se calcul a partir de la ecuacin 1.56. El valor de la resolucin se tom de las especificaciones del fabricante de acuerdo al rango. Se obtuvo as la siguiente expresin.

la resolucin de lectura en

[3.40]

C: MRC, Estuvo asociada a la incertidumbre de la solucin patrn empleada. Se clculo a partir de los datos de la incertidumbre expandida, 1.51 obtenindose la siguiente expresin [3.41] , y del factor de cobertura, , proporcionados en el certificado de calibracin del MRC, empleando la ecuacin

127

Se calcul la incertidumbre combinada de calibracin,

por la suma

geomtrica de las componentes individuales obtenindose la siguiente expresin.

[3.42] , empleando la

Se calcul el valor de nmero efectivo de grados de libertad, ecuacin 1.48. De la tabla 1.3 se tom el valor de , para

= 95,45%.

[1.48]

La incertidumbre expandida de calibracin

, se calcul empleando la ecuacin

1.49, considerando que el mensurando sigue una distribucin de Student.

[1.49]

Se calcul el valor de correccin para cada punto que de acuerdo a la definicin dada en el captulo uno, la correccin es igual al negativo del error sistemtico, como se toma el valor absoluto, la correccin es igual en valor al sesgo calculado con la ecuacin 1.1, de acuerdo a la siguiente expresin | | [3.43]

La incertidumbre de uso para cada punto calibrado, se consider igual a la suma de los valores absolutos de la correccin y la incertidumbre, de acuerdo a la ecuacin 3.44 (INS, 2008). | | | | [3.44]

3.1.2.3.3 Clculo de la incertidumbre del mtodo para la determinacin de la conductividad La especificacin del mensurando ya se explic en el clculo de la incertidumbre de calibracin. La figura 3.3 muestra las fuentes de incertidumbre identificadas,

128

tanto las asociadas al modelo matemtica del mensurando como aquellas que no aparecen explcitamente en l.

Fig 3.3: Diagrama causa-efecto para identificar las fuentes de incertidumbre para la determinacin de la conductividad Posteriormente, se procedi a la cuantificacin de los componentes expresados como incertidumbres estndar para su combinacin, tal como se indica a continuacin: A: Analista, Incertidumbre estndar tipo A, asociada con los errores aleatorios en la mediciones debido a la variabilidad de las condiciones ambientales y del propio analista. Se calcul de acuerdo a la siguiente expresin [3.45] B: Procedimiento, Como ya se explic en el clculo de la incertidumbre de calibracin, esta componente estuvo asociada a las contribuciones a la incertidumbre del equipo de medida. Las contribuciones que se consideraron en funcin de la informacin del medidor de conductividad fueron:

129

1. La incertidumbre de la calibracin del medidor de conductividad,

Debido a que cualquier instrumento de medida debe ser calibrado para garantizar la trazabilidad de los resultados que proporciona, tal como se ha indicado anteriormente. Su contribucin se calcul a partir de los datos obtenidos en el clculo de la incertidumbre de calibracin del medidor, ya explicada, empleando la ecuacin 1.51.

[1.51] . Debida a la exactitud de instrumento de

2. La incertidumbre de deriva,

medida. Su contribucin se calcul empleando la ecuacin 1.53. El valor de la expresado en %, por tanto se multiplic a la ecuacin 1.53 el valor de la conductividad de la solucin patrn, de acuerdo a la ecuacin 3.46
%

exactitud fue tomada de la informacin del fabricante, el mismo que estaba

[3.46]

C: MRC, Se calcul como se indic en el clculo de la incertidumbre de calibracin del medidor de conductividad empleando la ecuacin 3.41 [3,41] La incertidumbre combinada del mtodo,

se calcul por la suma

geomtrica de las componentes individuales de acuerdo a la ecuacin 3.32. [3.47]

Los clculos posteriores se realizaron siguiendo el modelo de clculo de la incertidumbre del mtodo establecido para la determinacin de la alcalinidad total.

130

3.1.2.3.4 Clculo de la incertidumbre del mtodo en el ensayo para la determinacin de DBO5 De acuerdo al procedimiento del mtodo, existen dos casos para determinar el DBO5 de las muestras, el primero se refiere cuando es necesario realizar diluciones de la muestra y el segundo cuando no se requiere de dilucin. A continuacin se describe el primer caso. Se especific el mensurando a partir de la ecuacin 2.17 (descrita en el procedimiento del mtodo), que constituye el modelo matemtica para el clculo del mensurando.

[2.17]

Con ayuda del diagrama causa-efecto, se identificaron las fuentes de incertidumbre, tanto las asociadas al modelo matemtico del mensurando como aquellas que no aparecen explcitamente en l, tal como se puede observar en la figura 3.4.

Fig 3.4: Diagrama causa-efecto para identificar las fuentes de incertidumbre de calibracin del medidor de conductividad Se evaluaron las fuentes de incertidumbre identificadas en el diagrama, concluyndose que no existe ninguna duplicacin. Se procedi entonces, a la

131

cuantificacin de los componentes, expresados como incertidumbres estndar para su combinacin, tal como se indica a continuacin: A: Analista, Incertidumbre estndar tipo A, asociada a los errores aleatorios en la mediciones debido a la variabilidad de las condiciones ambientales y del propio analista. Se calcul a partir de la desviacin estndar de repetibilidad de acuerdo a la ecuacin 3.48. [3.48] B: Procedimiento, Estuvo asociada a las contribuciones a la incertidumbre de los instrumentos de medida, utilizados para la estimacin del mensurando definido por la ecuacin 2.17. En esta ecuacin, la diferencia , as como la diferencia , son medidas de volumen utilizando el mismo instrumento de medida, que en este caso, se refiere al uso de bureta. Por esta razn, se reemplaz en la ecuacin 2.17 , para evitar la duplicacin de la contribucin a la incertidumbre de la bureta utilizada. Con esta consideracin, la ecuacin 2.17 queda segn la ecuacin 3.49 para muestras que requieren dilucin

[3.49]

La incertidumbre combinada asociada al procedimiento, se calcul aplicando la ley de propagacin de incertidumbre a la ecuacin 3.49, obtenindose la siguiente expresin

[3.50] Donde: Incertidumbre en la medida del OD

132

Incertidumbre en la medida del volumen de aforo Incertidumbre en la medida del volumen de dilucin Incertidumbre del factor de la solucin valorante Derivando parcialmente la ecuacin 3.49 respecto a cada una de las variables, se obtuvieron los coeficientes de sensibilidad y posteriormente se determin la contribucin de cada componente de incertidumbre: ecuacin 3.50. [3.51] , , y de la

[3.52]

[3.53]

[3.54] B.1: Incertidumbre en la medida de OD, : De acuerdo al procedimiento

empleado para la determinacin del OD, descrito en el anexo II, el valor de OD se determin a partir del gasto de una solucin valorante, la cual fue medida con ayuda de una bureta, por tanto, sta componente se calcul de acuerdo a la ecuacin 3.10, referida al uso de este instrumento obtenindose la siguiente expresin

[3.55] : Esta componente

B.2: Incertidumbre en la medida del volumen de aforo,

debido a la falta de calibracin del instrumento de medida utilizado, una probeta de 1000 mL, se calcul a partir de la tolerancia del instrumento dividida para 3 de acuerdo a la ecuacin 3.56, donde el valor de la tolerancia fue igual a 5 mL.

[3.56]

133

B.3: Incertidumbre en la medida del volumen de dilucin,

: Esta

componente se calcul de acuerdo a la ecuacin 3.11, ya que estuvo relacionada a una medida de volumen utilizando una pipeta aforada o graduada, de acuerdo al procedimiento de preparacin de las soluciones patrn descritas en el anexo IV.

[3.57] : La incertidumbre

B.4: Incertidumbre del factor de la solucin valorante,

combinada asociada al factor de acuerdo a su expresin matemtica definido por la ecuacin 2.18, se calcul de acuerdo a la siguiente expresin.
,

[2.18]

De esta ecuacin se obtiene la siguiente expresin.

,

[3.58]

Donde: Incertidumbre de la normalidad real de la solucin de Tiosulfato B.4.1: Incertidumbre de la normalidad real de la solucin de Tiosulfato, : Se calcul aplicando la ley de propagacin al modelo matemtico para el clculo de la definido por la ecuacin III.3. [III.3] De esta ecuacin se obtuvo la siguiente expresin

[3.59]

134

Donde: Incertidumbre de la normalidad de la solucin de Dicromato Incertidumbre en la medida del volumen de la solucin de Dicromato tomado para la valoracin Incertidumbre en la medida del volumen gastado de la solucin de Tiosulfato Derivando parcialmente la ecuacin III.3 respecto a cada una de las variables y se obtuvieron los coeficientes de sensibilidad de la ecuacin y posteriormente se calcul la contribucin de las componentes de incertidumbre: de la ecuacin 3.59. [3.60] , y

[3.61]

[3.62] B.4.1.1: Incertidumbre en la medida de volumen gastado de la solucin de Tiosulfato, : Esta componente se calcul de acuerdo a la ecuacin 3.10,

ya que estuvo relacionada a una medida de volumen utilizando una bureta.

[3.63]

B.4.1.2: Incertidumbre en la medida de volumen tomado de la solucin de Dicromato, : Esta componente se calcul de acuerdo a la ecuacin 3.11, ya que estuvo relacionada a una medida de volumen utilizando una pipeta aforada.

[3.64]

135

B.4.1.3: Incertidumbre de la normalidad de la solucin de Dicromato,

Estuvo asociada a las contribuciones a la incertidumbre a la preparacin de la solucin 0,025 N, definida por la ecuacin III.2 de acuerdo al procedimiento de valoracin del tiosulfato descrito en el anexo III. Aplicando la ley de propagacin de incertidumbre a esta ecuacin se calcul la incertidumbre combinada. [III.2] De esta ecuacin se obtuvo la siguiente expresin:

[3.65]

Donde: Incertidumbre de la normalidad de la solucin patrn certificada de Dicromato Incertidumbre en la medida de la alcuota tomada de la solucin patrn Incertidumbre en la medida del volumen preparado de la solucin de Dicromato Derivando parcialmente la ecuacin III.2 respecto a cada una de las variables se obtuvieron los coeficientes de sensibilidad y posteriormente se calcul la contribucin de las componentes de incertidumbre: ecuacin 3.65. [3.66] y de la

[3.67]

[3.68] B.4.1.3.1: Incertidumbre de la normalidad de la solucin patrn certificada de Dicromato, : Se calcul a partir de los datos de la incertidumbre

136

expandida,

, y del factor de cobertura, , proporcionados en el certificado de

calibracin del MRC, empleando la ecuacin 1.51. El valor de preparada, obtenindose la siguiente expresin
%

porcentaje, para ser multiplicado por el valor de la normalidad de la solucin

, se lo expresa en

[3.69]

B.4.1.3.2: Incertidumbre en la medida de la alcuota tomada de la solucin patrn Dicromato, acuerdo al anexo III.

: Esta componente se calcul de acuerdo a la ecuacin

3.11, ya que estuvo relacionada a una medida de volumen utilizando probeta de

[3.70]

B.4.1.3.3: Incertidumbre en la medida de volumen preparado de la solucin de Dicromato, : Se calcul de acuerdo a la ecuacin 3.11, ya que estuvo relacionada a una medida de volumen utilizando un matraz aforado de acuerdo al procedimiento descrito en el anexo III.

[3.71]

Para el segundo caso, correspondiente al nivel de 2 mg/L de concentracin, el modelo matemtico en este caso estuvo definido por la ecuacin 2.16, en donde de igual manera se realiz el cambio de indicado anteriormente. De esta manera se obtuvo la siguiente expresin.

, por

[3.72]

Para calcular la incertidumbre combinada del procedimiento se aplic igualmente la ley de propagacin de incertidumbre al modelo matemtico, ecuacin 3.72

[3.73]

137

Derivando parcialmente la ecuacin 3.72 respecto a cada una de las variables, se obtuvieron los coeficientes de sensibilidad de la ecuacin 3.73. [3.74] [3.75] La contribucin a la incertidumbre de cada componente: 3.55 y 3.58 respectivamente. C: MRC, En el caso del nivel medio y alto de concentracin, donde no se realiz dilucin de la solucin patrn certificada, la incertidumbre del MRC, a la

fueron

calculadas tal como ya se indic en el primer caso empleando las ecuaciones

fue calculada igual

que se explica ms adelante. ,

Para el nivel bajo de 2 mg/L de concentracin, la incertidumbre del MRC,

estuvo asociada a las contribuciones a la incertidumbre debido a la preparacin de la solucin final. Primero se especific el modelo matemtico para el clculo de la concentracin preparada a partir de la ecuacin 2.20 descrita en el literal 2.1.5, obtenindose la siguiente expresin.

[3.76]

La incertidumbre combinada asociada a la preparacin de la solucin patrn, , se calcul aplicando la ley de propagacin de incertidumbre a la ecuacin 3.76

[3.77]

138

Donde:

Incertidumbre de la concentracin de la solucin patrn certificada Incertidumbre en la medida de la alcuota tomada de la solucin patrn certificada Incertidumbre en la medida del volumen preparado de la solucin patrn final

Derivado parcialmente la ecuacin 3.76 respecto a cada una de las variables y se obtuvieron los coeficientes de sensibilidad y se calcul la contribucin de las componentes de incertidumbre: ecuacin 3.77.

de la

[3.78]

[3.79]

[3.80]

C.1: Incertidumbre de concentracin de la solucin patrn certificada,

: Se calcul a partir de los datos de la incertidumbre expandida,

,y

del factor de cobertura, , proporcionados en el certificado de calibracin del MRC, empleando la ecuacin 1.51. El valor de ecuacin 3.81.

para ser multiplicado por el valor de la concentracin preparada de acuerdo a

%

, se lo expresa en porcentaje,

[3.81]

C.2: Incertidumbre en la medida de la alcuota tomada,

: Se

calcul de acuerdo a la ecuacin 3.11, ya que estuvo relacionada a una medida de volumen utilizando una pipeta aforada segn el procedimiento descrito en el anexo IV.

139

[3.82] : Se

C.3: Incertidumbre en la medida del volumen preparado,

calcul de acuerdo a la ecuacin 3.11, ya que estuvo relacionada a una medida de volumen utilizando un matraz aforado, de acuerdo al procedimiento descrito en el anexo IV.

[3.83] se calcul por la suma

La incertidumbre combinada del mtodo,

geomtrica de las componentes individuales de acuerdo a la ecuacin 3.84. [3.84]

Todos los clculos posteriores se realizaron siguiendo el modelo de clculo de la incertidumbre del mtodo para la determinacin de la alcalinidad total.

3.1.2.3.5 Clculo de la incertidumbre del mtodo para la determinacin de slidos totales disueltos Se especific el mensurando a partir de la ecuacin 2.19 (descrita en el procedimiento del mtodo), que constituye el modelo matemtica para el clculo del mensurando.
/

[2.19]

Con ayuda del diagrama causa-efecto, se identificaron las fuentes de incertidumbre, tanto las asociadas al modelo matemtica del mensurando como aquellas que no aparecen explcitamente en l, tal como se puede observar en la figura 3.5.

140

Fig 3.5: Diagrama causa-efecto para identificar las fuentes de incertidumbre del mtodo para la determinacin de la alcalinidad total Se evaluaron las fuentes de incertidumbre identificadas en el diagrama, concluyndose que no existe ninguna duplicacin. Se procedi entonces, a la cuantificacin de los componentes expresados como incertidumbres estndar para su combinacin, tal como se indica a continuacin: A: Analista, Incertidumbre estndar tipo A, asociada a los errores aleatorios en la mediciones debido a la variabilidad de las condiciones ambientales y del propio analista. Se calcul de acuerdo a la ecuacin 3.85 [3.85] B: Procedimiento, Estuvo asociada a las contribuciones a la incertidumbre de los instrumentos de medida, utilizados para la estimacin del mensurando definido por la ecuacin 2.19. En esta ecuacin, la diferencia , son medidas de masa empleando , para el mismo equipo de medida, que en este caso, se refiere al uso de una balanza analtica Por esta razn, se reemplaz en la ecuacin 2.19 esta consideracin, la ecuacin 2.19 queda segn la ecuacin 3.86. evitar la duplicacin de la contribucin a la incertidumbre debido a la balanza. Con

141
/

[3.86]

La incertidumbre combinada asociada al procedimiento, se calcul aplicando la ley de propagacin de incertidumbre a la ecuacin 3.86, obtenindose la siguiente expresin.

[3.87]

Donde: Incertidumbre en la medida de masa Incertidumbre en la medida del volumen de muestra Derivando parcialmente la ecuacin 3.86 respecto a cada una de las variables, se obtuvieron los coeficientes de sensibilidad y posteriormente determinar la contribucin de cada componente de incertidumbre: y de la ecuacin 3.87 [3.88]

[3.89] B.1.1: Incertidumbre en la medida de masa, : Esta componente se calcul de

acuerdo a la ecuacin 3.27, debido a que estuvo relacionada a una medida de masa. Considerando iguales, tanto las ecuaciones como los datos proporcionados para el clculo de cada contribucin. No se incluy en este clculo la contribucin debida al patrn, ya que sta contribucin es analizada ms adelante. Se obtuvo as la siguiente ecuacin 3.90.

[3.90] : Esta

B.1.2: Incertidumbre en la medida del volumen de muestra, a un matraz aforado.

componente se calcul de acuerdo a la ecuacin 3.11, ya que estuvo relacionada

142

[3.91]

C: MRC,

En el caso del nivel alto de concentracin no se realiz dilucin de la solucin patrn certificado de acuerdo al anexo IV, la incertidumbre del MRC, en este caso fue igual a la

que se determina ms adelante, donde

Para los niveles bajo y medio de concentracin, donde se realiz dilucin de la solucin patrn como se describe en el anexo IV, la incertidumbre del MRC, , estuvo asociada a las contribuciones a la incertidumbre debido a la preparacin de la solucin patrn. Primero se especific el modelo matemtico para el clculo de la concentracin preparada a partir de la ecuacin 2.20 descrita en el literal 2.1.5, obtenindose la siguiente expresin.
/
/ / /

[3.92]

La incertidumbre combinada asociada a la preparacin de la solucin patrn, , se calcul aplicando la ley de propagacin de incertidumbre a la ecuacin 3.92

[3.93] Donde:

Incertidumbre de la concentracin de la solucin patrn certificada Incertidumbre en la medida de la alcuota tomada Incertidumbre en la medida del volumen preparado

143

Derivando parcialmente la ecuacin 3.92 respecto a cada una de las variables y se obtuvieron los coeficientes de sensibilidad y posteriormente se calcul la contribucin de las componentes de incertidumbre:

de la ecuacin 3.93.

[3.94]

[3.95]

[3.96]

C.1: Incertidumbre de concentracin de la solucin patrn certificada,

: Se calcul empleando la ecuacin 1.51, con los datos proporcionados

%

en el certificado de calibracin del MRC de acuerdo a la ecuacin 3.97

[3.97]

C.2: Incertidumbre en la medida de la alcuota tomada,

: Esta

componente se calcul de acuerdo a la ecuacin 3.11, ya que estuvo relacionada a una medida de volumen utilizando un matraz aforado o pipeta volumtrica segn el nivel de concentracin preparado de acuerdo al procedimiento descrito en el anexo IV.

[3.98] : Esta

C.3: Incertidumbre en la medida del volumen preparado,

componente se calcul de acuerdo a la ecuacin 3.11, ya que estuvo relacionada a una medida de volumen utilizando un matraz aforado de acuerdo al procedimiento descrito en el anexo IV.

[3.99]

144

La incertidumbre combinada de medida,

se calcul por la suma

geomtrica de las componentes individuales de acuerdo a la ecuacin 3.100.

[3.100]

Los clculos posteriores se realizaron siguiendo el modelo de clculo de la incertidumbre del mtodo establecido para la determinacin de la alcalinidad total.

3.1.2.4

Determinacin del Lmite de Deteccin

Se determin el lmite de deteccin a partir de los datos obtenidos del blanco empleando la ecuacin 1.9 descrita en el captulo uno. 3 3.1.2.5 Determinacin del Lmite de Cuantificacin [1.9]

Se estableci en funcin de los resultados obtenidos de los parmetros de validacin para el nivel bajo de concentracin.

3.1.2.6

Determinacin del Intervalo de trabajo

El intervalo de trabajo qued definido, en funcin de los resultados obtenidos de los parmetros de validacin, los cuales deban cumplir con los objetivos propuestos en el captulo 2.

3.2
3.2.1

DISCUSIN DE RESULTADOS
PRUEBAS PREVIAS

Los resultados obtenidos en las pruebas previas realizadas: 1) para la puesta a punto de los mtodos, 2) para la determinacin del nivel bajo de concentracin y

145

3) para el contraste de significacin entre el MRC y MRi, se presentan a continuacin.

3.2.1.1

Resultados de las pruebas previas realizadas para el mtodo de alcalinidad total

3.2.1.1.1 Prueba previa para la puesta a punto del mtodo Como se indic en el captulo dos, para esta prueba se analiz una muestra de 62,5 mgCaCO3/L de concentracin en un sistema abierto y cerrado. Para decidir si la diferencia entre las dos medias muestrales de los resultados proporcionados por ambos sistemas son las mismas, es decir, para contrastar la hiptesis nula , se calcul el estadstico y . Los resultados obtenidos con ayuda de Excel se presentan en la tabla 3.1. Los valores experimentales obtenidos en la puesta a punto del mtodo, se presentan en el anexo VIII. valor experimental de | | igual a 0,2 es menor que el valor crtico de Como se puede observar en la tabla 3.1, para un nivel de significacin 0,05, el :

igual a 2,78

para un contraste de una cola, ya que de antemano se presumi que el sistema abierto presentara un sesgo negativo en comparacin con los resultados obtenidos con el sistema cerrado debido a la posible solubilidad del CO2 del aire. Sin embargo, el resultado para un contraste de una cola prob que la diferencia entre las dos medias no fue significativa al nivel del 5%; es decir, no existi evidencia de que el anlisis en sistema abierto presente un sesgo negativo significativo respecto al sistema cerrado. En consecuencia se acept la hiptesis nula que indic que no existieron diferencias significativas entre las medias muestrales proporcionadas por ambos adicionalmente el valor de la probabilidad | | sistemas. Excel proporcion 0,2) = 0,43 como se puede

observar en la tabla 3.1. El valor de esta probabilidad es muy superior a 0,05, por tanto esto indic que la diferencia no fue significativa a un nivel del 5% como ya mencion.

146

Tabla 3.1: Valores obtenidos de los estadsticos y en el contraste de significacin entre el anlisis en un sistema abierto y cerrado para el mtodo de alcalinidad total
Prueba t para dos muestras suponiendo varianzas desiguales Muestras: soluciones analizadas en Sist. Abierto y Cerrado Concentracin: 62,5 mgCaCO3/L Resultados Media Varianza Observaciones Diferencia hipottica de las medias Grados de libertad Estadstico t P(T<=t) una cola Valor crtico de t (una cola) P(T<=t) dos colas Valor crtico de t (dos colas) Sist. Cerrado 59,97 0,28 3 0 4 0,2 0,43 2,13 0,85 2,78 Sist. Abierto 59,89 0,26 3

Prueba F para varianzas de dos muestras Resultados Media Varianza Observaciones Grados de libertad F P(F<=f) una cola Valor crtico para F (una cola) Sist. Cerrado 59,97 0,28 3 2 1,08 0,48 19,00 Sist. Abierto 59,89 0,26 3 2

Igualmente, se calcul el valor del estadstico , para probar si la diferencia entre las dos varianzas muestrales proporcionadas por ambos sistemas era significativa, es decir, para probar tabla 3.1, para un nivel de significacin 1,08 es menor que el valor crtico de : . Como se puede observar en la 0,05, el valor experimental de igual a igual a 19 para un contraste de una cola, solo para mayor a uno. El resultado prob

debido a que como se indic anteriormente, Excel calcula el valor de una cola, es decir, para obtener un valor de

que el sistema cerrado no es ms preciso que el abierto, es decir, se acept la hiptesis nula de que no existieron diferencias significativas entre las varianzas

147

muestrales a un nivel del 5%. Asimismo, como se puede observar en la tabla 3.1, Excel proporcion el valor de la probabilidad a un nivel del 5%. Con estos resultados, se verific que no existieron diferencias significativas entre el anlisis en un sistema abierto o cerrado para la determinacin de la alcalinidad total. Razn por la cual, se decidi realizar este ensayo en un sistema abierto, con la intensin de facilitar el desarrollo del mismo, tal como fue especificado en el procedimiento del mtodo. 3.2.1.1.2 Prueba previa para la determinacin del nivel bajo de concentracin Se realiz el anlisis de tres muestras de 1, 3 y 5 mgCaCO3/L de concentracin. Para establecer el nivel bajo del mtodo, se calcul el % de Recuperacin de las mediciones realizadas, cuyos resultados obtenidos se presentan en la tabla 3.2. Los valores experimentales obtenidos en esta prueba, se presentan en el anexo VIII. Como se puede observar en la tabla 3.2, para las concentraciones de 1 y 3 mgCaCO3/L, se obtuvieron valores del % de Recuperacin fuera del intervalo establecido en los objetivos de validacin, es decir, fuera del 80% - 120%. Sin embargo para la muestra de 5 mgCaCO3/L de concentracin, el % de Recuperacin obtenido se encontr dentro de este intervalo. En funcin de este resultado, se estableci el valor del nivel bajo igual a 5 mgCaCO3/L, tal como fue especificado en los objetivos de validacin del mtodo. Tabla 3.2: % de Recuperacin obtenidos en la determinacin del nivel bajo de concentracin para el mtodo de alcalinidad total
Anlisis del nivel bajo de concentracin 1 mgCaCO3/L Repeticiones Concentracin % de 3 mgCaCO3/L Concentracin % de 5 mgCaCO3/L Concentracin % de

1,03)

0,48. Puesto que esta

probabilidad es muy superior a 0,05, se prob que la diferencia no fue significativa

(mgCaCO3/L) Recuperacin (mgCaCO3/L) Recuperacin (mgCaCO3/L) Recuperacin 1 2 3 2,0 2,0 2,0 203,0 203,0 203,0 4,1 4,3 4,3 135,3 143,8 143,8 5,1 5,6 5,3 101,5 111,7 106,6

148

3.2.1.1.3 Prueba previa para el contraste de significacin entre el MRC y el MRi En esta prueba se analizaron dos muestras de igual concentracin, 5 mgCaCO3/L preparadas a partir de MRC y del MRi. Para decidir si la diferencia entre las medias muestrales, as como la diferencia entre las varianzas proporcionadas por ambas muestras era significativa, se calcul el estadstico el contraste de significacin se presentan en el anexo VIII. el valor experimental de | | igual a 1,83 es menor que el valor crtico de Como se puede observar en la tabla 3.3, para un nivel de significacin | | 0,05, igual a y . Los resultados obtenidos se presentan en la tabla 3.3. Los valores experimentales obtenidos en

2,36 para un contraste de dos colas, se compara con este valor de dos colas ya que no se tuvo una idea preconcebida de los resultados que se obtendran. Este resultado indic que la diferencia entre las dos medias no fue significativa al nivel del 5%. El valor de la probabilidad 1,83) = 0,11 fue superior a 0,05, lo que confirm que la diferencia no fue significativa a un nivel del 5%. Tabla 3.3: Valores obtenidos de los estadsticos y en el contraste de significacin entre el MRC y el MRi para el mtodo de alcalinidad total
Prueba t para dos muestras suponiendo varianzas desiguales Muestras: soluciones preparadas con MRC y MRi Concentracin: 5 mgCaCO3/L Resultados Media Varianza Observaciones Varianza agrupada Diferencia hipottica de las medias Grados de libertad Estadstico t P(T<=t) una cola Valor crtico de t (una cola) P(T<=t) dos colas Valor crtico de t (dos colas) MRi 5,13 0,07 5 0,049 0 7 -1,83 0,06 1,89 0,11 2,36 MRC 5,38 0,03 5

149

Tabla 3.3: Valores obtenidos de los estadsticos y en el contraste de significacin entre el MRC y el MRi para el mtodo de alcalinidad total Continuacin
Prueba F para varianzas de dos muestras Resultados Media Varianza Observaciones Grados de libertad F P(F<=f) una cola Valor crtico para F (una cola) MRi 5,13 0,07 5 4 2 0,26 6,39 MRC 5,38 0,03 5 4

Con estos resultados, se comprob al igual que en la puesta a punto del mtodo, que no existieron diferencias significativas entre el MRC y el MRi, para la determinacin de la alcalinidad total. Por tanto, se estableci que el laboratorio para sus respectivos controles de calidad, puede emplear como MRi el reactivo de carbonato de sodio empleado en este contraste de significacin.

3.2.1.2

Resultados de las pruebas previas realizadas para el mtodo de DBO5

3.2.1.2.1 Prueba previa para la puesta a punto del mtodo En esta prueba se analiz una muestra de 20 mg/L de concentracin usando un inhibidor de nitrificacin (piridina) y sin el uso del mismo. De igual manera de calcularon los estadstico : y para comprobar las hiptesis nulas, respectivamente. Los resultados obtenidos se presentan en la tabla : y

3.4 que se muestra a continuacin y los valores experimentales obtenidos se presentan en el anexo IX. Como se puede observar en la tabla, el valor experimental de igual a 0,34 es menor que el valor crtico de | | igual 4,30 para un contraste de dos colas, lo que indic que la diferencia entre las dos medias no fue significativa al nivel del 5%, de esta manera se acept la hiptesis nula. Igualmente el valor de la probabilidad 0,34) = 0,76, fue muy superior a 0,05 lo que indic que la diferencias no fueron significativas a un nivel del 5%.

150

Tabla 3.4: Valores obtenidos de los estadsticos y en el contraste de significacin entre el anlisis con y sin el uso del inhibidor de nitrificacin (piridina) para el mtodo de DBO5
Prueba t para dos muestras suponiendo varianzas desiguales Muestras: soluciones analizadas con y sin inhibidor Concentracin: 20 mg/L Resultados Media Varianza Observaciones Diferencia hipottica de las medias Grados de libertad Estadstico t P(T<=t) una cola Valor crtico de t (una cola) P(T<=t) dos colas Valor crtico de t (dos colas) Sin inhibidor Con inhibidor 20,94 17,34 3 0 2 0,34 0,38 2,92 0,76 4,30 20,11 0,01 3

Prueba F para varianzas de dos muestras Resultados Media Varianza Observaciones Grados de libertad F P(F<=f) una cola Valor crtico para F (una cola) Sin inhibidor Con inhibidor 20,94 17,34 3 2 1791,31 0,0006 19 20,11 0,01 3 2

Sin embargo, el valor experimental de que el valor crtico de

igual 1791,31 es extremadamente mayor

igual 19 para un contraste de una cola, esto prob que el | |

anlisis usando el inhibidor de nitrificacin es mucho ms preciso que el anlisis donde no se us este inhibidor. Por tanto, la hiptesis nula se rechaz. De hecho, de acuerdo al valor de 1791,31) 0,0006 que se puede observar en la 3.4, este es menor que el 0,05, esto indic, que la diferencia entre las desviaciones fue significativa incluso al nivel de 0,06%. En otras palabras, se rechaza la hiptesis nula, aunque sea de hecho verdadera 1 de cada 1818 veces (aproximadamente). Este resultado puede deberse a la procedencia del agua del

151

machngara utilizada para la preparacin del inculo y que fue la razn explicada en el captulo dos, por la cual se estableci el desarrollo de esta prueba previa para el mtodo. En funcin de estos resultados obtenidos, para el desarrollo del ensayo de DBO se decidi emplear el inhibidor de nitrificacin (piridina) para cualquier muestra analizada, tal como fue establecido en el procedimiento del mtodo. 3.2.1.2.2 Prueba previa para la determinacin del nivel bajo de concentracin En esta prueba se analizaron dos muestras de 1,24 y 1,98 mg/L. Se calcul el % de Recuperacin de las mediciones realizadas, cuyos valores se presentan en la tabla 3.5 que se muestra a continuacin. Los valores experimentales obtenidos se presentan en el anexo IX. Tabla 3.5: % de Recuperacin obtenidos en la determinacin del nivel bajo de concentracin para el mtodo de DBO5
Anlisis del nivel bajo de concentracin 1,24 mg/L Repeticiones Concentracin (mg/L) 1 2 3 4 0,8 0,8 1,5 0,9 % de Recuperacin 61,2 67,3 118,3 72,6 1,98 mg/L Concentracin (mg/L) 1,9 2,1 1,7 2,2 % de Recuperacin 94,6 107,3 86,9 109,9

Como se puede observar en la tabla 3.5, los valores del % de Recuperacin para 1,24 mg/L estuvieron fuera del intervalo de 80% y 120% establecido en los objetivos de validacin. Mientras que para la concentracin de 1,98 mg/L, estos valores si se encontr dentro del intervalo. Ya que el valor de la solucin patrn certificada para el desarrollo de la validacin de este mtodo, fue de 200 mg/L de concentracin, el nivel bajo de concentracin se defini igual a 2 mg/L, tal como se indic en los objetivos de validacin del mtodo.

152

3.2.1.2.3 Prueba previa para el contraste de significacin entre el MRC y MRi En esta prueba se analizaron dos muestras de igual concentracin, 2 mg/L preparadas a partir del MRC y del MRi. Los clculos de los estadsticos experimentales obtenidos en esta prueba, se presentan en el anexo IX. Tabla 3.6: Valores obtenidos de los estadsticos y en el contraste de significacin entre el MRC y el MRi para el mtodo de DBO5
Prueba t para dos muestras suponiendo varianzas desiguales Muestras: soluciones preparadas con MRC y MRi Concentracin: 2 mg/L Resultados Media Varianza Observaciones Diferencia hipottica de las medias Grados de libertad Estadstico t P(T<=t) una cola Valor crtico de t (una cola) P(T<=t) dos colas Valor crtico de t (dos colas) MRi 1,97 0,03 5 0 8 0,18 0,43 1,86 0,86 2,31 MRC 1,95 0,03 5

se

presentan en la tabla 3.6 que se muestra a continuacin. Los valores

Prueba t para dos muestras suponiendo varianzas desiguales Resultados Media Varianza Observaciones Grados de libertad F P(F<=f) una cola Valor crtico para F (una cola) MRi 1,97 0,03 5 4 1,36 0,39 6,39 MRC 1,95 0,03 5 4

Como se puede observar en la tabla 3.6, el valor experimental de | | igual a 0,18 es menor que el valor crtico de

igual a 2,31 para un contraste de dos colas, lo

que prob que la diferencia entre las dos medias no fue significativa. El valor de la

153 | |

probabilidad de

0,18) = 0,86 result muy superior a 0,05, esto confirm que la igual a 0,39 como se puede

diferencia no fue significativa a un nivel del 5%. As tambin, el valor experimental igual a 1,36 fue menor que el valor crtico de observar en la tabla 3.6. Esto prob la hiptesis nula.. El valor de la probabilidad 1,36) = 0,39 confirm que la diferencia entre las varianzas no fue significativa a un nivel del 5%. En otras palabras, lo resultados obtenidos del MRC no son ms precisos que los obtenidos con el MRi. Con estos resultados, se comprob que no existieron diferencias significativas entre el MRC y el MRi, para la determinacin de DBO. Por tanto, se estableci que el laboratorio para sus respectivos controles de calidad, puede emplear como MRi los reactivos de glucosa y cido glutmico utilizados para este contraste de significacin.

3.2.1.3

Resultados de las pruebas previas realizadas para el mtodo de STD

3.2.1.3.1 Prueba previa para la puesta a punto En esta prueba se tomaron los pesos de los crisoles a diferentes tiempos de enfriamiento. Los pesos obtenidos se presentan en la tabla 3.7 que se muestra a continuacin. Tabla 3.7: Valores obtenidos en la determinacin del tiempo de enfriamiento de los crisoles para el mtodo de STD
Tiempo de estabilizacin (min) 60 90 120 150 Pesos Crisol 1 (g) 43,8161 43,8160 43,8160 43,8160 Crisol 2 (g) 43,6336 43,6338 43,6339 43,6338 Crisol 3 (g) 43,8798 43,8801 43,8802 43,8802

Como se puede observar en la tabla 3.7, la lgica para establecer el tiempo de enfriamiento de los crisoles en el desecador, se bas en la imposibilidad de conseguir que la diferencia del ltimo dgito reportado sea igual a cero, debido a la

154

resolucin de la balanza que es igual a 0,0001 g, por tanto, de acuerdo a los pesos reportados, el tiempo de enfriamiento se estableci igual a 2 horas y media (150 minutos), tiempo en que como se puede observar en la tabla 3.7, se obtuvieron diferencias en el ltimo dgito de los pesos, que se atribuyen a la resolucin de la balanza. Este resultado fue es especificado en el procedimiento del mtodo. 3.2.1.3.2 Pruebas previa para la determinacin de nivel bajo de concentracin En esta prueba se analizaron cuatro muestras de 5, 10, 20 y 50 mg/L de concentracin. Los valores de los % de Recuperacin obtenidos, se presentan a continuacin en la tabla 3.8. Los valores experimentales obtenidos, se presentan en el anexo X. Tabla 3.8: % de Recuperacin obtenidos en la determinacin del nivel bajo de concentracin para el mtodo de STD
Anlisis del Nivel bajo de Concentracin 5 mg/L Repeticiones 1 2 3 Concentracin (mg/L) 18 18 12 20 mg/L Repeticiones 1 2 3 Concentracin (mg/L) 28 30 18 % de Recuperacin 140 150 90 (mg/L) 60 58 58 % de Recuperacin 360 360 240 (mg/L) 26 18 20 50 mg/L Concentracin % de Recuperacin 120 116 116 10 mg/L Concentracin % de Recuperacin 260 180 200

Como se puede observa en la tabla 3.8, para las concentraciones de 5, 10 y 20 mg/L se obtuvieron valores de los % de Recuperacin mucho mayores al establecido en los objetivos de validacin de 80% - 120%. Algunos incluso iguales a 360% obtenido para el nivel de 5mg/L, por mencionar el valor ms alto obtenido. Sin embargo, para la concentracin de 50 mg/L, se obtuvieron valores de los %

155

de Recuperacin dentro del intervalo establecido, aunque uno de estos valores se encontr justo en el lmite superior igual a 120, sin embargo de acuerdo a los objetivos puede llegar hasta este valor. En funcin de estos resultados, el nivel bajo de concentracin se defini igual a 50 mg/L tal como fue especificado en los objetivos de validacin del mtodo. 3.2.1.3.3 Pruebas previas para el contraste de significacin del MRC y el MRi En esta prueba se analizaron dos muestras de igual concentracin, 50 mg/L presentan en la tabla 3.9. Como se puede observar, el valor experimental de | | preparadas a partir de MRC y del MRi. Los estadsticos igual a 0,35 fue menor que el valor crtico de | | y aceptndose la hiptesis nula. Tal como se observa, el valor de la probabilidad 0,35) = 0,73 es muy superior a 0,05, esto indic que la diferencia no es significativa a un nivel del 5%. Tabla 3.9: Valores obtenidos de los estadsticos y en el contraste de significacin entre el MRC y el MRi para el mtodo de STD
Estadsticos t y F obtenidos en la hoja de clculo de Excel Prueba t para dos muestras suponiendo varianzas desiguales Muestras: soluciones preparadas con MRC y MRi Concentracin: 50 mg/L Resultados Media Varianza Observaciones Diferencia hipottica de las medias Grados de libertad Estadstico t P(T<=t) una cola Valor crtico de t (una cola) P(T<=t) dos colas Valor crtico de t (dos colas) MRC 62,8 3,2 5 0 8 -0,35 0,37 1,86 0,73 2,31 MRi 63,2 3,2 5

obtenidos, se

igual a 2,31 para un contraste de

dos colas, lo que prob que la diferencia entre las dos medias no fue significativa

156

Tabla 3.9: Valores obtenidos de los estadsticos y en el contraste de significacin entre el MRC y el MRi para el mtodo de STD Continuacin
Prueba F para varianzas de dos muestras Resultados Media Varianza Observaciones Grados de libertad F P(F<=f) una cola Valor crtico para F (una cola) MRC 62,8 3,2 5 4 1 0,5 6,39 MRi 61,6 3,2 5 4

Asimismo, el valor experimental de

igual a 1 tal como se puede observar en la igual a 6,39, se prob as tambin que 1) = 0,5 confirm que la diferencia

tabla 3.9, es menor que el valor crtico de nivel del 5%. El valor de la probabilidad anexo X.

no existieron diferencias significativas entre las varianzas de los resultados a un no es significativa. Los valores experimentales obtenidos se presentan en el

En funcin de estos resultados, se comprob que no existieron diferencias significativas entre el MRC y el MRi, para la determinacin de STD. Por tanto, se estableci que el laboratorio para sus respectivos controles de calidad, puede emplear como MRi el reactivo de carbonato de sodio empleado en este contraste de significacin.

3.2.2

PARMETROS DE VALIDACIN

A partir de los valores experimentales obtenidos en la ejecucin del diseo experimental descrito para cada mtodo, se calcularon los parmetros de validacin: % de Recuperacin, precisin e incertidumbre establecidos para la aceptacin de la validacin de los mtodos, de acuerdo al cumplimiento de los objetivos. Los resultados obtenidos en cada mtodo se presentan a continuacin.

157

3.2.2.1

Resultados de los parmetros de validacin obtenidos en el mtodo de alcalinidad total

Todos

los

valores

experimentales

obtenidos,

as

como

los

clculos

correspondientes de los parmetros de validacin del mtodo, se presentan en el anexo XI. 3.2.2.1.1 Veracidad (% de Recuperacin) En la tabla 3.10 se presentan los % de Recuperacin calculados, a partir de las mediciones realizadas en cada nivel de concentracin definidos para el intervalo de trabajo. Tabla 3.10: Resultados de la veracidad (% de Recuperacin) obtenidos en el mtodo de alcalinidad total
Valor de referencia (mgCaCO3/L) 5 25 49,9 50 100 250 Valor medio (mgCaCO3/L) 5,21 24,46 47,31 49,13 97,22 240,20 % de Recuperacin 104,24 97,85 94,81 98,27 97,22 96,08

Como se puede observar en la tabla 3.10, los valores obtenidos del % de Recuperacin tanto para el rango bajo como para el rango alto, se encontraron dentro del intervalo de 80% y 120% establecido en los objetivos de validacin del mtodo. Para el rango bajo los valores obtenidos variaron desde el 94,81% hasta el 104,24%; mientras que, para el rango alto los valores variaron desde el 96,08% hasta el 98,27%, como se puede observar en la tabla 3.10. Los valores ms alejado al 100% corresponden a los niveles altos de concentracin en ambos rangos del mtodo. En la tabla 3.11 se presentan los % de Recuperacin calculados a partir de las mediciones realizadas para la muestra real fortificada. Como se puede observar, los porcentajes de recuperacin obtenidos se encontraron entre el 80,25% hasta el 96,30% para el rango bajo. Para el rango

158

alto los valores obtenidos fueron desde el 83,46% hasta el 87,74%. Los porcentajes de recuperacin se encontraron dentro del intervalo establecido del 80% al 120%. Tabla 3.11: % de Recuperacin obtenidos de una muestra real fortificada en el mtodo de alcalinidad total
Rango bajo Repeticiones 1 2 3 4 5 Rango alto Repeticiones 1 2 3 4 5 Adicin Matriz (mgCaCO3/L) 13,9 14,2 13,9 13,9 14,2 Adicin Matriz (mgCaCO3/L) 66,3 66,3 65,3 65,3 66,3 = = 5 mgCaCO3/L % de Recuperacin 96,30 80,25 85,60 90,95 80,25

Matriz + MRC (mgCaCO3/L) 18,7 18,2 18,2 18,5 18,2

50 mgCaCO3/L % de Recuperacin 85,60 83,46 87,74 85,60 83,46

Matriz + MRC (mgCaCO3/L) 109,1 108,1 109,1 108,1 108,1

3.2.2.1.2 Precisin (% CVr y % CVR) En la tabla 3.12 se presentan los resultados relevantes calculados para la determinacin de la precisin del mtodo. De acuerdo a lo explicado en el captulo uno, el ANOVA de un factor fue diseado para contrastar la hiptesis nula, . De acuerdo a los resultados obtenidos por el ANOVA de un igual a 1,22, 3,04, 3,26, 3,51, 2,94 y 2,94 para los igual a 3,89 (para todos los niveles). factor calculados en la hoja de clculo de Excel que se presentan en la tabla, los valores experimentales de niveles de rango bajo, as como para los del rango alto respectivamente, fueron menores al valor crtico de Consecuentemente, se acept la hiptesis nula, es decir, la diferencia entre las medias muestrales se pudo atribuir a la presencia de errores aleatorios. El nivel :

159

de significacin

que se presenta en la tabla 3.12, es el valor calculado por

Excel, el mismo como se puede observar, en todos los casos es superior a 0,05; por tanto, la diferencia no fue significativa al nivel del 5%. Tabla 3.12: Resultados de la precisin (% CVr y %CVR) obtenidos en el mtodo de alcalinidad total
Rango bajo de trabajo Resultados F calculado F crtico CVr, % CVR, % Nivel bajo 5 mgCaCO3/L 1,22 3,89 0,33 3,02 3,04 Nivel medio 25 mgCaCO3/L 3,04 3,89 0,09 0,81 0,96 Nivel alto 49,9 mgCaCO3/L 3,26 3,89 0,07 0,61 0,74

Rango alto de trabajo Resultados F calculado F crtico CVr, % CVR, % Nivel bajo 50 mgCaCO3/L 3,51 3,89 0,06 1,04 1,26 Nivel medio 100 mgCaCO3/L 2,94 3,89 0,09 0,94 1,10 Nivel alto 250 mgCaCO3/L 2,94 3,89 0,09 0,38 0,45

Los porcentajes de CVr y CVR obtenidos en ambos rangos se encontraron dentro de los valores establecidos en los objetivos de validacin, %CVr %CVR 15% y 20%. Los valores mximos obtenidos correspondieron a los niveles bajos

de ambos rangos, es decir, para 5 y 50 mgCaCO3/L, tal como se puede observar en los resultados presentados en la tabla 3.12. 3.2.2.1.3 Incertidumbre En la tabla 3.13 se presentan los valores de la incertidumbre relativa del mtodo obtenidos en cada nivel de concentracin para el rango alto y bajo establecidos para el mtodo. Como se puede observar, los mximos valores de incertidumbre relativa obtenidos iguales a 8,13% y 3,26%, correspondieron al nivel bajo de

160

concentracin para 5 mgCaCO3/L y 50 mgCaCO3/L respectivamente. Ninguno sin embargo, super el valor establecido en los objetivos de validacin valores de 35%. Los se calcularon para un nivel de confianza del 95,45%,

obtenindose valores iguales 2, tal como se puede observar en la tabla 3.13. Los valores obtenidos en los dems niveles de concentracin, se encontraron de igual manera dentro del valor establecido. Tabla 3.13: Resultados de la Incertidumbre Expandida obtenidos en el mtodo de alcalinidad total
Incertidumbre Expandida del mtodo Concentracin (mgCaCO3/L) 5 25 49,9 50 100 250

Incertidumbre Expandida, (mgCaCO3/L) 2 2 2 2 2 2 0,41 0,55 0,80 1,63 2,44 2,83 % 8,13 2,21 1,61 3,26 2,44 1,13

(mgCaCO3/L) 0,20 0,28 0,40 0,81 1,22 1,42

3.2.2.1.4 Lmite de cuantificacin De acuerdo a los resultados de los parmetros de validacin obtenidos de los niveles bajos de concentracin, el lmite de cuantificacin fue igual a 5 mgCaCO3/L y 50 mgCaCO3/L para el rango bajo y alto respectivamente. 3.2.2.1.5 Intervalo de trabajo En funcin de los ya mencionados resultados obtenidos: el % de Recuperacin, la precisin e incertidumbre, todos cumplieron con los objetivos de validacin propuestos, por tanto, el intervalo de trabajo se defini igual al establecido, es decir, de 5 a 49,9 mgCaCO3/L para el rango bajo del mtodo y de 50 a 250 mgCaCO3/L para el rango alto del mtodo.

161

3.2.2.2

Resultados de la calibracin del medidor de conductividad

En la tabla 3.14 se presentan los resultados obtenidos del clculo de la incertidumbre de calibracin del medidor de conductividad. Como se puede observar, La incertidumbre de uso obtenida en cada punto, fue 1,37 S/cm y 2,03 mS/cm para el estndar de 147 S/cm y 12,8 mS/cm respectivamente. Tabla 3.14: Resultados de la incertidumbre de calibracin de uso obtenidos para el medidor de conductividad
Incertidumbre Expandida de Calibracin de Uso Estndar 147 S/cm 12,8 mS/cm

| 2 2

| 0,30 S/cm 0,06 mS/cm

Incertidumbre Expandida % 1,37 S/cm 0,26 mS/cm 0,93 2,03

0,54 S/cm 0,10 mS/cm

En el procedimiento de calibracin descrito en el captulo dos, se estableci el criterio de aceptacin o rechazo para los valores obtenidos de la incertidumbre de calibracin, criterio que indic, si el valor de la incertidumbre obtenida es menor o igual que dos veces la exactitud del equipo, ms la incertidumbre del patrn, aceptar la calibracin. En la tabla 3.15 se presentan los valores de la incertidumbre de las soluciones patrones certificadas empleadas para la calibracin, as como el valor de la exactitud del equipo igual a 5%, valor que fue tomado del manual del equipo. Tabla 3.15: Resultados del criterio de aceptacin de la incertidumbre de calibracin de uso obtenidos para el medidor de conductividad
Estndar Exactitud Criterio Aceptacin

147 S/cm 1 S/cm 0,5 % 2,47 S/cm 1,37 S/cm Se acepta

12,8 mS/cm 0,2 mS/cm 0,5 % 0,33 mS/cm 0,26 mS/cm Se acepta

Como se puede observar en la tabla 3.15, los valores de la incertidumbre relativa fueron menores a los valores correspondientes al criterio de aceptacin o rechazo. Por tanto, se acept la calibracin del medidor de conductividad, a partir

162

de los valores obtenidos. Los valores experimentales obtenidos en la calibracin del medidor de conductividad, as como los clculos de la incertidumbre de calibracin correspondiente, se presentan en el anexo XII.

3.2.2.3

Resultados de los parmetros de validacin obtenidos en el mtodo de conductividad

Todos

los

valores

experimentales

obtenidos

as

como

los

clculos

correspondientes de los parmetros para la validacin del mtodo, se presentan en el anexo XIII. 3.2.2.3.1 Veracidad (% de Recuperacin) En la tabla 3.16 se presentan los % de Recuperacin obtenidos para los dos puntos correspondientes a los estndares utilizados en la validacin del mtodo. Como se puede observar, el valor obtenido para el estndar de 147 S/cm igual a 99,37% y el valor obtenido para el estndar de 12,8 mS/cm igual a 100,60% se encontraron dentro del intervalo del 80% al 120% establecido en| los objetivos de validacin, cabe resaltar que fueron valores muy cercanos al valor ideal del 100%, lo que indic que el mtodo tiene una buena recuperacin. Tabla 3.16: Resultados de la veracidad (% de Recuperacin) obtenidos en el mtodo de conductividad
Valor de referencia 147 S/cm 12,8 mS/cm Valor medio 146,08 S/cm 12,88 mS/cm % de Recuperacin 99,37 100,60

3.2.2.3.2 Precisin (% CVr y % CVR) a partir de los clculos del ANOVA de un factor que se presentan en el anexo XI. Los resultados de la precisin del mtodo se presentan en la tabla 3.17 obtenidos Como se puede observar en la tabla, tanto para el estndar de 147 S/cm como igual 2,23 y 1,87 para el de 12,8 mS/cm los valores experimentales de

163

respectivamente, fueron menores al valor crtico de estndares. Con este resultado, la hiptesis nula

igual a 3,89 para ambos : , fue

aceptada, lo que prob en otras palabras, que la diferencia entre las medias muestrales se debi a la presencia de los errores aleatorios. As tambin, el valor de obtenido igual a 0,15 y 0,20 para cada estndar, fue superior a 0,05, por tanto, la diferencia no fue significativa al nivel de 5%. Tabla 3.17: Resultados de la precisin (% CVr y %CVR) obtenidos en el mtodo de conductividad
Resultados F calculado F crtico % CVr % CVR Estndar 147 S/cm 2,23 3,89 0,15 0,24 0,26 12,8 mS/cm 1,87 3,89 0,20 0,19 0,20

Los valores de %CVr y % CVR iguales a 0,24 y 0,26 para el estndar de 147 S/cm y de 0,19 y 0,20 para el estndar de 12,8 mS/cm, no superaron el lmite establecido %CVr 15% y %CVR se observa en la tabla 3.17. 3.2.2.3.3 Incertidumbre Los clculos de la incertidumbre expandida del mtodo se presentan en la tabla 3.18. Los valores de la incertidumbre relativa obtenida para el punto bajo igual a 2,03% y para el punto alto igual a 4,44%, se encontraron dentro del 35% establecido en los objetivos de validacin. %. Los tal como se puede observar en la tabla 3.18. valores de se 20% en los objetivos de validacin tal como

calcularon para un nivel de confianza del 95,45%, obtenindose valores iguales 2,

164

Tabla 3.18: Resultados de la Incertidumbre Expandida obtenidos en el mtodo de conductividad

Incertidumbre Expandida del mtodo Estndar 147 S/cm 12,8 mS/cm

Incertidumbre Expandida % 2 2 2,98 S/cm 0,57 mS/cm 2,03 4,44

1,49 S/cm 0,28 mS/cm

3.2.2.3.4 Lmite de cuantificacin El lmite de cuantificacin del mtodo se estableci igual a 147 S/cm en funcin de que este nivel cumpli con los objetivos de validacin. 3.2.2.3.5 Intervalo de trabajo El mtodo de conductividad fue validado en los puntos correspondientes a los valores de conductividad de los estndares disponibles, de acuerdo a los resultados obtenidos del % de Recuperacin, precisin e incertidumbre, se acept la validacin del mtodo para el intervalo comprendido entre 147 S/cm y 12,8 mS/cm.

3.2.2.4

Resultados de los parmetros de validacin obtenidos en el mtodo de DBO5

Todos los valores experimentales, as como los clculos correspondientes de los parmetros para la validacin del mtodo, se presentan en el anexo XIV. 3.2.2.4.1 Veracidad (% de Recuperacin) En la tabla 3.19 se presentan los % de Recuperacin calculados en cada nivel de concentracin para la determinacin de la veracidad del mtodo. Como se puede observar, se obtuvo para el nivel medio el valor de recuperacin ms alejado del 100% igual a 105,91%. Para los niveles bajo y alto se obtuvieron valores de recuperacin un poco ms cercanos al 100% e iguales a 95,16% y 95,31% respectivamente. Ningn porcentaje super el 80% o 120% establecido en los

165

objetivos de validacin. La serie de diluciones necesarias para el anlisis de la muestra, es un factor influyente en el resultado, ya que como se indic en el procedimiento del mtodo, este puede provocar el ingreso de aire al sistema. Tabla 3.19: Resultados de la veracidad (% de Recuperacin) obtenidos en el mtodo de DBO5
Valor de referencia (mg /L) 2 200 500 Valor medio (mg/L) 1,90 211,82 476,53

% de
Recuperacin 95,16 105,91 95,31

En la tabla 3.20 se presentan los resultados del % de Recuperacin obtenidos del anlisis de la muestra real fortificada. Como se puede observar, los porcentajes de recuperacin obtenidos de la muestra fortificada, variaron desde el 84,48% hasta el 118,18%, encontrndose dentro del intervalo establecido del 80% al 120% en los objetivos de validacin. Estos resultados reafirmaron que la recuperacin del mtodo se encuentra dentro de los lmites establecidos. Tabla 3.20: % de Recuperacin obtenidos de una muestra real fortificada en el mtodo de DBO5
Adicin Repeticiones 1 2 3 4 5 = Matriz (mg/L) 16,4 15,6 15,5 14,2 14,3 (mg/L) 27,4 24,5 23,9 26,0 25,5 10 mg/L Matriz + MRC % de Recuperacin 109,65 89,51 84,48 118,18 111,75

3.2.2.4.2 Precisin (% CVr y % CVR) En la tabla 3.21 se presentan los resultados del clculo de la precisin del mtodo a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor, que se presentan en el anexo XIV.

166

Tabla 3.21: Resultados de la precisin (% CVr y %CVR) obtenidos en el mtodo de DBO5

Resultados F calculado F crtico % CVr % CVR Nivel bajo 2 mg/L 1,47 3,89 0,27 7,90 8,44 Nivel medio 200 mg/L 1,93 3,89 0,19 5,60 6,26 Nivel alto 500 mg/L 1,92 3,89 0,19 2,90 3,12

Como se puede observar en la tabla 3.21, los valores experimentales de no superaron el valor crtico de aceptada, :

iguales

a 1,47, 1,93 y 1,92 obtenidos para los niveles bajo, medio y alto respectivamente igual a 3,89. La hiptesis nula fue por tanto . De acuerdo a los valores del nivel de significacin

obtenidos en cada nivel, estos fueron muy superiores a 0,05, lo que prob, que la diferencia de las medias muestrales no fue significativa a nivel del 5%. Los valores de %CVr y %CVR fueron menores al 15% y 20% respectivamente establecidos en los objetivos de validacin, donde para el nivel bajo correspondi los valores ms altos obtenidos para el intervalo de trabajo del mtodo. 3.2.2.4.3 Incertidumbre Los valores de la incertidumbre expandida calculada para cada nivel de concentracin del mtodo, se presentan en la tabla 3.22 que se muestra a continuacin. Tabla 3.22: Resultados de la Incertidumbre Expandida obtenidos en el mtodo de DBO5
Incertidumbre expandida del mtodo Concentracin (mg/L) 2 200 500

Incertidumbre Expandida, (mg/L) 2 2 2 0,32 26,69 30,80 % 16,16 13,35 6,16

(mg/L) 0,16 13,35 15,40

Para el nivel bajo y medio se obtuvieron valores de la incertidumbre relativa iguales a 16,16% y 13,35% respectivamente, como se puede observar en la tabla

167

3.22. La obtencin de valores altos para ambos niveles puede deberse al hecho de que, para el nivel bajo de 2 mg/L, una diferencia en el reporte del gasto del reactivo titulante, influye considerablemente sobre el resultado de DBO, mientras que para el nivel de 200 mg/L, si bien este hecho tambin influye, aqu el factor ms influyente es el ingreso de aire al sistema. Para el nivel de 500 mg/L el valor obtenido fue igual a 6,16%, si bien ambos factores, gasto de reactivo como ingreso de aire al sistema influyen en el resultado, estos no son significativos comparado con el valor de la concentracin analizada. Finalmente, ninguno de los valores obtenidos super el establecido en los objetivos de validacin. 3.2.2.4.4 Lmite de deteccin A partir de los valores obtenidos del blanco que se presentan en la tabla 3.23 se determin el lmite de deteccin del mtodo. Como se puede observar, el valor ms bajo calculado fue igual a 0,90 mg/L, por tanto este valor se estableci como el lmite deteccin del mtodo. Tabla 3.23: Resultados del blanco para la determinacin del lmite de deteccin del mtodo de DBO5
BLANCO Valor medio Desv. estndar LD DA 1 0,99 0,23 1,68 DA 2 0,55 0,21 1,17 DA 3 0,64 0,09 0,90

3.2.2.4.5 Lmite de cuantificacin De acuerdo a los resultados obtenidos de los parmetros de validacin para el nivel bajo de concentracin, se estableci el lmite de cuantificacin igual a 2 mg/L. 3.2.2.4.6 Intervalo de trabajo En funcin de los resultados obtenidos, donde cada parmetro de validacin cumpli con los objetivos propuestos, se defini el intervalo de trabajo de 2 a 500 mg/L para el mtodo de DBO5.

168

3.2.2.5

Resultados de los parmetros de validacin obtenidos en el mtodo de STD

Todos los valores experimentales, as como los clculos correspondientes de los parmetros de validacin del mtodo, se presentan en el anexo XV. 3.2.2.5.1 Veracidad (% de Recuperacin) Los valores del % de Recuperacin obtenidos en cada nivel de concentracin del intervalo de trabajo del mtodo, se presentan a continuacin en la tabla 3.24. Como se puede observar, los % de Recuperacin variaron desde un 99,27% hasta el 107,48%, correspondiendo el valor ms alejado del 100% al nivel bajo de 50 mg/L. Esto se puede atribuir a la influencia que tiene la misma resolucin del equipo igual a 0,0001g, que corresponde al 4% de error relativo Tabla 3.24: Resultados de la veracidad (% de Recuperacin) obtenidos en el mtodo de STD
Valor de referencia (mg/L) 50 500 1000 Valor medio (mg/L) 53,87 512,40 992,67

% de
Recuperacin 107,73 102,48 99,27

El % de Recuperacin obtenido de la muestra real fortificada se presenta en la tabla 3.25 que se muestra a continuacin. Tabla 3.25: % de Recuperacin obtenidos de una muestra real fortificada en el mtodo de STD
Adicin Repeticiones 1 2 3 4 5 = Matriz (mg/L) 248 244 240 248 246 (mg/L) 292 292 288 290 290 50 mg/L Matriz + MRC % de Recuperacin 88 96 96 84 88

169

Como se puede observar en la tabla 3.25, el % de Recuperacin vari entre 84% al 96% cumpliendo con el valor entre el 80% y 120%. Este resultado reafirm que el mtodo proporciona valores de Recuperacin dentro del intervalo establecido en los objetivos de validacin. 3.2.2.5.2 Precisin (% CVr y % CVR) En la tabla 3.26 se presentan los resultados ms relevantes de la precisin del mtodo obtenidos a partir del clculo del ANOVA de un factor. Como se puede observar, los valores experimentales de superaron el valor crtico de calculados por el ANOVA de un factor : iguales a 1,09, 1,03 y 1,79 para los niveles bajo, medio y alto respectivamente, no igual a 3,89. La hiptesis nula, consecuentemente fue aceptada. Los valores del nivel de significacin obtenidos, fueron muy superiores a 0,05, confirmado que la diferencia de las medias muestrales segn la hiptesis nula planteada no fue significativa al nivel del 5%. El %CVr y el %CVR para el nivel bajo de concentracin, fue el mayor de entre los tres niveles del rango de trabajo, mientras que el obtenido en el nivel alto fue el menor valor. Estos resultados, confirman la presuncin de que el nivel bajo es el ms crtico de todo el intervalo al obtenerse los valores ms altos en cuanto a los parmetros de validacin. Tabla 3.26: Resultados de la precisin (% CVr y %CVR) obtenidos en el mtodo de STD
Resultados F calculado F crtico % CVr % CVR Nivel bajo 50 mg/L 1,09 3,89 0,37 8,74 8,84 Nivel medio 500 mg/L 1,03 3,89 0,39 1,48 1,49 Nivel alto 1000 mg/L 1,79 3,89 0,21 1,28 1,36

3.2.2.5.3 Incertidumbre Los valores de la Incertidumbre Expandida obtenidos en cada nivel de concentracin se presentan en la tabla 3.27.

170

Tabla 3.27: Resultados de la Incertidumbre Expandida obtenidos en el mtodo de STD

Incertidumbre expandida del mtodo Concentracin (mg/L) 50 500 1000

Incertidumbre Expandida, (mg/L) 2 2 2 10,54 16,17 29,23 % 21,08 3,23 2,92

(mg/L) 5,27 8,09 14,62

Como se puede observar en la tabal 3.27, para el nivel bajo de 50 mg/L de concentracin se obtuvo el valor ms alto de la incertidumbre relativa igual a 21,08%. Este resultado tan alto puede deberse, al hecho de que al igual que en los mtodos anteriores el reporte en este caso del peso para el clculo de STD, si se considerara nicamente la influencia que tuvo la resolucin propia de la balanza igual a 0,0001 g, este valor representara un error relativo del 4% para este de concentracin, mientras que este para la concentracin de 500 mg/L correspondera a un error relativo del 0,4 % y del 0,2% para el de 1000 mg/L. sin embargo, todos los valores de la incertidumbre relativa obtenidos cumplieron con el objetivo de validacin establecido 3.2.2.5.4 Lmite de cuantificacin De acuerdo a los resultados obtenidos de los parmetros de validacin para el nivel bajo de concentracin, se estableci el lmite de cuantificacin igual a 50 mg/L. 3.2.2.5.5 Intervalo de concentracin En funcin de los resultados obtenidos de los parmetros de validacin, el intervalo de trabajo qued definido de 50 a 1000 mg/L para el mtodo de STD. 35%.

3.3

ELABORACIN DEL INFORME Y DECLARACIN DEL MTODO VALIDADO

El informe de validacin de cada mtodo fue entregado al laboratorio del CICAM siguiendo el esquema establecido en su manual de calidad. En funcin de este

171

ltimo se presentan a continuacin el resumen de los resultados obtenidos en la validacin y que consecuentemente permitieron la declararon del mtodo validado.

DECLARACIN DEL MTODO VALIDADO PARA LA DETERMINACIN DE LA ALCALINIDAD TOTAL, RANGO BAJO

CUANTITATIVO CUALITATIVO DE IDENTIFICACIN

Analito: Alcalinidad Total Unidades: mgCaCO3/L Matriz: Agua claras y residuales No aplica EXACTITUD

FUNCIN DE RESPUESTA

Nivel: concentracin 5 mgCaCO3/L 25 mgCaCO3/L 49,9 mgCaCO3/L Global

Repetibilidad %CVr 0,15 0,20 0,29 No aplica 3,04 0,81 0,61

Reproducibilidad %CVR 0,16 0,23 0,35 3,04 0,96 0,74

% de Recuperacin 104,24 97,85 94,81

U( % 8,13 2,21 1,61

LMITE DE DETECCIN (L.D.) : LMITE DE CUANTIFICACIN (L.C.) :

No aplica 5 mgCaCO3/L

SELECTIVIDAD / ESPECIFIDAD INTERFERENCIAS CONOCIDAS: Referirse a Mtodo de Titulacin, 2320 B. APHA TIPO DE INTERFERENCIA: Referirse a Mtodo de Titulacin, 2320 B APHA CORRECCIN: Referirse a Mtodo de Titulacin, 2320 B APHA INTERVALO DE TRABAJO VALIDADO: 5 - 49,9 mgcaCO3/L

CRITERIOS DE ACEPTACIN / RECHAZO: VERACIDAD % 80 < E < 120% , datos de 94,81 hasta 104,24 %; validacin aceptada INCERTIDUMBRE <= 35%, datos de 1,61 hasta 8,13 %; validacin aceptada %CVR <= 20%, datos de 0,74 hasta 3,04% ; validacin aceptada

172

DECLARACIN DEL MTODO VALIDADO PARA LA DETERMINACIN DE LA ALCALINIDAD TOTAL, RANGO ALTO

CUANTITATIVO CUALITATIVO DE IDENTIFICACIN

Analito: Alcalinidad Total Unidades: mgCaCO3/L Matriz: Agua claras y residuales No aplica EXACTITUD

FUNCIN DE RESPUESTA

Nivel: concentracin 50 mgCaCO3/L 100 mgCaCO3/L 250 mgCaCO3/L Global

Repetibilidad %CVr 0,51 0,91 0,92 No aplica 1,04 0,94 0,38

Reproducibilidad %CVR 0,62 1,07 1,08 1,26 1,10 0,45

% de Recuperacin 98,27 97,22 96,08

U( % 3,26 2,44 1,13

LIMITE DE DETECCIN (L.D.) LIMITE DE CUANTIFICACIN (L.C.)

No aplica 50 mgCaCO3/L

SELECTIVIDAD / ESPECIFIDAD INTERFERENCIAS CONOCIDAS: Referirse a Mtodo de Titulacin, 2320 B. APHA TIPO DE INTERFERENCIA: Referirse a Mtodo de Titulacin, 2320 B APHA CORRECCIN: Referirse a Mtodo de Titulacin, 2320 B APHA INTERVALO DE TRABAJO VALIDADO: 50 - 250 mgCaCO3/L

CRITERIOS DE ACEPTACIN / RECHAZO: VERACIDAD % 80 < E < 120% , datos de 96,08 hasta 98,27 %; validacin aceptada INCERTIDUMBRE <= 35%, datos de 1,13 hasta 3,26 %; validacin aceptada

%CVR <= 20%, datos de 0,45 hasta 1,26 % ; validacin aceptada

173

DECLARACIN DEL MTODO VALIDADO PARA LA DETERMINACIN DE LA CONDUCTIVIDAD

CUANTITATIVO CUALITATIVO DE IDENTIFICACIN

Analito: Conductividad Unidades: S/cm mS/cm Matriz: Agua claras y residuales No aplica EXACTITUD

FUNCIN DE RESPUESTA

Nivel: conductividad 147 S/cm 12,8 mS/cm Global

Repetibilidad %CVr 0,35 0,02 No aplica 0,24 0,19

Reproducibilidad %CVR 0,39 0,03 0,26 0,20

% de Recuperacin 99,37 100,60

U( % 2,03 4,44

LIMITE DE DETECCIN (L.D.) LIMITE DE CUANTIFICACIN (L.C.)

No aplica 147 S/cm

SELECTIVIDAD / ESPECIFIDAD INTERFERENCIAS CONOCIDAS: Referirse a Mtodo Potenciomtrico, 2510 B. APHA TIPO DE INTERFERENCIA: Referirse a Mtodo Potenciomtrico, 2510 B. APHA CORRECCIN: Referirse a Mtodo Potenciomtrico, 2510 B. APHA INTERVALO DE TRABAJO VALIDADO: 147 S/cm - 12,8 mS/cm

CRITERIOS DE ACEPTACIN / RECHAZO: VERACIDAD % 80 < E < 120% , datos 99,37 y 100,60 %; validacin aceptada INCERTIDUMBRE <= 35%, datos 2,03 y 4,44 %; validacin aceptada

%CVR <= 20%, datos 0,20 y 0,26 % ; validacin aceptada

174

DECLARACIN DEL MTODO VALIDADO PARA LA DETERMINACIN DE DBO5

CUANTITATIVO CUALITATIVO DE IDENTIFICACIN

Analito: Demanda Bioqumica de Oxgeno Unidades: mg/L Matriz: Agua claras y residuales No aplica EXACTITUD

FUNCIN DE RESPUESTA

Nivel: concentracin 2 mg/L 200 mg/L 500 mg/L Global

Repetibilidad %CVr 0,15 12,17 13,66 No aplica 7,90 5,60 2,90

Reproducibilidad %CVR 0,16 13,25 14,86 8,44 6,26 3,12

% de Recuperacin 95,16 105,91 95,31

U( % 16,16 13,35 6,16

LIMITE DE DETECCIN (L.D.) LIMITE DE CUANTIFICACIN (L.C.)

0,90 mg/L 2 mg/L

SELECTIVIDAD / ESPECIFIDAD INTERFERENCIAS CONOCIDAS: Referirse a Mtodo 5210 B. APHA TIPO DE INTERFERENCIA: Referirse a Mtodo 5210 B. APHA CORRECCIN: Referirse a Mtodo 5210 B. APHA INTERVALO DE TRABAJO VALIDADO: 2 - 500 mg/L

CRITERIOS DE ACEPTACIN / RECHAZO: VERACIDAD % 80 < E < 120% , datos de 95,16 hasta 105,91 %; validacin aceptada INCERTIDUMBRE <= 35%, datos de 6,16 hasta 16,16 %; validacin aceptada

%CVR <= 20%, datos de 3,12 hasta 8,44 % ; validacin aceptada

175

DECLARACIN DEL MTODO VALIDADO PARA LA DETERMINACIN DE STD

CUANTITATIVO CUALITATIVO DE IDENTIFICACIN

Analito: Slidos Totales Disueltos Unidades: mg/L Matriz: Agua claras y residuales No aplica EXACTITUD

FUNCIN DE RESPUESTA

Nivel: concentracin 50 mg/L 500 mg/L 1000 mg/L Global

Repetibilidad %CVr 4,72 7,62 12,55 No aplica 8,74 1,48 1,28

Reproducibilidad %CVR 4,76 7,65 13,50 8,84 1,49 1,36

% de Recuperacin 107,73 102,48 99,27

U( % 21,08 3,23 2,92

LIMITE DE DETECCIN (L.D.) LIMITE DE CUANTIFICACIN (L.C.)

No aplica 50 mg/L

SELECTIVIDAD / ESPECIFIDAD INTERFERENCIAS CONOCIDAS: Referirse a Mtodo 5240 C. APHA TIPO DE INTERFERENCIA: Referirse a Mtodo 5240 C. APHA CORRECCIN: Referirse a Mtodo 5240 C. APHA INTERVALO DE TRABAJO VALIDADO: 50 - 1000 mg/L

CRITERIOS DE ACEPTACIN / RECHAZO: VERACIDAD % 80 < E < 120% , datos de 99,27 hasta 107,73 %; validacin aceptada INCERTIDUMBRE <= 35%, datos de 2,92 hasta 21,08 %; validacin aceptada

%CVR <= 20%, datos de 1,36 hasta 8,84 % ; validacin aceptada

176

4
4.1

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

CONCLUSIONES

Para el mtodo de alcalinidad total se obtuvieron las siguientes conclusiones: En la prueba previa para la puesta a punto del mtodo, los valores de los estadsticos y iguales a 0,2 y 1,08 no superaron los valores crticos de 2,78 y 19 respectivamente para un nivel de significacin del 5%. Por lo cual se estableci realizar el ensayo para la determinacin de la alcalinidad total en sistema abierto. En la prueba previa para la determinacin del nivel bajo de concentracin del mtodo, para una concentracin de 1 mgCaCO3/L se obtuvo un % de Recuperacin igual a 203,0%, para el nivel de 3 mgCaCO3/L vari desde 135,3% hasta 143,8% y para la concentracin de 5 mgCaCO3/L se obtuvieron valores desde 101,5% hasta 111,7%, por lo cual se estableci para el nivel bajo del intervalo de trabajo la concentracin de 5mgCaCO3/L. Los valores obtenidos de los estadsticos y iguales a 1,83 y 2

respectivamente, en el contraste de significacin entre el MRi y el MRC, no superaron los valores crticos de 2,36 y 6,39 respectivamente para un nivel de significacin del 5%, probando que no existieron diferencias significativas entre ambos materiales de referencia. Se establecieron dos rangos de trabajo para la validacin del mtodo. Cada rango con tres niveles de concentracin: 5 mgCaCO3/L, 25 mgCaCO3/L y 49,9 mgCaCO3/L para el rango bajo y 50 mgCaCO3/L, 100 mgCaCO3/L y 250 mgCaCO3/L para el rango alto. En cada nivel de concentracin en cada rango se determinaron los parmetros de validacin y se comprob que cumplan con los objetivos de validacin establecidos.

177

En la determinacin de la veracidad del mtodo, para el rango bajo se obtuvieron valores del % de Recuperacin de 94,81%, 97,85% y 104,24%. En el rango alto se obtuvieron valores de 96,08%, 97,22% y 98,27% cumplindose en ambos rangos de trabajo el objetivo de validacin establecido que indicaba % de Recuperacin entre el 80% y 120%.

En la muestra real fortificada se obtuvo un % de Recuperacin entre el 80,25% al 96,30% para la adicin de 5 mgCaCO3/L y del 83,46%% al 87,74% para la adicin de 50 mgCaCO3/L cumplindose con el objetivo de validacin establecido del % de Recuperacin entre el 80% y 120%.

estadstico

contrastar la hiptesis nula, H :

En el contraste de significacin de ANOVA de un factor diseado para

iguales a 1,22, 3,04, 3,26 para los niveles de concentracin del

, los valores obtenidos del

rango bajo, y 3,51, 2,94, 2,94 para el rango alto, no superaron el valor de crtico igual 3,89 para un nivel de significacin del 5%. Con estos resultados se prob que la presencia de errores aleatorios sera la causa predominante de la discrepancia entre los valores medios, es decir, que no hubieron diferencias significativas. En la determinacin de la precisin del mtodo, los valores del %CVr obtenidos de 3,04%, 0,81% y 0,61% para el rango bajo y de 1,04%, 0,94% y 0,38% para el rango alto, cumplieron con el objetivo de validacin establecido que indicaba %CVr 15%. De la misma manera, los valores del %CVR obtenidos de 3,04%, 0,96% y 0,74% para el rango bajo y 1,26%, 1,10% y 0,45% para el rango alto, cumplieron con el objetivo de validacin que indicaba %CVR 20%.

En la determinacin de la incertidumbre relativa del mtodo, para el rango bajo se obtuvieron valores de 8,13%, 2,21% y 1,61%. Para el rango alto la incertidumbre relativa obtenida fue de 3,26%, 2,44% y 1,13% incertidumbre relativa 35%. En ambos rangos se cumpli con el objetivo de validacin establecido para la

178

El lmite de cuantificacin del mtodo se estableci igual a 5 mgCaCO3/L en funcin de los resultados obtenidos.

Al cumplirse con todos los objetivos de validacin establecidos, que especificaban: % de Recuperacin 80% - 120%, CVr% e Incertidumbre 15%, % CVR 20% 35%, el intervalo de trabajo del mtodo se estableci de 5

mgCaCO3/L a 49,9 mgCaCO3/L para el rango bajo y de 50 mgCaCO3/L a 250 mgCaCO3/L para el rango alto. Con los resultados obtenidos se procedi a la aceptacin y declaracin de la validacin del mtodo para la determinacin de la alcalinidad total, 2320 B. Mtodo de Titulacin del Standar Methods. Para el mtodo de conductividad se obtuvieron las siguientes conclusiones: Los valores obtenidos en la calibracin del medidor de conductividad para los estndares de 147 S/cm y 12,8 mS/cm fueron iguales a 1,37 S/cm y 2,03 mS/cm respectivamente. Ambos puntos cumplieron con el criterio de aceptacin establecido que indicaba que deba ser valores menores a 2,37 S/cm y 2,03 mS/cm. Por tanto se acept la calibracin del medidor de conductividad. En la determinacin de la veracidad del mtodo, para el estndar de 147 S/cm se obtuvo un % de Recuperacin del 99,37% y para el estndar de 12,8 mS/cm se obtuvo un % de Recuperacin de 100,60%. Ambos puntos cumplieron con el objetivo de validacin establecido del % de Recuperacin entre el 80% y 120%. En el contraste de significacin de ANOVA de un factor diseado para estadstico contrastar la hiptesis nula, H : , los valores obtenidos del

para 147 S/cm fue igual a 2,23 y para 12,8 mS/cm fue 1,87;. crtico igual 3,89 para un nivel de

Ambos valores no superaron el valor de

significacin del 5%. Con estos resultados se prob que la presencia de

179

errores aleatorios sera la causa predominante de la discrepancia entre los valores medios, es decir, que no hubieron diferencias significativas. En la determinacin de la precisin del mtodo, los valores del %CVr obtenidos iguales a 0,24% y 1,19% para 147 S/cm y 12,8 mS/cm respectivamente, cumplieron con el objetivo de validacin establecido que indicaba %CVr 15%. Igualmente, los valores del %CVR obtenidos de 0,26%
20%.

y 0,20% para 147 S/cm y 12,8 mS/cm respectivamente, cumplieron con el objetivo de validacin que indicaba %CVR -

En la determinacin de la incertidumbre relativa del mtodo, para el estndar de 147 S/cm se obtuvo un valor igual a 2,03%. Para el estndar de 12,8 mS/cm se obtuvo un valor igual a 4,44%. En ambos puntos se cumpli con el objetivo de validacin establecido para la incertidumbre relativa 35%.

El lmite de cuantificacin del mtodo se estableci igual a 147 S/cm L en funcin de los resultados obtenidos.

Al cumplirse con todos los objetivos de validacin establecidos, los mismos que especificaban: % de Recuperacin 80% - 120%, CVr% 20% e Incertidumbre de 147 S/cm a 12,8 mS/cm. 15%, % CVR 35%, el intervalo de trabajo del mtodo se estableci

Con los resultados obtenidos se procedi a la aceptacin y declaracin de la validacin del mtodo para la determinacin de la conductividad, 2510 B. Mtodo Potenciomtrico del Standar Methods.

Para el mtodo de DBO5 se obtuvieron las siguientes conclusiones: En la prueba previa para la puesta a punto del mtodo, se obtuvo un valor del estadstico igual a 2 que no super el valor crtico de 4,30; sin embargo, el 1791,31 fue mucho mayor que el valor crtico de 19 valor del estadstico

180

para un nivel de significacin del 5%. Por lo cual se estableci para el desarrollo del ensayo el uso del inhibidor de nitrificacin (piridina). En la prueba previa para la determinacin del nivel bajo de concentracin del mtodo, para la concentracin de 1,24 mg/L el % de Recuperacin vari desde 61,2% hasta 118,3% y para la concentracin de 1,98 mg/L se obtuvieron valores desde 86,9% hasta 107,3%, por tanto se estableci para el nivel bajo de concentracin el valor de 2 mg/L de acuerdo al estndar disponible de 200 mg/L. Los valores obtenidos de los estadsticos y en el contraste de significacin

entre el MRi y el MRC iguales a 0,18 y 1,36 respectivamente, no superaron los valores crticos de 2,32 y 6,39 para un nivel del significacin del 5%, probando que no existieron diferencias significativas entre ambos materiales de referencia. Para la validacin del mtodo se establecieron tres niveles de concentracin: 2 mg/L, 200 mg/L y 500 mg/L para cada uno de los cuales se determinaron los parmetros de validacin y se comprob que cumplan con los objetivos de validacin establecidos. En la determinacin de la veracidad del mtodo, se obtuvieron % de Recuperacin de 95,16%, 105,91 y 105,91%, cumplindose con el objetivo de validacin establecido del % de Recuperacin entre el 80% y 120%. En la muestra real fortificada se obtuvo un % de Recuperacin entre el 84,48% y 118,18% cumplindose con el objetivo de validacin establecido del % de Recuperacin entre el 80% y 120%. contrastar la hiptesis nula, H : En el contraste de significacin de ANOVA de un factor diseado para estadstico iguales a 1,47, 1,93 y 1,92 para los tres niveles de concentracin crtico igual 3,89 para un nivel de , los valores obtenidos del

establecidos, no superaron el valor de

181

significacin del 5%. Con estos resultados se prob que la presencia de errores aleatorios sera la causa predominante de la discrepancia entre los valores medios, es decir, que no hubieron diferencias significativas. En la determinacin de la precisin del mtodo en los tres niveles de concentracin, los valores del %CVr obtenidos 7,90%, 5,60% y 2,90% cumplieron con el objetivo de validacin establecido que indicaba %CVr 15%. De la misma manera, los valores del %CVR obtenidos 8,44%, 6,26% y 3,12% cumplieron con los objetivos de validacin que indicaban %CVR 20%. En la determinacin de la incertidumbre relativa del mtodo, se obtuvieron valores de 16,16%, 13,35% y 6,16%, cumpliendo con el objetivo de validacin establecido para la incertidumbre relativa 35%.

El lmite de deteccin del mtodo, se determin igual a 0,90 mg/L en funcin de los resultados obtenidos del blanco.

El lmite de cuantificacin del mtodo se estableci igual a 2 mg/L en funcin de los resultados obtenidos.

Al cumplirse con todos los objetivos de validacin establecidos que especificaban: % de Recuperacin 80% - 120%, CVr% e Incertidumbre mg/L a 500 mg/L. 15%, % CVR 20% 35%, el intervalo de trabajo del mtodo se estableci de 2

Con los resultados obtenidos se procedi a la aceptacin y declaracin de la validacin del mtodo para la determinacin del DBO5, 5210 B. Demanda Bioqumica de Oxgeno por el Mtodo Winkler del Standar Methods.

182

Para el mtodo de STD se obtuvieron las siguientes conclusiones: En la prueba previa para la puesta a punto del mtodo, se estableci dos horas y media como tiempo de enfriamiento en el desecador de los crisoles para el procedimiento de anlisis. En la prueba previa para la determinacin del nivel bajo de concentracin del mtodo, para la concentracin de 5 mg/L el % de Recuperacin vari desde 240% hasta 360%, para la concentracin de 10 mg/L vari desde 180% hasta 260%, para 20 mg/L el % de Recuperacin vari desde 90% hasta 150% y para la concentracin de 50 mg/L se obtuvieron valores desde 116% hasta 120%, por tanto se estableci para el nivel bajo la concentracin de 50 mg/L. Los valores obtenidos de los estadsticos y iguales a 0,35 y 1

respectivamente, en el contraste de significacin entre el MRi y el MRC para el mtodo, no superaron los valores crticos de 2,31 y 6,39 para un nivel de significacin del 5 %, demostrando que no existieron diferencias significativas entre ambos materiales de referencia. Para la validacin del mtodo se establecieron tres niveles de concentracin: 50 mg/L, 500 mg/L y 1000 mg/L para cada uno de los cuales se determinaron los parmetros de validacin y se comprob que cumplan con los objetivos de validacin establecidos. En la determinacin de la veracidad del mtodo, se obtuvieron % de Recuperacin de 107,73%, 102,48 y 99,27%, cumplindose con el objetivo de validacin establecido del % de Recuperacin entre el 80% y 120%. En la muestra real fortificada se obtuvo un % de Recuperacin entre el 84% y 96% cumplindose con el objetivo de validacin establecido del % de Recuperacin entre el 80% y 120%.

183

contrastar la hiptesis nula, H : estadstico

En el contraste de significacin de ANOVA de un factor diseado para

iguales a 1,79, 3,89 y 0,21 para los tres niveles de concentracin crtico igual 3,89 para un nivel de

, los valores obtenidos del

establecidos, no superaron el valor de

significacin del 5%. Con estos resultados se prob que la presencia de errores aleatorios sera la causa predominante de la discrepancia entre los valores medios, es decir, que no hubieron diferencias significativas. En la determinacin de la precisin del mtodo en los tres niveles de concentracin, los valores del %CVr obtenidos 8,74%, 1,48% y 1,36% cumplieron con el objetivo de validacin establecido que indicaba %CVr 15%. De la misma manera, los valores del %CVR obtenidos 8,44%, 1,49% y 1,36% cumplieron con los objetivos de validacin que indicaban %CVR 20%. En la determinacin de la incertidumbre relativa del mtodo, se obtuvieron valores de 21,08%, 3,23% y 2,92%, cumpliendo con el objetivo de validacin establecido para la incertidumbre relativa 35%.

El lmite de cuantificacin del mtodo se estableci igual a 50 mg/L en funcin de los resultados obtenidos.

Al cumplirse con todos los objetivos de validacin establecidos que especificaban: % de Recuperacin 80% - 120%, CVr% e Incertidumbre mg/L a 1000 mg/L. 15%, % CVR 20% 35%, el intervalo de trabajo del mtodo se estableci de 50

Con los resultados obtenidos se procedi a la aceptacin y declaracin de la validacin del mtodo para la determinacin de STD, 2540 B. Slidos Totales Disueltos secados a 180 del Standar Methods. C

184

4.2
-

RECOMENDACIONES
Se recomienda seguir los procedimientos establecidos en cada mtodo, tomado en cuenta las indicaciones que en ellos se han descrito, para asegurar la obtencin de resultados confiables.

Se recomienda prestar especial atencin en las indicaciones para el desarrollo del ensayo de DBO5 en lo referente a evitar el ingreso de aire (oxgeno) al sistema, ya que siendo este el analito cuantificado, una alteracin en su concentracin real producir datos alejados de la realidad.

Se recomienda tener en cuenta, que no todas las fuentes de incertidumbre identificadas durante la evaluacin de la incertidumbre realizan una contribucin significativa a la incertidumbre combinada, ya que en la prctica es probable que slo lo haga un pequeo nmero de ellas, las cuales tiene que analizarse con detalle para poder estimar con fiabilidad sus contribuciones.

Se recomienda tener en cuenta, que nunca debe infravalorarse la incertidumbre. En el caso de que la incertidumbre fuera muy elevada, sta deber disminuirse mejorando las etapas del mtodo analtico responsables de los componentes de incertidumbre ms elevados.

Se recomienda antes de realizar el experimento, tomar la decisin sobre si el contraste de significacin se debe realizar de una o dos colas, y no despus, cuando los resultados podran prejuzgar la eleccin.

Se recomienda asegurar que las superficies internas de los recipientes volumtricos estn suficientemente limpias antes de ser utilizadas para la ejecucin de los ensayos.

Se recomienda despus del procedimiento de limpieza general, si las paredes del recipiente no estn limpias, continuar la limpieza con mezcla de

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peroxidisulfato de amonio. Esta mezcla debe ser trabajada en campana de extraccin usando mscara protectora y guantes durante su uso y preparacin. Para los controles de calidad que el laboratorio realice, se recomienda emplear carbonato de sodio para el mtodo de alcalinidad total y STD, as como glucosa y cido glutmico para el mtodo de DBO5. Se recomienda, en funcin de los resultados obtenidos en la presente investigacin, que el laboratorio replante los objetivos de validacin establecidos para la aceptacin y declaracin de validacin del mtodo, es decir, disminuir los intervalos en funcin de los resultados obtenidos en cada mtodo.

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ANEXOS

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ANEXO I VALORACIN DE LA SOLUCIN DE CIDO SULFRICO PARA LA DETERMINACIN DE LA ALCALINIDAD TOTAL

La valoracin de la solucin de cido Sulfrico, H2SO4 0,02 N se realiza a partir de una solucin de NaOH 0,02 N, previamente valorada con una solucin de ftalato cido de potasio 0,02 N. Por tanto, la valoracin de esta solucin titulante se realiza en dos etapas: 1era ETAPA: Valoracin de la solucin de NaOH 0,02 N Para preparar una solucin de hidrxido de sodio de una determinada concentracin, se parte de hidrxido sdico slido comercial, se disuelve un peso conocido en agua destilada y se diluye a un volumen conocido. Al no ser el hidrxido sdico un patrn primario, es necesario valorar con una sustancia patrn primario como el ftalato cido de potasio (KHP, por sus siglas en ingls). Como indicador de la titulacin se emplea fenolftalena. Materiales Matraz erlenmeyer de 50 mL Bureta de 10 mL, calibrada Pipeta aforada de 5 mL, calibrada

Reactivos Solucin de NaOH 0,1 N: Pesar 4,0 g de NaOH, disolver en un vaso de precipitacin, y diluir con agua destilada a 1000 mL. Solucin de NaOH 0,02 N: Diluir 50 mL de solucin de NaOH 0,1 N con agua destilada hasta 250 mL. Solucin de ftalato cido de potasio KHP 0,02 N (99,97%): Secar aproximadamente 1 g de KHP durante 2 horas a 120 Pesar 0,4086 g de C. KHP, y disolver con agua destilada a 100 mL. Solucin de fenolftalena al 0,1% en etanol.

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Procedimiento a) Enjuagar la bureta con la solucin de KHP 0,02 N, enrasar a cero teniendo cuidado que no queden burbujas de aire en el interior de la llave o en el cuerpo de la bureta. b) Colocar en el erlenmeyer (limpio) 5 mL de NaOH 0,02 N medidos con pipeta. Aadir una gota de solucin de fenolftalena. c) Iniciar la valoracin aadiendo inicialmente sobre el erlenmeyer un volumen de la solucin de KHP prximo, por defecto al volumen terico (5 mL). Continuar la valoracin aadiendo la solucin valorante gota a gota y agitando continuamente hasta que la solucin pierda su color rosa. d) Anotar el volumen gastado de KHP, y calcular la concentracin de la solucin de NaOH preparada. Clculos La normalidad de la solucin de NaOH preparada se calcula de la ecuacin I.1. [I.1] Donde: Normalidad de la solucin de NaOH Volumen de la solucin de NaOH valorado Normalidad de la solucin de KHP Volumen de la solucin de KHP gastado El peso de KHP requeridos para la preparacin de una solucin de cualquier concentracin, en este caso 0,02 N, se calcula de la ecuacin I.2. [I.2] Donde: Normalidad de la solucin de KHP, Eq/L Peso molecular del KHP (204,223 g/mol)

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Peso del KHP, g 1000 Volumen de solucin de KHP preparado, mL Factor de conversin, Eq*mL/mol*L

2da ETAPA: Valoracin de una solucin de H2SO4 0,02 N Para preparar una solucin de una determinada concentracin se parte de la solucin de H2SO4 concentrado, comercial, y se diluye con agua destilada en un matraz aforado hasta el volumen adecuado. Al no ser el cido sulfrico un patrn primario, para conocer la concentracin exacta, se estandariza con una solucin patrn. En este caso, se utiliza una solucin de NaOH valorada con una solucin de KHP, que es un patrn primario. Como indicador de la titulacin se emplea fenolftalena. Materiales Matraz erlenmeyer de 50 mL Bureta de 10 mL, calibrada Pipeta aforada de 5 mL, calibrada

Reactivos Solucin de H2SO4 0,02 N: Diluir lentamente 1,7 mL de una solucin de cido sulfrico 6 N en 300 mL de agua destilada aproximadamente, mezclar bien y diluir a 500 mL. Solucin de NaOH 0,02 N: Se utiliza la solucin estandarizada en la 1era etapa. Solucin de fenolftalena al 0,1% en etanol.

Procedimiento a) Enjuagar la bureta con la solucin de NaOH 0,02 N, enrasar a cero teniendo cuidado que no queden burbujas de aire en el interior de la llave o en el cuerpo de la bureta.

194

b) Colocar en el erlenmeyer (limpio) 5 mL de H2SO4 0,02 N medidos con pipeta. Aadir una gota de solucin de fenolftalena. c) Valorar aadiendo inicialmente sobre el erlenmeyer un volumen de la solucin de NaOH prximo, por defecto al volumen terico (5 mL). Continuar la valoracin aadiendo el reactivo valorante gota a gota y agitando continuamente hasta que la solucin tome un color rosa, que debe persistir durante 15 o 20 segundos. d) Anotar el volumen gastado de NaOH, y calcular la concentracin de la solucin de cido sulfrico preparada. Clculos La normalidad de la solucin de H2SO4 preparada se calcula empleando la siguiente expresin [I.3] Donde: Normalidad de la solucin de H2SO4 Volumen de la solucin de H2SO4 valorado Normalidad de la solucin de NaOH valorante Volumen de la solucin de NaOH gastad Tabla II.1: Material volumtrico ocupado en la estandarizacin de la solucin de cido sulfrico Datos Volumen (mL) 5 5 100 5 5 Material volumtrico utilizado Pipeta graduada de 5 mL Bureta de 10 mL Baln aforado de 100 mL Pipeta graduada de 5 mL Bureta de 10 mL

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ANEXO II MTODO 4500-O C. MODIFICACIN DE AZIDA PARA LA DETERMINACIN DE OD

Discusin general Utilizar la modificacin de azida para la mayora de aguas residuales, diluyentes y muestras de corrientes, especialmente que contienen ms de 50 gNO2-N/L de y no ms de 1 mg de hierro ferroso/L. Deben estar ausentes otros agentes reductores u oxidantes. Si se aade 1 mL de solucin KF antes de acidificar la muestra y no se retrasa la titulacin, el mtodo es aplicable en presencia de 100 a 200 mg de hierro frrico/L. Reactivos Solucin de sulfato manganoso: disolver 480 g de MnSO4.4H2O, o 400 g MnSO4.2H2O o 364 g de MnSO4.H2O en agua destilada, filtrar y diluir a 1L. La solucin MnSO4 no debe dar color con almidn cuando se aade a una solucin acidificada de yoduro potsico (KI). Reactivo de lcali-yoduro-azida: Para muestras saturadas o menos que saturadas: Disolver 500 g NaOH (o 700 g KOH) y 135 g NI (o 150 g de KI) en agua destilada y diluir a 1 L. Anadir 10 g NaN3 disueltos en 40 mL de agua destilada. Las sales de potasio y sodio pueden intercambiarse. Este reactivo no debe dar color con la solucin de almidn cuando se diluya y acidifique. Para muestras sobresaturadas: Disolver 10 g NaN3 en 500 mL de agua destilada. Aadir 480 g NaOH y 750 g de yoduro de sodio y agitar hasta disolucin. Se producir una turbidez blanca debido al carbonato de sodio Na2CO3, pero que no es perjudicial. PRECAUCIN: No acidificar esta solucin porque se pueden producir humos de cido hidrozoico. cido sulfrico, H2SO4 concentrado: 1 mL es equivalente a unos 3 mL de reactivo lcali-yoduro-azida.

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Almidn: utilizar una solucin acuosa o mezclas solubles de polvo de almidn. Para prepara una solucin acuosa, disolver 2 g de cido saliclico, como conservador, en 100 mL de agua destilada caliente.

Titulante de tiosulfato sdico: Disolver 6,205 g Na2S2O3.5H2O en agua destilada. Aadir 1,5 mL de una solucin NaOH 6 N o 0,4 g de NaOH slido y diluir a 1000 mL. Procedimiento a) Para fijar el oxgeno, adicionar 1 mL de solucin de MnSO4, y despus 1 mL de reactivo lcali-yoduro-azida a la muestra recogida en un frasco winkler de 300 mL. Si se mojan las pipetas con la muestra, lavar antes de volver al frasco de reactivo. Alternativamente, mantener la punta de la pipeta justo por encima de la superficie del lquido al aadir los reactivos. b) Tapar con cuidado para excluir las burbujas de aire, y mezclar invirtiendo varias veces el frasco. c) Cuando el precipitado se ha depositado adecuadamente (hasta aproximadamente la mitad del volumen del frasco), aadir 1,0 mL H2SO4 concentrado, para dejar un sobrenadante claro por encima del hidrxido de manganeso floculado. d) Volver a tapar y mezclar invirtiendo varias veces hasta disolucin completa. Titular un volumen correspondiente a un volumen de 200 mL de muestra original. e) Titular con solucin de 0,025 M de Na2S2O3 hasta color paja plido. Aadir una gota de la solucin de almidn, y titular hasta la primera desaparicin del color azul. f) Anotar el volumen gastado de la solucin de Na2S2O3. Clculo

Los mg/L de OD para un volumen de 200 mL de muestra titulado es: 1 , 0,025 1 / [II.1]

197

ANEXO III VALORACIN DE LA SOLUCIN DE TIOSULFATO SDICO PARA LA DETERMINACIN DEL OD

El tiosulfato sdico (en realidad, Na2S2O3.5H2O) no es una sustancia patrn primario, por lo que no pueden obtenerse soluciones de concentracin exacta por simple pesada. La estandarizacin de estas soluciones se basa en su titulacin frente a sustancias patrones primarios como el K2Cr2O7, que en exceso de KI da lugar a la siguiente reaccin. El yodo liberado se titula con la solucin de Na2S2O3 utilizando almidn como indicador. Cr O 6I 14H 2Cr 3I 7H O

[III.1]

El laboratorio no cont con el patrn primario de K2Cr2O7, sin embargo, cont con una solucin de dicromato de amonio (NH4)2Cr2O7 que fue empleada para la estandarizacin de la solucin de tiosulfato sdico. La concentracin de esta solucin es 991 g/mL de Cr+6 como se puede observar en el certificado del MRC en el anexo XVII, la expresin de la normalidad de la solucin se calcul tal como se indica a continuacin.
,

De acuerdo a este clculo, se obtuvo una solucin 0,057 N, que corresponde al valor de . A partir de la ecuacin III.2 se determin la alcuota tomada de la 43,7 mL (empleando una probeta de 50 mL), , de una solucin 0,025 N que correspondiente al solucin patrn certificada para preparar una 100 mL = valor de

(empleando un matraz aforado de 100 mL). [III.2]

Donde: Normalidad de la solucin patrn certificada de Dicromato Alcuota tomada de la solucin patrn certificada de Dicromato Normalidad de la solucin final preparada de Dicromato

198

Volumen de la solucin final preparada de Dicromato Materiales Matraz erlenmeyer de 125 mL Bureta de 10 mL, calibrada Pipeta aforada de 10 mL, calibrada

Reactivos Solucin de (NH4)2Cr2O7 0,025 N: Tomar 43,7 mL de la solucin patrn certificada, diluir con agua destilada hasta 100 mL. Almidn: utilizar una solucin acuosa o mezclas solubles de polvo de almidn. Para prepara una solucin acuosa, disolver 2 g de cido saliclico, como conservador, en 100 mL de agua destilada caliente. Procedimiento En el matraz erlenmeyer disolver 1 g de yoduro de potasio exento de yodato en 60 mL de agua. Agregar 0,5 mL de cido sulfrico concentrado y 10 mL de la disolucin de dicromato de amonio empleando la pipeta aforada. Diluir a 100 mL con agua y valorar el yodo con la solucin de tiosulfato. Agregar el almidn hasta el final de la determinacin, cuando se alcance un color amarillo plido. Anotar el volumen gastado.

Clculos La solucin de tiosulfato se estandariza con la solucin de dicromato de amonio 0,025 N preparada. Su normalidad real se calcula a partir de la ecuacin III.3. [III.3] Donde: Normalidad de la solucin final preparada de Dicromato

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Volumen de la solucin de Dicromato 0,025 N tomado para la valoracin Volumen de la solucin de Tiosulfato gastado Tabla III.1: Material volumtrico ocupado en la estandarizacin de la solucin de tiosulfato sdico Datos Volumen (mL) 43,7 100 10 10 Material volumtrico utilizado Probeta de 50 mL Baln aforado de 100 mL Pipeta aforada de 10 mL Bureta de 10 mL

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ANEXO IV PREPARACIN DE LAS SOLUCIONES PATRN PARA EL DESARROLLO DE VALIDACIN DE CADA MTODO
De manera general, la preparacin de las soluciones patrn de acuerdo los niveles de concentracin requeridas para el desarrollo de validacin de cada mtodo, se prepararon en funcin del volumen de muestra requerido descrito en el procedimiento del mtodo (literal 2.1.3), as como del nmero de lecturas necesarias de cada solucin segn el diseo experimental (literal 2.2.3). Para efectos de la validacin, la muestra es referida a la solucin patrn preparada. Como se indic en la preparacin de los objetos de ensayo, en el literal 2.1.5, cada nivel de concentracin fue preparado mediante dilucin, tomando la alcuota necesaria de la solucin patrn certificada y aforando al volumen de solucin deseado. A partir de la ecuacin 2.20 se determin la alcuota tomada. [2.20] Siguiendo estas indicaciones se describe a continuacin la preparacin de las soluciones patrn para cada mtodo. Mtodo para la determinacin de la alcalinidad total Para la validacin de este mtodo, el laboratorio adquiri una solucin patrn certificada (MRC) de 500 mgCaCO3/L de concentracin. De acuerdo al procedimiento del mtodo y al diseo experimental, para el rango bajo del mtodo, se requera tomar un volumen de muestra igual a 100 mL obtenindose 5 lecturas por da de la muestra, por tanto, se requera un total de 500 mL de muestra, preparndose por seguridad 1000 mL de solucin en cada nivel de concentracin para el rango bajo del mtodo. Para el rango alto, el volumen de muestra fue 25 mL, debindose obtener de igual manera 5 lecturas por da, dando un total de 125 mL necesarios, por tanto, en este caso se prepararon 250 mL de solucin patrn en cada nivel de concentracin para el rango alto del mtodo. En

201

la tabla IV.1 se especifica el material volumtrico ocupado en cada nivel de concentracin. Tabla IV.1: Material volumtrico utilizado en la preparacin de las soluciones patrn para la validacin del mtodo de la alcalinidad total
Concentracin de la solucin patrn certificada (
/ / /

=
/

500 mgCaCO3/L Solucin patrn preparada Material volumtrico utilizado Matraz aforado de 1000 mL Matraz aforado de 1000 mL Matraz aforado de 1000 mL

Alcuota tomada Material volumtrico utilizado Pipeta aforada de 10 mL Matraz aforado de 50 mL Matraz aforado de 100 mL Pipeta graduada de 1 mL

(mgCaCO3/L) 5 25 49,9

(mL) 10 50 99,8

(mL) 1000 1000 1000

50 100 250

25 50 125

Matraz aforado de 25 mL Matraz aforado de 50 mL Matraz aforado de 100 mL Matraz aforado de 25 mL

250 250 250

Matraz aforado de 250 mL Matraz aforado de 250 mL Matraz aforado de 250 mL

Para la concentracin de 49,9 mgCaCO3/L, se especifica el uso de dos materiales volumtricos, esto se debi, a que fue necesario medir primero una alcuota de 100 mL con ayuda del matraz aforado y luego se sac 0,2 mL con ayuda de la pipeta serolgica de 1 mL, para obtener la alcuota necesaria de 99,8 mL de acuerdo a la tabla IV.1. De igual manera, para la concentracin de 250 mgCaCO3/L, primero se tom una alcuota de 100 mL y luego los 25 mL restantes cada uno con el matraz aforado respectivo, de esta manera se obtuvo los 125 mL de alcuota necesarios. Mtodo para la determinacin de DBO5 Para la validacin de este mtodo, el laboratorio adquiri una solucin patrn certificada (MRC) de 200 mg/L de concentracin. De acuerdo al procedimiento del mtodo, el volumen de muestra requerido para el anlisis no es un valor constante, sino que depende del valor de DBO de la solucin patrn analizada. Por tanto, en este mtodo cada nivel de concentracin fue un caso diferente, que se detalla a continuacin.

202

Para el nivel bajo de 2mg/L de concentracin de acuerdo a la tcnica de dilucin no demandaba diluciones. El procedimiento del mtodo para muestras que no requieren dilucin, indica que se deben realizar tres lecturas por muestra para reportar el resultado igual al promedio de estos tres valores. Sin embargo, para la validacin del mtodo se report el resultado de cada lectura, sin ser promediado, obtenindose 5 lecturas por da de acuerdo al diseo experimental. Esto debido a la cantidad de solucin patrn que tres lecturas por resultado demandaba. Con esta consideracin, se prepararon 1000 mL de solucin patrn (de las cual se podan obtener 3 lecturas debido al volumen del frasco winkler, 300 mL), preparndose evidentemente dos soluciones por da, para completar las 5 lecturas. En la tabla IV.2 se especifica el material volumtrico ocupado en cada nivel de concentracin. Tabla IV.2: Material volumtrico utilizado en la preparacin de las soluciones patrn para la validacin del mtodo de DBO5
Concentracin de la solucin patrn certificada (
/ / /

)
/

200 mg/L

Alcuota tomada Material volumtrico utilizado Pipeta aforada de 10 mL .

Solucin patrn preparada Material volumtrico utilizado Matraz aforado de 1000 mL -

(mg/L) 2 200 500

(mL) 10 -

(mL) 1000 -

Para el nivel medio de 200 mg/L de concentracin, como se observa en la tabla IV.2 no se debi tomar ningn volumen de alcuota, ya que este nivel corresponde a la concentracin de la solucin patrn certificada. Sin embargo, este valor de DBO si demand de diluciones de la muestra, para su anlisis. Por tanto, de acuerdo a las ecuaciones descritas en la tcnica de dilucin del procedimiento, se determin el volumen de muestra necesario para el anlisis.

[2.12] 1000 1000 0,5 [2.14] [2.13] [2.15]

1000

1,5

203

Para la concentracin del nivel alto de 500 mg/L, se debi realizar igualmente diluciones para el anlisis de la muestra. En la tabla IV.3 se especifica el material volumtrico ocupado para tomar el volumen de muestra tanto para el nivel medio y alto del mtodo en funcin de los datos obtenidos. Tabla IV.3: Material volumtrico utilizado para tomar el volumen de muestra de acuerdo a la tcnica de dilucin del mtodo de DBO5
Nivel de Volumen concentracin de dilucin (mg/L) 2 (mL) D1 : 10 200 D2 : 20 D3 : 30 D1 : 4 500 D2 : 8 D3 : 12 Material volumtrico utilizado Pipeta aforada de 10 mL Pipeta aforada de 10 mL Pipeta aforada de 10 mL Pipeta graduada de 10 mL Pipeta graduada de 10 mL Pipeta graduada de 10 mL

Cada volumen de dilucin para el mismo nivel de concentracin, se tom empleando el mismo material volumtrico como se puede observar en la tabla IV.3. Para el nivel alto de 500 mg/L de concentracin, debido a que la solucin patrn certificada tena un valor de concentracin menor, se hizo uso de un artificio matemtico para el clculo de DBO5. Se realiz el anlisis con la solucin de 200 mg/L, tomando el volumen de muestra como si se tratase de una concentracin de 500 mg/L, y de igual manera con las lecturas obtenidas, se realiz el clculo de la DBO de la muestra. Es decir, como si se tratase de una concentracin igual a 500 mg/L. Mtodo para la determinacin de STD Para la validacin de este mtodo, el laboratorio adquiri una solucin patrn certificada (MRC) de 1000 mg/L de concentracin. De acuerdo al procedimiento del mtodo y al diseo experimental, se requera tomar un volumen de muestra igual a 50 mL obtenindose 5 lecturas de la solucin patrn, por tanto, se

204

prepararon 250 mL de solucin en cada nivel de concentracin. En la tabla IV.4 se especifica el material volumtrico ocupado en cada nivel de concentracin. Tabla IV.4: Material volumtrico utilizado en la preparacin de las soluciones patrn para la validacin del mtodo de STD
Concentracin de la solucin patrn certificada (
/ / /

)
/

1000 mg/L

Alcuota tomada Material volumtrico utilizado Matraz aforado de 25 mL Matraz aforado de 50 mL -

Solucin patrn preparada Material volumtrico utilizado Matraz aforado de 500 mL Matraz aforado de 500 mL -

(mg/L) 50 500 1000

(mL) 25 250 -

(mL) 500 500 -

205

ANEXO V EJEMPLO DE CLCULO DEL ESTADSTICO CON AYUDA DE EXCEL

Excel tiene una opcin que realiza el clculo del estadstico . Los pasos a seguir se describen a continuacin: a) Ingresar los datos obtenidos en una hoja de Excel. Ir a la barra de herramientas y en la opcin Datos, seleccionar Anlisis de datos. Prueba t para dos b) En la ventana que se despliega, seleccionar la opcin muestras suponiendo varianzas desiguales en la figura V.1.

Aceptar, tal como se indica

Fig V.1: Ejemplo de clculo del estadstico c) Se despliega una nueva ventana la que se muestra en la figura V.2. Ingresar los datos obtenidos de las dos muestras analizadas en la opcin Rango para la variable 1 y 2 respectivamente. d) En las opciones de salida, seleccionar Rango de salida para indicar la celda dentro de la hoja donde se est trabajando para que sea mostrados los resultados. Caso contrario, elegir cualquiera de dos opciones restantes Aceptar.

206

Fig V.2: Ejemplo de clculo del estadstico e) El valor de alfa que representa el nivel de probabilidad, para todos los clculos en esta investigacin se estableci igual a de Excel. V.3 se muestra un ejemplo de la presentacin de los resultados en la hoja 0,05. En la figura

Fig V.3: Ejemplo de clculo del estadstico

207

ANEXO VI EJEMPLO DE CLCULO DEL ESTADSTICO EXCEL

Excel tiene una opcin que realiza el clculo del estadstico . Los pasos a seguir se describen a continuacin: a) Ingresar los datos obtenidos en una hoja de Excel. Ir a la barra de herramientas y en la opcin varianzas desiguales Datos, seleccionar Anlisis de datos. Prueba para b) En la ventana que se despliega, seleccionar la opcin

CON AYUDA DE

Aceptar, tal como se indica en la figura VI.1.

Fig VI.1: Ejemplo de clculo del estadstico c) Se despliega una nueva ventana la que se muestra en la figura VI.2. Ingresar los datos obtenidos de las dos muestras analizadas en la opcin Rango para la variable 1 y 2 respectivamente. Se debe recordar que Excel para este clculo, slo proporciona el contraste F de una cola, siendo necesario introducir la muestra con la varianza ms grande como primera muestra, es decir, en la variable 1. d) En las opciones de salida, seleccionar Rango de salida para indicar la celda dentro de la hoja donde se est trabajando para que sea mostrados

208

los resultados. Caso contrario, elegir cualquiera de dos opciones restantes Aceptar.

Fig VI.2: Ejemplo de clculo del estadstico e) El valor de alfa que representa el nivel de probabilidad para todos los VI.2 se muestra un ejemplo de la presentacin de los resultados en la hoja de Excel. 0,05. En la figura niveles en esta investigacin se estableci igual a

Fig VI.3: Ejemplo de clculo del estadstico

209

ANEXO VII EJEMPLO DE CLCULO DEL ANOVA DE UN FACTOR CON AYUDA DE EXCEL
Excel tiene una opcin que realiza el clculo del ANOVA de un factor. Los pasos a seguir se describen a continuacin: a) Ingresar los datos obtenidos en una hoja de Excel. Ir a la barra de herramientas y en la opcin varianza de un factor Datos, seleccionar Anlisis de datos. Anlisis de b) En la ventana que se despliega, seleccionar la opcin

Aceptar, tal como se indica en la figura VII.1.

Fig VII.1: Ejemplo de clculo del ANOVA de un factor c) Se despliega una nueva ventana la que se muestra en la figura VII.2. Ingresar los datos obtenidos de las muestras analizadas en la opcin Rango de entrada. d) En las opciones de salida, seleccionar Rango de salida, para indicar la celda dentro de la hoja donde se est trabajando para que sea mostrados los resultados. Caso contrario, elegir cualquiera de dos opciones restantes Aceptar.

210

Fig VII. 2: Ejemplo de clculo del ANOVA de un factor e) El valor de alfa que representa el nivel de probabilidad para todos los muestra un ejemplo de la presentacin de los resultados en la hoja de Excel. niveles es esta investigacin se estableci a 0,05. En la figura VII.3 se

Fig VII.3: Ejemplo de clculo del ANOVA de un factor

211

ANEXO XVIII VALORES EXPERIMENTALES OBTENIDOS EN LAS PRUEBAS PREVIAS DEL MTODO DE ALCALINIDAD TOTAL
Tabla VIII.1: Valores experimentales obtenidos en la puesta a punto del mtodo de alcalinidad total
Concentracin = 62,5 mgCaCO3/L

Solucin Valorante de H2SO4 empleada N 1 Anlisis en un Sistema Abierto Repeticiones 1 2 3 pH T (C) pH T (C) pH T (C) Condiciones inicial 10,50 19,7 10,45 20,0 10,44 18,0 final 4,50 20,1 4,54 20,6 4,48 18,5 Gasto (mL) 5,950 5,900 5,850 Concentracin (mgCaCO3/L) 60,4 59,9 59,4

Anlisis en un Sistema Cerrado Repeticiones 1 2 3 pH T (C) pH T (C) pH T (C) Condiciones inicial 10,39 19,3 10,39 20,0 10,23 17,9 final 4,50 20,1 4,53 20,2 4,50 18,4 Gasto (mL) 5,950 5,925 5,850 Concentracin (mgCaCO3/L) 60,4 60,1 59,4

212

Tabla VIII.2: Valores experimentales obtenidos en la determinacin del nivel bajo de concentracin del mtodo de alcalinidad total
Concentracin Condiciones inicial 6,44 20,7 6,23 20,7 6,53 22,1 = final 4,54 18,5 4,48 19,0 4,56 19,2 = final 4,51 18,1 4,53 17,5 4,50 18,0 final 4,49 20,9 4,49 21,0 4,52 22,9 = 1 mgCaCO3/L Gasto (mL) 0,200 0,200 0,200 3 mgCaCO3/L Gasto (mL) 0,400 0,425 0,425 5 mgCaCO3/L Gasto (mL) 0,500 0,550 0,525 Concentracin (mgCaCO3/L) 5,1 5,6 5,3 Concentracin (mgCaCO3/L) 4,1 4,3 4,3 Concentracin (mgCaCO3/L) 2,0 2,0 2,0

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 1 Repeticiones 1 2 3 pH T (C) pH T (C) pH T (C)

Concentracin Repeticiones 1 2 3 pH T (C) pH T (C) pH T (C) inicial 6,71 18,2 6,58 18,7 6,5 18,9

Condiciones

Concentracin Repeticiones 1 2 3 pH T (C) pH T (C) pH T (C) inicial 7,14 17,6 8,78 17,2 8,75 17,6

Condiciones

213

Tabla VIII.3: Valores experimentales obtenidos en el contraste de significacin del MRC y MRi del mtodo de alcalinidad total
Concentracin = 5 mgCaCO3/L

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 1 Material de Referencia Certificado (MRC) Repeticiones 1 2 3 4 5 pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) Condiciones inicial 6,85 17,6 6,62 17,7 6,35 17,7 6,69 17,6 6,85 18,5 final 4,53 17,6 4,55 18,2 4,50 18,2 4,53 18,3 4,50 20,4 Gasto (mL) 0,550 0,525 0,525 0,500 0,525 Concentracin (mgCaCO3/L) 5,6 5,4 5,4 5,1 5,4

Material de Referencia Interno (MRi) Repeticiones 1 2 3 4 5 pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) Condiciones inicial 8,68 20,5 8,66 20,2 8,25 20,2 8,14 19,8 7,84 20,0 final 4,45 20,7 4,52 20,6 4,50 20,5 4,53 20,1 4,55 20,2 Gasto (mL) 0,475 0,525 0,525 0,500 0,475 Concentracin (mgCaCO3/L) 4,9 5,4 5,4 5,1 4,9

214

ANEXO IX VALORES EXPERIMENTALES OBTENIDOS EN LAS PRUEBAS PREVIAS DEL MTODO DE DBO5
Tabla IX.1: Valores experimentales obtenidos en la puesta a punto del mtodo de DBO5
Concentracin = 20 mg/L

Solucin valorante de Na2S2O4 empleada N 1 Anlisis sin inhibidor de nitrificacin Repeticiones Dilucin (mL) Blanco 100 1 200 300 Blanco 100 2 200 300 Blanco 100 3 200 300 gasto inicial (mL) 6,675 6,875 6,875 6,350 6,850 6,850 6,550 6,450 6,850 7,025 6,700 6,675 gasto final (mL) 6,100 2,725 1,500 1,100 6,450 4,750 2,650 1,125 6,350 4,250 2,275 0,900 DBO5 (mg/L) 0,6 36,2 24,3 15,8 25,4 0,4 17,2 17,7 16,6 17,2 0,5 23,0 19,9 17,8 20,2 Anlisis empleando inhibidor de nitrificacin (piridina) Repeticiones Dilucin (mL) Blanco 100 1 200 300 gasto inicial (mL) 6,925 6,725 6,825 6,700 gasto final (mL) 6,825 4,600 3,075 0,200 DBO5 (mg/L) 0,1 20,5 18,5 21,6 20,2

215

Tabla IX.1: Valores experimentales obtenidos en la puesta a punto del mtodo de DBO5 Continuacin
Repeticiones Dilucin (mL) Blanco 100 2 200 300 Blanco 100 3 200 300 gasto inicial (mL) 6,925 6,750 6,725 6,850 6,925 6,775 6,650 6,900 gasto final (mL) 6,850 4,650 3,100 0,250 6,800 4,750 2,950 0,050 DBO5 (mg/L) 0,1 20,5 18,0 22,0 20,2 0,1 19,2 18,1 22,7 20,0

Tabla IX.2: Valores experimentales obtenidos en la determinacin del nivel bajo de concentracin del mtodo de DBO5
Concentracin Blanco: 0,1 mL Repeticiones 1 2 3 4 Concentracin Blanco: 0,5 mL Repeticiones 1 2 3 4 gasto inicial (mL) 6,700 6,450 6,900 6,500 = (mL) 6,750 6,750 6,550 6,750 = 1,24 mg/L DBO5 (mg/L) 0,8 0,8 1,5 0,9

Solucin valorante de Na2S2O4 empleada N 1 gasto final (mL) 5,850 5,525 5,350 5,500 1,98 mg/L gasto final (mL) 4,400 4,150 4,350 4,100 DBO5 (mg/L) 1,9 2,1 1,7 2,2

gasto inicial

216

Tabla IX.3: Valores experimentales obtenidos en el contraste de significacin del MRC y el MRi del mtodo de DBO5
Concentracin = 2 mg/L

Solucin valorante de Na2S2O4 empleada N 1 Material de Referencia Certificados (MRC) Blanco: 0,5 mL Repeticiones 1 2 3 4 5 gasto inicial (mL) 6,650 6,675 6,525 6,800 6,550 gasto final (mL) 4,200 4,050 4,150 4,300 4,350 DBO5 (mg/L) 2,0 2,2 1,9 2,0 1,7

Material de Referencia Interno (MRi) Blanco: 0,5 ml Repeticiones 1 2 3 4 5 gasto inicial (mL) 6,750 6,750 6,550 6,750 6,750 gasto final (mL) 4,400 4,150 4,350 4,100 4,300 DBO5 (mg/L) 1,9 2,1 1,7 2,2 2,0

217

ANEXO X VALORES EXPERIMENTALES OBTENIDOS EN LAS PRUEBAS PREVIAS DEL MTODO PARA STD
Tabla X.1: Valores experimentales obtenidos en la determinacin del nivel bajo de concentracin del mtodo de STD
Concentracin Repeticiones 1 2 3 (g) 45,4058 45,5481 47,1681 = (g) 45,3706 44,2773 46,0325 = (g) 43,8808 47,3672 41,6568 = (g) 43,6351 43,8165 44,1745 (g) 43,6381 43,8194 44,1774 (g) 43,8822 47,3687 41,6577 50 mg/L Peso final Concentracin (mg/L) 60 58 58 (g) 45,3719 44,2782 46,0335 20 mg/L Peso final Concentracin (mg/L) 28 30 18 = (g) 45,4067 45,5490 47,1687 10 mg/L Peso final Concentracin (mg/L) 26 18 20 5 mg/L Peso final Concentracin (mg/L) 18 18 12

Peso inicial

Concentracin Repeticiones 1 2 3

Peso inicial

Concentracin Repeticiones 1 2 3

Peso inicial

Concentracin Repeticiones 1 2 3

Peso inicial

218

Tabla X.2: Valores experimentales obtenidos en el contraste de significacin del MRC y el MRi del mtodo de STD
Concentracin Peso inicial (g) 47,5272 46,9348 41,4699 42,8853 45,4330 = 50 mg/L Peso final (g) 47,5304 46,9379 41,4731 42,8883 45,4362 Concentracin (mg/L) 64 62 64 60 64

Material de Referencia Certificado (MRC) Repeticiones 1 2 3 4 5

Material de Referencia Interno (MRi) Repeticiones 1 2 3 4 5 Peso inicial (g) 45,2611 43,5452 41,6556 43,6339 46,1743 Peso final (g) 45,2643 43,5482 41,6588 43,6371 46,1775 Concentracin (mg/L) 64 60 64 64 64

219

ANEXO XI VALORES OBTENIDOS EN LA VALIDACIN DEL MTODO PARA LA DETERMINACIN DE LA ALCALINIDAD TOTAL

220

Tabla XI.1: Valores obtenidos en la valoracin de las soluciones de cido sulfrico utilizadas en la validacin del mtodo de alcalinidad total
Valoracin de la solucin de H2SO4 N 1 Gasto de KHP (mL) 4,9 4,875 4,925 Promedio Gasto de NaOH (mL) 5,15 5,175 5,20 = Normalidad (Eq/L) 0,0202 0,0202 0,0205 0,0203

Valoracin de la solucin de H2SO4 N 2 Gasto de KHP (mL) 4,9 4,9 4,950 Promedio Gasto de NaOH (mL) 5,225 5,20 5,225 = Normalidad (Eq/L) 0,0205 0,0204 0,0207 0,0205

Valoracin de la solucin de H2SO4 N 3 Gasto de KHP (mL) 4,975 5,0 5,0 Promedio Gasto de NaOH (mL) 5,30 5,30 5,35 = Normalidad (Eq/L) 0,0211 0,0212 0,0214 0,0212

Validacin de la solucin de H2SO4 N 4 Gasto de KHP (mL) 4,95 4,975 4,975 Promedio Gasto de NaOH (mL) 5,35 5,40 5,425 = Normalidad (Eq/L) 0,0212 0,0215 0,0216 0,0214

221

Tabla XI.2: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 5 mgCaCO3/L para la validacin del mtodo de alcalinidad total
Nivel bajo Repeticiones Concentracin = Condiciones inicial 8,68 20,5 8,66 20,2 8,25 20,2 8,14 19,8 7,84 20,0 8,81 20,7 8,98 20,3 8,83 20,2 8,46 19,8 8,53 19,5 8,67 20,4 8,47 20,7 8,60 20,8 8,40 20,9 8,33 21,1 final 4,45 20,7 4,52 20,6 4,50 20,5 4,53 20,1 4,55 20,2 4,46 21,3 4,54 20,8 4,48 21,1 4,55 20,5 4,51 20,1 4,50 21,1 4,52 21,9 4,54 21,3 4,46 21,4 4,50 21,1 5 mgCaCO3/L Gasto (mL) Concentracin (mgCaCO3/L)

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 2 1 2 DA 1 3 4 5 pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) 0,500 0,525 0,500 0,500 0,475 5,1 5,4 5,1 5,1 4,9

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 3 1 2 DA 2 3 4 5 0,505 0,500 0,475 0,500 0,505 5,4 5,3 5,0 5,3 5,4

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 4 1 2 DA 3 3 4 5 0,500 0,475 0,500 0,475 0,500 5,4 5,1 5,4 5,1 5,4

222

Tabla XI.3: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 25 mgCaCO3/L para la validacin del mtodo de alcalinidad total
Nivel medio Repeticiones Concentracin = Condiciones inicial 9,75 17,4 9,62 17,1 9,58 18,0 9,62 18,1 9,61 18,2 9,23 19,1 9,20 19,3 8,83 19,6 8,96 19,6 8,91 19,5 9,72 18,9 9,45 19 9,52 18,9 9,51 18,9 9,48 19,1 final 4,50 17,7 4,55 18,0 4,50 18,4 4,52 18,7 4,54 18,7 4,50 20 4,52 20,7 4,50 20,2 4,49 20,2 4,50 20,3 4,51 19,4 4,52 19,8 4,46 19,6 4,50 20,3 4,55 19,9 25 mgCaCO3/L Gasto (mL) Concentracin (mgCaCO3/L)

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 2 1 2 DA 1 3 4 5 pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) 2,375 2,400 2,350 2,350 2,375 24,3 24,6 24,1 24,1 24,3

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 3 1 2 DA 2 3 4 5 2,350 2,300 2,325 2,300 2,325 24,9 24,4 24,6 24,4 24,6

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 4 1 2 DA 3 3 4 5 2,275 2,275 2,300 2,300 2,300 24,3 24,3 24,6 24,6 24,6

223

Tabla XI.4: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 49,9 mgCaCO3/L para la validacin del mtodo de alcalinidad total
Nivel alto Repeticiones Concentracin = Condiciones inicial 10,02 18,4 9,91 18,3 9,98 18,8 9,97 18,6 9,96 18,5 9,93 18,3 10,00 18,5 9,93 18,8 10,07 18,8 9,80 18,8 10,03 20,2 9,99 20,4 9,81 20,5 9,92 20,5 9,95 20,6 final 4,45 19,1 4,48 19,4 4,50 19,6 4,49 19,3 4,50 19,2 4,52 18,9 4,53 19,1 4,52 19,3 4,54 19,5 4,47 19,5 4,52 20,4 4,53 20,6 4,48 20,8 4,54 20,9 4,50 21,2 49,9 mgCaCO3/L Gasto (mL) Concentracin (mgCaCO3/L)

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 2 1 2 DA 1 3 4 5 pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) 4,600 4,550 4,625 4,550 4,625 47,2 46,6 47,4 46,6 47,4

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 3 1 2 DA 2 3 4 5 4,475 4,450 4,500 4,500 4,475 47,4 47,2 47,7 47,7 47,4

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 4 1 2 DA 3 3 4 5 4,400 4,425 4,425 4,450 4,450 47,1 47,3 47,3 47,6 47,6

224

Tabla XI.5: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 50 mgCaCO3/L para la validacin del mtodo de alcalinidad total
Nivel bajo Repeticiones Concentracin = Condiciones inicial 10,00 19,3 9,96 19,7 9,90 20,0 9,96 19,5 9,96 19,7 9,68 19,3 9,55 19,6 9,45 19,6 9,66 19,7 9,64 20,1 9,86 18,4 10,03 18,7 10,03 18,9 9,88 19,8 9,95 19,4 final 4,51 21,2 4,50 21,3 4,47 21,4 4,55 21,8 4,47 21,7 4,52 19,7 4,53 20 4,61 20,9 4,47 20,4 4,51 20,6 4,57 18,9 4,56 20,3 4,51 20,6 4,47 21,7 4,50 20,1 50 mgCaCO3/L Gasto (mL) Concentracin (mgCaCO3/L)

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 2 1 2 DA 1 3 4 5 pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) 1,175 1,200 1,200 1,175 1,200 48,2 49,2 49,2 48,2 49,2

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 3 1 2 DA 2 3 4 5 1,175 1,175 1,150 1,175 1,175 49,8 49,8 48,8 49,8 49,8

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 4 1 2 DA 3 3 4 5 1,150 1,150 1,150 1,125 1,150 49,2 49,2 49,2 48,2 49,2

225

Tabla XI.6: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 100 mgCaCO3/L para la validacin del mtodo de alcalinidad total
Nivel medio Repeticiones Concentracin = Condiciones inicial 10,33 19,0 10,31 19,4 10,20 19,6 10,25 21,1 10,20 20,2 10,02 19,1 10,07 19,3 9,99 18,9 10,05 19,4 10,03 19,0 10,31 19,9 10,28 20,5 10,30 20,2 10,15 20,1 10,19 19,7 final 4,50 20,9 4,58 21,4 4,36 21,9 4,50 22,5 4,52 22,3 4,48 21,4 4,52 21,4 4,45 21,2 4,45 21,9 4,55 20,5 4,42 21,0 4,50 21,6 4,42 21,4 4,56 21,9 4,55 22,2 100 mgCaCO3/L Gasto (mL) Concentracin (mgCaCO3/L)

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 2 1 2 DA 1 3 4 5 pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) 2,350 2,350 2,350 2,375 2,350 96,4 96,4 96,4 97,4 96,4

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 3 1 2 DA 2 3 4 5 2,350 2,275 2,300 2,325 2,300 99,6 96,5 97,5 98,6 97,5

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 4 1 2 DA 3 3 4 5 2,275 2,300 2,250 2,250 2,275 97,4 98,4 96,3 96,3 97,4

226

Tabla XI.7: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 250 mgCaCO3/L para la validacin del mtodo de alcalinidad total
Nivel alto Repeticiones Concentracin = Condiciones inicial 10,53 17,5 10,56 18,3 10,54 17,7 10,55 17,6 10,50 18,0 10,48 18,9 10,51 18,7 10,44 19,1 10,48 19,2 10,52 18,9 10,53 19,8 10,49 20,1 10,48 20,2 10,45 20,5 10,60 20,0 final 4,45 19,9 4,50 21,7 4,56 20,3 4,55 19,7 4,50 20,0 4,48 19,6 4,54 20,0 4,54 20,2 4,46 20,7 4,49 20,9 4,47 20,1 4,43 20,9 4,46 21,5 4,50 21,4 4,55 20,6 250 mgCaCO3/L Gasto (mL) Concentracin (mgCaCO3/L)

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 2 1 2 DA 1 3 4 5 pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) 5,850 5,850 5,850 5,800 5,850 239,9 239,9 239,9 237,8 239,9

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 3 1 2 DA 2 3 4 5 5,700 5,700 5,700 5,650 5,650 241,7 241,7 241,7 239,6 239,6

Solucin valorante de H2SO4 empleada N 4 1 2 DA 3 3 4 5 5,600 5,600 5,625 5,625 5,625 239,7 239,7 240,8 240,8 240,8

227

Tabla XI.8: Valores experimentales obtenidos en la determinacin del % de Recuperacin de una muestra fortificada para el mtodo de alcalinidad total rango bajo
Matriz: Agua residual Solucin valorante de H2SO4 empleada N 4 Repeticiones 1 2 3 4 5 pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) Condiciones inicial 7,05 21,3 6,96 21,1 7,01 21,1 7,03 21,2 7,06 21,2 final 4,47 21,7 4,50 21,7 4,54 21,6 4,52 21,8 4,47 21,7 Gasto (mL) 1,300 1,325 1,300 1,300 1,325 Concentracin (mgCaCO3/L) 13,9 14,2 13,9 13,9 14,2

Matriz + adicin del MRC Adicin : 5 mgCaCO3/L Repeticiones 1 2 3 4 5 pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) Condiciones inicial 7,08 20,8 7,08 21,0 7,04 21,0 7,03 21,2 7,04 21,0 final 4,50 21,2 4,53 21.5 4,51 21,5 4,50 21,7 4,51 21,5 Gasto (mL) 1,750 1,700 1,700 1,725 1,700 Concentracin (mgCaCO3/L) 18,7 18,2 18,2 18,5 18,2

228

Tabla XI.9: Valores experimentales obtenidos en la determinacin del % de Recuperacin de una muestra fortificada para el mtodo de alcalinidad total rango alto
Matriz: Agua residual Solucin valorante de H2SO4 empleada N 4 Repeticiones 1 2 3 4 5 pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) Condiciones inicial 7,54 21,4 7,43 21,4 7,61 21,2 7,56 21,5 7,60 21,6 final 4,52 21,8 4,43 21,7 4,53 21,6 4,50 22,5 4,50 23,0 Gasto (mL) 1,550 1,550 1,525 1,525 1,550 Concentracin (mgCaCO3/L) 66,3 66,3 65,3 65,3 66,3

Matriz + adicin del MRC Adicin : 50 mgCaCO3/L Repeticiones 1 2 3 4 5 pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) pH T (C) Condiciones inicial 7,86 21,4 7,87 21,2 7,88 21,3 7,88 21,3 7,89 21,6 final 4,56 22,0 4,51 22,1 4,51 22,7 4,46 22,9 4,57 23,5 Gasto (mL) 2,550 2,525 2,550 2,525 2,525 Concentracin (mgCaCO3/L) 109,1 108,1 109,1 108,1 108,1

229

Tabla XI.10: Clculo de la precisin en el nivel de 5 mgCaCO3/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de alcalinidad total
Nivel bajo Repeticiones 1 2 3 4 5 , mgCaCO3/L % CVr , mgCaCO3/L , mgCaCO3/L
, mgCaCO3/L

Concentracin = 5 mgCaCO3/L DA 1 5,1 5,4 5,1 5,1 4,9 5,13 3,02 5,21 0,15 0,16 DA 2 5,4 5,3 5,0 5,3 5,4 5,27 2,94 , mgCaCO3/L2 % CVr % CVR DA 3 5,4 5,1 5,4 5,1 5,4 5,24 2,95 0,001 3,02 3,04

Resultados del ANOVA de un factor realizados con ayuda de Excel

Origen de las variaciones Entre grupos Dentro de los grupos Total SDC 0,06 0,29 0,35 2 12 14 DCM 0,03 0,02 F 1,22 0,33 F crtico 3,89

0,06 0,29 0,03 0,02 0,35 1,22 crtico 3,89 0,33 2 12 14

Diferencia cuadrtica entre grupos Diferencia cuadrtica dentro del grupo Diferencia cuadrtica media entre grupos Diferencia cuadrtica media dentro del grupo Diferencia cuadrtica media total experimental Valor crtico para Probabilidad Grados de libertad 1 Grados de libertad 2 Grados de libertad totales

230

Tabla XI.11: Clculo de la precisin en el nivel de 25 mgCaCO3/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de alcalinidad total
Nivel medio Repeticiones 1 2 3 4 5 , mgCaCO3/L % CVr , mgCaCO3/L , mgCaCO3/L
, mgCaCO3/L

Concentracin = 25 mgCaCO3/L DA 1 24,3 24,6 24,1 24,1 24,3 24,29 0,81 24,46 0,20 0,23 DA 2 24,9 24,4 24,6 24,4 24,6 24,59 0,80 , mgCaCO3/L2 % CVr % CVR DA 3 24,3 24,3 24,6 24,6 24,6 24,50 0,80 0,02 0,81 0,96

Resultados del ANOVA de un factor realizados con ayuda de Excel

Origen de las variaciones Entre grupos Dentro de los grupos Total Suma de Grados de cuadrados libertad 0,24 0,47 0,70 2 12 14 Promedio de los cuadrados 0,12 0,04 Probabili_ dad 0,09 Valor crtico para F 3,89

F 3,04

0,24 0,47 0,12 0,04 0,70 3,04 crtico 3,89 0,09 2 12 14

Diferencia cuadrtica entre grupos Diferencia cuadrtica dentro del grupo Diferencia cuadrtica media entre grupos Diferencia cuadrtica media dentro del grupo Diferencia cuadrtica media total experimental Valor crtico para Probabilidad Grados de libertad 1 Grados de libertad 2 Grados de libertad totales

231

Tabla XI.12: Clculo de la precisin en el nivel de 49,9 mgCaCO3/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de alcalinidad total
Nivel alto Repeticiones 1 2 3 4 5 , mgCaCO3/L % CVr , mgCaCO3/L , mgCaCO3/L
, mgCaCO3/L

Concentracin = 49,9 mgCaCO3/L DA 1 47,2 46,6 47,4 46,6 47,4 47,05 0,61 47,31 0,29 0,35 DA 2 47,4 47,2 47,7 47,7 47,4 47,49 0,61 , mgCaCO3/L2 % CVr % CVR DA 3 47,1 47,3 47,3 47,6 47,6 47,40 0,61 0,04 0,61 0,74

Resultados del ANOVA de un factor realizados con ayuda de Excel

Origen de las variaciones Entre grupos Dentro de los grupos Total Suma de Grados de cuadrados libertad 0,54 1,00 1,55 2 12 14 Promedio de los cuadrados 0,27 0,08 Probabili_ dad 0,07 Valor crtico para F 3,89

F 3,26

0,54 1,00 0,27 0,08 1,55 3,26 crtico 3,89 0,07 2 12 14

Diferencia cuadrtica entre grupos Diferencia cuadrtica dentro del grupo Diferencia cuadrtica media entre grupos Diferencia cuadrtica media dentro del grupo Diferencia cuadrtica media total experimental Valor crtico para Probabilidad Grados de libertad 1 Grados de libertad 2 Grados de libertad totales

232

Tabla XI.13: Clculo de la precisin en el nivel de 50 mgCaCO3/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de alcalinidad total
Nivel bajo Repeticiones 1 2 3 4 5 , mgCaCO3/L % CVr , mgCaCO3/L , mgCaCO3/L
, mgCaCO3/L

Concentracin = 50 mgCaCO3/L DA 1 48,2 49,2 49,2 48,2 49,2 48,79 1,04 49,13 0,51 0,62 DA 2 49,8 49,8 48,8 49,8 49,8 49,61 1,02 , mgCaCO3/L2 % CVr % CVR DA 3 49,2 49,2 49,2 48,2 49,2 49,01 1,03 0,13 1,04 1,26

Resultados del ANOVA de un factor realizados con ayuda de Excel

Origen de las variaciones Entre grupos Dentro de los grupos Total Suma de Grados de cuadrados libertad 1,80 3,08 4,87 2 12 14 Promedio de los cuadrados 0,90 0,26 Probabili_ dad 0,06 Valor crtico para F 3,89

F 3,51

1,80 3,08 0,90 0,26 4,87 3,51 crtico 3,89 0,06 2 12 14

Diferencia cuadrtica entre grupos Diferencia cuadrtica dentro del grupo Diferencia cuadrtica media entre grupos Diferencia cuadrtica media dentro del grupo Diferencia cuadrtica media total experimental Valor crtico para Probabilidad Grados de libertad 1 Grados de libertad 2 Grados de libertad totales

233

Tabla XI.14: Clculo de la precisin en el nivel de 100 mgCaCO3/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de alcalinidad total
Nivel medio Repeticiones 1 2 3 4 5 , mgCaCO3/L % CVr , mgCaCO3/L , mgCaCO3/L
, mgCaCO3/L

Concentracin = 100 mgCaCO3/L DA 1 96,4 96,4 96,4 97,4 96,4 96,56 0,94 97,22 0,91 1,07 DA 2 99,6 96,5 97,5 98,6 97,5 97,94 0,93 , mgCaCO3/L2 % CVr % CVR DA 3 97,4 98,4 96,3 96,3 97,4 97,16 0,93 0,32 0,94 1,10

Resultados del ANOVA de un factor realizados con ayuda de Excel

Origen de las variaciones Entre grupos Dentro de los grupos Total Suma de Grados de cuadrados libertad 4,85 9,89 14,74 2 12 14 Promedio de los cuadrados 2,43 0,82 Probabili_ dad 0,09 Valor crtico para F 3,89

F 2,94

4,85 9,89 2,43 0,82 14,74 2,94 crtico 3,89 0,09 2 12 14

Diferencia cuadrtica entre grupos Diferencia cuadrtica dentro del grupo Diferencia cuadrtica media entre grupos Diferencia cuadrtica media dentro del grupo Diferencia cuadrtica media total experimental Valor crtico para Probabilidad Grados de libertad 1 Grados de libertad 2 Grados de libertad totales

234

Tabla XI.15: Clculo de la precisin en el nivel de 250 mgCaCO3/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de alcalinidad total
Nivel alto Repeticiones 1 2 3 4 5 , mgCaCO3/L % CVr , mgCaCO3/L , mgCaCO3/L
, mgCaCO3/L

Concentracin = 250 mgCaCO3/L DA 1 239,9 239,9 239,9 237,8 239,9 239,44 0,38 240,20 0,92 1,08 DA 2 241,7 241,7 241,7 239,6 239,6 240,83 0,38 , mgCaCO3/L2 % CVr % CVR DA 3 239,7 239,7 240,8 240,8 240,8 240,32 0,38 0,33 0,38 0,45

Resultados del ANOVA de un factor realizados con ayuda de Excel

Origen de las variaciones Entre grupos Dentro de los grupos Total Suma de Grados de cuadrados libertad 4,96 10,13 15,09 2 12 14 Promedio de los cuadrados 2,48 0,84 Probabili_ dad 0,09 Valor crtico para F 3,89

F 2,94

4,96 10,13 2,48 0,84 15,09 2,94 crtico 3,89 0,09 2 12 14

Diferencia cuadrtica entre grupos Diferencia cuadrtica dentro del grupo Diferencia cuadrtica media entre grupos Diferencia cuadrtica media dentro del grupo Diferencia cuadrtica media total experimental Valor crtico para Probabilidad Grados de libertad 1 Grados de libertad 2 Grados de libertad totales

235

Tabla XI.16: Valores para el clculo de los coeficientes de sensibilidad para el mtodo de alcalinidad total
Valores para el clculo de las constantes A1, B1 y C1 = Concentracin (mgCaCO3/L) 5 25 49,9 50 100 250 (mL) 0,5 2,5 4,99 1,25 2,5 6,25 (mL) 100 100 100 25 25 25 1000 mgCaCO3/L

Valores para el clculo de las constantes A2, B2 y C2 (Eq/L) 0,02 (mL) 5 (mL) 5

Valores para el clculo de las constantes A3 y B3 Factor de conversin = 1000 Eq*mL/mol*mL (g) 0,4086
/

(g/mol) 204,223

(mL) 100

Valores para el clculo de las constantes A4, B4 y C4

/

500 mgCaCO3/L
/

(mgCaCO3/L) 5 25 49,9 50 100 250

(mL) 10 50 99,8 25 50 125

(mL) 1000 1000 1000 250 250 250

236

Tabla XI.17: Clculo de los coeficientes de sensibilidad para el mtodo de alcalinidad total
Clculo de las constantes A1, B1 y C1 A partir de las ecuaciones descritas en el captulo 3 se calcularon los coeficientes de sensibilidad [3.3] ; Concentracin (mgCaCO3/L) 5 25 49,9 50 100 250 A1 (mgCaCO3/L*mL) 10 10 10 40 40 40 Clculo de las Constantes A2, B2 y C2 [3.16] ; A2 (mL/mL) 1 B2 (N/mL) 0,004 [3.17] ; C2 (N*mL/mL) 0,004 [3.18] [3.4] ; B1 (mL/mL) 0,005 0,025 0,0499 0,05 0,1 0,25 [3.5] C1 (mL*mgCaCO3/L/mL2) 0,05 0,25 0,499 2 4 10

Clculo de las constantes A3, B3 y C3 [3.22] ; A3 (Eq/g*L) 0,048966

3

[3.23] B3 (Eq/mL2) 0,00020 Clculos de las Constantes A4, B4 y C4

Concentracin (mgCaCO3/L) 5 25 49,9 50 100 250

[3.31]; A4 (mL/mL) 0,01 0,05 0,0998 0,1 0,2 0,5

[3.32]; B4 (mgCaCO3/L*mL) 0,5 0,5 0,5 2 2 2

[3.33]

C4 0,005 0,025 0,0499 0,2 0,4 1

(mgCaCO3/L*mL)

237

Tabla XI.18: Clculo de la incertidumbre de la concentracin del cido mtodo de alcalinidad total
Incertidumbre de la concentracin del cido Clculo de Material Volumtrico utilizado : Equipo utilizado : MRC utilizado : Contribucin del peso de KHP (g) (g) (g)

para el

Baln aforado de 100 mL Balanza analtica KHP slido Contribucin del volumen de KHP (mL)

0,000070 0,000058 0,000035 0,000058 0,000102 0,000152 0,049 = = y

0,0015 (mL) (mL) 0,08718 0,00606

(g)

(g)

(g) A3 (Eq/g*L)

( mL) B3 (Eq/L*mL) 1,90E-05 1

0,08740 0,0002

(Eq/L) [3.21] A2 (mL/mL) Clculo de

Material Volumtrico utilizado : Bureta de 10 mL (mL)

Pipeta graduada de 5 mL 0,001 (mL)

0,0025 (mL) (mL) 0,0029 0,00030

(mL) (mL)

0,00693 0,00279 0,01021 0,01269 0,004 = = =

(mL) (mL) B2 (Eq/L*mL)

(mL) C2 (Eq/L*mL) 5,63E-05

0,00383 0,004

(Eq/L) [3.15] Factor de conversin (mgCaCO3/L) [3.12]

50000 mgCaCO3/Eq 2,816

238

y del volumen de Tabla XI.19: Clculo de la incertidumbre del volumen del cido, muestra, para el mtodo de alcalinidad total
Clculo de [3.10] Clculo de rango bajo [3.11] Clculo de rango alto [3.11]

Material volumtrico utilizado : Bureta de 10 mL (mL)

Baln aforado de 100 mL 0,001 (mL)

Baln aforado de 25 mL (mL)

0,0015 (mL) (mL) 0,08718 0,00606

0,0015 (mL) (mL) 0,00404 0,00091

(mL) (mL)

0,00693 0,00279 0,01021 = 0,01269

(mL) (mL)

(mL)

0,08740

(mL)

0,00441

Tabla XI.20: Clculo de la incertidumbre en la medida de la alcuota, y en / para el mtodo de alcalinidad total la medida del volumen preparado, /
Clculo de
/ /
/

[3.35]

(mgCaCO3/L) 5 25 49,9 50 100 250

(mL) 10 50 99,8 25 50 125

(mL) 0,0015 0,0015 0,0035 0,0015 0,0015 0,003

/

(mL)

(mL) 0,00242 0,01394 0,00613 0,00091 0,01394 0,04547

(mL) 0,00308 0,02054 0,09092 0,00441 0,02054 0,10197

0,00115 0,01501 0,09064 0,00404 0,01501 0,09122

Clculo de
/

para el rango bajo [3.36]

(mL) 1000

(mL) 0,015 Clculo de

/

(mL)

(mL) 0,02425

(mL) 0,12455

0,12124

para el rango alto [3.36]

(mL) 250

(mL) 0,01

(mL)

(mL) 0,02122

(mL) 0,06232

0,05774

239

Tabla XI.21: Clculo de la incertidumbre del MRC, total

Clculo de
Concent. A4
/

para el mtodo de alcalinidad

[3.30]
/

B4
(mgCaCO3/L*mL) (mL)

C4
(mgCaCO3/L*mL) (mL)

(mgCaCO3/L) (mL/mL)

(mgCaCO3/L)

(mgCaCO3/L)

5 2 49,9 50 100 250

0,01 0,05 0,0998 0,1 0,2 0,5

0,0075 0,0030 0,0749 0,0750 0,1500 0,3750

0,5 0,5 0,5 2 2 2

0,00308 0,02054 0,09092 0,00441 0,02054 0,10197

0,005 0,025 0,0499 0,2 0,4 1

0,12455 0,12455 0,12455 0,06232 0,06232 0,06232

0,00166 0,01073 0,04649 0,01701 0,05665 0,28395

Tabla XI.22: Clculo de la incertidumbre del procedimiento, de alcalinidad total

Clculo de Concent. 5 2 49,9 50 100 250 A1
(mL)

parel mtodo

[3.2] C1
(mgCaCO3/L) (mgCaCO3/L*mL) (mL) (mgCaCO3/L)
.

B1
(mL/mL)

(mgCaCO3/L) (mgCaCO3/L*mL)

10 10 10 40 40 40

0,01269 0,01269 0,01269 0,01269 0,01269 0,01269

0,005 0,025 0,0499 0,05 0,1 0,25

2,816 2,816 2,816 2,816 2,816 2,816

0,05 0,25 0,499 2 4 10

0,08740 0,08740 0,08740 0,00441 0,00441 0,00441

0,1277 0,1467 0,1943 0,5267 0,5806 0,8689

Tabla XI.23: Clculo de la incertidumbre combinada, alcalinidad total

Clculo de Concentracin (mgCaCO3/L) 5 25 49,9 50 100 250 [3.1] (mg CaCO3/L) 0,16 0,23 0,35 0,62 1,07 1,08

para el mtodo de

[3.37]

(mgCaCO3/L) 0,1277 0,1467 0,1943 0,5267 0,5806 0,8689

(mgCaCO3/L) 0,0017 0,0107 0,0465 0,0170 0,0567 0,2840

(mgCaCO3/L) 0,2034 0,2764 0,4013 0,8139 1,2185 1,4166

240

Tabla XI.24: Clculo del nmero efectivo de grados de libertad, alcalinidad total
Clculo de Concentracin (mgCaCO3/L) 5 25 49,9 50 100 250

para el mtodo de

[1.48]

(mgCaCO3/L4) 0,0017 0,0058 0,0259 0,4388 2,2047 4,0273

(mgCaCO3/L4) 0,0006 0,0030 0,0147 0,1480 1,3099 1,3718 14 14 14 14 14 14 38,18 27,26 24,74 41,50 23,56 41,10 2,08 2,11 2,12 2,07 2,12 2,07

*Factor derivado de la distribucin de Student a un nivel de confianza 1.3

95,45% obtenido de la tabla

Tabla XI.25: Clculo de la Incertidumbre Expandida,

Clculo de Concentracin (mgCaCO3/L) 5 25 49,9 50 100 250 **Valor de

para el mtodo de alcalinidad total

[1.49]

(mgCaCO3/L) 0,20 0,28 0,40 0,81 1,22 1,42 2 2 2 2 2 2

**

Incertidumbre Expandida, (mgCaCO3/L) 0,41 0,55 0,80 1,63 2,44 2,83 % 8,13 2,21 1,61 3,26 2,44 1,13

de la tabla XI.24 tomado como el entero menor ms prximo

241

ANEXO XII VALORES OBTENIDOS EN LA CALIBRACIN DEL MEDIDOR DE CONDUCTIVIDAD

Tabla XII.1: Valores experimentales obtenidos en la calibracin del medidor de conductividad
Estndar Repeticiones 1 2 3 4 5 Valor medio Correccin Desv. Estndar Conductividad = 147 S/cm Conductividad (uS/cm) 147,5 147,6 147,7 146,9 146,8 Temperatura T (C) 18,2 18,6 18,8 18,8 18,8 -0,30 S/cm 0,42 S/cm Conductividad = 12,8 mS/cm Conductividad (mS/cm) 12,87 12,85 12,86 12,86 12,86 Temperatura T (C) 20,0 20,0 19,9 19,8 20,0 12,86 mS/cm -0,06 mS/cm 0,01 mS/cm

147,30 S/cm

Tabla XII.2: Datos del medidor de conductividad

Estndar 147 S/cm 12,8 mS/cm Datos del equipo Exactitud 0,5 % 0,5 % Resolucin 0,1 S/cm 0,01 mS/cm

Tabla XII.3: Clculo de la incertidumbre combinada de calibracin, medidor de conductividad

Clculo de Estndar 147 (S/cm) 12,8 (mS/cm) [3.38] 0,18708 0,00316 [3.40] 0,06 0,01

para el

[3.42] [3.41] 0,500 0,100 0,54 0,10

242

Tabla XII.4: Clculo del nmero efectivo de grados de libertad, conductividad

Clculo de Estndar 147 S/cm 12,8 mS/cm

para el medidor de

[1.48]

*
0,0012 S/cm4 1,00E-10 mS/cm
4

0,08314 S/cm4 0,00010 mS/cm

4

4 4

271,46 4034741,78

2 95,45% obtenido de la 2

*Factor derivado de la distribucin de Student a un nivel de confianza tabla 1.3

Tabla XII.5: Clculo de la Incertidumbre Expandida de Uso,

conductividad
Clculo de Estndar 147 S/cm 12,8 mS/cm

para el medidor de

[3.44] [3.43]

| Incertidumbre Expandida % 1,37 S/cm 0,26 mS/cm 0,93 2,03

0,54 S/cm 0,10 mS/cm

2 2

0,30 S/cm 0,06 mS/cm

243

ANEXO XIII VALORES OBTENIDOS EN LA VALIDACIN DEL MTODO PARA LA DETERMINACIN DE LA CONDUCTIVIDAD
Tabla XIII.1: Valores experimentales obtenidos para el estndar de 147 S/cm y 12,8 mS/cm para la validacin del mtodo de conductividad
Estndar Repeticiones 1 DA 1 2 3 4 5 1 DA 2 2 3 4 5 1 DA 3 2 3 4 5 Conductividad = 147 S/cm Conductividad (S/cm) 146,3 146,4 146,5 145,7 145,6 146,1 145,8 145,7 145,9 145,7 146,4 146,9 146,0 146,3 145,9 Temperatura (C) 18,2 18,6 18,8 18,8 18,8 19,0 19,3 18,8 18,9 19,1 18,4 18,6 18,7 19,0 19,0 Conductividad = 12,8 S/cm Conductividad (mS/cm) 12,85 12,91 12,90 12,89 12,89 12,87 12,87 12,85 12,88 12,94 12,87 12,85 12,86 12,86 12,86 Temperatura (C) 18,2W 18,0 18,0 18,0 17,9 17,9 17,9 17,9 17,9 18,0 20,0 20,0 19,9 19,8 20,0

244

Tabla XIII.2: Clculo de la precisin para el estndar de 147 S/cm a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de conductividad
Conductividad Repeticiones 1 2 3 4 5 , S/cm % CVr , S/cm , S/cm
,

= DA 2 146,1 145,8 145,7 145,9 145,7 145,84 0,24

147 S/cm DA 3 146,4 146,9 146,0 146,3 145,9 146,30 0,24 0,03 0,24 0,26

DA 1 146,3 146,4 146,5 145,7 145,6 146,10 0,24 146,08 0,35 0,39

, S/cm2 % CVr % CVR

S/cm

Resultados del ANOVA de un factor realizados con ayuda de Excel

Origen de las variaciones Entre grupos Dentro de los grupos Total SDC 0,53 1,43 1,96 2 12 14 DCM 0,27 0,12 F 2,23 0,15 F crtico 3,89

0,53 1,43 0,27 0,12 1,96 2,23 crtico 3,89 0,15 2 12 14

Diferencia cuadrtica entre grupos Diferencia cuadrtica dentro del grupo Diferencia cuadrtica media entre grupos Diferencia cuadrtica media dentro del grupo Diferencia cuadrtica media total experimental Valor crtico para Probabilidad Grados de libertad 1 Grados de libertad 2 Grados de libertad totales

245

Tabla XIII.3: Clculo de la precisin para el estndar de 12,8 mS/cm a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de conductividad
Conductividad Repeticiones 1 2 3 4 5 , mS/cm % CVr , mS/cm , mS/cm
, mS/cm

= DA 2 12,87 12,87 12,85 12,88 12,94 12,88 0,19

12,8 mS/cm DA 3 12,87 12,85 12,86 12,86 12,86 12,86 0,19 0,0001 0,19 0,203

DA 1 12,85 12,91 12,90 12,89 12,89 12,89 0,19 12,88 0,02 0,03

, mS/cm2 % CVr % CVR

Resultados del ANOVA de un factor realizados con ayuda de Excel

Origen de las variaciones Entre grupos Dentro de los grupos Total SDC 0,0022 0,0070 0,0091 2 12 14 DCM 0,0011 0,0006 F 1,87 0,20 F crtico 3,89

0,0022 0,0070 0,0011 0,0006 0,0091 1,87 crtico 3,89 0,20 2 12 14

Diferencia cuadrtica entre grupos Diferencia cuadrtica dentro del grupo Diferencia cuadrtica media entre grupos Diferencia cuadrtica media dentro del grupo Diferencia cuadrtica media total experimental Valor crtico para Probabilidad Grados de libertad 1 Grados de libertad 2 Grados de libertad totales

246

Tabla XIII.4: Clculo de la incertidumbre combinada, conductividad

Clculo de Estndar 147 (S/cm) 12,8 (mS/cm) [3.46] 0,42435 0,11085

para el mtodo de

[3.47] [1.51] 1,37 0,26

[3.45] 0,3856 0,0261

1,48877 0,28424

Tabla XIII.5: Clculo del nmero efectivo de grados de libertad, conductividad

Clculo de Estndar 147 S/cm 12,8 mS/cm

para el mtodo de

[1.48]

*
0,0221 S/cm4 4,64E-07 mS/cm
4

4,91258 S/cm4 0,00653 mS/cm

4

14 14

3111,79 196867,28

2 2

Tabla XIII.6: Clculo de la Incertidumbre Expandida, U para el mtodo de conductividad

Clculo de [1.49] Estndar 147 S/cm 12,8 mS/cm

*Factor derivado de la distribucin de Student a un nivel de confianza tabla 1.3

95,45% obtenido de la

Incertidumbre Expandida % 2 2 2,98 S/cm 0,57 mS/cm 2,03 4,44

1,49 S/cm 0,28 mS/cm

247

ANEXO XIV VALORES OBTENIDOS EN LA VALIDACIN DEL MTODO PARA LA DETERMIANCIN DE DBO5

248

Tabla XIV.1: Valores obtenidos en la valoracin de las soluciones de tiosulfato de sodio utilizadas en la validacin del mtodo de DBO5
Valoracin de la solucin de Na2S2O3 N 1 (mL) 9,90 9,95 9,80 Promedio = (Eq/L) 0,025 0,025 0,025 Factor 1,01 1,01 1,02 1,012

Valoracin de la solucin de Na2S2O3 N 2 (mL) 10,00 9,90 9,90 Promedio = (Eq/L) 0,025 0,025 0,025 Factor 1,00 1,01 1,01 1,007

Valoracin de la solucin de Na2S2O3 N 3 (mL) 9,7 9,5 9,8 Promedio = (Eq/L) 0,025 0,025 0,025 Factor 1,03 1,05 1,02 1,035

Valoracin de la solucin de Na2S2O3 N 4 (mL) 9,95 9,90 9,95 Promedio = (Eq/L) 0,025 0,025 0,025 Factor 1,01 1,01 1,01 1,007

249

Tabla XIV.2: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 2 mg/L para la validacin del mtodo de DBO5
Nivel bajo Blanco: 0,5 mL Repeticiones 1 DA 1 2 3 4 5 1 DA 2 2 3 4 5 1 DA 3 2 3 4 5 Concentracin = gasto inicial (mL) 6,65 6,675 6,525 6,8 6,55 6,65 6,725 6,575 6,575 6,7 7,25 6,75 7,15 7,3 6,75 gasto final (mL) 4,2 4,05 4,15 4,3 4,35 4,3 4,5 4,35 4,25 4,35 4,975 4,5 4,65 4,55 4,3 2 mg/L DBO5 (mg/L) 2,0 2,1 1,9 2,0 1,7 1,9 1,7 1,7 1,8 1,9 1,8 1,8 2,0 2,3 2,0

Solucin valorante de Na2S2O3 empleada N 2

250

Tabla XIV.3: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 200 mg/L para la validacin del mtodo de DBO5
Nivel medio Concentracin Dilucin (mL) Blanco 10 1 20 30 Blanco 10 2 20 30 Blanco DA 1 10 3 20 30 Blanco 10 4 20 30 Blanco 10 5 20 30 gasto inicial (mL) 7,575 7,525 6,950 7,400 7,700 7,800 7,450 7,450 7,300 7,100 6,950 7,700 7,300 7,500 7,575 7,500 7,500 7,450 7,500 7,400 = gasto final (mL) 6,200 4,500 1,925 0,050 6,700 4,700 1,975 0,050 6,500 4,425 1,650 0,050 6,450 4,500 2,700 0,150 6,600 4,300 1,800 0,050 200 mg/L DBO5 (mg/L) 1,4 170,8 188,9 206,1 188,6 1,0 217,4 231,6 220,8 223,2 0,8 194,1 232,9 236,3 221,1 0,9 222,5 208,3 224,3 218,4 0,9 232,9 248,4 222,5 234,6

Solucin valorante de Na2S2O3 empleada N 3 Repeticiones

251

Tabla XIV.3: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 200 mg/L para la validacin del mtodo de DBO5 Continuacin
Repeticiones Dilucin (ml) Blanco 10 1 20 30 Blanco 10 2 20 30 Blanco DA 2 10 3 20 30 Blanco 10 4 20 30 Blanco 10 5 20 30 gasto inicial (ml) 7,150 7,150 7,150 7,175 7,025 7,125 7,150 7,000 7,350 7,300 7,150 6,800 7,400 7,450 7,150 7,525 7,300 7,450 7,150 7,525 gasto final (ml) 6,450 4,500 2,700 1,200 6,725 5,025 2,750 1,275 7,000 4,850 3,100 0,500 6,700 4,875 2,425 0,650 6,600 4,275 3,050 0,375 DBO5 (mg/L) 0,7 201,8 194,1 182,0 192,6 0,3 186,3 212,2 187,2 195,2 0,4 217,4 191,5 205,3 204,7 0,7 194,1 208,3 213,0 205,1 0,7 256,2 176,0 222,5 218,2

252

Tabla XIV.3: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 200 mg/L para la validacin del mtodo de DBO5 Continuacin
Repeticiones Dilucin gasto inicial (ml) Blanco 10 1 20 30 Blanco 10 2 20 30 Blanco DA 3 10 3 20 30 Blanco 10 4 20 30 Blanco 10 5 20 30 (ml) 7,400 7,050 7,800 7,800 7,700 7,150 7,900 7,150 7,675 7,350 7,550 7,350 6,950 7,400 7,150 7,300 6,950 7,400 7,150 7,300 gasto final (ml) 6,650 4,575 2,150 0,050 7,000 5,000 2,300 0,050 7,150 4,975 2,825 0,050 6,350 4,800 2,250 0,050 6,350 5,300 1,900 0,000 DBO5 (mg/L) 0,8 178,5 253,6 241,5 224,5 0,7 150,1 253,6 220,8 208,2 0,5 191,5 217,4 233,7 214,2 0,6 207,0 222,5 229,4 219,7 0,6 155,3 240,6 231,2 209,0

253

Tabla XIV.4: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 500 mg/L para la validacin del mtodo de DBO5
Nivel alto Concentracin Dilucin (ml) Blanco 4 1 8 12 Blanco 4 2 8 12 Blanco DA 1 4 3 8 12 Blanco 4 4 8 12 Blanco 4 5 8 12 gasto inicial (ml) 7,750 7,750 7,400 7,200 7,100 7,150 7,550 7,250 7,150 7,600 7,850 7,550 6,950 6,950 6,850 6,800 6,950 6,900 6,900 6,800 = gasto final (ml) 7,350 5,275 3,200 1,650 6,800 4,900 3,600 1,750 6,900 5,400 3,600 1,700 6,800 4,925 3,050 1,175 6,800 4,900 3,100 1,175 500 mg/L DBO5 (mg/L) 0,4 522,4 478,3 432,2 477,6 0,3 490,9 459,4 436,4 462,2 0,3 490,9 503,5 469,9 488,1 0,2 472,0 459,4 459,4 463,6 0,2 465,7 459,4 459,4 461,5

Solucin valorante de Na2S2O3 empleada N 4 Repeticiones

254

Tabla XIV.4: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 500 mg/L para la validacin del mtodo de DBO5 Continuacin
Nivel alto Repeticiones Dilucin (mL) Blanco 4 1 8 12 Blanco 4 2 8 12 Blanco DA 2 4 3 8 12 Blanco 4 4 8 12 Blanco 4 5 8 12 Concentracin = gasto inicial (mL) 7,500 7,250 7,300 7,250 7,250 7,275 7,400 7,400 6,925 7,000 6,725 6,650 7,550 7,050 7,200 6,925 7,500 7,250 7,300 7,250 gasto final (mL) 7,100 4,900 3,100 1,800 6,850 5,100 2,450 1,400 6,850 5,050 3,000 1,600 7,250 4,900 3,050 0,900 7,100 4,900 3,100 1,800 500 mg/L DBO5 (mg/L) 0,4 490,9 478,3 423,8 464,3 0,4 446,9 572,7 469,9 496,5 0,1 472,0 459,4 417,5 449,7 0,3 465,7 484,6 480,4 476,9 0,4 490,9 478,3 423,8 464,3

255

Tabla XIV.4: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 500 mg/L para la validacin del mtodo de DBO5 Continuacin
Nivel alto Repeticiones Dilucin (mL) Blanco 4 1 8 12 Blanco 4 2 8 12 Blanco DA 2 4 3 8 12 Blanco 4 4 8 12 Blanco 4 5 8 12 Concentracin = gasto inicial (mL) 7,500 7,550 7,300 7,100 7,150 7,300 7,650 7,350 6,900 6,900 6,750 6,800 7,500 7,100 7,225 6,825 7,000 7,000 7,100 6,925 gasto final (mL) 7,200 5,225 3,100 1,500 6,900 5,100 3,700 1,000 6,700 4,650 2,600 0,750 7,250 4,900 3,050 0,900 6,900 5,000 3,350 1,150 500 mg/L DBO5 (mg/L) 0,3 509,8 490,9 444,8 481,8 0,3 490,9 465,7 511,9 489,5 0,2 516,1 497,2 490,9 501,4 0,3 490,9 494,1 476,2 487,1 0,1 478,3 459,4 476,2 471,3

256

Tabla XIV.5: Valores experimentales obtenidos en la determinacin del % de Recuperacin de una muestra fortificada para el mtodo de DBO5
Matriz: agua residual Solucin valorante de Na2S2O3 empleada N 4 Repeticiones Dilucin (mL) Blanco 100 1 200 300 gasto inicial (mL) 7,300 6,900 7,025 7,150 gasto final (mL) 7,150 5,100 3,675 2,100 DBO5 (mg/L) 0,1 16,6 16,1 16,4 16,4 Blanco 100 2 200 300 7,300 7,600 7,050 7,100 7,075 5,900 3,425 2,500 0,2 14,9 17,1 14,7 15,6 Blanco 100 3 200 300 7,450 7,100 7,100 7,100 7,400 5,425 4,150 2,450 0,05 16,4 14,6 15,4 15,5 Blanco 100 4 200 300 7,075 7,100 6,800 6,750 6,800 5,500 3,350 2,550 0,3 13,3 16,0 13,2 14,2 Blanco 100 5 200 300 7,100 7,100 6,800 6,750 6,825 5,300 3,750 2,450 0,3 15,4 14,0 13,5 14,3

257

Tabla XIV.5: Valores experimentales obtenidos en la determinacin del % de Recuperacin de una muestra fortificada para el mtodo de DBO5 Continuacin
Matriz + adicin del MRC Solucin valorante de Na2S2O3 empleada N 4 Adicin : 10 mg/L Repeticiones Dilucin (ml) Blanco 50 1 100 150 gasto inicial (ml) 7,150 7,950 6,950 7,300 gasto final (ml) 6,850 6,100 4,400 2,800 DBO5 (mg/L) 0,3 31,2 22,7 28,2 27,4 Blanco 50 2 100 150 Blanco 50 3 100 150 7,150 7,200 7,000 7,200 7,350 7,200 6,825 7,200 7,000 5,850 4,650 3,000 7,150 5,850 4,400 3,100 0,2 24,2 22,2 27,2 24,5 0,2 23,2 22,4 26,2 23,9 Blanco 50 4 100 150 Blanco 50 5 100 150 7,000 7,075 6,950 7,050 7,050 7,200 6,825 7,200 6,850 5,600 4,275 3,050 6,975 5,850 4,400 3,100 0,2 26,7 25,4 25,8 26,0 0,1 25,7 23,7 27,0 25,5

258

Tabla XIV.6: Clculo de la precisin en el nivel de 2 mg/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de DBO5
Nivel bajo Repeticiones 1 2 3 4 5 , mg/L % CVr , mg/L , mg/L
,

Concentracin = DA 1 2,0 2,1 1,9 2,0 1,7 1,94 7,90 1,90 0,15 0,16 DA 2 1,9 1,7 1,7 1,8 1,9 1,81 8,49 , mg/L2 % CVr % CVR

2 mg/L DA 3 1,8 1,8 2,0 2,3 2,0 1,96 7,84 0,002 7,90 8,44

mg/L

Resultados del ANOVA de un factor realizados con ayuda de Excel

Origen de las variaciones Entre grupos Dentro de los grupos Total SDC 0,07 0,28 0,35 2 12 14 DCM 0,03 0,02 F 1,47 0,27 F crtico 3,89

0,07 0,28 0,03 0,02 0,35 1,47 crtico 3,89 0,27 2 12 14

Diferencia cuadrtica entre grupos Diferencia cuadrtica dentro del grupo Diferencia cuadrtica media entre grupos Diferencia cuadrtica media dentro del grupo Diferencia cuadrtica media total experimental Valor crtico para Probabilidad Grados de libertad 1 Grados de libertad 2 Grados de libertad totales

259

Tabla XIV.7: Clculo de la precisin en el nivel de 200 mg/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de DBO5
Nivel medio Repeticiones 1 2 3 4 5 , mg/L % CVr , mg/L , mg/L
,

Concentracin = DA 1 188,6 223,2 221,1 218,4 234,6 217,18 5,60 211,82 12,17 13,25 DA 2 192,6 195,2 204,7 205,1 218,2 203,18 5,99 , mg/L2 % CVr % CVR

200 mg/L DA 3 224,5 208,2 214,2 219,7 209,0 215,11 5,66 27,50 5,60 6,26

mg/L

Resultados del ANOVA de un factor realizados con ayuda de Excel

Origen de las variaciones Entre grupos Total SDC 571,12 2347,76 2 12 14 DCM 285,56 148,05 F 1,93 0,19 F crtico 3,89

Dentro de los grupos 1.776,64

571,12 1.776,64 285,56 148,05 2347,76 1,93 crtico 3,89 0,19 2 12 14

Diferencia cuadrtica entre grupos Diferencia cuadrtica dentro del grupo Diferencia cuadrtica media entre grupos Diferencia cuadrtica media dentro del grupo Diferencia cuadrtica media total experimental Valor crtico para Probabilidad Grados de libertad 1 Grados de libertad 2 Grados de libertad totales

260

Tabla XIV.8: Clculo de la precisin en el nivel de 500 mg/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de DBO5
Nivel alto Repeticiones 1 2 3 4 5 , mg/L % CVr , mg/L , mg/L
,

Concentracin = DA 1 477,6 462,2 488,1 463,6 461,5 470,63 2,90 476,53 13,66 14,86 DA 2 464,3 496,5 449,7 476,9 476,2 472,73 2,89 , mg/L2 % CVr % CVR

500 mg/L DA 3 481,8 489,5 501,4 487,1 471,3 486,23 2,81 34,33 2,90 3,12

mg/L

Resultados del ANOVA de un factor realizados con ayuda de Excel

Origen de las variaciones Entre grupos Total SDC 716,25 2.953,94 2 12 14 DCM 358,12 186,47 F 1,92 0,19 F crtico 3,89

Dentro de los grupos 2.237,70

716,25 2.237,70 358,12 186,47 2.953,94 1,92 crtico 3,89 0,19 2 12 14

Diferencia cuadrtica entre grupos Diferencia cuadrtica dentro del grupo Diferencia cuadrtica media entre grupos Diferencia cuadrtica media dentro del grupo Diferencia cuadrtica media total experimental Valor crtico para Probabilidad Grados de libertad 1 Grados de libertad 2 Grados de libertad totales

261

Tabla XIV.9: Valores para el clculo de los coeficientes de sensibilidad para el mtodo de DBO5
Valores para el clculo de las constantes A5, B5, C5 y D5; A8 y B8 Factor de dilucin (f) Concentracin (mg/L) 2 00 500 (mg/L) 2 4 4 (mL) 1000 1000 (mL) 20 8 = 1

Valores para el clculo de las constantes A6, B6, C6 y D6 (Eq/L) 0,025 (mL) 10 Valor de las constantes A7, B7 y C7 = (Eq/L) 0,025

(mL) 10

0,057 (Eq/L) (mg/L) 43,7 Valor de las constantes A9, B9 y C9 (mL) 100

(mg/L) 2 200 500

200 mg/L

(mL) 10 -

(mL) 1000 -

262

Tabla XIV.10: Clculo de los coeficientes de sensibilidad para el mtodo de DBO5

Clculo de las constantes A5, B5, C5 y D5 A partir de las ecuaciones descritas en el captulo 3 se calcularon los coeficientes de sensibilidad [3.51] ; Concentracin (mg/L) 200 500 A5 (mL/mL) 50 125 [3.52] ; B5 (mg/L*mL) 0,2 0,5 [3.53] ; C5 (mg/L*mL) 10,0 62,5 D5 (mg/L) 200 500 [3.54]

Clculo de las Constantes A8 y B8 [3.74] ; Concentracin (mg/L) 2 A8 1 Clculo de las Constantes A6, B6 y C6 [3.60] ; A6 (mL/mL) 1 B6 (Eq/L*mL) 0,0025 Clculo de las Constantes A7, B7 y C7 [3.66] ; A7 (mL/mL) 0,437

[3.75] D8 (mg/L) 2,0

[3.61]; C6

[3.62]

(Eq/L*mL) 0,0025

[3.67]; B7 (Eq/L*mL) 0,00057 C7

[3.68]

(Eq/L*mL) 0,000249

Clculos de las Constantes A9, B9 y C9 [3.78]; A9 (mL/mL) 0,01

Concentracin (mg/L) 2 200 500

[3.79]; B9 (mg/L*mL) 0,2 -

[3.80] C9

(mg/L*mL) 0,002 -

263 , medida del volumen Tabla XIV.11: Clculo de la incertidumbre en la medida de OD, y en la medida del volumen de dilucin, para el mtodo de DBO5 de aforo,
Clculo de [3.55] Clculo de [3.56] Material Volumtrico utilizado : Bureta de 10 mL (mL)

Probeta de 1000 mL 0,001 (mL) 2,8868

(mL) (mL)

0,00693 0,00279 0,01443 0,01628 Clculo de (mL) = [3.57] 2,88675

(mL) (mL = mg/L) =

Material Volumtrico utilizado : Para 200mg/L Pipeta aforada de 10 mL (mL)

Para 500 mg/L Pipeta graduada de 10 mL (mL)

0,0015 (mL) (mL) = 0,00115 0,00242 0,00308

0,0025 (mL) (mL) = 0,00693 0,00109 0,00745

(mL)

(mL)

Tabla XIV.12: Clculo de la incertidumbre en la medida de la alcuota, / para el mtodo de DBO5 la medida del volumen preparado, /
Clculo de
/

y en

[3.82]

Clculo de

[3.83]

Material Volumtrico utilizado : Pipeta aforada de 10 mL (mL)

Baln aforado de 1000 mL (mL)

0,0015 (mL) (mL) (mL) = 0,00115 0,00242 0,00308

0,0150 (mL) (mL) (mL) = 0,12124 0,02425 0,12455

264

Tabla XIV.13: Clculo de la incertidumbre del factor de la solucin valorante, mtodo de DBO5
Clculo de Clculo de MRC utilizado : (Eq/L) A7 (mL/mL) Probeta de 50 mL (mL)

para el

Solucin de Dicromato 0,057 N = = 2,5227E-05 0,437 Baln aforado de 100 mL 0,0150 (mL)

Material Volumtrico utilizado : 0,0015 (mL) (mL) 0,08718 0,00606 0,08740 0,000249 1 Clculo de [3.64]

(mL) (mL)

0,15588 0,00364 0,15665 0,00057

(mL)= B7 (Eq/L*mL) (Eq/L) A6 (Eq/L)-1 Clculo de

(Ml) C7 (Eq/L*mL) = = 9,25635E-05

[3.65]

[3.63]

Material Volumtrico utilizado : Bureta de 10 mL (mL)

Pipeta aforada de 10 mL 0,001 (mL)

0,0015 (mL) (mL) 0,00115 0,00242 0,00308 0,0025 0,0000926 0,025 0,00370

(mL) (mL) (mL) =

0,00693 0,00279 0,01443 0,01628 0,0025 (Eq/L) =

(mL) C6 (Eq/L*mL) =

(mL)= B6 (Eq/L*mL) =

Normalidad terica (Eq/L) = [3.58] =

Tabla XIV.14: Clculo de la incertidumbre del MRC,

Clculo de Concent. (mg/L) 2 200 500 A9 (mL/mL) 0,01 /

para el mtodo de DBO5

[3.77]
/

B9 (mg/L*mL) 0,2 -

C9 (mg/L*mL) 0,002 -

(mg/L) 0,01020 1,02041 2,55102

(mL)

(mL)

(mg/L) 0,00067 1,02041 2,55102

0,00308 -

0,12455 .

265

Tabla XIV.15: Clculo de la incertidumbre del procedimiento, mtodo de DBO5

Clculo de Conc.
(mg/L)

para el

[3.50]

A8
(mg/L)

D8
(mg/L) (mg /L)

2 Conc. 200 500

1 A5

0,01628

2 B5

0,0037 C5
(mL) (mg/L*mL) (mL)

0,0179 D5
(mg/L) (mg /L)

(mg/L) (mL/mL)

(mg/L)

(mg/L*mL)

50 125

0,0163 0,0163

0,2 0,5

2,89 2,89

10,0 62,5

0,00308 0,00745

200 500

0,0037 0,0037

1,2431 3,1416

Tabla XIV.16: Clculo de la incertidumbre combinada,

Clculo de Concentracin (mg/L) 2 200 500 [3.45] (mg/L) 0,16 13,25 14,86

del mtodo para el DBO5

[3.84]

(mg/L) 0,0179 1,2431 3,1416

(mg/L) 0,0007 1,0204 2,5510

(mg/L) 0,1616 13,3470 15,4007

Tabla XIV.17: Clculo del nmero efectivo de grados de libertad, DBO5

Clculo de Concentracin (mg/L) 2 200 500

para el mtodo de

[1.48]

(mg/L4) 0,0007 31734,44 56255,09

(mg/L4) 0,0007 30819,55 48754,59 14 14 14 14,35 14,42 16,15 2,21 2,21 2,19

*Factor derivado de la distribucin de Student a un nivel de confianza tabla 1.3

95,45% obtenido de la

266

Tabla XIV.18: Clculo de la Incertidumbre Expandida,

Incertidumbre expandida del mtodo Concentracin (mg/L) 2 200 500 **Valor de

para el mtodo de DBO5

(mg/L) 0,16 13,35 15,40 2 2 2

**

Incertidumbre Expandida, (mg/L) 0,32 26,69 30,80 % 16,16 13,35 6,16

de la tabla XIV.17 tomado como el entero menor ms prximo

Tabla XIV.19: Clculo de lmite de deteccin a partir de los valores obtenidos del blanco para el mtodo de DBO5
Repeticiones 1 2 3 4 5 Valor medio Desv. estndar LD DA 1 1,4 1,0 0,8 0,9 0,9 0,99 0,23 1,68 DA 2 0,7 0,3 0,4 0,7 0,7 0,55 0,21 1,17 DA 3 0,8 0,7 0,5 0,6 0,6 0,64 0,09 0,90

267

ANEXO XV VALORES OBTENIDOS EN LA VALIDACN DEL MTODO PARA LA DETERMINACIN DE STD

268

Tabla XV.1: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 50 mg/L para la validacin del mtodo de STD
Nivel bajo Repeticiones 1 DA 1 2 3 4 5 1 DA 2 2 3 4 5 1 DA 3 2 3 4 5 Concentracin Peso inicial (g) 44,2775 43,6345 45,2620 43,5468 41,6572 47,3677 42,8860 46,0329 46,9357 44,2781 44,7643 45,4087 48,5640 43,8159 43,5452 = (g) 44,2805 43,6369 45,2646 43,5492 41,6597 47,3701 42,8888 46,0359 46,9382 44,2809 44,7670 45,4115 48,5670 43,8184 43,5482 50 mg/L Concentracin (mg/L) 60 48 52 48 50 48 56 60 50 56 54 56 60 50 60

Peso final

Tabla XV.2: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 500 mg/L para la validacin del mtodo de STD
Nivel medio Repeticiones 1 DA 1 2 3 4 5 1 DA 2 2 3 4 5 Concentracin Peso inicial (g) 44,1736 43,8168 48,5648 47,3692 44,2813 43,6379 43,8823 46,0333 41,6575 43,8811 = (g) 44,1992 43,8430 48,5909 47,3946 44,3066 43,6635 43,9079 46,0583 41,6832 43,9063 500 mg/L Concentracin (mg/L) 512 524 522 508 506 512 512 500 514 504

Peso final

269

Tabla XV.2: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 500 mg/L para la validacin del mtodo de STD Continuacin
Repeticiones 1 DA 3 2 3 4 5 Peso inicial (g) 46,0330 45,2650 47,3675 46,0330 45,2623 Peso final (g) 46,0590 45,2900 47,3932 46,0590 45,2882 Concentracin (mg/L) 520 500 514 520 518

Tabla XV.3: Valores experimentales obtenidos en el nivel de 1000 mg/L para la validacin del mtodo de STD
Nivel alto Repeticiones 1 DA 1 2 3 4 5 1 DA 2 2 3 4 5 1 DA 3 2 3 4 5 Concentracin Peso inicial (g) 41,4711 45,3721 43,6349 47,5309 44,7648 42,8877 46,9367 45,3742 44,1728 48,5666 44,7643 44,1721 41,6601 46,9359 43,5489 = (g) 41,5201 45,4208 43,6850 47,5806 44,8133 42,9374 46,9869 45,4233 44,2224 48,6172 44,8141 44,2221 41,7097 46,9867 43,5980 1000 mg/L Concentracin (mg/L) 980 974 1002 994 970 994 1004 982 992 1012 996 1000 992 1016 982

Peso final

270

Tabla XV.4: Valores experimentales obtenidos en la determinacin del % de Recuperacin de una muestra fortificada para el mtodo de STD
Matriz : Agua residual Repeticiones 1 2 3 4 5 Peso inicial (g) 44,7630 47,3670 44,2769 43,8807 46,0407 Peso final (g) 44,7754 47,3792 44,2889 43,8931 46,0530 Concentracin (mg/L) 248 244 240 248 246

Matriz + adicin del MRC Adicin : 50 mg/L Repeticiones 1 2 3 4 5 Peso inicial (g) 44,1715 43,8151 48,5639 44,5652 47,1696 Peso final (g) 44,1861 43,8297 48,5783 44,5797 47,1841 Concentracin (mg/L) 292 292 288 290 290

271

Tabla XV.5: Clculo de la precisin en el nivel de 50 mg/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de STD
Nivel bajo Repeticiones 1 2 3 4 5 , mg/L % CVr , mg/L , mg/L
,

Concentracin = DA 1 60 48 52 48 50 51,6 9,14 53,87 4,72 4,76 DA 2 48 56 60 50 56 54,0 8,74 , mg/L2 % CVr % CVR

50 mg/L DA 3 54 56 60 50 60 56,0 8,43 0,40 8,74 8,84

mg/L

Resultados del ANOVA de un factor realizados con ayuda de Excel

Origen de las variaciones Entre grupos Dentro de los grupos Total SDC 48,53 267,20 315,73 2 12 14 DCM 24,27 22,27 F 1,09 0,37 F crtico 3,89

48,53 267,20 24,27 22,27 315,73 1,09 crtico 3,89 0,37 2 12 14

Diferencia cuadrtica entre grupos Diferencia cuadrtica dentro del grupo Diferencia cuadrtica media entre grupos Diferencia cuadrtica media dentro del grupo Diferencia cuadrtica media total experimental Valor crtico para Probabilidad Grados de libertad 1 Grados de libertad 2 Grados de libertad totales

272

Tabla XV.6: Clculo de la precisin en el nivel de 500 mg/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de STD
Nivel medio Repeticiones 1 2 3 4 5 , mg/L % CVr , mg/L , mg/L
,

Concentracin = DA 1 512 524 522 508 506 514,4 1,48 512,40 7,62 7,65 DA 2 512 512 500 514 504 508,4 1,50 , mg/L2 % CVr % CVR

500 mg/L DA 3 520 500 514 520 518 514,4 1,48 0,37 1,48 1,49

mg/L

Resultados del ANOVA de un factor realizados con ayuda de Excel

Origen de las variaciones Entre grupos Dentro de los grupos Total SDC 120,00 697,60 817,60 2 12 14 DCM 60,00 58,13 F 1,03 0,39 F crtico 3,89

120,00 697,60 60,00 58,13 817,60 1,03 crtico 3,89 0,39 2 12 14

Diferencia cuadrtica entre grupos Diferencia cuadrtica dentro del grupo Diferencia cuadrtica media entre grupos Diferencia cuadrtica media dentro del grupo Diferencia cuadrtica media total experimental Valor crtico para Probabilidad Grados de libertad 1 Grados de libertad 2 Grados de libertad totales

273

Tabla XV.7: Clculo de la precisin en el nivel de 1000 mg/L a partir de los valores obtenidos del ANOVA de un factor para el mtodo de STD
Nivel alto Repeticiones 1 2 3 4 5 , mg/L % CVr , mg/L , mg/L
,

Concentracin DA 1 980 974 1002 994 970 984,0 1,28 992,67 12,55 13,50 DA 2 994 1004 982 992 1012 996,8 1,26 , mg/L2 % CVr % CVR

1000 mg/L DA 3 996 1000 992 1016 982 997,2 1,26 24,88 1,28 1,36

mg/L

Resultados del ANOVA de un factor realizados con ayuda de Excel

Origen de las variaciones Entre grupos Total SDC 563,73 2.453,33 2 12 14 DCM 281,87 157,47 F 1,79 0,21 F crtico 3,89

Dentro de los grupos 1.889,60

563,73 1.889,60 281,87 157,47 2.453,33 1,79 crtico 3,89 0,21 2 12 14

Diferencia cuadrtica entre grupos Diferencia cuadrtica dentro del grupo Diferencia cuadrtica media entre grupos Diferencia cuadrtica media dentro del grupo Diferencia cuadrtica media total experimental Valor crtico para Probabilidad Grados de libertad 1 Grados de libertad 2 Grados de libertad totales

274

Tabla XV.8: Valores para el clculo de los coeficientes de sensibilidad para el mtodo de STD
Valores para el clculo de las constantes A10 y B10 Factor de conversin Concentracin (mg/L) 50 500 1000
/

= 1000.000 mg*mL/g*L (g) 0,0025 0,025 0,05 (mL) 50 50 50

Valores para el clculo de las constantes A11, B11 y C11

/

(mg/L) 50 500 1000

(mL) 25 250 -

1000 mg/L

(mL) 500 500 -

Tabla XV.9: Clculo de los coeficientes de sensibilidad para el mtodo de STD

Clculo de las Constantes A10, y B10 [3.88] ; Concentracin (mg/L) 50 500 1000 [3.89] A10 (mg/g*L) 20000 20000 20000 Clculo de las constantes A11, B11 y C11 A partir de las ecuaciones descritas en el captulo 3 se calcularon los coeficientes de sensibilidad

B10 (mg/mL*L) 1 10 20

[3.94]; A11 (mL/mL) 0,05 0,5 -

[3.95]; B11 (mg/L.mL) 2 2 -

[3.96] C11

Concentracin (mg/L) 50 500 1000

(mg/L) 0,1 1 -

275 Tabla XV.10: Clculo de la incertidumbre en la medida de la alcuota, / para el mtodo de STD medida del volumen preparado, /
/ /

y en la

Clculo de

[3.98]

(mg/L) 50 500 1000

/

(mL) 25 250 -

(mL) 0,0015 0,0100 Clculo de

(mL)

(mL) 0,00091 0,02122 -

(mL)

0,0040 0,0577 /

0,00441 0,06232 /

[3.99]

(mL) 500

(mL) 0,01

(mL)

(mL) 0,00606

(mL)

0,26558

0,26584

Tabla XV.11: Clculo de la incertidumbre en la medida de masa, y en la medida del para el mtodo de STD volumen de muestra,
Clculo de [3.90] Clculo de [3.91]

Material Volumtrico utilizado : Equipo utilizado : Contribucin del peso (g) (g) (g) (g)

Baln aforado de 50 mL Balanza analtica Contribucin del volumen (mL)

0,00007 0,000058 0,000035 0,000058 = 0,000113

0,0015 (mL) (mL) = 0,01501 0,01394 0,02054

(g)

(mL)

Tabla XV.12: Clculo de la incertidumbre del MRC,

Clculo de Concent. (mg/L) 50 500 1000 A11 (L/L) 0,05 0,5 /

para el mtodo de STD

[3.93]
/

B11 (mg/L*L) 2000 2000 (L)

C11 (mg/L*L) 100 1000 (L)

(mg/L) 0,2551 2,5510 5,1020

(mg/L) 0,0308 1,3089 5,10

4,41E-06 6,23E-05 -

2,66E-04 2,66E-04 -

276

Tabla XV.13: Clculo de la incertidumbre del procedimiento, mtodo de STD

Clculo de Concentracin (mg/L) 50 500 1000 A10 (L ) 20 20 20
-1

para el

[3.87]
B10 (mg/L2) 1000 10000 20000 (L) 2,05E-05 2,05E-05 2,05E-05 (mg/L) 2,25989 2,26911 2,29684

(mg) 0,112990 0,112990 0,112990

Tabla XV.14: Clculo de la incertidumbre combinada,

Clculo de Concentracin (mg/L) 50 500 1000 [3.85] (mg/L) 4,76 7,65 13,50

para el mtodo de STD

[3.100]

(mg/L) 2,25989 2,26911 2,29684

(mg/L) 0,0308 1,3089 5,1

(mg/L) 5,27017 8,08509 14,6169

Tabla XV.15: Clculo del nmero efectivo de grados de libertad, STD

Clculo de Concentracin (mg/L) 50 500 1000

para el mtodo de

(mg/L4) 771,43 4273,06 45647,58

(mg/L4) 513,78 3423,03 33250,31 14 14 14 21,02 17,48 19,22 2,13 2,17

*Factor derivado de la distribucin de Student a un nivel de confianza tabla 1.3

95,45% obtenido de la

2,14

Tabla XV.16: Clculo de la Incertidumbre Expandida,

Clculo de Concentracin (mg/L) 50 500 1000 **Valor de

para el mtodo de STD

[1.49]

(mg/L) 5,27 8,09 14,62 2 2 2

**

Incertidumbre Expandida, (mg/L) 10,54 16,17 29,23 % 21,08 3,23 2,92

de la tabla XV.15 tomado como el entero menor ms prximo

277

ANEXO XVI CERTIFICADOS DE CALIBRACIN