6000 AC: Arte de fermentar. Los sumerios y babilonios usaban levaduras para fabricar cerveza. 4000 AC: Los egipcios descubrieron la manera de fermentar pan con la levadura cervecera. Libro del Gnesis (9: 20,21): No se dedic a la labranza y plant una via. Bebi del vino, se embriag
Siglo XIV DC: Destilacin de bebidas alcohlicas. Uso de bacterias de cido actico para fabricar vinagre, de bacterias de cido lctico para conservar la leche (yogur, por ejemplo). Siglo XVII: Anthony von Leeuwenhoek (16321723) descubre el mundo microbiano con sus microscopios primitivos. Siglo XIX: El desarrollo tcnico de los microscopios permite demostrar el origen de los microbios y vencer la creencia de la generacin espontnea.
Hasta la primera guerra mundial, apenas progres la idea de utilizar bacterias y levaduras para fabricar otra cosa que no fuera alcohol.
Proceso Neuberg para producir glicerol (para nitroglicerina) mediante la fermentacin dirigida de Saccharomyces cerevisiae. Agregando lcali y bisulfito de sodio al depsito de fermentacin alcohlica se fomentaba la produccin de glicerol. Proceso Weizmann, usando Clostridium acetobutylicum, para la produccin de disolventes como la acetona (fabricacin de cordita).
Sin embargo, las restricciones impuestas durante el conflicto anunciaron lo que puede llamarse como segunda era biotecnolgica.
Los descubrimientos de Pasteur, Robert Koch (1843-1910) y Alexander Fleming (1928) revolucionaron el tratamiento de las enfermedades infecciosas con el descubrimiento de los antibiticos. Durante la Segunda Guerra Mundial comienza la tercera era biotecnolgica, por la necesidad de contar con ciertos medicamentos para que las vctimas no murieran de sepsis bacteriana.
Puede decirse que la cuarta era biotecnolgica comienza a principios de la dcada de 1970, con el advenimiento de la Ingeniera Gentica. El descubrimiento de los sistemas de restriccin y modificacin en bacterias y la aplicacin de las endonucleasas. Los trabajos de Milstein y Kohler sobre la formacin de hibridomas con la posterior utilizacin para la produccin de anticuerpos monoclonales (1975).
Un hito que merece resaltarse ocurri en 1982 cuando la compaa Eli Lilly consigui la aprobacin de la Food and Drug Administration de los Estados Unidos de Norteamrica para la utilizacin de insulina humana clonada y producida en Escherichia coli. A esto siguieron los interferones, hormonas de crecimiento humana y bovina, el antgeno de superficie del virus de la hepatitis B, etc.
El desarrollo de un proceso de produccin a gran escala, en forma exitosa, es el resultado de acelerar e intensificar un concepto original, generalmente un procedimiento de laboratorio o a pequea escala.
DISEO DE UN FERMENTADOR
El recipiente en el que se realiza en proceso industrial se denomina fermentador. El tamao de los fermentadores puede variar entre el de los pequeos de 5 a 10 litros, a escala de laboratorio y los enormes de 500.000 litros a escala industrial. El tamao del fermentador utilizado depende del proceso y de cmo se va a operar. Los procesos que operan con medio no renovado, requieren fermentadores ms grandes que los procesos que funcionan de modo continuo o semicontnuo.
DISEO DE UN FERMENTADOR
PRINCIPAL FUNCIN: Proporcionar una ambiente ptimo para el proceso de fermentacin. TIPOS DE FERMENTADOR: Aerobio y anaerobio
TIPOS DE FERMENTADOR
Los fermentadores anaerbicos requieren poco equipamiento especial, excepto el necesario para eliminar el calor que se genera durante la fermentacin, mientras que los fermentadores aerbicos requieren un equipamiento mucho ms elaborado, para asegurar que se logra el mezclado y la aireacin adecuados. Como la mayora de los fermentadores son aerbicos, la presente discusin se va a centrar en los fermentadores aerbicos.
Tipos de fermentador de cultivo sumergido. (A) Fermentador de tanque agitado. (B) Columna de burbujeo. (C) Fermentador de puente de aire de asa interna. (D) Fermentador de puente de aire de asa externa. (E) Fermentador de lecho fluidizado. (F) Fermentador de cama triangular.
Impulsores para tanques agitados. (A) Turbina de disco de Rushton agitados. (flujo radial). (B) Propela marina (flujo axial). (C) Lightnin' hydrofoil flujo flujo Lightnin' (axial flow). (D) Prochem hydrofoil (flujo axial). (E) Intermig (flujo flow). flujo axial). (F) Chemineer hydrofoil (flujo axial). flujo
El vstago que hace v girar el impulsor est est unido al motor a travs trav de otro eje que debe penetrar en el fermentador desde fuera. Debido a la necesidad de mantener la esterilidad, es vital que el cierre hermtico herm que conecta el eje con el motor est dispuesto est de tal manera que los contaminantes no puedan pasar a travs trav de l.
Fermentador de cultivo sumergido tpico. (1) Tanque del biorreactor. (2) Chaqueta. (3) Aislamiento. (4) Cubierta protectora. (5) Coneccin al inculo. (6) Puertos para sensores (7) Agitador. (8) Difusor de gas. (9) Sello mecnico. (10) Caja de herramienta. (11) Motor. (12) Lnea de recoleccin. (13) Conecciones de la chaqueta. (14) Vlvula de muestreo con sello de vapor. (15) Mirilla de cristal. (16) Conecciones para cidos, lcalis y agentes antiespumantes. (17) Entrada de aire. (18) Tapa removible. (19) Lnea de alimentacin de medio. (20) Lnea de deareado (se conecta al condensador, que no se muestra). (21) Puertos de instrumentacin para espuma, sensores, presin y otros artefactos. (22) Rompedor de espuma de centrfuga. (23) Mirilla de crsital (no mostrada) y coneccin de vapor. (24) Lnea del disco de ruptura.
El crecimiento de microorganismos puede verse como el incremento en el material celular, expresado en trminos de masa o nmero de clulas. El incremento en biomasa puede determinarse gravimtricamente o numricamente para sistemas unicelulares.
Tiempo de duplicacin: duplicaci Se refiere al tiempo requerido para duplicar el peso de la biomasa. Tiempo de generacin: generaci Se refiere al tiempo necesario para duplicar el nmero de clulas.
Modos de operacin de los operaci fermentadores: En un proceso biotecnolgico, existen tres biotecnol formas de hacer crecer a los microorganismos en un fermentador: -Por lotes (batch) (batch) -Semi-continuo Semi-Continuo Operacin por lotes: El reactor se Operaci carga con la especie reactiva y, a medida que procede la reaccin, cambian las condiciones en el reactor al consumirse los reactivos y formarse los productos. Cuando se ha alcanzado el nivel deseado de reaccin, se vaca el reactor, se limpia y el proceso se repite. Son procesos que no se encuentran en estado estacionario.
El ambiente nutricional dentro del fermentador cambia en forma continua y, por lo tanto, fuerza cambios en el metabolismo celular. Eventualmente, la multiplicacin celular cesa por desaparicin o limitacin de nutrientes y acumulacin de productos txicos de excrecin.
La naturaleza compleja del crecimiento de microorganismos por lotes, se muestra tal como sigue:
La fase 1 o lag, es un tiempo de aparente no crecimiento, pero estudios bioqumicos demuestran actividad metablica, indicando que las clulas estn en proceso de adaptacin a las condiciones ambientales y que un nuevo crecimiento comenzar, eventualmente.
Perfil de crecimiento tpico de microorganismos en t medio sumergido
Existe, luego, una fase de aceleracin transitoria cuando el inculo comienza a crecer que es seguida, rpidamente, por una fase de crecimiento exponencial. En la fase exponencial, el crecimiento microbiano ocurre a la mxima velocidad posible para ese microorganismo, con nutrientes en exceso, parmetros de crecimiento ideales y ausencia de inhibidores.
Sin embargo, en cultivos por lote, el crecimiento exponencial es de duracin limitada y, a medida que las condiciones nutricionales cambian, la velocidad de crecimiento disminuye y se entra en la fase de deceleracin, seguida de la fase estacionaria, donde el crecimiento global no se obtiene, por falta de nutrientes.
La fase final del ciclo es la fase de muerte, cuando la velocidad de crecimiento ha cesado. La mayora de los procesos biotecnolgicos por lotes se detiene antes de esta fase, debido a la disminucin en el metabolismo y a la lisis celular.
Algunos medios para prolongar la vida de un cultivo por lotes: -Adicin gradual de componentes nutritivos concentrados (carbohidratos), aumentando el volumen del cultivo (utilizado para produccin industrial de levadura). -Adicin de medio al cultivo (perfusin) y extraccin de un volumen igual de medio usado, libre de clulas (utilizado para cultivos de clulas animales).
Operacin continua: Existe un flujo Operaci continuo de reactivos frescos hacia el reactor y el producto fluye continuamente hacia fuera. En algunos sistemas continuos el medio nutriente es inoculado con el cultivo microbiano al entrar al reactor y los organismos llevan a cabo su actividad a medida que el lquido fluye a travs del sistema y salen del sistema junto con el medio.
Los organismos pueden separarse de la corriente que lleva al producto y reciclarse para inocular el lquido de alimentacin. En un sistema continuo con mezcla completa, las condiciones son uniformes en todo el reactor, en un equilibrio de mezcla de nutrientes, organismos y productos. La alimentacin del sistema es medio nutriente libre de organismos y, en algunos casos, un inculo de organismos reciclados.
Esta prctica de cultivo continuo, provee un crecimiento casi balanceado, con pequea fluctuacin de nutrientes, metabolitos, nmero celular o biomasa. Esto consiste en medio fresco entrando un sistema por lotes, en fase de crecimiento exponencial, con una remocin correspondiente de medio ms clulas.
Este mtodo de cultivo continuo, permite a los organismos crecer en condiciones de estado estacionario, en las que el crecimiento ocurre a una velocidad constante y en un medio ambiente constante.
En un sistema de cultivo perfectamente mezclado, se pasa medio estril al biorreactor, a un flujo constante y una mezcla de cultivo (medio, productos de desecho y organismos) emergen del mismo a la misma velocidad, manteniendo el volumen total del cultivo, dentro del biorreactor, constante.
FERMENTADOR DE CHAROLA
FERMENTADOR DE TUNEL
ESTERILIZACION Y ESTERILIDAD
Los fermentadores deben ser vaciados, limpiados, esterilizados y recargados antes de cada fermentacin, operaciones todas esenciales pero no productivas. En procesos por lotes, estas operaciones pueden tomar tanto tiempo como la fermentacin misma. En un proceso continuo, por el contrario, una corrida puede durar semanas o meses, es decir que el tiempo no productivo es, en proporcin, pequeo.
Esterilizacin: Esterilizaci
Esterilizacin de fermentadores. En el laboratorio, el mtodo estndar de esterilizacin es el calor: 120C de calor hmedo durante 15 min o 160C de calor seco durante, al menos, 1 hora. A escala industrial, el calor seco es prohibitivamente caro, salvo en casos muy especiales y se utiliza, habitualmente, la esterilizacin por calor hmedo.
Esterilizacin del fermentador y el medio conjuntamente. El calentamiento se consigue mediante: Inyeccin de vapor en el medio, por lo que el medio se prepara ligeramente ms concentrado para compensar la dilucin por el vapor condensado. El medio se calienta por conduccin, haciendo pasar vapor por la camisa de termostatizacin.
Esterilizacin por separado del fermentador y el medio. Este sistema ofrece ventajas ya que reduce el tiempo en el que el recipiente de fermentacin es improductivo: un fermentador vaco se esteriliza con relativa rapidez.
La esterilizacin es el proceso de conseguir la esterilidad, para la que no existen grados: un objeto, superfcie o sustancia es, o no es, estril. Si es estril no contiene organismos viables o clulas presentes y, si se le protege contra la contaminacin, la condicin estril permanecer indefinidamente. La desinfeccin implica que el material ha sido tratado a fin de eliminar o reducir el riesgo de organismos patgenos, pero no implica que todos los organismos viables hayan sido inactivados.
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La esterilizacin se utiliza para: 1. Asegurar que un proceso se lleva a cabo solamente con el organismo deseado 2. Permitir la utilizacin segura de los productos 3. Evitar la contaminacin ambiental 4. Impedir el deterioro de un producto
La esterilizacin se lleva a cabo: Eliminando los organismos viables como en la filtracin Matndolos de una de las siguientes formas: 1. Calentando en presencia o ausencia de agua 2. Irradiando con radiaciones ultravioleta, gamma oX 3. Tratando con productos qumicos en solucin o en forma gaseosa
Las esporas bacterianas resisten el calor (termfilas: 200 kPa a 134oC, 1-10 min, vapor de agua o calor seco a 180oC, 15 min) y, algunas, las altas dosis de radiacin (Deinococcus radiodurans: 6000 krad). La esterilizacin debe ser capaz de eliminar las esporas ms resistentes de las especies ms resistentes.
Muerte por calentamiento: En la esterilizacin hmeda, el vapor a presin tiene dos funciones importantes: 1. Condensndose sobre el material permite que el calor se transfiera rpidamente causando un aumento rpido de la temperatura 2. Las propias molculas de agua aumentan, o al menos mantienen el nivel de hidratacin dentro de la espora.
En la esterilizacin por calor seco, el calor es transferido muy lentamente y la tendencia es reducir ms el nivel de hidratacin y, de esta forma, se protegen las protenas de las esporas. Las esporas son considerablemente ms resistentes al calor seco que al calor hmedo.
Radiacin Radiaci La radiacin ultravioleta no es muy penetrante y no se puede confiar en ella como agente esterilizante, a menos que se pueda garantizar la exposicin directa del organismo contaminante. Los rayos gamma y X son ms tiles debido a su alto poder de penetracin.
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Determinacin de la destruccin de Determinaci destrucci microorganismos: Tiempo trmico letal: tiempo ms corto que t lleva destruir los microorganismos a una temperatura determinada Punto trmico letal: temperatura ms baja t que se necesita para matar a los organismos en 10 minutos. Para ambos se necesita saber el tamao inicial de la poblacin y las condiciones precisas. No son particularmente tiles.
Un parmetro ms til es: par m Tiempo de reduccin decimal o valor reducci D: tiempo en minutos, a una temperatura determinada, que se requiere para reducir la poblacin viable al 10% de su valor previo. Valor-Z: es el cambio de temperatura Valorque se requiere para modificar el valor D por un factor de 10.
Oxido de etileno y de propileno: pueden utilizarse en forma gaseosa. El de etileno es ms efectivo pero altamente txico, irritante y violentamente explosivo en mezclas con aire. Su efecto letal sobre las bacterias depende de la humedad; las condiciones ptimas incluyen 40-80% de humedad relativa y temperatura de 60oC durante 3-4h, para una concentracin de gas de 800-1000 mg/l. El proceso se utiliza cuando el equipo puede ser daado por altas temperaturas.
Esterilizacin por filtracin: Esterilizaci filtraci Filtros profundos: capa relativamente gruesa de fibra de vidrio, algodn, lana mineral, celulosa moldeados como planchas, tapones o cilindros. Filtros de pantalla: membranas hechas de steres de celulosa u otros polmeros
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Tempertatura
Termopar
Presin Presi
Manmetro Man
pH
Electrodos
Serpentines, barras enfriadoras Manipulacin de Manipulaci llaves y salidad de aire Bomba dosificadora de acidos y bases
Tiempo
Tiempo
Oxgeno Ox
Q
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Tiempo
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Q2
Tiempo
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CONTROL Y VIGILANCIA DEL PROCESO Control Qumico de las Fermentaciones Qu 1. Anlisis previos a la fermentacin An fermentaci 2. Anlisis para estimar la velocidad de An la fermentacin fermentaci 3. Anlisis posterior o final An
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