KELOMPOK 4 DIAGNOSTIK MOLEKULER

NAMA ANGGOTA KELOMPOK 4:

1. ANANDA FEBRIANA SOAMOLE (P00341021004)
2. AULIA PRICILYA LAPAE (P00341021008)
3. FITRI YANI (P00341021016)
4. HESTY MEILANI RISKIA ARSYAD (P00341021017)
5. SINDI (P00341021043)

PCR part 1
Sebelum memulai protokol ini, siswa harus mengisi lembar kerja yang disediakan di
halaman terakhir dokumen ini. Ini akan memungkinkan siswa menghitung volume reagen yang
tepat untuk dicampur dalam pembuatan master cocktail. Tujuan cocktail adalah untuk
mencampur semua Reagen umum. Dalam prosedur multi sampel untuk menghindari pemipetan
berlebih dan potensi kesalahan dalam contoh protokol ini ke empat siswa sedang memperkuat
gen aktinin 3 dari keempat sampel DNA mereka
Informasi ini diisi di sisi kiri lembar kerja di sisi kanan siswa sisi tangan menggunakan
persamaan untuk menentukan jumlah tabung yang dibutuhkan dan pengali untuk volume
reagen. Selain empat sampel DNA sebagai kontrol negatif selalu disertakan oleh karena itu
lima tabung diperlukan untuk reaksi PCR dalam pembuatan kesalahan pemipetan koktail
dihitung dengan menambahkan sampel lain sehingga pengali untuk grup ini adalah 6
Setiap baris tabel satu diwakili mengirimkan reagen umum yang digunakan dalam
semua sampel yang menjalani reaksi PCR pengali diisi di semua baris kolom pengali. Tabel
satu bergerak melintasi setiap baris volume yang ditunjukkan per reaksi dikalikan dengan
pengali 12,5×6 = 75 mikroliter merah tack ditambahkan ke koktail 11,5×6= 69 mikroliter
ditambahkan air ke koktail 0,5×6= 3 mikroliter masing-masing primer maju dan mundur
ditambahkan ke koktail akhirnya jumlah volume ini harus sama dengan produk akhir baris
75+68+3+3= 150 mikroliter volume total dalam koktail. Jumlah ini cocok 25×6.
Tabel kedua digunakan sebagai panduan untuk pelabelan sampel PCR seperti yang
ditunjukkan oleh persamaan kelompok ini akan menggunakan lima tabung kelas harus secara
kolektif menomori sampel PCR agar tidak membingungkan sampel di antara kelompok-
kelompok dalam contoh ini siswa ini telah menyisihkan sampel bernomor lima hingga
sembilan nama sampel diisi dikolom kedua dan primer yang digunakan untuk setiap sampel
diisi di dua kolom terakhir, dalam contoh ini primer maju adalah aktin dan 3f serta primer
terbalik adalah aktin dan tiga adalah primer yang sama digunakan untuk semua sampel reagen
umum yang disediakan adalah biologi molekuler air primer maju yang anda harus yakin untuk
memeriksa tanda PCR untuk memastikan bahwa Anda menggunakan konsentrasi yang sesuai
primer terbalik dan campuran siap pakai red tack harus dicairkan terlebih dahulu untuk
digunakan tetapi setelah simpan larutan di atas es untuk mencegah degradasi enzim.
Selanjutnya siapkan koktail dengan menggunakan volume dan Reagen yang ditunjukkan pada
lembar kerja. Dapatkan tabung baru dan beri label sebagai koktail. Saat membuat koktail
sebaiknya mulai dengan volume yang terbesar meskipun red tack adalah volume terbesar,
larutan harus disimpan diatas es selama mungkin sehingga sebagai gantinya air ditambahkan
terlebih dahulu saat menambahkan masing-masing Reagen pastikan untuk menggunakan
mikropipet yang sesuai untuk volume yang ditambahkan. Selanjutnya primer ditambahkan
sebaiknya pipet volume kecil langsung ke volume yang lebih besar untuk menghindari
kehilangan Reagen anda. Akhirnya menambahkan red tack dan segera mengembalikan stok ke
es, campur larutan di centrifuge semua tabung koktail yang dibuat oleh semua kelompok di
kelas bersama-sama. Tekan dan tahan tombol pendek untuk melakukan putaran singkat.

PCR part 2
1. Memecah koktail menjadi reaksi. Solusi koktail yang dikumpulkan akan dibagi diantara
5 tabung dalam contoh ini tabung PCR disediakan dalam 5 tabung, mikroliter larutan
koktail ditambahkan ke masing-masing 5 tabung
2. Sebelum menambahkan DNA kereaksi PCR pastikan bahwa tabung diberi label,
pastikan semua sampel DNA dicampur sebelum mentransfer larutan. Satu mikroliter
adalah volume yang sangat kecil, masukan ujungnya ke dasar tabung dan pompa ke
atas dan ke bawah untuk memastikan bahwa 1 mikrometer DNA telah dikeluarkan ke
dalam tutup reaksi tabung dengan erat dan dijentikkan untuk mencampur sampel.
3. Sentrifugasi sampel untuk mengumpulkan solusi, Menggunakan mikrosentrifuge untuk
mengumpulkan solusi di bagian bawah tabung untuk selalu mencampur dan
mengumpulkan solusi
4. Masukkan sampel ke dalam thermal cycler, Menghidupkan iechler termos dengan
saklar di belakang tempat tabung di thermosicler. Program siklus panas telah diprogram
ke dalam termosicler sehingga yang perlu dilakukan hanyalah menjalankannya dengan
menekan tombol lanjutan, gunakan panah horizontal untuk menavigasi ke program
yang diinginkan.
5. Siklus termal akan naik ke suhu awal