Sikarwar822015BBJ18873 en Id
Sikarwar822015BBJ18873 en Id
com
Lihat diskusi, statistik, dan profil penulis untuk publikasi ini di:https://www.researchgate.net/publication/281231866
Efek Anti Tumor Racun Calloselasma rhodostoma pada Garis Sel Kanker Payudara
Manusia
KUTIPAN BACA
3 73
3 penulis, termasuk:
Archana Sikarwar
Universitas Kedokteran Internasional (IMU)
25PUBLIKASI122KUTIPAN
LIHAT PROFIL
TinjauanLihat proyek
Semua konten yang mengikuti halaman ini diunggah olehArchana Sikarwarpada 05 Januari 2016.
DOMAIN ILMUinternasional
www.sciencedomain.org
1Departemen Patologi, Fakultas Kedokteran, International Medical University (IMU), Bukit Jalil,
Kuala Lumpur,Malaysia.
2Departemen Biologi Manusia, Fakultas Kedokteran, IMU, KL, Malaysia.
3Mahasiswa Sarjana Ilmu Biomedis, IMU, KL, Malaysia.
Kontribusi penulis
Pekerjaan ini dilakukan dalam kolaborasi antara semua penulis. Penulis YFL dan AS merancang penelitian
ini, dan menulis protokolnya. Penulis YYY melakukan analisis statistik. Penulis AS menulis yang pertama
draf naskah. Penulis YFL dan YYY mengelola analisis penelitian. Penulis YYY
mengelola pencarian literatur. Semua penulis membaca dan menyetujui naskah akhir.
Informasi Artikel
DOI: 10.9734/BBJ/2015/18873
Editor:
(1) Chung-Jen Chiang, Departemen Ilmu Laboratorium Medis dan Bioteknologi, Universitas Kedokteran China,
Taiwan.
Peninjau:
(1) César Luiz da Silva Guimarães, Departemen Kedokteran, Universitas Federal Rondônia, Brasil.
(2) Rodrigo Crespo Mosca, Pusat Teknologi Radiasi, Universitas São Paulo, Brasil.
Riwayat Tinjauan Sejawat Lengkap:http://sciencedomain.org/review-history/9876
ABSTRAK
Tujuan:Kanker payudara merupakan masalah kesehatan utama bagi wanita di seluruh dunia. Potensi efek anti tumor
dari bisa ular telah dipelajari dan bukti menunjukkan pengurangan ukuran tumor dan penghambatan angiogenesis.
Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari efek antitumor dariCalloselasma rhodostomaracun pada sel MDA-MB-231.
Metode:Perubahan morfologi sel MDA-MB-231 dan MCF-10A yang diobati dengan racun dalam
berbagai waktu inkubasi dipelajari. Sitotoksisitas racun pada kedua jalur sel ditentukan dengan
menggunakan Uji sitotoksisitas non-radioaktif Cytotoxicity 96®.
Hasil:Berdasarkan studi morfologi dan studi uji sitotoksisitas, sel MDA-MB-231 terbunuh pada
konsentrasi racun 10 µg/ml, dimulai pada 12 jam pasca perawatan dan dosis pembunuhan yang
signifikan pada konsentrasi racun 20 µg/ml. Studi morfologi sel MCF-10A menunjukkan bahwa sel juga
terbunuh pada konsentrasi racun 10 µg/ml, dimulai pada 12 jam pasca. Namun, sel MCF-10A yang layak
diamati 48 jam pasca perawatan.
___________________________________________________________________________________________________
Kesimpulan:C.rhodostomaracun dapat membunuh sel payudara non-tumorogenik MCF-10A dan sel kanker payudara
tumorgenik MDA-MB-231. Namun, racun tersebut membunuh sel MDA-MB-231 pada konsentrasi yang lebih rendah
daripada sel MCF-10A. Diperlukan lebih banyak penelitian untuk mempelajari efek antitumor racun.
2
Ling dkk.; BBJ, 8(2): 1-9, 2015; Artikel no.BBJ.18873
dengan 5% CO22. Media dikumpulkan pada titik Pada Tabel 2, sel kontrol MCF-10A yang tidak diberi
waktu yang berbeda (12, 24 dan 48 jam) setelah perlakuan (gambar A, B, C) menunjukkan bentuk
inkubasi racun dengan sel MDA-MB-231. poligonal dengan konten seluler. Tidak ada
Sitotoksisitas racun ditentukan dengan perubahan morfologis yang diamati pada sel yang
menggunakan uji sitotoksisitas Non-Radioaktif diberi perlakuan dengan konsentrasi racun 1, 2,
Sitotoksisitas 96® (Promega, USA). Pengujian ini dan 4 µg/ml (gambar D, E, F, G, H, I, J, K, L) di semua
menentukan kematian sel dengan mengukur titik waktu inkubasi. Seperti sel MDA-MB-231,
jumlah laktat dehidrogenase (LDH), yang perubahan morfologi sel MCF-10A terlihat pada
merupakan enzim sitosolik yang stabil, konsentrasi racun 10 µg/ml (gambar M, N dan O),
dilepaskan dari sel lisis. Pengaruh racun ular dimulai pada 12 jam setelah pengobatan racun.
pada sel MDA-MB-231 ditentukan pada setiap
konsentrasi dalam 4 ulangan. Data ini digunakan Sekarat sel MCF-10A dengan penyusutan
untuk menghitung efek sitotoksisitas dari bisa membran diamati pada konsentrasi 10 µg/ml di
ular. Prosedur diulangi dengan mengganti sel semua titik waktu inkubasi. Namun, sel MCF-10A
kanker payudara MDA-MB-231 dan Leibovitz's yang aktif masih dilaporkan pada konsentrasi
L-15 Medium dengan sel payudara manusia racun 20 µg/ml setelah 48 jam pasca
MCF-10A dan Media Pertumbuhan MEGM. perlakuan.
Persentase sitotoksisitas sel dihitung terhadap
kontrol positif yang diobati dengan LDH 3.2 Uji Sitotoksisitas
menggunakan rumus berikut:
Ara. 1 menunjukkan hubungan di antara
Sitotoksisitas sel (%) = () efek sitotoksisitas dan sel MDA-MB-231 pada berbagai
()
konsentrasi racun. Pada titik waktu 12 jam dan 24 jam,
nilai signifikan dimulai pada konsentrasi 10 µg/ml dan
2.5 Analisis Statistik seterusnya dengan persentase sitotoksisitas masing-
masing 46,95% dan 56,75%; sedangkan pada titik
Nilai sel yang diberi perlakuan dan kontrol menjadi
waktu 48 jam, nilai signifikan dimulai pada konsentrasi
sasaran ANOVA dua arah di GraphPad Prism 6
4 µg/ml dan seterusnya dengan persentase
untuk membandingkan sel kontrol yang tidak diberi
sitotoksisitas 63,86%. Semua titik waktu inkubasi
perlakuan dengan sel yang diberi racun pada titik
memberikan nilai signifikan tertinggi pada konsentrasi
waktu inkubasi yang sama. Nilai p <0,05 dianggap
20 µg/ml dengan persentase sitotoksisitas sebesar
signifikan.
87,73% pada titik waktu 12 jam, 88,06% pada titik
3. HASIL DAN PEMBAHASAN waktu 24 jam, 96,53% pada titik waktu 48 jam.
3
Ling dkk.; BBJ, 8(2): 1-9, 2015; Artikel no.BBJ.18873
Tabel 1. Perubahan morfologi sel MDA-MB-231 pasca 12 jam, 24 jam dan 48 jam dengan
C.rhodostomapengobatan racun ular. Panah menunjukkan sel-sel mati terlepas dari kultur
termos (perbesaran total 200x)
1
D e F
2
G H Saya
4
J K L
10
M N HAI
20
P Q R
MDA-MB-231 dan MCF-10A menunjukkan dan 48 jam pasca perawatan. Oleh karena itu, dosis
perubahan morfologis pada konsentrasi racun 10 µg/ pembunuhan yang signifikan untuk sel MDA-MB-231 adalah 20
ml, dimulai pada 12 jam pasca perawatan. Dengan µg/ml sedangkan MCF-10A yang layak masih ada dalam
kata lain, 10 µg/ml adalah dosis sitotoksik minimum konsentrasi yang sama yang menunjukkan bahwa sel MCF-10A
untuk kedua lini sel. membutuhkan lebih banyak waktu atau konsentrasi racun
yang lebih tinggi untuk dibunuh. Secara signifikan, sel MDA-
Pada konsentrasi racun 20 µg/ml, semua sel MDA- MB-231 ditemukan mati pada konsentrasi racun yang lebih
MB-231 diamati sebagai sel mati pada 24 jam rendah dibandingkan dengan MCF-10A.
4
Ling dkk.; BBJ, 8(2): 1-9, 2015; Artikel no.BBJ.18873
Tabel 2. Perubahan morfologi sel MCF-10A pasca 12 jam, 24 jam dan 48 jam denganC.rhodostoma
pengobatan racun ular. (perbesaran total 200x)
1
D e F
2
G H Saya
4 J K L
10
M N HAI
20
P Q R
Tabel 3. Rata-rata sitotoksisitas sel MBA-MD-231 yang diobati dengan berbagai konsentrasi racun pada
Titik waktu 12 jam, 24 jam, 48 jam
5
Ling dkk.; BBJ, 8(2): 1-9, 2015; Artikel no.BBJ.18873
Tabel 4. Persentase sitotoksisitas sel MBA-MD-231 yang diobati dengan berbagai racun
konsentrasi pada titik waktu 12 jam, 24 jam, 48 jam
Tabel 5. Rata-rata sitotoksisitas sel MCF-10A yang diberi perlakuan dengan berbagai konsentrasi racun pada
Titik waktu 12 jam, 24 jam, 48 jam
100 ***
80
Sitotoksisitas (%)
60 12 jam
24 jam
40
48 jam
20
0
0 5 10 15 20 25
Konsentrasi racun (µg/ml)
Gambar 1. Persentase sitotoksisitas sel MBA-MD-231 yang diobati dengan berbagai konsentrasi racun
pada waktu 12 jam, 24 jam, 48 jam
(*=p<0,05; ***=p<0,001)
Efek sitotoksik tergantung dosis dan waktu ular pada menunjukkan bahwa sel MDA-MB-231 memiliki
sel kanker konsisten dengan penelitian lain [15,16]. HT percabangan sitoplasma yang lebih sedikit setelah
Yalcın dan rekan-rekannya telah menunjukkan inkubasi dengan 16 μg/mL ICD-85, yang berasal dari
peningkatan aktivitas sitotoksikMontivipera xanthina Racun ular Agkistrodon halys dan a
racun dengan dosis dan waktu inkubasi pada human Hemiscorpius lepturuskalajengking [16]. Meski minim
breast adenocarcinoma (MCF-7), human colon sitotoksikC.rhodostomadosis racun 10 μg/mL lebih
adenocarcinoma (HT-29), osteosarcoma (Saos-2) rendah dari 16 μg/mL, tetapi kandungan protein yang
setelah perlakuan 24 jam dan 48 jam. Dalam studi bervariasi pada bisa ular yang berbeda dapat
mereka, tidak ada efek sitotoksik yang dapat diamati menghasilkan variasi dalam kisaran konsentrasi
pada sel Vero (sel ginjal non-kanker) [17]. Studi kami sitotoksisitas hingga garis kanker [14].
mengungkapkan hal ituC.rhodostomaracun dapat
membunuh sel kanker payudara manusia (MDA- 4.2 Uji Sitotoksisitas
MB-231) dengan dosis lebih rendah daripada sel
MCF-10A non-tumorogenik 24 jam dan 48 jam pasca Efek penghambatan pertumbuhan faktor pertumbuhan
perawatan. Studi lain saraf racun ular (NGF) pada berbagai tumor manusia
6
Ling dkk.; BBJ, 8(2): 1-9, 2015; Artikel no.BBJ.18873
sel, terutama K562 dan JF305, dilaporkan menggunakan dosis sitotoksik minimum terlihat pada studi
metode kolorimer MTT [18]. Studi sitotoksisitas lain juga morfologi sel sebelumnya. Dosis pembunuhan
mengungkapkan efek penghambatan pertumbuhan yang signifikan 20 µg/ml, juga disetujui oleh pengujian
serupa dariC. albolabrisdan (p<0,001) pada semua titik waktu inkubasi.
C.rhodostomapada berbagai sel kanker dan hati sebagai
sel normal menggunakan uji MTT [19]. Mirip dengan Namun, pengujian telah menunjukkan pentingnya
metode kolorimerik MTT, alat uji komersial yang sel MDA-MB-23 yang diobati dengan konsentrasi
digunakan dalam penelitian kami juga mendeteksi racun 4 µg/ml pada 48 jam pasca pengobatan.
aktivitas sitotoksisitas. Kit uji secara langsung mengukur Kejadian kontras dengan sel
laktat dehidrogenase (LDH) yang dilepaskan setelah lisis hasil morfologi MDA-MB-231 tidak ditemukan sel
sel, sedangkan uji MTT mengukur aktivitas metabolisme mati pada konsentrasi racun 4 µg/ml.
sel yang layak yang secara tidak langsung menunjukkan Konsentrasi racun ini tidak menunjukkan nilai
aktivitas sitotoksisitasnya. yang signifikan jika dibandingkan dengan
konsentrasi racun 2 µg/ml dan 10 µg/ml pada
Secara keseluruhan, persentase sel lisis ditemukan titik waktu inkubasi yang sama.
signifikan secara statistik dalam sel MDA-MB-231 yang
diobati dengan racun (Gbr. 1), dan meningkat secara Selain itu, garis sel MCF-10A non-tumorogenik
proporsional dengan konsentrasi racun. Pengujian juga lebih rapuh dan lebih sulit dipertahankan
mengkonfirmasi efek penghambatan pertumbuhan dalam daripada garis sel tumorgenik MDA-MB-231.
studi morfologi sel sel MDA-MB-231. Racunnya secara Peningkatan teknik laboratorium diperlukan
signifikan (p<0,05) menghancurkan sel pada konsentrasi untuk studi masa depan.
10 µg/ml, yang merupakan
Tabel 6. Persentase sitotoksisitas sel MCF-10A yang diberi perlakuan dengan berbagai konsentrasi racun pada
Titik waktu 12 jam, 24 jam, 48 jam
60
12 jam
40
24 jam
20
48 jam
0
- 20 0 5 10 15 20 25
- 40
- 60
Konsentrasi racun (µg/ml)
Gambar 2. Persentase sitotoksisitas sel MCF-10A yang diobati dengan berbagai konsentrasi racun pada
Waktu 12 jam, 24 jam, 48 jam
7
Ling dkk.; BBJ, 8(2): 1-9, 2015; Artikel no.BBJ.18873
8
Ling dkk.; BBJ, 8(2): 1-9, 2015; Artikel no.BBJ.18873
saluran seluler. Jurnal Hewan Berbisa dan faktor pertumbuhandalam vitrHai. Jurnal
Racun termasuk Penyakit Tropis. 2008; Limfologi dan Onkologi Tiongkok AS. 2008;7
14(4):619-627. (1-2):29-32.
17. Yalcın HT, Ozen MO, Gocmen B, Nalbantsoy 19. Kunsap S, Buranapradikun S,
A. Efek racun viper Ottoman (Montiwipera Suntrarachun S, Puthong S, Boonchang S,
xanthina (Abu-abu, 1849)) pada berbagai Khaw O, dkk. Efek dariCryptelytrops
sel kanker dan mikroorganisme. albolabris, Calloselasma rhodostoma dan
Sitoteknologi. 2014; 66(1):87-94. Daboia siamensisracun pada sel kanker
manusia. Ilmu Kehidupan Biol J Asia.
18. Sun J, Zhang L, Jiang L, Zheng H, Wang 2013;2(1).
W, Xin Y, dkk. Studi eksperimental potensi antitumor saraf bisa ular
_________________________________________________________________________________
© 2015 Ling et al.; Ini adalah artikel Akses Terbuka yang didistribusikan di bawah ketentuan Lisensi Atribusi Creative Commons (http://
creativecommons.org/licenses/by/4.0), yang mengizinkan penggunaan, distribusi, dan reproduksi tanpa batas dalam media apa pun,
asalkan karya aslinya dikutip dengan benar.