Machine Translated by Google

# 9:
METODE DETEKSI BERBASIS PROTEIN

PERKENALAN PADA
BIOTEKNOLOGI PADA TANAMAN
PERLINDUNGAN
Machine Translated by Google

DEFINISI :

DETEKSI IDENTIFIKASI DIAGNOSA

Untuk mengkonfirmasi Untuk menyelidiki

Untuk menemukan dan
keberadaan identitas atau karakter patogen
mengidentifikasi patogen
patogen atau hama atau hama
atau hama yang
yang terkait dengan
menyebabkan penyakit atau kerusakan
gejala pada tanaman

Mengizinkan kategorisasi atau

pengelompokan
Machine Translated by Google

BIOTEKNOLOGI UNTUK DETEKSI HAMA TANAMAN &

PENYAKIT

SASARAN :

DNA /
PROTEIN
RNA
Machine Translated by Google

Protein

Protein (juga dikenal sebagai polipeptida) adalah

senyawa organik yang terbuat dari asam amino yang
tersusun dalam rantai linier dan dilipat menjadi bentuk bulat.

Urutan asam amino dalam protein ditentukan oleh urutan gen,

yang dikodekan dalam kode genetik.
Machine Translated by Google

PROTEIN
Machine Translated by Google

Asam amino proteinogenik adalah asam amino yang dapat ditemukan

dalam protein dan membutuhkan mesin seluler yang dikodekan dalam kode
genetik organisme apa pun untuk produksinya yang terisolasi.
Ada 22 asam amino standar, tetapi hanya 21 yang ditemukan pada eukariota.
Machine Translated by Google

Ikatan peptida (ikatan amida) adalah ikatan kimia

kovalen yang terbentuk antara dua molekul ketika gugus
karboksil dari satu molekul bereaksi dengan gugus amina
dari molekul lain, sehingga melepaskan molekul air (H2O).
Machine Translated by Google
Machine Translated by Google

Struktur tiga dimensi protein [triosa fosfat

isomerase]

Representasi yang Representasi permukaan yang

representasi semua-atom
diwarnai oleh jenis atom disederhanakan dapat diakses oleh pelarut
menggambarkan konformasi diwarnai berdasarkan jenis residu
tulang punggung, diwarnai oleh struktur(residu asam merah, residu basa
sekunder
biru, residu polar hijau, residu
nonpolar putih).
Machine Translated by Google

METODE DETEKSI BERBASIS PROTEIN

Tes Serologi

• Penggunaan antibodi untuk mendeteksi dan

mengidentifikasi patogen • Cepat, spesifik,
sensitif • Antibodi mendeteksi antigen (biasanya
protein)
pada permukaan patogen
• Antibodi mengikat antigen dengan spesifisitas tinggi
• Umumnya digunakan untuk identifikasi virus
Machine Translated by Google

ANTIGEN
ÿ zat yang membangkitkan produksi satu atau
lebih banyak antibodi
ÿ Patogen sebagai antigen dapat menginduksi banyak antibodi
sel susu

ANTIBODI
juga dikenal sebagai imunoglobulin (Ig),
adalah protein besar berbentuk Y yang diproduksi oleh sel B
yang digunakan oleh sistem kekebalan tubuh untuk
mengidentifikasi dan menetralisir benda asing seperti bakteri

ANTISERUM (jamak ANTISERA)

Serum darah yang mengandung antibodi
Machine Translated by Google

- Epitop, juga dikenal sebagai

penentu antigenik, adalah
bagian dari antigen yang
dikenali oleh sistem
kekebalan tubuh, khususnya
oleh antibodi,
sel B, atau sel T
– Interaksi antara
antibodi & antigen
bersifat spesifik: antibodi
hanya mengenali 1
epitop dalam antigen
Machine Translated by Google

Struktur Antibodi
• Molekul antibodi (protein
IgG) terdiri dari 4 unit
polipeptida • Dua salinan
polipeptida identik (55 000 Dalton)
dan disebut RANTAI BERAT •
Dua salinan polipeptida lainnya
juga identik

(25.000 Dalton) dan dipanggil

RANTAI CAHAYA

• Rantai berat dan rantai ringan

dihubungkan oleh ikatan disulfida

Dua lengan identik

Satu ekor
Machine Translated by Google

Struktur Antibodi

Penyambung antara lengan & ekor disebut

ENGSEL

ENGSEL memungkinkan situs pengikatan antigen

untuk berinteraksi dengan beberapa antigen
dengan konformasi yang berbeda
Machine Translated by Google

Struktur Antibodi
Dua jenis urutan asam amino
dalam LIGHT CHAIN DAN
RANTAI BERAT :

1. WILAYAH VARIABEL
2. WILAYAH KONSTAN

VARIABLE REGION menentukan spesifisitas dari

SITUS PENGIKAT ANTIGEN
Machine Translated by Google

Struktur Antibodi
Machine Translated by Google

Antiserum poliklonal Antiserum monoklonal

ÿ antibodi yang diperoleh • Hanya mengandung satu antibodi
dari sumber daya sel B yang spesifik yang mengidentifikasi
berbeda. satu epitop spesifik
ÿ Mereka adalah kombinasi
molekul imunoglobulin yang
disekresikan melawan antigen
tertentu, masing-masing
mengidentifikasi epitop yang berbeda
Machine Translated by Google

Metode Deteksi Berbasis Serologis

• Uji Mikropresipitasi •
Uji Immunodifusi/Uji Ouchterlony • Uji
Aglutinasi • Uji imunosorben terkait-
enzim (ELISA) • Uji Dot Immunobinding
(DIBA) • Mikroskop elektron imunosorben
(ISEM)
• Western Blot
Machine Translated by Google

UJI IMUNODIFUSI

Ts f1 Ts
c1
tes
diagnostik
a1
yang S1 e2 S2 d1
b2
melibatkan
difusi
a2
melalui zat b1 e1 d2

seperti agar
Machine Translated by Google

UJI IMUNODIFUSI
ÿ Pelat gel dipotong untuk membentuk serangkaian
lubang ("sumur") di dalam gel. ÿ Sampel ekstrak
bunga ditempatkan di salah satunya
baik, dan serum atau antibodi yang dimurnikan ditempatkan
di sumur lain dan pelat dibiarkan selama 48 jam untuk
berkembang. ÿ Selama ini antigen dalam sampel

ekstrak dan antibodi masing-masing berdifusi keluar dari

sumur masing-masing. ÿ Di mana dua front difusi bertemu,
jika salah satu antibodi mengenali salah satu antigen, mereka
akan berikatan dengan antigen dan membentuk kompleks
imun. ÿ Kompleks imun mengendap dalam gel untuk
memberikan garis putih tipis, yang merupakan tanda
visual dari pengenalan antigen.
Machine Translated by Google

ANTIBODI – REAKSI ANTIGEN

1. ANTIBODI TIDAK MENGENALI

ANTIGEN ÿ TIDAK ADA GARIS PENCETAHAN

2. ANTIBODI MENGENALI ANTIGEN

GARIS PRESIPITASI TERBENTUK

3. DUA ANTIGEN NON IDENTIK ÿ SPUR

TERBENTUK
Machine Translated by Google

UJI IMUNODIFUSI UNTUK IDENTIFIKASI

VIRUS MOSAIK MENTIMUN

Subkelompok I: CMV-Y
Subkelompok II: CMV-P

ÿ Cucumber mosaic virus (CMV) dari Indonesia mendominasi

oleh CMV subgrup I yang termostabil ÿ CMV
subgrup II (termosensitif) lebih umum di daerah beriklim sedang
Machine Translated by Google

Uji Immunosorbent terkait-enzim (ELISA)

tes yang menggunakan antibodi dan
perubahan warna untuk mengidentifikasi suatu zat.

ANTI- SERUM ÿ SERUM ANTI-VIRUS

ANTIGEN ÿ VIRUS

KONJUGASI ÿ ANTIBODI BERLABEL ENZIM

SUBSTRAT ÿp-NITROPHENYL FOSFAT AKAN BERUBAH

WARNA SUBSTRAT KETIKA
DIREAKSIKAN DENGAN ENZIM
Machine Translated by Google

Uji Immunosorbent terkait-enzim (ELISA)

ÿ ELISA langsung ÿ ELISA tidak langsung

VIRUS Antigen
Antigen
Antiserum

Antiserum Antiserum
VIRUS

Konjugat Konjugat
Mengkonjugasikan
Mengkonjugasikan

substrat
Substrat substrat
Substrat
Machine Translated by Google

Kelebihan ELISA

Mampu mendeteksi titer

1
(konsentrasi) patogen yang rendah

Membutuhkan hanya sejumlah

2
kecil antibodi

Cocok untuk uji skala besar

3

Uji kuantitatif (pembaca

4
ELISA)