1.

La clasificacin nutricional de un organismo se realiza segn tres criterios importantes: el origen del carbono, la fuente de energa y los donadores de electrones.


Fuente del carbono. Se refiere a la fuente del carbono usada por el organismo para su crecimiento y desarrollo. Un organismo se denomina hetertrofo si usa compuestos orgnicos procedente de otros organismos y auttrofo si su fuente del carbono es el dixido de carbono (CO2).

Donador de electrones. Se refiere a los compuestos donadores de electrones que se utilizarn en la biosntesis (por ejemplo, en forma de NADH o NADPH). Un organismo se denominaorgantrofo cuando utiliza compuestos orgnicos como fuente de electrones, mientras que se denomina littrofo cuando utiliza compuestos inorgnicos. Los organismos organotrofos son a menudo tambin hetertrofos, y as usan compuestos orgnicos como fuente de electrones y de carbono al mismo tiempo. De forma similar, los organismos litotrofos son a menudo tambin auttrofos, con fuentes inorgnicas de electrones y dixido de carbono como fuente inorgnica del carbono.

Fuente de energa. Se refiere al mtodo empleado por el organismo para producir ATP, que se requiere para aprovisionar de combustible los caminos anablicos de biosntesis de los componentes de la clula. Un organismo es fotoauttrofo cuando utiliza luz como fuente de energa, mientras que es quimioauttrofo cuando obtiene la energa de reacciones con compuestos qumicos.

2.

Las bacterias necesitan grandes cantidades de agua. De hecho, salvo excepciones, se pueden considerar como organismos acuticos. Requieren cierto grado de humedad para crecer. Desde el punto de vista de sus posibles papeles, el agua es: el principal constituyente del protoplasto bacteriano; el medio universal donde ocurren las reacciones biolgicas; un reactante en exceso (es decir, un producto resultante de algunas reacciones bioqumicas).

Las fuentes de agua pueden ser: endgena: procedente de procesos de oxido-reduccin; exgena (la ms importante): procedente del medio, y que difunde a travs de las membranas. Ahora bien, no toda el agua de un ambiente est disponible para la bacteria:

Existen determinadas sustancias que absorben y superficies que adsorben de modo ms o menos intenso molculas de agua, dejndolas inasequibles para la bacteria. Los solutos disueltos en agua (p. ej., sales, azcares) tienen afinidad por las molculas de H2O que los rodean, por lo que stas tampoco estarn a disposicin del microorganismo. La disponibilidad de agua se mide por un parmetro llamado actividad de agua o potencial de agua, indicativo del agua libre, y que se expresa como aW= PS/PW donde PS es la presin parcial de vapor de agua en la solucin problema y PW es la presin parcial de vapor del agua destilada.

Cmo medir el potencial de agua de un medio lquido determinado? Se mide la humedad relativa del aire que hay encima del medio (en frascos), y este valor se refiere al valor de 100, que es la humedad del aire encima del agua destilada. O sea, la aW = humedad relativa/100).
Las bacterias tienen valores de aW normalmente entre 0.90 y 0.99. Bacterias de hbitats oligotrficos (como Caulobacter, Spirillum) tienen aW cercanos a 1. Bacterias como Escherichia y Streptococcus, que viven en sangre y fluidos corporales, tienen aW de alrededor de 0.995. Bacterias marinas como ciertos Vibrio y Pseudomonas encuentran valores de 0.980. Ciertos bacilos Gram-positivos que resisten mejor la sequedad poseen valores de 0.950. En el extremo de resistencia encontramos ciertas bacterias xerfilas, capaces de vivir a aW muy bajos (en torno a 0.75). Muchas de estas bacterias viven de hecho en medios acuosos, pero donde gran parte del agua no est disponible por las razones arriba citadas: procariotas halfilos extremos, como la arquea Halobacterium, que habita en lagunas hipersalinas; bacterias (y sobre todo, ciertos microrganismos eucariticos como levaduras) sacarfilos, que viven en jugos y zumos con altas concentraciones de azcares.

3. FACTORES FSICOS Y QUMICOS QUE INFLUYEN EN EL CRECIMIENTO BACTERIANO.

y

Temperatura: Cada microorganismo tiene una temperatura de crecimiento adecuada. Si consideramos la variacin de la velocidad de crecimiento en funcin de la temperatura de cultivo, podemos observar una temperatura mnima por debajo de la cual no hay crecimiento; a temperaturas mayores se produce un incremento lineal de la velocidad de crecimiento con la temperatura de cultivo hasta que se alcanza latemperatura ptima a la que la velocidad es mxima. Por encima de esta temperatura ptima, la velocidad de crecimiento decae bruscamente y se produce la muerte celular.

El aumento de la velocidad de crecimiento con la temperatura se debe al incremento generalizado de la velocidad de las reacciones enzimticas con la temperatura. Se denomina coeficiente de temperatura a la relacin entre el incremento de la velocidad de reaccin y el de temperatura. En trminos generales, la velocidad de las reacciones bioqumicas suele aumentar entre 1.5 y 2.5 veces al aumentar 10C la temperatura a la que tienen lugar. La falta de crecimiento a temperaturas bajas se debe a la reduccin de la velocidad de las reacciones bioqumicas y al cambio de estado de los lpidos de la membrana celular que pasan de ser fluidos a cristalinos impidiendo el funcionamiento de la membrana celular. La muerte celular a altas temperaturas se debe a la desnaturalizacin de protenas y a las alteraciones producidas en las membranas lipdicas a esas temperaturas. Es importante tener en cuenta que a temperaturas bajas, el metabolismo celular es lento y las clulas paran de crecer; aunque suelen morir. Sin embargo, cuando la temperatura es superior a la ptima, se produce la muerte celular rpidamente y las clulas no pueden recuperar su capacidad de divisin si baja posteriormente la temperatura. Esto permite esterilizar por calor y no por fro.

4.

CATABOLISMO: conjunto de reacciones de degradacin de sustancias en las que se produce (o libera) energa. Como resultado de estos dos grupos de reacciones tiene lugar el crecimiento celular. Una clula, para crecer, necesita sintetizar los nutrientes que tienen en el ambiente, y por biosntesis forma los componentes celulares. Los nutrientes son fuentes de C, N, O. La energa que se necesita para estas biosntesis, procede del exterior y puede ser de diversa naturaleza: luz, compuestos orgnicos y compuestos inorgnicos. La mayora de los microorganismos usan compuestos qumicos orgnicos que son captados del ambiente, introducidos en la clula y degradados por catabolismo en sistemas ms simples que la clula necesita (la clula los expulsa, ms tarde, como productos de desecho). Esta energa se usa para el anabolismo y para otras funciones celulares, como puede ser el movimiento de los flagelos, transporte de solutos por la membrana. Los microorganismos se puede clasificar atendiendo al tipo de metabolismo que realice. En concreto, se agrupan atendiendo a la fuente de energa que toman del medio o la fuente de C. Dependiendo de la energa que toman del medio para crecer, tenemos: - luz, fototrofos - compuestos qumicos, quimiotrofos. Estos a su vez se pueden dividir segn sea el compuesto qumico que utilizan. Ambos obtienen energa de la oxidacin del compuesto qumico, por tanto, obtienen energa qumica.

- inorgnico: quimiolittrofos - organico: quimioorgantrofos Dependiendo de la fuente de carbono (C) (fuente de molculas con C para usarlo como constituyente celular), tenemos: - anhidrido carbnico, sintetizan los constituyentes celulares a partir de dixido de carbono. Transforman compuestos inorgnicos en orgnicos, autotrofos. - Utilizan compuestos orgnicos que ya han sido elaborados por otros organismos, hetertrofos. La mayora de los organismos auttrofos son los que obtienen su energa de la oxidacin de compuestos qumicos inorgnicos o de la luz.

5.

VAS DE DEGRADACIN DEL GLUCGENO.VAS BIOSINTETICAS. El glucgeno es una forma de almacenamiento de glucosa en el organismo. Es un polmero ramificado formado exclusivamente por unidades de glucosa que son fcilmente movilizables. La gran mayora de las unidades de glucosa en este polmero estn unidas por enlaces glucosdicos -1,4, aunque aproximadamente, cada diez residuos de glucosa lineal aparece una ramificacin debida a un enlace glucosdico en posicin -16. Los dos lugares principales de localizacin del glucgeno en el organismo son el msculo esqueltico y el hgado. El mayor porcentaje de almacenamiento se da en el hgado, aunque globalmente se localiza ms glucgeno en el msculo esqueltico ya que este tejido tiene un mayor peso especfico en cuanto a masa, en el total del organismo. Los procesos de degradacin y biosntesis del glucgeno tienen un papel fundamental en la regulacin de la glucemia del organismo, al mismo tiempo que aportan un suministro de glucosa adecuado a las necesidades celulares.

Las rutas metablicas que regulan la degradacin y sntesis del glucgeno son totalmente distintas aunque las enzimas que intervienen en ambos procesos estn controladas en cuanto a su actividad por fosforilacin reversible. La ruta degradativa del glucgeno fue descubierta por las investigaciones de los esposos Gerty y Carl Cori.

El polmero de glucgeno es escindido en un primer paso por la fosforilasa en presencia de ortofosfato para producir glucosa 1-fosfato. Esta enzima acta sobre el polmero por el extremo no reductor de la molcula. Adems, la ruptura fosforoltica del glucgeno tiene la ventaja, desde el punto de vista energtico, de que la glucosa liberada est ya fosforilada; mientras que si el proceso fuera hidroltico, la glucosa tendra que ser fosforilada con gasto de una molcula de ATP para integrarse en la va glucoltica. Desde otro punto de vista, la glucosa 1 fosfato que se produce en este proceso no puede salir fuera de la clula muscular y, por tanto, debe ser utilizada in situ. Slo el hgado, debido a la presencia de la enzima glucosa 6 fosfatasa es capaz de liberar glucosa al torrente circulatorio, por eso se habla de este rgano como regulador esencial de la glucemia del organismo. Para la accin cataltica de la fosforilasa es necesaria la presencia del pirdoxal-5'-fosfato (PLP) que es un derivado de la vitamina B6, ya que esta coenzima interviene decisivamente en que la accin de la fosforilasa sea fosforoltica y no hidroltica.

Hay que tener en cuenta que la fosforilasa por s sola, no puede degradar el glucgeno totalmente, ya que los enlaces glusosdicos a-1,6 no son escindidos por esta enzima: por tanto es necesaria la presencia de otras enzimas que ejercen una accin concertada; stas son una transferasa y una a1,6 glucosidasa. Esta ltima enzima, llamada tambin enzima desramificante, cataliza la hidrlisis de los enlaces a-1,6, liberando glucosa no fosforilada. La biosntesis del glucgeno, sin embargo, sigue una ruta distinta. En este caso el proceso consiste en la incorporacin de unidades de glucosa al grupo hidroxilo del C-4 de un residuo terminal, en la molcula de glucgeno en crecimiento. Esta reaccin est catalizada por la glucgeno sintasa, aunque esta enzima slo puede aadir molculas de glucosa si la cadena del polisacrido tiene ya, ms de cuatro residuos. Adems, la molcula de glucosa que aade la glucgeno sintasa debe estar activada previamente en forma de UDP-glucosa. El hecho de que existan dos vas totalmente distintas y separadas para la sntesis y para la degradacin del glucgeno, indica que la regulacin de ambas debe ser muy rigurosa. Por tanto, el control de las dos rutas est coordinado de forma que la glucgeno sintasa sea casi inactiva, cuando la fosforilasa es muy activa y viceversa. Adems hay hormonas especificas que afectan fundamentalmente el metabolismo del glucgeno. La insulina incrementa la actividad del hgado en la sntesis del glucgeno, ya que niveles altos de esta hormona en sangre denotan un estado satisfactorio de nutricin, mientras que niveles bajos denotan ayuno. Por otro lado, los efectos de la adrenalina y el glucagn sobre el metabolismo del glucgeno son opuestos a los de la insulina, ya que la adrenalina estimula la degradacin del glucgeno en el msculo y, en menor proporcin, tambin en el hgado. Este rgano es ms sensible a la accin del glucagn, ya que incrementa la salida de glucosa con el fin de regular la glucemia cuando los niveles de esta hormona son altos. Esta accin est provocada por la estimulacin de la degradacin del glucgeno heptico que activa el glucagn.

6. 2.2.1 CADENA TRANSPORTADORA DE ELECTRONES Y FUERZA MOTRIZ DE PROTONES

Como el alumno seguramente sabr, el mecanismo de la fosforilacin oxidativa se suele explicar en base a la teora quimiosmtica de Mitchell (1961 y aos siguientes). Recordemos que la c.t.e. est formada por una serie ordenada de molculas transportadoras situadas (en bacterias) en la membrana citoplsmica (y en sus invaginaciones), molculas que sufren oxidaciones y reducciones reversibles. Los donadores de electrones inmediatos para las c.t.e son el FADH2 y el NADH+H+, que se generan, p.ej., en la glucolisis o en el ciclo de Krebs (ciclo de los cidos tricarboxlicos o del cido ctrico). El alumno conocer por la asignatura de Bioqumica los principales tipos de componentes de las c.t.e. respiratorias: NADH deshidrogenasas, unidas a la cara interna de la membrana. Aceptan tomos de H a partir del NADH, y se los ceden a las flavoprotenas Flavoprotenas (Fp, un tipo de riboflainas), dotadas de grupos FAD o FMN. Pueden acepar tomos de H, pero a su vez ceden electrones. Protenas no hmicas de Fe-S (Fe/S protenas). Algunas poseen agrupamientos de Fe2S2 (como la ferredoxina) y otras Fe4S4. Transportan solamente electrones. Quinonas. Son molculas muy hidrofbicas, inmersas en la membrana,

capaces de moverse dentro de ella. Sirven como aceptores de tomos de H, pero slo ceden electrones. En bacterias podemos encontrar dos principales tipos de quinonas: ubiquinona (UQ) menaquinona (MQ), ms frecuente en bacterias Gram-positivas. Citocromos (protenas hmicas con Fe quelado). Sufren oxidacin y reduccin por prdida y ganancia de un electrn cada vez, a travs del Fe del centro de la molcula. Los citocromos son de varias clases, segn el tipo de grupo hemo (ej. tipo a, b, c, etc), y a veces forman complejos fuertes con otros citocromos (ej., cit bc1) o con Fe/S-protenas. El alumno recordar que los electrones fluyen desde los transportadores con potencial de reduccin ms negativo hacia los de potencial ms positivo, hasta que finalmente reducen un aceptor final de electrones (A) obtenido del ambiente. Observar que algunos de estos transportadores transportan tomos de H (o sea, protones y electrones), mientras que otros transportan nicamente electrones. Qu pasa con los protones? Ah est la gracia... paciencia, enseguida lo veremos. La situacin de los transportadores dentro de la membrana es asimtrica, lo que condiciona que el transporte sea un proceso vectorial (es decir, tiene un sentido determinado), de modo que los H salen hacia afuera y los electrones tienden a entrar al interior. Como resultado de todo ello, tenemos que existen determinados puntos de la c.t.e. (llamados bucles o lazos translocadores de protones) en los que el efecto neto es la salida de protones al exterior de la membrana citoplsmica (concretamente, en los puntos donde confluyen un transportador de H+ y otro de electrones). Es decir, existe una translocacin de protones hacia el exterior ligada a las reacciones redox que ocurren en la c.t.e. Por otro lado, la membrana es impermeable a los protones, por lo que los protones translocados a resultas del funcionamiento de las c.t.e. no pueden entrar directamente. Por lo tanto, se crea un gradiente electroqumico de protones, compuesto de gradiente osmtico de esos iones H+ ((pH) y un gradiente de carga elctrica ((]). Este gradiente es unaforma de energa potencial que puede realizar trabajo. El valor de este gradiente electroqumico de protones o fuerza protn motriz (f.p.m.) es: (p = (] -Z(pH (expresado en milivoltios, mV),

donde Z = 2,3 RT/F, siendo R= constante de los gases, T= temperatura absoluta, F= constante de Faraday

Como ya dijimos, esta (p (f.p.m.) es capaz de:

realizar trabajo til directamente: transporte activo ligado a simporte de iones (repasa el captulo 6) rotacin del motor flagelar (repasa el captulo 8)
7.