UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

ESCUELA DE FORMACIN PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUMICA

Proyecto de tesis ACTIVIDAD DIURTICA DEL EXTRACTO HIDROALCOHLICO DE Calceolaria speciosa Pennell. huahuillay EN Cavia porcellus cobayo.

Presentado por: COAQUIRA APAZA, Betzabeth Hilda.

AYACUCHO PER 2007

I.

GENERALIDADES

1.- TILULO Actividad diurtica del extracto hidroalcohlico de Calceolaria speciosa Pennell. huahuillay EN Cavia porcellus cobayo. 2.- PERSONAL INVESTIGADOR 2.1.- AUTOR: COAQUIRA APAZA, Betzabeth Hilda. Estudiante de la Escuela de Formacin Profesional de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de San Cristbal de Huamanga. 2.2.- ASESOR: Q.F. Jos M. DIEZ MACAVILCA, Profesor asociado a dedicacin exclusiva, Adscrito al Departamento Acadmico de la Facultad de Ciencias Biolgicas. Q.F. Aldo J. TINCO JAYO, Profesor auxiliar a tiempo completo, Adscrito al Departamento Acadmico de la Facultad de Ciencias Biolgicas. 3.- TIPO DE INVESTIGACIN Bsico Experimental 4.- RGIMEN DE INVESTIGACIN Libre 5.- CRONOGRAMA DE TRABAJO 5.1.- DURACIN DE PROYECTO:

Duracin Fecha de inicio

: 6 meses. : Julio del 2007.

Fecha de trmino : Diciembre del 2007.

5.2.- CRONOGRAMA: N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Actividad/mes Revisin bibliogrfica Preparacin de reactivos Implementacin de materiales y equipos Evaluacin de campo Seleccin y acondicionamiento del animal Aplicacin del extracto de Calceolaria sp. en los cobayos Recoleccin de datos Tabulacin de datos Anlisis e interpretacin de datos Preparacin del informe Informe final Sustentacin 6.- RECURSOS DISPONIBLES 6.1.- RECURSOS HUMANOS: Un estudiante de Farmacia y Bioqumica Dos Qumico Farmacuticos 6.2.- RECURSOS MATERIALES: 6.2.1.- Material biolgico: Mes 1 Mes 2 Mes 3 Mes 4 Mes 5 Mes 6

5kg de Calceolaria speciosa Pennell. huahuillay

6.2.2.- Unidades de experimentacin

25 Cavia porcellus cobayos de 400 450g de masa corporal.

6.2.2.- Materiales de laboratorio: 02 Pipetas de 1 mL. 01 Pipeta de 5 mL.

01 Pipeta de 10 mL. O2 Fiolas de 25 mL. 02 Fiolas de 50 mL. 03 Matraces de Erlenmeyer 04 Probetas graduadas de 100 mL. 01 Bureta de 100 mL. 02 Buretas de 10 mL. 03 Embudos de vidrio 05 Vasos de precipitado 03 varillas de vidrio 10 Tubos de prueba 02 Morteros 03 Jeringas de 5 ml 03 Jeringas de 10 ml 05 Papel de filtro 03 Jeringas de 20 ml 02 Sondas 05 Litros de agua destilada Furosemida Cloruro de sodio al 0.9% Etanol ter etlico Cloroformo 05 Jaulas de diuresis 05 Jaulas de transporte 01 Cronmetro 05 Embudos de plstico 01 Bao Mara 01 Balanza analtica 02 Gradillas 02 Soporte Universal 01 Estufa

6.2.3.- Reactivos:

6.2.4.- Equipos y aparatos:

 6.2.5.- Otros:

01 Equipo de soxhlet

3 Guantes quirrgico 1 Libreta de campo o apunte Lapiceros 2 Millares papel bon 1 Rollo de cmara fotogrfica Marcadores Vestuario

7.- PRESUPUESTO 7.1.- BIENES: Bienes de consumo

Equipos de laboratorioS/. 13 000.00 Materiales de laboratorio Material de limpieza Material de escritorio. Medicamentos Materia prima. 900.00 60.00 150.00 80.00 100.00 25.00 300.00

Vestuario....
Semovientes... 7.2.- SERVICIOS:

Material humanoS/. Pasaje y gasto de transporte.. Otros servicios de terceros

Impresin Publicaciones Material fotogrfico Encuadernamiento Otros

100.00 100.00

300.00 400.00 40.00 100.00 150.00

S/. 15805.00 8.- FINANCIAMIENTO

U.N.S.C.H.. S/. 13 980.00 Autofinanciamiento..

TOTAL 1 825.00 S/. 15 805.00

II.

PLAN DE INVESTIGACIN

1.- PROBLEMA 1.1.- Enunciado del problema: A qu concentracin ser mayor la actividad diurtica del extracto hidroalcohlico de la Calceolaria speciosa Pennell. huahuillay cobayo? 1.2.- Definicin y delimitacin del problema: 1.2.1.- Definicin del problema: En el Per, el empleo de productos naturales principalmente de origen vegetal se encuentra ampliamente difundido a la existencia de una gran diversidad de flora en las distintas regiones del pas (Cornejo, 1987). Las plantas presentan muchos beneficios como el control de las enfermedades, lo cual cuyo valor medicinal es otorgado por la presencia de los metabolitos secundarios. En la actualidad en los pases desarrollados como en las vas de desarrollo se revalora las propiedades curativas de las plantas medicinales y otros aspectos de la medicina tradicional. El presente trabajo de investigacin se orienta al estudio del efecto diftrico de Calceolaria sp. huawillay. Porque esta planta tambin es usada como digestiva como uso tradicional por la poblacin que vive en el campo y las personas que venden hierbas en el mercado. 1.2.2.- Delimitacin del problema: administrado en Cavia porcellus

Se pretende al trmino de este trabajo de investigacin nos ayuda a evaluar la capacidad diurtica de esta planta medicinal, por lo que es usado tradicionalmente en forma de infusin por sus propiedades diurticas. La motivacin de este trabajo es determinar la capacidad diurtica de esta planta medicinal y comprobarlo cientficamente su efecto. De comprobarse su efecto esta nos ayudara a usarlo con mayor seguridad como fitomedicamento debido a su efectividad, econmico y su fcil manejo.

2.- MARCO TERICO 2.1.- Antecedentes: Sobre el estudio de las plantas medicinales como es de la Calceolaria engleriana como actividad diurtica han demostrado la presencia de metabolitos secundarios como los flavonoides y taninos, por lo tanto otras especies del genero Calceolaria tendr diferentes actividades farmacolgicas, dando asi una informacin cientifica ( Del Castillo, 2002). Realizaron el tamizaje fitoqumico y determinacin de la actividad diurtica del extracto hidroalcohlicode la raz de Foeniculum vulgare hinojo planta nativa de Ayacucho, utilizando extractos hidroalcohlicos a concentraciones de 100mg/kg, 200mg/kg y 400mg/kg donde hace uso del mtodo de Nail y Col. (Oriundo, 2003). Realiz el efecto diurtico a diferentes concentraciones del extracto acuoso atomizado de Taraxacum officinale diente de len, extracto atomizado a concentraciones de 100mg/kg, 250mg/kg, 350mg/kg y 500mg/kg donde hace uso del mtodo de Nail y Col. (Manrique, 2004) Realiz la evaluacion de la actividad diuretica del extracto atomizado de Bidens pilosa sillkau en cobayos, extracto atomizado a concentraciones de 100mg/kg, 150mg/kg, y 200mg/kg donde hace uso del mtodo de Nail y Col. . (Gonzalez, 2004)

2.2.- Aspectos botnicos de la planta:

2.2.1.- Descripcin taxonmica de Calceolaria sp. huawillay DIVISION CLASE SUBCLASE ORDEN FAMILIA GENERO ESPECIE : ANTOPHYTA (ANGIOSPERMAE) : DICOTILEDONEAE : METACLAMIDEAS : TUBIFLORALES : SCROPHULARIACEAE : Calceolaria : Calceolaria speciosa Pennell.

NOMBRE COMUN: huahuillay 2.2.2.- Descripcin taxonmica del Calceolaria speciosa Pennell. Son plantas herbceas y algunas veces son arbustos pequeos. FLORES hermafroditas, zigomorfas. Cliz con cuatro divisiones profundas. Corola con el tubo corto; estambres dos, laterales e insertadas en la base de la corola, filamentos cortos o largos; anteras biloculares, estilo simple; estigma es cabezuela. Capsula bilocular, cnica, dehiscente por cuatro valvas, incluida en el cliz. INFLORESENCIA cimosas, raro solitarias y de color amarilla. SEMILLAS numerosas, estriadas o reticuladas. Hierbas perennes, raramente anuales. HOJAS opuestas o verticiladas, simples o compuestas, enteras o dentadas. 2.2.3.- Distribucin geogrfica del Calceolaria speciosa Pennell. El genero se encuentra en los andes del centro y sur de Per entre los 2000 a 4100 m.s.n.m, especialmente en los departamentos de Ayacucho y Junn. Se sabe que la Calceolaria va del sur Mxico hasta los andes del sur de la tierra, desarrollndose mejor en cuestas rocosas y matorrales de montaas secas (Molau, 1988). Su floracin y recoleccin se da en los meses de primavera andina: abril, mayo, junio y julio, pero particularmente en el departamento de Ayacucho crece en los meses de enero y abril, siendo escaso de agosto a diciembre (Aedes, 1998). Usos medicinales En el empleo de la medicina tradicional se le atribuye ciertas propiedades medicinales como: diurtico, digestivo, astringente, febrfugo, antiulceroso e hipoglucemiante tambin se le describe por su uso para la tos, resfro y retraso menstrual; estas son usadas en forma de infusin las hojas y flores frescas tomndolas despus de los alimentos (Soukup, 1991).

El rin Los riones realizan dos funciones fundamentales. En primer lugar, eliminan gran parte de los productos metablicos terminales del organismo, y en segundo lugar, controlan las concentraciones de la mayor parte de los componentes de los lquidos corporales. Los dos riones en conjunto tienen aproximadamente dos millones de nefronas, y cada una de ellas es capaz de formar orina por separado. As pues, en la mayor parte de los casos no es necesario discutir el rin entero, sino simplemente la funcin de una nica nefrona para explicar la funcin renal. La funcin bsica de la nefrona es limpiara o aclarar el plasma sanguneo de desecho a medida que pasa por los riones. Dentro de estas sustancias que deben ser eliminados se encuentran particularmente determinados productos terminales del metabolismo como: urea, acido rico, uratos y creatinina. Tambin tenemos otras sustancias como los iones de sodio, potasio cloruro e hidrogeno que tienden a acumularse en el organismo en cantidades excesivas, as tambin la funcin de la nefrona es evitar la acumulacin de estos iones (GUYTON, 1995) Diurticos Los diurticos reducen el volumen total de agua y sal que esta en el organismo al incrementar su excrecin urinaria. Esto ocurre principalmente debido a que estos compuestos alteran la resorcin del cloruro de sodio en los tubulos renales. Los diurticos pueden clasificarse de acuerdo a su estructura qumica, la ubicacin del efecto de reducir la sal y el agua en las neuronas de los riones y la actividad farmacolgicas (HELLER, 1990).

Mecanismo de accin

Los diurticos del asa inhiben la reabsorcin de sodio y cloro en la porcin proximal del asa ascendente de Henle e incrementa la excrecin de agua. Los diurticos tiacidicos y sus homlogos aumentan la excrecin urinaria de sodio y agua por inhibir la resorcin sdica en el sitio de dilucin cortical del lado ascendente del asa de Henle.

Los inhibidores de la anhidrasa carbnica mediante bloqueo enzimtico, promueven excrecin renal de sodio, potasio, bicarbonato y agua.

Entre los diurticos diversos, el manitol aumenta la presin osmtica del filtrado glomerular, inhibiendo la resorcin tubular de agua y electrolitos (LITTER, 1997).

Absorcin, distribucin, metabolismo y excrecin

Los diurticos tiacidicos y sus homlogos se absorben bien del aparato digestivo y estos diurticos se distribuyen en todos los tejidos corporales y se excretan primariamente sin modificar la orina.

Entre los diurticos del asa de Henle, acido etacrnico estos se absorben rpidamente despus de su administracin oral, se metaboliza en el hgado y se excreta por los riones. La furosemida se absorbe poco en el aparato digestivo, solo se metaboliza una pequea cantidad se excreta por la orina. La urea se absorbe bien despus de la administracin oral pero rara vez se administra por esta va por que tiene un sabor desagradable. Despus de la administracin intravenosa se distribuye a los lquidos intracelulares y extracelulares incluyendo el lquido cefalorraqudeo. Esto se hidrolizan en el aparato digestivo por las ureasas bacterianas y se excretan por los riones (LITTER, 1997).

Furosemida La furosemida es un derivado del acido antranilico, posee un ncleo bencenosulfamilo halogenado adyacente en forma semejante a las tiazidas. Deriva de un anillo aromtico fundamental correspondiente al acido antranilico, con una cadena lateral que contiene un anillo furano; su potencia y eficacia diurtica depende de todas estas caractersticas. La furosemida administrada por la va intravenosa, intramuscular o oral, producen la diuresis en animales y en el hombre normal o con edema, que puede llegar a los 10 litros diarios. La accin del diurtico es rpida y de corta duracin. Por la va oral el efecto comienza a los 30 a 60 minutos, es mximo a los 90 a 120 minutos y dura de 6 a 8 horas. Por va intravenosa la diuresis comienza a los 5 a 15 minutos llega al mximo a los 30 a 60 minutos y dura 3 a 5 horas. La furosemida adems de producir un aumento de la eliminacin de agua, provoca una potente saluresis, con una intensa excrecin de sodio (natriuresis), cloruro (cloruresis) y potasio (kaliuresis), con mayor eliminacin del anin cloruro es mayor

que el catin de sodio, dicho exceso de cloruro se elimina con iones potasio y amonio (LITTER, 1997). 3.- HIPTESIS El extracto hidroalcohlico de Calceolaria speciosa Pennell. huahuillay presenta mayor actividad diurtica en la concentracin mayor administrada en Cavia porcellus cobayo. 4.- IDENTIFICACIN DE LAS VARIABLES 4.1.- Variable independiente:

Concentraciones del extracto hidroalcohlico de la Calceolaria speciosa.

huahuillay. Niveles 100mg/kg 250mg/kg 500mg/kg

4.2.- Variable dependiente:

Actividad diurtica.
Niveles Porcentaje de excrecin volumtrica urinaria Frecuencia de excrecin urinaria

5.- OBJETIVOS 5.1.- Objetivo general:

Determinar la actividad diurtica del extracto hidroalcohlico de Calceolaria

speciosa Pennell. huahuillay.

5.2.- Objetivos especficos:

Determinar la concentracin optima diurtica del extracto hidroalcohlico de

Calceolaria speciosa Pennell. huahuillay.

Identificar cualitativamente los metabolitos secundarios de la Calceolaria

speciosa Pennell.

6.- DISEO METODOLGICO 6.1.- Tipo de investigacin: Bsico Experimental 6.2.- Definicin de la poblacin y muestra: Poblacin Hojas y flores de Calceolaria speciosa Pennell. huahuillay recolectada en zonas ridas en la provincia de Huancasancos del departamento de Ayacucho. Muestra 5 kg. de las hojas y flores de Calceolaria speciosa Pennell. Unidad experimental 25 Cavia porcellus cobayos de la misma edad de 400 450g de peso. 6.3.- Mtodos:

Procedimiento para la recoleccin de datos

Recoleccin de la muestra: Recolectar la muestra y secarlo a temperatura ambiente en un lugar que tenga buena ventilacin y cambiando el papel cada da hasta que se seque completamente. Preparacin de la muestra: Una vez secada, se pulveriza la muestra y se macera con alcohol de 70 para luego proceder a la filtracin, concentrar y preparar las diferentes concentraciones. Determinacin de la actividad diurtica La metodologa empleada para la determinacin de la actividad diurtica se basara en el mtodo utilizado por Nail y Col y aplicado en la ctedra de Farmacologa del rea de Farmacia de UNSCH. En este ensayo se utilizan 25 cobayos con un peso de 400 a 450 gr. A las cuales se dejan en ayunas unas 18 a 24 horas antes de la prueba, si ser privadas de agua, se les administra por va oral mediante una sonda naso gstrica 50ml/kg de peso una solucin de cloruro de sodio 9% y se coloca en una jaula de diuresis. Despus de 15 minutos de hidratacin se les pesa se les administra el producto en estudio y se les coloca en al jaula de diuresis, recolectando a partir de ese momento la orina cada 30 minutos por un periodo de cuatro horas.

Para el estudio comparativo del extracto hidroalcohlico se forman cinco grupos de cinco animales y cada uno distrbuido de la siguiente manera:
Grupo I Grupo II Grupo III Grupo IV Grupo V Blanco administrado con solucin de cloruro de sodio 9% Control positivo tratado con furosemida en dosis de 5mg/kg de peso Administrado con extracto hidroalcohlico a dosis de 100mg/kg de peso Administrado con extracto hidroalcohlico a dosis de 250mg/kg de peso Administrado con extracto hidroalcohlico a dosis de 500mg/kg de peso

Luego de la administracin sern colocados individualmente en la jaula de diuresis para colectar la orina. Para determinar el efecto diurtico se procede a pesar a los animales inmediatamente despus de producido la diuresis y por la diferencia de peso se calcula aproximadamente el volumen perdido, as mismo se mide en la probeta el volumen de orina eliminado, los que nos permitan determinar la concentracin ideal que muestre una mayor eficacia diurtica en relacin a la furosemida tomado como patrn. La excrecin volumtrica urinaria (EVU) se expreso en porcentaje mediante la siguiente formula: EVU = Volumen de orina excretado x 100 Volumen de lquido administrado

7.- DISEO EXPERIMENTAL El diseo que se utiliza para el estudio del presente trabajo de investigacin es el Diseo Completamente ramdomizado.

8.- BIBLIOGRAFA

1. Cornejo, V. (1987) Las plantas medicinales y su correcta utilizacin.

Facultad de Ciencias Biolgicas UNSCH Ayacucho-Per. 2. Aedes (1998) Estudio de la biodiversidad vegetal y animal, cuenca Cotahuasi: flora medicinal. Consejo provincial de la Unin, secretaria tcnica La unin. Arequipa-Per. 3. Soukup, S (1991) Vocabulario de nombres vulgares de la flora peruana. Escuela tipogrfica salesiana. Colegio Salesiano. Lima-Per. 4. Litter, M (1997) compendio de farmacologa. Editorial Talleres Graficos. Buenos Aires.

5. Heller, H (1990) Gua profesional de medicamentos. El Manual Moderno.

Segunda edicin. Mxico. 6. Guyton, A (1995) Tratado de fisiologa Medica. Sptima edicin. Editorial Iberoamericana.