"ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA IN VITRO DE LA Grindelia boliviana Rusby (CHIRI CHIRI) EN CEPAS DE Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes" Dra.

Rosa Ins Vengoa Fgueroa1, Dr Gustavo Tagle Carbajal2

RESUMEN: La medicina tradicional utiliza la Grindelia boliviana Rusby (GbR) en el tratamiento emprico de diversas enfermedades atribuyndole a esta planta propiedad antibacteriana. Realizamos el presente estudio con la finalidad de evaluar in vitro la actividad antibacteriana de la Decoccin (DE), Extracto Alcohlico (EA) y Aceite Esencial (AE) de la GbR y determinar su Concentracin Inhibitoria Mnima (CIM) frente a cepas de Staphylococcus aureu (Sa) ATCC 25923 y Streptococcus pyogenes (Sp) EMB 217. El Diseo corresponde a un estudio experimental, prospectivo, longitudinal, simple ciego que consta de 3 pasos: a) Estandarizacin de la curva de crecimiento bacteriano (fase logartmica promedio) que fue para el Sa=0,39 y Sp=0,36. b) Estandarizacin de la Concentracin antibacteriana de la GbR por el mtodo turbidimtrico para hallar la CIM para cada forma medicamentosa frente a las dos cepas standard. c) Pruebas de Susceptibilidad. Se encontr que la CIM fue para Sa con DE: 640 mg (40 ul); EA: 320 mg (20 ul) y AE: 2500 mg (10 ul) y para el Sp DE: 320 mg (20 ul); EA: 160 mg (10 ul) y AE: 1250 mg (5 ul). Y se hallaron halos de inhibicin para las tres formas; de preparacin. Se concluye que: - La DE, EA y AE de GbR tienen actividad antibacteriana in vitro en Sa y Sp. - La forma medicamentosa con mayor actividad antibacteriana fue el aceite esencial seguida del extracto alcohlico ( Mtodo excavacin). Palabras Clave: Grindelia boliviana, Actividad antibacteriana, Chiri Chiri ABSTRACT: Traditional Medicine uses Grindelia boliviana Rusby (GbR) in the empiric treatment of many diseases ascribing to this plant antibiotic characteristics, we made this study...., and determinate its Least Inhibitory Concentration (CIM) against stubs of Staphylococcus aurous (Sa) ATCC 25923 and Streptococcus pyogenes (Sp) EMB 217. The design of the investigation is experimental, prospective, longitudinal, one blind with three steps: a) Make an standard curve of bacterial growing "logarithmic phase average", the which was for Sa=0,39 and Sp=0,36. b) Make an average of the anfibiotic concentration of GbR by the Turbidimetric Method and get the CIM for every medicinal method of GbR against the two standard stubs. And c) Susceptibility Tests. The CIM was for Sa with DE; 640 mg (40ul), EA: 320 mg (20ul) and AE 2500 mg (10ul), and for Sp with DE 320 mg (20ul); EA: 160 mg (10ul) and, AE: 1250 mg (5ul), and we found inhibition rings for the three preparation models. We conclude: - The DE, EA and AE of GbR have antbiotic activity in vitro against Sa and Sp. - The medicinal model with major antibiotic activity was the essential oil followed by the alcoholic abstract (excavation method). Key words: Grindelia boliviana, Antibiotic activity, Chiri Chiri

INTRODUCCIN No obstante la amplia utilizacin emprica de la Grindelia boliviana Rusby (chiri Chiri) como antiinflamatorio en la Medicina Tradicional Peruana, no se hallan estudios (como antibacteriano) que precedan a est trabajo. La farmacopea alemana describe a las especies Grindelia robusta Nutt y Grindelia squarrosa Dunal, con usos teraputicos. Asimismo se observa el uso de las Grindelias dentro de la farmacopea de Inglaterra, Francia, Espaa, Alemania, Blgica y desde 1893 se integra a la farmacopea americana (1,2). El agua de la Grindelia y la tintura tienen efectos antibiticos frente a las bacterias Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis (1). El presente estudio trata de demostrar uno de los probables efectos farmacolgicos de la Grindelia boliviana Rusby (Chiri Chiri), usado en medicina tradicional a la cual se le confiere muchas propiedades (1-3,13-15). El problema en estudio es: Son efectivas la Decoccin, el extracto alcohlico y/o el aceite esencial de las hojas y flores de la Grindelia boliviana Rusby (Chiri Chiri) como antibacteriano en cultivos in Vitro de cepas patrn de Staphylococcus aureus y/o Streptococcus pyogenes?. El Objetivo central de este estudio es: Demostrar la accin antibacteriana de la Grindelia boliviana Rusby oriunda del sur andino y como objetivos especficos. a. Evaluar in Vitro la actividad antibacteriana de la decoccin, extracto alcohlico y/o aceite esencial de Grindelia boliviana Rusby. b. Determinar la Concentracin Inhibitoria Mnima (CIM) de Grindelia boliviana Rusby en cepas estndar de Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes. c. Determinar cual de las formas medicamentosas tiene mayor efecto antibacteriano. Buscamos de esta manera: Revalorizar el uso de plantas medicinales de nuestro medio, brindando un aporte tcnico (cientfico) adecuado a la Medicina Tradicional; Demostrar el efecto antibacteriano, nos permitir ofrecer una alternativa importante en el enfoque tradicional del tratamiento de heridas superficiales en la zona rural y Promover el diseo del ensayo clnico derivado del presente estudio, luego de la demostracin in Vitro, por todo esto planteamos la siguiente Hiptesis "La decoccin, el extracto alcohlico y/o aceite esencial de las hojas y flores de la Grindelia boliviana Rusby (Chiri Chiri) tienen accin antibacteriana in Vitro en cepas estndar de Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes". El presente es un estudio experimental, prospectivo, longitudinal, con aleatorizacin simple, simple ciego. MATERIAL Y MTODOS Se realiz un control no experimental por seleccin mediante criterios de inclusin y exclusin. Material : Se incluyeron todas aquellas muestras de la Grindelia boliviana Rusby ( Chiri Chiri ), Obtenidas del Valle Sagrado de los Incas (Pisac) a 3,000 msnm, nivel Qheswa, cultivadas (in situ) mediante agricultura orgnica, recolectadas de 8 a 11 a.m. entre los meses de diciembre a febrero, fueron secadas a sombra y se demostraron las caractersticas completas de la especie, se recogi el tercio superior de la planta. TCNICA DE PREPARACIN DE LAS FORMAS MEDICAMENTOSAS: DECOCCIN: 50 gramos de hojas y flores secas se mezclaron con agua destilada 50 cc a temperatura ambiente (peso/volumen)(22) y se dejaron en bao mara, Termostato Tre-C Tipo F Brev. 22766, durante 30 minutos, removindose repetidamente, finalmente se filtr en caliente. Reducindose en bao mara a 3 cc. almacenado en recipiente de vidrio acaramelado y refrigerado a una temperatura de 4 C.

EXTRACTO ALCOHLICO: Mediante percolacin alcohlica (22,23) se introduce 50 gramos de hojas y flores, previamente trituradas en mortero, en el percolador al cul se agreg 400 cc alcohol etlico a 60. El lquido de extraccin se introdujo por la parte superior del percolador, circulando lentamente a travs de la droga, consiguiendo una maceracin progresiva en 24 horas, para lograr una extraccin del 95% de la sustancia. Luego es concentrado en bao mara por evaporacin a 3 cc. y almacenado en recipiente de vidrio acaramelado y refrigerado a una temperatura de 4 C. ACEITE ESENCIAL: Obtenida mediante destilacin por vapor (24) de 1000 gramos de hojas y flores frescas de la planta, posterior condensacin y separacin del aceite equivalente a 5 cc. El punto de ebullicin de este compuesto fluctu entre los 80 C y 100 C. Est fue almacenado en recipiente de vidrio acaramelado y dejado a temperatura ambiente. TCNICA DE MANEJO DE LOS CULTIVOS:Se trabajo con 192 muestras, En el Laboratorio Clnico del Hogar Clnica San Juan de Dios del Cusco. - Se aplicaron los parmetros bsicos Para el cultivo de las cepas estndar utilizndose como medio de cultivo el agar Mueller Hinton (DIFCO) para Staphylococcus aureus, y para Streptococcus pyogenes el agar Mueller Hinton enriquecido con sangre humana al 3% (27). - Se us como medio de cultivo para la estandarizacin de la curva de crecimiento de las cepas patrn el caldo B.H.I.(Infusin cerebro - corazn). (DIFCO). - El tipo de siembra en las placas de Petri, fue por la tcnica de cubrimiento de Barry modificada (25,28). - El tipo de incubacin fue por aerobiosis. - Las placas se incubarn a 37 C, durante 18 - 24 horas (29) dentro de un incubador Dryng Chamber type P/G 2007. serie 510525. - El excavado del agar se realiz utilizando un "molde de excavacin" estril (de vidrio o metal) que genera un hoyo de 5 mm de dimetro. - Los Discos Experimentales fueron elaborados con papel filtro Whatman N 3 de 8 mm de dimetro con una capacidad de absorcin de 20 ul (30). - La lectura de los halos de inhibicin se efectu a las 18 horas y confirmadas a las 24 horas. - La lectura se realiz por medicin directa lo ms exactamente posible al milmetro, a simple vista, por la cara inferior de la placa. - Se excluyeron aquellas placas de Petri cuyo control de calidad determin una sospecha de incumplimiento de los parmetros establecidos para los cultivos bacterianos, y aquellas que presentaron contaminacin. DISEO DEL EXPERIMENTO: Se evalu la actividad antibacteriana de las drogas naturales. El experimento consisti en tres pasos: a) Estandarizacin de la curva de crecimiento del: (8, 31, 32) Staphylococcus aureus American Type Cultural Collection (ATCC) 25923. y Streptococcus pyogenes EMB 217 - NAMRID Para lo cul: - Se sembr 0,5 ml de cultivo fresco de Staphylococcus aureus ATCC 25923 o de Streptococcus pyogenes EMB 217 en 4,5 ml de caldo B.H.l (Infusin cerebrocorazn) pH =7.0. Incubadas a 37 C. La evaluacin del crecimiento bacteriano se realiz cada hora mediante la lectura del cultivo en el espectrofotmetro Wiener lab Group Model BTR-811. Serie 801150387. b) Estandarizacin de la concentracin antibacteriana de la Grindelia boliviana Rusby con las dos cepas patrn. Por el Mtodo turbidimtrico (8, 32). Se utilizaron tubos de vidrio conteniendo 4,5 ml del inculo fresco en caldo B.H.l de S. aureus o S. pyogenes a una densidad ptica de 0,39 y 0,36 respectivamente

"fase logartmica promedio" a los que se agreg 0,5 ml de las concentraciones equivalentes a: 5, 10, 20, 40, 80, 160, 320, 640,1280 miligramos de la decoccin y extracto alcohlico, y concentraciones equivalentes de: 625 mg (2.5 ul), 1250 mg (5ul), 2500 mg (10ul), 3750 mg (15ul), 5000 mg (20 ul) de aceite esencial de Grindelia boliviana Rusby. Todo ello se compara con controles para cada cepa (4,5 ml de B.H.l. ms inculo) Incubndose a 37 C por 18 horas (25). Al final del perodo de incubacin, los tubos se examinaron visualmente y por espectrofotometra controlando la turbidez que indica que el crecimiento bacteriano no fue inhibido por la concentracin antibacteriana contenida en el medio. El punto de ruptura representa la Concentracin Inhibitoria Mnima (CIM). c) Aplicacin de la estandarizacin en cepas patrn: Por el mtodo Disco-placa y el Mtodo excavacin-placa (8, 23,31). Los que se basan en la medicin del dimetro de zonas de inhibicin de crecimiento bacteriano que rodean a los discos o excavaciones que contienen las diferentes diluciones de la decoccin, extracto alcohlico o aceite esencial. Se sembr la superficie del agar por el mtodo de cubrimiento de Barry modificado. Se cerr la placa de Petri y, se dejo que el inculo se seque durante 5 minutos por lo menos, pero no ms all de los 30 minutos. Se aplicaron los discos previamente embebidos en diferentes diluciones de la decoccin, aceite esencial o extracto alcohlico, colocndolos sobre la superficie del agar, presionando suavemente contra la superficie del medio, empleando pinzas estriles, previamente flameadas y enfriadas (24). Se aplicaron en las excavaciones las diluciones obtenidas de la decoccin, extracto alcohlico o aceite esencia, con ayuda de una micropipeta. El control se hizo con discos embebidos con agua destilada estril que tambin se empleo en la excavacin con volmenes equivalentes a las dosis usadas (33). El manejo de datos se realiz por lista de chequeo y el anlisis: Descriptivo por promedio de halos de inhibicin y Inferencial mediante el Coeficiente de correlacin de Pearson y el de Regresin. RESULTADOS 1.- ESTANDARIZACIN DE LA CURVA DE CRECIMIENTO DEL Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes. La lectura de la proliferacin bacteriana se realiz con espectofotmetro a una longitud de onda de 670 mm, llevando el aparato a una densidad ptica (DO) de cero con caldo BHI sin inculo (blanco) obtenindose lo siguiente. (ver Tabla N 1) (Grfico N 1). 2.- ESTANDARIZACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA: MTODO DE DILUCIN EN TUBOS. En Staphylococcus aureus: DECOCCIN: Se registr nitidez a partir de la quinta dilucin, por lo tanto la CIM es de 640 mg (40ul), con una densidad ptica (DO) inicial de 0,34 y final de 0,22 EXTRACTO ALCOHLICO: La CIM fue de 320 mg (20ul) correspondiendo a una DO inicial de 0,20 y final de 0,14. ACEITE ESENCIAL: Observndose turbidez slo en el primer tubo de ensayo (5ul),siendo su CIM de 10ul = 2500 mg, lo que corresponde a una DO inicial de 0,73 y final de 0,040. BLANCO: Present turbidez constante, con una DO de 0.435. En Streptococcus pyogenes: DECOCCIN: Se hall una CIM de 320 mg (20ul). Con una DO inicial de 0, 16 y final de 0,93. EXTRACTO ALCOHLICO: La CIM fue de 160 mg (10 ul), que corresponde a una DO inicial de 0,16 y final de 0,14. ACEITE ESENCIAL: Su CIM fue de 1250 mg (5ul), que equivale a una DO inicial de 0,112 y, final de 0,054.

BLANCO: present turbidez constante. Con una DO de 0,445 3.- PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD BACTERIANA: Los dimetros promedio de halos de inhibicin de la Decoccin, Extracto alcohlico y Aceite Esencial de Grindelia boliviana Rusby se muestran en la Tabla N 2. Se aprecia que en el mtodo de Disco-Placa el Aceite esencial es la forma medicamentosa que presenta los halos de inhibicin ms altos que van de 0 20,6 mm para el caso del Staphylococcus aureus con dosis equivalentes de 1250 a 5000 mg respectivamente (5- 20 ul). Con la cepa de Streptococcus pyogenes es el Extracto alcohlico el que muestra los dimetros ms altos que van de 0-18,25 mm con dosis equivalentes de 80 640 mg (5-20 ul). En el mtodo Excavacin - Placa el Aceite esencial es nuevamente la forma medicamentosa ms efectiva con halos de inhibicin de 16,88 a > 26,38 mm que equivalen a dosis de 1250 - 3750 mg (5 - 20 ul), para el Staphylococcus aureus y para el Streptococcus pyogenes con halos de inhibicin de 0 - 22,75 mm que son equivalentes a dosis de 1250 - 5000 mg (5-20 ul). Mediante el anlisis inferencial realizado a todos los dimetros de inhibicin se obtuvo los siguientes resultados (Tabla N 3. Grficos del 2 al 9), segn las formas medicamentosas para las dos cepas en estudio. ANLISIS Y DISCUSIN 1) ESTANDARIZACIN DE LA CURVA DE CRECIMIENTO BACTERIANO: El Staphylococcus aureus ATCC 25923, lleg a su fase de crecimiento exponencial a las dos horas de haber sido cultivada, con una densidad ptica (DO) de 0,39 unidades de absorbancia. El Streptococcus pyogenes EMB 217, alcanz su fase exponencial a las tres horas, con una DO de 0,36 unidades de absorbancia resultado que semeja al de otros trabajos (20). Esto se explica porque la mayor parte de los microorganismos crecen exponencialmente, pero la velocidad de crecimiento varia mucho de un organismo a otro (8) 2) ESTANDARIZACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA Y PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD En resultados obtenidos por el Mtodo de Dilucin en tubos sobre la CIM de las diferentes formas medicamentosas de Grindelia boliviana R. revelan que tienen mayor efecto inhibitorio sobre el Streptococcus pyogenes con diluciones ms bajas (decoccin 320 mg; extracto alcohlico 160 mgl; aceite esencial 1250 mg). Lo que se evala tambin mediante la medicin o lectura de la densidad ptica siendo resaltante en el extracto alcohlico, que esta se mantiene elevada al final de la prueba. an existiendo nitidez visible, pudiendo explicarse que dicho aumento corresponda a la activacin de algn componente de la planta por el calor (incubadora a 37 C). Se pudo apreciar que en el mtodo excavacin con el Aceite Esencial la CIM (1250 mg) fue la ms baja para el Staphylococcus aureus. As mismo se muestra, que el promedio de los halos de inhibicin mas altos para el Staphylococcus aureus se hallan con Aceite Esencial y Extracto alcohlico en el Mtodo de Excavacin-Placa, y para el Streptococcus pyogenes con Extracto alcohlico en el mtodo Disco-Placa. Como vemos los ms altos promedios se dan con el mtodo de excavacin (Independiente de la bacteria). ello quiz se deba a la mejor capacidad de difusin de las formas medicamentosas en el agar ya que podra ser limitada esa capacidad al usarse papel filtro. La prueba de regresin de las tres formas medicamentosas nos permiten predecir valores de dimetros de inhibicin para diluciones mayores. Las pruebas de

regresin logartmica muestran gran significancia estadstica (p< 0,00 1) que se aprecia a predominio del mtodo Excavacin. El anlisis de Correlacin de Pearson (COR) tambin nos permite ver la fuerza de relacin que existe entre las variables implicadas, determinando que presenta una muy buena correlacin (COR > a 0.75). El Coeficiente de determinacin, R-2, sirve para sealar en que porcentaje se puede explicar una variable conociendo la otra. Por tanto en la Tabla No 3 se aprecia que el R2 del Extracto alcohlico por el mtodo de excavacin es de 0.94, lo que se interpreta que 94% de la variacin en el halo de inhibicin se explica por las diferentes diluciones. Podemos apreciar en los grficos 6 -al 9 que es el aceite esencial la forma medicamentosa que muestra mayor actividad antibacteriana. Suponemos que la Decoccin al ser una forma medicamentosa netamente acuosa extraera los compuestos qumicos hidrosolubles, el extracto alcohlico tendra compuestos qumicos hidrosolubles y liposolubles a diferencia del aceite esencial que extraera los compuestos liposolubles. Imaginamos que los principios activos antibacterianos son ms liposolubles que hidrosolubles. Segn la composicin qumica que muestra el gnero Grindelia creemos que la actividad antibacteriana se deba a la presencia de Diterpenos, flavonoides y poliacetilenos corno lo visto en otras plantas por AHMAD (34), MARTINEZ (35), HIREMATH (36) RATSIMAMANGA (37). La accin antibacteriana demostrada por el aceite esencial se basara en los compuestos qumicos como el borneol, terpinol, A-pineno y B-pineno (38,39). CONCLUSIONES 1. La Decoccin, Extracto Alcohlico v Aceite Esencial de Grindella boliviana Rusbv tienen actividad antibacteriana in Vitro sobre cepas de Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes. 2. La CIM para el Staphylococcus aureus fue: Decoccin=640 mg (40ul), Extracto Alcohlico=320 mg (20ul) y Aceite Esencial=2500 mg (10ul). 3. La CIM para el Streptococcus pyogenes segn las formas medicamentosas fueron: Decoccin=320 mg (20ul); Extracto Alcohlico=160 mg (10ul); y Aceite Esencial=1250 mg(5ul). 4. Las formas medicamentosas con mayor actividad antibacteriana fueron el Aceite Esencial y el Extracto Alcohlico con el mtodo de Excavacin. SUGERENCIAS - Propender a la investigacin fitoqumica y farmacolgica de la Grindelia boliviana Rusby. - Proseguir el estudio con cepas salvajes obtenidas de pacientes con patologa drmica. - Continuar con estudios de toxicidad subaguda, toxicidad crnica, teratogenicidad y, efectos adversos. - Corroborar luego del estudio in Vitro en animales de laboratorio, su efecto antibacteriano en ensayos clnicos. AGRADECIMIENTOS Al Hogar Clnica San Juan de Dios en la persona del Hermano Pedro Pia, por habernos facilitado amablemente las instalaciones del laboratorio. A nuestros asesores: Dr. Luis Miranda y Dra. Zenia Mongo por sus sabios consejos en la elaboracin de, la investigacin. Al Instituto de Ecologa y Plantas Medicinales (IEPLAM) a su Director el Blgo. Justo Mantilla por toda la colaboracin brindada en la obtencin de la planta seca y del aceite esencial. Al Centro de Medicina Andina en la persona del Q. F. Ricardo Snchez por la ayuda prestada para la elaboracin del extracto alcohlico. Al NAMRID en la persona del Dr. Carlos Lebrn Jefe del Servicio de Bacteriologa por facilitarnos las cepas estndar de los microorganismos.

TABLA N1: CRECIMIENTO BACTERIANO TIEMPO 0 (Horas) 1 2 3 4 5 6 7 8

Staphyl 0,105 0,191 0,399 0,546 0,590 0,548 0,480 0,413 0,112 (DO) Streptc 0,128 0,201 0,295 0,361 0,417 0,405 0,260 0,120 0.090 (DO) Control 0,030 0,030 0,030 0,030 0,30 (DO) DO=Densidad ptica Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp 0,030 0,030 0,030 0,030

TABLA N2: ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA IN VITRO METODO FORMA DILUCION MEDICAMENTO (mg/ul) 80 DECOCCION 160 320 640 80 DISCO EXTRACTO ALCOHOLICO 160 320 640 1250 ACEITE ESENCIAL 2500 3750 5000 80 DECOCCION 160 320 640 80 EXCAVACION EXTRACTO ALCOHOLICO 160 320 640 1250 ACEITE ESENCIAL 2500 3750 5000 Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp DIAMETRO DE HALO DE INHIBICIN (mm) S. aureus 8.00 9.13 11.88 8.50 9.88 11.88 10.90 18.40 20.60 5.28 9.13 10.50 7.00 10.00 19.50 16.88 22.88 26.38 >26.38 S. pyogenes 8.25 10.50 18.25 12.25 15.00 18.25 10.75 11.75 14.00 5.75 9.75 11.50 10.50 13.00 15.50 11.25 17.75 22.75

TABLA N3: ANALISIS INFERENCIAL Cepas F.M. A.M. RB COR R2 DP' Staphylococcus aureus DECOCC EP' EXT.OH. DP' EP' ACEITE E DP EP' DECOCC DP EP' Streptococcus EXTR.OH DP EP' ACEITE E DP EP'

0.88 0.96 0.92 0.97 0.99 0.94 0.93 0.97 0.93 0.93 0.95 0.97 0.73 0.85 0.79 0.97 0.96 0.87 0.80 0.87 0.81 0.80 0.87 0.94 0.53 0.72 0.62 0.94 0.92 0.76 0.64 0.76 0.66 0.64 0.76 0.88

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

*:P<0,001 F.M. = FORMA MEDICAMENTOSA; A=ANLISIS ESTADISTICO ; M=MTODO; DP=DISCO PLACA; EP=EXCAVACIN PLACA; RB=COEFICIENTE DE REGRESIN; COR=COEFICIENTE DE CORRELACIN; R2=COEFICIENTE DE DETERMINACIN.

GRAFICO N2 :ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LA DECOCCION Y EXTRACTO ALCOHOLICO DE G. b.R. SEGUN METODO DE SUSCEPTIBILIDAD SOBRE Staphylococcus aureus.

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

GRAFICO N3 :ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LA DECOCCION Y EXTRACTO ALCOHOLICO DE G. b.R. SEGUN METODO DE SUSCEPTIBILIDAD SOBRE Streptococcus pyogenes.

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

GRAFICO N4 :ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DEL ACEITE ESENCIAL DE G. b.R. SEGUN METODO DE SUSCEPTIBILIDAD SOBRE Staphylococcus aureus.

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

GRAFICO N5 :ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DEL

ACEITE ESENCIAL DE G. b.R. SEGUN METODO DE SUSCEPTIBILIDAD SOBRE Streptococcus pyogenes

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

GRAFICO N6 :ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LA DECOCCION, EXTRACTO ALCOHOLICO Y ACEITE ESENCIAL DE G. b.R. POR EL METODO DE DISCO-PLACA Staphylococcus aureus.

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

GRAFICO N7 :ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LA DECOCCION,EXTRACTO ALCOHOLICO Y ACEITE ESENCIAL DE G. b.R. POR EL METODO DE EXCAVACION-PLACA Staphylococcus aureus.

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

GRAFICO N8 :ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LA DECOCCION, EXTRACTO ALCOHOLICO Y ACEITE ESENCIAL DE G. b.R. POR EL METODO DE DISCO-PLACA SOBRE Streptococcus Pyogenes.

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

GRAFICO N9 :ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LA DECOCCION, EXTRACTO ALCOHOLICO Y ACEITE ESENCIAL DE G. b.R. POR EL METODO DE EXCAVACION-PLACA SOBRE Streptococcus Pyogenes.

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

1,2 Mdicos cirujanos egresados de la FMH UNSAAC

http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/situa/2000_n15/actividad.htm