Laboratrio de Estudos e Pesquisa em Produo e Nutrio de Animais No-Ruminantes

Digestibilidade e Mtodos de Determinao de Valores Nutricionais dos Alimentos

Prof. Alex Maiorka, Ananda Portella Felix amaiorka@ufpr.br

Introduo

Avaliao de Alimentos
Avaliao qumica + biolgica

Caracterizao da composio qumica dos alimentos e do aproveitamento dos seus componentes pelos animais

Introduo

Por que avaliar alimentos ?

Introduo
Importncia nutricional, econmica e social

Otimizar desempenho x minimizar custos e impacto ambiental

Introduo
Viso do nutricionista (valores mnimos)

75 kg de protena

40 kg de gordura

1 tonelada de milho

2,4 kg de lisina

2,1 kg de metionina

Introduo
Contribuio de EM dos ingredientes na dieta
EM INGREDIENTE Kcal/Kg* Milho Farelo de soja Farinha de carne Farinha de vsceras Farinha de Penas leo de vsceras Calcrio Sal L-Lisina DL-Metionina Premix TOTAL 3381 2256 2445 3259 2734 8817 3762 4858 * Rostagno, 2000

DIETA 63,1 22,2 4,4 2,5 2,5 3,7 0,3 0,4 0,3 0,2 0,4 100

CONTRIBUIO 2133,41 500,83 107,58 81,47 68,35 326,22

EM % total 65,87 15,46 3,32 2,52 2,11 10,07

11,28 9,716 3239

0,35 0,30 100

Introduo

Valor Nutricional do Milho

Composto PB (%) EE (%) EMV (kcal/kg)

Gro Normal Quebrado Fungado 8,1 3,7 3.439 8,1 3,3

- 2,5%

8,5 2,4
-10%

3.353

3.073

Fonte: Adaptado de Dale (1994)

Introduo
Contribuio de EM dos ingredientes na dieta
EM INGREDIENTE Kcal/Kg* Milho Farelo de soja Farinha de carne Farinha de vsceras Farinha de Penas leo de vsceras Calcrio Sal L-Lisina DL-Metionina Premix TOTAL 3381
(84,5)

DIETA 3296 2256 2445 3259 2734 8817 3762 4858 * Rostagno, 2000

CONTRIBUIO 2133 2079,77 500,83 107,58 81,47 68,35 326,22

EM % total 65,92 15,87 3,40 2,58 2,16 10,33

63,1 22,2 4,4 2,5 2,5 3,7 0,3 0,4 0,3 0,2 0,4 100

11,28 9,716 3239 3155

0,36 0,31 100

Introduo

Conhecer o valor nutricional dos ingredientes possibilita a formulao de dietas que atendam exatamente as necessidades do animal, evitando gastos excessivos

NUTRIO DE PRECISO

Introduo

1. Controle dos ingredientes

- Recebimento - Armazenamento dos ingredientes - Processamento dos ingredientes

2. Controle de formulao 3. Controle no Processamento de Produo

- Contaminaes cruzadas

4. Controle no processo de distribuio 5. Controle no processo de utilizao

Composio Qumica

Avaliao dos Alimentos

Fracionamento dos Alimentos

Alimento

gua

Matria seca

Matria Mineral

Matria Orgnica

Vitaminas

Gorduras

Protenas

Carboidratos

Avaliao dos Alimentos Anlises

Mtodos Qumicos
Mtodo de Weende ou proximal
- Matria seca (MS)

Mtodos Fsico-qumicos
NIRs ou Infravermelho Proximal Espectrofotometria Eletroforese capilar Cromatografia gasosa Cromatografia lquida

Matria mineral (MM) Protena bruta (PB) Fibra bruta (FB) Extrato etreo (EE) Extrativos no nitrogenados (ENN)

Mtodo de Van Soest

- Fibra em detergente neutro (FDN) - Fibra em detergente cido (FDA) - Lignina

Avaliao dos Alimentos

Anlise proximal (W eende) Protena bruta Extrato etreo Com ponente qum ico Protena N no proteico Lpidos Pigm entos Acares cidos orgnicos Pectinas Hem iceluloses Lignina solvel em lcali Lignina insoluvel em lcali N ligado a fibra Celulose M inerais insolveis em detergente M inerais solveis em detergente Solveis em detergente neutro Anlise de Van Soest

Extrativos no N

Lignina FDA

FDN

Fibra bruta

Cinzas

NIRs

Espectrofotometria no Infravermelho Proximal Possibilita determinar de forma ampla a composio do alimento Baseados nos princpios de Reflectncia e Transmitncia da luz

Procedimento:
- Leitura da amostra e emisso da radiao IV pelo equipamento - Programa analisa picos de reflectncia e transmitncia - Comparao com picos conhecidos previamente (calibrao) - Emisso dos resultados de composio da amostra

Necessita de calibrao do aparelho

NIRs

Calibrao Criar banco de dados, com diferentes alimentos e respectiva composio Banco de dados formado por resultados obtidos pelo mtodo qumico A partir do banco de dados so criadas equaes Predio

Vantagens: Anlise rpida Baixo custo (depois de calibrado) No usa reagentes (depois de calibrado)

Desvantagens: Alto custo do equipamento?????? Necessita de calibrao

NIRs

LNA-UFPR

Urease e Protena Solvel em KOH

Soja gro desativado e subprodutos da soja

Subprocessamento

Superprocessamento

Inibidores de tripsina ativos Urease mximo 0,3 pH

Reao de Maillard Solubilidade KOH mnimo 80%

Fonte: ANFAR (1985)

Capacidade Tamponante dos Alimentos

Facilidade de uma molcula reter ou trocar ctions por H+, conforme o pH do meio onde ele se encontra

Alguns ingredientes possuem maior CT que outros, devendo ser restritos em determinadas dietas

Capacidade Tamponante dos Alimentos

Componentes da dieta que apresentam alta correlao com a capacidade tamponante:

Minerais Lignina Protena Bruta

Qual a quantidade adequada de cidos orgnicos adicionados a dieta ?

Viscosidade

A variao da Viscosidade entre os alimentos e entre as variedades dos mesmos alimentos muito grande

Viscosidade
Concentrao de PNAs e energia metabolizvel para frangos de corte
AME(MJ/kg MS)

14 13.5 13 12.5 12 11.5 11 1.2 1.3 1.4

Sol NSP (% MS) Variedades de Trigo r = - 0.91

1.5

1.6

Adaptado: Annison (1991).

Viscosidade

Composio de diferentes alimentos em polissacardeos no amilceos (% da matria seca).

Alimento Cevada Milho Centeio Sorgo Trigo Canola* Soja* Girassol* Aveia Ervilha Algodo* Linhaa* Glutenose * Farelo Fonte: Adaptado de CLASSEN, 1996; KNUDSEN, 1997; CHOCT, 1997. Celulose 4,3 2,2 1,6 2,2 2,0 5,9 6,2 8,9 8,2 5,3 9,2 5,3 7,5 Arabinose 2,8 2,0 3,6 2,0 3,1 4,3 2,3 2,5 1,8 3,6 3,4 3,6 6,8 Xilose 5,3 2,7 5,8 0,9 4,8 1,7 1,8 4,0 8,0 1,3 6,0 6,6 10,4 Manose Galactose 0,3 0,3 0,4 0,1 0,3 0,4 0,9 1,0 0,3 0,2 0,4 0,4 0,4 0,2 0,5 0,4 0,2 0,4 1,8 3,5 1,1 0,7 0,7 1,2 3,3 1,8 Glicose 6,5 1,8 3,0 2,1 2,0 0,8 0,7 1,0 3,3 3,6 0,8 3,7 1,6 c. urnico B-glucano Total 0,4 0,7 0,3 1,3 0,4 4,8 3,7 5,3 1,0 3,2 4,5 6,8 6,6 4,2 0,1 1,6 0,2 0,8 ---2,8 ---0,2 24,0 10,3 14,0 9,0 13,8 19,7 19,1 23,8 26,1 17,9 25,5 29,7 35,3

Viscosidade

Viscosidade dependente de vrios fatores: - Tamanho das molculas - Grau de ramificao - Presena de grupos carregados - Concentrao de polissacardeos no amilceos

Viscosidade

Gros de cereais:

Quantidades variveis de polissacardeos no amilceos (PNA), que so compostos predominantemente de arabinoxilanas, beta-glicanas e celulose

Energia Bruta

Avaliao da energia
Energia no nutriente, mas sim o resultado do metabolismos destes

Trabalho bioqumico celular Quebra de ligaes C ---- C C ---- H H ---- H

Produo de energia resultante da oxidao de compostos orgnicos

Caloria Calor necessrio para elevar a temperatura de 1g de gua de 14,5 a 15,5C

Energia Bruta
Avaliao da energia
Energia liberada pela oxidao dos nutrientes: 1 g protena = 4 Kcal 1 g carboidrato = 4 Kcal 1 g lipdeos = 9 Kcal
Lipdeos liberam 2,25 (9/4) vezes mais energia

Energia metabolizvel (EM) Mais utilizada para aves e sunos

Energia Bruta

LNA-UFPR

Avaliao Biolgica de Alimentos

Avaliao Biolgica de Alimentos

Digestibilidade Disponibilidade Metabolizabilidade da energia

Ensaios de digestibilidade

Digestibilidade

Proporo de um componente nutricional que foi absorvido pelo organismo

Ensaios de digestibilidade
Digestibilidade dos Alimentos
Frao do alimento consumido que aproveitada pelo animal

Digestibilidade = Consumido - Excretado x 100 Consumido

Digestibilidade de Nutriente = Nutriente consumido (kg) - Nutriente excretado (kg) x 100 Nutriente consumido (kg)

Ensaios de digestibilidade
Digestibilidade dos Alimentos
Digestibilidade Aparente Baseada na diferena entre a quantidade de matria seca ou nutriente ingerido e respectiva concentrao nas fezes Digestibilidade Verdadeira Considera no clculo a matria metablica fecal (perdas endgenas, descamaes, microrganismos) Especialmente importante no caso da digestibilidade de PB e EE

Digestibilidade verdadeira sempre ser maior que digestibilidade aparente

Ensaios de digestibilidade

Disponibilidade

Proporo de um componente nutricional que foi absorvido e utilizado no metabolismo do organismo

Ensaios de digestibilidade

Metabolizabilidade da energia

Definida como a Energia Bruta dos alimentos descontando-se as perdas de energia das fezes, urina e dos produtos gasosos da digesto

Para monogstricos, a energia perdida na forma de gases insignificante

Ensaios com Animais

Ensaios de digestibilidade
Mtodos diretos
- Mtodo da coleta total de excreta - Mtodo do uso de marcadores - Mtodo de substituio

Mtodos indiretos

Ensaios de digestibilidade
Mtodo da coleta total de excretas Mtodo mais tradicional
(Hill e Anderson, 1958; Potter e Matterson, 1960 e Sibbald e Slinger, 1963)

Perodo de adaptao s instalaes e a dieta 4 - 7 dias Perodo de coleta das excretas e quantificao do consumo de rao 4 - 5 dias
A acurcea dos coeficientes de digestibilidade e EM depende da quantificao total do alimento ingerido e da produo de excretas durante o perodo de coleta

Ensaios de digestibilidade
Mtodo do uso de marcadores
Objetivo Estimar parmetros que no podem ser medidos diretamente
Caractersticas necessrias aos marcadores: -Ser indigestvel e no ser absorvido ou metabolizado no TGI -Ser completamente recuperado ao final do TGI -Ser inerte e no ser txico para o animal -Misturar-se ao alimento e apresentar fluxo constante pelo TGI -Possuir um mtodo especfico e sensvel de determinao

Ensaios de digestibilidade
Mtodo do uso de marcadores Dispensa a quantificao da ingesto e excreo Menor tempo de coleta de excretas (3-5 dias)
Indicadores internos: - Componentes naturais da rao - Mais utilizados para ruminantes Dieta contm naturalmente alta quantidade destes indicadores - Exemplos: Lignina, CAI, FDA indigestvel

Ensaios de digestibilidade
Mtodo do uso de marcadores
Indicadores externos: - Devem ser adicionados rao xido crmico (CR2O3) - Mais utilizado (0,25 - 0,50% da rao) - Alta taxa de recuperao Anlise Colorimetria ou espectrofotometria de absoro atmica

Ensaios de digestibilidade
Mtodo do uso de marcadores
Indicadores externos: Cinza cida insolvel (CAI) - Indicador interno para ruminantes - Anlise pelo mtodo gravimtrico (mais acessvel) - Incluso > 2% pode diminuir a taxa de passagem Melhora digestibilidade
(Cheng e Coon,1990)

- Na prtica se usa 0,5 -1,0% da rao

Ensaios de digestibilidade
Mtodo do uso de marcadores
Indicadores externos: Cinza cida insolvel (CAI) - Indicador interno para ruminantes - Anlise pelo mtodo gravimtrico (mais acessvel) - Incluso > 2% pode diminuir a taxa de passagem Melhora digestibilidade
(Cheng e Coon,1990)

- Na prtica se usa 0,5 -1,0% da rao

Ensaios de digestibilidade
Mtodo de substituio Incluso de 20 - 40% do ingrediente teste na dieta referncia
(Matterson et al., 1965)

Ingredientes proticos Dieta referncia com baixo nvel protico Cereais Dieta referncia com maior nvel protico Fontes de fibras e leos 7 - 10% da dieta referncia

Ensaios de digestibilidade

Quanto maior o nvel de incluso do ingrediente teste, maior a preciso da digestibilidade

CDI = CDRR + (CDRT CDRR) % Substituio/100

Ensaios de digestibilidade
Fluxograma para realizao das anlises
Amostragem Identificao das amostras

Estocagem Pr-secagem (amostras midas)

Moagem

Estocagem Anlise

Avaliao da Protena

Ensaios de digestibilidade
Avaliao da protena
O conhecimento dos nveis de aminocidos essenciais e de sua biodisponibilidade nos alimentos fundamental

- Otimizar o uso de ingredientes de alto custo - Incluir ingredientes alternativos, corrigindo a frmula com AA sintticos - Permitir mximo desempenho dos animais - Diminuir poluio ambiental

Ensaios de digestibilidade
Avaliao da protena
Digestibilidade aparente de AA = AA consumida - AA excretado x 100 AA consumido

Digestibilidade verdadeira de AA = AA consumida - (AA excretado - AA fecal endgeno) x 100 AA consumido

Determinao das perdas endgenas - Animais em jejum - Dieta livre de protena - Dieta purificada (Casena hidrolisada, aas cristalinos)

Ensaios de digestibilidade
Protena do alimento
Digesto

AAs no absorvidos

AAs absorvidos

leo Digestibilidade ileal Catabolismo Sntese protica

Parte distal do intestino

Urina

Crescimento Disponibilidade

Fezes Digestibilidade aparente

Excreta (fezes e urina) Metabolizabilidade

Fonte: Adaptado de Parsons (1991)

Ensaios de digestibilidade
Digestibilidade da protena em aves
Coeficiente de digestibilidade da PB, determinado por coleta total em frangos intactos e cecectomizados e pela coleta ileal Intactos Rao 59,34 Cecectomizados 57,19 Ileal 85,00

Presena de cido rico

Degradao de aas pela flora microbiana

Ensaios de digestibilidade

Digestibilidade de aminocidos em aves

- Coleta de excretas
~ 25% dos AAs das excretas de aves so de origem microbiana
(Parsons et al., 1982)

- Coleta ileal
Recomendao: Aves em crescimento

- Galos cecectomizados
Excreo de 132 mg de AAs em relao a galos inteiros (99 mg) durante jejum Degradao microbiana de aas endgenos no ceco
(Kessler et al., 1991)

Ensaios de digestibilidade

Disponibilidade de aminocidos
Ensaio da curva de crescimento
Mede a capacidade da protena para substituir um aminocido limitante

Dieta basal deficiente no AA + nveis crescentes do AA cristalino (100% disponvel) e do ingrediente teste

Aplica-se na curva padro (AA 100% disponvel) a resposta de crescimento obtida com o ingrediente teste

Ensaios de digestibilidade

Digestibilidade de aminocidos e protena em sunos

Cnula no leo terminal Mais utilizado Anastomose leo-retal Coleta da digesta ileal aps eutansia

CDAPB

Ileal: 75,64% e Total: 81,86%

Fonte: Serrano (1990)

Degradao de aas pela microbiota do intestino grosso

Ensaios de digestibilidade

Ensaios de digestibilidade
Avaliao da protena Digestibilidade in vitro
Deve simular as condies do trato gastrintestinal Digestibilidade em pepsina Mais utilizado para ingredientes de origem animal Recomendaes:
0,2% de pepsina AOAC (1991)
(pode digerir totalmente protenas de baixa qualidade)

0,002% de pepsina Parsons (1991)

Avaliao da Energia

Ensaios de digestibilidade
Energia bruta ingerida (4,4cal/g) 100%
Energia fezes (1,0cal/g) 22,7%

Energia digestvel aparente (3,4cal/g) 77,3%

Gases fermentao (no considerada) Energia urina (0,2cal/g) 4,5%

Energia metabolizvel aparente (3,2cal/g) 72,7%

Frao endgena e metablica (0,1-0,2cal/g) 4,6%

Energia metabolizvel verdadeira (3,49cal/g) 79,3%

Incremento calrico (0,4-1,4cal/g) 9-32%

Energia lquida (1,8-2,8 cal/g) 41-64% Energia lquida produo (0,72-1,12 cal/g) 16,4-25,5%

Energia lquida mantena (1,08-1,68 cal/g) 24,5-38,2%

Ensaios de digestibilidade
EMA x EMAn em aves
Energia metabolizvel aparente (EMA) e energia metabolizvel aparente corrigida para balano de nitrognio (EMAn), utilizando o mtodo da coleta total com pintos e galos em kcal/ kgMS

Pintos EMA 3.537 EMAn 3.321 Diferena -216 EMA 3.570

Galos EMAn 3.548 Diferena 22

Maior reteno de N em aves em crescimento Menor contribuio energtica da excreo nitrogenada

Fonte: Adaptado de Caf (1993)

Ensaios de digestibilidade
EMAV x EMVn em aves
Energia metabolizvel verdadeira (EMV) e energia metabolizvel verdadeira corrigida para balano de nitrognio (EMVn) em galos alimentados ad libitum ou com alimentao forada (30g) em Kcal/ kg MS

Alimentao ad libitum
EMV 3.548 EMVn 3.574 Diferena -26 EMV

Alimentao forada EMVn 3.671 Diferena -1.202

2.469

Baixos nveis de ingesto Maior contribuio do N endgeno e metablico nas excretas

Fonte: Adaptado de Caf (1993)

Ensaios de digestibilidade

Energia para sunos Inicialmente NDT x 4,41kcal (ED medida in vivo) Atualmente EM e EMn
EMA = EB alimento - EBF (EB fezes + urina + gases fermentao)
(Diggs et al., 1965)

0,1 - 3% da energia

EL Eficincia do uso da EM para a protena (58%), extrato etreo (90%), amido (75%) e fibra bruta (58%)

Fonte: Adapatado de Noblet et al.????

Ensaios de digestibilidade
Mtodos indiretos Alternativa aos mtodos in vivo
Podem fornecer informaes sobre a digestibilidade e a EM dos alimentos com boa correlao com ensaios in vivo

Baseados nos dados obtidos em experimentos prvios com animais Exemplos: Equaes de predio, NIRs

Consideraes Finais

Conhecer a composio qumica do alimento antes de formular a rao imprescindvel para obteno de resultados positivos

O controle de qualidade de alimentos no pode ser encarado como custo e sim como investimento, pois seu retorno muito rpido

Consideraes Finais

A utilizao de mtodos indiretos uma ferramenta de grande aplicabilidade para estimativas da composio e disponibilidade das diferentes fraes dos alimentos

A correta interpretao dos resultados obtidos em avaliaes diretas e/ou indiretos determinante e exige conhecimento das diferentes metodologias

Consideraes Finais

A atualizao da matriz nutricional com os resultados obtidos deve ser atividade de rotina pelo responsvel pela nutrio