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Clulas madre y nuevas terapias. Una visin general

JOS ANTONIO LPEZ GUERRERO

RESUMEN Algunas terapias basadas en la multi o pluripotencia de las inapropiadamente denominadas Clulas Madre se estn llevando a cabo desde mediados del siglo pasado. La investigacin actual en terapia celular y medicina regenerativa se agrupa en dos grandes polos: la centrada en las Clulas Madre Adultas (ASC), y la que estudia los misterios de la pluripotencia de las clulas madre de origen embrionario (ESC), todava sin aplicacin biomdica debido, entre otras cosas, a la menor inversin pblica por recelos morales, que no bioticos. Entre ambos polos, podramos situar las investigaciones llevadas a cabo con clulas madre derivadas de sangre de cordn umbilical, fetales o, incluso, germinales. Tras unas breves pinceladas histricas, el presente captulo describir las caractersticas moleculares principales de las clulas madre y los avances ms significativos tanto in vitro, modelos animales o en terapias desarrolladas en humanos. Finalmente, pero no por ello menos importante, se describirn los frentes actuales de investigacin ms innovadores: en terapia celular, con o sin complemento de ingeniera gentica; la siempre polmica transferencia nuclear, mal llamada clonacin teraputica; y, por supuesto, la reprogramacin celular, el Valhala actual de la investigacin biomdica y la tcnica que ms expectativas y esperanzas parece estar suscitando entre investigadores, legisladores, medios de comunicacin y sociedad, en general. 25

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ABSTRACT There are many therapies based on multi or pluripotency of the unsuitably denominated Stem Cells that have been carried out since the mid-20th century. Current studies in cellular therapy and regenerative medicine can be grouped into two major categories. One is focused in Adult Stem Cells (ASC), the other category is focused on Embryonic Stem Cells (ESC) pluripotency mechanisms these results have not yet been used in biomedicine due, among other factors, to the less public funding as a result of moral, rather than bioethical, prejudices. In addition, other studies are based on stem cells derived from umbilical cord blood, foetuses or even germ lineage. After a historical introduction, the present chapter will describe the main molecular features of stem cells and the key scientific findings obtained both in vitro and in animal models, as well as those therapies carried out on human beings. Last, but not least, we will tackle the most innovative investigation fields currently developed: i) cellular therapy, assisted or not by genetic engineering; ii) the controversial nuclear transfer technique, inappropriately defined as therapeutic cloning and, finally, iii) cellular reprogramming, the current biomedical investigation Valhala, which represent the most promising technique for researchers, law makers, the media and society.

INTRODUCCIN Si pensamos en aquellos conceptos en la frontera entre la investigacin bsica y biomedicina aplicada, que ltimamente hayan calado profundamente a partes iguales en la sociedad y laboratorios de todo el mundo, stos sern, sin duda alguna, el de Terapia Celular y Medicina Regenerativa. A lo largo del presente captulo y, por extensin, del libro que sostiene entre sus manos, se presentarn y discutirn muchos de los aspectos moleculares y potencialmente teraputicos con base en el poder replicativo y de diferenciacin de unas clulas muy especiales; unas clulas que en Espaa fueron rebautizadas quiz ms desde un punto de vista emocional que tcnico como Clulas Madre. Tras resear alguna ancdota histrica trascendente, nos ocuparemos de los aspectos 26

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ms innovadores de la investigacin actual, detenindonos en las posibles implicaciones clnicas presentes a corto, medio y largo plazo: Terapia Celular (TC) con o sin manipulacin gentica, Transferencia Nuclear (TN) tambin llamada Clonacin Teraputica (CT) o Reprogramacin Celular (RC). De hecho, esta ltima tcnica ya ha merecido el honor de figurar por segundo ao consecutivo entre los diez hitos principales de la prestigiosa revista cientfica Science (1). Sin embargo, hasta llegar a este prado experimental tan frtil, la comunidad cientfica y las esperanzas de miles de enfermos han tenido que sortear duros escollos, como aquellos intentos de innecesaria estafa llevados a cabo por un ambicioso cientfico surcoreano, W.S. Hwang, de la Universidad Nacional de Sel. No nos merecamos sus falsos clones humanos o el abuso sistemtico de sus colaboradoras a las que, al parecer, obligaba a donar los ovocitos para saciar su hambre de notoriedad. Sea como fuere, y como sugiere el acadmico J.M. Snchez Ron en su libro Viva la Ciencia, el objetivo inminente de la mayora de las investigaciones actuales pretende dilucidar los mtodos de obtencin y mecanismos de accin de las clulas madre; un nuevo El Dorado en investigacin biomdica.

DEFINICIONES A mediados de los aos 80, quien escribe imparta, como Profesor Asociado de la Universidad Autnoma de Madrid, clases de inmunologa bsica. Al tratar el tema de la hematopoyesis, comenzaba por sealar el comn origen de todos los linajes celulares a partir de aquella entraable Clula Troncal Pluripotente, que no Madre, en sintona con la denominacin ofrecida por nuestros pases vecinos Cellules Souches, Stammzellen, Clulas Estaminais, Cellule Staminali o, por supuesto, Stem Cells. Aunque no he podido encontrar una fecha precisa, la sustitucin del trmino troncal por madre empez a asentarse mediticamente, al parecer, a mediados de la pasada dcada, cuando comenzaron a hacerse eco en nuestro pas las investigaciones de los mejores laboratorios del mundo sobre cultivos de clulas extrados de fetos y cordn umbilical para regeneracin de tejidos. Algunos diarios, ante el potencial curativo milagroso de estos nuevos cultivos llegaron a 27

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lanzar titulares como Los cientficos crean la clula filosofal (La Vanguardia, 6 noviembre 1998) (Figura 1).

FIGURA 1. Agregados celulares formados por clulas mesenquimales aisladas de miocardio humano. Fuente: M. Gonzlez y A. Bernad.

A pesar de que la 23 edicin de la Real Academia Espaola (2005) recoge el calificativo de madre, junto a troncal para estos tipos celulares, muchos son los cientficos que se resisten a sucumbir a tan amorosa acepcin. No obstante, y si se me permite, continuar utilizando el trmino ms popular de madre para referirme a estas peculiares entidades biolgicas (2, 3). Qu es realmente una clula madre?, cuntos tipos existen?, qu potencial biolgico y teraputico tienen? Bsicamente, se puede definir una clula madre por sus tres caractersticas principales: i) puede dividirse dando lugar a nuevas copias de s misma; ii) puede diferenciarse bajo ciertas condiciones fisiolgicas o experimentales hacia otros tipos y linajes celulares, y iii) puede acabar colonizando y originando nuevos 28

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tejidos y rganos. As, y partiendo del cigoto la clula madre totipotente por excelencia, a medida que avanzamos a travs del desarrollo embrionario y fetal hasta conseguir un individuo adulto, la capacidad para cumplir las tres condiciones anteriores disminuye y, por ello, se hablar de clulas toti, pluri, multi o, finalmente, unipotentes. Dicho esto, y considerando el origen celular ltimo, podramos agrupar toda esta escala de posibilidades en dos grandes bloques: Clulas Madre Embrionarias o ESC (Embryonic Stem Cells) procedentes, esencial aunque no nicamente, de la Masa Celular Interna (MCI) del blastocisto, y Clulas Madre Adultas o ASC (Adult Stem Cells), las cuales, por ejemplo, tendran la funcin de reparacin de tejidos daados o de renovacin celular fisiolgica (2-4). Entre ambos extremos, un abanico de flexibilidad se abre con otros tipos clulas: fetales, germinales o las tambin famosas clulas madre procedentes de Sangre de Cordn Umbilical (SCU), de las que tambin hablaremos. Actualmente, se est evaluando el potencial teraputico de determinadas clulas procedentes de lquido amnitico (5). ALGUNA PINCELADA HISTRICA Un posible arranque en TC podramos situarlo a mediados del siglo XVII: R. Lower, mdico de la corte de Luis XIV, experiment, en 1665, con transfusiones de sangre en perros, y J. B. Denis (1667) hizo lo propio en Pars desde corderos a humanos, detallando lo que constituira la primera descripcin del proceso (6). Un brusco salto hasta 1919 nos situara en el origen del concepto de clula troncal (7). Tres dcadas ms tarde, J. Hammond (8) lleva a cabo la primera descripcin del mtodo para mantener embriones de ratn en cultivo. En todo caso, y sin duda alguna, el principal antecedente del desarrollo posterior de la TC fueron los trabajos pioneros de E. D. Thomas, que arrancan en 1957 (9) y finalizan con el establecimiento del trasplante de mdula sea como la opcin teraputica de eleccin para el tratamiento de muchos desrdenes neoplsicos humanos; su trayectoria le vali el Premio Nobel de Fisiologa y Medicina en 1990. Estos resultados constituyen la primera evidencia slida de la existencia de clulas madre pluripotentes en el organismo de mamferos adultos con gran capacidad reparadora. 29

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En 1981, M. J. Evans (10) junto a M. H. Kaufman obtuvieron ESC de ratn, y dos aos ms tarde, J. McGrath y D. Solter desarrollaron una nueva tcnica mediante microciruga para extraer el proncleo del cigoto y fusin celular mediada por virus en experimentos de TN (4, 5). Por otro lado, en 1996 se produce el nacimiento en el Instituto Roslin de Edimburgo de dos ovejas por TN: el grupo de K.H.S. Campbell obtiene clones por transferencia de clulas embrionarias en cultivo e I. Wilmut crea a Dolly a partir de una clula de ubre de su ovina madre (11). Finalmente, En 1998 varios grupos de todo el mundo describen un mtodo para aislar, cultivar y obtener lneas de ESC humanas (10, 12, 13). A partir de este punto, los acontecimientos se suceden vertiginosamente hasta vislumbrarse en la actualidad un nuevo horizonte en torno a unas simples siglas, iPS (induced Pluripotential Stem cells), y la denominada reprogramacin celular. MOLCULAS IMPLICADAS La transferencia del conocimiento bsico al clnico es un proceso que debe ser necesariamente lento, aunque firme. En palabras de J.C. Izpisa, Director del Centro de Investigacin en Medicina Regenerativa de Barcelona, estamos intentando correr antes de aprender a gatear. Tanto el conocimiento de los genes implicados en replicacin y diferenciacin celular, como su regulacin transcripcional y epigentica se me antojan fundamentales para poder integrar en terapias seguras todos los resultados prometedores que actualmente estn dndose a conocer en modelos celulares y animales. No obstante, la presin social, con demanda inmediata de terapias para nuestros seres queridos, podra llevar a la precipitacin meditica de algunos resultados bsicos, si no al fraude (a las pruebas, tras lo ocurrido en Sel, me remito). Un ejemplo cercano a la estafa y buhonera lo encontramos en China, donde hace unos aos H. Hongyun, del Sanatorio de Trabajadores de Xishan, en Pekn, salt a los medios de masas por su ofrecimiento, a partir de 20.000 dlares, para tratar lesiones medulares y otras neuropatologas, como la Esclerosis Lateral Amiotrfica (ELA), a travs de clulas madre procedentes de fetos (de hasta ocho meses!). Poco parecen importarle a Hongyun los protocolos internacionales de experimentacin en humanos. La desesperacin de 30

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muchos pacientes con daos medulares severos supera cualquiera mala praxis mdica. Algunos de estos pacientes, incluso, llegaron a afirmar encantados, tras la operacin, que podan mover alguna falange de la mano!... Pero sin duda, y no renuncio a volver a comentarlo siquiera sucintamente, uno de los mayores fraudes de la historia quiz el mayor junto al famoso Hombre de Piltdown lo protagoniz alguien que no lo necesitaba. W.S. Hwang era, y probablemente lo siga siendo, uno de los mayores expertos mundiales en clulas madre embrionarias y clonacin. Dos publicaciones en Science aparecidas con apenas un ao de diferencia mostraban la clonacin de embriones humanos por la tcnica de TN (3, 14). De hecho, el artculo de mayo del 2005 zanj la carrera contra otros laboratorios por la clonacin humana y, de paso, pareca allanar la pista hacia la Nobel Foundation. En dicho artculo, a partir de 11 pacientes con diferentes patologas y mediante TN se establecieron, supuestamente, otras tantas lneas celulares (NT-hESC-2 hasta NThESC-12) con caractersticas de ESC. No obstante, lo que hubiera supuesto un paso de gigante para la obtencin de clulas madre pluripotentes derivadas de adultas del propio paciente, acab revelndose como simples embriones sin manipular. Ni ms, ni menos. Seis millones de dlares en paradero desconocido y unas becarias supuestamente obligadas a ceder sus vulos acabaron por destronar al cientfico surcoreano. De poco sirvi que su grupo publicara, poco despus y ahora s, la clonacin de varias lobas, Snuwolf y Snuwolffy (15). Lejos del delito, la prudencia nos debera indicar siempre el camino firme, lejos de la seduccin de las sirenas de los grandes titulares mediticos. Ciertamente, de muchos fracasos, que no errores, se pueden revelar las claves de futuros xitos: del triste intento de curar, en 1983, al joven de 13 aos, D. Vetter, de su Inmunodeficiencia Combinada Severa con mdula sea de su hermana muri de la infeccin viral que se le transmiti durante el tratamiento, se lleg a la terapia gnica mediante retrovirus efectiva en otros casos posteriores de inmunodeficiencia, como la denominada ADA (Adenosina Desaminasa) (16). No obstante, cuando nos referimos a medicina regenerativa, a manipulacin y tratamientos con clulas madre pluri o multipotentes, no debemos pasar por alto que la frontera que nos puede transportar desde la divisin y posterior diferenciacin celular hasta el descontrol de la proliferacin, 31

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con sus vertientes siniestras conocidas, no estn bien definidas. En este sentido seguimos, como se ha sealado, apenas gateando, a pesar de la caracterizacin de posibles nuevos genes mediante tcnicas de microarrays, por ejemplo implicados en replicacin, diferenciacin y maduracin celular que, incluso, estn siendo ya utilizados con xito en modelos animales. Por supuesto, no pretendo elaborar una lista exhaustiva de todos los factores y marcadores de divisin, maduracin o diferenciacin celular. S mencionar brevemente algunos de los ms estudiados en clulas madre, comenzando por aquellos factores que recientemente han trascendido ms all de las revistas cientficas gracias a su implicacin en RC, tcnica que ms tarde volveremos a tratar. Tal y como seala J.A. Thomson, en su artculo sobre la induccin de clulas madre derivadas de somticas humanas (17), aunque el desarrollo embrionario de mamferos sigue un orden temporal muy estricto, el hecho de que estos pasos estn dictados por eventos epigenticos ms que genticos permitiran la reversin del proceso mediante el efecto transactivador de diferentes factores, tal y como qued de manifiesto con Dolly. Es ms, la bsqueda de tales factores ha permitido reprogramar clulas adultas sin la necesidad de TN. Cuatro ellos que acabaron denominndose los cuatro magnficos, Oct4, Sox2, Klf4 y c-Myc, lograron desdiferenciar y reprogramar fibroblastos humanos adultos (18). Oct4 (Pou5f1), junto a Nanog y Sox2, est ntimamente involucrado en el mantenimiento del estado pluripotente de las ESC y del embrin temprano, mientras que Klf4 (Factor 4 similar a Krppel), junto a cMyc, estara implicado en el mantenimiento en cultivo del fenotipo de las ESC y su rpida proliferacin, evitando la accin de factores antioncognicos como p53, el cual podra, entre otras opciones, unirse al promotor de Nanog e inhibir su expresin. Al propio grupo de Yamanaka, de la Universidad de Kyoto y autor del trabajo, le sorprendi, en sus estudios iniciales con ratones, que Nanog fuera prescindible para el mantenimiento del estado pluripotente de las clulas reprogramadas. De hecho, cuando en 2003 el escocs I. Chambers (Universidad de Edimburgo) describa la clonacin de dicho factor hometico en Cell (19), lo haca completamente convencido de que era la llave principal del mantenimiento y virtual inmortalidad en cultivo de las ESC. Es ms, en un arranque patritico recurri a la leyenda Tir na ng pas de la 32

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eterna juventud, en la mitologa celta para su denominacin. Por otra parte, y en el caso de c-Myc, adems de estar implicado en ciertos procesos de tumorognesis, poda causar muerte o diferenciacin de las ESC humanas, por lo que se buscaron nuevas combinaciones genticas para la reprogramacin: Oct4, Sox2, Nanog y Lin28 otros marcadores de ESC indiferenciadas. Recientemente, investigadores del Instituto Max Planck de Munster y de la Escuela Tcnica Superior de Aquisgrn, en Alemania, han conseguido clulas iPS murinas utilizando nicamente dos factores, Oct4 junto a Klf4 o c-Myc (20), aunque con truco: se utiliz una poblacin celular neuronal que expresaba Sox2 de forma endgena. Abandonando hasta un posterior apartado la RC y centrndonos en los procesos reguladores, activadores o inhibidores que rodean a las clulas madre, otros muchos genes han de ser tomados en cuenta (1, 4, 21). Aunque injustamente no podr mencionarlos a todos, algunos de los factores de mantenimiento de la pluripotencialidad en ESC analizados y caracterizados inicialmente en ratn son: Ecat1, Dppa5/ESG1, Fbxo15, Eras, Dnmt31, Ecat8, Gdf3, Sox15, Dppa4, Dppa2, Fth117, Sal14, Rex1, Utf1, Tcl1, Dppa3, -catenina, Stat3, Grb2 (21), los cuales engrosaran una larga lista con otros miembros tales como Piwi (Hiwi en humanos), Hes-1, Hif, FoxD3, Eras, Rex1, Utf1, Pax3, Piwi, Pumilio o Bam. La caracterizacin de los diferentes precursores pluri o multipotenciales adultos se suele llevar a cabo, aunque no exclusivamente, a travs de la identificacin de los denominados Marcadores de Superficie o Grupos de Diferenciacin (CD; Cluster of Differentiation) por supuesto, tambin nos encontramos marcadores especficos en ESC, tales como CD9, CD24 o CD133, entre otros (4). Si bien todos los precursores celulares neuronales, musculares, epiteliales o las polmicas y controvertidas MAPC (Multipotent Adult Progenitor Cells), de las que ms adelante hablaremos (22), entre otras muestran sus marcadores especficos, a modo de ejemplo nos centraremos en dos tipos especficos: las Clulas Madre Hematopoyticas (HSC; Hematopoietic Stem Cells) y las Mesenquimales (MSC; Mesenchymal Stem Cells). Cuando hablamos de HSC mdula sea, sangre perifrica o de cordn umbilical, hacamos referencia al antgeno CD34 aunque, posteriormente, se han ido identificando fenotipos ms variados dependiendo del estado de diferenciacin, 33

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como CD133 clulas inmaduras que pueden carecer incluso de CD34, CD117/c-kit, CD38 y CD45. HSC con alta actividad de autorrenovacin seran, adems, VEGFR-2+ (Receptor tipo 2 del Factor de Crecimiento del Endotelio Vascular). Adems de las HSC, otro tipo celular con creciente inters en investigacin, las MSC, constituyeron las primeras clulas multipotentes no hematopoyticas aisladas y caracterizadas de mdula sea (Figura 2). Tienen aspecto fibroblstico en cultivo

FIGURA 2. Clulas madre mesenquimales de mdula sea humana sometidas a diferenciacin adipognica y teidas con Oil red O. Fuente: M. Gonzlez y A. Bernad.

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y gran adherencia al plstico. Pueden identificarse a partir de una serie de marcadores especficos cuando se analizan en su conjunto, como CD29, CD44, CD71, CD90, CD105 y CD106 (VCAM-1), adems de SH2, SH3 o SH4. Por otra parte, no expresaran CD45, CD34, CD11 o CD14. Aparte de colaborar con el mantenimiento y expansin de las HSC en mdula sea o en SCU, las MSC podrn diferenciarse, en presencia de los factores adecuados, hacia osteoblastos, mioblastos o condroblastos, entre otros tipos celulares. TERAPIA CELULAR En la actualidad ya existen diferentes tratamientos en humanos, adems del trasplante de mdula sea o el de piel artificial sobre grandes quemados, que dependen del potencial de las clulas madre, como hepticos, traumatolgicos, del epitelio corneal o de implantacin de condrocitos. En breve, esta lista podra ampliarse con terapia pulmonar, del Sistema Nervioso Central (SNC) o diabetes, por ejemplo. Por otra parte y desde 2003, las clulas madre utilizadas en terapias estn siendo consideradas como medicamento por la reciente legislacin al respecto, siempre y cuando para su obtencin sea necesaria una manipulacin experimental sustancial para diferenciarlo del trasplante de tejidos u rganos. An sin profundizar en aspectos tan importantes como los mtodos de obtencin de todos los tipos celulares embrionarios, fetales o adultos o las connotaciones bioticas subyacentes, a continuacin se describirn algunos de los logros ms destacados, cerca o lejos de la poyata, sobre terapia celular. En primer lugar, quera sealar que, como podra parecer lgico, la falta de connotaciones ticas en realidad religiosas ha hecho avanzar claramente a la investigacin y terapias con ASC en detrimento de los estudios con embriones. No obstante, ambos frentes son necesarios si queremos apostar por el desarrollo pleno del potencial de uno u otro sistema. Cada uno de ellos, como veremos, presenta aspectos que destacan sobre el otro, al mismo tiempo que desventajas por subsanar. Por ejemplo, al comparar las ESC con las ASC observamos que, en cultivo, las primeras crecen con mayor facilidad, aunque en modelos animales pueden generar tumores recientemente se ha observado cierta inesta35

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bilidad genmica en ESC humanas (hESC) basadas, principalmente, en la amplificacin de un segmento gnico en la regin cromosmica 20q11.21 (23). No obstante, dicho potencial tumorognico podra minimizarse a travs de los estudios que se estn llevando a cabo. En general, una clula ES podra ser capaz de generar ms de 200 tipos celulares diferentes pertenecientes a todas las capas germinales: endoteliales, hematopoyticas, osteoclastos, musculares, neuronales, adipocitos, epidrmicas... Por otra parte, las ASC parten, como se ha indicado, con el beneplcito y consenso de todas las sensibilidades sociales. Pueden ser obtenidas directamente de un gran nmero de tejidos adultos incluyendo a las derivadas de SCU sin que medie embrin alguno. Sin embargo, su cultivo in vitro es ms tedioso, lento y, tras largo tiempo, puede originar degeneracin cromosmica (2-4, 24). Adems, con polmica o sin ella, parece bastante claro que la plasticidad, pluripotencia, est bastante ms restringida que en el caso de las ESC y son clulas que han envejecido con el individuo donante. Debido a que el trmino clula madre es relativamente reciente, se tiende a asociar su uso en clnica a potenciales tratamientos innovadores sin considerar, por ejemplo, que ya en la dcada de los 50 del siglo pasado tuvo lugar la primera infusin de suspensin de mdula sea alognica en un paciente con leucemia. Un trasplante con ms xito hasta 20 meses de supervivencia se produjo en 1963, mientras que la primera transfusin de clulas de cordn umbilical se produjo en 1972 (25). En los ltimos 15 aos, uno de los grandes avances con HSC lo ha constituido la posibilidad de movilizarlas desde la mdula sea a sangre perifrica, hasta constituirse en la opcin clnica fundamental, en detrimento del trasplante de mdula sea convencional. La terapia celular ya ha curado a animales en modelos de enfermedad humana como cncer, Parkinson, cardiopatas o traumas de mdula espinal, aunque se siguen sin conseguir los efectos deseados en ensayos humanos (Figura 3). Aqu, las patologas y enfermedades pueden ser mucho ms complejas que las simulaciones en modelos animales. Factores ambientales diversos, como edad, dieta, metabolismo, estilo de vida o, por qu no, estrs, adems de los genticos, siempre complejos, pueden influir y modificar las posibilidades de xito de las terapias. 36

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FIGURA 3. Los estudios en modelo de gran animal, previos a la aplicacin humana de clulas madre, son de gran inters para descartar efectos adversos, definir dosis celulares y poner a punto tanto los procedimientos de cultivo como los quirrgicos. La imagen corresponde a ciruga en un equino llevada a cabo en el Hospital Clnico Veterinario de la Universidad Autnoma de Barcelona, en el contexto de un estudio orientado a la regeneracin del cartlago articular.

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APLICACIONES E INNOVACIN Las aplicaciones potenciales de las clulas madre en terapias presentes y futuras podramos resumirlas como: i) Terapia celular estndar para conseguir la diferenciacin de ASC y posterior integracin y regeneracin/reparacin de tejidos daados ya se llevan a cabo tratamientos con HSC, MSC y derivadas de SCU, con la obtencin, entre otros, de tejido muscular, seo o epitelial, adems de la regeneracin celular sangunea. ii) Terapia celular y modificacin gentica, a caballo entre la anterior y la terapia gnica donde, al mismo tiempo que se reconstituye un tejido daado, se puede aportar la ventaja de la ingeniera molecular para, por ejemplo, suplementar con la expresin de algn factor que ayude al paciente como las terapias con HSC modificadas genticamente para tratamientos de las inmunodeficiencias severas sealadas anteriormente. En este contexto querra mencionar, al menos, el experimento ya clsico realizado por el grupo de R. Jaenisch (Instituto Whitehead de Investigaciones Biomdicas, Cambridge, EE.UU.) y publicado en Cell (26) donde, mediante recombinacin gentica homloga en ASC se pudo recuperar el fenotipo salvaje de ratones que partan con la mutacin del gen Rag2, causante de una inmunodeficiencia grave. iii) Clonacin en animales, en su acepcin ms literal, o como herramienta de generacin de embriones (TN) para la posterior obtencin de ESC. iv) Reprogramacin celular; la quinta esencia del desarrollo cientfico al servicio de la biomedicina. Tal y como ya se ha indicado, una hipottica terapia con clulas iPS ofrecera la pluripotencialidad de las ESC sin abandonar el contexto ASC, con todo lo que ello, desde el punto de vista cientfico y social, representara para los futuros tratamientos humanos autlogos. INNOVACIN CON ESC Tal y como se ha comentado, hoy por hoy no existen terapias celulares regladas en humanos que tengan como base a las ESC aunque ya se estn ultimando los protocolos para llevar a cabo los primeros ensayos clnicos en pacientes con dao medular. No obstante, se est avanzando mucho en modelos animales (Figura 4), en investigacin bsica celular y molecular y en el control del poder transformador de 38

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FIGURA 4. Proceso de diferenciacin desde una clula madre embrionaria de ratn hasta un cardiomiocito. El proceso comienza con la formacin de un agregado celular, o cuerpo embrionario (fotografa superior izquierda), en el que se simula la formacin de un embrin. Ms tarde, y a medida que crecen, las clulas se van diferenciando a diversos tejidos. En las siguientes fotografas podemos observar esta capa de clulas diferenciadas a cardiomiocitos que presentaban latido espontneo (fotografa superior, medio), con tincin especfica para la protena cardiaca Troponina (fotografa inferior, izquierda) y para los ncleos (fotografa inferior, medio). En la fotografa derecha podemos observar las imgenes superpuestas de ambas tinciones. Fuente: A. Izarra y A. Bernad.

estas clulas un ejemplo reciente lo constituyen las ratas parapljicas que se estn curando con tratamiento de neuronas derivadas de hESC, llevado a cabo en el Centro de Investigacin Prncipe Felipe de Valencia (27, 28). Mientras tanto y en Espaa, se han estructurado Redes de Investigacin, con centros de referencia principalmente en Andaluca, Catalua y Comunidad Valenciana. Entre los proyectos que las correspondientes Administraciones han considerado y aprobado estn la TN y la creacin de embriones quimera entre ncleos humanos y citoplasma de ratn, tal y como solicit el equipo liderado por Izpisa. Enfermedades de calado social tan profundo como diabetes, Parkinson o diferentes tipos de cnceres estn sobre la poyata. Uno de los inconvenientes que se pretende solucionar en la utilizacin de ESC es su mayor capacidad de inducir tumores (Figura 5). En este sentido, la diferenciacin celular completa, partiendo de una poblacin homognea, pura, permitira evitar que una subpoblacin permaneciera en un estadio ms indiferenciado y, por lo tanto, con potencial de seguir dividindose y escapando al control de replicacin. Segn la opinin generalizada entre investigadores del campo, ser la diabetes una de las primeras enfermedades cruciales posiblemente 39

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FIGURA 5. Clulas madre embrionarias de ratn modificadas para sobreexpresar la protena verde fluorescente (EGFP), junto con microRNAs de inters en la diferenciacin a linaje cardiovascular. Fuente: A. Izarra y A. Bernad.

tratadas con terapias basadas en ESC. Los intentos de generar islotes de Langerhans funcionales productores de insulina para trasplantes tendrn que considerar la amenaza autoinmune que subyace en la diabetes tipo I, adems de los problemas inherentes a la histocompatibilidad. En este mismo sentido, proyectos de TN han sido aprobados en Reino Unido a propuesta de la Universidad de Newcastle con pacientes diabticos. Sin embargo, tras la irrupcin de la RC, como ya se ha sealado, el foco de investigacin se est escorando hacia esta ltima posibilidad. Como acabamos de ver, una posibilidad que algunos pases contemplan consiste en la creacin de embriones quimricos procedentes de ovocitos enucleados y ncleos de distintas especies. Existen estudios con los binomios vaca-humano con el visto bueno de la Autoridad para la Fecundacin y Embriologa Humana, HFEA, de Reino Unido, ratn-humano o conejo-humano, si bien datos recientes apuntan a pro40

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fundas alteraciones epigenticas que podran dificultar esta opcin. En todos estos casos, donde el hbrido tendra un 99% de material gentico procedente del ncleo y algo menos del 1% de ADN mitocondrial, el producto quimrico es destruido a los 14 das de su obtencin. Estos proyectos, no exentos de polmica, que persiguen prescindir de las donaciones de ovocitos humanos no exentas de dolor y peligro, podran beneficiarse de las nuevas posibilidades de obtencin de clulas germinales a partir de ESC (29). Adems de las ESC derivadas de la MCI, otras fuentes de clulas madre pluripotentes las encontraramos en estadios embrionarios anteriores, mrula o embriones detenidos a partir de dos blastmeros, o tejidos posteriores de origen extraembrionario (amnios, por ejemplo). Estas y otras opciones buscan minimizar las connotaciones religiosas que supone el tener que destruir embriones en investigacin: utilizar blastmeros, como se acaba de mencionar, respetando el resto del embrin, o clulas derivadas de embriones no funcionales (cdx2 deficientes) (30). Finalmente, con o sin recelos morales previsibles, tanto la Ley Espaola (14/2007) de Investigaciones Biomdicas (LIB) segn la cual el ISCIII ya ha analizado 65 proyectos con embriones humanos, como la HFEA britnica, han amparado estos primeros proyectos con embriones quimricos.

INNOVACIN CON ASC En primer lugar, querra mencionar el proyecto, todava en desarrollo, llevado a cabo por investigadores de Navarra, Salamanca y bilogos, hematlogos y cardilogos vinculados a la Red de Terapia Celular de Valladolid, sobre la recuperacin de corazones infartados a partir de ASC autlogas (31). En estos ensayos, el mecanismo ltimo que explicara la real recuperacin de los pacientes observada, sigue sin estar aclarada y no se descarta la fusin, secrecin de factores y efectos paracrinos, en vez de diferenciacin e integracin, de las clulas previamente inyectadas (32). Aunque muchos de estos tratamientos se realizan mediante la inyeccin de las clulas lejos del foco a tratar, se sigue desconociendo el mecanismo por el que dichas clulas son capaces de alcanzar rganos diana distantes (33). Esto parece sugerir que, quiz, 41

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ms que especie-especficas, las clulas utilizadas en terapias celulares podran ser rgano-especficas. Otro proyecto destacado y todava en marcha actualmente en ensayos clnicos avanzados Fase III con gran nmero de pacientes est siendo coordinado por el grupo de D. Garca Olmo, director de la Unidad de Terapia Celular del hospital universitario madrileo La Paz y en colaboracin con la empresa biotecnolgica Cellerix (ver captulo 7). Mediante liposuccin efectuada directamente al paciente, se obtuvieron hasta 400.000 clulas AdSC (en este caso, Adipose-derived Stem Cells) por mililitro, capaces de favorecer la curacin de fstulas perianales (34). Desde el Instituto de Biomedicina de Sevilla, Hospital Universitario Virgen del Roco, el equipo de J. Lpez Barneo fue pionero en el anlisis de clulas madre localizadas en el cuello cerca de la bifurcacin de la cartida, susceptibles de diferenciarse en clulas productoras de dopamina, esencial si se pretende desarrollar un tratamiento contra el Parkinson (35). Por otro lado, en el interior del cerebro humano adulto, un equipo de investigadores del centro SUNY Stony Brook, de la Universidad de Nueva York, ha logrado detectar clulas madre directamente del hipocampo, lo que podra suponer un paso firme en la deteccin temprana de algunas enfermedades neurolgicas (36). Sin abandonar el sistema nervioso, y desde el Departamento de Biologa Celular de la Universidad de Valencia, el grupo de J.M. Garca Verdugo representa un frente de investigacin destacado en neurognesis que ha hecho cambiar la imagen esttica de nuestra estructura neuronal: se ha demostrado la capacidad migratoria de neuroblastos originados en la zona subventricular que pueden desplazarse desde las paredes de los ventrculos laterales hasta el bulbo olfatorio. Estudiar los mecanismos moleculares de esta migracin y la capacidad de orientacin celular en tan larga distancia es un campo en constante desarrollo (37) (Figura 6). Igualmente, en la actualidad se siguen llevando a cabo, tras los resultados optimistas realizados en modelos animales y coordinados desde el Instituto de Neurociencias de la Universidad Miguel Hernndez (UMH; CSIC), ensayos clnicos (Fase I) en enfermos de ELA mediante el autotrasplante de clulas mononucleadas de mdula sea a mdula espinal (38). De igual modo, la Esclerosis Mltiple est siendo objeto de ensayos clnicos: investigadores de la Universidad de 42

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FIGURA 6. Lnea Fetal Humana inmortalizada derivada de Mesencfalo Ventral (hVMs) con propiedades multipotenciales y capaz de diferenciarse a los tres tipos de linajes neurales: Neuronas y Oligodendrocitos. En la imagen se observan dichas clulas tras siete das de diferenciacin, con medio Bradford, generando neuronas predominantemente dopaminrgicas, TH+ (Tirosina Hidroxilasa). En rojo, un marcador neuronal; verde, TH y, en azul, un intercalante del ADN: Hoescht. Fuente: Laboratorio de AlbertoMartnez Serrano.

Northwestern (Chicago, EE.UU.) han llevado a cabo una experiencia con 21 pacientes en fase inicial recurrente-remitente de la enfermedad (39) donde, tras varias sesiones de tratamiento con HSC, se vieron mejoras en todos los test realizados, funcin cognitiva y calidad de vida, en general. Dando un pequeo giro de especialidad, las ASC obtenidas de grasa usadas como complemento en el tratamiento de fracturas es una realidad clnica desde hace varios aos (Figura 7). En este sentido, uno de los ejemplos ms llamativos, si a la repercusin en prensa nos remitimos, lo constituy el tratamiento (diciembre del 2004) de una nia de siete aos quien, a causa de una cada, requiri la regeneracin craneal de unos 43

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FIGURA 7. Aplicacin del bioinjerto constituido por clulas madre autlogas expandidas con biorreactor. Se introduce en el interior de la cabeza del fmur mediante control radioscpico.

cien centmetros cuadrados; logro alcanzado a travs de su tejido seo de pelvis mezclado con ASC obtenidas de grasa de los glteos por un equipo de cirujanos alemanes coordinados por H.P. Howaldt. En este caso, la proeza teraputica vino precedida, apenas unos meses antes, por la confirmacin cientfica en fracturas de tejido seo craneal de ratones, transformando clulas de tejido adiposo en osteoblastos (40). Recientemente, aqu en Espaa, se ha conseguido otro hito de mbito mundial. Desde el Hospital Clnic de Barcelona y en colaboracin con el Politcnico de Miln, entre otras instituciones internacionales, a finales del 2008 se informaba del primer trasplante de trquea a una mujer, sin necesidad de inmunosupresin, del mundo (41). El truco?, desvestir la trquea enzimticamente de todo material molecular susceptible de ser reconocido como antgeno alognico antes de volver a revestirla con un cultivo de ASC de diferentes procedencias extradas de la propia paciente y diferenciadas a condrocitos. 44

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La infertilidad, tanto en hombres como en mujeres, constituye, tambin, un frente de investigacin presente con clulas adultas. Desde la Universidad de Tennessee (EE.UU.), investigadores coordinados por A. Bukovsky lograron que ASC de epitelio superficial de ovario humano produjeran ovocitos viables en fertilizacin in vitro (42). Ello abre una va de esperanza para la posible utilizacin de precursores propios en determinados casos de infertilidad. A mediados de 2008 tuvo lugar, en el Centro Cacereo de Ciruga de Mnima Invasin Jess Usn, el primer simposio nacional sobre terapia celular y medicina regenerativa. Si en algo coincidieron todos los cientficos all reunidos fue en sealar que, desgraciadamente, lejos quedan todava las terapias humanas efectivas contra enfermedades como Alzheimer o Parkinson, a pesar de su mximo inters social. S se ha avanzado, no obstante, en aquellas terapias en hematologa y con condrocitos, queratinocitos o clulas del limbo esclero-corneal, como tambin se indic anteriormente. En dicho congreso cacereo, se sealaron distintos estudios clnicos en desarrollo en Espaa que abundan sobre el establecimiento de la factibilidad y seguridad para la regeneracin miocrdica mediante HSC y derivadas de SCU. A propsito de seguridad, y desde hace varios aos, el grupo de A. Bernad, actualmente en el Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares de Madrid, est utilizando este sistema de MSC humanas (Figura 8) para analizar la bioseguridad de los cultivos de larga duracin. Tras sucesivos pases varios meses que nos llevaran a la postsenescencia los cultivos de hMSC muestran una clara incidencia de inestabilidad gentica. Curiosamente, cuando el cultivo se llevaba a cabo al 3% de oxgeno bastante menos que el que suelen tener los incubadores estndares de clulas, el comportamiento era mucho ms satisfactorio. Las limitaciones en cuanto a plasticidad que las ASC pueden sufrir, en comparacin con las ESC, han sido, asimismo, centro de polmica. Un artculo aparecido en Nature en 2002 (22) describa la supuesta caracterizacin de unas nuevas clulas, obtenidas en mdula sea murina, denominadas MAPC y de pluripotencia supuestamente comparables a las ESC. Por desgracia, la coordinadora de la investigacin, C. M. Verfaillie, directora del Stem Cell Institute, de la Universidad de Minnesota, acaba de ser cuestionada incluso algunos de sus colaboradores han mencionado la maldita palabra fraude, hacindonos recordar nue45

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FIGURA 8. Clulas progenitoras de mdula sea en cultivo (clulas mesenquimales). La imagen corresponde a clulas de un paciente procesadas en el Instituto de Gentica y Biologa Molecular (U. Valladolid, CSIC) durante el desarrollo de un Ensayo Clnico orientado a la regeneracin del disco intervertebral lumbar. Este ensayo, enmarcado en el Plan de Terapias Avanzadas impulsado por el Ministerio de Sanidad, se lleva a cabo en el Instituto de Terapia Regenerativa Tisular del Centro Mdico Teknon de Barcelona.

vamente el triste espectculo surcoreano. Varios expertos que han analizado los resultados concluyeron que el famoso Nature (22) contena algunos datos significativamente falsos. La propia Verfaillie habla, sospechosamente, de errores en algunas figuras. Sea como fuere, existan las MAPC murinas o no, todava no se ha encontrado algo as en humanos. Un campo de investigacin, apenas en fase incipiente pero muy prometedor, es el que concierne a los biomateriales y polmeros biodegradables como sustrato y soporte en terapia celular (4, 43, 44). Desde el Instituto de Bioingeniera de la UMH, nuevas investigaciones se estn 46

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centrando en polmeros de hidroxiapatita o fosfato triclcico, fcilmente reabsorbidos por el organismo, para posibles usos con hMSC en diversas patologas osteoarticulares (Figura 9). Lanzando la vista a un futuro ms lejano, la combinacin del fosfato triclcico con biocermicas, como la wollastonita, podra originar matrices tridimensionales. Ya no hablaramos de implantes planos. Finalmente, y aunque slo se mencione sucintamente, parece lgico sealar que, lo que hace tan especiales a las clulas madre, podra llevar un lado oscuro intrnseco. Un estudio que mereci la portada de Nature (45) sealaba la presencia de clulas madre como agentes claves en algunos tipos de cnceres, como el de mama, la leucemia o tumores

FIGURA 9. Las clulas madre cultivadas se presentan en una suspensin lquida adecuada para su supervivencia. En algunos casos pueden aplicarse directamente (infiltradas o por va intravenosa) pero en algunas situaciones conviene conformar un injerto consistente como en la ciruga orientada a regeneracin sea. En la imagen, bioinjerto constituido por clulas expandidas con el biorreactor Aastrom Replicell y grnulos de fosfato triclcico compactados con un cogulo de plasma autlogo.

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cerebrales. Desde la Universidad de Harvard (Boston, EE.UU.) se aislaron aquellas clulas posiblemente implicadas en el origen de melanomas, las cuales, adems, eran altamente resistentes a la quimioterapia. Nuevos estudios sobre la naturaleza de estas clulas permitirn la definicin de nuevas dianas moleculares.

CLULAS MADRE DERIVADAS DE SCU Las terapias celulares que derivan de la sangre de cordn umbilical cedida, tras el nacimiento, a bancos pblicos o, cada vez ms frecuentemente, privados, no suponen, en trminos absolutos, un porcentaje demasiado alto entre los tratamientos actuales. No obstante, existen ya ms de 40 enfermedades, con componentes genticos o sin ellos, para las cuales puede ser considerado apropiado este material. Un estudio multicntrico, coordinado desde Minnesota (46) ha demostrado que clulas obtenidas de SCU es la opcin ms vlida para algunos tipos de leucemias estudiado en unos 800 nios con leucemia linfoblstica o mieloide aguda en aquellos casos en los que no existan donantes de mdula sea de la misma familia. Es un hecho contrastado, aunque no del todo explicado, la menor inmunoagresividad de estas clulas tras su utilizacin en trasplantes alognicos para regeneracin de todos los linajes sanguneos. Una posible explicacin podra verificarse definitivamente en poco tiempo: segn las investigaciones del equipo de S. Querol Giner, director de los Servicios Londinenses Anthony Nolan de Cordn Umbilical expuestas durante el simposio Cellular Therapy in Hematology que tuvo lugar en Sevilla en mayo de 2008, una nueva subpoblacin de clulas reguladoras de linfocitos T, CD4/CD25/ CD45RA que coexpresa el factor Foxp3, habra sido caracterizada desde SCU. Estas clulas podran estar detrs de la mayor tolerancia tras una infusin celular. Es ms, en ensayos de proliferacin mixta de linfocitos, se desarrollaran como supresoras, abriendo una nueva va de explicacin a la menor incidencia de Reaccin de Injerto Contra Husped (GVHD, en sus siglas en ingls) observada en trasplantes de SCU (47). La congelacin de material procedente de SCU est aumentando en nuestros das. De hecho, casi la mitad de las muestras guardadas actualmente derivadas de este tejido se encuentran en bancos privados aunque, 48

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por otra parte, de los pocos ms de 8000 trasplantes con clulas de SCU registrados en todo el mundo, solo cuatro casos parecen haber sido autotrasplantes (con tejido procedente de bancos privados). Por otro lado, a la sombra de estos bancos de SCU, estn floreciendo algunas empresas que ya anuncian la posibilidad de poder congelar, a la espera de que la ley legisle este campo sin trillar, clulas tan diversas como las procedentes de sangre menstrual, dientes de leche o grasa de liposuccin. Todo un espectculo del pasen y congelen, tal y como se comenta desde la direccin de la Organizacin Nacional de Trasplantes.

CLONACIN VERDADERA Y TRANSFERENCIA NUCLEAR Segn el propio I. Wilmut ha avanzado, una de las vctimas del desarrollo de la RC ser la Transferencia Nuclear (Clonacin Teraputica). Sin embargo, actualmente la tcnica que permiti la clonacin de la oveja posiblemente ms famosa de la historia, sigue activa en muchos laboratorios dentro y fuera de nuestras fronteras. Sucintamente, en qu consiste dicha tcnica?, dnde radica el problema? Antes de entrar en estas consideraciones, querra comentar una cuestin lingstica: no est tan claro cmo denominar al producto de la transferencia de un ncleo diploide adulto a un ovocito enucleado. En este sentido, el Presidente de la Sociedad Internacional de Biotica, M. Palacios, tras comprobar la forma de obtencin, las diferencias epigenticas, ADN mitocondrial, actividad mittica o movilizacin del calcio intracelular de un embrin constituido por fecundacin verdadera y otro originado por TN, decidi llamar, a este ltimo, nuclvulo. En cualquier caso, las comisiones tico-cientficas nacionales o internacionales de aquellos pases con legislacin al respecto consideran que esta tcnica se ajusta a derecho y tica. En teora, la TN conseguira minimizar, sino eliminar completamente, dos de los mayores problemas de los trasplantes: la obtencin de la suficiente cantidad del tejido a implantar y su completa histocompatibilidad donante y receptor sern el mismo paciente. Para obtener ESC clonadas desde un individuo adulto, se extrae una de sus clulas y de ella su ncleo diploide, que se inyectar en un ovocito donado y sin ncleo (enucleado) para formar, tras estimulacin, un cigoto o algo 49

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morfolgica y funcionalmente anlogo con el que se proceder tal y como se establece para las ESC procedentes de preembriones sobrantes. El oocito en metafase II ser capaz de reprogramar al ncleo de la clula somtica hacia un estado pluripotente para comenzar el proceso de desarrollo embrionario. Solo las clulas que pierdan su memoria epigentica seguirn con el proceso proliferativo, produciendo estructuras muy similares a las embrionarias obtenidas mediante fecundacin (48). En cuanto a ejemplos significativos de TN, adems del ratn deficiente en Rag2, ya mencionado, otro trabajo muestra cmo neuronas dopaminrgicas derivadas de TN-ES fueron capaces de corregir el fenotipo de un modelo de Parkinson murino (49). Recientemente, un grupo de cientficos de la empresa californiana Stemagen Corporation, coordinados por A. French, ha conseguido lo que el surcoreano Hwang so y fingi: la obtencin de embriones humanos a partir de ncleos de clulas adultas mediante TN (50). Nuevamente, el hecho de que solo pudieran constatar la identidad gentica total en un caso y, hasta la fecha, no hayan podido obtener lneas celulares derivadas del embrin activado algo que pareca ser el plato fuerte en el montaje fantasma del cientfico de Sel, apunta claramente a las dificultades tcnicas del proceso. Uno de los obstculos tcnicos principales, la obtencin de oocitos humanos, podra pasar por la constitucin de quimeras con los problemas ya sealados, donde el ncleo humano diploide ofrecer su acervo gentico a un citoplasma procedente de otro mamfero (conejo, ratn o, incluso, elefante). Dejando a nuestra especie al margen, la clonacin de animales s ha visto en la TN un mtodo efectivo de reproduccin a la carta: adems de la pionera Dolly, otras ovejas clonadas y transgnicas (Polly) han visto cmo diferentes factores y protenas humanas factor de coagulacin IX o antitripsina alfa 1, por ejemplo con posible finalidad farmacolgica, se acumulaban en su leche mediante la conduccin del transgn deseado con el promotor de la beta-lactoglobulina. Asimismo, se han podido obtener vacas argentinas clonadas y transgnicas enriquecidas con la hormona de crecimiento bovino que producen hasta un 20% ms de leche (51). Ya han sido clonados una docena de mamferos oveja, vaca, ratn, cabra, cerdo, gato, conejo, mula, caballo, rata, perro o lobo. Sin 50

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embargo, toda tecnologa innovadora puede desarrollar su faceta ms pintoresca: desde hace poco, varias empresas en EE.UU. o en Corea se ofrecen a clonar mascotas por unas decenas de miles de euros. De hecho, a finales de enero de 2009 se anunciaba a bombo y platillo la obtencin de un nuevo perro clonado comercialmente para mitigar la pena de una familia que, por unos insignificantes 155.000 dlares, volvi a sentir la presencia de su labrador fallecido. Finalmente, la clonacin podra permitir recuperar especies extintas como el Tilacino, desaparecido desde 1936 o, recientemente, el rinoceronte blanco del norte del Congo, del que no deben quedar ms de una docena de ejemplares, si acaso. Para ello, investigadores pertenecientes a la Royal Zoological Society y la Universidad de Edimburgo, quieren mezclar clulas reprogramadas de la piel de uno de estos escasos mamferos con embriones de una especie hermana, el rinoceronte del sur, para obtener quimeras con la esperanza de que se colonice la lnea germinal.

REPROGRAMACIN CELULAR Destacada por segundo ao consecutivo por la revista Science como uno de los mayores hitos del ao, la RC supone un verdadero punto de inflexin en la biomedicina que sea de todos los tiempos o no, depender de su evolucin futura. Los antecedentes moleculares y celulares sobre diferenciacin, transdiferenciacin, desdiferenciacin y regeneracin que subyacen tras la RC ya han sido, en mayor o menor medida, tratados. A todos los efectos, dos publicaciones recientes, aparecidas prcticamente al unsono (17, 18) trazan la lnea divisoria de dichos hitos. En el primero de dichos trabajos, el prolfico grupo de la Universidad de Kioto, Japn, coordinado por S. Yamanaka quien ya destac en 2006 por la obtencin de otras clulas Pluripotentes Inducidas, iPS, en ratn (21) describe la obtencin de clulas iPS desde fibroblastos de la dermis facial de una mujer de 36 aos mediante los mismos factores que haba utilizado en ratn los ya descritos Sox2, Klf4, Oct4 y c-Myc. Tal y como se observ en el modelo murino, las clulas iPS humanas obtenidas eran equivalentes a ESC en morfologa, capacidad proliferativa, antgenos de superficie, expresin gentica, actividad telomerasa y, por supuesto, el status epigentico que determina, al fin y al cabo, el 51

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estado de desarrollo y pluripotencia que una clula tiene en un momento dado. En este sentido, estas clulas iPS demostraron plena capacidad para diferenciarse a linajes tisulares procedentes de todas las capas germinales y para originar teratomas. Sin apenas tiempo para digerir estos fantsticos resultados, desde Wisconsin, EE.UU., el grupo de J.A. Thomson se asegura su parcela de gloria al publicar, asimismo, la derivacin de clulas iPS humanas desde fibroblastos fetales. En este caso, partiendo desde una lista de posibles factores presentes en precursores mieloides de ESC, fueron acotando los candidatos hasta llegar a un cctel final de tambin cuatro genes: Oct4, Sox2, Nanog sorprendentemente ausente en el trabajo de los japoneses y Lin28, que sustituira a c-Myc sugiriendo, de este modo, un menor potencial tumorognico de la mezcla. Ambos grupos opinan, no obstante, que para futuras terapias en humanos la seguridad del cctel gentico y del vector retrovirus o lentivirus tendra que estar garantizada. Sobre esta cuestin de la posible bioseguridad, ya en el mismo nmero de Science con el artculo de Thomson, se describe la normalidad fenotpica, en un modelo de ratn de anemia falciforme, tras la obtencin y transduccin gnica de clulas iPS derivadas de piel autloga (52). Este trabajo, llevado a cabo por el equipo de R. Jaenisch es especialmente interesante por la combinacin, precisamente, de dos terapias claras del siglo XXI: la gnica, que no termina de convencer, y la celular derivada de clulas iPS. En cuanto a otro de los aspectos claves para una futura terapia en humanos, la del nmero de factores necesarios para la milagrosa transformacin celular, podemos recrearnos en el estudio coordinado por H.R. Schler descrito al principio del presente captulo (20): utilizando clulas neuronales con alta expresin endgena de Sox2, y mediante la introduccin de nicamente dos factores, Oct4 y Klf4 (o c-Myc), se consiguieron clulas iPS murinas tan plsticas como las del laboratorio de Yamanaka. De lo que no hay duda es del enorme inters cientfico y social que han generado estas investigaciones I. Wilmut ya ha anunciado su enroque desde la TN, su parcela natural, hacia esta prometedora va. Sin embargo, en este necesariamente escueto recorrido por la RC, no querra terminar sin sealar, que no describir, otro prometedor trabajo desarrollado bsicamente en nuestro pas y coordinado por uno de los principales bilogos del panorama internacional, J.C. Izpisa (53). En dicho estudio, se describe la rpida generacin de clulas iPS a partir de 52

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queratinocitos humanos. La transduccin retroviral con Oct4, Sox2, Klf4 y c-Myc (el cctel magnfico de Yamanaka) de clulas primarias, adultas, procedentes incluso de un nico pelo humano, result, al menos, 100 veces ms eficaz y el doble de rpida que la llevada a cabo con fibroblastos. De avance decidido tambin ha de considerarse la obtencin de clulas iPS, generadas de una paciente de 82 aos diagnosticada con la forma familiar de ELA, que fueron derivadas con xito hacia neuronas motoras y gla, las mismas que fallan en dicha enfermedad neurodegenerativa (54). De hecho, poco despus de estos resultados se haca pblica una relacin de lneas celulares especficas de pacientes con distintas enfermedades, como la diabetes tipo 1, distrofia muscular, Huntington, ADA o Parkinson, entre otras (55). Y esto no ha hecho ms que empezar. Mes a mes, el nmero de enfermedades con su representacin en cultivos celulares iPS crece decididamente, ofreciendo una herramienta nica para el estudio de los mecanismos moleculares subyacentes, como banco de pruebas de nuevos frmacos o para futuras correcciones de defectos genticos previas al tratamiento de pacientes con sus propias clulas. En este sentido, un trabajo publicado apenas unos das antes de haber escrito estas lneas (enero 2009), muestra la curacin de la hemofilia en un modelo de ratn, reprogramando fibroblastos mediante la insercin, con retrovirus, de tres factores (56). Sea como fuere, est o no prxima la terapia en humanos, estos nuevos avances biomdicos suponen la apuesta clnica de futuro ms prometedora y aceptada por propios y extraos. UN LTIMO COMENTARIO SOBRE LEGISLACIN No podra cerrar este breve captulo sin, al menos, destacar los firmes y prometedores pasos legislativos acontecidos en Espaa durante el ltimo lustro, y que nos han situado a la vanguardia del progresismo cientfico. Cuando hablamos de clulas madre, la normativa actual espaola se encuentra entre las ms avanzadas del mundo, siendo garantista tanto en el control de la autorizacin de los proyectos como en su seguimiento. Dos leyes han tenido la culpa: Ley 14/2006 (26 de mayo) sobre Reproduccin Humana Asistida y, sobre todo, la Ley 14/2007 53

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(3 de julio) de Investigaciones Biomdicas (LIB). Tal y como se refleja en el prembulo de esta ltima, uno de sus ejes prioritarios consiste en proteger la dignidad del ser humano respecto de las aplicaciones de la biologa y la medicina tal y como se suscribi en Oviedo el 4 de abril de 1997. La LIB permitira la utilizacin de cualquier tcnica de obtencin de clulas troncales embrionarias humanas con fines teraputicos o de investigacin que no comporte la creacin de un preembrin o de un embrin exclusivamente con este fin y en los trminos definidos en la Ley. En el mbito mundial, los polos estn bien definidos. Un curioso sentido de la defensa de la dignidad humana llev al anterior presidente de EE.UU. a secundar a Honduras y Costa Rica en la Asamblea General de la ONU, cuando el 18 de febrero de 2005 se aprob una declaracin, no vinculante, que instaba a todos los gobiernos a tomar las medidas oportunas para prohibir todo tipo de clonacin, incluyendo la TN. Por supuesto, Blgica, Reino Unido y Singapur, entre otros pases, se opusieron. Y como no poda ser de otro modo, el nuevo inquilino de la Casa Blanca ya ha realizado alguna declaracin a favor de la financiacin con dinero pblico de esta clase de proyectos, aprobando, entre otras medidas, el primer ensayo clnico con ESC. Por cierto, quienes piensen que las clulas iPS estn libres de pecado moral, debern analizar los resultados del equipo investigador de la compaa Advanced Cell Technology, con R. Lanza al frente, quienes ya han anunciado la clonacin de ratones a travs de la colonizacin de un preembrin murino por clulas reprogramadas (57). Entonces? AGRADECIMIENTOS Deseo expresar mi ms sincero agradecimiento al Dr. Antonio Bernad por la lectura y correccin del presente artculo; al Dr. Llus Orozco por sus oportunos y siempre interesantes comentarios y a los grupos de ambos investigadores, junto a los miembros del laboratorio de Alberto Martnez, por las fotografas y figuras ofrecidas para documentar el presente trabajo. Finalmente, quisiera reconocer a Daniel Contreras y a Hayleigh Stewart la ayuda prestada en la redaccin de algunos de los apartados. 54

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ABREVIATURAS ASC, Adult Stem Cells (Clula Madre Adulta); CT, Clonacin Teraputica; ELA, Esclerosis Lateral Amiotrfica; ESC, Embryonic Stem Cells (Clula Madre Embrionaria); HFEA, Human Fertilisation and Embryology Authority (Autoridad para la Fecundacin y Embriologa Humana); ISCIII, Instituto de la Salud Carlos III; HSC, Hematopoietic Stem Cells (Clulas Madre Hematopoyticas); iPS, Induced Pluripotential Stem cells (Clula Madre Pluripotente Inducida); LIB, Ley de Investigaciones Biomdicas; MAPC, Multipotent Adult Progenitor Cells (Clulas Multipotentes Adultas Progenitoras); MCI, Masa Celular Interna; MSC, Mesenchymal Stem Cells (Clulas Madre Mesenquimales); RC, Reprogramacin Celular; SCU, Sangre de Cordn Umbilical; SNC, Sistema Nervioso Central; TC, Terapia Celular; TN, Transferencia Nuclear; UMH, Universidad Miguel Hernndez (Alicante). BIBLIOGRAFA
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MADRE Y NUEVAS TERAPIAS.

UNA

VISIN GENERAL

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