PRACTICA N3 A) COLORACION DE ZIEHL NEELSEN (coloracin acido resistente o baciloscopia).

FUNDAMENTO. Es el alto contenido de lpidos en la pared celular de ciertas bacterias permite que el colorante una vez fijado por el calor no se desprende por accin de los agentes colorantes (alcohol acido ). OBJETIVOS. Diagnosticar TBC y observar BAAR en esputo.

MATERIALES: Lamina porta objetos Aplicador de madera Esputo de pacientes sospechoso de tuberculosis Colorantes: fucsina fenicada y azul de metileno Reactivos: alcohol acido Aceite de xilol , aceite de imersion Microscopio PROCEDIMIENTOS. Extender y fijar la muestra de esputo empleando un aplicador de madera. La fijacin se realiza despus que seque el extendido Cubrir con fucsina fenicada y calentar la lamina en forma suave a la llama del mechero hasta el desprendimiento de vapores , repetir esto hasta por tres veces consecutivas sin llegar a la ebullicin . Eliminar el exceso de colorante y lavar intensamente a chorro de agua Decolorar con alcohol acido hasta que no desprenda el colorante . Lavar con agua corriente y agregar gotas de azul de metileno .Dejar actuar por 1 a 2 minutos donde acta como colorante de de contraste. Lavar, secar y observar. RESULTADOS. Las observaciones se reportan como bacilos de alcohol acido resistentes (BAAR). Leucocitos polimorfos nucleares Fibras musculares.

De acuerdo con la OPS: BAAR 1-9 1-9 1-9 0 CAMPOS En 100 En 100 E1 En >100 RESULTADOS + ++ +++ INTERPRETACION Recin empieza TBC con necrosis caseosa Cavernas pulmonares , hemoptisis negativo

B) COLORACION DEL VAGO.

FUNDAMENTO. Las bacterias fusoespirales y espiroquetas comnmente no se tien con las tcnicas usuales el mtodo se basa primeramente en la impregnacin con mercurio cromo a nivel de la pared celular de dichos microorganismos y solo as se podrn teir con violeta de genciana. OBJETIVOS. Observar las bacterias que se encuentra en el sarro dentario: espiroqueta, fusoespiraladas y fusobacteria.

MATERIALES. Lamina porta objeto Palito mondadientes Mercurio cromo al 2% Colorante violeta genciana Muestra de sarro dentario Aceite de imersion Microscopio. PROCEDIMIENTO. Prepara la extensin del sarro dentario, empleando el palito mondadientes sobre la lmina porta objetos, usando una gota de solucin salina fisiolgica y la fijacin se realiza solo al ambiente. Impregnar con mercurio cromo al 2% por espacio de 3 minutos. Lavar con agua corriente. Cubrir con violeta genciana por espacio de 3 minutos. Lavar secar y observar. RESULTADOS. Esquematizar las observaciones espiroqueta, fusoespiraladas y fusobacteria.

CUESTIONARIO
1. Por qu la tincin de ZIEHL NIEHLSEN es importante para el diagnstico

clnico? Es muy til para el diagnstico de MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS Y M. LEPRAC. Debido a la gran resistencia de las Mycobacterias y actinomicetes a pesar de ser Gram positivas. Crean dificultades cuando se les intenta colorear por el mtodo Gram, debido a que ello requiere otro tipo de tcnicas de coloracin y para ello es necesaria la coloracin de ziehl neelsen o acido resistente.

2. Qu fenmeno se presenta cuando se aplica el colorante durante la tincin de

ZIEHL NIEHLSEN? Las bacterias acido alcohol resistente poseen una pared celular rica en lpidos y cidos carboxlicos (cido mico lico) que tiene la propiedad de unirse excepcionalmente fuerte al colorante 1 ero (fusila de Ziehl) cuando se usa el calor como mordiente. Una vez que se forma este complejo colorante - pared, ni siquiera la accin conjunta del cido y del alcohol pueden deshacerlo, ya que las paredes retienen el colorante en forma RESISTENTE. De esta forma se identifica las bacterias acido - resistentes.

3. Es posible reemplazar el azul de metileno por la safranina en la coloracin de ZIEHL NIEHLSEN? Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las clulas tienen una composicin qumica diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de forma diferente frente a un colorante. El colorante tie las clulas (azul de metileno, safranina) o no (nigrosina). La safranina (tambin llamada Safranina o rojo bsico 2), es un colorante biolgico, de contraste que se utiliza en la Tincin de Gram para proporcionar un color violeta ms intenso a las bacterias Gram+ y tie de rosa a las bacterias G- ; en histologa y en citologa. La safranina se usa como lquido de contraste en algunos protocolos de tincin, coloreando el ncleo celular de rojo. Tambin para detectar cartlago, mucina y grnulos de mastocitos. ZAFRANINA Composicin: Alcohol etlico de 50-----100 ml Safranina (C.I. 50240)-------1 g La preparacin se realiza en fro. En los manuales tando de histologa animal como vegetal, figuran preparados con frmulas distintas, tanto en las concentraciones de colorante como en la de disolvente (Martoja, 1970; Purvis-Collier-Walls 1966), Johansen 1968; Gabe, 1968; etc.). Nuestra experiencia es que, a concentraciones mayores de colorante, ste precipita fcilmente, siendo poco limpias las tinciones; y el exceso de colorant conlleva un exceso de coloracin. El azul de metileno se prepara en fro a distintas concentraciones dependiendo del uso que se quiera dar. Las dos ms frecuentes son: Composicin: Existen diferentes formulaciones dependiendo del libro al que se consulte, las ms usadas son las siguientes 1)Azul de metileno (C.I. 52015)--1 g Agua destilada --------------1000 ml 2)Azul de metileno (C.I. 52015)--1 g Boraz-----------------------------1g Agua destilada ---------------100 ml

4. Seale la importancia de la coloracin de ZIEHL NIEHLSEN Esta tincin es til en la deteccin de bacterias del gnero Micobacterium en muestras de esputo. La presencia de bacilos rojos sobre fondo azul constituye un diagnstico casi definitivo de tuberculosis.