Quantificao em Cromatografia
Quantificao
Determinao da concentrao de substncia (analito) numa amostra desconhecida. A concentrao de analito na amostra determinada a partir de uma relao de proporcionalidade com um padro da mesma substncia, mas de concentrao conhecida.
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Resumo da apresentao
Etapas do processo analtico; Introduo anlise quantitativa Mtodos quantitativos: (1) Mtodo de percentagem de rea (2) Mtodo de padro externo (3) Mtodo de padro interno (4) Mtodo de adio padro
Anlise Instrumental II - Introduo cromatografia
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Esta resposta do detector depende tambm da natureza do analito, o que torna obrigatria a utilizao de padres dos compostos a quantificar. Tratamento e Interpretao de resultados Elaborao do Relatrio/Concluses
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Para que a quantificao seja exequvel os picos devero estar bem resolvidos
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Vantagens:
Mtodo simples Clculos rpidos
Desvantagens:
A altura mais varivel do que a rea (menor exactido e menor preciso)
Desvantagens:
Deve -se estabelecer uma linha de base
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Mtodos quantitativos
Mtodo de percentagem de rea Mtodo de padro externo Mtodo de padro interno Mtodo de adio padro
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Percentagem de rea
Mtodo mais simples de quantificao; Fornece uma estimativa da quantidade de analito presente; Este mtodo pressupe que o detector responde de forma idntica para todos os compostos. Esta hiptese no vlida O detector UV depende da absoro da radiao O detector de ionizao de chama depende da formao de ies O detector de captura electrnica depende da afinidade electrnica
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A percentagem da rea igual a rea da substancia pela soma da rea de todos picos. Esse valor representa a percentagem do analito na amostra. Neste mtodo assume-se que: Cada componente produz um pico A resposta do detector no depende da natureza da substncia
Quantificao:
Calcula-se a rea total de todos os picos da amostra; A concentrao de um componente 1, C1 dada por: C1 (%) = ( Area 1 / Area total ) x 100
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Padro externo
Usa uma srie de compostos conhecidos (padres externos) para criar uma curva de calibrao. Grfico que relaciona os sinais de um mtodo analtico com quantidades conhecidas do analito Representao grfica dessas curvas pode ter a configurao de:
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Elaborao da Curva de calibrao Preparar solues padro com concentraes conhecidas do analito de interesse; Registar as reas dos picos para o conjunto de solues padro Determinar a curva analtica com base nos resultados obtidos Analisa-se a soluo problema, regista-se o sinal obtido e atravs da curva de calibrao determina-se a concentrao da soluo problema. Usar rigorosamente as mesmas condies experimentais!
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Nestas condies: A relao entre rea e concentrao linear em determinadas gamas de concentrao Determina-se a resposta da mistura de padres a quantificar em pelo menos 5 nveis de concentrao uniformemente distribudos pela gama de linearidade Calcula-se a equao de correlao entre rea e concentrao
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Factor de resposta
Com base no valor do factor de resposta e na rea obtida do analito com concentrao desconhecida obtm-se a concentrao.
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A escolha do padro interno depende da composio da amostra em ensaio Idealmente No dever interferir / reagir com os constituintes originais da amostra Pico bem resolvido dos demais picos dos componentes da amostra Ser quimicamente similar ao analito de interesse Tempo de reteno e concentrao prximo do analito Ser puro, inerte e no dever fazer parte da amostra
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Utiliza-se quando difcil manter inalterveis as condies operatrias Quando se empregam tcnicas pouco reprodutveis, isto , h variao da resposta nos diferentes ensaios. Na Prtica quando ocorrer alteraes no padro interno, essas alteraes dar-se-o tambm nos padres e amostra. Por isso, Fazendo a razo sinal obtido / sinal padro interno elimina-se as alteraes e Manter-se- sensivelmente proporcional s concentraes
A concentrao do padro interno no necessita de ser conhecida com exactido, mas deve ser rigorosamente a mesma para todas as solues padro e amostras
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As curvas de calibrao so traadas adoptando para ordenadas as razes de sinais, e para as abcissas os valores das concentraes.
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Desvantagens:
Em amostras complexas, a seleco do padro interno separvel dos demais componentes pode ser extremamente difcil
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Porm, pode-se determinar a concentrao de um analito desconhecido usando apenas um padro interno e um controlo de concentrao conhecida empregando o factor de resposta bastando para isso empregar as frmulas:
O IRF indica-nos o erro associado ao processo Quanto mais prximo de 1 for, menos erros esto inerentes ao processo , e como tal mais fidedigna a anlise quantitativa
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Prepara-se uma soluo contendo determinada quantidade da amostra problema. Uma mesma quantidade de amostra problema adicionada a todas as solues contendo padres.
A todos os bales excepto em um adicionar amostra volumes crescentes de soluo padro. Completar com solvente o volume dos bales e fazer a leitura das solues. Construir um grfico com os sinais obtidos em funo das quantidades conhecidas do analito (nos padres)
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O ponto onde a recta corta o eixo das ordenadas corresponde rea do pico da substncia a ser determinada, sem qualquer adio do padro A extrapolao da recta define, no eixo das abcissas, a concentrao da substncia na amostra analisada
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GC detectores (cont.)
Detectores Usados em Cromatografia gasosa Detector de Condutividade Trmica (TCD) Detector de Ionizao por Chama (FID) Detector de Azoto-Fsforo (NPD) Detector de Captura Electrnica (ECD) Detector de Foto-Ionizao (PID) Detector de Condutividade Electroltica (ELCD) Detector de Fotometria de Chama (FPD) Detector de Descarga Pulsada (PDD) Detector de Espectrometria de Massa (MS) Pesquisar a aplicabilidade de cada um dos detectores supracitados!
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Fim!
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