Previo 2 1.- Como se dividen los microorganismos de acuerdo a su temperatura? Criofilo mesofilo y termofilo 2.

- Que es un microorganismo Crifilo, Mesfilo y Termfilo? Las bacterias crofilas son aquellas que crecen a temperaturas bajo cero las mesofilas son aquellas que crecen a temperatura ambiente y las termfilas son las que crecen a altas temperaturas 3.- En que consiste la esterilizacin? La esterilizacin es el proceso de eliminacin de toda forma de vida, incluidas las esporas. Es un trmino absoluto que implica prdida de la viabilidad o eliminacin de todos los microorganismos contenidos en un objeto o sustancia, acondicionado de tal modo que impida su posterior contaminacin. 4.- Cuntos mtodos existen de esterilizacin y en que consiste cada uno de ellos? Existen varios mtodos de esterilizacin Mtodos fsicos Calor hmedo (en autoclave de vapor) Calor seco (en horno de esterilizacin) Radiacin gamma

Mtodos qumicos xido de etileno perxido de hidrgeno

5.-

Qu

mtodos

utilizara

para

las

formas

vegetativas

esporuladas

de

microorganismos? Tindalizacin: (esterilizacin intermitente) consiste en someter el producto a

calentamientos intermitentes entre 56 y 100C durante 30 minutos con lo que se asegura destruir las formas vegetativas. En los intervalos se mantiene a temperatura ambiente o a 37C, las esporas germinan y lasbacterias resultantes se hacen ms sensibles al calentamiento posterior.

6.- Cmo eliminara a hongos y levaduras de superficies, as como de alimentos y agua? la utilizacin de antispticos es muy usada para la eliminacin de este tipo de microorganismos adems de la utilizacin de temperatura (frio o calor) que no permita su

desarrollo; aunque la ultrafiltracin puede ser usada en agua ya que el tamao de las molculas es de un tamao que esta filtracin es suficiente para ser retiradas del agua 7.- Qu mtodos de esterilizacin utilizara para soluciones termolbiles? La filtracin seria un mtodo muy efectivo para las soluciones de tipo termolbiles ya que este mtodo no necesita variacin en su temperatura. 8.- En un laboratorio de microbiologa que tipos de equipos cree usted son necesarios para llevar a cabo una buena esterilizacin de materiales y medios de cultivo? Un auto clave. 9.- Como se lleva a cabo la esterilizacin qumica y la radiacin y donde se recomienda? Agentes Qumicos. Los agentes qumicos como el xido e etileno, formaldehdo o glutaraldehdo reaccionan con gran facilidad con diferentes grupos funcionales de los cidos nucleicos y protenas alquilando estos radicales esenciales. a) xido de etileno. Es un gas inflamable y potencialmente explosivo, muy penetrante que incativa microorganismos sustituyendo tomos de hidrgeno lbiles por otros grupos como hidroxilos, carboxilos, etc. El material se expone a esterilizar a un 5-10% de xido de etileno en dixido de carbono a 50-60 en condiciones de humedad controlada durante 4 a 6 horas. Es necesario someterlo despus a un perodo de aireacin debido a su carcter mutegnico. Es un agente efectivo en la esterilizacin de material termolbil como prtesis, catteres, etc. b) Formol o formaldehdo. Es un gas fcilmente soluble en agua que se utiliza al 40% (formalina). Usado en forma gaseosa y en cmara cerrada se emplea en la esterilizacin hospitalaria y en la industria farmacutica. Tambin es muy utilizado como desinfectante ambiental de salas altamente contaminadas que una vez tratadas deben airearse. c) Glutaraldehdo. S emplea sumergiendo el material limpio en una solucin al 2%, se emplea sobre todo en la esterilizacin de instrumentos pticos y los utilizados en terapia respiratoria. Radiaciones a) Luz UV: es absorbida a una longitud de onda de 240 a 280 nm por cidos nucleicos causando daos genticos alterando las bases. Se la utiliza en la preparacin de vacunas, cabinas de seguridad biolgica, lugares de trabajo como mesadas de laboratorios, est. b) Radiaciones ionizantes: actan lesionando cidos nucleicos. Se la utiliza sobre todo en procesos industriales para esterilizar dispositivos quirrgicos, guantes, jeringas, etc.

10.- De que variables depende el xito de una buena esterilizacin? Las principales variables son: Tiempo Temperatura Distribucin de la sustancia esterilizante Distribucin del equipo a esterilizar Limpieza del equipo y material utilizado en la esterilizacin Caractersticas de los microorganismos que se desean eliminar Caractersticas del medio donde se encuentran los microorganismos a eliminar Tcnica de esterilizacin

11.- Cules son los tiempos que se necesitan o requieren para esterilizar los siguientes materiales: Guantes de caucho, sondas,, frascos de vidrio, agua, jeringas de vidrio y plstico, hule, medios de cultivo, instrumental de acero inoxidable, torundas? Ya que el calor hmedo (autoclave) y el calor seco (estufa son los mtodos ms utilizados en el laboratorio, sern los descritos en tiempo de utilizacin. Autoclave Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo ms usado es el de Chamberland. Esteriliza a 120 a una atmsfera de presin (estas condiciones pueden variar) y se deja el material durante 20 a 30 minutos. Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metlica, que en la parte inferior recibe calor por combustin de gas o por una resistencia elctrica, esta se cierra en la parte superior por una tapa de bronce. Esta tapa posee tres orificios, uno para el manmetro, otro para el escape de vapor en forma de robinete y el tercero, para una vlvula de seguridad que funciona por contrapeso o a resorte. Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no alcance a los objetos que se disponen sobre una rejilla de metal. Se cierra asegurando la tapa, sin ajustar los bulones y se da calor, dejando abierta la vlvula de escape hasta que todo el aire se desaloje y comience la salid9de vapor en forma de chorro continuo y abundante. Ventajas del calor hmedo: Rpido calentamiento y penetracin Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo No deja residuos txicos Hay un bajo deterioro del material expuesto Econmico

Desventajas: No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos

Estufa Doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia, circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cmaras, a temperatura de 170 C para el

instrumental metlico y a 140 C para el contenido de los tambores. Se mantiene una temperatura estable mediante termostatos de metal, que al dilatarse por el calor, cortan el circuito elctrico. Ventajas del calor seco: No es corrosivo para metales e instrumentos. Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no voltiles.

Desventajas: Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor.

12.- Qu es un antisptico y cuales son los ms utilizados? Los antispticos son sustancias antimicrobianas que se aplican a un tejido vivo o sobre la piel para reducir la posibilidad de infeccin, sepsis o putrefaccin. En general, deben distinguirse de los antibiticos que destruyen microorganismos en el cuerpo, y de los desinfectantes, que destruyen microorganismos existentes en objetos no vivos. Algunos antispticos son autnticos germicidas, capaces de destruir microbios (bactericidas), mientras que otros son bacteriostticos y solamente previenen o inhiben su crecimiento. Los antibacterianos son antispticos que slo actan contra bacterias. Algunos antispticos habituales son: Alcoholes Compuestos de amonio cuaternario cido brico Gluconato de clorhexidina Perxido de hidrgeno Yodo Mercurocromo Dihidrocloruro de Octenidina Compuestos de Fenol (cido carblico) Cloruro de sodio Hipoclorito de sodio

Previo 3 1.- Qu es un medio de cultivo? Solucin que cuenta con los nutrientes necesarios para recuperar, multiplicar, aislar e identificar los microorganismos (bajo condiciones favorables de temperatura y pH), as como efectuar pruebas de susceptibilidad. Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados, al prepararse podemos encontrarlos en estado slido, semislido y lquido. 2.- Los medios de cultivo que nutrientes contienen, seale cuales son cada uno de ellos y de donde se obtienen? Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Los principales son: Fuente de carbono. Fuente de nitrgeno.- Las bacterias pueden obtener el nitrgeno atmosfrico a travs de las protenas o por la degradacin de aminocidos o pptidos. Azufre y fosfatos.- La obtienen como elemento(S), y como fosfatos en sales (P). Vitaminas. Agua.- Medio de transporte que permite una mejor absorcin de los nutrimentos. Protenas.- Se suministran generalmente peptonas, que se encuentran disponibles en el comercio, preparadas por digestin parcial de carne con enzimas peptdicas; consisten en polipptidos, dipptidos y aminocidos. Carbohidratos.- Suministran carbono para la sntesis, y adems su fermentacin libera energa utilizable en el metabolismo. Factores accesorios de crecimiento.- Son tambin requerimientos por algunas bacterias. Entre ellos estn las vitaminas del complejo B; estas suministran enzimas necesarias para que las bacterias que son incapaces de sintetizar otros factores necesarios para algunas bacterias sean obtenidas de los nutrimentos ms complejos. Sales minerales.- Elementos como K, Ca, Na, etc.; tambin son requeridas por algunas bacterias en su desarrollo.

3.- Cmo se clasifican los medios de cultivo? Segn su aspecto fsico:

fosiferoliquidos Semi-slidos Slidos duros o muy duros

Segn su uso:

Selectivos Selectivos de enriquecimiento Diferenciales Para cultivar grmenes anaerobios Para medir potencia de antibiticos De transporte en micro Para filtracin a travs de membrana Para cultivo de hongos y levaduras

Para cultivo de protozoarios 4.- Qu es el agar y de donde se obtiene, qumicamente que contiene? Agar-agar o agar es una substancia gelatinosa derivada de algas marinas. Qumicamente el agar es un polmero de subunidades de galactosa; en realidad es una mezcla heterognea de dos clases de polisacridos: agaropectina y agarosa. Aunque ambas clases de polisacridos comparten el mismo esqueleto de galactosa, la agaropectina est modificada con grupos cidos, tales como sulfato y piruvato. Los polisacridos de agar sirven como la estructura primaria de la pared celular de las algas. Disuelto en agua caliente y enfriado se vuelve gelatinoso. 5.- Cules son las cualidades que tiene el agar? Debido a las propiedades descritas anteriormente, el Agar se utiliza ampliamente en los casos en que se necesita un agente de suspensin, estabilizacin, espesamiento o gelificacin. As es posible encontrar diversas aplicaciones en la industria de alimentos, farmacologa, microbiologa y distintas ramas de produccin. Una de las aplicaciones ms importantes es la de su gran utilidad como medio de cultivo de bacterias. Destacan entre las ventajas que posee para este efecto, las siguientes:

Su resistencia a no ser licuado por las bacterias, muy pocas lo logran e incluso no es licuado por aquellas que licuan los medios preparados con gelatina animal.

Permanece en estado slido a la temperatura de incubacin y no sufre desgarros al efectuar la siembra de bacterias. La propiedad de ser llevado de gel a slido y viceversa, permite que los microorganismos pueden ser mezclados totalmente con l, a una temperatura que no los afecte.

6.- Cmo se clasifican los medios de cultivo y en que consiste cada uno de ellos? Debido a las propiedades descritas anteriormente, el Agar se utiliza ampliamente en los casos en que se necesita un agente de suspensin, estabilizacin, espesamiento o gelificacin. As es posible encontrar diversas aplicaciones en la industria de alimentos, farmacologa, microbiologa y distintas ramas de produccin. Una de las aplicaciones ms importantes es la de su gran utilidad como medio de cultivo de bacterias. Destacan entre las ventajas que posee para este efecto, las siguientes:

Su resistencia a no ser licuado por las bacterias, muy pocas lo logran e incluso no es licuado por aquellas que licuan los medios preparados con gelatina animal. Permanece en estado slido a la temperatura de incubacin y no sufre desgarros al efectuar la siembra de bacterias. La propiedad de ser llevado de gel a slido y viceversa, permite que los microorganismos pueden ser mezclados totalmente con l, a una temperatura que no los afecte.

7.- Cules son los medios de cultivo bsicos y para que genero de bacterias se utilizan? Son los medios ms simples, contienen extracto de carne, peptona, sal El extracto o infusin de carne proporciona aminocidos, vitaminas, pequeas cantidades de elementos como C, N y otros elementos. Ejem: infusin, Agar cerebro-corazn. Son medios slidos muy apropiados cultivo de bacterias y hongos, incluyendo los de difcil desarrollo. 8.- Cules son los medios enriquecidos y de enriquecimiento y para que genero de bacterias se utilizan? de algunos ejemplos de cada uno de ellos. Algunos microorganismos no son capaces de desarrollarse en medios de cultivo normales. Para cultivarlos necesitamos aadir sustancias altamente nutritivas como sangre, suero, extractos de tejidos animales. Estos medios son los medios y agua. sales y Agar de para el

enriquecidos, y los microorganismos que crecen en ellos son microorganismos exigentes o fastidiosos. Ejemplo: agar-sangre. 9.- Cules son los medios de cultivo selectivos y diferenciales, enumere cuales son los principales de cada uno de ellos y para que tipo de bacterias se utilizan? Un medio selectivo es un medio de cultivo en el que slo puede crecer un tipo de microorganismo. Un ejemplo sera usar un medio rico en un antibitico como la ampicilina para permitir nicamente el crecimiento de los resistentes a ste. El cristal violeta inhibe las gram +. Otra manera es modificar la fuente de carbono; si sustituimos la glucosa por maltosa, seleccionamos aquellos microorganismos capaces de digerirla. 10.- Cules son los medios de cultivo utilizados para hongos y levaduras y cuales son los ms idneos para cada uno de estos microorganismos? Los medios para Micologa difieren en varios aspectos de aquellos que se usan en Bacteriologa. Estos ltimos por lo general son levemente alcalinos, mientras que la mayora de los hongos prefieren un medio cido e incluso muchas especies toleran una acidez relativamente alta. Los medios de bacteriologa normalmente contienen protenas como fuente tanto de carbono como de nitrgeno. En cambio para hongos, se usa hidratos de carbono como fuente de energa, y el nitrgeno se suministra como sales inorgnicas, sea como nitrato o como sales de amonio. Los elementos qumicos esenciales para el cultivo de hongos son: C, H, O, S, N, P, K, Mg, Fe, etc. Tambin son necesarias cantidades mnimas de otros elementos para el crecimiento de ciertos hongos. La mayora de los medios naturales y de los medios sintticos preparados con drogas de calidad tcnica, normalmente contienen suficiente cantidad de los llamados "elementos trazas", pero a veces es necesario agregarlos deliberadamente cuando se preparan con drogas de calidad analtica. 11.- Cmo preparara un medio de cultivo en el laboratorio, cuales son las condiciones para caldos y agares en cuento a temperatura y tiempos? 1. Pesar los reactivos necesarios para preparar 250 ml de medio. Ponerlos en el matraz. 2. Con la probeta, medir 250 ml de agua destilada y aadirla al matraz con el polvo. 3. Poner el matraz sobre el agitador con una mosca para que la suspensin se mezcle homogneamente. 4. Cuando la solucin est homognea, retirarla del agitador, sacar la mosca y tapar con un pedazo de aluminio. 5. La autoclave estar prendida previamente. Introduce tu matraz en el interior de la autoclave. Cirrala. 6. Una vez que empiece a salir vapor, coloca la vlvula en la autoclave, para que la presin comience a subir. Tiene que llegar hasta 15 lb/in2. A partir de este

momento, debers tomar el tiempo de 20 minutos. Debers tener cuidado de que la presin de la autoclave, nunca rebase los 20 lb/in2, ni est por debajo de los 15 lb/in2. Esto se puede controlar conectando y desconectando la autoclave, segn te indique la maestra. 7. Transcurridos los 20 minutos, desconecta la autoclave. Comienza a abrir la vlvula para liberar el vapor y que la presin comience a bajar. La autoclave puede abrirse nicamente cuando el manmetro marque cero. 8. La autoclave se abre desde atrs, procurando que nadie quede de frente hacia donde se abre la tapa, ya que saldr mucho vapor caliente que causa quemaduras. Una vez que se abri con cuidado, con ayuda del trapo, sacar el matraz. 9. Vaciar el medio en las cajas de Petri estriles siguiendo la tcnica asptica. Las cajas no pueden ser destapadas a menos que sea entre los mecheros o dentro de la campana de flujo laminar. Las tapas no se tocan por dentro con los dedos, ni se sacan del rea de esterilidad. 10. Ya slidas, se cierran adecuadamente y se etiquetan con el tipo de medio, equipo, grupo y fecha de elaboracin. Guardar en el refrigerador. 12.- Qu son los medios de transporte? Los medios de transporte destinados al traslado de productos que supuestamente contienen microorganismos, poseen una composicin qumica apropiada, destinada a mantener la carga microbiana con un mnimo de actividad fisiolgica, de tal manera que su contenido cualitativo y cuantitativo vare lo mnimo, desde que se efecta la toma de muestras hasta que llega al laboratorio donde ser procesado. 13.- Cules son los medios para el estudio de carbohidratos? La Cistina Triptena Agar (C.T.A.): Medio semislido ideal para estudios de fermentacin de hidratos de carbono, para deteccin de movilidad y para conservacin de microorganismos. Se puede utilizar para el transporte de cepas bacterianas a distancia. 14.- Cules son los medios de mantenimiento? Suelen ser distintos a los de crecimiento ptimo ya que el crecimiento rpido y prolfico suele ocasionar la muerte rpida de las clulas. Ejemplo: al aadir glucosa y utilizarla los microorganismos producen cidos, acidificndose el medio por lo que es preferible no utilizar glucosa en los medios de mantenimiento. 15.- Qu indicadores se utilizan en los medios diferenciales? Se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y

amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayora de las bacterias Gram-positivas).

16.- Cules son los carbohidratos mas utilizados en los medios de cultivo? Los principales carbohidratos de los medios de cultivos son: D - galactosa, 3-6 anhiro - L - galactosa, sulfatos y cido pirvico; metil - D - galactosa y cido urnico entran en su composicin. La Agarosa est constituida por unidades alternadas de -D - galactopiranosa unin 1,3 y 3,6 anhiro-L galactopiranosa unin 1,4.

Previo 4 1.- Que bacterias pertenecen a la familia de las Enterobacterias enumere cada una de ellas? Enterobacteriaceae es una familia de bacterias Gram negativas que contiene ms de 30 gneros y ms de 100 especies que pueden tener morfologa de bacilos o cocos. 2.- Cuales son las Enterobacterias de importancia industrial? ESPIRULINAS (Cianobacterias) ricas en esenciales, vitaminas y ac. Grasos poliinsaturados LEVADURA SECA: alto contenido en protenas y vitamina B MICROALGAS (chlorella y Scenedesmus) alto contenido proteico MOHO (Fusarium gramineam) microprotena QUORN Sacharomyces cerevisiae

3.- Dentro de las Enterobacterias cules son las de inters clnico? La presencia de Enterobacteriaceae dentro del organismo es anormal y determina la aparicin de infecciones, cuya gravedad depende del punto de entrada. Introducidas por los alimentos, provocan problemas intestinales al adherirse y atravesar la barrera de la mucosa gastrointestinal, manifestada por diarreas y deshidratacin. Ciertas especies provocanpatologas especficas:

La especie Salmonella typhi es responsable de la fiebre tifoidea. La especie Shigella dysenteriae es el agente responsable de la disentera bacilar.

La especie Escherichia coli enterotxica es responsable de la gastroenteritis infantil. La especie Yersinia pestis es responsable de la peste. La especie Serratia marcescens usualmente causa infecciones nosocomiales como resultado de tratamiento en un hospital.

4.- Escriba las caractersticas de cada una de las Enterobacterias. En la definicin clsica de una Enterobacteriaceae se usan siete criterios bsicos, adicional a la aparicin de nuevos mtodos taxonmicos para incluir a ciertos gneros que no cumplen con todos los siguientes criterios, pero que forman parte de esta familia:

Son bacterias gram negativas, la mayora bacilos, otros cocobacilos y otros pleomrficos. No son exigentes, son de fcil cultivo. Son oxidasa negativo (excepto Plesiomonas, que es oxidasa positivo), es decir, carecen de la enzima citocromo oxidasa.1 Son capaces de reducir nitrato en nitrito. Son anaerbicos facultativos. Son fermentadores de carbohidratos en condiciones anaerbicas con o sin la produccin de gas (en especial glucosa y lactosa), y oxidadores de una amplia gama de substratos en condiciones aerbicas.2

Muchos gneros tienen un flagelo que sirve para desplazarse, aunque algunos gneros no son mviles.

Adicional a ello, las Enterobacteriaceae no forman esporas, algunas producen toxinas y pueden ser encapsuladas y son organismos catalasa positivos. Son quimiohetertrofos, y necesitan para su crecimiento compuestos simples decarbono y nitrgeno, generalmente slo con D-glucosa, aunque algunas requieren aminocidos y vitaminas. La temperatura ptima de crecimiento es de entre 22 C y 37 C. Las diferencias entre los nombres de los diversos gneros provienen de criterios ms precisos, como la fermentacin de los diferentes azcares, la produccin o no de azufre, la presencia de enzimas metablicas (galactosidasa,desaminasas, descarboxilasas), etc. Los serotipos de importancia medica y sanitaria pueden distinguirse entre s por la presencia o ausencia de antgenos en su constitucin celular, tales como en

el lipopolisacrido (antgeno O), el antgeno flagelar (antgeno H) o el antgeno capsular (antgeno K).1

5.- Como hara la identificacin Enterobacterias? Mediante pruebas primarias

en el laboratorio de la familia de las

6.- Que son las pruebas primarias y en qu consisten. Para la identificacin de las bacterias en el laboratorio es importante conocer sus caractersticas morfolgicas, la reaccin a la tincin de Gram, agrupacin, propiedades, morfologa colonial, reacciones metablicas como produccin de enzimas y reacciones de xido-fermentacin. La identificacin bacteriana primaria se basa en los siguientes puntos:

Tincin de Gram: Revela la forma de la bacteria, agrupacin y grupo taxonmico al que pertenece: Gram positivo o Gram negativo.

Tincin de Ziehl Neelsen: Las bacterias Alcohol-cido resistentes (BAAR), son difciles de cultivar, tal vez y en un agar sangre muestre algo de crecimiento, por eso es til esta tincin de identificacin primaria.

Tincin de esporas: La espora es un mecanismo de defensa generalmente de los gneros Bacillus y Clostridium.

Prueba de catalasa: La catalasa es una enzima que descompone al perxido de hidrgeno en oxgeno y agua, esta enzima es similar a la estructura de la hemoglobina. Excluyendo al gnero Streptococcus y algunos otros la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen catalasa.

La base de esta prueba es demostrar la presencia de la enzima catalasa, colocando 2 o 3 gotas al cultivo. El resultado es positivo si en la colonia hay efervescencia.

7.- Cuales son las pruebas secundarias y en qu consisten cada una de ellas. La identificacin se fundamenta en la comparacin del microganismo que deseamos identificar con los microorganismos de identidad conocida. La

exactitud de la identificacin depende de la eficacia del trabajo preparatorio as como su grado. Estas pruebas se clasifican de la siguiente manera:

Simples: Citrato, Malonato, MR-VP, Nitrato y Leche Tornasol. Mltiples: TSI, LIA y SIM. Especiales: Coagulasa, Hialuronidasa y Acriflavina.

8.- Dentro de la identificacin cual considera usted que de manera rpida le servira a usted para hacer la identificacin de una bacteria. Una tincin de gram 9.- Si le enviarn a usted una muestra para analizar a el laboratorio cul sera la metodologa que seguira usted para hacer la identificacin y el aislamiento. Tomaria del centro de una colonia bacteria y la sembrara en un agar y una vez que esta cfreciera le hara las pruebas primarias 10.- Cual es material que se utilizara para realizar esta practica. Medios de cultivo y bioqumicas: 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 placa de AST o BHI placa de MacConkey (MC) placa de Eosina Azul de Metileno (EMB) placa de Sulfito Bismuto (SB) placa de Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD) placa de Salmonella Shigella (SS) placa de Desoxicolato Citrato (DC) placa de Bilis Rojo Violeta (BRV) tubos de OF tubo con Nitratos tubo con SIM tubo con MR VP tubo con Citratos tubo con Urea tubo con Malonatos tubo tubo tubo tubo con con con con TSI MIO caldo arginina LIA

Material Biolgico

 Otros

Antisueros VS enterobacterias E. Coli Salmonella Shigella

Mechero Microscopio Asa bacteriolgica Agua destilada estril Cubre objetos Portaobjetos

REACTIVOS Peroxido de hidrogeno 30% Tiras reactivas (oxidasa) Aceite mineral Reactivo de Kovack o Erlichs Rojo de metilo KOH 40% Alfa-naftol Alfa-naftilamina Ac. Sulfanilico Colorantes de Gram

Previo 5 1.- Dentro de bacterias Gram-positivas cuales considera de importancia industrial y de importancia clnica?

La especie Salmonella typhi es responsable de la fiebre tifoidea. La especie Shigella dysenteriae es el agente responsable de la disentera bacilar. La especie Escherichia coli enterotxica es responsable de la gastroenteritis infantil. La especie Yersinia pestis es responsable de la peste. La especie Serratia marcescens usualmente causa infecciones nosocomiales como resultado de tratamiento en un hospital. ESPIRULINAS (Cianobacterias) ricas en esenciales, vitaminas y ac. Grasos poliinsaturados LEVADURA SECA: alto contenido en protenas y vitamina B MICROALGAS (chlorella y Scenedesmus) alto contenido proteico MOHO (Fusarium gramineam) microprotena QUORN Sacharomyces cerevisiae

2.- Cuales son las bacterias alimentaria?

Gram-positivas que afectan a la industria

Sacharomyces cerevisiae Lactobacilos Penicillium camemberti

3.- Enumere cuales son las principales bacterias grampositivas. Y escriba las caractersticas de cada una de ellas. Bacillus, Listeria, Staphylococcus,Streptococcus, Enterococcus, y Clostridium 4.- Cuales serian las principales pruebas bioqumicas que se realizan a este tipo de bacterias?

Simples: Citrato, Malonato, MR-VP, Nitrato y Leche Tornasol. Mltiples: TSI, LIA y SIM. Especiales: Coagulasa, Hialuronidasa y Acriflavina.

5.-

Escriba cuales son los principales medios de cultivo utilizados para el

aislamiento identificacin, y diferenciacin de este tipo de microorganismos. Segn sus cualidades fsicas distinguimos:

Lquidos Semi-slidos Slidos

Segn su formulacin:

Qumicamente definidos: se conoce exactamente la cantidad de cada uno de los compuestos que hay en el medio. Complejos: se realizan a partir de extractos naturales (extracto de levadura, sangre,...). Por tanto, no se conoce exactamente cual es la composicin del medio. Sin embargo, presenta la ventaja de que ya estn presentes todos o casi todos los elementos que una clula puede requerir.

Segn su uso:

Medio General: Es aquel medio donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto aquellos que necesitan de unas condiciones especiales.

Ejemplo:Agar CLED

Selectivos: permiten seleccionar el crecimiento de una especie o grupo determinado (hongos, bacterias entricas, protozoos...). Diferenciales: permiten identificar una especie o grupo por su crecimiento ya sea por su metabolismo, respiracion, etc.

Ejemplo:Medio de McConkey

De enriquecimiento: son medios diseados para permitir el crecimiento del mximo nmero de especies posible. Pueden usarse, por ejemplo, para estudiar todos los microorganismos presentes en una muestra. Mnimo: contienen la mnima cantidad de nutrientes posible que permite el crecimiento de una especie. De transporte: est preparado para servir de almacenamiento temporal a especmenes transportados. manteniendo su viabilidad y su concentracin. Simple

6.- En qu consiste la prueba de la bacitracina? Prueba utilizada para la diferenciacin de estreptococos betahemoltico del grupo A de otros estreptococos betahemolticos. Fundamento La bacitracina es un antibitico que inhibe la sntesis de pared celular bacteriana, y a la concentracin que se encuentra en los discos (0.04 U) inhibe el crecimiento de los estreptococos beta hemolticos del grupo A de Lancefield pero no inhibe el desarrollo de otros estreptococos beta hemolticos. Los micrococcus y los estomatococcus tambin son inhibidos, mientras que los estafilococos coagulasa negativo son resistentes. Un resultado sensible, es presuntivo de la presencia de estreptococo grupo A, y se puede incrementar adems el valor diagnstico mediante la realizacin de la prueba del PYR (PYR-A-Enterococos, cdigo B12-406-24 7.- Describa como se realizan las pruebas de novobiocina y la de optoquina y para que se utilizan. Novobiocina, tambin conocida como albamicina o catomicina, es un antibitico aminocumarina producido por la bacteria Streptomyces niveus ,que recientemente ha sido identificado como un sinnimo subjetivo de S. spheroides, un miembro de la orden de las actinobacterias o actinomycetes. Otros antibiticos de la clase de las aminocumarinas son la clorobiocina y la cumermicina A1. Optoquina: Discos embebidos en clorhidrato de etilhidrocuprena (optoquina) til para diferenciar Streptococcus pneumoniae (sensible) de Streptococcus viridans (resistente). Fundamento Las colonias de Streptococcus pneumoniae son inhibidas por 5 g de optoquina contenida en un disco de papel de filtro aplicado sobre la superficie de una placa de agar sangre. Las colonias de S. pneumoniae son mucoides o crateriformes. Colocar un disco de optoquina sobre el inculo. Incubar toda la noche en CO2 5-10% a 35C. Examinar la placa para observar cualquier zona de inhibicin alrededor del disco de optoquina. Medir el dimetro de la zona de inhibicin incluyendo el dimetro del disco. Interpretacin Una zona de inhibicin mayor o igual de 14 mm es presuntiva para Streptococcus pneumoniae. Si no se observa zona de inhibicin es compatible con estreptococos alfa hemolticos diferentes al Streptococcus pneumoniae (generalmente S. viridans). Las zonas de inhibicin inferiores a 14 mm de dimetro son cuestionables para Streptococcus pneumoniae y deben ser confirmadas por la prueba de solubilidad en bilis.

8.-Cuales son los grupos de Estreptococos y como se clasifican? Los estreptococos son un gnero de Bacterias Gram positivas, esfricas pertenecientes al filo Firmicutes1 y al grupo de las bacterias cido lcticas. Estas bacterias crecen en cadenas o pares, donde cada divisin celular ocurre a lo largo de un eje. De all que su nombre, del Griego streptos, significa que se dobla o retuerce con facilidad, como una cadena. En contraste, los Gram positivos estafilococos, que se dividen usando varios ejes, forman agrupaciones racimosas de clulas. Los Streptococci son oxidasa y catalasa negativos. Las especies de estreptococus que producen enfermedades son:

Estreptococos del grupo pyogenes producen amigdalitis e imptigo.

A: Streptococcus

Estreptococos del grupo B: Streptococcus agalactiae producen meningitis en neonatos y trastornos del embarazo en la mujer. Neumococo: Streptococcus pneumoniae es de neumona adquirida en la comunidad. la principal causa

Streptococcus viridans es una causa importante de endocarditis y de abscesos dentales. Streptococcus mutans causa importante de caries dental. Pertenece al grupo de estreptococos viridans.

Algunas especies de los grupos C y G tienen en su pared la protena G, que, por su capacidad de unin a anticuerpos, tiene importantes aplicaciones en biotecnologa. 9.- Como se prepara en el laboratorio el agar sangre y el agar chocolate? Agar Chocolate (CHOC) es un medio de cultivo enriquecido y no selectivo. Es una variante del agar sangre. Contieneglbulos rojos, que han sido lisados por el suave calentamiento a 56 C. Este agar se usa para el delicado y exigente crecimiento de bacterias respiratorias, como por ejemplo Haemophilus influenzae. Estas bacterias necesitan factores de crecimiento, como el NAD y hematina, componentes que podemos encontrar dentro de los globulos rojos; por lo tanto, un prerequisito logico para el crecimiento es la lisis de los globulos rojos. El agar se llama asi debido a su parecido con el chocolate, pero no contiene nada de este.

Debido a que este medio soporta muchos tipos de bacterias, no es muy util para coprocultivos. El agar sangre es una combinacin de un agar base (agar nutritivo) con el agregado de 5 % de sangre ovina, tambin puede usarse sangre humana, para cultivos en una placa de Agar. El agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento. Se usa tambin para ver la capacidad hemoltica de los microorganismos patgenos (que es un factor de virulencia). Observando los halos hemolticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemlisis que posee: alfa: halos verdosos beta: halos incoloros gamma: inexistencia de halos 10.- Cual seria la metodologa que utilizara para identificar aislar un alimento contaminado con estafilococo? No suele ser difcil aislar estafilococos. El medio de eleccin para obtenerlos de muestras purulentas es el agar-sangre; con 24 horas de incubacin S. aureus da un buen crecimiento de colonias cremosas, muy pigmentadas y redondeadas, rodeadas de las zonas claras de hemlisis b 11.- Escriba las formas que llegan a presentar este tipo de bacterias dibjelas.

Previo 6 1.- Que es el recuento en placas o las unidades formadoras de colonias? Unidades Formadoras de Colonias es un valor que indica el grado de contaminacin microbiolgica de un ambiente. Expresa el nmero relativo de microorganismos de un taxn determinado en un volumen de un metro cbico de agua. 2.- Como se realiza este mtodo de unidades formadoras de colonias?
Una dilucin hecha con bacteria y agua peptonada se coloca en el plato de agar (Cuenta de plato agar para muestras alimenticias o Agar trypticase de soja para muestras clnicas) y expandida en el plato siguiendo este patrn.

Las "Unidades Formadoras de Colonias" (ufc) se miden en

(UFC por mililitro).

3.- Que tan importante es este mtodo en la industria alimentaria?

4.- Dentro de las normas de SSA describa la metodologa que se utilizan para cereales. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-147-SSA1-1996, BIENES Y SERVICIOS. CEREALES Y SUS PRODUCTOS. HARINAS DE CEREALES, SEMOLAS O SEMOLINAS. ALIMENTOS A BASE DE CEREALES, DE SEMILLAS COMESTIBLES, HARINAS, SEMOLAS O SEMOLINAS O SUS MEZCLAS. PRODUCTOS DE PANIFICACION. DISPOSICIONES Y ESPECIFICACIONES SANITARIAS Y NUTRIMENTALES. 5.- Como determinara la presencia de coliformes en lcteos y aguas? A continuacin se muestra un ejemplo de cmo identificar coliformes totales en esta experiencia la siguientes 6 placas fueron rotuladas (10-1, 10-2 y 10-3), con Agar violeta Rojo Billis (VRBA), a esta placas le agregamos 1 ml de la muestra (a cada una de las 6 placas). Estas placas la incubamos x 24 horas a 37 C, aqu no se presentaron crecimiento de coliforme; el cual nos indica, que el H2O tratado este experimento est debidamente saneada, como lo estipula la norma COVENIN, que el H2O potable debe ser limpia, fresca, sin sabores ni olores desagradables o que cause rechazo de quien la consume. Esta prueba dio negativa, no hubo crecimiento de bacterias coliforme, por lo ya sealado anteriormente por lo que se considera que el agua es de calidad o como lo dice COVENIN: agua de calidad es la expresin de todos los factores fsicos, qumicos y microbiolgicos que estn presentes en el H2O. Si la prueba fuese positiva, las colonias tienen que ser roja, dada por los pigmentos. La finalidad de esta experiencia es de observar crecimiento de coliformes totales, en este caso la Escherichia coli que es la especie clsica de este grupo. 6.- Que medios utilizara para la realizacin de esta practica? Medios liquidos 7.- Cual es la metodologa que se utiliza para la determinacin de coliformes? 1. Se toman 10 ml de muestra y se adicionan a un tubo de ensaye que contenga a una campana de Durham y 20 ml de caldo rojo de fenol

lactosado; esto se hace por triplicado, es decir; 3 tubos de 20 ml de caldo rojo de fenol lactosado y 10 ml de muestra. 2. Posteriormente se toma 1 ml de muestra y se agregan en un tubo que contenga campana de Durham y 10 ml de caldo rojo de fenol lactosado, esto tambin es por triplicado. 3. Se toma 0.1 ml de muestra y se adiciona en un tubo que contenga 10 ml de caldo rojo de fenol lactosado, tambin se hace por triplicado. 4. Se ponen a incubar entre 24 y 48 horas a 37C. 8.- En que consisten las campanas de Durham y para que sirven? Son tubos de vidrio muy delgados y sirven para ver si la bacteria a analizar es productora de gas Previo 7 1.- Que son los coliformes totales y fecales? No todos los coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores de contaminacin. Se distinguen, por lo tanto, los coliformes totales que comprende la totalidad del grupo y los coliformes fecales aquellos de origen intestinal.Desde el punto de vista de la salud pblica esta diferenciacin es importante puesto que permite asegurar con alto grado de certeza que la contaminacin que presenta el agua es de origen fecal. 2.- Donde podran determinarse coliformes? En qu tipo de alimentos? En la higiene de alimentos los coliformes no se consideran indicadores de contaminacin fecal sino solamente indicadores de calidad. Los coliformes totales se usan para evaluar la calidad de la leche pasteurizada, leche en polvo, helados, pastas frescas, frmulas para lactantes, fideos y cereales para el desayuno. Los coliformes fecales se usan para evaluar los mariscos frescos. Por ltimo, la E. coli se usa como indicador en quesos frescos, quesillos, cereales, masas con relleno, alimentos infantiles, cecinas cocidas y verduras frescas. 3.- De la Norma de SSA cul es la metodologa que se utiliza para coliformes as como material y reactivos. 4.- Cul es la metodologa que utilizo en el laboratorio para determinarlos?

1. Se toman 10 ml de muestra y se adicionan a un tubo de ensaye que contenga a una campana de Durham y 20 ml de caldo rojo de fenol lactosado; esto se hace

por triplicado, es decir; 3 tubos de 20 ml de caldo rojo de fenol lactosado y 10 ml de muestra. 2. Posteriormente se toma 1 ml de muestra y se agregan en un tubo que contenga campana de Durham y 10 ml de caldo rojo de fenol lactosado, esto tambin es por triplicado. 3. Se toma 0.1 ml de muestra y se adiciona en un tubo que contenga 10 ml de caldo rojo de fenol lactosado, tambin se hace por triplicado. 4. Se ponen a incubar entre 24 y 48 horas a 37C. Si existe un cambio de coloracin de rojo a amarillo y/o formacin de gas en la campana quiere decir que la prueba es positiva para coliformes totales. 1. Del tubo que nos arroje un resultado positivo se toma una muestra de 1 ml y se siembra en un tubo que contenga campana de Durham y 10 ml de caldo Bilis verde brillante. Esta siembra se hace por duplicado. 2. Uno de los tubos se incuba a 37C y el otro a 45C durante 24 a 48 horas. Si se observa turbidez o formacin de gas entonces la prueba es presuntivamente positiva para coliformes fecales 1. Para hacer la prueba confirmativa se toma una muestra con un asa de cada tubo que haya dado positivo a la prueba presuntiva y se siembra en agar Mc.Conke o EMB. 2. Realizar las pruebas primarias. 3. Posteriormente se hace observacin a microscopio y de acuerdo a la morfologa de las bacterias se realizan las pruebas bioqumicas correspondientes.
5.- Porque es tan importante la determinacin de coliformes en la industria alimentaria? Son importantes debido a que son indicadores de calidad.