Machine Translated by Google

Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862

Daftar konten tersedia di ScienceDirect

Jurnal Internasional Farmasi

beranda jurnal: www.elsevier.com/locate/ijpharm

Wawasan ke dalam campuran cairan terapeutik dan formulasi

terhadap terapi tuberkulosis
A B B
Philip Santos , David Pires , Elsa Anes , Ana Rita C. Duarte to,*
A
LAQV, REQUIMTE, Departemen Kimia Sekolah Sains dan Teknologi NOVA, Caparica, Portugal
B
Unit Interaksi Host-Patogen, Lembaga Penelitian Obat-obatan, iMed-ULisboa, Fakultas Farmasi, Universitas Lisbon, Lisbon, Portugal

INFORMASI ARTIKEL ABSTRAK

Kata kunci: Campuran cairan terapeutik, sebagai sistem eutektik dalam, dianggap sebagai strategi berkelanjutan yang dapat
Obat anti tuberkulosis berguna untuk modifikasi dan peningkatan farmakokinetik dan farmakodinamik dari berbagai bahan aktif dalam bahan.
Campuran eutektik
Dalam penelitian ini, kami menilai stabilitas dan aktivitas antibakteri dari formulasi cairan terapeutik yang disiapkan
Campuran cairan terapeutik
TBC dengan obat anti-tuberkulosis. Terapi tuberkulosis menyajikan berbagai jebakan terkait, misalnya, pemberian rejimen
obat multipel yang berkepanjangan, berbagai efek samping yang parah, rendahnya kepatuhan pasien terhadap
pengobatan dan perkembangan resistensi obat. Selama penelitian ini, dimungkinkan untuk menilai stabilitas fisikokimia
1H NMR dan FTIR
formulasi selama 6 bulan, dengan mikroskop optik terpolarisasi, ATR. Selain itu, campuran
tersebut menghadirkan efek antibakteri terhadap strain kulosis umbi Mycobacterium yang rentan terhadap obat
(H37Rv). Hal ini sangat jelas untuk campuran dengan etambutol yang tergabung, membuat mereka menarik untuk
dilanjutkan dengan studi lebih lanjut dan evaluasi penerapan klinis. Setelah infeksi, juga diamati bahwa dosis tunggal
dan lebih tinggi tampaknya lebih efektif daripada dosis terpisah yang lebih rendah, yang memungkinkan produksi
formulasi yang ramah pasien.

1. Perkenalan
Tuberkulosis (TB) merupakan penyakit lama yang diduga telah menyertai
manusia modern hingga saat ini. Ini adalah infeksi bakteri yang disebabkan
oleh bakteri yang terkait erat secara filogenetik dari kompleks spesies
Mycobacterium tuberculosis yang meminjam namanya dari agen penyebab
manusia yang paling representatif dari Mycobacterium tuberculosis (Mtb)
(Mehta dan Dutt, 2016; Smith, 2003; Salvatore dan Zhang, 2017). Meskipun
merupakan penyakit yang dapat dicegah dan diobati, penyakit ini masih
merupakan salah satu infeksi paling mematikan di seluruh dunia. Insiden TB
telah mengalami penurunan yang lambat selama bertahun-tahun, namun
proporsi kasus TB yang resistan terhadap obat dan resistan obat secara luas
telah menarik perhatian baru terhadap penyakit ini (Jenewa: Organisasi
Kesehatan Dunia, 2021) .
Mtb menyebar dari pasien ke pasien melalui penghirupan aerosol yang
terinfeksi yang dihembuskan oleh individu yang terinfeksi (Salvatore dan
Zhang, 2017; Marimani et al., 2018). Secara singkat, tetesan kecil yang
mengandung 1-3 basil memfasilitasi penyebaran dari saluran pernapasan
bagian atas ke paru-paru dalam (alveola), tempat Mtb difagosit oleh makrofag alveolar.
Garis pengobatan yang diterapkan untuk Mtb yang rentan obat sama
dengan yang ditetapkan lebih dari 40 tahun yang lalu dan terdiri dari
pengobatan jangka panjang dengan rejimen empat obat anti-TB (isoniazid
(INH), rifampisin (RIF), pirazinamid (PZA) dan etambutol (EMB)) selama
minimal 6 bulan untuk mengobati penyakit aktif (Jain et al., 2008; Machado et
al., 2016; Sarathy et al., 2012; Bahuguna dan Rawat, 2020). Pengobatan
untuk infeksi yang resistan terhadap obat lebih kompleks, dengan peningkatan
waktu pengobatan dan pemberian obat lini kedua yang lebih toksik dan
kurang efektif (Bahuguna dan Rawat, 2020; Hussain et al., 2019). Itu

Singkatan: API, bahan aktif farmasi; CA, asam sitrat; CFU, unit pembentuk koloni; DES, pelarut eutektik dalam; DMSO, dimetil sulfoksida; EMB, etambutol; FBS, serum
janin sapi; FTIR-ATR, spektroskopi inframerah transformasi fourier dengan pantulan total yang dilemahkan; HEPES, asam 2-[4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il]etanasulfonat;
INH, isoniazid; L-Arg, L-arginin; LTTM, campuran suhu transisi rendah; MBC, konsentrasi bakterisida minimal; MEM, media esensial minimum Eagle; MIC, konsentrasi
penghambatan minimal; MOI, banyaknya infeksi; Mtb, mycobacterium tuberculosis; MTS, 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-
tetrazolium; NMR, resonansi magnetik nuklir; PBS, salin buffer fosfat; PMA, phorbol-12-miristat 13-asetat; POM, mikroskop optik terpolarisasi; PZA, pirazinamid; RIF,
rifampisin; RPMI, Roswell Park Memorial Institute 1640 media; TBC, TBC; TEER, hambatan listrik transepitel.

* Penulis yang sesuai.

Alamat email: aduarte@fct.unl.pt (ARC Duarte).

https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2023.122862
Diterima 29 November 2022; Diterima dalam bentuk revisi 23 Februari 2023; Diterima 14 Maret 2023
Tersedia online 23 Maret 2023
0378-5173/© 2023 Penulis. Diterbitkan oleh Elsevier BV Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).
Machine Translated by Google

F. Santos dkk. Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862

kemampuan obat yang terbatas untuk mencapai target, permeabilitas dinding sel Tabel
bakteri yang rendah (Wallis dan Hafner, 2015; Costa et al., 2016), tahap 1 Campuran cairan terapeutik disiapkan.
pertumbuhan yang berbeda dan metabolisme plastik mikobakteri berkontribusi pada Rasio Molar Singkatan
Cairan Terapi
terapi lama yang dijelaskan (Jain et al. ., 2008; Machado et al., 2016; Sarathy et al., Campuran
2012), dan akibatnya, rendahnya kepatuhan pasien terhadap terapi yang juga
Asam Sitrat : L-Arginin: 1:1:4 (Roda dkk., 2020) | 1:1:5 (Roda dkk., CA:L-Arg:H2O
mendukung perkembangan resistensi obat (Mar imani et al., 2018; Nathan dan H2O 2020) | 1:1:6 (Santos et al., 2019;
Barry , 2015). Roda et al., 2020) | 1:1:7 ( Santos et
Persistensi TB di seluruh dunia dan kelemahan yang dijelaskan sebelumnya al., 2019; Roda et al., 2020) | 2:1:7 (Santos
et al., 2019) | 2:1:8 ( Santos dkk.,
memicu kebutuhan untuk menemukan obat baru yang menunjukkan sifat yang lebih
2019) | 2:1:9 (Santos et al., 2019)
baik, seperti mampu menargetkan tempat infeksi dan juga rejimen obat berbeda
yang ramah pasien. Farah dan rekan kerjanya menyebutkan beberapa fitur Asam sitrat: 2:1:1:7 (Monteiro dkk., 2021) CA:EMB:L-Arg:
menarik, yang desain obat anti-TB baru harus dipertimbangkan, seperti: (1) aman Etambutol:L H2O
dan manjur dengan aktivitas bakterisidal di semua tahap infeksi TB; (2) memberikan Arginin: H2O
Asam sitrat: 1:1:5 (Monteiro dkk., 2021) | 2:1:10 CA:EMB:H2O
perawatan yang lebih singkat dengan kombinasi berbeda yang dapat menurunkan
Etambutol:H2O ( Santos et al., 2019; Monteiro et al.,
jumlah
2021)
obat yang diminum pasien; (3) menemukan obat dengan mekanisme aksi yang luas
dan toksisitas rendah untuk mengobati strain yang resistan terhadap obat; (4) tidak
ada atau berkurang interaksi obat obat; (5) menemukan formulasi ramah pasien Tabel
yang lebih murah dan tersedia; dan juga (6) formulasi pemberian terkontrol dengan 2 Formulasi berbeda dibuat dengan melarutkan jumlah obat anti-TB yang berbeda
bioavailabilitas lebih tinggi dan kemanjuran berkelanjutan untuk jangka waktu yang dalam campuran CA:EMB:H2O (1:1:5).
lama, memungkinkan untuk mengurangi frekuensi dosis (Farah et al., 2016).
Obat anti tuberkulosis Massa Singkatan
Strategi yang berbeda telah dieksplorasi untuk meningkatkan sifat senyawa ditambahkan Perbandingan

terapeutik, dan pendekatan hijau dan berkelanjutan adalah alat terbaru yang
menunjukkan potensi untuk meningkatkan fitur farmakokinetik dan farmakodinamik
senyawa aktif dan untuk formulasi sistem penghantaran obat yang beragam.
Campuran suhu transisi rendah (LTTMs) dianggap hijau dan strategi berkelanjutan
yang dapat disebut sebagai pelarut alternatif, karena menggambarkan campuran
yang menghadirkan rentang cairan yang besar, stabilitas termal yang besar,
tekanan uap yang dapat diabaikan dan, secara umum, ramah lingkungan dan
dengan tingkat yang dapat diterima. toksisitas (Yiin et al., 2016; Perna et al., 2020;
Francisco et al., 2013). LTTM terdiri dari campuran dengan transisi suhu rendah
dan dapat mencakup sistem eutektik dalam (DES) (Perna et al., 2020; Francisco et
al., 2013; Durand et al., 2016), yang digambarkan sebagai campuran dari dua atau
lebih senyawa yang digabungkan dalam rasio molar yang ditentukan menunjukkan
titik leleh yang lebih rendah daripada senyawa awal (Francisco et al., 2013; Abbott
et al., 2017; Aroso et al., 2016). Menurut literatur, campuran ini dibuat terutama
oleh adanya ikatan hidrogen, tetapi juga van der Waals dan/atau interaksi
elektrostatik dapat dibentuk antara senyawa (Francisco et al., 2013; Santana et al.,
2019).
Ribuan kombinasi berbeda dimungkinkan untuk diformulasikan (Barros et al., 2017),
yang menjadikannya sangat menarik untuk berbagai aplikasi termasuk penelitian
farmasi dan pengembangan obat. Ketika sistem eutektik ini memasukkan setidaknya
satu bahan farmasi aktif (API) dalam komposisinya atau digunakan untuk melarutkan
setidaknya satu API untuk meningkatkan sifat-sifatnya, sistem ini disebut sistem
eutektik dalam terapeutik (Alvarez dan Zhang, 2019; Aroso et al., 2015 ; Roda et
´
al., 2021).
Baru-baru ini, jenis campuran cairan terapeutik ini telah dieksplorasi dalam
biomedis, mendekati berbagai target dan penyakit termasuk infeksi TB. Zakrewsky
dan rekan kerjanya menguji aktivitas antimikroba terhadap galur Mtb yang resistan
terhadap obat dari campuran cairan dengan kolin klorida:asam geranat (1:2)
(Zakrewsky et al., 2016; Zainal Abidin et al., 2019). Juga, dari penelitian sebelumnya
yang dilakukan dalam kelompok, dimungkinkan untuk memformulasikan campuran
cairan terapeutik dengan kombinasi EMB dan L-arginin, dalam rasio molar yang
berbeda, dengan asam sitrat dan air yang menunjukkan peningkatan kelarutan
senyawa aktif (Santos et al. ., 2019). Dalam penelitian ini, dinilai aktivitas antimikroba
dan kemampuan untuk melarutkan obat anti-TB yang berbeda dalam campuran
cairan terapeutik berdasarkan EMB, L-arginin, asam sitrat dan air. Selain itu,
formulasi cairan terapeutik dengan obat anti-TB yang berbeda disiapkan dan
stabilitasnya, aktivitas biologis dan antimikroba terhadap strain yang rentan Mtb
diamati.
CA:EMB:H2O RIF + PZA + INH 1:1:1 CA:EMB:H2O + RPI
(1:1:5) (1:1:1)
RIF + PZA + INH 2:3:1 CA:EMB:H2O + RPI
(2:3:1)
RIF + PZA + INH 2:5:1 CA:EMB:H2O + RPI
(2:5:1)
PZA CA:EMB:H2O + PZA
2. Bagian Eksperimental
2.1. Bahan
Semua reagen digunakan tanpa pemurnian lebih lanjut. Asam sitrat monohidrat
(CA; CAS: 5949-29-1, kemurnian ÿ99,5%), L-Arginine (L-Arg; CAS: 74-79-3,
kemurnian ÿ 98%), phorbol-12-myristate-13- asetat (PMA; CAS: 16561-29-8) dan
IGEPAL CA-630 (CAS: 9002-93-1) dibeli dari Sigma Aldrich, MO, USA. Ethambutol
(EMB; CAS: 74-55-5, kemurnian ÿ 98%) diperoleh dari Santa Cruz Biotechnology,
Dallas, USA. Hidrazida asam isonikotinik (INH; CAS: 54-85-3, kemurnian 98%),
pirazinamid (PZA, CAS: 98-96-4, kemurnian 98%) dan rifampisin (RIF; CAS:
13292-46-1, ÿ 95 % kemurnian) diperoleh dari Alfa Aesar, Kandel, Jerman.
Untuk kultur sel digunakan medium esensial minimum Eagle (MEM), media
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640, serum janin sapi (FBS), larutan
antibiotik-antimikotik (penisilin dan streptomisin), HEPES (4-(2-hidroksietil)- 1-
piperazineethanesulfonic acid) dan sodium pyruvate dari Corning, USA dan Gibco,
UK. Dimethyl sulfoxide (DMSO; CAS: 67-68-5) dibeli dari Fisher BioReagents dan
Cell Titer96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay dari Promega, USA.
Untuk kultur Mtb dan pengujian digunakan agar Middlebrook 7H10, media
Middlebrook 7H9 dan OADC dari Becton, Dickinson and Company, USA.
2.2. Persiapan campuran cairan terapeutik dan formulasi berdasarkan campuran
CA:EMB:H2O (1:1:5)
Dalam penelitian sebelumnya, campuran cairan terapeutik yang berbeda
disiapkan untuk terapi tuberkulosis (Santos et al., 2019; Roda et al., 2020).
Campuran ini termasuk asam sitrat, L-Arginine, etambutol dan air yang digabungkan
dalam beberapa rasio molar (Tabel 1). Komponen dicampur dalam rasio molar yang
sesuai dan terus diaduk pada 50-60 ÿC, sampai campuran cairan bening terbentuk.

Untuk menyiapkan formulasi cairan terapeutik, jumlah obat anti-tuberkulosis

yang berbeda (INH, PZA, RIF) ditambahkan ke dalam campuran CA:

2
Machine Translated by Google
F. Santos dkk.
EMB:H2O (1:1:5), menurut rasio yang disebutkan dalam Tabel 2.
2.3. Pelarutan obat anti TB pada PBS menggunakan campuran cairan terapeutik
sebagai pembawa
Pelarutan obat anti-tuberkulosis dalam campuran cairan terapeutik dilakukan dengan
melarutkan kelebihan obat (INH, RIF atau PZA) dalam kira-kira 1 g campuran cairan
terapeutik yang berbeda dan kemudian ditambahkan 1 mL larutan PBS. Campuran diaduk
(60 rpm) selama 24 jam, sebelum dianalisis. Penentuan kelarutan obat anti-tuberkulosis
menggunakan campuran cairan terapeutik sebagai pembawa dievaluasi dengan
spektroskopi UV pada pembaca pelat mikro (VICTOR NivoTM, PerkinElmer, Waltham,
MA, USA). Absorbansi larutan diukur pada 263 nm untuk INH, 270 nm untuk PZA dan 335
nm untuk RIF. Kurva kalibrasi dibuat menggunakan masing-masing obat sebagai standar
dalam PBS (R2 = 0,9957 (INH), R2 = 0,9919 (PZA), R2 = 0,9977 (RIF). Semua sampel
diukur dalam rangkap tiga.
2.4. Mikroskop optik terpolarisasi (POM)
Karakterisasi optik formulasi dengan CA:EMB:H2O (1:1:5) dan obat anti-tuberkulosis
dilakukan pada suhu kamar menggunakan mode transmisi mikroskop optik terpolarisasi
BX-53 (Olympus, Tokyo, Jepang). Tetesan formulasi ditempatkan pada slide kaca
mikroskop dan kemudian diamati, gambar diperoleh dengan kamera digital (Olympus
SC50) dan dianalisis dengan perangkat lunak Olympus Stream Start 2.4.2 (Olympus,
Tokyo, Jepang).
2.5. Resonansi magnetik nuklir (NMR)
1Spektra H NMR 1 H–1 H
Spektroskopi NMR dilakukan untuk mendapatkan
dan NOESY NMR pada spektrometer Bruker Avance III 400 (Bruker, Billerica, MA, USA)
pada frekuensi operasi 400,13 MHz. Sampel disiapkan dalam tabung NMR 5 mm dengan,
kira-kira, 350 ÿL dari setiap campuran dan 200 ÿL DMSOÿd6 (Euriso-Top, St. Aubin Cedex,
Prancis). Pergeseran kimia dirujuk ke Me4Si (ÿ dalam ppm) dan analisis data dilakukan
dengan perangkat lunak MestReNova (11.0.4–18998).
2.6. Spektroskopi inframerah transformasi Fourier (FTIR-ATR)
Spektra inframerah diperoleh pada PerkinElmer Spectrum Two
(Waltham, MA, USA) dengan refleksi total yang dilemahkan (ATR) dalam mode transmisi
dan dengan bilangan gelombang antara resolusi 400 dan 4000, pada
1 efektif perembesan di mana lapisan tunggal diunggulkan (cm2 ), md adalah massa awal
1 cmÿ . Spektrum diperoleh dari 16 pemindaian dengan suhu kamar 4
cmÿ .
2.7. Budaya sel
Sel A549 adalah sel epitel alveolar manusia dari karsinoma paru manusia (DSMZ,
ACC 107) dan sel THP-1 adalah garis sel leukemia monositik akut manusia (ATCC
TIB202). Sel-sel A549 dikultur dalam media MEM yang dilengkapi dengan 10% serum
janin sapi dan 1% larutan antibiotik-antimikotik. Sel THP-1 ditumbuhkan dalam media RPMI
1640, ditambah dengan 10% serum fetal bovine, 10 mM HEPES dan 1 mM sodium
pyruvate. Sel disubkulturkan dalam media yang dilembabkan pada suhu 37 ÿC dengan
5% CO2 dan diferensiasi monosit THP-1 menjadi makrofag diinduksi menggunakan 20
nM phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA), semalaman, diikuti dengan istirahat periode
24 jam tanpa
PMA.
2.8. Tes viabilitas sel
Viabilitas sel dievaluasi dengan A549 konfluen dan sel yang tidak berdiferensiasi dan
makrofag konfluen yang diunggulkan pada pelat 96-sumur (2x104 sel/sumur A549; 5x104
makrofag/sumur) dan setelah 24 jam
3
Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862
dari pembibitan media telah dihapus dan sel diinkubasi dengan konsentrasi yang berbeda
dari komponen murni (rifampisin diencerkan dalam media kultur dengan DMSO 5%),
campuran cairan terapeutik dan formulasi yang diencerkan dalam media kultur, selama
20-24 jam. Setelah masa inkubasi, sel dicuci dengan PBS dan viabilitas sel dievaluasi
menggunakan CellTiter96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay berdasarkan
reagen MTS (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethox yphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-
tetrazolium)). Jumlah formazan yang diproduksi diukur pada 490 nm dalam pembaca
pelat mikro (VICTOR NivoTM, PerkinElmer, USA) dan viabilitas sel dinyatakan dalam
persentase sel hidup dibandingkan dengan kontrol (sel yang tidak diberi perlakuan).
Pengujian dilakukan dengan setidaknya tiga percobaan independen, dalam rangkap tiga,
dan data dianalisis dengan GraphPad Prism 8.0.1.
2.9. Studi permeasi dengan dukungan permeabel transwell
Permeabilitas berbagai kombinasi campuran cairan terapeutik dan API dievaluasi
menggunakan garis sel A549. Sel-sel diunggulkan pada sisipan transwell 12 sumur (sisipan
PET kultur sel Falcon, ukuran pori 0,4 ÿm, luas 0,9 cm2 ) dengan kerapatan sel 1,26x104
sel/sumur (Vieira et al., 2018). Sel-sel ditanam di media tambahan dan kultur yang
ditambahkan ke sisi apikal dan basolateral. Media diganti setiap 2 hari, selama 8 hari,
hingga tercapai lapisan tunggal yang homogen. Hambatan listrik transepitel (TEER) diukur
di semua sumur dan di sumur media tanpa sel
dianggap kosong. TEER diperiksa sebelum pengujian menggunakan EVOM 3 (epithelial
voltohmmeter, World Precision Instruments, USA), dilengkapi dengan sepasang elektroda
yang ditempatkan di sisi apikal dan basolateral.
Nilai TEER yang diperoleh pada penelitian ini adalah 294 ± 14 O/cm2 (mean ± S.
D.). Sampel diinkubasi pada suhu 37 ÿC dengan 5% CO2 selama 6 jam, dan diambil 0,5
mL sampel dari sisi basolateral pada titik waktu yang berbeda (0,5, 1, 2, 3, 4, 5 dan 6 jam),
kemudian diganti dengan jumlah media segar yang sama. Sampel dianalisis dan diukur
dengan HPLC (Dio nex ICS3000; kolom MERCK Purosphere STAR RP18 250x4mm;
deteksi UV pada 210, 238, 280, 320 dan 510 nm; eluen: 20 mM NAH2PO4 + 0,2%
trietilamina pada pH 7,0 dan asetonitril). Analisis dilakukan pada suhu 40 ÿC. Permeabilitas
semu (Papp) untuk senyawa murni, campuran cairan terapeutik dan formulasi dihitung
mengikuti persamaan (Persamaan (1)):
SMA
Karton(cm/ s) = (1)
A × md × t
di mana ma adalah massa senyawa yang meresap setiap titik waktu (g), A adalah luas
senyawa yang ditambahkan ke sisi apikal (g) dan t adalah waktu permeasi (s). Penyerapan
seluler oleh sel A549 diperkirakan dengan persamaan berikut (Persamaan (2)):
Serapan seluler = C0 ÿ CBf ÿ CAf (2)
dimana C0 adalah konsentrasi awal yang ditambahkan pada sisi apikal, CBf adalah
konsentrasi akhir pada sisi basolateral dan CAf adalah konsentrasi akhir pada sisi apikal.
2.10. Aktivitas antimikroba dalam Mtb (H37Rv)
Uji mikrobiologis dilakukan di laboratorium Keamanan Hayati Tingkat 3 di Fakultas
Farmasi Universitas Lisbon, dengan menghormati standar penahanan akademik nasional
dan Eropa tingkat 3, manajemen laboratorium, dan keamanan hayati, berdasarkan Direktif
UE yang berlaku. Mycobacterium tuberculosis H37Rv (ATCC 27294), strain yang rentan
terhadap obat, digunakan untuk penentuan konsentrasi penghambatan minimal (MIC)
dan konsentrasi bakterisidal minimal (MBC) dari campuran cairan terapeutik, dengan
metode pengenceran kaldu dengan konsentrasi bervariasi antara 0,125 dan 16 ÿg /mL.
Secara singkat, kultur Mtb pada fase pertumbuhan eksponensial disentrifugasi dan dicuci
Machine Translated by Google

F. Santos dkk. Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862

Gambar 1. Kelarutan berbagai obat anti TB (a) INH; b) PZA dan c) RIF) dalam campuran cairan terapeutik dan PBS. Data disajikan sebagai rata-rata ± SD (n = 3), *p ÿ
0,05, **p ÿ 0,005.

PBS, kemudian disuspensikan kembali dalam media biakan segar. Cluster bakteri
dibongkar dan dihilangkan dengan perawatan ultrasonik selama 5 menit diikuti dengan
sentrifugasi kecepatan rendah (500 × g) selama 2 menit. Suspensi sel tunggal
diverifikasi dengan mikroskop fluoresensi. Konsentrasi yang dipilih dari campuran
cairan terapeutik diinkubasi dengan suspensi bakteri yang mengandung sekitar 105
unit pembentuk koloni per mL. MIC ditentukan pada hari ke 10 inkubasi dengan
pemeriksaan visual dari pelat. Untuk penentuan MBC, sampel bakteri diperoleh dari
pelat uji MIC, diencerkan 1:10 dalam air dan dilapisi dalam media padat 7H10 + 10%
OADC. MBC sesuai dengan konsentrasi yang tidak menghasilkan koloni yang terlihat
pada media padat.
2.11. Infeksi makrofag dengan Mtb (H37Rv)
dengan 5% CO2. Setelah internalisasi, sel dicuci tiga kali dengan PBS dan
ditangguhkan kembali dalam media kultur yang sesuai dengan perlakuan masing-
masing. Pada hari ke-3 pasca infeksi, separuh media kultur diisi ulang dengan atau
tanpa penguatan perlakuan.
2.12. Kelangsungan hidup intraseluler bakteri
Bila diperlukan, sel yang terinfeksi dilisiskan dengan pengobatan 10 menit dengan
larutan IGEPAL 0,05% dalam air, deterjen nonionik, non-denaturasi yang mengganggu
sel eukariotik tetapi tidak mempengaruhi viabilitas mycobacteria, dengan tujuan untuk
menilai CFU intracel yang layak. bakteri lurik. Pengenceran serial dari suspensi
bakteri yang dihasilkan dilapisi dalam agar Middlebrook 7H10 dengan OADC 10% dan
diinkubasi selama 2-3 minggu pada suhu 37 ÿC sebelum koloni dapat diamati dan
dihitung.

Kultur Mtb disiapkan seperti dijelaskan di atas dan disuspensikan kembali dalam
media kultur makrofag. Makrofag dalam 96-well plate seperti dijelaskan di atas,
terinfeksi Mtb pada MOI 0,1 selama 3 jam, pada 37 ÿC

4
Machine Translated by Google
F. Santos dkk.
Gambar 2. Gambar formulasi cairan terapeutik berdasarkan CA:EMB:H2O (1:1:5) dan obat anti TB yang diperoleh POM pada suhu kamar, setelah 6 bulan
persiapan.
2.13. Analisis statistik
Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak GraphPad
Prism 8.0.1. Semua pengukuran dilakukan dalam rangkap tiga dan data
disajikan sebagai rata-rata ± SD. Normalitas dievaluasi dengan uji Shapiro-Wilk.
Data yang memenuhi distribusi normal diuji dengan analisis ANOVA satu arah
dan dua arah dengan uji post-hoc Bonferroni untuk perbandingan berganda.
Data yang tidak mengikuti distribusi normal diuji dengan uji non parametrik uji
Kruskal-Wallis dan uji Dunn digunakan untuk perbandingan berganda.
Perbedaan dianggap signifikan bila nilai p ÿ0,05.
3. Hasil dan Pembahasan
Penggunaan campuran cairan terapeutik telah dieksplorasi sebagai
pendekatan yang lebih berkelanjutan untuk memodifikasi dan meningkatkan
karakteristik obat yang ada, yang pada akhirnya dapat meningkatkan kinerja
dan kemanjurannya dalam pengobatan berbagai penyakit. Hal ini dicapai,
terutama, melalui interaksi ikatan hidrogen yang terjadi antara pasangan
campuran yang berbeda. Beberapa contoh penggunaan campuran jenis ini
untuk pendekatan terapeutik, telah dilaporkan dalam literatur seperti penggunaan
campuran berdasarkan kolin klorida dan
asam askorbat untuk meningkatkan kelarutan deksametason; (Silva et al.,
2018) menggunakan API untuk memformulasikan campuran cair sebagai
ibuprofen (Aroso et al., 2015; Silva et al., 2020; Pereira et al., 2019; Stott et al.,
1998; Silva et al. ., 2021) atau asam asetilsalisilat (Aroso et al., 2016)
dikombinasikan dengan terpen berbeda yang dapat mempotensiasi aktivitas
dan karakteristik API; menggabungkan asam sitrat dan etambutol atau arginin
yang meningkatkan kelarutan dan permeabilitasnya; (Santos et al., 2019) atau
bahkan menggabungkan API yang berbeda, seperti lidokain dan ibuprofen (Mann et al.,
Rasio yang berbeda dalam komponen campuran dapat memengaruhi
karakteristik fisikokimianya, misalnya, rasio air yang berbeda dapat menyebabkan
modifikasi viskositas media, serta polaritas dan kekuatan interaksi yang tercipta
antara komponen campuran ( Ma et al., 2018; Vilkova et al., 2020). Beberapa
penelitian menguatkan hipotesis bahwa ´ penambahan sejumlah kecil air
berkontribusi untuk memperkuat interaksi (misalnya, ikatan hidrogen, van der
Walls, gaya elektrostatik) antara komponen campuran, mempertahankan
struktur antarmolekulnya yang kompleks. Namun, penambahan air dalam
jumlah besar (hingga 50%) akan menyebabkan disosiasi molekul masing-
masing komponen, mengganggu jaringan campuran dan secara bertahap
menghidrasi molekul dan karenanya
Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862
melarutkan komponen, membentuk larutan berair (Monteiro et al., 2021; Ma et
al., 2018; Vilkova et al., 2020; Roda et al.,
´ 2021; El Achkar et al., 2019; Dai et
al., 2015; Zhekenov et al., 2017; Hammond et al., 2017). Baru-baru ini, Roda
dan rekannya memusatkan perhatian mereka pada pemahaman peran fungsi
air sebagai komponen campuran cairan dengan CA, L-Arg dan air, mengevaluasi
melalui berbagai teknik karakterisasi fisikokimia dan pemodelan termodinamika
peran air dalam campuran. Mereka mengamati bahwa air akan mengarah pada
pembentukan spesies bermuatan dan, juga, bertindak sebagai mediator ikatan
hidrogen untuk L-Arg dan CA (Roda et al., 2021). Dalam studi lain, Monteiro
dan rekan kerjanya mengamati, dengan dinamika molekuler, adanya interaksi
antara CA dan EMB dan berasumsi bahwa molekul air diperlukan untuk
membentuk jaringan ikatan hidrogen yang memberikan kestabilan pada
campuran. Mereka juga memperhatikan bahwa dengan mengubah rasio
komponen campuran cairan, dalam kasus CA:EMB:H2O (1:1:5) meningkatkan
interaksi tambahan melalui ikatan hidrogen. Dengan docking molekuler, penulis
mengeksplorasi lebih lanjut internalisasi EMB melalui transporter ABC
mikobakteri (Rv1819c), menunjukkan internalisasi EMB yang menguntungkan
ketika dalam bentuk campuran cair dengan CA dan/atau L-Arg (Monteiro et al.,
2021 ) .
Mempertimbangkan penelitian yang dilaporkan dengan campuran ini yang
menunjukkan peran berbagai komponen campuran dalam memperkuat
interaksinya, khususnya untuk CA:EMB:H2O (1:1:5). Dalam karya ini, kami
merumuskan dua hipotesis, satu adalah kemungkinan menyiapkan campuran
cairan terapeutik yang stabil yang menggabungkan obat anti-TB yang digunakan
sebagai pengobatan lini pertama, dan yang lainnya adalah untuk membuktikan
kelayakan formulasi ini melalui studi bioaktivitas in vitro, yaitu jika sistem ini
menghadirkan aktivitas antibakteri terhadap Mtb.
3.1.2020).
Kelarutan obat anti TB lini pertama menggunakan cairan terapi berbeda
campuran sebagai pembawa
Campuran cairan terapeutik telah dijelaskan dalam literatur sebagai
campuran yang berpotensi meningkatkan kelarutan API, dan bioavailabilitas
keseluruhannya dan, akibatnya, kemanjuran terapeutiknya. Berbagai jenis studi
dapat dilakukan untuk mengevaluasi efek dari campuran ini pada kelarutan
obat, tergantung apakah API dimasukkan dalam campuran cair (Aroso et al.,
2016; Santos et al., 2019; Stott et al., 1998; Duarte et al., 2017) atau jika
dilarutkan dalam campuran cair, gunakan itu sebagai pembawa (Roda et al.,
2021; Silva et al., 2018; Morrison et al., 2009; Tajmir dan Roosta, 2020 ; Li dan
Lee, 2016). Di sini, kami menggunakan pendekatan terakhir di mana kami
menjenuhkan campuran cairan terapeutik dan PBS
5
Machine Translated by Google
F. Santos dkk.
1
Spektra H NMR dari formulasi cairan terapeutik dengan superposisi spektrum dari 0 dan 6 bulan formulasi. a) CA:EMB:H2O (1:1:5) + RPI
Gambar 3. (1:1:1), b) CA:EMB:H2O (1:1:5) + RPI (2:3:1), c) CA:EMB:H2O (1:1:5) + RPI (2:5:1), d) CA:EMB:H2O (1:1:5) + PZA.
(50:50 w/w) dengan senyawa INH, PZA dan RIF (Gbr. 1).
Mengenai uji kelarutan dengan obat anti-TB, kita dapat mengamati bahwa
campuran dengan rasio molar CA dan air yang lebih tinggi menunjukkan kelarutan
INH yang lebih rendah. Kemungkinan penurunan pH sistem yang lebih tinggi
mempengaruhi kelarutan INH. Yang menunjukkan pembubaran INH yang lebih
baik adalah CA:L-Arg:H2O (1:1:4 dan 1:1:7), menjadi formulasi 1:1:4 yang
menunjukkan sedikit peningkatan kelarutan dibandingkan dengan INH diri.
Berlawanan dengan INH, PZA menghadirkan kelarutan yang lebih baik dalam
campuran dengan rasio CA dan air yang lebih tinggi, lebih baik daripada PZA itu
sendiri. Campuran cairan terapeutik dengan EMB tergabung adalah campuran
yang menunjukkan peningkatan kelarutan PZA, yang penting untuk kemungkinan
penyesuaian kembali dosis PZA yang digunakan dalam terapi TB, karena ini
adalah salah satu obat yang memerlukan dosis lebih tinggi agar efektif melawan
Mtb (Nahid et al., 2016; Claire du Toit et al., 2006). Dalam kasus RIF, tidak
diamati peningkatan kelarutannya, mungkin karena karakteristik intrinsik RIF
karena merupakan molekul berukuran besar dengan struktur kompleks dan
karakter hidrofobik (Motiei et al., 2021; Ermondi et al . , 2021). Namun, meskipun
kelarutan RIF rendah, sistem yang disiapkan dapat melarutkan semua obat anti-
TB lini pertama, yang menunjukkan kemungkinan untuk memformulasikan
campuran cairan terapeutik dengan keempat obat anti-TB, seperti yang
dihipotesiskan dalam penelitian ini. Formulasi yang menggabungkan campuran
cairan terapeutik dan obat anti-TB didasarkan pada sistem CA:EMB:H2O (1:1:5),
karena penelitian sebelumnya (Santos et al., 2019) dan, studi dinamika molekuler
yang memungkinkan untuk amati penguatan interaksi molekuler antar komponen
sistem ini (Monteiro et al., 2021).
6
Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862
3.2. Uji stabilitas fisikokimia formulasi berdasarkan CA:EMB: H2O (1:1:5) dan
obat anti-TB
Untuk lebih memahami bagaimana formulasi berdasarkan CA:EMB:H2O
(1:1:5) dan obat anti-TB mempertahankan strukturnya dari waktu ke waktu, kami
menggunakan teknik yang berbeda (POM, NMR dan FTIR-ATR) untuk
mengevaluasi stabilitas fisikokimia segera setelah persiapan dan 6 bulan
kemudian. Campuran dipertahankan pada suhu kamar (20–25 ÿC), selama
periode ini.
Mikroskop optik terpolarisasi (POM) digunakan untuk mengamati campuran
yang berbeda dengan cross polarizer untuk memverifikasi keberadaan kristal
dalam campuran, mendeteksi apakah campuran itu homogen atau memiliki fase
yang berbeda ( Aroso et al., 2017). Seperti yang dapat kita amati pada Gambar.
2, gambar formulasi cairan di bawah mikroskop terpolarisasi berwarna hitam
pekat, yang berarti bahwa mereka adalah cairan homogen dan tidak menunjukkan
kristal atau endapan dalam formulasi.
Studi NMR dilakukan untuk mengamati apakah terjadi perubahan signifikan
dalam struktur formulasi cairan terapeutik 6 bulan setelah persiapan 1 . Seperti
yang ditunjukkan pada Gambar. 3, NMR H menunjukkan beberapa perbedaan
yang terkait dengan gugus –OH, yang segera setelah persiapan menunjukkan
puncak yang lebih tajam sementara setelah 6 bulan puncak tampak lebih luas. Di dalam
1
H NMR, proton –OH, biasanya cukup dapat dipertukarkan dan penampakan
serta intensitasnya dalam spektrum bergantung pada berbagai faktor seperti
suhu analisis, konsentrasi sampel, pelarut yang digunakan untuk menyiapkan
sampel, antara lain (Charisiadis et al. , 2014). Luasnya gugus –OH dapat
dijelaskan dengan beberapa pertukaran proton gugus –OH dengan proton dari
pelarut. Juga, sedikit variasi dalam konsentrasi campuran ketika NMR dilakukan
dapat berkontribusi pada perluasan puncak dari gugus –OH yang muncul di dekat
garis dasar di semua spektrum dari 6 bulan. Meskipun perbedaan pada
Machine Translated by Google

F. Santos dkk. Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862

Gambar 4 Spektra FTIR-ATR formulasi cair berdasarkan CA:EMB:H2O (1:1:5) dan obat anti TB (a) CA:EMB:H2O (1:1:5), b) CA: EMB:H2O (1:1:5) + RPI (1:1:1), c)
CA:EMB:H2O (1:1:5) + RPI (2:3:1), d) CA:EMB:H2O (1:1:5) + RPI (2:5:1), e) CA: PK:H2O (1:1:5) + PC.

7
Machine Translated by Google

F. Santos dkk. Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862

Tabel 3 terlihat bahwa campuran cairan terapeutik menghadirkan spektrum dengan puncak
Nilai IC50 untuk komponen murni, campuran cairan terapeutik dan formulasi dalam yang luas karena adanya air dalam campuran, terutama di wilayah 1 antara 3600
sel epitel alveolar A549. Hasil dinyatakan sebagai rata-rata ± SD dari setidaknya dan 2800 cmÿ . Namun, juga memungkinkan untuk
tiga percobaan independen yang dilakukan dalam rangkap tiga. mengidentifikasi peregangan –OH dari EMB, CA (-C-OH) dan air di wilayah yang sama di sekitar
1 3550–3200 cmÿ . Ini menegaskan adanya interaksi antarmolekul
Senyawa IC50 (mg/mL) di
sel A549 antara berbagai komponen campuran cairan dalam kelompok ini, dan yang
Komponen Murni Asam sitrat 1,43 ± 0,13 sebelumnya dilaporkan oleh Santos dan rekan kerja melalui 1 H–1 H-NOESY NMR
L-arginin 12,30 ± 0,56 (Santos et al., 2019). Kehadiran gugus –OH dari CA (–COOH) terdeteksi, kira-kira,
Etambutol 21,50 ± 2,94 pada bentangan 3000 cmÿ CA (–COOH) terdeteksi antara 1800 dan 1 dan -C=O
Isoniazid 33,53 ± 1,73
1700 cmÿ puncak antara 1500 dan 1400 cmÿ getaran dari gugus heteroatom. 1, itu
Pirazinamid 31,76 ± 5,59
0,69 ± 0,34 Mengenai kelarutan sejumlah kecil obat 1 tampaknya sesuai dengan peregangan
Rifampisin
anti TB dalam cairan campuran CA:EMB:H2O (1:1:5) kita dapat mengamati dengan
FTIR-ATR bahwa struktur campuran cairan tidak berubah dengan adanya anti-TB
Campuran Cairan Terapi CA:EMB:H2O (2:1:10) 2,86 ± 0,60
CA:EMB:H2O (1:1:5) 3,43 ± 0,55 ini. obat TBC. Mengenai stabilitas formulasi ini dari waktu ke waktu, dari penelitian
CA:EMB:L-Arg:H2O 4,10 ± 0,70 kami tidak ada perbedaan signifikan yang terdeteksi pada spektrum yang dapat
(2:1:1:7) mempengaruhi struktur kimia dari campuran. Dengan demikian, membuktikan
CA:L-Arg:H2O (1:1:4) 5,80 ± 1,45
bahwa mereka cocok untuk digunakan setidaknya selama 6 bulan tanpa
CA:L-Arg:H2O (1:1:5) 5,36 ± 1,33
6,62 ± 1,04
menunjukkan sinyal degradasi atau kehilangan fungsinya karena gangguan ikatan
CA:L-Arg:H2O (1:1:6)
CA:L-Arg:H2O (1:1:7) 6,12 ± 0,86 antarmolekul.
CA:L-Arg:H2O (2:1:7) 3,08 ± 0,99
CA:L-Arg:H2O (2:1:8) 3,24 ± 0,21
CA:L-Arg:H2O (2:1:9) 3,37 ± 0,23
Campuran Cairan Terapi CA:EMB:H2O + RPI 2,59 ± 1,28 3.3. Studi viabilitas sel
Formulasi (1:1:1)
CA:EMB:H2O + RPI 2,51 ± 1,69
Penilaian viabilitas sel sangat penting untuk memahami perilaku campuran yang
(2:3:1)
diformulasikan secara in vitro. Inhibi setengah maksimal
CA:EMB:H2O + RPI 3,10 ± 1,99
(2:5:1) konsentrasi tory (IC50) dinilai dalam garis sel A549, sel epitel alveolar manusia
CA:EMB:H2O + PZA 3,45 ± 0,21 (Tabel 3). Dari hasil yang diperoleh dan IC50 yang dihitung kami mengamati bahwa
di antara komponen murni yang digunakan untuk memformulasi campuran, CA dan
RIF obat anti-TB adalah yang memiliki nilai IC50 lebih rendah. Ini berarti jumlah
luasnya gugus –OH, struktur formulasi cair tampaknya dipertahankan dari waktu ke
senyawa yang lebih sedikit diperlukan untuk menghambat setengah dari viabilitas
waktu.
sel, menunjukkan komponen murni sitotoksisitas yang lebih tinggi daripada ketika
Untuk meneliti lebih lanjut perubahan kimia yang dapat terjadi dalam struktur
digabungkan dalam campuran cair.
formulasi cair dan mengklarifikasi apakah formulasi ini stabil dari waktu ke waktu,
Relatif, nilai yang diperoleh untuk campuran cairan terapeutik yang diformulasikan
spektroskopi inframerah juga dilakukan. Metode ini memungkinkan untuk mendeteksi
sebagian besar berbeda dari yang diperoleh untuk komponen murni. Dari hasil
keberadaan gugus fungsi dan ikatan yang berbeda dan dengan refleksi total yang
yang diperoleh dan meskipun L-Arg menunjukkan nilai IC50 yang lebih rendah
dilemahkan memungkinkan untuk meningkatkan sensitivitas permukaan dan
daripada EMB, ketika dicampur dengan komponen campuran lainnya (CA dan air)
menggunakan sampel cair, seperti formula cair terapeutik. Deteksi perubahan
campuran yang mengandung EMB memiliki IC50 yang sedikit lebih rendah daripada
frekuensi puncak dan intensitasnya dapat menunjukkan perubahan struktur kimia
campuran dengan L-Arg. Rasio molar yang berbeda dari komponen, juga mengubah
campuran. Pada Gambar. 4, kita dapat mengamati tumpang tindih spektrum periode
nilai IC50 secara substansial, menjadi campuran dengan rasio CA yang lebih tinggi
waktu yang berbeda (0 dan 6 bulan). Spektrum pertama menyajikan campuran
menunjukkan nilai IC50 yang lebih rendah dan, akibatnya, sitotoksisitas yang lebih
cairan terapeutik tanpa menambahkan obat anti-TB (INH, RIF, PZA) dan
tinggi, mungkin karena peningkatan keasaman campuran. Peningkatan rasio air
membandingkan spektrum ini dengan komponen murni (Gambar S1) adalah
dalam campuran, secara umum, menyebabkan sedikit peningkatan viabilitas sel.
Untuk campuran cairan terapeutik

Gambar 5 Viabilitas sel dievaluasi dalam makrofag pada 0,625 mg/mL dan 0,080 mg/mL. Data disajikan sebagai rata-rata ± SD (n = 3).

8
Machine Translated by Google

F. Santos dkk. Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862

Gambar 6. Aktivitas intraseluler formulasi cairan terapeutik pada makrofag yang terinfeksi H37Rv. Aktivitas dievaluasi pada titik waktu yang berbeda, selama 9 hari,
menggunakan konsentrasi yang berbeda: 16 ÿg/mL dan 8 ÿg/mL ditambah dosis lain 8 ÿg/mL pada hari ke 3. Unit pembentuk koloni (CFU) ditentukan dengan menghitung
koloni berasal dari bakteri yang masih hidup pada setiap titik waktu. Data disajikan sebagai rata-rata ± SD (n = 3), ****p ÿ 0,0001, jika dibandingkan dengan kontrol.

formulasi diamati penurunan viabilitas sel dibandingkan dengan campuran
cairan awal (CA:EMB:H2O (1:1:5)), karena penambahan sejumlah kecil obat
anti-TB yang berbeda (INH, PZA, RIF) , namun penurunan ini tidak signifikan
secara statistik.
Setelah mengevaluasi viabilitas sel dalam sel A549, viabilitas sel dalam
makrofag THP-1 juga dievaluasi, dengan mempertimbangkan nilai IC50 yang
ditentukan dalam sel A549. Karena nilai IC50 yang lebih rendah ditemukan di
RIF (0,69 ± 0,34) kami menguji viabilitas sel untuk makrofag dengan konsentrasi PZA memberikan kemampuan permeabilitas terendah, hampir merupakan satu-
di bawah IC50 yang ditentukan untuk RIF untuk menjamin bahwa kami
menemukan batas konsentrasi tidak beracun yang dapat digunakan dalam penelitian lebihMengenai
dengan mikobakteri. Gambar 5 menunjukkan viabilitas sel dalam makrofag dari
semua senyawa pada 0,625 mg/mL dan 0,080 mg/mL. Dari hasil yang diperoleh
dapat diamati bahwa RIF bersifat sitotoksik pada 0,625 mg/mL, namun pada
0,080 mg/mL tidak diamati. Oleh karena itu, kita dapat mengasumsikan bahwa
semua campuran cair dan senyawa murni (RIF < 0,080 mg/mL) tidak bersifat
sitotoksik bagi makrofag, karena mereka menghadirkan viabilitas sel hampir
100% (lihat Gambar 6).
3.4. Studi permeasi setelah terpapar formulasi cairan terapeutik
Studi in vitro tentang pengangkutan molekul dan/atau formulasi penting
untuk memperkirakan kemampuan molekul untuk menembus melalui berbagai
model penghalang hidup, sebagai satu lapisan tunggal atau kultur bersama.
Untuk meniru penghalang paru, kami menggunakan sistem transwell yang
memungkinkan pembentukan dua lingkungan mikro yang berbeda (sisi apikal
dan basolateral). Di sisi apikal dibiakkan sel epitel alveolar (A549) sampai
mereka berdiferensiasi dan membentuk lapisan tunggal seluler (model
penghalang), yang membentuk epitel terpolarisasi dan mencegah aliran arus
ion di sepanjang
jalur paraseluler. Setelah paparan campuran cairan terapeutik ke model
penghalang paru, selama 6 jam, kami memperkirakan permeabilitas yang
tampak (Tabel 4) untuk setiap senyawa dan mengamati bahwa obat anti-TB
(EMB, INH, PZA) yang diuji menunjukkan permeabilitas yang lebih tinggi
daripada formulasi cair. . Antara formulasi cairan terapeutik, perbedaan kecil
diamati. Namun, tampaknya ada kecenderungan peningkatan permeabilitas
dengan meningkatnya rasio obat yang ada dalam formulasi. Formulasi dengan
satunya senyawa yang tertahan di sisi apikal.
lanjut. serapan seluler yang diperkirakan untuk setiap formulasi dalam
monolayer seluler A549, kita dapat menyimpulkan bahwa sejumlah besar
senyawa yang dipelajari diinternalisasi oleh sel alih-alih melewati sisi apikal ke
sisi basolateral, yang membenarkan permeasi formulasi yang lebih rendah
melalui model penghalang sel A549.
Selain itu, perkiraan serapan seluler dalam sel A549 menunjukkan bahwa,
dalam kasus formulasi cair, konsentrasi formulasi yang lebih tinggi terakumulasi
di dalam sel dalam konsentrasi non-toksik daripada meresap dari sisi apikal ke
sisi basolateral, kecuali untuk formulasi dengan PZA. yang tersisa di sisi apikal.
Permeabilitas formulasi melalui model penghalang paru ini lebih rendah
dibandingkan dengan obat murni, dihipotesiskan bahwa formulasi tetap berada
di epitel dan tidak diserap ke sirkulasi sistemik, tetap berada di tempat infeksi.
3.5. Aktivitas antimikroba di H37Rv
Aktivitas antimikroba dievaluasi secara in vitro untuk Mtb strain H37Rv yang
rentan terhadap obat dengan konsentrasi yang terbukti tidak beracun untuk garis
sel (16 – 0,125 ÿg/mL), dan nilai penghambatan minimal

9
Machine Translated by Google

F. Santos dkk. Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862

Tabel 4 (Aliansi, 2008; Aliansi, 2008; Aliansi, 2008; Aliansi, 2008). RIF dan INH adalah yang
Perkirakan permeabilitas yang tampak dan serapan seluler dari uji transwell, memberikan efek yang lebih nyata terhadap Mtb (H37Rv). Mengenai campuran cairan
menggunakan monolayer seluler A549 sebagai membran. terapeutik yang memiliki EMB dalam komposisinya adalah yang menunjukkan aktivitas
Menggabungkan Karton Terakhir Terakhir Perkiraan yang lebih baik terhadap H37Rv, menjadi yang memiliki rasio CA dan air yang lebih
(10-5 Konsentrasi Konsentrasi serapan rendah (CA: EMB:H2O (1:1:5)) yang menyajikan kinerja yang lebih baik terhadap
cm/dtk) pada sisi apikal di basolateral seluler H37Rv (2 ÿg/mL). Mengenai formulasi yang disiapkan dengan campuran cairan
(mg/mL)* sisi (mg/mL) (mg/mL)
apeutik CA:EMB:H2O (1:1:5) dan jumlah obat anti-TB yang berbeda, aktivitas serupa
Etambutol 2.484 – – –
diamati dibandingkan dengan cairan apeutik saja, dengan pengecualian formulasi
±
yang hanya ditambahkan PZA yang membutuhkan konsentrasi lebih tinggi untuk
1.279
Isoniazid 1.663 – – – menghambat pertumbuhan bakteri.
±
0,316
3,007 – – –
Pirazinamid
±
3.6. Efek pada Mtb (H37Rv) selama infeksi pada makrofag
0,896
0,339 – – –
Rifampisin
± Infeksi makrofag THP-1 dengan H37Rv dan perawatan posterior dengan formulasi
0,068 dilakukan untuk mengevaluasi efek formulasi dalam kelangsungan hidup intraseluler
0,714 – – –
CA:EMB:H2O Mtb . Konsentrasi terpilih yang diuji tidak mempengaruhi viabilitas makrofag, seperti
(1:1:5) ±
0,472 yang diharapkan dari studi viabilitas yang ditunjukkan sebelumnya dan berada dalam
CA:EMB:H2O 0,656 0,016 0,009 1.237 kisaran MIC yang diuji. Dua pendekatan diikuti. Dosis tunggal 16 ÿg/mL diberikan
+RPI ± kepada makrofag yang terinfeksi serta dua dosis 8 ÿg/mL, satu dosis pada hari ke-0
(1:1:1) 0,318
ditambah dosis baru 8 ÿg/mL pada hari ke-3 pasca infeksi. Diamati bahwa
CA:EMB:H2O 0,659 0,038 0,050 1.223
dibandingkan dengan kontrol, campuran dan formulasi menunjukkan aktivitas
+RPI ±
(2:3:1) 0,484 antibakteri terhadap H37Rv menurunkan CFU selama seluruh waktu percobaan,
CA:EMB:H2O 0,715 0,086 0,049 1.272 menghambat pertumbuhan bakteri hingga setidaknya 9 hari kultur. Menarik juga untuk
+RPI ± diamati bahwa meskipun pola aktivitas antibakteri yang disajikan serupa, pengobatan
(2:5:1) 0,503
dengan dosis awal 8 ÿg/mL dan penguatan setelah 3 hari dengan tambahan 8 ÿg/mL
CA:EMB:H2O 0,292 1.085 0,003 0,220
+ PZA ± disajikan kurang efektif daripada pemberian dosis tunggal yang lebih tinggi pada awal
0,113 infeksi (16 ÿg/mL).

*Nilai indikatif, diperkirakan dari satu replika.

Seperti yang diharapkan, dengan peningkatan rasio obat anti-TB yang dilarutkan
Tabel 5 dalam campuran cairan terapeutik terlihat peningkatan aktivitas anti bakteri terhadap
MIC dan MBC ditentukan secara in vitro pada mycobacterium tuberculosis (H37Rv), H37Rv.
setelah 7 hari pengobatan. Efek yang lebih menonjol terhadap pertumbuhan Mtb diamati dengan pemberian
MIC MBC MIC MBC dosis tunggal yang lebih tinggi di awal, bila dibandingkan dengan kontrol, yang dapat
Menggabungkan Menggabungkan
(ÿg/mL) (ÿg/mL) (ÿg/ (ÿg/ menjadi keuntungan untuk menyesuaikan rejimen terapeutik dan, misalnya, untuk
mL) mL) meningkatkan kepatuhan terhadap pasien terhadap pengobatan.
Asam sitrat >16 >16 CA:L-Arg:H2O >16 t
(1:1:5)
L-arginin >16 >16 CA:L-Arg:H2O >16 t 4. Kesimpulan
(1:1:6)
Etambutol 1 2 CA:L-Arg:H2O >16 >16
(1:1:7)
Campuran cairan terapeutik sebagai sistem eutektik dalam telah dipelajari sebagai
Isoniazid <0,125 <0,125 CA:L-Arg:H2O >16 t pendekatan yang lebih berkelanjutan untuk mengatasi terapi tuberkulosis,
(2:1:7) meningkatkan sifat obat anti-tuberkulosis yang ada. Seperti yang dibuktikan oleh
Pirazinamid >16 >16 CA:L-Arg:H2O >16 t
penelitian ini, campuran cairan terapeutik dan formulasinya menunjukkan stabilitas
(2:1:8)
fisikokimia hingga 6 bulan, aktivitas terapeutik terhadap Mtb (H37Rv) dan juga
Rifampisin <0,125 0,25 CA:L-Arg:H2O >16 >16
(2:1:9) meningkatkan kelarutan pirazinamid menggunakan campuran cairan terapeutik. Untuk
CA:EMB:H2O 4 8 CA:EMB:H2O 2 4 menjawab kelemahan terapi tuberkulosis, campuran ini menampilkan dirinya sebagai
(2:1:10) +RPI (1:1:1) pendekatan yang lebih berkelanjutan yang berpotensi berkontribusi pada pengobatan
CA:EMB:H2O 2 4 CA:EMB:H2O 2 4
TB.
(1:1:5) +RPI (2:3:1)
CA:EMB:L-Arg: 4 8 CA:EMB:H2O 2 4
H2O (2:1:1:7) +RPI (2:5:1)
CA:L-Arg:H2O >16 t CA:EMB:H2O 2 8 Pernyataan kontribusi kepengarangan CRedit
(1:1:4) + PZA

*dan tidak ditentukan.
konsentrasi (MIC) dan konsentrasi bakterisidal minimal (MBC) dihitung dan disajikan
pada Tabel 5.
Dari penentuan nilai MIC dan MBC kami mengamati beberapa variabilitas dalam
komponen murni, seperti yang diharapkan obat anti-TB lebih efektif dan dengan MIC
dan MBC lebih rendah dari CA dan L-Arg , dengan pengecualian PZA yang diketahui
hanya menjadi aktif pada nilai pH rendah (Salfinger dan Heifets, 1988). Selanjutnya,
nilai yang dilaporkan untuk obat anti TB sesuai dengan penelitian sebelumnya yang
disajikan dalam literatur
Filipa Santos: Konseptualisasi, Investigasi, Metodologi, Kurasi Data, Witting –
draft asli. David Pires: Konseptualisasi, Investigasi, Metodologi, Kurasi Data, Witting
– draf asli.
Elsa Anes: Konseptualisasi, Analisis formal, Akuisisi pendanaan, Pengawasan,
Validasi, Penulisan – review & editing. Ana Rita C.
Duarte: Konseptualisasi, Analisis formal, Akuisisi pendanaan, Pengawasan, Validasi,
Penulisan – review & editing.
Deklarasi Kepentingan Bersaing
Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak mengetahui persaingan finansial

10
Machine Translated by Google
F. Santos dkk.
kepentingan atau hubungan pribadi yang dapat memengaruhi pekerjaan yang
dilaporkan dalam makalah ini.
Ketersediaan data
Data akan tersedia berdasarkan permintaan.
Terima kasih
Proyek ini telah menerima dana dari Hori zon Uni Eropa 2020 (European
Research Council) berdasarkan perjanjian hibah No ERC 2016-CoG 725034
dan didukung oleh Associate Laboratory for Green Chemistry-LAQV yang
dibiayai oleh dana nasional dari FCT/ MCTES (UIDB /50006/2020) dan dari
hibah dari National Foundation for Science, FCT Fundaçao ˜ para a Ciˆencia e
Tecnologia – Portugal, PTDC/SAU-INF/28182/2017 ke EA, UID/DTP/04138/2019
(ke IMed- UL Lisboa). Kami juga berterima kasih atas dukungan ADEIM-FFUL
(Associaç˜ ao para o Ensino ea Investigaçao em Microbiologia).
˜ Pengobatan antibiotik tuberkulosis: masalah lama, solusi baru. Mikroba 3 (6), 285–292.
Lampiran A. Data tambahan
Data tambahan untuk artikel ini dapat ditemukan online di https://doi. org/10.1016/
j.ijpharm.2023.122862.
Referensi
Abbott, AP, Ahmed, EI, Prasad, K., Qader, IB, Ryder, KS, 2017. Cair
formulasi obat-obatan dengan pembentukan eutektik. Kesetimbangan Fase Fluida. 448, 2–8.
https://doi.org/10.1016/j.fluid.2017.05.009.
Aliansi, TB, 2008. Isoniazid. Tuberkulosis 88 (2), 112–116. https://doi.org/10.1016/
S1472-9792(08)70011-8.
Aliansi, TB, 2008. Rifampisin. Tuberkulosis 88 (2), 151–154. https://doi.org/10.1016/
S1472-9792(08)70024-6.
Aliansi, TB, 2008. Ethambutol. Tuberkulosis 88 (2), 102–105. https://doi.org/ 10.1016/
S1472-9792(08)70008-8.
Aliansi, TB, 2008. Pirazinamid. Tuberkulosis 88 (2), 141–144. https://doi.org/
10.1201/9781315152110.
´
Alvarez, MS, Zhang, Y., 2019. Membuat sketsa pelarut neoterik untuk meningkatkan
bioavailabilitas obat. J.Kontrol. Rilis 311–312, 225–232. https://doi.org/10.1016/j.
jconrel.2019.09.008. ˆ dan potensinya sebagai kendaraan kelarutan obat. Int. J.
Aroso, IM, Craveiro, R., Rocha, A., et al., 2015. Desain sistem pelepasan terkontrol untuk THEDES
- Pelarut eutektik dalam terapeutik, menggunakan teknologi cairan superkritis.
Int. J. Farmasi. 492 (1–2) https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2015.06.038.
Aroso , IM , Silva , JC , Mano , F. , dkk
bahan farmasi dengan sistem eutektik terapeutik dalam 98, 57–66. https://doi.org/10.1016/
j.ejpb.2015.11.002 .
Aroso, IM, Paiva, A., Reis, RL, Duarte, ARC, 2017. Pelarut eutektik dalam alami dari kolin klorida
dan betaine – Sifat fisikokimia. J.Mol. Liq. 241, 654–661. https://doi.org/10.1016/
j.molliq.2017.06.051.
Bahuguna, A., Rawat, DS, 2020. Gambaran umum obat antituberkulosis baru, obat
kandidat, dan target mereka. Kedokteran Res. Wahyu 40 (1), 263–292. https://doi.org/
10.1002/med.21602.
Barros, AA, Silva, JM, Craveiro, R., Paiva, A., Reis, RL, Duarte, ARC, 2017. Pelarut hijau untuk
meningkatkan proses impregnasi dalam biomedis. Curr Opin Green Sustain Chem. 5, 82–
87. https://doi.org/10.1016/j.cogsc.2017.03.014.
Charisiadis, P., Kontogianni, VG, Tsiafoulis, CG, Tzakos, AG, Siskos, M.,
Gerothanassis, IP, 2014. 1H-NMR sebagai alat struktural dan analitik ikatan hidrogen intra
dan intermolekul produk alami dan senyawa model yang mengandung fenol. Molekul 19,
13643–13682. https://doi.org/10.3390/molekul190913643 .
Claire du Toit, L., Pillay, V., Danckwerts, MP, 2006. Kemoterapi tuberkulosis: pendekatan
pemberian obat saat ini. Bernafas. Res. 7 (118), 1–18. https://doi.org/
10.1186/1465-9921-7-118.
Costa, A., Pinheiro, M., Magalh˜ aes, J., et al., 2016. Formulasi obat nano untuk mengobati
tuberkulosis. Lanjut Pengiriman Obat. Wahyu 102, 102–115. https://doi.org/10.1016/
j.addr.2016.04.012 .
Dai, Y., Witkamp, GJ, Verpoorte, R., Choi, YH, 2015. Menyesuaikan sifat pelarut eutektik dalam
alami dengan air untuk memfasilitasi aplikasinya. Makanan Kimia. 187, 14–19. https://doi.org/
10.1016/j.foodchem.2015.03.123.
Duarte, ARC, Ferreira, ASD, Barreiros, S., Cabrita, E., Reis, RL, Paiva, A., 2017.
Perbandingan antara bahan farmasi aktif murni dan pelarut eutektik terapeutik dalam: Studi
kelarutan dan permeabilitas. eur. J. Farmasi. Biofarm. 114, 296–304. https://doi.org/10.1016/
j.ejpb.2017.02.003.
Durand, E., Lecomte, J., Villeneuve, P., 2016. Dari kimia hijau ke alam: peran serbaguna
campuran suhu transisi rendah. Biochimie 120, 119–123. https://doi.org/10.1016/
j.biochi.2015.09.019.
11
Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862
El Achkar, T., Fourmentin, S., Greige-Gerges, H., 2019. Pelarut eutektik dalam: sebuah
gambaran tentang interaksi mereka dengan air dan senyawa biokimia. J.Mol. Liq. 288, 111028
https://doi.org/10.1016/j.molliq.2019.111028.
Ermondi, G., Vallaro, M., Saame, J., et al., 2021. Rifampisin sebagai contoh senyawa di luar
aturan-5: ionisasi di luar air dan lipofilisitas di luar oktanol/air. eur. J. Farmasi. Sains. 161 ,
105802 https://doi.org/10.1016/j.ejps.2021.105802.
Farah, SI, Abdelrahman, AA, Utara, EJ, Chauhan, H., 2016. Peluang dan
tantangan untuk produk alami sebagai agen antituberkulosis baru. Pengujian Obat Dev.
Technol. 14 (1), 29–38. https://doi.org/10.1089/adt.2015.673.
Francisco, M., Bruinhorst, AVD, Kroon, MC, 2013. Suhu Transisi Rendah
Campuran (LTTMs): generasi baru pelarut desainer. Angew. Chemie - Int Ed. 52 (11), 3074–
3085. https://doi.org/10.1002/anie.201207548.
Jenewa: Organisasi Kesehatan Dunia. Laporan Tuberkulosis Global 2021.; 2021.
Hammond, OS, Bowron, DT, Edler, KJ, 2017. Efek air pada struktur nano pelarut eutektik dalam:
transisi yang tidak biasa dari campuran ionik ke larutan berair.
Angelw. Kimia – Int. Ed.56 (33), 9782–9785. https://doi.org/10.1002/anie.201702486 .
Hussain, A., Singh, S., Das, SS, Anjireddy, K., Karpagam, S., Shakeel, F., 2019.
Obat nano sebagai pembawa pengiriman obat obat anti-tuberkulosis: dari patogenesis hingga
pengendalian infeksi. Kur. Pengiriman Obat. 16 (5), 400–429. https://doi.org/10.2174/
1567201816666190201144815.
Jain, SK, Lamichhane, G., Nimmagadda, S., Pomper, MG, Bishai, WR, 2008.
https://doi.org/10.1128/MICROBE.3.285.1.
Li, Z., Lee, PI, 2016. Investigasi peningkatan kelarutan obat menggunakan pelarut eutektik dalam
dan turunannya. Int. J. Farmasi. 505 (1–2), 283–288. https://doi.org/ 10.1016/
j.ijpharm.2016.04.018.
Ma, C., Laaksonen, A., Liu, C., Lu, X., Ji, X., 2018. Efek aneh air pada cairan ionik dan pelarut
eutektik dalam. kimia Soc. Wahyu 47, 8685–8720. https://doi.org/ 10.1039/c8cs00325d.
Machado, D., Pires, D., Perdig˜ ao, J., et al., 2016. Pemblokir saluran ion sebagai agen antimikroba,
penghambat efflux, dan peningkat aktivitas pembunuhan makrofag terhadap mycobacterium
tuberculosis yang resistan terhadap obat. PLoS Satu 11 (2), 1–28. https://doi.org/ 10.1371/
journal.pone.0149326.
Mann, SK, Pham, TN, McQueen, LL, Lewandowski, JR, Brown, SP, 2020. Mengungkap struktur
dan dinamika ikatan hidrogen antarmolekul dalam farmasi eutektik dalam dengan
spektroskopi NMR pemintalan sudut ajaib. Mol. Farmasi. 17 (2), 622–631. https://doi.org/
10.1021/acs.molpharmaceut.9b01075.
Marimani, M., Ahmad, A., Duse, A., 2018. Peran faktor epigenetik, bakteri dan host dalam
perkembangan infeksi Mycobacterium tuberculosis. Tuberkulosis 113, 200–214. https://
doi.org/10.1016/j.tube.2018.10.009.
Mehta, JB, Dutt, AK, 2016. Epidemiologi dan faktor inang. Mikrobiol. Spektr. 4 (6) https://doi.org/
10.1128/microbiolspec. TNM17-0018-2016.
Monteiro H., Santos F., Paiva A., Duarte ARC, Ferreira RJ, 2021. Molekuler
studi dinamika campuran cairan terapeutik dan pengikatannya pada mikobakteri.
Depan. Pharmacol. 12, 1–11. https://doi.org/10.3389/fphar.2021.626735.
Morrison, HG, Sun, CC, Neervannan, S., 2009. Karakterisasi perilaku termal pelarut eutektik dalam
Farmasi. 378 (1–2), 136–139. https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2009.05.039.
Motiei, M., Gouveia, LP, Sopík, T., et al., 2021. Pengembangan sistem pengiriman rifampisin
berbasis nanopartikel. Molekul 26 (2067), 1–19. https://doi.org/10.3390/
molekul26072067 .
Nahid, P., Dorman, SE, Alipanah, N., et al., 2016. Official American Thoracic Society/ Centers for
Disease Control and Prevention/ Infectious Diseases Society of America Clinical Practice
Guidelines: Pengobatan tuberkulosis yang rentan terhadap obat. Klinik. Menulari.
Mengatakan. Pedoman IDSA. 63, 147–195. https://doi.org/10.1093/cid/ciw376.
Nathan, C., Barry, CE, 2015. Pengembangan obat TB: imunologi di meja. Imunol.
Wahyu 264 (1), 308–318. https://doi.org/10.1111/imr.12275.
Pereira, CV, Silva, JM, Rodrigues, L., et al., 2019. Mengungkap potensi antikanker dari pelarut
eutektik terapeutik berbasis limonene. Sains. Rep. 9 (1), 1–11. https://doi. org/10.1038/
s41598-019-51472-7.
Perna, FM, Vitale, P., Capriati, V., 2020. Pelarut eutektik dalam dan aplikasinya sebagai pelarut
hijau. Curr Opin Green Sustain Chem. 21, 27–33. https://doi.org/10.1016/j.cogsc.2019.09.004 .
Roda, A., Santos, F., Matias, AA, Paiva, A., Duarte, ARC, 2020. Desain dan pemrosesan formulasi
pemberian obat dari sistem eutektik terapeutik dalam untuk tuberkulosis.
J. Superkrit. Cairan 161, 104826. https://doi.org/10.1016/j.supflu.2020.104826.
Roda, A., Paiva, A., Duarte, ARC, 2021. Formulasi cair terapeutik berdasarkan campuran suhu
transisi rendah untuk penggabungan obat antiinflamasi.
Farmasi 13 (1620), 1–16. https://doi.org/10.3390/pharmaceutics13101620.
Roda, A., Santos, F., Chua, YZ, et al., 2021. Mengurai sifat asam sitrat : L arginin : campuran
air: peran bifungsional air. PCCP 23, 1706–1717. https://doi.org/10.1039/d0cp04992a.
Salfinger, M., Heifets, LB, 1988. Penentuan MIC pirazinamid untuk
Mycobacterium tuberculosis pada pH yang berbeda dengan metode radiometrik.
Antimikroba. Agen Kemoterapi. 32 (7), 1002–1004. https://doi.org/10.1128/ AAC.32.7.1002.
PP Salvatore, Y. Zhang, Tuberkulosis: dasar molekuler patogenesis, dalam: Modul Referensi
dalam Ilmu Biomedis, Elsevier Inc.; 2017, hlm. 1-15. doi:10.1016/b978-0-
12-801238-3.95697-6.
Santana, APR, Mora-Vargas, JA, Guimaraes, ˜ TGS, Amaral, CDB, Oliveira, A.,
Gonzalez, MH, 2019. Sintesis berkelanjutan dari pelarut eutektik dalam alami (NADES)
dengan metode yang berbeda. J.Mol. Liq. 293, 111452 https://doi.org/10.1016/j.
molliq.2019.111452.
Machine Translated by Google
F. Santos dkk.
˜
Santos, F., Leitao, MIPS, Duarte, ARC, 2019. Properti pelarut eutektik terapeutik dalam L-
arginin dan etambutol untuk pengobatan tuberkulosis. Molekul 24 (1). https://doi.org/
10.3390/molecules24010055.
Santos, F., Leit˜ ao, MIPS, Duarte, ARC, 2019. Properti Pelarut Eutektik Dalam Terapi
Pengobatan Tuberkulosis. Molekul 24 (55), 1–12. https://doi.org/ 10.3390/
molecules24010055.
Sarathy, J., Dartois, V., Lee, E., 2012. Peran mekanisme transportasi dalam
Resistensi dan toleransi obat Mycobacterium tuberculosis. Farmasi. 5 (11), 1210–1235.
https://doi.org/10.3390/ph5111210.
Silva, E., Oliveira, F., Silva, JM, Matias, A., Reis, RL, Duarte, ARC, 2020. Desain THEDES
yang optimal berdasarkan alkohol perillyl dan ibuprofen. Ilmu farmasi. 12 (11), 1121.
https://doi.org/10.3390/pharmaceutics12111121.
Silva, E., Oliveira, F., Silva, JM, Reis, RL, Duarte, ARC, 2021. Menguraikan
sifat bioaktif dari pelarut eutektik terapeutik dalam berdasarkan terpen alami.
Kur. Res. kimia Biol. 1, 100003 https://doi.org/10.1016/j.crchbi.2021.100003.
Silva, JMM, Reis, RL, Paiva, A., Duarte, ARC, 2018. Desain pelarut eutektik dalam terapeutik
fungsional berdasarkan kolin klorida dan asam askorbat. Keberlanjutan ACS.
kimia Eng. 6 (8), 10355–10363. https://doi.org/10.1021/acssuschemeng.8b01687.
Smith, I., 2003. Patogenesis Mycobacterium tuberculosis dan penentu virulensi molekuler.
Klinik. Mikrobiol. Wahyu 16 (3), 463–496. https://doi.org/10.1128/
CMR.16.3.463-496.2003.
Stott, PW, Williams, AC, Barry, BW, 1998. Pengiriman transdermal dari eutektik
sistem: Peningkatan perembesan obat model, ibuprofen. J.Kontrol. Rilis 50 (1–3), 297–
308. https://doi.org/10.1016/S0168-3659(97)00153-3.
12
Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862
Tajmir, F., Roosta, A., 2020. Kelarutan cefixime dalam campuran air pelarut eutektik dalam
dari studi eksperimental dan pemodelan. J.Mol. Liq. 303, 112636 https://doi.org/10.1016/
j.molliq.2020.112636 .
Vieira, ACC, Chaves, LL, Pinheiro, S., et al., 2018. Nanopartikel lipid padat berlapis kitosan
mukoadhesif untuk pengelolaan tuberkulosis yang lebih baik. Int. J. Farmasi. 536 (1),
478–485. https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2017.11.071.
´
Vilkova, M., Pÿotka-Wasylka, J., Andruch, V., 2020. Peran air dalam ekstraksi pelarut-basa
eutektik dalam. J.Mol. Liq. 304, 112747 https://doi.org/10.1016/j. molliq.2020.112747.
Wallis, RS, Hafner, R., 2015. Memajukan terapi host-directed untuk tuberkulosis. Nat.
Pendeta Immunol. 15 (4), 255–263. https://doi.org/10.1038/nri3813.
Yiin, CL, Quitain, AT, Yusup, S., Sasaki, M., Uemura, Y., Kida, T., 2016.
Karakterisasi campuran suhu transisi rendah alami (LTTM): pelarut hijau untuk
delignifikasi biomassa. Bioresour. Technol. 199, 258–264. https://doi. org/10.1016/
j.biortech.2015.07.103.
Zainal-Abidin, MH, Hayyan, M., Ngoh, GC, Wong, WF, Looi, CY, 2019. Perbatasan yang
muncul dari pelarut eutektik dalam dalam penemuan obat dan sistem penghantaran obat.
J.Kontrol. Rilis 316, 168–195. https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2019.09.019.
Zakrewsky, M., Banerjee, A., Apte, S., et al., 2016. Pelarut eutektik dalam kolin dan geranat
sebagai agen antiseptik spektrum luas untuk aplikasi pencegahan dan terapeutik.
Lanjut Kesehatanc. Mater. 5 (11), 1282–1289. https://doi.org/10.1002/adhm.201600086 .
Zhekenov, T., Toksanbayev, N., Kazakbayeva, Z., Shah, D., Mjalli, FS, 2017. Pembentukan
pelarut eutektik dalam tipe III dan efek air pada interaksi antarmolekulnya.
Kesetimbangan Fase Fluida. 441 , 43–48 . https://doi.org/10.1016/j.
fluid.2017.01.022.