Bioqumica inmunolgica

2. Las inmunoglobulinas. Estructura, propiedades y funciones biolgicas.

Protena (Densitometra)
Protenas IgG IgA IgM IgD

+
Albmina

Movilidad electrofortica

Las inmunoglobulinas se encuentran en la regin de las gammaglobulinas

Anticuerpos = inmunoglobulinas globulinas

Protenas de estructura globular sintetizadas por clulas del sistema inmune (Linfocitos B y clulas plasmticas derivadas de ellos. Presentes en la sangre (plasma) y otros fluidos biolgicos (saliva, lgrimas, secrecin mucosa intestinal, lquido sinovial, lquido intersticial etc.) En el plasma se detectan dentro de la fraccin de las globulinas. Capaces de reconocer a otras molculas (antgenos) de manera muy especfica, y formar complejos estables con ellos (inmunocomplejos). Su aparicin en plasma forma parte de la respuesta inmunolgica adaptativa, en lo que se conoce como respuesta humoral especfica. Los anticuerpos tienen una vida media en el organismo relativamente larga (varias semanas). Constituyen una defensa muy eficaz contra agentes patgenos.

La estructura bsica de las inmunoglobulinas b

Dos cadenas pesadas (50 KDa), idnticas entre s

N N

Dos cadenas ligeras (25 KDa), idnticas entre s

Cadena pesada C C
Eje de simetra simetr

Las cadenas estn unidas por uno o varios puentes disulfuro Glicoprotenas

N N

Cadena ligera

Tipos de inmunoglobulinas
Existen 5 tipos bsicos de inmunoglobulinas: IgG, IgM, IgA, IgD, IgE. b Son sintetizadas por los linfocitos B (IgM, IgD) y por las clulas plasmticas derivadas de ellos (IgG, IgA, IgE). IgM e IgG se detectan principalmente en el plasma sanguneo y en el lquido intersticial Las IgA aparecen fundamentalmente en secreciones (saliva, lgrimas, secrecin intestinal, etc.), recubriendo mucosas expuestas al ataque de agentes patgenos externos. La IgD es una inmunoglobulina asociada a la membrana de los linfocitos B. Su funcin primaria de las es la de servir como detectores de antgenos para las clulas B. Se detecta marginalmente en el plasma. Las IgE son anticuerpos que, si bien inicialmente se liberan al plasma por las clulas plasmticas, son integrados en la membrana de otras clulas (mastocitos), participando en las reacciones de hipersensibilidad.

Caractersticas estructurales Caracter

Formas polimerizadas que aparecen en el hombre SC = Componente secretor (60.000 Da) J = Protena de unin(J: join; 20.000 Da)

Tipo

Cadena pesada (H) 55.000

Cadena ligera (L) (MG 22.500) = =

SIgA

IgG IgA (SIgA)

= SC SC = SC SC

IgM IgD IgE

extended

compact

Inmunoglobulinas monomricas
En solucin en el soluci plasma y otros fluidos biolgicos biol

Asociadas a membrana de linfocitos B

Asociada a membrana de las clulas cebadas c

Inmunoglobulinas multimricas

Estructura tridimensional de la Inmunoglobulina G

Cadena ligera Cadena ligera

Cadena pesada Cadena pesada

Polisacrido

Estructura en dominios de las inmunoglobulinas

Regin Regi variable

Regin Regi constante

Dos dominios variables (VH, VL) y cuatro dominios constantes (CL, CH1, CH2, CH3)

Reconocimiento antgeno-anticuerpo

Identificacin del dominio de Identificaci unin a los antgenos uni ant

2 x Fab Digestin con papana Fc

Digestin con bromelana

F(ab)2

Fab, F(ab)2: antigen binding fragment: zona de unin a antgenos Fab, F(ab) Fc: crystaline fragment: zona constante que interacciona con Fc:

receptores celulares

Experimento que permiti visualizar las estructuras de los permiti visualizar complejos antgeno anticuerpo ant

Molcula orgnica de pequeo tamao (antgeno), que es administrado a un conejo con el fin de producir anticuerpos especficos contra l

Anticuerpos que reconocen a la molcula orgnica Sntesis qumica de una molcula que contiene dos veces el mismo determinante antgenico

Estructuras que se observan al microscopio electrnico al incubar electr antgenos y anticuerpos ant

Antgeno con dos determinantes antignicos iguales

Los anticuerpos muestran una extraordinaria especificidad por los antgenos... los ant
Radical ( R ) sulfonato arsenato carboxilato

Tipo de antgeno

Respuesta que se obtiene cuando se evala la respuesta de Igs producidas al inmunizar con cido 3-aminobenzeno sulfnico, frente a anlogos

Los anticuerpos muestran una extraordinaria especificidad por los antgenos... los ant

Por qu son tan especficos los anticuerpos...?

1) Porque el antgeno encaja en el locus de reconocimiento del anticuerpo

El reconocimiento del antgeno por el anticuerpo tiene lugar en un locus especfico constituido por los extremos de la cadena ligera y pesada, en la que encaja el antgeno y que permite se ponga de manifiesto toda una serie de fuerzas que mantendrn unidos antgeno y anticuerpo. La zona de reconocimiento por parte del Ac es de tamao limitado (10 aa)

2) El reconocimiento eficaz (y con ello la especificidad) se basan en que exista entre antgeno y anticuerpo una interaccin tal que las fuerzas de atraccin superen a las de repulsin, de manera que el complejo que se forme sea estable

Inmunocomplejo estable si atraccin > repulsin

Inmunocomplejo no estable si atraccin < repulsin

Qu fuerzas mantienen juntos al antgeno y a los anticuerpos? Qu ant

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Distancia relativa a la que actan estas fuerzas act

Puentes hidrgeno hidr

Electrostticas Electrost

Van der Waals

Hidrofbicas Hidrof

La interaccin entre antgeno y anticuerpo es un equilibrio qumico interacci ant qu al que puede aplicarse la Ley de Accin de Masas Acci

Las constantes de afinidad son del orden de 1010

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Cuando el anticuerpo es multivalente, la Ke global puede ser mayor que la del fragmento Fab; de esta manera, incluso con una afinidad baja, una IgM puede ser eficaz para unirse a antgenos.

Reacciones de precipitacin antgeno-anticuerpo

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Antgenos: molculas capaces de provocar una respuesta del sistema inmune, Ant mol Si la respuesta es de tipo humoral resultar en la produccin de anticuerpos humoral resultar producci contra l

Cuando el antgeno es grande, el anticuerpo solo ant puede reconocer una parte de l (determinante (determinante antignico o epitopo) antig epitopo)

La naturaleza de los inmunocomplejos formados depende de la proporcin relativa de antgeno y de anticuerpo

1. En exceso de anticuerpo se forman inmunocomplejos de tamao moderado tama 2. En exceso de antgeno, los inmunocomplejos ant son tambin de tamao moderado tambi tama 3. Cuando antgeno y anticuerpo se encuentran en ant una proporcin adecuada,los complejos proporci formados son de gran tamao, y por tanto tama insolubles

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Inmunoprecipitacin: Las concentraciones relativas de anticuerpo y de antgeno Inmunoprecipitaci ant influyen en el tamao de los complejos antgeno-anticuerpo que se forman. tama ant geno-

exceso de anticuerpo (no se forma precipitado) cantidad de precipitado precipitado visible

exceso de antgeno (no se forma precipitado) ant

punto de equivalencia

cantidad de antgeno aadida a una cantidad fija de anticuerpo

Mtodos analticos basados en la inmunoprecipitacin

Cualitativos: Doble inmunodifusin inmunodifusi Inmunoelectroforesis en contracorriente Cuantitativos Inmunodifusin radial Inmunodifusi Inmunoelectroforesis rocket

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Fundamento de la doble inmunodifusin

Antgeno

Anticuerpo

Inmunoprecipitado

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Inmunodifusin radial
Patrn 4 Patr Patrn 3 Patr Problema Patrn 2 Patr

Patrn 1 Patr

Patrn 5 Patr

Inmunoelectroforesis

+
contracorriente

+
rocket

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Funciones biolgicas de los anticuerpos

Principales funciones efectoras de los anticuerpos:

1. Neutralizacin

2. Opsonizacin

3. Fijacin y activacin del complemento

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1. Neutralizacin:
Toxinas

Bacterias

Virus

Aglutinndolas y bloqueando su movilidad

Anticuerpos neutralizantes

Anticuerpos neutralizantes, que bloquean su infectividad

2. Opsonizacin: facilitan la fagocitosis

Las bacterias que poseen cpsula o envoltorio se resisten a ser fagocitadas por los neutrfilos

La unin de anticuerpos a la cpside bacteriana permite se una al anticuerpo (regin Fc) la protena del complemento C3b

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Las bacterias as sealizadas son fagocitadas por los neutrfilos e incorporadas a los fagolisosomas

La generacin de especies reactivas de O2 en el interior del fagolisosoma lleva a la destruccin de la bacteria

Generacin de ROS por sistemas enzimticos (NADPH oxidasa) que reducen el O2

Fagocitosis de bacterias

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3. Fijacin y activacin del complemento:

C3

C3b

C5 C5a C5b

Lisis de un paramecio mediada por anticuerpos y complemento

20

Principales funciones efectoras de los anticuerpos

IgG

Distribucin de las inmunoglobulinas en el organismo

IgM

IgA

IgG, IgE

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Abundancia relativa de las inmunoglobulinas en el plasma humano

IgA IgG
1250mg/100ml 210mg/100ml

IgM
150mg/100ml

IgE
0,03mg/100ml IgG IgA IgM IgD IgE 1000-1500 mg/dl 1000mg/dl 250-300 mg/dl 250mg/dl 100-150 mg/dl 100mg/dl 0,3-30 mg/dl 0,3- mg/dl 1,5-200 g/dl 1,5-

IgD
3mg/100ml

Extravasacin de las inmunoglobulinas a otros fluidos biolgicos Extravasaci biol

Transporte a travs de epitelios trav Transporte a travs de placenta trav Difusin al espacio Difusi extravasal

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Transporte de las IgA a travs trav de epitelios

IgA Receptor poli-Ig Componente secretor

IgA secretada

Vescula de transporte

Superficie luminal

Superficie luminal

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