1. QUE ESPECTROFOTOMETRIA: La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones qumicas y biolgicas.

El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones biolgicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, aun el vidrio que parece ser completamente transparente absorbe longitud de ondas que pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la regin del infrarrojo. La absorcin de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida. El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida. **Ya te han dado algunas respuestas aproximadas, pero en el caso de las dos primeras cometen un error notable, como es el decir que es un mtodo de anlisis. Yerran porque, en modo estricto, desde el punto de vista de un Qumico Analtico, no es lo mismo una tcnica que un mtodo. Me explicar: La espectrofotometra es una tcnica de anlisis tanto cualitativo (permite saber qu tenemos en una muestra) como cuantitativo (permite saber cunto tenemos de cada compuesto o elemento, segn sea molecular o atmica). Tcnica son unos determinados principios fsico-qumicos bsicos a emplear; en este caso, habitualmente son la absorcin o la emisin de radiacin de las diversas longitudes de onda del espectro electromagntico, aunque tambin puede aprovecharse la dispersin de la radiacin. Aparecen as la espectrofotometra de absorcin atmica, espectrofotometra de absorcin molecular (sta, en el ultravioleta-visible no es muy selectiva, ya que muchos compuestos orgnicos absorben en esa zona), y las correspondientes de emisin desde un estado electrnico excitado, que si se ha conseguido con una absorcin previa de radiacin, se denominan tcnicas de luminiscencia (bien fluorescencia o bien fosforescencia), la espectrometra Raman basada en la dispersin, etc... Mtodo, en cambio, es la aplicacin de una tcnica determinada a la resolucin de un problema analtico concreto. As, por ejemplo, podemos hablar de que la tcnica adecuada para determinar sodio en agua es la emisin atmica de llama, pero basndose en esta tcnica se pueden desarrollar diversos mtodos analticos, diversas maneras de proceder en el anlisis. Hay libros de Anlisis Instrumental (Skoog, por ej.) que te podran ser de gran utilidad para aprender sobre las diferentes tcnicas espectrofotomtricas. Espero haberte sido de utilidad.

2. 3. Se denomina espectro electromagntico a la distribucin energtica del conjunto de las ondas electromagnticas. Referido a un objeto se denomina espectro electromagntico o simplemente espectro a la radiacin electromagntica que emite (espectro de emisin) o absorbe (espectro de absorcin) una sustancia. Dicha radiacin sirve para identificar la sustancia de manera anloga a una huella dactilar. Los espectros se pueden observar mediante espectroscopios que, adems de permitir observar el espectro, permiten realizar medidas sobre ste, como la longitud de onda, la frecuencia y la intensidad de la radiacin. El espectro electromagntico se extiende desde la radiacin de menor longitud de onda, como los rayos gamma y los rayos X, pasando por la luz ultravioleta, la luz visible y los rayos infrarrojos, hasta las ondas electromagnticas de mayor longitud de onda, como son las ondas de radio. Se cree que el lmite para la longitud de onda ms pequea posible es la longitud de Planck mientras que el lmite mximo sera el tamao del Universo (vase Cosmologa fsica) aunque formalmente el espectro electromagntico es infinito y continuo. 4. 5. La longitud de onda de una onda describe cun larga es la onda. La distancia existente entre dos crestas o valles consecutivos es lo que llamamos longitud de onda. Las ondas de agua en el ocano, las ondas de aire, y las ondas de radiacin electromagntica tienen longitudes de ondas. La letra griega "l" (lambda) se utiliza para representar la longitud de onda en ecuaciones. La longitud de onda es inversamente proporcional a la frecuencia de la onda. Una longitud de onda larga corresponde a una frecuencia baja, mientras que una longitud de onda corta corresponde una frecuencia alta. La longitud de ondas de las ondas de sonido, en el rango que los seres humanos pueden escuchar, oscilan entre menos de 2 cm (una pulgada), hasta aproximadamente 17 metros (56 pies). Las ondas de radiacin electromagntica que forman la luz visible tienen longitudes de onda entre 400 y 700 nanmetros (luz morada) y 700 (luz roja) nanmetros (10-9 metros). La frecuencia y longitud de onda de una onda estn relacionadas entre s mediante la siguiente ecuacin: l = c / f donde "l" es la longitud de onda, "c" es la velocidad de la onda, y "f" es la frecuencia. Para la luz y otras ondas electromagnticas que viajan en el vaco, c = 299 792.458 km/seg (186,282 millas/seg), la velocidad de la luz. Para las ondas de sonido que se desplazan por el aire, c es aproximadamente 343 metros/segundos (767 millas/hora). 6. En el Sistema Internacional, la unidad de medida de la longitud de onda es el metro, como la de cualquier otra longitud. Segn los rdenes de magnitud de las longitudes de onda con que se est

trabajando, se suele recurrir a submltiplos como el milmetro (mm), el micrmetro (m) y el nanmetro (nm). El milmetro (smbolo mm) es una unidad de longitud. Es el tercer submltiplo del metro y equivale a la milsima parte de l.

1 mm = 103 m
Un micrmetro equivale a una milsima de milmetro: 1 m = 0,001 mm = 1 10-3 mm. 1 mm = 1000 m. El nanmetro es la unidad de longitud que equivale a una milmillonsima parte de un metro. Comnmente se utiliza para medir la longitud de onda de la radiacin ultravioleta, radiacin infrarroja y la luz. Recientemente la unidad ha cobrado notoriedad en el estudio de la nanotecnologa, rea que estudia materiales que poseen dimensiones de unos pocos nanmetros. 7. LEYES DE ABSORCIN Cuando un haz de luz pasa a travs de un medio, se registra una cierta prdida de intensidad, debido a la absorcin por parte de la sustancia. Se llama TRANSMITANCIA (T) a la relacin entre la luz incidente y la luz transmitida: T = Is / I0 ; %T = (Is / I0 ) x 100.

Se puede perder intensidad por la interaccin con la cubeta o el solvente. Para evitar este error se hace una primera medida con una solucin de referencia o BLANCO, que contiene todos los posibles compuestos que intervienen en la lectura menos el que vamos a medir. Todas las medidas que se hagan con posterioridad sern referidas a esta medida inicial y se harn en la misma cubeta que se utiliz en la medida del blanco. La Transmitancia se usa poco, se emplea ms la Absorbancia (A) porque la relacin entre A y la concentracin de una solucin es directamente proporcional y la de la T es inversamente proporcional. La relacin entre la absorbancia y la transmitancia es la siguiente: Si el %T = 100 Si el %T = 0 A = 2-log T = 2-log 100 = 0 A = 2-log 0 =

En los aparatos que se usan actualmente se presentan absorbancias, pero el aparato lo que mide realmente es %T que luego transforma a absorbancia. 3.1. LEY DE BEER

La absorbancia de una solucin es directamente proporcional ala concentracin y a la longitud del paso de la luz. A = e . b. c Siendo: A: absorbancia. No tiene unidades. e: el coeficiente de extincin molar, tambin llamado coeficiente de absorcin. Es constante para un compuesto dado siempre que se fijen condiciones de longitud de onda, de pH, de temperatura, de solventes, etc. Sus unidades son 1/ (mol/cm). b: es la longitud de paso de la luz, en cm. c: es la concentracin del absorbente. Se mide en mol/L. La aplicacin prctica de la Ley de Beer es, que conociendo la absorbancia de una sustancia podemos averiguar su concentracin y esto lo podemos hacer de dos formas: 1. Por comparacin con una solucin conocida: si tenemos 2 soluciones, una problema (P) y una estndar (S), podemos establecer la siguiente relacin matemtica entre ellas: 2. A travs de una curva de calibracin: la curva de calibracin es la representacin grfica en un eje de coordenadas de la Absorbancia (eje de ordenadas) frente a la Concentracin (eje de abcisas). Se ensayan varias soluciones de concentracin conocida y se determinan sus A, construyndose la curva de calibrado, que es una recta. Una vez ensayadas las soluciones problemas, su concentracin se averigua por interpolacin de las A de las soluciones problema en la curva de calibracin. Hay que tener en cuenta la LINEALIDAD, que es el intervalo de concentraciones del cromgeno entre las cuales existe una relacin lineal entre Absorbancia y Concentracin. Cuando la concentracin del cromgeno sobrepasa los lmites de linealidad se deja de cumplir la Ley de Beer, convirtindose la recta en una curva. La lectura de la Absorbancia fuera de los lmites de linealidad se traduce en una concentracin falsamente baja de cromgeno. En esta situacin, hay que diluir la muestra para que su concentracin entre en los lmites de la linealidad. 9. En un amplio sentido, un fotmetro es cualquier instrumento usado para medir la intensidad de la Luz. Los que se utilizan para la fotometra, son instrumentos para detectar:Fotmetro de Bunsen.

Intensidad de luz dispersa. Absorbancia. Fluorescencia.

Un espectrofotmetro es un instrumento usado en la fsica ptica que sirve para medir, en funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una misma magnitud fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones. Tambin es utilizado en los laboratorios de qumica para la cuantificacin de sustancias y microorganismos.

Hay varios tipos de espectrofotmetros, puede ser de absorcin atmica o espectrofotmetro de masa. 10.espectrofotometro: Fuente de luz La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las siguientes condiciones: estabilidad, direccionabilidad, distribucin de energa espectral continua y larga vida. Las fuentes empleadas son: lmpara de wolframio (tambin llamado tungsteno), lmpara de arco de xenn y lmpara de deuterio que es utilizada en los laboratorios atmicos. Monocromador El monocromador asla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromtica. Est constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersin. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es un lente que lleva el haz de luz que entra con una determinada longitud de onda hacia un prisma el cual separa todas las longitudes de onda de ese haz y la longitud deseada se dirige hacia otra lente que direcciona ese haz hacia la rendija de salida. Compartimiento de Muestra Es donde tiene lugar la interaccin, R.E.M con la materia (debe producirse donde no haya absorcin ni dispersin de las longitudes de onda). Es importante destacar, que durante este proceso, se aplica la ley de Lambert-Beer en su mxima expresin, en base a sus leyes de absorcin, en lo que concierne al paso de la molcula de fundamental-excitado. Detector El detector, es quien detecta una radiacin y a su vez lo deja en evidencia, para posterior estudio. Hay de dos tipos: a) los que responden a fotones; b) los que responden al calor Registrador Convierte el fenmeno fsico, en nmeros proporcionales al analito en cuestin.

FotodetectoresEn los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16 fotodetectores para

percibir la seal en forma simultnea en 16 longitudes de onda, cubriendo el espectro visible. Esto reduce el tiempo de medida, y minimiza las partes mviles del equipo.