PENGARUH PEMBERIAN DIET HIGH FAT HIGH FRUCTOSE (HFHF)

MODIFIKASI AIN-93M TERHADAP KADAR INTERLEUKIN 6 (IL-6)

PADA TIKUS PUTIH RATTUS NORVEGICUS SPRAGUE DAWLEY

MODEL OBESITAS

TUGAS AKHIR

Untuk Memenuhi Persyaratan

Memperoleh Gelar Sarjana Gizi

Oleh:
Ilmi Atmimnurona Hedys
NIM 155070301111008

PROGRAM STUDI ILMU GIZI

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2018
 DAFTAR ISI

Judul ............................................................................................................ i

Halaman Persetujuan .................................................................................. ii

Pernyataan Keaslian Tulisan ...................................................................... iii

Kata Pengantar............................................................................................ iv

Abstrak ........................................................................................................ vi

Abstract ....................................................................................................... vii

Daftar Isi ...................................................................................................... viii

Daftar Tabel ................................................................................................ xii

Daftar Gambar ............................................................................................ xiii

Daftar Lampiran .......................................................................................... xiv

BAB 1 PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang .......................................................................... 1

1.2 Rumusan Masalah ..................................................................... 5

1.3 Tujuan Penelitian

1.3.1 Tujuan Umum .................................................................. 5

1.3.2 Tujuan Khusus ................................................................. 5

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Manfaat Akademik ........................................................... 6

1.4.2 Manfaat Praktis ................................................................ 6

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Obesitas .................................................................................... 7

viii
 2.1.1 Etiologi dan Faktor Resiko Obesitas ................................7

2.1.2 Patofisiologi Obesitas ...................................................... 8

2.2 Tikus Sebagai Hewan Coba ...................................................... 9

2.3 Tikus Rattus Norvegicus Sprague Dawley (SD) ........................ 10

2.4 Diet Standar AIN-93M ............................................................... 11

2.5 Diet High Fat High Fructose (HFHF) ......................................... 12

2.6 Interleukin-6 (IL-6) ..................................................................... 14

2.6.1 IL-6 Siignalling ................................................................. 15

2.6.2 Pengaruh Diet HFHF terhadap Kadar IL-6 ...................... 16

2.6.3 Pengaruh Obesitas terhadap Kadar IL-6 ......................... 18

BAB 3 KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN

3.1 Kerangka Konsep ...................................................................... 22

3.2 Hipotesis Penelitian ................................................................... 24

BAB 4 METODE PENELITIAN

4.1 Rancangan Penelitian ............................................................... 25

4.2 Populasi dan Sampel Penelitian ................................................ 25

4.2.1 Kriteria Inklusi .................................................................. 25

4.2.2 Kriteria Drop Out .............................................................. 25

4.2.3 Jumlah Sampel ................................................................ 26

4.3.4 Prosedur Pengambilan Sampel ....................................... 26

4.3 Variabel Penelitian ..................................................................... 27

4.3.1 Variabel Bebas ................................................................ 27

4.3.2 Variabel Tergantung ........................................................ 27

ix
 4.3.3 Variabel Kendali ...............................................................27

4.4 Lokasi dan Waktu Penelitian ..................................................... 27

4.4.1 Lokasi Penelitian ..............................................................27

4.4.2 Waktu Penelitian .............................................................. 27

4.5 Bahan dan Alat Penelitian ......................................................... 28

4.5.1 Alat Penelitian .................................................................. 28

4.5.2 Bahan Penelitian ..............................................................29

4.6 Definisi Operasional .................................................................. 31

4.7 Prosedur Penelitian ................................................................... 34

4.7.1 Prosedur Perlakuan Tikus ............................................... 34

4.7.2 Prosedur Pembuatan Pakan ............................................34

4.7.3 Prosedur Pembuatan Fruktosa 30% ................................36

4.7.4 Prosedur Pembedaan dan Pengambilan Sampel ............36

4.7.5 Prosedur Perhitungan Kadar IL-6 ................................... 37

4.8 Analisa Data .............................................................................. 40

BAB 5 HASIL DAN PEMBAHASAN

5.1 Karakteristik Tikus Percobaan ................................................... 41

5.2 Gambaran Pakan Tikus ............................................................. 41

5.3 Rata-rata Asupan Makan, Minum dan Zat Gizi pada Tikus

Percobaan yang diberi Diet Normal Modifikasi AIN-93M dan

Diet HFHF Modifikasi AIN-93M ..................................................42

5.4 Rata-Rata Berat Badan Awal dan Berat Akhir Tikus .................44

5.5 Kadar Interleukin 6 (IL-6) Plasma pada Tikus ........................... 45

x
BAB 6 PEMBAHASAN

6.1 Rata-rata Asupan Makan, Minum dan Zat Gizi pada Tikus

Percobaan yang diberi Diet Normal Modifikasi AIN-93M dan

Diet HFHF Modifikasi AIN-93M .................................................47

6.2 Rata-Rata Berat Badan Tikus Percobaan Kelompok Normal

Modifikasi AIN-93M dan Kelompok HFHF Modifikasi

AIN-93M ....................................................................................51

6.3 Rata-rata Kadar Interleukin-6 (IL-6) pada Tikus Percobaan

Kelompok Normal Modifikasi AIN-93M dan Kelompok HFHF

Modifikasi AIN-93M ...................................................................55

6.4 Keterbatasan Penelitian ............................................................ 57

BAB 7 PENUTUP

7.1 Kesimpulan ................................................................................ 59

7.2 Saran ......................................................................................... 59

Daftar Pustaka ............................................................................................ 60

Lampiran ..................................................................................................... 66

xi
 ABSTRAK

Hedys, Ilmi Atmimnurona. 2018. Pengaruh Pemberian Diet High Fat High
Fructose (HFHF) Modifikasi AIN-93M terhadap Kadar Interleukin 6 (Il-6)
pada Tikus Putih Rattus Norvegicus Sprague Dawley Model Obesitas.
Tugas Akhir, Program Studi Ilmu Gizi, Fakultas Kedokteran Universitas
Brawijaya. Pembimbing: (1) Dr. dr. Sri Andarini,M.Kes (2) Inggita
Kusumastuty, S.Gz, M.Biomed.

Obesitas merupakan masalah kesehatan yang prevalensinya meningkat

setiap tahunnya ketika obesitas terjadi, sirkulasi konsentrasi dalam sitokin pro-
inflamasinya meningkat. Sumber utama dari sitokin pro-inflamasi pada obesitas
adalah jaringan adiposa, salah satu sitokin pro-inflamasi adalah interleukin 6 (IL-
6). Interleukin-6 (IL-6) adalah sitokin yang memiliki efek pleiotropik pada
inflamasi, respon imun, dan hematopoiesis. Penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui pengaruh pemberian Diet HFHF modifikasi AIN-93M terhadap
marker inflamasi IL-6 pada tikus putih Rattus Norvegicus Sprague Dawley. Studi
Eksperimental menggunakan posttest-only control group design dilakukan
terhadap hewan coba tikus Sprague Dawley jantan. Sampel pada penelitian ini
dibagi menjadi 2 kelompok perlakuan, yaitu kelompok normal modifikasi AIN-93M
dan kelompok HFHF modifikasi AIN-93M dengan jumlah sampel minimal pada
tiap kelompok yaitu 16 ekor tikus. Tikus Rattus Norvegicus Sprague Dawley
diberikan diet HFHF modifikasi AIN-93M dan diet normal modifikasi AIN-93M
selama ± 17 minggu. Variabel yang diukur pada penelitian ini adalah kadar
Interleukin-6 (IL-6) plasma dengan menggunakan metode ELISA. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa asupan energi kelompok HFHF modifkasi AIN-93M lebih
tinggi (69.66 ± 6.22 kkal) dibandingkan dengan kelompok normal modifikasi AIN-
93M (51.71 ± 7.09 kkal), hasil analisa kadar IL-6 plasma antara kelompok normal
modifikasi AIN-93M (17.25 ± 5.20 pg/ml) dan kelompok HFHF modifikasi AIN-
93M (20.06 ± 6.99 pg/ml) tidak terdapat perbedaan yang signifikan (independen
t-test, p=0.219). Kesimpulan dari penelitian ini adalah diet High Fat Hiigh
Fructose (HFHF) modifikasi AIN-93M pada penelitian ini tidak berpengaruh
secara signifikan pada kadar Interleukin-6 (IL-6).

Kata Kunci: diet High Fat High Fructose (HFHF), Interleukin-6 (IL-6), obesitas

vi
 ABSTRACT

Hedys, Ilmi Atmimnurona. 2018. The Effect of High Fat High Fructose Diet
(HFHF) Administration on the level of Interleukin-6 (IL-6) of Obesity Model
Rattus Norvegicus Sprague Dawley Rats. Final Assignment, Nutrition
Program, Faculty of medicine, Brawijaya University. Supervisors: (1) Dr.
dr. Sri Andarini,M.Kes (2) Inggita Kusumastuty, S.Gz, M.Biomed.

Obesity is a health problem that the prevalence increase each year, when
obesity occurs, the circulation of cytokine pro-inflammation increased. The main
source of pro-inflammation cytokine is adipose tissue, the one of pro-
inflammation cytokines is Interleukin-6 (IL-6). Interleukin-6 (IL-6) is the cytokine
that has pleiotropic effect in inflammation, immune response, and
haematopoiesis. This research is aimed to understand the effect of High Fat High
Fructose diet (HFHF) AIN-93M modification administration to inflammation
marker IL-6 on Rattus Norvegicus Sprague Dawley Rats. Experimental study
using posttest-only control group design was conducted into male Sprague
Dawley rat. The samples in this research were divided into 2 groups, that was
normal AIN-93M modification group and HFHF AIN-93M modification group with
the amount of each group was 16 rats. Rattus Norvegicus Sprague Dawley Rats
were given High Fat High Fructose diet (HFHF) AIN-93M modification and normal
diet AIN-93M modification for ± 17 weeks. The variabel measured was the level
of Interleukin-6 (IL-6) plasma and used ELISA method. Results of this research
indicated that energy intake of HFHF AIN-93M modification group was higher
(69.66 ± 6.22 kkal) than normal AIN-93M modification group (51.71 ± 7.09 kkal),
the result of level of IL-6 plasma analysis between normal AIN-93M modification
group (17.25 ± 5.20 pg/ml) and HFHF AIN-93M modification (20.06 ± 6.99 pg/ml)
was not different (independent t-test, p=0.219). The conclusion of this research
was High Fat High Fructose (HFHF) Diet AIN-93M modificartion was not
significally influence the level of Interleukin-6 (IL-6).

Keywords: High Fat High Fructose (HFHF) diet, Interleukin-6 (IL-6), obesity

vii
 BAB 1

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Obesitas adalah kelebihan akumulasi lemak yang dapat menyebabkan

gangguan kesehatan (WHO, 2017). Obesitas merupakan masalah kesehatan

yang prevalensinya meningkat dari tahun ke tahun. Prevalensi obesitas di

dunia yaitu sebesar 10% pada laki-laki dan 14% pada perempuan, hal ini

meningkat dua kali lipat dibandingkan tahun 1980 (WHO, 2012). Sedangkan

prevalensi obesitas di Indonesia menurut Riskedas (2013) pada laki-laki

tahun 2013 meningkat sebesar 11,9% dari tahun 2010, sedangkan pada

perempuan dewasa meningkat sebesar 17,5%.

Obesitas terjadi akibat adanya peningkatan konsumsi energi dan

penurunan aktivitas fisik. Obesitas sangat berhubungan erat dengan adanya

sindrom metabolik. Kondisi ini berhubungan dengan terjadinya inflamasi

kronis yang ditandai dengan produksi sitokin yang abnormal, meningkatnya

reaktan fase akut, dan aktivasi sinyal inflamasi (Wellen et al., 2003).

Beberapa penelitian membuktikan bahwa terdapat hubungan antara kejadian

obesitas dengan terjadinya marker inflamasi (Monteiro et al., 2010). Individu

yang obesitas, sirkulasi konsentrasi dalam sitokin pro-inflamasinya

meningkat. Sumber utama dari sitokin pro-inflamasi pada obesitas adalah

jaringan adiposa, terdapat beberapa sitokin yang berperan penting pada

inflamasi kronis, yaitu Tumor Necrosis Factor-α (TNF-α), inflammasome

activated IL-1β, dan interleukin 6 (IL-6).

1
 2

Interleukin 6 (IL-6) adalah sitokin yang memiliki efek pleiotropik (memiliki

lebih dari 1 fungsi atau atau efek) pada inflamasi, respon imun, dan

hematopoiesis (pembentukan sel darah) (Tanaka, et al., 2014). Interleukin 6

disekresi di sel yang berbeda-beda dalam tubuh, salah satunya pada jaringan

adiposa. Sitokin ini dapat menstimulasi produksi beberapa reaktan fase akut

seperti C-Reactive Protein (CRP) serta menstimulasi lipogenesis hepatik

yang berhubungan dengan obesitas dan resistensi insulin (Hadizadeh, 2017).

Interleukin 6 merupakan jenis sitokin yang penting dalam transisi dari

inflamasi akut menjadi inflamasi kronis, serta menjadi sitokin yang

berkontribusi pada inflamasi kronis seperti obesitas karena merupakan sitokin

yang memegang peran penting dalam reaksi fase akut, inflamasi, dan

hematopoiesis (Rodriguez-Hernandez, et al., 2013).

Penelitian sebelumnya banyak menggunakan hewan coba berupa tikus,

karena metabolisme tikus hampir sama dengan metabolisme manusia.

Sprague Dawley merupakan jenis hewan coba kategori outbred rat yang

pertama kali digenerasikan oleh Robert S. Dawley pada tahun 1920. Sprague

Dawley (SD) biasa digunakan untuk penelitian yang meneliti tentang kondisi

manusia, seperti diabetes, obesitas, kanker, dan cardiovascular diseases

(Brower, et al., 2015). Penelitian yang dilakukan oleh Marques et al. (2016)

tentang pemberian diet tinggi lemak pada tikus SD dan tikus Wistar,

mendapatkan hasil bahwa terjadi peningkatan level plasma leptin serta terjadi

gangguan toleransi glukosa pada Tikus SD dan Tikus Wistar, terdapat juga

penurunan albumin. Albumin dapat menghambat munculnya protein fase akut

yang dapat meningkatkan kondisi inflamasi, seperti obesitas. Namun pada

 3

Tikus SD didapatkan luas jaringan adiposa yang lebih besar dibandingkan

dengan Tikus Wistar.

Huang et al. (2004) membandingkan kelompok diet tinggi lemak dengan

kelompok diet tinggi fruktosa terhadap terjadinya obesitas pada tikus SD

jantan. Pada penelitian tersebut menunjukkan bahwa pada tikus yang

diberikan diet tinggi lemak memiliki berat badan, berat liver, berat relatif liver,

jaringan adiposa, dan konsentrasi plasma kolesterol yang lebih tinggi

dibandingkan dengan kelompok kontrol dan kelompok yang diberikan diet

tinggi fruktosa. Sedangkan pada tikus yang diberi diet tinggi fruktosa memiliki

konsentrasi trigliserida, konsentrasi insulin, dan konsentrasi leptin yang lebih

tinggi dibandingkan dengan kelompok kontrol dan kelompok yang diberi diet

tinggi lemak. Sedangkan penelitian yang dilakukan oleh Wada (2010)

menunjukkan bahwa mencit yang diberikan diet tinggi lemak dan tinggi

fruktosa terdapat marker sindrom metabolik, yaitu resistensi insulin,

hipertensi, dislipidemia, dan perlemakan hati. Selain itu, juga terdapat

peningkatan ekspresi dari sitokin proinflamasi (TNFα, MCP-1, dan IL-6).

Metode HFHF yang dilakukan oleh beberapa peneliti yaitu dengan

menambahkan fruktosa kedalam komposisi dietnya, seperti penelitian yang

dilakukan oleh Wang et al., (2015) pada tikus SD, yaitu memberikan diet

HFHF dengan komposisi fruktosa sebesar 25% dan lard sebesar 25%

dengan densitas energi 4.7 kkal/g.

Diet AIN merupakan diet standar dari American Institute of Nutrition (AIN)

untuk tikus laboratorium. Diet ini memiliki kandungan gizi yang adekuat untuk

tikus laboratorium, pada AIN 93-M sendiri memiliki kandungan lemak dan
 4

protein yang lebih rendah, sehingga direkomendasikan untuk tikus dewasa.

Berbeda dengan diet standar yang digunakan untuk ternak, unggas, dan

hewan sejenis lainnya yang dimana mengandung zat gizi yang lebih sedikit

(Revees, 1993). Banyak beberapa penelitian yang menggunakan modifikasi

diet AIN 93-M pada metode pemberian dietnya, salah satunya penelitian

yang dilakukan oleh Huang, et al. (2013) menggunakan metode HFHF

dengan memodifikasi diet standar AIN-93M dengan komposisi diet sukrosa

28% dan lemak 22%, lalu ditambahkan fruktosa sebesar 20% pada dietnya

dengan densitas energi sebesar 141 kkal/30g (4.7 kkal/g), sedangkan pada

kelompok normal diberikan diet standar AIN-93M dengan densitas energi

sebesar 114 kkal/30 g (3.8 kkal/g). Efek pemberien diet HFHF pada

penelitian ini adalah terjadi peningkatan sitokin pro-inflamasi seperti IL-1β,

TNF-α, dan IL-6. IL-6 meningkat sebesar 137% dibandingkan dengan

kelompok kontrol. Diet tinggi lemak yang digunakan untuk penelitian

laboratorium menggunakan 32-60% lemak dari kalori yang diberikan karena

diharapkan dapat menyebabkan tikus obesitas dengan cepat (Gajda, 2008),

diet tinggi fruktosa yaitu sebesar 20% dari kebutuhan energi (Rippe, 2013).

Pada penelitian sebelumnya, kandungan lemak pada dietnya masih dibawah

32%.

Meskipun telah terdapat penelitian tentang pengaruh pemberian pakan

diet HFHF, akan tetapi pemberian pakan HFHF dengan cara dan komposisi

modifikasi AIN-93M yang berbeda mungkin akan memberikan hasil yang

berbeda, terutama pada kadar IL-6 sebagai marker pro-inflamasi, sehingga

perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui pengaruh diet HFHF modifikasi

 5

AIN-93M dengan cara dan komposisi yang berbeda terhadap terjadinya

obesitas yang dilihat dari kadar Interleukin 6 (IL-6) pada tikus putih Rattus

Norvegicus Sprague Dawley.

1.2 Rumusan Masalah

Apakah pemberian diet HFHF modifikasi AIN-93M berpengaruh terhadap

kadar IL-6 pada tikus putih Rattus Norvegicus Sprague Dawley?

1.3 Tujuan Penelitian

1.3.1 Tujuan Umum

Untuk mengetahui pengaruh pemberian Diet HFHF modifikasi AIN-

93M terhadap marker inflamasi IL-6 pada tikus putih Rattus

Norvegicus Sprague Dawley.

1.3.2 Tujuan Khusus

1. Mengetahui asupan makan dan minum tikus putih Rattus

Norvegicus Sprague Dawley yang diberikan diet normal

modifikasi AIN-93M.

2. Mengetahui asupan makan dan minum tikus putih Rattus

Norvegicus Sprague Dawley yang diberikan diet HFHF modifikasi

AIN-93M.

3. Mengetahui kadar IL-6 pada tikus putih Rattus Norvegicus

Sprague Dawley yang diberikan diet normal modifikasi AIN-93M.

4. Mengetahui kadar IL-6 pada tikus putih Rattus Norvegicus

Sprague Dawley yang diberikan diet HFHF modifikasi AIN-93M.

 6

5. Mengetahui perbedaan kadar IL-6 plasma pada tikus putih Rattus

Norvegicus Sprague Dawley yang diberi Diet HFHF modifikasi

AIN-93M dengan tikus yang diberi diet normal modifikasi AIN-

93M.

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Manfaat Akademik

1. Dapat meningkatkan pengetahuan akademisi atau peneliti

tentang pengaruh pemberian diet HFHF modifikasi AIN-93M

terhadap terjadinya obesitas.

2. Dapat meningkatkan pengetahuan akademisi atau peneliti

tentang pengaruh terjadinya obesitas dengan terjadinya inflamasi

yang dilihat dari kadar IL-6.

1.4.2 Manfaat Praktis

Dapat memberikan pengetahuan kepada masyarakat tentang

konsumsi tinggi lemak dan tinggi fruktosa yang dapat menyebabkan

obesitas dan terjadinya inflamasi yang dilihat dari perbedaan kadar

IL-6.
 7

BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Obesitas

Obesitas merupakan suatu keadaan dimana terjadi kelebihan berat badan

dibandingkan dengan tinggi badan dan berhubungan dengan peningkatan

sejumlah penyakit kronis seperti Diabetes Mellitus Tipe 2, Hipertensi, dan

pernyakit kardiovaskular (Gadde, et al., 2018). Selain itu, obesitas juga

didefinisikan sebagai kelebihan jaringan adiposa dan peningkatan lemak

tubuh jika dibandingkan dengan nilai yang dianjurkan (Kuczmarski, 2007).

1.1.1 Etiologi dan Fakto Resiko Obesitas

Penyebab dari obesitas sangat kompleks dan banyak faktor yang

mempengaruhi, seperti interaksi yang kompleks antara genetik, hormon,

dan lingkungan. Berat badan diregulasi oleh berbagai macam sistem,

yang terdiri dari faktor periferal dan faktor sentral. Salah satu faktor yang

berpengaruh yaitu faktor genetik, faktor genetik akan berinteraksi

dengan lingkungan untuk memproduksi phenotype obesitas. Terdapat

korelasi antara terjadinya maternal gestational diabetes melitus yang

berhubungan dengan hiperglikemia dan perkembangan obesitas pada

anak-anak. Namun, sebagian besar obesitas terjadi karena adanya

konsumsi energi yang berlebih dan kurangnya energi yang keluar (bisa

dari metabolisme dan aktivitas fisik).

7
 8

Penyebab sekunder dari obesitas yaitu terdiri dari obat-obatan,

seperti obat psikotropik, obat diabetes, antihipertensi, hormon steroid

dan kontrasepsi, anti histamin, dan protease inhibitor, dan penyakit

neuroendokrin (hipotalamus, thiroid, dan adrenal) (Pozza, 2018; Wright,

2012). Makanan dan lingkungan juga dapat menyebabkan terjadinya

obesitas. Makanan siap saji yang mengandung gula, lemak, dan natrium

yang tinggi juga dapat meningkatnya kejadian obesitas. Peningkatan

kebiasaan konsumsi jajanan dan pemilihan makanan yang tidak bergizi

sebagai hasil dari iklan di media masa juga akan meningkatkan kejadian

obesitas (Sinha, 2009).

1.1.2 Patofisiologi Obesitas

Aktivitas fisik yang kurang dan asupan energi yang berlebihan

dapat mempengaruhi derajat adipositas pada manusia, jaringan adiposa

memiliki peran kunci terhadap terjadinya inflamasi kronis yang sangat

berhubungan dengan obesitas (Rivera, 2008). Peningkatan jumlah

lemak, khususnya jenis trigliserida pada jaringan adiposa terjadi pada

otot skeletal, liver, dan organ serta jaringan yang lainnya. Seseorang

yang obesitas dibandingkan dengan orang yang normal memiliki massa

otot yang lebih sedikit dan massa lemak yang lebih banyak. Peningkatan

berat badan yang terjadi dalam waktu lama, maka dapat terjadi

peningkatan lemak yang didistribusikan ke tubuh sehingga jaringan

adiposa subkutan menyimpan banyak cadangan lemak di berbagai

bagian tubuh. Jaringan adiposa yang menyimpan trigliserida ini adalah

jaringan adiposa putih (WAT).

 9

Obesitas juga berhubungan dengan terjadinya peningkatan

makrofag dan sel imun lainnya di jaringan adiposa, karena jaringan

mengalami re-modeling sebagai respons dari apoptosis adiposa. Sel

imun ini mensekresi sitokin pro-inflamasi yang berkontribusi dengan

resistensi insulin yang sering terjadi pada pasien obesitas (Heymsfield,

2017).

2.2 Tikus sebagai Hewan Coba

Hewan coba adalah organisme yang hidup yang secara alami

memperoleh atau diinduksi oleh proses patologi yang sama atau menyerupai

fenomena yang terjadi pada manusia. Tujuan utama dari penelitian

eksperimental yang menggunakan hewan coba adalah untuk menyelesaikan

masalah pada praktek klinik dan untuk mengembangkan metode baru dan

diterima untuk menyembuhkan atau mengurangi kejadian penyakit.

Penggunaan hewan coba pada sains, sudah diterima oleh mayoritas orang-

orang dan ilmuwan sebagai kebutuhan untuk perkembangan ilmu

pengetahuan. Hal ini dikarenakan hewan dan manusia memiliki banyak

kesamaan (Chow, 2008).

Hewan coba tikus banyak digunakan didalam penelitian eksperimental,

seperti penelitian genetik, penyakit, efek obat, dan topik lainnya yang

berhubungan dengan kesehatan dan obat-obatan. Tikus yang digunakan

sebagai hewan coba pada penelitian disebut tikus laboratorium, tikus

laboratorium yang digunakan yaitu tikus dengan spesies Rattus Norvergicus

yang dikembangbiakkan untuk penelitian ilmiah. Tikus laboratorium

merupakan hewan coba yang sangat penting untuk penelitian di bidang

kesehatan (Alexandru, 2011). Terdapat beberapa jenis tikus yang digunakan

 10

untuk penelitian, yaitu Tikus Wistar, Tikus Buffalo dan Fisher 344, dan Tikus

Sprague Dawley.

2.3 Tikus Rattus Norvegicus Sprague Dawley (SD)

Sprague Dawley merupakan jenis tikus yang cukup terkenal dalam

penelitian eksperimental laboratorium di dunia. Jenis tikus ini sangat cerdas

dan sangat populer untuk penelitian psikologi (Pierce, 2008). Taksonomi dari

jenis tikus Rattus Norvegicus yaitu

Kingdom : Animal

Phylum : Chordata

Class : Mammalia

Order : Rodentia

Suborder : Myomorpha

Family : Muridae

Genus : Rattus

Spesies : Norvegicus

Karakteristik perilaku dari tikus jenis rattus norvegicus yaitu merupakan

hewan nocturnal, dimana sebagian besar aktivitasnya pada malam hari dan

pada pagi hari. Rattus norvergicus juga merupakan hewan yang tidak

agresif, mempunyai rasa ingin tahu, dan mudah diatur, sehingga mereka

dapat dengan mudah beradaptasi dengan lingkungan baru atau situasi

eksperimen. Rattus norvergicus lebih nyaman tinggal ditempat yang kecil,

gelap, dan tempat yang terbatas (Sharp, 2010). Karakteristik anatomi

maupun fisiologi dari rattus norvegicus dapat dilihat pada tabel 2.1
 11

Tabel 2.1 Anatomi dan Fisiologi Rattus Norvegicus (Sharp, 2010)

Parameter Nilai
Masa hidup (tahun) 2,5-3,5
Berat badan jantan (g)* 450-520
Berat badan betina (g)* 250-300
Suhu tubuh (rectal) 35,9-37,5oC
96,6-99,5oF
Konsumsi makanan (g/100 gBB/hari) 5-6
Konsumsi minuman(ml/100g BB/hari) 10-12
Volume plasma (ml) 7,8
pada tikus dengan berat 250 g
* Berat badan akan bervariasi tergantung jenis tikus stock atau strain

2.4 Diet Standar AIN-93M

AIN-93M merupakan makanan standar untuk penelitian kesehatan yang

menggunakan tikus laboratorium. Tujuan dari diet standar ini adalah untuk

membantu peneliti dengan pengalaman yang terbatas pada penelitian di

bidang nutrisi untuk lebih mudah dalam menjalankan penelitiannya. AIN-93M

memiliki kandungan lemak dan protein yang lebih rendah dan

direkomendasikan untuk tikus dewasa (Reeves, et al., 1993). Komposisi

bahan dan komposisi mineral mix pada diet standar AIN-93M dapat dilihat

pada tabel 2.2 dan 2.3

Tabel 2.2 Formulasi diet standar AIN-93 M

Bahan Jumlah (g/kg diet)
Cornstarch 465,692
Kasein (≥ 85% protein) 140
Dextrinize cornstarch (90-94% tetrasakarida) 155
Sukrosa 100
Soybean oil 40
Serat 50
Mineral mix (AIN-93M-MX) 35
Vitamin mix (AIN-93-VX) 10
L-Cystine 1.8
Choline bitartrate (41,1% choline) 2.5
Ter-butylhydroquinone 0.008
(Reeves, et al., 1993)
 12

Tabel 2.3 Mineral mix (AIN-93M-MX)

Bahan Jumlah (g/kg diet)
Elemen mineral esensial
Kalsium karbonat, anhydrous, 40,04% Ca 357
Potassium fosdat, monobasic, 22,76% P: 28,73% 250
Sodium, Chloride, 39,34%, Na 60,66% Cl 74
Potassium Klorida, 44,877% K, 18,39% S 46.6
Potassium sitrat, tri-potassium, monohidrat, 36,16% K 28
Magnesium oxide, 60,32% Mg 24
Ferric citrate, 16,5% Fe 6,06
Xinc carbonate, 52,14% Zn 1,65
Manganous carbonate, 47,79% Mn 0,63
Cupric carbonate, 57,47% Cu 0,30
Potassium iodate, 59,3% I 0,01
Sodium selenate, anhydrous, 41,79% Se 0,01025
Ammonium paramolybdate, 4 hydrate, 54-34% Mo 0,00795
Pottentially beneficial mineral element
Sodium meta-silicate, 9 hydrate, 9,88% Si 1,45
Chromium potassium sulfate, 12 hydrate, 10,42% Cr 0,275
Boric acid, 17,5% B 0,0815
Sodium fluoride, 45,24% F 0,0635
Nickel carbonate, 45% Ni 0,0318
Lithium chloride, 16,38% Li 0,0174
Ammonium vanadate, 43,55% V 0,0066
Powdered sucrose 209,806
(Reeves, et al., 1993)

2.5 Diet High Fat High Fructose (HFHF)

Diet HFHF merupakan diet yang memiliki kandungan lemak dan fruktosa

yang tinggi. Diet HFHF merupakan kombinasi antara diet tinggi lemak dan

diet tinggi fruktosa. Diet tinggi lemak yang biasa digunakan untuk penelitian

laboratorium menggunakan 32-60% lemak dari kalori yang diberikan. Dalam

perspektif gizi, seorang manusia jika mengkonsumsi 60% lemak dari kalori

dapat menyebabkan gangguan kesehatan yang berat. Sehingga

diasumsikan jika pemberian diet tinggi lemak dengan kandungan 60% dapat

menyebabkan tikus laboratorium menjadi obesitas dalam waktu yang cepat.

Jenis lemak yang digunakan pada diet tinggi lemak bermacam-macam.

Banyak diet tinggi lemak pada tikus laboratorium mengandung lebih banyak
 13

lemak jenuh, seperti lard, lemak daging sapi, atau minyak kelapa. Jenis

lemak ini dapat dengan cepat menyebabkan obesitas pada tikus (Gajda,

2008). Diet tinggi lemak pada manusia dapat menimbulkan berbagai macam

gangguan metabolisme, seperti penurunan aktivitas lipolisis, penurunan

sekresi dan sesitivitas leptin, apoptosis neuron hipotalamus, kerusakan

metabolisme mitokondria, resistensi insulin, dan obesitas. Kelebihan asupan

kalori dapat menyebabkan hiperinsulinemia, yang dapat menyebabkan

lipogenesis dan obesitas. Konsumsi asam lemak jenuh berhubungan dengan

kejadian resistensi insulin. Kejadian insulinemia banyak terjadi pada individu

yang mengkonsumsi diet tinggi asam lemak jenuh. Konsumsi diet tinggi

asam lemak jenuh, lemak trans, MUFA (omega-9), atau PUFA (omega-6)

dapat memperparah resistensi insulin. Diet tinggi lemak dapat menurunkan

ekspresi gen dari transporter glukosa (GLUT 1 dan GLUT 4) pada jaringan

adiposa dan otot (Coelho et al., 2011).

Studi pada hewan dan manusia, menunjukkan bahwa fruktosa

merupakan zat gizi yang dapat berkontribusi pada respon metabolik,

resistensi insulin, dan perkembangan fase pre-diabetes maupun diabetes.

Diet tinggi fruktosa pada tikus juga banyak digunakan pada penelitian tanda-

tanda kardiovaskular (Patel, et al., 2009). Fruktosa sendiri merupakan jenis

monosakarida sederhana yang ditemukan pada sumber nabati. Fruktosa

dalam komersial dapat berbentuk disakarida (campuran dari glukosa dan

fruktosa) yang membentuk high-fructose corn syrup (HFCS) (Abdelmalek,

2012). Metabolisme fruktosa sedikit berbeda dengan glukosa, terutama dari

segi reaksi katabolisme. Fruktosa dimetabolisme di liver melalui fruktolisis

 14

dan menghasilkan glukosa, laktat, asam lemak bebas (FFA), very low-

density lipoprotein (VLDL)-TG, dan asam urat (Zhang, 2017).

Konsumsi tinggi fruktosa dapat menyebabkan kelebihan asupan energi,

peningkatan berat badan, dan peningkatan resiko obesitas, perlemakan hati,

dan gangguan profil lipid (Schwarz et al., 2015). Konsumsi fruktosa juga

dapat meningkatkan faktor resiko dari sindrom metabolik, menyebabkan

peningkaan asam urat yang akan menyebabkan kerusakan endotel. Selain

itu, konsumsi tinggi fruktosa juga dapat meningkatkan marker inflamasi

sekunder yang juga dapat meningkatkan resiko sindrom metabolik.

Seseorang yang mengkonsumsi 20% dari kebutuhan energi mereka dengan

fruktosa dapat meningkatkan jaringan adiposa visceral dan faktor resiko lain

yang berhubungan dengan sindrom metabolik (Rippe, 2013).

2.6 Interleukin-6 (IL-6)

Interleukin-6 (IL-6) merupakan sitokin yang memiliki efek pleiotropik yang

berhubungan dengan terjadinya inflamasi, gangguan pertahanan tubuh, dan

kerusakan jaringan (Pozza, 2018). Family dari sitokin IL-6, yaitu IL-6, IL-11,

Leukimia Inhibitory Factor (LIF), Oncostatin M (OSM), Ciliart Inhibitory Factor

(CNTF), Cardiotropin-1 (CT-1), Neuripoietin (NPN), IL-27, dan IL-31. Semua

jenis IL-6 ini (kecuali IL-31), mengeluarkan memban glikoprotein gp130 yang

biasanya berperan sebagi reseptor dan signal tranducer subunit. IL-6

berikatan dengan membran reseptor α (IL-6R). IL-6R ini membentuk

kompleks dengan gp130 untuk membentuk gp-130 dan menginisiasi sinyal

IL-6 (Scheller, et al., 2011).

 15

2.6.1 IL-6 Signalling

Interleukin 6 (IL-6) merupakan sitokin pro-inflamasi dan kadarnya

meningkat sebagai respon inflamasi. Terdapat 2 subunit reseptor IL-6,

yaitu gp130 dan IL-6R. IL-6R merupakan protein transmembran 80-kDa

yang mengikat IL-6 secara langsung. IL-6R berperan dalam mencari dan

mengidentifikasi protein transmembran lain yang dapat menyebabkan

transducer sinyal. Gp130 merupakan glikoprotein 130kDa yang memiliki

sitoplasma besar yang memediasi respon signalling dari IL-6. Stimulasi

dari reseptor IL-6 mengaktifkan jalur sinyal Janus kinase (Jak)-STAT

(signal transducer dan aktivator dari transkripsi). Janus kinase (JAK)

dapat menyebabkan fosfolirasi dan aktivasi dari faktro transkripsi mayor

yang diregulasi oleh IL-6, signaling transducer, dan aktivasi transkripsi

(STAT) (Rincon, 2012). Terdapat setidaknya 2 reseptor IL-6 yang larut,

yaitu yang diproduksi oleh pembelahan proteolitik pada saat

pembentukan ikatan membran atau oleh saat penyambungan reseptor

mRNA (Glund, 2008). Pembelahan proteolitik dari IL-6R dapat

distimulasi oleh C-reactive protein (CRP) serta dapat terjadi melalui

TNF-α (Barnes, et al., 2011)

Ikatan reseptor dapat memediasi aktivitas biologis IL-6, yaitu

ikatan IL-6 dengan IL-6R dan gp130. Pertama, IL-6 akan berikatan

dengan IL-6R, kemudian ikatan ini akan mengikat dua molekul dari

gp130 yang dapat menginisiasi sinyal IL-6. IL-6R meningkatkan

kekuatan sinyal IL-6, yaitu dengan mengeluarkan sinyal transducer

protein gp130. Namun hanya beberapa sel saja yang mengekpresikan

IL-6R di permukaan sel, seperti makrofag, neutrofil, dan beberapa jenis

 16

sel T dan hepatosit. Aktivasi sel yang hanya memperlihatkan gp130

melalui IL-6 atau IL-6R disebut trans-signalling. Trans-signalling IL-6

memicu proliferasi sel T selama kanker kolon dan berpengaruh pada

regulasi ekspresi molekul pada sel endotel.

Jalur apoptosis berperan sebagai stimulus fisiologis dari keluarnya

IL-6R. Apoptosis memegang peran penting dalam regulasi

pertumbunhan, homeostasis jaringan, perkembangan, dan respon imun.

Selama apoptosis, sIL-6R aktif dan membentuk kompleks dengan IL-6

dan menghasilkan IL-6 trans-signalling pada sel non-apoptosis. Pada

manusia, neutrofil mengeluarkan IL-6R setelah induksi dari apoptosis.

Hal ini akan menyebaban pembentukan IL-6 atau sIL-6R komplek yang

akan langsung menyebabkan trans-signalling pada sel endotel.

Pengeluaran IL-6R dan IL-6 trans-signalling menghasilkan tahap yang

paling penting dalam respon inflamasi (Scheller, et al., 2011).

2.6.2 Pengaruh Diet HFHF terhadap Kadar IL-6

Diet tinggi lemak dapat mengubah ukuran dan morfologi jaringan

adiposa karena adanya peningkatan akumulasi lemak, peningkatan

massa jaringan adiposa putih ini dapat mempengaruhi perubahan

biokimia dan histologi yang dapat dikarakeristikan menjadi inflamasi.

Jaringan adiposa mensekresi sitokin proinflamasi (TNF-α dan IL-6) yang

terdapat pada metabolisme lemak. Diet tinggi lemak juga dapat

meningkatkan jumlah makrofag yang dapat memicu terjadinya inflamasi

(Ludgero-Correia, et al., 2012).

Konsumsi diet tinggi fruktosa secara tidak langsung dapat

berpengaruh pada sitokin pro-inflamasi. Konsumsi diet tinggi fruktosa

 17

juga dapat meningkatkan resiko hiperlipidemia karena terjadi

peningkatan plasma asam lemak bebas, trigliserida, dan VLDL-TG.

Fruktosa sendiri dapat menyebabkan lipotoksisitas yang dapat memicu

terjadinya inflamasi adiposa. Jaringan adiposa dapat menyebabkan

peningkatan sekresi asam lemak bebas. Jaringan adiposa mensekresi

adipokin, hormon (leptin), dan chemokines (MCP-1, IL-10, TNF-α, dan

IL-6). Dalam keadaan konsumsi fruktosa yang tinggi, jaringan adiposa

akan meningkatkan sekresi sitokin proinflamasi pada sirkulasi sistemik.

Gangguan jaringan adiposa ini dapat mengganggu pengeluaran energi

dan signaling insulin akibat adanya sitokin proinflamasi. Respon

inflamasi, yang diikuti oleh perubahan fungsi dan morfologi, peningkatan

adiposiitas, dan gangguan signaling insulin dideteksi pada tikus yang

diberikan diet tinggi fruktosa. Gangguan endotel karena konsumsi

fruktosa juga sejalan dengan adanya infiltrasi makrofag pada jaringan

adiposa (Zhang, et al., 2017).

Diet HFHF dapat menyebabkan peningkatan berat badan,

adipositas, hipertensi, resistensi insulin, oksidatif stess, reaksi inflamasi

seperti peningkatan IL-6, dislipidemia, penurunan kadar leptin dan

penurunan kadar adiponektin yang merupakan gejala kunci terjadinya

sindrom metabolik pada manusia. Hal-hal tersebut menunjukkan bahwa

diet HFHF dapat menyebabkan terjadinya perkembangan diabetes

melitus tipe 2 dan obesitas karena terjadi hiperleptinemia dan disfungsi

endotel (Lozano et al., 2016). Pada tikus, jaringan adiposa bagian

epididimal merupakan salah satu jaringan adiposa yang menyebabkan

adipositas, inflamasi jaringan adiposa, dan inflamasi sistemik. Hipertofi

 18

dan hiperplasi jaringan adiposa menjadi inflamasi karena adanya

diferensiasi dari monosit menjadi makrofag. Inflamasi jaringan adiposa

merupakan salah satu penyebab utama terjadinya inflamasi (Vedova et

al., 2016).

2.6.3 Pengaruh Obesitas terhadap Kadar IL-6

Pada obesitas, terjadi hipertrofi jaringan adiposa karena terjadi

peningkatan penyimpanan trigliserida. Individu dengan hipertrofi pada

jaringan adiposa dapat meningkatkan resiko penyakit, salah satunya

yaitu terjadinya inflamasi kronis grade rendah. Peningkatan volume

jaringan adiposa ini secara signifikan akan berhubungan dengan

gangguan sensitivitas insulin, stress oksidatif, dan peningkatan

parameter inflamasi sejalan dengan jumlah makrofag pada jaringan

adiposa. Sehingga terjadi peningkatan marker inflamasi (Blüher, 2009).

Jaringan adiposa memiliki 2 jenis tipe, yaitu jaringan adiposa putih

(WAT) dan jaringan adiposa coklat (WAT). WAT merupakan jaringan

adiposa yang memiliiki peran sebagai penyimpan energi. WAT

memproduksi beberapa adipokin yang berhubungan dengan inflamasi,

yaitu adiponektin, IL-1β, IL-6, TNF-α, MCP-1, dan MIF. Kadar TNF-α

dan IL-6 secara langsung akan berkolerasi dengan adipositas dan

resistensi insulin.

Obesitas dapat menyebabkan infiltrasi makrofag jaringan adiposa

di WAT. Makrofag jaringan adiposa (ATM) memiliki dua jenis sel, yaitu

M1 dan M2. Makrofag M1 adalah makrofag yang mensekresikan sitokin

proinflamasi, yaitu TNF-α, IL-1β, dan IL-6. Sementara makrofag M2

adalah makrofag yang mensekresikan sitokin anti-inflamasi yaitu IL-10

 19

dan IL-1RA. Pada keadaan obesitas, proporsi jumlah M1 lebih besar

dibandingkan dengan M2, sehingga terjadi peningkatan sitokin inflamasi

yang dapat menyebabkan inflamasi pada jaringan adiposa (McArdle, et

al., 2013). Hal ini terjadi sebagai respon terhadap terjadinya hipoksia

pada massa jaringan lemak yang meningkat akibat adanya obesitas.

Hipoksia ini menstimulasi ekspresi gen yang mengkode IL-6 dan leptin

yang juga akan meningkat sejalan dengan peningkatan IL-6. Akumulasi

lemak juga memiliki korelasi yang sangat dekat dengan terjadinya stress

oksidatif. Stress oksidatif ini dapat menekan ekspresi mRNA dan

mensekresi adiponektin, serta dapat meningkatkan ekspresi PAI-1,

MCP-1, dan IL-6. Hiperglikemia juga dapat memicu peningkatan level

oksigen reaktif. Paparan dari hiperglikemia dapat menyebabkan

peningkatan sekresi IL-6 pada adiposa. (Eder, et al., 2009).

Gambar 2.1 Perluasan Jaringan Adiposa dan Inflamasi

Asupan energi yang berlebihan menyebabka perluasan jaringan adiposa yang

diikuti oleh sekresi MCP-1, TNF-α, IL-1β, dan IL-6 akibat adanya makrofag
proinflamasi M1 (McArdle, 2013).
 20

Gambar 2.2 Regulasi Produksi IL-6

Pada keadaan obesitas, jaringan adiposa berperan sebagai sumber utama

dari produksi IL-6. Produksi ini diregulasi oleh adipokin dan proses pada
jaringan adiposa seperti leptin atau stess dan oleh hormon, seperti insulin,
katekolamin, dan glukosteroid (Eder, 2009)

Inflamasi grade rendah juga berhubungan dengan terjadinya resistensi

insulin dan diabetes melitus tipe 2. Tumour necrosis factor-α (TNF-α) dan IL-6

merupakan reseptor yang dapat menstimulasi c-Jun amino-terminal kinase (JNK)

dan nuclear factor-қB (NF-қB) yang dapat menyebabkan upregulasi mediator

inflamasi yang dapat meningkatkan kejadian resistensi inuslin (Kahn, et al.,

2006). Jalur lain yang dapat menyebabkan inflamasi yaitu melalui substrat

reseptor insulin (IRS), IL-6 juga dapat menginduksi suppresor signaling insulin

(SCOs) yang juga dapat mengganggu aktivitas reseptor kinase insulin, dengan

mengikat substrat reseptor insulin (IRS) 1 dan IRS 2 yang dapat menyebabkan

penurunan IRS (Hummasti, et al., 2010), dimana insulin signalling dapat

terhambat jika kadar IRS menurun (Eder, et al., 2009). IL-6 dapat menstimulasi

lipolisis pada manusia, efek lipolisis ini dapat berkontribusi pada terjadinya

resistensi insulin karena adanya asam lemak dari jaringan adiposa yang masuk
 21

kedalam sirkulasi, sehingga dapat menyebabkan akumulasi lemak dan resistensi

insulin pada jaringan yang lainnya, seperti otot skeletal dan liver (Goossens,

2008).
 22

BAB 3

KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN

3.1 Kerangka Konsep

Tikus Putih Rattus Norvegicus Sprague Dawley

Diet HFHF
KH: 29,39%, protein: 21,81%, lemak: 51,64%, dan
fruktosa 30%

↑ penyimpanan trigliserida

Hipertrofi dan Hiperplasia WAT

Obesitas

↓ adiponektin ↑ leptin ↑ MCP-1

↑ Makrofag jaringan adiposa

↑ M1 ↓ M2

↑ TNF-α ↑ IL-6 ↑ IL-1β ↓ IL-10 ↓ IL-1RA

↓ IRS Menstimulasi jalur JNK dan NF-қB

Keterangan

Diteliti
Resistensi Insulin
Tidak diteliti
Gambar 3.1 Kerangka konsep

22
 23

Diet tinggi lemak dan tinggi fruktosa dapat menyebabkan peningkatan

penyimpanan trigliserida (Blüher, 2009). Pada kondisi obesitas, terdapat

keseimbangan energi positif yang disebabkan karena akumulasi lemak yang

berlebihan dalam waktu yang cukup lama. Hal ini dapat mempengaruhi

plastisitas dari jaringan adiposa, sehingga jaringan adiposa mengalami hipertrofi

(Monteiro et al., 2010) dan jika berlangsung lama maka akan terjadi penambahan

jumlah adiposit atau hiperplasia (Mukhtar, 2012). Peningkatan volume adiposa

(hipertrofi) dapat menyebabkan penurunan level adiponektin, peningkatan sitokin

inflamasi (Bahceci, et al., 2007), peningkatan kadar leptin, dan peningkatan

monocyte chemoattractant protein (MCP-1).

Peningkatan MCP-1 akan memicu infiltrasi monosit dari White Adipose

Tissue (WAT), yang akan berpengaruh juga pada makrofag jaringan adiposa

(ATM). Jumlah ATM akan berubah disesuaikan dengan keadaan genetik atau

keadaan obesitas. ATM memiliki dua jenis sel, yaitu M1 dan M2. Makrofag M1

adalah makrofag yang mensekresikan sitokin inflamasi, yaitu TNF-α, IL-1β, dan

IL-6. Sementara makrofag M2 adalah makrofag yang mensekresikan sitokin anti-

inflamasi yaitu IL-10 dan IL-1RA. Pada keadaan obesitas, proporsi jumlah M1

lebih besar dibandingkan dengan M2, sehingga terjadi peningkatan sitokin

inflamasi yang dapat menyebabkan inflamasi pada jaringan adiposa (McArdle, et

al., 2013).

Tumor Necrosis Factor-α (TNF-α) dan IL-6 dapat berperan sebagai

reseptor yang dapat menstimulasi jalur c-Jun amino-terminal kinase (JNK) dan

nuclear factor-қB (NF-қB) yang dapat menghasilkan regulasi dari mediator

inflamasi (Kahn, et al., 2006). Peningkatan JNK dan NF-қB ini menyebabkan

perubahan sinyal insulin sehingga dapat menyebabkan resistensi insulin

 24

(Rodriguez-Hernandez et al., 2013). Selain itu sitokin pro inflamasi juga dapat

menginduksi supresos signaling insulin (SCOs) yang juga dapat mengganggu

aktivitas reseptor kinase insulin, dengan mengikat substrat reseptor insulin (IRS)

1 dan IRS 2 dan dapat menyebabkan penurunan IRS (Hummasti & Hotamisligil,

2010).

3.2 Hipotesis Penelitian

Diet HFHF modifikasi AIN-93M berpengaruh terhadap kadar IL-6 plasma

pada tikus putih Rattus Norvegicus Sprague Dawley.

 BAB 4

METODE PENELITIAN

4.1 Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian true eksperimental laboratory dengan

rancangan penelitian Randomized Posttest-only Control Group Design

dengan menggunakan rancangan acak lengkap untuk menentukan

kelompok normal dan kelompok perlakuan lalu dilanjutkan dengan

menggunakan rancangan acak kelompok.

4.2 Populasi dan Sampel Penelitian

Populasi pada penelitian eksperimental ini adalah seluruh tikus putih Rattus

Norvegicus Sprague Dawley. Sampel yang diambil pada penelitian ini adalah

tikus putih jenis Rattus Norvegicus Sprague Dawley yang memenuhi kriteria

inklusi dan eksklusi sebagai berikut:

4.2.1 Kriteria Inklusi

1. Usia 3 bulan

2. Jenis kelamin jantan

3. Berat 200-250 gram

4. Tidak ada cacat fisik

5. Sehat

4.2.2 Kriteria Drop Out

Tikus yang mati selama penelitian berlangsung

25
 26

4.2.3 Jumlah Sampel

Pada penelitian ini menggunakan 2 kelompok perlakuan yaitu

kelompok yang diberi diet normal dan kelompok yang diberikan diet

tinggi lemak dan tinggi fruktosa. Sehingga dihitung dengan

menggunakan rumus federer (1977) berikut

(t - 1) (n – 1) ≥ 15

(2 – 1) (n – 1) ≥ 15

(n – 1) ≥ 15

n ≥ 16

dimana t = jumlah perlakuan

n = jumlah ulangan

Perhitungan cadangan:

10% x jumlah ulangan

10% x 16 = 1,6, dibulatkan menjadi 2 ekor

Berdasarkan hasil dari rumus diatas, maka didapatkan bahwa

terdapat minimal 16 kali pengulangan tiap perlakuan dengan minimal

2 ekor tikus cadangan tiap perlakuannya, sehingga didapatkan

sampel pada penelitian ini adalah 36 tikus.

4.2.4 Prosedur Pengambilan Sampel

Sampel diambil dengan menggunakan rancangan acak

lengkap untuk membagi sampel menjadi 2 kelompok, yaitu

kelompok diet normal modifikasi AIN-93M dan kelompok diet

HFHF modifikasi AIN-93M. Selanjutnya dilakukan rancangan acak

kelompok untuk membagi sampel berdasarkan berat badan yang

terbesar hingga terkecil.

4.3 Variabel Penelitian

4.3.1 Variabel Bebas

Variabel bebas pada penelitian ini adalah diet HFHF modifikasi

AIN-93M.

4.3.2 Variabel Tergantung

Variabel tergantung pada penelitian ini adalah kadar Interleukin 6

(IL-6) plasma.

4.3.3 Variabel Kendali

Variabel kendali adalah variabel yang dapat dikendalikan, yaitu

jenis tikus, umur tikus, jumlah makanan, dan minuman tikus.

4.4 Lokasi dan Waktu Penelitian

4.4.1 Lokasi Penelitian

Penelitian ini dilakukan pada beberapa Laboratorium yaitu:

1. Laboratorium Pangan Politeknik Kesehatan Malang untuk

pembuatan pakan.

2. Laboratorium Biosains Universitas Brawijaya Malang untuk

pemeliharaan tikus

3. Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya

Malang untuk pembuatan fruktosa.

4. Laboratorium Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas

Brawijaya untuk analisa kadar IL-6 plasma.

4.4.2 Waktu Penelitian

Penelitian eksperimental ini dilaksanakan mulai Bulan Agustus 2017-

Januari 2018.
4.5 Bahan dan Alat Penelitian

4.5.1 Alat Penelitian

1. Alat Pemeliharaan Tikus dan Penimbangan Asupan Makan,

Minum, dan Penimbangan Berat Badan

 Kandang tikus

 Tutup kandang berupa kawat

 Tempat makan tikus

 Botol minum kapasitas 250 ml

 Sekam

 Pipa untuk tempat bermain tikus

 Timbangan untuk mengukur asupan makan dan berat

badan tikus

 Gelas ukur untuk mengukur asupan minum tikus

2. Alat pembuatan pakan tikus

 Baskom plastik

 Timbangan

 Sarung tangan

 Gelas ukur

 Mixer

 Alat pengambilan sampel

 Oven

 Loyang

3. Alat Pembuatan Fruktosa 30%

 Beaker glass

 Gelas ukur
  Erlenmeyer

 Labu ukur

 Stirer

 Timbangan analitik

 Sendok

 Pipet

 Corong

 Kertas saring

 Jurigen

4. Alat Pembedahan dan Pengambilan Sampel Plasma Tikus

 Pisau bedah

 Jarum pentul

 Spuit injeksi

4.5.2 Bahan Penelitian

1. Bahan Pembuatan dan Kandungan Energi Pakan

Bahan pembuatan dan kandungan energi pakan dapat dilihat

pada tabel 4.1 dan 4.2

Tabel 4.1 Bahan Pembuatan dan Kandungan Energi Pakan

Normal Modifikasi AIN 93-M
Bahan Kandungan Energi Pakan
 Cornstarch  Karbohidrat : 42,87%
 Dextrinnise Cornstarch  Lemak : 25,81%
 Sukrosa  Protein : 31,32%
 Soybean Oil  Densitas energi : 4,21 kkal/g
 Kasein
 Tepung putih telur
 Agar
 Mineral
 Vitamin Mix Ain
 I-Cystine
 Coline Birtartrate
 Tabel 4.2 Bahan Pembuatan dan Kandungan Energi Pakan
Tinggi Lemak Modifikasi AIN-93M
Bahan Kandungan Energi Pakan
 Cornstarch  Karbohidrat : 29,39%
 Dextrinnise Cornstarch  Lemak : 51,64%
 Sukrosa  Protein : 21,81%
 Fruktosa  Densitas energi : 5,08 kkal/g
 Lard
 Minyak Kedelai
 Kasein
 Tepung Putih Telur
 Agar
 Mineral dan Vitamin mix
ain
 I-Cystine
 Coline Birtatrate
 TBHQ

2. Bahan Pembuatan dan Kandungan Energi Diet Tinggi Fruktosa

30%

Tabel 4.3 Bahan Pembuatan dan Kandungan Energi Diet

Tinggi Fruktosa 30%
Bahan Kandungan Energi Minum
 Bubuk fruktosa  Densitas energi fruktosa :
 Pewarna makanan 3.9 kkal/g
merah, untuk  Kandungan energi fruktosa
membedakan minum 30% (30 g fruktosa dalam
normal dan minum tinggi 100 ml air) : 117 kkal/100ml
fruktosa
 31

4.6 Definisi Operasional

No Variabel Definisi Operasional Cara Mengukur Hasil Ukur Skala Ukur

1. Diet HFHF Merupakan pakan pelet yang dibuat dari modifikasi Penimbangan Pakan: gram Nominal

modifikasi AIN 93-M AIN-93M dan minuman fruktosa yang dibuat dari Minum: ml

bubuk fruktosa, diberikan pada kelompok tinggi

lemak dan tinggi fruktosa selama 17 minggu secara

ad libitum dengan komposisi

 Pakan pelet

Cornstarch, Dextrinnise Cornstarch, Sucrose,

Fruktosa, Lard, Minyak Kedelai, Kasein, Tepung

Putih Telur, Agar, Mineral dan Vitamin mix ain,

I-Cystine, Coline Birtatrate, TBHQ dengan nilai

kandungan karbohidrat 29,39%, lemak 51,64%,

dan protein 21,81% serta densitas energi

sebesar 5,08 kkal/g

 32

 Minum fruktosa

Konsentrasi fruktosa sebesar 30% dengan

kandungan energi sebesar 117 kkal/100ml.

2. Diet normal Merupakan pakan standar AIN-93M yang diberikan Penimbangan gram Nominal

modifikasi AIN 93-M kepada tikus kelompok normal secara ad libitum

selama 17 minggu.dengan komposisi Cornstarch,

Dextrinnise cornstarch, Sucrose, Soybean Oil,

Casein, Tepung putih telur, Agar, Mineral, Vitamin

Mix Ain, I-Cystine, Coline Birtartrate, dan TBHQ

dengan nilai kandungan karbohidrat 42,87%, lemak

25,81%, dan protein 31,32% serta densitas energi

sebesar 4,21 kkal/g.

3. Berat Badan Tikus  Berat badan datang Penimbangan gram Nominal

Merupakan berat badan tikus saat tikus pertama

kali datang dan sebelum masuk masa adaptasi

(aklimatisasi).
 33

 Berat badan awal perlakuan

Merupakan berat badan awal tikus saat

mendapatkan perlakuan (setelah masa

aklimatisasi)

 Berat badan akhir

Merupakan berat badan tikus setelah 17 minggu

perlakuan

4. Interleukin-6 (IL-6) Merupakan sitokin pro inflamasi yang memiliki efek ELISA reader pg/ml Rasio

pleiotropik pada inflamasi, respon imun, dan

hematopoiesis yang diukur pada plasma darah pada

tikus setelah pemberian intervensi selama 17

minggu. Metode pengukuran dengan menggunakan

metode ELISA dan disajikan dengan satuan pg/ml.

 34

4.7 Prosedur Penelitian

4.7.1 Prosedur Perlakuan Tikus

1. Sebelum diberi perlakuan, tikus di aklitimasi selama 1 bulan

dengan diberikan pakan standar PAR-S.

2. Setelah di aklitimasi, tikus dipisahkan menjadi kelompok

normal dan kelompok lemak dengan randomisasi rancangan

acak lengkap, setelah itu di randomisasi lagi dengan

rancangan acak kelompok berdasarkan berat badan tikus.

3. Tikus perlakuan normal diberikan diet normal modifikasi AIN-

93M sebanyak kurang lebih 50 gram.

4. Tikus perlakuan tinggi lemak tinggi fruktosa diberikan diet

HFHF modifikasi AIN-93M tinggi lemak sebanyak kurang lebih

40 gram dan diberikan minum fruktosa 30% sebanyak 250 ml.

5. Asupan makan dan minum tikus ditimbang tiap dua hari sekali

dengan cara menghitung selisih pemberian pakan dan minum

dengan sisa pakan dan minum, kemudian dibagi menjadi dua

untuk mengetahui asupan makan dan minum tiap harinya.

6. Berat badan tikus ditimbang satu minggu sekali untuk

mengetahui perubahan berat badan tikus.

7. Setelah 17 minggu, dilakukan pembedahan tikus untuk

mengetahui kadar IL-6 plasma dengan pengambilan sampel.

4.7.2 Prosedur Pembuatan Pakan

4.7.2.1 Diet Modifikasi AIN 93-M

Berdasarkan penelitian pendahulu, prosedur pembuatan

yaitu
 35

1. Timbang semua bahan sesuai dengan berat masing-

masing

2. Tempatkan semua bahan kering (Cornstarch,

Dextrinnise Cornstarch, Sukrosa, kasein, tepung putih

telur, agar, mineral, vitamin mix Ain, I-Cystine, coline

birtartrate) kedalam mangkuk mixer

3. Tambahkan air sebanyak 50 ml kedalam bahan kering

4. Masukkan minyak kedelai kedalam bahan kering

5. Bahan dimixer secara merata, setelah itu diuleni

hingga kalis

6. Setelah itu bahan dioven pada suhu 60oC selama

kurang lebih 12 jam (modifikasi dari Kusumastuty,

2017).

4.7.2.2 Diet Tinggi Lemak

Berdasarkan penelitian pendahulu, prosedur pembuatan

yaitu

1. Timbang semua bahan sesuai dengan berat masing-

masing

2. Tempatkan semua bahan kering (Cornstarch,

Dextrinnise Cornstarch, Sukrosa, kasein, tepung putih

telur, agar, mineral, vitamin mix Ain, I-Cystine, coline

birtartrate, dan lard) kedalam mangkuk mixer

3. Tambahkan air sebanyak 50 ml kedalam bahan kering

4. Masukkan minyak kedelai kedalam bahan kering

 36

5. Bahan dimixer secara merata, setelah itu diuleni

hingga kalis

6. Setelah itu bahan dioven pada suhu 60oC selama

kurang lebih 12 jam (modifikasi dari Kusumastuty,

2017).

4.7.3 Prosedur Pembuatan Fruktosa 30%

1. Fruktosa bubuk ditimbang dengan menggunakan timbangan

analitik sebanyak 75 g, lalu dimasukkan kedalam gelas kimia.

2. Tambahkan air sebanyak 150 ml, lalu diaduk dengan

menggunakan stirrer hingga homogen.

3. Kemudian masukkan kedalam labu ukur 250 ml, tambahkan

air hingga 250 ml menggunakan pipet. Kemudian dikocok

hingga homogen.

4. Saring menggunakan kertas saring, lalu masukkan kedalam

jurigen. Ulangi prosedur diatas hingga volume fruktosa cair

sebanyak 8 liter.

5. Tambahkan pewarna makanan berwarna merah sebanyak 3

tetes dengan menggunakan pipet (Ratnayani, 2008).

4.7.4 Prosedur Pembedahan dan Pengambilan Sampel Darah Tikus

1. Sebelum dilakukan pembedahan, tikus dipuasakan selama

±10 jam.

2. Setelah itu, dilakuan euthanasia pada tikus dengan cara

anastesi menggunakan Ketamine 0,3 ml intramuskular bagian

paha, kemudian dilakukan pembedahan.

 37

3. Sampel darah diambil di bagian jantung sebanyak ± 3 ml

dengan menggunakan spuit.

4. Sampel darah dimasukkan kedalam tabung yang berisi EDTA,

kemudian di sentrifuge selama 10 menit dengan kecepatan

3000 rpm.

4.7.5 Prosedur Perhitungan Kadar IL-6 Plasma

Kadar IL-6 dalam plasma dihitung dengan menggunakan Bioassay

Technology Rat Interleukin 6 ELISA Kit dengan prosedur sebagai

berikut

1. Siapkan semua reagen, larutan standar, dan sampel. Simpan

pada suhu ruang sebelum digunakan.

2. Masukkan standar IL-6 sebanyak 50µl kedalam sumur

standar.

3. Masukkan sampel sebanyak 40µl kedalam sumur sampel, lalu

tambahkan anti-IL-6 antibodi sebanyak 10µl kedalam sumur

sampel.

4. Tambahkan streptavidin-HRP sebanyak 50µl kedalam sumur

sampel dan sumur standar.

5. Campur secara merata, lalu tutup dengan plate sealer.

Inkubasi selama 60 menit dalam suhu 37oC.

6. Buka plate sealer dan cuci sebanyak 5 kali dengan wash

buffer. Minimal dengan 0,35 ml wash buffer selama 30 detik

hingga 1 menit pada tiap pencucian.

 38

7. Masukkan substrate solution A sebanyak 50µl pada tiap

sumur, lalu dilanjutkan dengan memasukkan substrate

solution B sebanyak 50µl pada tiap sumur.

8. Tutup plate dengan tutup yang gelap, lalu inkubasi selama 10

menit pada suhu 37oC pada keadaan gelap.

9. Masukkan stop solution sebanyak 50µl pada tiap sumur.

Warna biru akan langsung berubah menjadi warna kuning.

10. Lihat optical density (OD) tiap sumur dengan menggunakan

microplate reader dengan absorbansi 450nm (Bioassay

Technology Laboratory)
 39

Alur Penelitian

Tikus Sprague Dawley

berat 200 -250 g, umur 2 bulan

Randomisasi

Kelompok HFHF Kelompok Normal

Fase adaptasi 1 bulan

Kelompok diet HFHF Kelompok diet normal

Modifikasi AIN-93M modifikasi AIN 93-M

Pemberian pakan selama 17

minggu

Penimbangan berat badan

setiap minggu
Tikus dipuasakan
± 10 jam
Euthanasia dengan Ketamine
0,3 ml

Pembedahan

Pengambilan sampel plasma

darah

Analisis kadar IL-6 Plasma

Gambar 4.1 Alur Penelitian

 40

4.8 Analisa Data

4.8.1 Analisa Data Asupan Makan, Fruktosa, dan Zat Gizi Tikus

Percobaan

Setalah data asupan makan, fruktosa, dan zat gizi tikus

diperoleh, maka dilakukan uji normalitas dengan menggunakan

Shapiro-Wilk. Seluruh data terdistribusi normal (p > 0.05), kemudian

dilakukan uji beda dengan menggunakan uji Independent t-test,

sehingga diketahui perbedaan rata-rata pada 2 kelompok sampel.

4.8.2 Analisa Data Berat Badan Awal dan Akhir Tikus Percobaan

Setelah data berat badan datang, berat badan awal

perlakuan, berat badan akhir perlakuan dan perubahan berat badan

tikus diperoleh, maka dilakukan uji normalitas dengan

menggunakan Shapiro-Wilk. Seluruh data terdistribusi normal (p >

0.05), kemudian dilakukan uji beda dengan menggunakan uji

Independent t-test, sehingga diketahui perbedaan rata-rata berat

badan pada 2 kelompok sampel.

4.8.3 Analisa Data Kadar Interleukin-6 (IL-6) Tikus Percobaan

Setelah data Interleukin-6 (IL-6) tikus diperoleh, maka

dilakukan uji normalitas dengan menggunakan Shapiro-Wilk. Hasil

uji normalitas menunjukkan bahwa data terdistribusi normal (p >

0.05), kemudian dilakukan uji beda dengan menggunakan uji

Independent t-test, sehingga diketahui perbedaan rata-rata kadar

Interleukin-6 (IL-6) pada 2 kelompok sampel.

 BAB 5

HASIL PENELITIAN DAN ANALISA DATA

5.1 Karakteristik Tikus Percobaan

Karakteristik tikus percobaan pada masing-masing kelompok

perlakuan dalam penelitian ini dapat dilihat pada tabel 5.1 dibawah ini

Tabel 5.1 Karakteristik Tikus Percobaan

Kriteria Inklusi Kelompok Normal Kelompok HFHF
Modifikasi AIN-93M Modifikasi AIN-93M
Jumlah 16 16
Jenis Kelamin Jantan Jantan Jantan
Usia (bulan) 3 3 3
BB datang 200-250 gram 244.19 ± 33.07 240.24 ± 30.71
(Mean±SD)

Berdasarkan Tabel 5.1 dapat diketahui bahwa seluruh kelompok

perlakuan telah sesuai dengan kriteria inklusi. Hasil uji statistik

Independent t-test pada berat badan tikus datang dari masing-masing

kelompok tidak terdapat perbedaan yang signifikan dengan nilai p= 0.725

(α=0.05)

5.2 Gambaran Pakan Tikus

Komposisi zat gizi yang terkandung dalam pakan dan minum diet

normal modifikasi AIN-93M maupun diet HFHF modifikasi AIN-93M

ditampilkan pada tabel 5.2

41
 42

Tabel 5.2 Komposisi Zat Gizi Pakan Kelompok Normal Modifikasi AIN-
93M dan kelompok HFHF Modifikasi AIN-93M per 100 gram
Kelompok Normal Kelompok HFHF
Modifikasi AIN-93M Modifikasi AIN-93M
Energi (kkal) 421 508
Protein (gram); (%) 32.96 g (31.32%) 27.69 g (21.81%)
Lemak (gram); (%) 12.07 g (25.81%) 29.14 g (51.64%)
Karbohidrat (gram); (%) 45.12 g (42.87%) 37.32 g (29.39%)
Densitas Energi (kkal/gram) 4.21 5.08

Tabel 5.3 Kandungan Energi Minum Tinggi Fruktosa Kelompok HFHF

Modifikasi AIN-93M per 100 ml
Kelompok HFHF Modifikasi AIN-93M
Energi (kkal) 117
Karbohidrat (gram) 30
Densitas Energi Fruktosa 3.9
(kkal/gram)
*) Kelompok HFHF diberikan pelet tinggi lemak dan minum tinggi fruktosa

Berdasarkan tabel 5.2 diketahui bahwa energi pada pakan

kelompok HFHF modifikasi AIN-93M lebih besar dibandingkan kelompok

normal modifikasi AIN-93M. Selain itu, kandungan lemak pada kelompok

HFHF modifikasi AIN-93M juga lebih besar dibandingkan dengan

kelompok normal modifikasi AIN-93M. Kelompok HFHF Modifikasi AIN-

93M juga mendapatkan energi tambahan dari minum tinggi fruktosa.

5.3 Rata-rata Asupan Makan, Fruktosa, dan Zat Gizi pada Tikus

Percobaan yang diberi Diet Normal Modifikasi AIN-93M dan Diet

HFHF Modifikasi AIN-93M

Asupan makan dan minum yang dikonsumsi oleh tikus dihitung

setiap dua hari sekali dengan menghitung selisih pemberian pakan dua

hari yang lalu dengan sisa pakan, kemudian dibagi menjadi dua untuk
 43

menghitung asupan makan dan minum tikus setiap harinya. Asupan

makan dan minum kemudian dikonversikan ke nilai energi, protein, lemak

dan karbohidrat pada masing-masing kelompok

Rata-rata asupan makan, minum, dan zat gizi tikus dapat dilihat

pada tabel 5.4.

Tabel 5.4 Perbedaan Rata-rata Asupan Makan, Fruktosa, dan Zat Gizi
Tikus Kelompok Normal Modifikasi AIN-93M dan kelompok HFHF
Modifikasi AIN-93M
Kelompok Normal Kelompok HFHF ∆ p
Modifikasi AIN-93M Modifikasi AIN-93M
Asupan makan (g) 12.28 ± 1.68 6.66 ± 1.09 5.62 0.000
Asupan Fruktosa (ml) - 30.60 ± 3.67 - -
Energi (kkal) 51.71 ± 7.09 69.66 ± 6.22 17.95 0.000
Protein (gram) ; (%) 4.05 ± 0.55 1.85 ± 0.30 2.2 0.000
(31.33%) (10.62%)
Lemak (gram) ; (%) 1.48 ± 0.20 1.94 ± 0.32 0.46 0.000
(25.76%) (25.06%)
Karbohidrat (gram);(%) 5.54 ± 0.76 11.67 ± 1.08 6.13 0.000
(42.85%) (67.01%)

Berdasarkan analisis uji independent t-test diketahui bahwa

terdapat perbedaan yang signifikan antara asupan makan dan energi

kelompok normal modifikasi AIN-93M dibandingkan dengan diet HFHF

modifikasi AIN-93M dengan nilai p=0.000 (α=0.05) dimana asupan makan

kelompok normal modifikasi AIN-93M lebih besar dibandingkan dengan

kelompok HFHF modifikasi AIN-93M, sedangkan asupan energi kelompok

HFHF modifikasi AIN-93M lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok

normal modifikasi AIN-93M.

 44

Berdasarkan hasil analisis uji independent t-test diketahui bahwa

terdapat perbedaan yang signifikan antara asupan protein, lemak, dan

karbohidrat kelompok normal modifikasi AIN-93M dibandingkan dengan

diet HFHF modifikasi AIN-93M dengan nilai p=0.000 (α=0.05), dimana

asupan protein pada kelompok normal modifikasi AIN-93M lebih tinggi

dibandingkan dengan kelompok HFHF modifikasi AIN-93M sedangkan

asupan lemak dan karbohidrat kelompok HFHF modifikasi AIN-93M lebih

tinggi dibandingkan dengan kelompok normal modifikasi AIN-93M.

5.4 Rata-Rata Berat Badan Awal dan Berat Akhir Tikus

Penimbangan berat badan tikus dilakukan secara bertahap yaitu

setiap 1 minggu sekali selama 17 minggu. Perkembangan berat badan

tikus selama penelitian dapat dilihat pada tabel 5.5.

Tabel 5.5 Rata-Rata Berat Badan Tikus Kelompok Normal Modifikasi

AIN-93M dan kelompok HFHF Modifikasi AIN-93M
Kelompok Normal Kelompok HFHF ∆ p
Modifikasi AIN-93M Modifikasi AIN-93M
BB datang ± SD 244.19 ± 33.07 240.24 ± 30.71 3.95 0.725
BB awal perlakuan 246.11 ± 19.1 247.58 ± 22.9 1.47 0.847
BB akhir ± SD 261.93 ± 29.29 276.92 ± 35.65 14.99 0.217
Perubahan BB 15.82 (6.43%) 29.34 (11.85%) 13.52 0.72
(gram) ; (%)

Pada tikus kelompok normal modifikasi AIN-93M terjadi

peningkatan berat badan sebesar 15.82 gram sedangkan pada kelompok

HFHF modifikasi AIN-93M terjadi peningkatan berat badan sebesar 29.34

gram, berdasarkan hasil uji statistik independent t-test, perubahan berat

badan antara dua kelompok tidak terdapat perbedaan yang signifikan

dengan nilai p=0.72 (α=0.05). Berdasarkan uji independent t-test

 45

diketahui bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan pada berat

badan akhir tikus pada kelompok normal modifikasi AIN-93M

dibandingkan dengan kelompok HFHF modifikasi AIN-93M dengan nilai

p=0.217 (α=0.05). Gambaran perubahan berat badan tikus tiap hewan

percobaan setiap minggunya dapat dilihat pada gambar 5.1.

300.00

290.00

280.00

270.00
Berat Badan

260.00
BB Lemak
250.00 BB Normal
240.00

230.00

220.00
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
Minggu ke-

Gambar 5.1 Gambaran Perubahan Berat Badan Tikus Sebelum dan Setelah
Perlakuan

5.5 Kadar Interleukin 6 (IL-6) Plasma pada Tikus

Kadar Interleukin-6 (IL-6) Plasma pada masing-masing kelompok

tikus dapat dilihat pada tabel 5.6.

Tabel 5.6 Rata-Rata Kadar Interleukin-6 (IL-6) Plasma Kelompok Normal

Modifikasi AIN-93M dan kelompok HFHF Modifikasi AIN-93M
Kelompok Normal Kelompok HFHF ∆ p
Modifikasi AIN-93M Modififikasi AIN-93M
IL-6 ± SD 17.25 ± 5.20 20.06 ± 6.99 2.81 0.219
 46

Pada kelompok normal modifikasi AIN-93M didapatkan kadar IL-6 yaitu

sebesar 17.25 pg/ml sedangkan pada kelompok HFHF modifikasi AIN-93M

didapatkan kadar IL-6 sebesar 20.06 pg/ml. Berdasarkan hasil uji independent t-

test diketahui bahwa kadar interleukin-6 (IL-6) plasma tidak berbeda secara

signifikan pada kelompok normal modifikasi AIN-93M dibandingkan dengan

kelompok HFHF modifikasi AIN-93M dengan nilai p=0.219 (α=0.05).

 BAB 6

PEMBAHASAN

6.1 Rata-rata Asupan Makan, Minum dan Zat Gizi pada Tikus Percobaan

yang diberi Diet Normal Modifikasi AIN-93M dan Diet HFHF Modifikasi

AIN-93M

Asupan makan dan minum pada tikus percobaan merupakan

selisih dari asupan yang diberikan dengan asupan yang tersisa. Kebutuhan

pakan seekor tikus percobaan kurang lebih sebanyak 10% dari berat

tubuhnya jika pakan tersebut merupakan pakan kering, sedangkan

kebutuhan minum seekor tikus setiap harinya kira-kira 15-30 ml, jumlah ini

dapat berkurang jika pakan yang dikonsumsi mengandung banyak air.

Asupan makan tikus dipengaruhi oleh nafsu makan tikus, jika nafsu makan

tikus berlebih maka tikus dapat meningkatkan asupan energi (Smith dan

Mangkowidjojo, 1988).

Pada penelitian ini, asupan makan tikus pada kelompok normal

modifikasi AIN-93M yaitu 12.28 ± 1.68 g/hari. Penelitian sebelumnya yang

dilakukan oleh Jariyah (2013) menunjukkan bahwa rata-rata asupan makan

tikus Wistar kelompok normal yang diberi diet AIN-93M dalam satu hari yaitu

13.32 g. Asupan makan tikus pada kelompok HFHF modifikasi AIN-93M

pada penelitian ini yaitu sebesar 6.66 ± 1.09 g/hari. Pada penelitian

sebelumnya yang dilakukan oleh Ramirez et al. (2017) menunjukkan bahwa

rata-rata tikus Wistar yang diberi diet tinggi lemak modifikasi AIN-93M dalam

satu hari yaitu 15.4 ± 1.6 g/hari, jenis lemak yang diberikan pada penelitian

Ramirez et al. (2017) tersebut yaitu Lard, dimana rata-rata asupan makan

47
 48

tikus pada penelitian tersebut lebih tinggi dibandingkan dengan rata-rata

asupan makan tikus pada penelitian ini. Hal ini disebabkan karena densitas

energi pada penelitian oleh Ramirez et al. (2017) lebih rendah yaitu 4.65

kkal/g, sedangkan pada penelitian ini densitas energinya yaitu 5.08 kkal/g.

Densitas energi merupakan jumlah energi yang terkandung tiap berat pada

makanan.

Rata-rata asupan makan tikus pada kelompok normal modifikasi

AIN-93M lebih tinggi dibandingkan dengan asupan makan kelompok HFHF

modifikasi AIN-93M. Hal ini juga dapat terjadi karena densitas energi dari

pakan kelompok HFHF modifikasi AIN-93M lebih tinggi (5.08 kkal/g)

dibandingkan dengan pakan kelompok normal modifikasi AIN-93M (4.21

kkal/g), selain itu juga pada kelompok HFHF diberi energi tambahan dari

minuman fruktosa dengan densitas energi sebesar 3.9 kkal/g. Penelitian

yang dilakukan oleh Picchi et al. (2011) juga menunjukkan hasil yang sama,

yaitu kelompok yang diberi diet tinggi lemak modifikasi AIN-93M memiliki

asupan makan yang lebih rendah (73.4 ± 13.14 g pada minggu terakhir

penelitian) dibandingkan dengan asupan makan kelompok kontrol (114.6 ±

21.6 g pada minggu terakhir penelitian). Hal ini disebabkan karena makanan

dengan densitas energi yang rendah akan menyumbangan asupan energi

yang rendah pula, sehingga asupan makan tikus akan meningkat.

Makanan yang memiliki densitas energi yang lebih rendah maka

akan memberikan energi yang lebih rendah per gramnya dibandingkan

dengan makanan yang memiliki densitas energi yang lebih tinggi (Ledikwe et

al., 2006). Hal ini sejalan dengan hasil dari penelitian ini, yaitu pada

kelompok normal modifikasi AIN-93M asupan energinya lebih rendah (51.71

 49

± 7.09 kkal) dibandingkan dengan asupan energi kelompok HFHF modifikasi

AIN-93M (69.66 ± 6.22 kkal).

Asupan tikus juga dapat dipengaruhi oleh tekstur pakan tikus yang

hendak dimakan, pada penelitian ini terdapat perbedaan tekstur pakan

antara kelompok normal modifikasi AIN-93M dan kelompok HFHF modifikasi

AIN-93M. Pakan pada kelompok normal modifikasi AIN-93M memiliki tekstur

yang lebih padat dibandingkan dengan kelompok HFHF modifikasi AIN-93M

yang memiliki tekstur lebih lunak. Penelitian yang dilakukan oleh Anggraeny,

dkk (2016) menunjukkan bahwa tikus yang diberikan pakan yang lebih padat

memiliki asupan yang lebih tinggi, hal ini disebabkan karena tekstur ini

sesuai dengan pakannya sehari-hari. Selain itu, tekstur pakan yang lebih

padat lebih disukai tikus karena tikus merupakan hewan pengerat (Putri,

2013).

Asupan makan yang rendah dapat dipengaruhi pula oleh adanya

hypophagia, sebuah penelitian yang dilakukan oleh Nascimento (2008)

menunjukkan bahwa tikus yang diberikan diet tinggi kalori menunjukkan

adanya hypophagia yang mungkin terjadi karena adanya peningkatan serum

leptin. Leptin merupakan hormon yang disintesis dan disekresi oleh jaringan

adiposa yang berperan pada regulasi nafsu makan dan metabolisme energi.

Ikatan leptin dan reseptor-leptin dapat mentrigger proses signalling

intraseluler di ventromedial hypothalamus (pusat kenyang) yang akan

memunculkan sinyal di otak bahwa makanan yang dikonsumsi sudah cukup.

Kadar leptin dalam darah menggambarkan jumlah simpanan lemak

trigliserida di jaringan lemak dan semakin banyak cadangan lemak, maka

semakin banyak leptin yang dilepaskan ke dalam darah (Meutia, 2005). Hal
 50

ini menunjukkan bahwa pada tikus percobaan pada penelitian ini masih

terjadi homeostasis energi, dibuktikan bahwa kadar leptin pada penelitian ini

juga tidak terdapat perbedaan yang signifikan yaitu 10,72 ± 2,55 ng/ml pada

kelompok normal modifikasi AIN-93M dan 11,11 ± 2,14 ng/ml pada kelompok

HFHF modifikasi AIN-93M (Firdayanti, 2018), sehingga tidak banyak leptin

yang dikeluarkan ke dalam darah sebagai respon peningkatan cadangan

lemak yang tinggi. Homeostasis energi juga dapat terjadi karena rata-rata

asupan lemak tikus percobaan yang hanya 25.06%, sedangkan menurut

Gajda (2008), dikatakan tinggi lemak jika asupan lemak sebesar 32 – 60%

dari total kalori pakan.

Rata-rata asupan minum fruktosa pada kelompok HFHF

modifikasi AIN-93M pada penelitian ini yaitu 30.60 ± 3.67 ml/hari, sedangkan

rata-rata seluruh asupan zat gizi makro antara dua kelompok yaitu protein,

lemak, dan karbohidrat memiliki perbedaan yang signifikan (p < 0.05),

dimana asupan protein pada kelompok HFHF modifikasi AIN-93M lebih

rendah dibandingkan dengan kelompok normal modifikasi AIN 93-M

sedangkan pada asupan lemak dan karbohidrat kelompok HFHF modifikasi

AIN-93M lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok normal modifikasi AIN-

93M. Hal ini disebabkan karena pada kelompok HFHF modifikasi AIN-93M,

kandungan lemak pada pakannya lebih tinggi (51.64%) dibandingkan

dengan kelompok normal modifikasi AIN-93M (25.81%) dan pada kelompok

HFHF modifikasi AIN-93M terdapat karbohidrat tambahan dari minum tinggi

fruktosa.

Zat gizi merupakan salah satu faktor lingkungan yang

mempengaruhi kemampuan hewan untuk mencapai pertumbuhan,

 51

reproduksi, masa hidup, dan respon stimuli. Kebutuhan zat gizi dari tikus

laboratorium sangat dinamis karena dipengaruhi oleh faktor genetik dan

lingkungan. Faktor genetik yang dimaksud merupakan ukuran tubuh,

performa reproduksi, dan perubahan metabolik yang disebabkan karena

manipulasi genetik dari strain tikus. Sedangkan faktor lingkungan terdiri dari

status mikrobiologi dari lingkungan, tingkat stress, interaksi zat gizi makanan

(Lewis, et al., 2006). Tikus dewasa spesies Rattus Norvegicus rata-rata

memiliki asupan makan 5-6 g/100 g BB/hari dan asupan minum 10-12

ml/100gBB/hari (Sharp, 2010). Kebutuhan karbohidrat adalah 40-45% hari

dari total kebutuhan energi per hari, kebutuhan protein sebesar 20-25% per

hari, dan kebutuhan lemak sebesar 5-15% per hari (Rita, 2001) sedangkan

pada untuk diet tinggi lemak, kandungan lemak yang digunakan yaitu

sebesar 32-60% dari total kalori yang diberikan (Gajda, 2008). Karbohidrat

dan lemak merupakan sumber energi utama dari tikus. Lemak memiliki kalori

yang jauh lebih tinggi dibandingkan dengan karbohidrat dan protein,

karbohidrat dan protein yaitu 4 kkal/g sedangkan lemak yaitu 9 kkal/g.

Kelebihan asupan energi dapat menyebabkan obesitas yang berhubungan

dengan penurunan masa hidup, peningkatan kejadian dan keparahan

penyakit degeneratif (Lewis, 2006).

6.2 Rata-Rata Berat Badan Tikus Percobaan Kelompok Normal Modifikasi

AIN-93M dan Kelompok HFHF Modifikasi AIN-93M

Perbedaan asupan makan, densitas energi, dan asupan energi

pada kedua kelompok tikus akan menyebabkan perbedaan berat badan tikus

diantara dua kelompok perlakuan. Peningkatan berat badan tikus merupakan

 52

konsekuensi dari adanya peningkatan simpanan lemak karena adanya

peningkatan densitas energi karena komposisi lemak yang lebih tinggi.

Penumpukan lemak yang tinggi terjadi ketika mengkonsumsi energi yang

lebih tinggi, biasanya lebih berasal dari konsumsi lemak daripada konsumsi

karbohidrat maupun protein (Nascimento et al., 2008)

Pada penelitian ini, berat badan akhir dan peningkatan berat

badan antara kedua kelompok tikus tidak terdapat perbedaan yang

signifikan, dimana kelompok tikus normal modifikasi AIN-93M memiliki berat

badan akhir sebesar 261.93 ± 29.29 g serta terjadi peningkatan berat badan

sebesar 15.82 g sedangkan pada kelompok HFHF modifikasi AIN-93M

memiliki berat badan akhir sebesar 276.92 ± 35.65 g dengan peningkatan

sebesar 29.34 g. Hal ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan oleh

Picchi (2011), terdapat perbedaan yang tidak signifikan pada kelompok

kontrol yang diberikan diet modifikasi AIN-93M (densitas energi 4.71 kkal/g)

dibandingkan dengan kelompok tinggi lemak dengan modifikasi AIN-93M

(densitas energi 6.57 kkal/g). Sedangkan pada penelitian Huang, et al.

(2013) pada tikus percobaan yang diberikan diet HFHF memiliki berat badan

yang lebih besar (341.6 ± 5.76 g) dibandingkan dengan tikus kelompok

kontrol (288.7 ± 1.6), dimana berat badan awal tikus pada minggu ke-0 yaitu

155 ± 5 g. Namun pada penelitian ini, kelompok HFHF modifikasi AIN-93M

tetap memiliiki berat badan yang lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok

normal modifikasi AIN-93M.

Tikus dikatakan obesitas jika berat badannya bertambah ≥ 20%

dibandingkan dengan berat badan awalnya (Shiyan, 2017), hal ini karena

pada jumlah peningkatan berat badan tersebut, tikus akan beresiko

 53

mengalami terjadinya resistensi insulin (Ali, 2015). Pada penelitian ini,

peningkatan berat badan tikus kelompok HFHF modifikasi AIN-93M sebesar

11.85%, hal ini menunjukkan bahwa tikus kelompok ini tidak dapat dikatakan

sebagai tikus obesitas.

Tidak adanya perbedaan yang signifikan pada berat badan tikus

dan tikus kelompok HFHF modifikasi AIN-93M tidak masuk kategori obesitas

dapat terjadi karena tikus jenis rattus memiliki HDL yang tinggi, yaitu ± 80%

dari total plasma kolesterol dan secara umum resisten terhadao

atherogenesis (Li et al., 2011). Kadar kolesterol HDL darah yang tinggi

berguna dalam menurunkan resiko aterosklerosis, karena HDL berfungsi

dalam mengangkut kolesterol dari jaringan periferal menuju ke hati hingga

mencegah pengapuran, yang kemudian organ hati mengekskresikannya

melalui empedu, hal ini dapat menurunkan resiko obesitas (Gani, dkk, 2013).

Selain itu, dapat terjadi juga karena adanya penurunan berat

badan pada minggu ke-13 pada kelompok HFHF modifikasi AIN-93M.

Penurunan berat badan tikus bisa terjadi karena asupan yang menurun juga,

pada penelitian ini terdapat perubahan tekstur pakan kelompok HFHF

modifikasi AIN-93M dimana tekstur pakan tikus lebih lunak dari sebelumnya.

Hal ini dapat berpengaruh pada asupan pakan tikus, pada penelitian ini

terjadi penurunan asupan pakan tikus pada minggu ke-13, hal ini sejalan

dengan penurunan berat badan tikus HFHF modifikasi AIN-93M yang dimulai

dari minggu ke-13. Pada saat tubuh kekurangan asupan energi maka tubuh

akan melakukan pemecahan simpanan lemak pada jaringan adiposa

sebagai kompensasi tubuh akan kurangnya asupan energi, sehingga

 54

simpanan lemak di jaringan adiposa akan menurun dan dapat menyebabkan

penurunan berat badan (Widodo, 2006).

Selain itu, penurunan asupan makan tikus juga dapat terjadi

karena lamanya waktu penelitian. Pada penelitian ini, lama waktu pemberian

intervensi yaitu 17 minggu. Pada beberapa penelitian sebelumnya, yaitu

penelitian yang dilakukan oleh Wang (2015) dengan pemberian diet HFHF

selama 13 minggu serta penelitian Huang (2013) dengan pemberian diet

HFHF selama 8 minggu sudah menunjukkan beberapa marker obesitas,

salah satunya adalah peningkatan IL-6. Lamanya waktu pemberian diet

HFHF dapat mempengaruhi nafsu makan pada tikus melalui sekresi hormon

ghrelin, yaitu hormon yang mengatur nafsu makan melalui hipotalamus.

Perubahan sekresi ghrelin merupakan respon untuk menstimulasi atau

menekan nafsu makan karena adanya ketidakseimbangan energi. Plasma

ghrelin menurun sebesar 20% dan 29% pada tikus yang diberikan diet tinggi

lemak selama 10 minggu dan 60 minggu, hal ini menunjukkan bahwa

semakin lama pemberian diet tinggi lemak maka akan menurunkan kadar

ghrelin, sehingga dapat menurunkan nafsu makan tikus (Gomez, 2013).

Sinyal ghrelin dapat mengganggu terjadinya obesitas pada tikus yang

diberikan diet tinggi lemak (Zigman, 2005). Selain itu, penelitian yang

dilakukan oleh (Heriansyah, 2013), juga menunjukkan bahwa tikus yang

diberikan diet tinggi lemak juga mengalami penurunan nafsu makan mulai

dari minggu ke-12 hingga minggu ke-20 pemberian intervensi.

Kelompok normal modifikasi AIN-93M memiliki berat badan yang

lebih rendah dibandingkan dengan kelompok HFHF modifikasi AIN-93M, diet

HFHF dapat menyebabkan beberapa gangguan yang merupakan

 55

karakteristik dari sindrom metabolik (Wang et al., 2015). Diet tinggi lemak

sendiri dapat menyebabkan keseimbangan lemak positif pada waktu singkat,

pada saat jangka waktu yang lama akumulasi positif ini akan menjadi

peningkatan berat badan dan semakin lama durasi pemberian diet, maka

akan terjadi peningkatan berat badan yang lebih tinggi pula (Picchi, 2011).

Sedangkan diet tinggi fruktosa dapat menyebabkan peningkatan berat badan

karena metabolisme fruktosa terjadi di liver dan menghasilkan glukosa,

laktat, free fatty acid (FFA), very-low density lipoprotein (VLDL)-TG, dan

asam urat (Zhang, et al., 2017) sehingga konsumsi tinggi fruktosa dapat

menyebabkan kelebihan asupan energi yang berefek pada peningkatan

berat badan (Schwarz et al., 2015).

6.3 Rata-rata Kadar Interleukin-6 (IL-6) pada Tikus Percobaan Kelompok

Normal Modifikasi AIN-93M dan Kelompok HFHF Modifikasi AIN-93M

Perbedaan berat badan antara tikus kelompok normal modifikasi

AIN-93M dan kelompok HFHF modifikasi AIN-93M akan mempengaruhi

kadar interleukin-6 (IL-6) plasma pada tikus. Beberapa faktor yang dapat

mempengaruhi kadar IL-6 adalah massa lemak tubuh, berat badan

(Timper et al., 2017), penyakit imun, penyakit inflamasi kronis (Tanaka

dan Kishimoto, 2012), tingkat stress (Murni, dkk, 2018), glukokortikoid,

estrogen, androgen (Keller, et al., 1996)

Pada penelitian ini, kadar IL-6 plasma antara kelompok normal

modifikasi AIN-93M dan kelompok HFHF modifikasi AIN-93M tidak

terdapat perbedaan yang signifikan dengan selisih sebesar 2.81 pg/ml.

Pada penelitian sebelumnya, yang dilakukan oleh Huang et al. (2013)

tikus yang diberikan diet HFHF memiliki kadar IL-6 lebih tinggi (± 42
 56

pg/ml) dibandingkan dengan kelompok kontrol (± 17 pg/ml), dimana pada

kelompok HFHF terjadi peningkatan sebesar 137%. Hal ini disebabkan

karena pada penelitian tersebut terjadi peningkatan berat badan yang

signifikan juga, yaitu 341.6 ± 5.73 g pada kelompok HFHF dan 288.7 ±

1.6 g pada kelompok kontrol.

Interleukin-6 (IL-6) disekresi sebagai respon adanya peradangan

pada adiposit dan sel endotel dan keberadaanya dirangsang oleh sitokin

lain, seperti IL-1 atau Tumor Necrosis Factor-α (TNF-α). Interleukin-6 (IL-

6) akan berikatan dengan reseptor IL-6 (IL-6R) yang akan diikuti dengan

membentuk kompleks dengan glikoprotein 130 (gp130), mekanisme ini

disebut dengan trans-signalling IL-6 yang dapat meregulasi reaksi pro-

inflamasi (Baran, 2018). Ikatan antara IL-6, IL-6R, dan gp130 ini dapat

meningkatkan kadar IL-6 (Gabay, 2006).

Salah satu faktor yang mempengaruhi kadar IL-6 yaitu berat

badan dan massa lemak tubuh, seperti yang dibahas sebelumnya bahwa

peningkatan berat badan tikus merupakan konsekuensi dari adanya

peningkatan simpanan lemak yang berlebih didalam tubuh. Simpanan

lemak akibat adanya kelebihan energi ini akan disimpan di white adipose

tissue (WAT), karena adanya peningkatan berat badan maka akan terjadi

peningkatan lipolisis yang akan meningkatkan kadar triasilgliserida yang

akan menjadi free fatty acids (FFAs), FFAs ini dapat mengaktifkan jalur

inflamasi dan meningkatkan sitokin pro-inflamasi salah satunya adalah IL-

6. Peningkatan FFAs di liver juga dipengaruhi oleh konsumsi fruktosa

yang tinggi, seperti yang telah dijelaskan sebelumnya bahwa fruktosa

dimetabolisme di liver dan salah satunya diubah menjadi FFAs (Zhang,

 57

2017). Selain itu, peningkatan berat badan berhubungan dengan

peningkatan jumlah pre-adiposa yang akan berhubungan juga dengan

adanya infiltrasi Adipose Tissue Macrophage (ATM), pada kondisi berat

badan yang berlebih maka jenis sel makrofag M1 akan lebih besar

dibandingkan dengan M2, sehingga terjadi peningkatan sitokin pro-

inflamasi salah satunya adalah IL-6 (McArdle, et al., 2013).

Berdasarkan penjelasan diatas dapat disimpulkan bahwa tidak

adanya perbedaan yang signifikan antara kedua kelompok tikus

disebabkan karena adanya perubahan yang tidak signifikan pula pada

berat badan kedua kelompok tikus serta penambahan berat badan tikus

yang tidak lebih dari 20% (11.85%), sehingga simpanan lemak di WAT

juga tidak terlalu tinggi yang akan berpengaruh pada ekspresi sitokin pro-

inflamasi IL-6 plasma pada tikus yang diberikan diet HFHF. Hal ini

ditunjukkan pada hasil analisis WAT pada penelitian ini juga menunjukkan

hasil yang tidak signifikan, dimana total WAT pada kelompok normal

modifikasi AIN-93M sebesar 10.32 ± 3.3 g sedangkan kelompok HFHF

modifikasi AIN-93M sebesar 10.32 ± 3.12 g (Indirasari, 2018).

6.4 Keterbatasan Penelitian

Penelitian dengan menggunakan subjek tikus harus dilakukan

dengan lebih cermat dan teliti, selain itu kesehatan tikus percobaan juga

harus diperhatikan, hal ini dikarenakan kesehatan tikus juga mungkin akan

berpengaruh terhadap hasil penelitian. Berdasarkan beberapa referensi yang

didapat, karakteristik fisik pakan tikus yang baik adalah yang padat dan

beraroma tajam karena tikus lebih menyukai karakteristik pakan tersebut.

Pada penelitian ini, karakteristik pakan tikus kelompok HFHF modifikasi AIN-
 58

93M masih bertekstur lunak sehingga kurang disukai oleh tikus. Pada

penelitian selanjutnya, perlu dilakukan evaluasi pakan sehingga

mendapatkan tekstur yang lebih padat, serta dapat mempertahankan

karakteristik pangan tikus hingga akhir penelitian.

 BAB 7

PENUTUP

7.1 Kesimpulan

1. Rata-rata asupan makan tikus kelompok normal modifikasi AIN-93M

yaitu 12.28 ± 1.68 g

2. Rata-rata asupan makan tikus pada kelompok HFHF Modifikasi AIN-

93M yaitu 6.66 ± 1.09 g.

3. Kadar IL-6 pada Tikus Rattus Norvegicus Sprague Dawley yang

diberikan diet normal Modifikasi AIN-93M yaitu 17.25 ± 5.20 pg/ml.

4. Kadar IL-6 (Interleukin-6) pada Tikus Rattus Norvegicus Sprague

Dawley yang diberikan diet HFHF sebesar 20.06 ± 6.99 pg/ml

5. Tidak terdapat perbedaan yang signifikan jumlah IL-6 (Interleukin-6)

pada Tikus Rattus Norvegicus Sprague Dawley yang diberikan diet

normal Modifikasi AIN-93M dan diet HFHF Modifikasi AIN-93M.

7.2 Saran

Pakan pada kelompok HFHF modifikasi AIN-93M memiliki tekstur yang

agak lembek atau kurang padat sehingga dapat menurunkan nafsu makan

tikus yang selanjutnya akan berdampak pada asupan makan tikus

perharinya, maka untuk kajian selanjutnya perlu dilakukan penelitian tentang

cara pengolahan pakan tikus dan cara penyimpanan yang tepat, sehingga

didapatkan pakan yang digemari oleh tikus yaitu pakan dengan tekstur padat

dan lebih beraroma. Hal ini perlu, karena dapat menurunkan resiko adanya

penurunan nafsu makan tikus dan dapat mempertahankan karakteristik

pangan tikus hingga akhir penelitian.

59
 60

DAFTAR PUSTAKA

Abdelmalek, Manal F, Mariana Lazi, Susanne Bonek, Edward W. Lipkin, Ashok,

John P. Bantle, Jeanne M. Clark. Higher Dietary Fructose is Associated
with Impaired Hepatic Adenosine Triphosphate Homeostatis Obese
Individuals with Type 2 Diabetes. Clinical Journal of American Association
for the Study of Liver Disease, 2012, 56 (3).

Alexandru, I. Experimental use of animals in research spa. Balneo-Research

Journal, 2011, 2(1): 65–69.

Ali, A., Amalia, L., & Suptijah, P. Pemberian Kitosan Dan Pengaruhnya Terhadap
Berat Badan Dan Kadar Trigliserida Darah Tikus Sprague-Dawley. Yang,
2015, 10(1), 9–16.

Anggraeny, O., Dianovita, C., Putri, E. N., Sastrina, M., & Dewi, R. S. Korelasi
Pemberian Diet Rendah Protein Terhadap Status Protein, Imunitas,
Hemoglobin, dan Nafsu Makan Tikus Wistar Jantan. Indonesian Journal
of Human Nutrition, 2016, 3(2), 105–122.

Bahceci, M, D. Gokalp, S. Bahceci, A. Tuzcu, S. Atmaca, S. A. The Correlation

Between adiposity and adiponectin, tumor necrosis factor alpha,
interleukin-6 and high sensitivity C-reactive protein levels. Is adipocyte
size associated with inflammation in adults?. Journal Endrocinol, 2007,
30(210–214).

Baran, P., Hansen, S., Waetzig, G. H., Akbarzadeh, M., Huber, H. J., Ahmadian,
M. R. The balance of Interleukin (IL)-6, IL-6:soluble IL-6 receptor (IL-6R)
and IL-6:sIL-6R:sgp130 complexes allows simultaneous classic and trans-
signaling. J. Biol. Chem, 2018, 130(Il).

Barnes, T. C., Anderson, M. E., & Moots, R. J. The many faces of interleukin-6:
The role of IL-6 in inflammation, vasculopathy, and fibrosis in systemic
sclerosis. International Journal of Rheumatology, 2011.

Blüher, M. Adipose tissue dysfunction in obesity. Experimental and Clinical

Endocrinology and Diabetes, 2009, 117(6): 241–250

Brower, M., Grace, M., Kotz, C. M., & Koya, V. Comparative analysis of growth
characteristics of Sprague Dawley rats obtained from different sources.
Laboratory Animal Research, 2015, 31(4): 166–73.

Chow, Pierce, Ng Robert T H, Ogden Bryan E. Using Animal Models In

Biomedical Research: A Primer For The Investigator. World Scientific,
2008.

Coelho, D. F., Pereira-Lancha, L. O., Chaves, D. S., Diwan, D., Ferraz, R.,
Campos-Ferraz, P. L., Lancha, A. H. Effect of high-fat diets on body
 61

composition, lipid metabolism and insulin sensitivity, and the role of

exercise on these parameters. Brazilian Journal of Medical and Biological
Research, 2011, 44(10): 966–972.

Eder, K., Baffy, N., Falus, A., & Fulop, A. K. The major inflammatory mediator
interleukin-6 and obesity. Inflammation Research, 2009, 58(11): 727–736.

Firdayanti, Shella Ernita. 2018. Pengaruh Pemberian Diet High Fat High Fructose
(HFHF) Modifikasi AIN-93M terhadap Kadar Leptin pada Tikus Gaur Putih
Sprague Dawley. Skripsi. Tidak Diterbitkan, Fakultas Kedokteran
Universitas Brawijaya Malang.

Gabay, C. Interleukin-6 and chronic inflammation. Arthritis Research & Therapy,

2006, 2(2).

Gadde, K. M., Martin, C. K., Berthoud, H. R., dan Heymsfield, S. B. Obesity:

Pathophysiology and Management. Journal of the American College of
Cardiology, 2018, 71(1): 69–84.

Gajda, A. High fat diets for diet-induced obesity models. Research Diets, 2008.

Gani, N., Momuat, L. I., & Pitoi, M. M. Profil Lipida Plasma Hiperkolesterolemia
pada ( Abelmoschus manihot L .) Tikus Wistar Pemberian Gedi yang
Merah. Jurnal MIPA UNSRAT Online, 2013, 2(1), 44–49.

Glund, S., dan Krook, A. Role of interleukin-6 signalling in glucose and lipid
metabolism. Acta Physiologica, 2008, 192(1): 37–48.

Gomez, G., Han, S., Englander, E. ., & Greeley Jr, G. Secretion and Ghrelin-
Induced Food Intake in Rats. Regulatory Peptides, 2013, 173(409), 60–
63.

Goossens, G. H. The role of adipose tissue dysfunction in the pathogenesis of

obesity-related insulin resistance. Physiology and Behavior, 2008, 94(2):
206–218.

Hadizadeh, Fatemeh, Elham Faghihimani, P. A. Nonalcoholic fatty liver disease:

Diagnostic biomarkers. World J Gastrointest Pathophysiol, 2017, 8(2)

Heriansyah, T. Pengaruh Berbagai Durasi Pemberian Diet Tinggi Lemak

Terhadap Profil Lipid Tikus Putih ( Rattus Norvegicus Strain Wistar )
Jantan. Jurnal Kedokteran Syiah Kuala, 2013, 13(3), 144–150.

Heymsfield, S. B., dan Wadden, T. A. Mechanisms, Pathophysiology, and

Management of Obesity. New England Journal of Medicine, 2017, 376(3):
254–266.

Huang, B. W., Chiang, M. T., Yao2, H. T., dan Chiang, W. The effect of high-fat
and high-fructose diets on glucose tolerance and plasma lipid and leptin
levels in rats. Diabetes, Obesity and Metabolism, 2004, 120–126.
 62

Huang, H. Y., Korivi, M., Tsai, C. H., Yang, J. H., dan Tsai, Y. C.
Supplementation of lactobacillus plantarum K68 and fruit-vegetable
ferment along with high fat-fructose diet attenuates metabolic syndrome in
rats with insulin resistance. Evidence-Based Complementary and
Alternative Medicine, 2013.

Hummasti, S., dan Hotamisligil, G. S. Endoplasmic reticulum stress and

inflammation in obesity and diabetes. Circulation Research, 2010, 107(5):
579–591.

Indirasari, Adiza Pramesti. 2018. Pengaruh Pemberian Diet High Fat High
Fructose (HFHF) Modifikasi Standar AIN-93M terhadap Body Fat Index
(BFI) pada Tikus Sprague Dawley Jantan. Skripsi. Tidak DIterbitkan,
Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang.

Kahn, S. E., Hull, R. L., dan Utzschneider, K. M. Mechanisms linking obesity to

insulin resistance and type 2 diabetes. Nature, 2006, 444(7121): 840–
846.

Keller, E. T., Wanagat, J., & Ershler, W. B. Molecular And Cellular Biology Of
Interleukin-6 And Its Receptor. Frontiers in Bioscience, 1996, 1, 340–357.

Kuczmarski, R. J. Chapter 2 What is Obesity? Definitions Matter. Handbook of

Obesity Prevention, 2007, 25–44.

Kusumastuty, Inggita. 2017. Studi Pembuatan Pakan Tikus Modifikasi AIN-93M.

Laporan Penelitian. Tidak diterbitkan, Fakultas Kedokteran Universitas
Brawijaya, Malang.

Ledikwe, J. H., Blanck, H. M., Khan, L. K., Serdula, M. K., Seymour, J. D., Tohill,
B. C., & Rolls, B. J. Dietary energy density is associated with energy intake
and weight status in US adults. Am J Clin Nutr, 2006, 83, 1362–1368.

Lewis, S. M., Ullrey, D. E., Barnard, D. E., & Knapka, J. J. 2006. Nutrition.

Li, X., Liu, Y., Zhang, H., Ren, L., Li, Q., & Li, N. Animal models for the
atherosclerosis research : a review. Protein Cell, 2011, 2(3), 189–201.
https://doi.org/10.1007/s13238-011-1016-3

Lozano, I., Van Der Werf, R., Bietiger, W., Seyfritz, E., Peronet, C., Pinget, M.,
Dal, S. High-fructose and high-fat diet-induced disorders in rats: Impact on
diabetes risk, hepatic and vascular complications. Nutrition and
Metabolism, 2016, 13(1): 1–13.

Ludgero-Correia, A., Aguila, M. B., Mandarim-de-Lacerda, C. A., dan Faria, T. S.

Effects of high-fat diet on plasma lipids, adiposity, and inflammatory
markers in ovariectomized C57BL/6 mice. Nutrition, 2012, 28(3): 316–
323.
 63

Marques, C., Meireles, M., Norberto, S., Leite, J., Freitas, J., Pestana, D.,
Calhau, C. High-fat diet-induced obesity Rat model: a comparison
between Wistar and Sprague-Dawley Rat. Adipocyte, 2016, 5(1): 11–21.

McArdle, M. A., Finucane, O. M., Connaughton, R. M., McMorrow, A. M., dan

Roche, H. M. Mechanisms of obesity-induced inflammation and insulin
resistance: Insights into the emerging role of nutritional strategies.
Frontiers in Endocrinology, 2013, 4: 1–23.

Meutia, N. Peran Hormon Ghrelin Dalam Meningkatkan Nafsu Makan. E-USU

Repository, 2005, (3), 1–11.

Monteiro, R., dan Azevedo, I. Chronic inflammation in obesity and the metabolic
syndrome. Mediators of Inflammation, 2010.

Murni, A. W., Darwin, E., Zubir, N., & Nurdin, A. E.. Analyzing Determinant
Factors for Pathophysiology of Functional Dyspepsia Based on Plasma
Cortisol Levels , IL-6 and IL-8 Expressions and H . pylori Activity. Acta
Medical Indonesia, 2018, 50(1), 38–45.

Nascimento, A. F., Sugizaki, M. M., Leopoldo, A. S., P., A., Nogueira, Luvizotto,
R. A. M., Cicogna, A. C. A Hypercaloric Pellet-Diet Cycle Induces Obesity
and Co-Morbidities in Wistar Rats. Arq Bras Endocrinol Metab, 2008,
52(6).

Mukhtar, Diniwati. Makrofag pada jaringan Adiposa Obes sebagai Penanda

Terjadinya Resistensi Insulin. Kedokteran, 2012, 28(317).

Patel, J., Iyer, A., dan Brown, L. Evaluation of the chronic complications of
diabetes in a high fructose diet in rats. Indian Journal of Biochemistry and
Biophysics, 2009, 46(1), 66–72.

Patrick E. Sharp, M. C. L. R. 2010. The Laboratory Rat. Taylor & Francis.

Picchi, M. G., Mattos, A. M. De, Rodrigues, M., Barbosa, Passos, C., Iii, D., & De,
M. A high-fat diet as a model of fatty liver disease in rats. Acta Cirúrgica
Brasileira, 2011, 26, 25–30.

Pozza, C., & Isidori, A. M. What’s Behind the Obesity Epidemic. Imaging in
Bariatric Surgery, 2018, 1–8.

Putri, R S. 2013. Studi Pengembangan Kesukaan Umpan dalam Pengendalian

Tikus di Rumah Sakkit Umum Daerah Kabupaten Banjarnegara. Skripsi.
Tidak Diterbitkan, Institut Pertanian Bogor.

Ramirez, N. M., Lopes, R. C., Castro, M. E., Stampini, H., Martino, D., Benjamin,
A., Ribeiro, R. Anti-obesity effects of tea from Mangifera indica L . leaves
of the Ubá variety in high-fat diet-induced obese rats. Biomedicine &
Pharmacotherapy, 2017, 91, 938–945.
 64

Ratnayani, K, Dwi Adhi, dan Gitadewi. Penentuan Kadar Glukosa dan Fruktosa
pada Madu Randu dan Madu Kelengkeng dengan Metode Kromatografi
Cair Kinerja Tinggi. Jurnal Kimia, 2008, 2 (2): 77-86.

Reeves, Nielsen, F. H., & Fahey, G. C. AIN-93 Purified Diets for Laboratory
Rodents: Final Report of the American Institute of Nutrition Ad Hoc Writing
Committee on the Reformulation of the AIN-76A Rodent Diet. The Journal
of Nutrition, 1993, 123(11): 1939–1951.

Rincon, M. Interleukin-6: From an inflammatory marker to a target for

inflammatory diseases. Trends in Immunology, 2012, 33(11): 571–577.

Rippe, J. M., & Angelopoulos, T. J. Sucrose, High-Fructose Corn Syrup, and

Fructose, Their Metabolism and Potential Health Effects: What Do We
Really Know? Advances in Nutrition: An International Review Journal,
2013, 4(2), 236–245.

Rita, H R. 2001. Pengaruh Defisiensi Pakan terhadap Nilai Kecemasan Nutrien

dan Pertumbuhan Tikus Putih jantan Dewasa (Rattus sp.). Tugas Akhir.
Tidak Diterbitkan, Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor.

Rivera, C. A. Pathophysiology of Obesity. Pathophysiology, 2008, 15(2): 69–70.

Rodriguez-Hernandez, H., Simental-Mendia, L. E., Rodriguez-Ramirez, G., dan

Reyes-Romero, M. A. Obesity and inflammation: Epidemiology, risk
factors, and markers of inflammation. International Journal of
Endocrinology, 2013, 1–11.

Scheller, J., Chalaris, A., Schmidt-Arras, D., dan Rose-John, S. The pro- and
anti-inflammatory properties of the cytokine interleukin-6. Biochimica et
Biophysica Acta - Molecular Cell Research, 2011, 1813(5): 878–888.

Schwarz, J. M., Noworolski, S. M., Wen, M. J., Dyachenko, A., Prior, J. L.,
Weinberg, M. E., Mulligan, K. Effect of a high-fructose weight-maintaining
diet on lipogenesis and liver fat. Journal of Clinical Endocrinology and
Metabolism, 2015, 100(6), 2434–2442.

Sharp, Patrick E., M. C. L. R. 2010. The Laboratory Rat. Taylor & Francis.

Shiyan, S., Bella, M., & Amriani, A. Antiobesity and antihypercholesterolemic

effects of white tea ( Camellia sinensis ) infusion on high-fat diet induced
obese rats. Pharmaciana, 2017, 7(2), 278–288.

Sinha, A., & Kling, S. A review of adolescent obesity: Prevalence, etiology, and
treatment. Obesity Surgery, 2009, 19(1): 113–120.

Smith JB, Mangkoewidjojo S. 1988. Pemeliharaan, Pembiakan, dan penggunaan

Hewan Percobaan di Daerah Tropis. Jakarta: UI Press.

Tanaka, T., Narazaki, M., dan Kishimoto, T. IL-6 in inflammation, immunity, and
 65

disease. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology 2014, 6(10).

Timper, K., Denson, J. L., Steculorum, S. M., Rose-john, S., Wunderlich, F. T.,
Timper, K., Engstro, L. IL-6 Improves Energy and Glucose Homeostasis in
Obesity via Enhanced Central IL-6 trans -Signaling Article IL-6 Improves
Energy and Glucose Homeostasis in Obesity via Enhanced Central IL-6
trans -Signaling. Cell Reports, 2017, 19, 267–280.

Vedova, Della, M. C., Muñoz, M. D., Santillan, L. D., Plateo-Pignatari, M. G.,

Germanó, M. J., Tosi, M. E. R., Ramirez, D. C. A Mouse Model of Diet-
Induced Obesity Resembling Most Features of Human Metabolic
Syndrome. Nutrition and Metabolic Insights, 2016, 9.

Wada, Tsutomu, Hiroki Kenmochi, Yusuke Miyashita, M. S., Minoru Ojima,

Masakiyo Sasahara, Daisuke Koya, H. T., dan Sasaoka. Spironolactone
Improves Glucose and Lipid Metabolism by Ameliorating Hepatic
Steatosis and Inflammation and Suppressing Enhanced Gluconeogenesis
Induced. Endocrinology, 2010, 151: 2040–2049.

Wang, O., Liu, J., Cheng, Q., Guo, X., Wang, Y., Zhao, L., Ji, B. Effects of ferulic
acid and γ-Oryzanol on high-fat and high-fructose diet-induced metabolic
syndrome in rats. PLoS ONE, 2015, 10(2): 1–14.

Wellen, Kathryn, E., dan Gokhan, S. Obesity-induced inflamatory changes in

adipose tissue. J.Clin.Invest, 2003, 112(12): 1785–1788.

WHO. 2012. World Health Statistics 2012. World Health Statistics 2012 (Vol. 27).

Widodo, I Nengah T. K., Waliyo E. Pengaruh Pemberian Diet Tinggi Kalsium

terhadap Penurunan Berat Badan pada Rattus Norvegicus Galus Wistar.
Jurnal Kedokteran Brawijaya, 2006, 17(2)

Wright, S. M., & Aronne, L. J. Causes of obesity. Abdominal Imaging, 2012,

37(5): 730–732.

Zhang, D. M., Jiao, R. Q., dan Kong, L. D. High dietary fructose: Direct or indirect
dangerous factors disturbing tissue and organ functions. Nutrients, 2017,
9(4)

Zigman JM, Nakano Y, Coppari R, Balthasar N, Marcus JN, Lee CE, et al. Mice
lacking ghrelin receptors resist the development of diet-induced obesity. J
Clin Invest, 2005, 115:3564–3572.