UNIVERSIDADE FEDERAL DOS VALES DO JEQUITINHONHA E MUCURI PS-GRADUAO EM QUMICA TCNICAS ELETROQUMICAS

Prof. Dr. Wallans Torres Pio dos Santos Prof. Dr. Lucas Ferreira Franco

ESTUDO DO COMPORTAMENTO ELETROQUMICO DO PIROXICAM EM DIFERENTES MEIOS

Discentes: Ismael Carneiro Lindomar Gomes Raphael Esteves

Diamantina, Julho de 2011.

Sumrio
Resumo.......................................................................................................................................... 3 1. INTRODUO ............................................................................................................................ 4 1.1. Piroxicam........................................................................................................................... 4 1.2. Tcnica Voltamtrica .......................................................................................................... 5 1.2.1. Voltametria Cclica ...................................................................................................... 6 1.2.2. Voltametria de Pulso Diferencial................................................................................. 7 2. PARTE EXPERIMENTAL .............................................................................................................. 9 2.1. Reagentes e Solues ......................................................................................................... 9 2.2. Equipamentos e Software .................................................................................................. 9 2.3. Procedimento de anlise do Piroxicam ............................................................................ 9 3. RESULTADOS E DISCUSSO ..................................................................................................... 10 3.1. Voltametria Cclica ........................................................................................................... 10 3.2. Voltametria de Pulso Diferencial...................................................................................... 14 4. CONCLUSO ............................................................................................................................ 19 5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ............................................................................................... 20

Resumo Atravs da voltametria cclica foi possvel descobrir o potencial de oxidao do Piroxicam que um frmaco largamente utilizado para controlar vrias doenas. Pelos estudos da voltametria cclica, tambm foi possvel identificar o melhor eletrlito e eletrodo para a deteco do analito em estudo. Como s ocorre processo de oxidao, a tcnica de voltametria de pulso diferencial foi escolhida para a construo da curva de calibrao. Com base nesta curva, foi possvel verificar a faixa de deteco com uma resposta linear para o frmaco estudo.

1. INTRODUO

1.1. Piroxicam Piroxicam

(Figura

1),

[4-hidroxi-2-metil-N-(2-piridil)-2H-1,2-

benzothiazine-3-carboxamida-1,1-dixido], o prottipo de uma classe de frmacos anti-inflamatrios no esterides (AINE) que tem sido chamado de oxicams. Piroxicam produz uma resposta rpida e eficaz no tratamento de muitas doenas, tais como artrite reumatide, osteoartrite, espondilite anquilosante, gota artrite, reumatide juvenil, distrbio muscular esqueltico da dor ps-parto e leses esportivas [1-4]. Estas molculas so pouco solveis em gua. No entanto, eles podem ser dissolvidos em solventes orgnicos, em soluo aquosa-orgnica [1]. As tcnicas voltamtricas tm sido utilizadas de forma intensa para anlise de produtos farmacuticos, dado que o processo exige uma diluio simples e a maioria dos excipientes utilizados no interferem na anlise [4]. Poucos estudos sobre o comportamento eletroqumico do Piroxicam so encontrados na literatura, sendo que o primeiro estudo est relacionado com o processo de reduo do frmaco em eletrodo de mercrio. Em alguns estudos, os autores descreveram o comportamento da eletrooxidao do composto utilizando eletrodos como o diamante dopado com boro, carbono vtreo e grafite piroltico modificado [1].

Figura 1.1. Formas tautomricas do Piroxicam. Figura extrada da ref. [4].

Como visto na figura 1, o Piroxicam apresenta grupos potencialmente oxidveis tais como o grupo amida e enol, quando em sua forma enlica [4].

1.2. Tcnica Voltamtrica A voltametria baseada na medida de corrente desenvolvida em um eletrodo em condies onde existe a polarizao por concentrao. uma tcnica difere da coulometria pelo fato de que na coulometria todo o analito essencialmente convertido para um outro estado, enquanto na voltametria ocorre um consumo mnimo do analito. Em voltametria, um sinal de excitao de potencial varivel aplicado no eletrodo de trabalho presente em uma clula eletroqumica. Este sinal de excitao produz uma resposta caracterstica na forma crescente de corrente, a qual a quantidade medida (o sinal de interesse) nesse mtodo. Para uma anlise voltamtrica necessrio uma clula eletroqumica composta de trs eletrodos imersos em uma soluo contendo o analito e tambm o eletrlito inerte, denominado eletrlito de suporte. Um dos trs eletrodos o eletrodo de trabalho, cujo potencial linearmente variado com o tempo. Suas dimenses so suficientemente pequenas para aumentar a sua tendncia a polarizar. O segundo eletrodo o eletrodo de referncia (geralmente, eletrodo de calomelano saturado ECS ou eletrodo de pratacloreto de prata) cujo potencial permanece constante durante a anlise. O terceiro eletrodo o contra-eletrodo que frequentemente confeccionado com um fio de platina enrolado, cuja funo permitir o transporte de corrente entre a fonte de sinal e o eletrodo de trabalho atravs da soluo em estudo. A resistncia eltrica que contm o eletrodo de referncia muito grande (> 1011 ), de tal forma que a corrente que flui pelo eletrodo de referncia desprezvel. Assim a corrente total da fonte transportada entre o contra-eletrodo e o eletrodo de trabalho. importante salientar que a faixa de potencial que pode ser empregada em uma medida voltamtrica em solues aquosas no depende somente do material do eletrodo, mas tambm da prpria composio da soluo onde o eletrodo est imerso. Geralmente, o limite para o potencial positivo determinado pela oxidao da gua que produz oxignio e por outro lado o limite para o potencial negativo determinado pela reduo da gua que produz hidrognio.

1.2.1. Voltametria Cclica Na voltametria cclica a resposta de corrente para um pequeno eletrodo estacionrio e imerso em uma soluo em repouso obtida em funo de um sinal de excitao na forma triangular. A voltametria cclica frequentemente selecionada como a primeira tcnica para investigar um sistema que envolve espcies eletroativas. A figura 1.1 mostra um exemplo de uma anlise voltamtrica, enfatizando o sinal de excitao na forma triangular (a). A resposta em corrente obtida (b) d origem a um voltamograma, que nos fornece informaes sobre o analito investigado.

Figura 1.2. (a) Potencial versus o tempo e (b) voltamograma de uma soluo 6,0 nM de K3Fe(CN)6 e 1,0 M de KNO3.

Os dados importantes em voltametria cclica so o potencial de pico catdico Epc, o potencial de pico andico Epa, a corrente de pico catdico ipc (ponto D) e a corrente de pico andico ipa (ponto J).

1.2.2. Voltametria de Pulso Diferencial A voltametria de pulso diferencial um mtodo de pulso, onde a ideia medir a corrente em um tempo onde a diferena entre a corrente faradaica desejada e a corrente capacitiva interferente grande. A mais importante vantagem do voltamograma tipo derivativo o aumento da sensibilidade. Tipicamente, a voltametria de pulso diferencial obtm picos bem definidos para concentraes at 2000 vezes inferiores quelas observadas para ondas voltamtricas clssicas. Geralmente o limite de deteco obtido com voltametria de pulso diferencial duas ou trs ordens de magnitude menor quando comparado com valores obtidos por voltametria clssica, alcanando a faixa de 10-7 a 10-8 mol L-1. A maior sensibilidade se deve a dois fatos, o primeiro est relacionado com o aumento da corrente faradaica, e o segundo, com a diminuio da corrente de carga. Quando o potencial de excitao na forma de degrau aplicado no eletrodo de trabalho (Figura 1.2), observado um rpido aumento da corrente faradaica e tambm da corrente no-faradaica em funo da mudana de carga na superfcie do eletrodo. Contudo a corrente no-faradaica decai exponencialmente com o tempo e rapidamente aproxima-se de zero. Assim, medindo-se a corrente para um valor apropriado de tempo, a corrente residual no-faradaica consideravelmente reduzida, e a razo sinal/rudo grande, resultando em um aumento de sensibilidade.

Figura 1.3. Sinal de excitao em voltametria de pulso diferencial.

Dois valores de corrente so obtidos de forma alternada; um obtido antes da aplicao do pulso(S1), e o outro obtido antes do fim do pulso (S2). A diferena de corrente de pulso registrada em funo do aumento linear do potencial de excitao. A curva diferencial resultante (Figura 1.3) consiste em um pico cuja altura diretamente proporcional concentrao do analito.

Figura 1.4. Voltamograma para um experimento de voltametria de pulso diferencial.

Este trabalho teve como objetivo propor uma metodologia eletroqumica para determinao do Piroxicam, onde foi comparado seu comportamento frente a diferentes eletrodos e eletrlitos.

2. PARTE EXPERIMENTAL

2.1. Reagentes e Solues O Piroxicam (princpio ativo puro) foi fornecido por farmcia de manipulao. Uma soluo estoque deste foi preparado pela dissoluo em metanol puro em uma concentrao de 0,25 mM e conservada em temperatura de aproximadamente 30C. Como eletrlitos para anlise do Piroxicam foram utilizados, soluo de cido sulfrico 0,1 M, tampo acetato 0,1 M (pH 4), tampo fosfato 0,1 M (pH 7) e tampo borato 0,1 M (pH 10). Sendo todos estes reagentes da marca DINMICA.

2.2. Equipamentos e Software As investigaes eletroqumicas foram realizadas mediante o uso do potenciostato PGSTAT 128N da AUTOLAB e GPES como software. Os eletrodos de trabalho utilizados foram: eletrodo de ouro, eletrodo de diamante dopado com boro e eletrodo de carbono grafite. O eletrodo de platina foi utilizado como contra-eletrodo e o eletrodo de prata/cloreto de prata como eletrodo de referncia.

2.3. Procedimento de anlise do Piroxicam As solues de trabalho (eletrlito mais analito) foram preparadas pela mistura de 2,0 mL da soluo 0,25 mM de Piroxicam em metanol puro com 8,0 mL de eletrlito em um frasco de 10 mL, ou seja, foi utilizado uma razo Metanol-H2O de 1:4 v/v. A soluo de Piroxicam foi investigada em diferentes eletrlitos com diferentes eletrodos de trabalho por meio de voltametria cclica, em temperatura constante. Para construo da curva de calibrao a voltametria de pulso diferencial foi utilizada.

3. RESULTADOS E DISCUSSO

3.1. Voltametria Cclica O comportamento eletroqumico do Piroxicam investigado com o eletrodo de ouro em diferentes eletrlitos, por meio da VC mostrado na Figura 3.1.

Figura 3.1. Voltametria Cclica do Piroxicam utilizando eletrodo de ouro em diferentes eletrlitos. [Piroxicam] = 0,25 mM. v = 50mVs-1. AS = cido Sulfrico (pH 1); TA = Tampo Acetato (pH 4); TF = Tampo Fosfato (pH 7).

O Piroxicam apresenta picos de oxidao na superfcie do eletrodo de ouro, em trs diferentes eletrlitos, pouco intensos, porm em valores de potenciais razoavelmente baixos. Contudo, o eletrodo de ouro apresentou pontos negativos pelo fato de sua superfcie se contaminar com os subprodutos gerados pela oxidao do frmaco e de sua limpeza ser difcil e demorada. Devido esta grande dificuldade de limpeza, o eletrodo de ouro no apresentou uma grande reprodutibilidade na anlise do Piroxicam.

O comportamento eletroqumico do Piroxicam investigado com o eletrodo de diamante dopado com boro em diferentes eletrlitos, por meio da VC, mostrado na Figura 3.2.

Figura 3.2. Voltametria Cclica do Piroxicam utilizando eletrodo de diamante dopado com boro em diferentes eletrlitos. [Piroxicam ] = 0,25 mM. v = 50mVs-1. AS = cido Sulfrico (pH 1); TA = Tampo Acetato (pH 4).

O Piroxicam apresenta picos de oxidao muito bem definidos na superfcie do eletrodo de diamante dopado com boro, mas semelhantemente ao eletrodo de ouro, houve contaminao de sua superfcie com os subprodutos gerados na oxidao do Piroxicam, e sua limpeza no constituiu um processo fcil e rpido. Consequentemente, a reprodutibilidade no eletrodo de diamante dopado com boro no foi satisfatria. O comportamento eletroqumico do Piroxicam investigado com o eletrodo de carbono grafite em diferentes eletrlitos, por meio da VC mostrado na Figura 3.3.

Figura 3.3. Voltametria Cclica do Piroxicam utilizando eletrodo de carbono grafite em diferentes eletrlitos. [Piroxicam] = 1,25 mM. v = 50mVs-1. AS = cido Sulfrico (pH 1); TA = Tampo Acetato (pH 4); TF = Tampo Fosfato (pH 7); TB = Tampo Borato (pH 10).

O comportamento eletroqumico do Piroxicam utilizando o eletrodo de carbono grafite foi muito satisfatrio, tendo em vista que os picos de oxidao apresentaram-se muito bem definidos. Analisando o voltamograma da Figura 3.3 verifica-se que quando utilizado como eletrlito de suporte o tampo fosfato (pH 7) o pico de oxidao ocorre em um valor de potencial mais baixo do que com os outros eletrlitos de suporte investigados. Comparando-se o comportamento da oxidao do Piroxicam com os outros eletrodos verificado tambm que o eletrodo de carbono grafite apresenta o menor valor de potencial de oxidao. Isto se torna uma enorme vantagem, pois sabido que quanto menor o potencial de oxidao do composto menor a chance de se ter uma interferncia em uma anlise eletroqumica do frmaco comercial, pois este pode possuir outros compostos que podem sofrer o processo de oxidao.

Diferentemente dos outros eletrodos apresentados, o eletrodo de carbono grafite apresentou uma grande reprodutibilidade. O fato desta reproduo de sinal, pode estar relacionado com uma menor facilidade de contaminao com possveis sub-produtos formados no processo de oxidao do frmaco em questo. Com isso, a limpeza do eletrodo de carbono grafite era realizada com uma maior eficincia e em um menor tempo. Como houve um erro no preparo da soluo estoque de Piroxicam, a sua concentrao foi maior no estudo de VC com o eletrodo de carbono grafite. No entanto, esse fato no prejudica a anlise de seu comportamento bem como comparaes com os resultados com outros eletrodos que foram realizados com concentraes um pouco mais baixa do Piroxicam. Era de esperar que o comportamento eletroqumico do Piroxicam sob a superfcie do eletrodo de carbono grafite fosse um processo difusional, no entanto, para velocidades acima de 60 mVS-1 pode ser observado um pequeno desvio da idealidade. Sugerindo-nos que o processo eletroqumico do Piroxicam no completamente controlado pelo processo difusional, como representado na figura 3.4. Porm, estes dados so condizentes com a literatura [4].

Figura 3.4. Influncia da velocidade de varredura sob a corrente de pico andica do

Piroxicam no eletrodo de carbono grafite. Tampo fosfato (pH 7), tendo como velocidade de varredura 20, 30, 40,50 e 60 mVS-1.

Um dado interessante no comportamento eletroqumico do Piroxicam o fato de o valor do potencial de pico (Ep) da oxidao diminuir com o aumento de pH, como mostrado na tabela 3.1.

Tabela 3.1. Valores do potencial de pico (Ep) da oxidao em diferentes valores de pH e em diferentes eletrodos.

Eletrodo\pH Ouro DDB Grafite Comum

1 0,823 V 0,852 V 0,730 V

4 0,713 V 0,734 V 0,680 V

7 0,681 V 0,629 V

10 0,644 V

Como discutido por Abbaspour [4], essa dependncia do potencial de pico com o pH sugere um processo de oxidao que determinada pela transferncia de prtons. Com o aumento do pH verifica-se uma diminuio do potencial de pico, que pode ser justificado pela desprotonao que facilitada no processo de oxidao.

3.2. Voltametria de Pulso Diferencial Definido as melhores condies para se determinar o Piroxicam eletroquimicamente: eletrodo de carbono grafite e como eletrlito o tampo fosfato (pH 7), utilizou-se a tcnica de voltametria de pulso diferencial (VPD) para construo da curva calibrao por meio de uma srie de solues de diferentes concentraes do Piroxicam (ver Figura 3.8). A VPD foi escolhida como a tcnica mais apropriada, ao invs da voltametria de onda quadrada (VOQ) devido o Piroxicam no sofrer processo de reduo nas condies estudadas neste trabalho. Contudo, antes foi necessrio a definio dos melhores valores para os parmetros da VPD como velocidade de varredura do potencial (v) e amplitude do pulso de potencial (A). O grfico 3.5 apresenta o comportamento do Piroxicam na VPD frente a variao da velocidade de varredura do potencial.

Figura 3.5. Otimizao da velocidade de varredura. Eletrodo de carbono grafite. Tampo fosfato (pH 7). Faixa de potencial 0,5 a 0,8 V utilizada. A = 40 mV.

Analisando os valores da relao da corrente de pico pela largura de meia altura do pico em funo da velocidade de varredura do potencial na VPD, verifica-se que o valor timo para a velocidade de varredura ocorre em 20 mVs-1, e portanto, este o valor do parmetro utilizado na construo da curva de calibrao. O grfico 3.6 apresenta comportamento do Piroxicam na VPD frente a variao da amplitude do potencial.

Figura 3.6. Otimizao da amplitude. Eletrodo de carbono grafite. Tampo fosfato (pH 7). Faixa de potencial utilizada 0,5 a 0,8 V. v = 20 mVs-1.

Verifica-se por meio da anlise do grfico da figura 3.6, que o melhor valor do parmetro amplitude de potencial 80 mV e, portanto, este foi o valor utilizado na construo da curva de calibrao do Piroxicam. Aps determinado os valores dos parmetros velocidade de varredura e amplitude, foi possvel obter a curva de calibrao por voltametria de pulso diferencial como apresentado na figura 3.7.

Figura 3.7. Curva de calibrao do Piroxicam obtida via voltametria de pulso diferencial. Eletrodo de grafite comum. Tampo fosfato (pH = 7). Faixa de potencial 0,5 a 0,8 V. v = 20 mVs-1 . A = 80 mV.

Como pode ser observado na figura 3.7, em baixas concentraes (> 95

mol L-1) o Piroxicam no apresenta uma resposta linear na superfcie do

eletrodo de carbono grafite, usando como eletrlito suporte o tampo fosfato. Este acontecimento pode estar relacionado com a camada difusional de Nernst, pois o eletrodo em questo apresenta uma grande rea superficial. Um comportamento similar pode ser observado em altas concentraes (< 240 mol L-1). Uma possvel justificativa seria a passivao na superfcie do eletrodo. Com base na figura 3.7, foi possvel construir uma curva de calibrao, bem como os voltamogramas diferencias das solues de Piroxicam, que pode ser observada na figura 3.8.

Figura 3.8. Curva de calibrao do Piroxicam obtida via voltametria de pulso diferencial, com destaque no comportamento linear da resposta do eletrodo de carbono grafite. Tampo fosfato (pH 7). Faixa de potencial 0,5 a 0,8 V. v = 20 mVs-1 . A = 80 mV.

A relao entre a concentrao do Piroxicam e a corrente de pico andica nestas condies pode ser obtida via equao de regresso linear,

i p ( A) 2,104 0,047C , onde ip a corrente de pico e C a concentrao do

Piroxicam em M com coeficiente de correlao de 0,99977.

4. CONCLUSO Conclui-se que o setup da clula com o eletrodo de carbono grafite e tampo fosfato o que apresenta resultados mais satisfatrios para o Piroxicam. O eletrodo de carbono grafite alm de apresentar um valor de potencial de oxidao do Piroxicam mais baixo do que os outros eletrodos investigados e no apresentar problemas de contaminao de fcil confeco, baixo custo e apresenta uma grande reprodutibilidade no sinal do frmaco em estudo. Os melhores valores dos parmetros velocidade de varredura e amplitude, na voltametria de pulso diferencial, para o Piroxicam foram 20 mVs1

e 80 mV, respectivamente. Sendo, portanto, estes parmetros utilizados na

construo da curva de calibrao do Piroxicam. Uma alternativa para melhorar ainda mais os valores de deteco e quantificao do Piroxicam seria o uso da tcnica de amperometria de mltiplos pulsos em sistema FIA utilizando uma clula do tipo wall-jet, pois uma tcnica que ainda no tem relatos na literatura.

5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS [1] Angel A.J. Torreiro, Carlos E. Tonn, Leonides Sereno, Julio Raba. Journal of Electroanalytica Chemistry. 588 (2006) 218-225.

[2] J.A. Acua, C. de la Fuente, M.D. Vsquez, et al. Journal Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 29 (2002) 617-624.

[3] S. Shahrokhian, E. Jokar, M. Ghalkhani. Microchim. Acta. 170 (2010) 141146.

[4] A. Abbaspour, R. Mirzajani. Journal Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 44 (2007) 41-48.

[5] Skoog A. Douglas. Princpios de Anlise Instrumental. 6 ed. Editora Bookman, 2009.