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Cromatografa Lquida de Alta Eficiencia (HPLC)
7 febrero, 2008 Written by Juan Jos 65 Comentarios

Cromatografa de Lquida de Alta Eficiencia (High Performance Liquid Chromatography)

Qu es Cromatografa Lquida de Alta Eficiencia? La cromatografa es un mtodo fsico de separacin basado en la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra mvil. En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs de una columna que contiene a la fase fija. La cromatografa lquida clsica se lleva a cabo en una columna generalmente de vidrio, la cual est rellena con la fase fija. Luego de sembrar la muestra en la parte superior, se hace fluir la fase mvil a travs de la columna por efecto de la gravedad. Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamao de las partculas de fase fija se fue disminuyendo hasta el tamao de los micrones, lo cual gener la necesidad de utilizar altas presiones para lograr que fluya la fase mvil. De esta manera, naci la tcnica de cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), que requiere de instrumental especial que permita trabajar con las altas presiones requeridas.

* Tipos de Cromatografa Lquida o Cromatografa de Particin. * Cromatografa de Adsorcin * Cromatografa Inica * Cromatografa de Exclusin Diagrama Bsico de un sistema de HPLC

* Elecccin del Solvente Caractersticas: o Disponible comercialmente * Precio * Pureza y Estabilidad. En la actualidad contamos con productos de calidad de pureza cromatogrfica. Bajo contenido de impuresas. * Disolver la muestra * Misible con otros solventes para formar mezclas tiles *

No degradar o disolver la fase estacionaria * Tener baja viscosidad para reducir las cadas de presin * Ser compatible con el detector utilizado. Transparencia ptica (cuando se usan detectores UV)Filtracin y Desgasificacin de solventes o + # Filtro a la Entrada del Solvente Mtodos de Filtracin de Solventes en HPLC Hay tres(3) mtodos comunes que se utilizan hoy para la filtracin previa de los Solventes en HPLC : En la actualidad HPLC ha llegado a ser una de las Tcnicas del Laborario Moderno ms importantes como herramienta analtica para separar y detectar compuestos qumicos. Como en todas las tcnicas analticas, los pequeos problemas a la larga pueden llegar a tener un mayor impacto en la exactitud y durabilidad del sistema. Aun con la evolucin de los cromatografos lquidos en la era de la computadora, hay aun problemas que sta no puede resolver. Hasta los Solventes para HPLC, tods filtrados cuidadosamente en la fbrica, pueden acumular partculas en suspencin que pueden ser perjudical a los componentes del sistema HPLC. Estas partculas en suspencin pueden venir de varias fuentes, incluso de la exposicin al polvo en el aire durante el trasegado de solvente en el depsito para solvente, la exposicin a partculates del aire durante el almacenamiento del solvente en el depsito del solvente, la degradacin lenta del recipiente solvente, o de condensacin y polimerizacin del solvente. Las partculas pueden ocasionar costosos daos a la bomba HPLC, al guarda columnas, y en general causar desgaste del sistema de HPLC. Los fabricantes de los instrumentos tienen en cuenta este problema y recomiendan que se filtre y desgasifique los solventes HPLC antes de usarlos. En el instante que se abre una nueva botella de solvente para HPLC se expone el interior del solvente a la atmsfera y empieza a acumular gases disueltos que se encuentran en la atmsfera. El trasegado del solvente en el depsito solvente y su almacenamiento en estos depsitos mseste fenmeno. El Oxgeno Disuelto que constituye el 21% de la atmsfera puede producir mayor interferencia en los detectores de fluorescencia y electroqumicos. El Nitrgeno Disuelto es el otro componente de la atmsfera que puede producir burbujas en la columna de HPLC y cuando el solvente entra al detector produce picos falsos y desviaciones de la lnea base. El Dixido de Carbono disuelto algunas veces puede ser la causa de los cambios de pH en el sistema de solvente. *

Filtracin al Vaco * Filtracin en Lnea Sonificacin Mtodos de Desgasificacin de Solventes en HPLC Existen cuatro(4) mtodos comunes usados para desgasificar solventes en HPLC previos a su uso: * Burbujear Helio * Desgasificacin Electrnica en la Lnea del Flujo * Desgasificacin al Vaco en LneaBombas Requisitos o aspectos ms importantes que debe reunir una bomba o sistema de bombeo: o Debe producir presiones estables hasta 6000 psi. * Mantener el flujo libre de pulsaciones * Generar intervalos de caudales de flujo (0,1 a 10 ml/min) * Control y reproducibilidad del flujo de solvente * Componentes de la bomba resistentes a la corrosinLas bombas que se usan en HPLC se pueden clasificar segn su funcionamiento y diseo en: o Mecnicas + Recprocantes * De desplazamiento contnuo o Neumticas Programacin del Solvente Existen dos mtodos de programacin de Solvente en HPLC: o Isocrtico

* o Gradiente de Elucin. Es un trmino que se utiliza para describir el proceso mendiante el cual se cambia la composicin de la fase mvil. Pueden efectuarse de dos maneras: + A baja presin * A alta presin o + Obtener la mejor resolucin de los componentes de la muestra en el menor tiempo posible. Cuando se desarrolla un anlisis usando el mtodo de gradiente se debe tener presente dos objetivos: * Asegurar alta presicin y exactitud. o + Determinar la composicin inicial y final del solvente Para obtener buenos resultados con el mtodo de gradiente debemos seguir 5 pasos fundamentales: * Ajustar el tiempo del gradiente * Determinar la forma del gradiente (lineal, concava o convexa) * Ajustar la velocidad del flujo para mejorar la resolusin * Regresar a las condiciones iniciales la columna.Sistemas de Inyeccin de muestra Estos sistemas han variados durante la historia del sistema de HPLC, en un principio de utilizaba la inyeccin de la muestra con jeringas de alta presin cuales ya estn de desuso. Hoy se utiliza el sistema de Vvulas inyectoras. Columnas y Fases Estacionarias Tipos de Columna: Fuentes de dao de una columna de HPLC: * Obstruccin por partculas pequeas en los solventes o fases mviles * Obstruccin por materiales no eludos en las muestras * Variacin de las caractersticas de retencin por incremento de materiales no eludos

Deteccin La eficiencia de un detector cromatogrfico depende de la relacin entre la cantidad fsica medida y la composicin del efluente, as como tambin de lascaractersticas de las seal de transferida. Los tipos de detectores en HPLC se clasifican en: o Detectores basados en una propiedad de la fase mvil . Ejemplo: Detector de Indice de Refraccin * Detectores basados en una propiedad de la sustancia a separar. Ejemplo: Detector de Fluorescencia, Detector UltravioletaLos detectores ms utillizados en HPLC son: o Detector UV. Hay bsicamente tres tipos: + Detector de Longitud de Onda Fija * Detector de Longitud de Onda Variable * Detector de Arreglo de Diodos o Detector de Indice de Refraccin. Existen muchos diseos de estos detectores, pero solamente existen ahora dos tipos: + Tipo Deflexin * Tipo Fresnel o Detector de Fluorescencia. Este detector solamente puede detectar compuestos que tengan fluorescencia nativa o inducida por derivatizacin . * Detector de Fluorescencia Inducida por Laser o +

Segn la Fuente de Excitancin * Segn el sistema ptico o Detectores Electroqumicos. Pueden ser clasificados en tres tipos: + Detector Amperomtrico * Detector Conductimtrico * Detector Potenciomtrico Se deben tener algunas precauciones con los detectores electroqumicos para asegurarse anlisis reproducicbles: o + # Chequear que esten conectados adecuadamente a tierra la bomba, el detector y registrador (integrador. * Usar bombas reciprocantes de doble piston * Mantener en todo momento el flujo de la fase mvil en el detector. * Operar con el voltaje adecuado * Monitorear la altura de los picos para observar cambios en la efiencia que nos indique la necesidad de reacondicionar los electrodos. * Tener electrodos de referencias extras en solucin 3M de NaOH y reemplazar el electrodo de referencia en la celda 1 2 veces a la semana. * Desconectar el detector electroqumico cuando este llimpiando las columnas. * Utilizar agua, buffers y solventes orgnicos de alta pureza.Derivatizacin

Existen dos tendencias : o Pre-Columna * PostColumnaAnalisis Cualitativo y Cuantitativo Problemas ms comunes encontrados en HPLC Esta es una lista de los problemas normalmente encontrados en HPLC, sus posibles causas posibles, y cmo solucionarlos. o Presin Alta + Posible causa: Obstruccin de la Columna de HPLC o Guarda Columna por partculas. * Solucin: Invierta la Columna y Enjuagar con solvente, teniendo la columna desconectada del detector. Si sto no funciona reemplaze el fritado a la entrada de la columna. Si la presin sigue alta reemplaze la columna. * Solucin a largo plazo: Asegurese que todas las fases mviles se filtren apropiamente antes que entren a la bomba de HPLC . Tambin filtre todas las muestras antes de inyectarlas. o Prdida de la Resolucin + Posible causa: Obstruccin de la Columna de HPLC del Guarda Columna por partculas. * Solucin: vea la seccin de Presin Alta * Solucin a largo plazo: Filtrar todo antes que se introduzcan las fases mviles en el sistema de HPLC. o Picos Hendidos + Posible causa : Obstruccin de la Columna de HPLC o del Guarda Columna por partculas. *

Solucin: Marcha atrs columna roja con presin baja est al lado de abre. Si es necesario reemplaze el fritado de la entrada o la columna. * Solucin a largo plazo: Filtrar todo antes que se introduzcan las fases mviles en el sistema de HPLC. o Variacin en los Tiempos de Retencin + Posible causa : Aire atrapado en la bomba debido a gases disueltos en fase mvil. * Solucin: Bomba primera y est fases seguras tan mviles es propiamente [degassed] * Solucin a larga plazo: Asegurese fase tan mvil est propiamente y adecuadamente desgasificada. Si usa desgasificacin electrnica en lnea asegura esa cadencia del flujo no es demasiado alto para evita [degassing] completo. o Variaciones de la Lnea Base + Posible causa: Burbujas del aire atrapados en la celda del detector debido a una mala desgasificacin de los solventes de la fase mvil. * Solucin: Asegurese que todas las fases mviles estn debidamente desgasificadas y considerar el uso de un restrictor de la presin a toma de corriente del detector. o Lnea Base con mucho Ruido + Posible causa: Aire atrapado en celda del detector o en la bomba. * Solucin: Enjuage el sistema y purge la bomba de HPLC . Use Solventes desgasificados adecuadamente para mantener constante la velocidad de flujo de la fase movil del sistema. o Picos Falsos (Detectores Electroqumicos y de Fluorescencia) +

Posible causa: Oxgeno Disuelto * Solucin: Desgasificar adecuadamente las fases mviles para reducir la concentracin de oxgeno disuelto. * Solucin a largo plazo: Agregar un sistema de filtracin al vaco en lnea. Peridicamente chequear el nivel de oxgeno disuelto. o Baja Ninguna Presin + Posible causa: Trabajar con bombas, sellos pistones expuestos por mucho tiempo a partculas en suspencin en la fase mvil. * Solucin: Reemplace los sellos o pistones, si es necesario.Recomendaciones para adquirir un sistema de HPLC Estos son algunos consejos para adquirir un sistema de HPLC ajustado a sus necesidades: o Cuntas muestras y tipos de ensayos * La facilidad para reemplazar los sellos de las bombas (mantenimiento) * La exactitudad y presicin del sistema de bombas * El Sistema de Gradiente. La suavidad y reproducibilidad de la mezcla * Que tipo de servicio ofrecen puede ofrece la casa vendedora * Suministro de software y compatibilidades * Cunto puede PAGAR usted !

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Comments on: "Cromatografa Lquida de Alta Eficiencia (HPLC)" (65)

1. Nperilla said: 4 marzo, 2008 en 21:51 Hola Juan, Te queria hacer una pregunta. Actualmente estoy en un taller analizando Cafeina y Acido benzoico en cafe y bebidas colas. El analisis se hace por HPLC en fase reversa con una fase movil de Acetonitrilo:agua:acido acetico. Mis preguntas son dos: 1. Para que sirve el acido acetico, tiene que ver con la ionizacion de los compuestos? (pKa cafeina 10.4 y Acido benzoico 4.2) 2. La metodologia esta modificada de una anterior en donde solo usan agua acido acetico, entonces, que proposito tuvo el incluir acetonitrilo en esta nueva fase movil? Ojala me puedas ayudar. espero oir de ti. Un saludo,

2. JUAN CARLOS said: 3 abril, 2008 en 21:58 bueno soy estudiante de la Rafael Landivar de Guatemala y curso un tecnico en investigacin criminal y forense esta informacin me es muy util si existiera un poquito ms se los agradecere

3. Maritza said: 8 mayo, 2008 en 14:29 Hola Estoy trabajando con HPLC-Fluorescencia en hidrocarburos aromaticos policiclicos con solvente CH3CN/agua, y la linea base se fue subiendo desde 6 hasta 10 y ahora no baja, y esto no permite ver los picos pequeos en el cromatograma. Tu que me sugieres? Muchisimas Gracias,

4. Marisa Rodriguez said: 27 agosto, 2008 en 18:34 hola necesito ver si podrian ayudarme como puedo preparar una solucion: Tris 400 milimolar MgCl2 10miliMolar aartir de Tris 1M y MgCl2 1M se los agradeceria mucho, porfavor si podrian mandarme lo a mi correo se los agradesco. marisa

5. erica said:

7 octubre, 2008 en 17:56 hola lo mio es muy basico no se leer el espectro.me podras ayudar?

6. Melvin said: 9 octubre, 2008 en 3:27 Hoa necesito ayuda en la interpretacion de los cromatogramas y como elabaorar una secuencia en el HPLC

7. natrilix78 said: 11 octubre, 2008 en 16:41 hola, erica lo primero que debes saber es que si estamos hablando de cromatografia los datos que obtienes de los equipos no debes llamarlos espectros sino cromatogramas.. en cuanto a tu pregunta, debes saber que cada compuesto que eluye de la columna lo hace a un tiempo de retencion determinado, el cual depende de la columna que estes usando, por lo que te recomiendo siempre usar un patron para que puedas comparar tu muestra. O, emplear un HPLC acoplado a masas que te pueda identificar que compuestos presentes en tu muestra, ojo aqui si estariamos hablando de espectros de masas para lo cual te recomendaria asesoria pues no es sencillo elucidar uno espero haberte ayudado

8. rodrigo pradenas said: 13 octubre, 2008 en 20:19 Muy buena la referencia que hacen a los posibles problemas en HPLC, yo trabaj en mi tesis con HPLC con detecdtor de fluorescencia para analisis de OTA en vinos chilenos, y me parece interesante que se encuentren pginas en la red con informacion importante para los usuarios.

9.

rosa said: 18 enero, 2009 en 5:57 Hola, necesito saber como interpretar un cromatograma y como expresar los resultados obtenidos de la curva estandar y de la muestra analizada, que es vitamina C.

10. Menvile said: 19 enero, 2009 en 3:47 Hola necesito saber sobre cromatografia de azucares en especial de la ribosa. Gracias

11. jannette said: 12 marzo, 2009 en 3:59 esta pagina es muy buena y muy interesante, soy del D.F y actualmente estoy estudiando mi servicio social para obtener mi licenciatura en baja california sur, la paz, en el CIBNOR, y estoy aprendiendo sobre la cromatografia en HPLC para pigmentos y toxinas es la primera vez que lo hago y es una experiencia muy agradable, y el tema que explican aki es entendible y didactico, sigan asi.

12. jannette said: 12 marzo, 2009 en 4:02 ah! se me olvidaba, me gustaria saber que es la cromatografia integral. gracias

13. Veronica Jimenez Hernandez said: 18 marzo, 2009 en 18:51

Buenas tardes! Me podria sugerir cuales son los solventes que necesito para analizar hidrocarburos, especificamente Diesel y podria enviarme una cotizacion. Espero respuesta. Gracias!!

14. nicole ayala said: 25 marzo, 2009 en 22:52 nesecito un practico para hplc

15. nicole ayala said: 25 marzo, 2009 en 22:53 necesito un parctico para hplc

16. ALMA DELIA said: 30 marzo, 2009 en 16:41 HOLA QUISIERA SABER CUAL ES LA DIFERENCIA ENTRE UNA PRECOLUMNA, POSTCOLUMNA Y UNA COLUMNA NORMAL PARA HPLC

17. veronica said: 24 abril, 2009 en 10:21 Hola. Estoy haciendo un estudio sobre toxinas PSP mediante HPLC y necesito saber que fases moviles debo usar para toxinas GTX

18. manuquinngarci@gmail.com said: 24 abril, 2009 en 10:26 Hola , alguien sabe por qu se usa patrones estndar para realizar un cromatograma y luego con RP-HPLC, para las muestras a analizar?; que es patrn estandar? .

19. QUIMI said: 10 mayo, 2009 en 14:09 Hola, Si se realiza un HPLC para separar aspirina y cafeina. Cul tendr menor tiempo de retencin y por qu? Habra que utilizar un eluyente polar?

20. kurtney said: 7 junio, 2009 en 5:33 hola, me podrian decir ke solventes utilizar para analizar fructosa , estoy separando las propiedades de un zumo dietetico de antemano gracia y spero me ayuden.

PAM said: 23 julio, 2009 en 18:54 para analizar azucares debes tner un detector IR ( indice de refraccion) y una columna polyamida, la FM es agua acetonitrilo el % de composion puede ser 25:75, y la misma fase movil la puedes ocupar para diluir.

21. juan said: 18 junio, 2009 en 18:50 estoy trabajando para detectar cumafos en mieles por hplc con detector UV porque es lo unico que tenemos. Necesito que te fijes si voy bien porque me esta costando bastante y GC no van a comprar. Uso long de onda de 315 nm, FM agua.metanol:acetonitrilo 65:14:21, flujo de 0.5 ml/min y temperatura ambiente. Si hay algo de esto que me quisieran corregir o indicar alguna ayuda se los agradezco

22. PAMELA said: 25 junio, 2009 en 1:07 HOLA ME PUEDES AYUDAR CON EL METODO DE EXTRACCION DE VITAMINA C EN YOGURT GRACIAS

Josue DF said: 11 julio, 2009 en 12:58 Prueba una fase normal, yo he encontrado demasiados inconvenientes en la cuantificacion del ascorbico por HPLC-DAD ya que esta vitamina hidrosoluble se degrada muy rapidamente, de hecho he optado por cuantificarla al espectrofotometro

PAM said: 23 julio, 2009 en 18:50

para estabilizar la muestra y que la degradacion de la vitamina C sea mas lenta puedes utilizar acido metafosforico 0.1% en solucion para diluir la muestra u/o estandar

23. Diego said: 26 junio, 2009 en 14:20 Hola, Trabajo con HPLC y tengo el siguiente problema: Se devuelve la Fase mvil por el agujero del inyector. He limpiado el equipo y he cambiado la columna, pero el problema sigue. Qu puedo hacer?

Josue DF said: 11 julio, 2009 en 12:55 Posiblemente estes conectando mal la columna, si tienes un compartimento de columna con valvula de switcheo, asegurate de conectar la columna en donde corresponde, si sigue el problema, la tuberia que va de la columna al puerto de inyeccion podria estar daada y eso provocar la fuga, solo es cuestion de cambiarla

GERMAN said: 23 agosto, 2009 en 16:02 Hay dos posibles causas la mas probable es que tienes que cambiar el sello donde se inyecta es una tubito plstico y tambien tienes que cambiar el sello del rotor del inyector, este se cambia anualmete, esto soluciona tu problema

Roberto said: 20 diciembre, 2009 en 1:40 Saludos. Su problema lo debe de revisar en la bomba,al no existir presin para mandar el liquido este se regresa Att., Dr. Roberto Naranjo Qumico-Farmacutico qfrobert_carlos@hotmail.com

24. David Insuasty said: 31 julio, 2009 en 16:44 Hola, trabajo en la supervisin a la calidad de plaguicidas qumicos en formulaciones, quisiera saber si alguien conoce un mtodo para la determinacin de Mancozeb por HPLC?. Gracias

taz said: 24 mayo, 2011 en 3:26 EPA 0630

taz said: 24 mayo, 2011 en 3:29 pero no es HPLC, pero tal vez te sirva

25.

Zecarlos said: 8 octubre, 2009 en 18:25 1) Cual es la diferencia entre na columna y un cartucho en HPLC 2) que son las columnas monoliticas o de que se diferencian en las otras, ejemplos

26. Milton Lopez said: 14 diciembre, 2009 en 20:31 necesito aprender a manejar un HPLC, y diferentes tecnicas para la separacion de mezclas, identificacion de productos ,determinacion de plaguicidas , alcaloides y muchas otras determinaciones. que puedan servirme a tener un empleo y ayudar en mi comunidad.

27. Milton Lopez said: 14 diciembre, 2009 en 20:34 me gustaria aprender a manejar un HPLC, y conocer tecnicas de analisis en la determinacion de una serie mezclas de quimicos asi como determinar barbituricos alcaloides pesticidas entre otras sustancias, que me permitan conseguir un empleo. Gracias por todo el material de informacion que tienen sigan instruyendo .

28. ana clara said: 2 enero, 2010 en 15:58 me gustaria saber si me podrian decir como se prepara uin nlitro de la fase movil del sistema isocratico 57% de acetonitrilo 41% de agua 2% de acido aceticodesde ya muchas gracias

Alejandra said: 2 junio, 2011 en 14:35 Sencillo, mide 570 mL de Acetonitrilo, 410 mL de agua y 20 mL de acido acetico.

29. Andrea said: 25 enero, 2010 en 11:27 Hola!tengo una duda urgente, q maana tengo el examen de practicascual es la funcinde acido acetico en la determinacion de cafeina por HPLC?Supongo que es algo de los grupos ionizables de la cafena pero no lo tengo. Se supone que esta cargada la cafena cuando se separa? (fase estacionaria C18) A ver si me puedes contestar(por favor, al mail)

30. andrea said: 7 febrero, 2010 en 20:53 hola oye una pregunta, estoy trabajando con muestras de orina, para la cuantificacionde acetil isoniciada e isonicida,pero el problema es que tengo mucho ruido en los primeros 3 mins. de la corrida y se enpalma con el farmaco, quisiera saber si puedes darme una idea de con que puedo quitarle el ruido a la muestra,pues el ruido puede ser de hasta 200 mVolts y necesitoq ue se redusca a 16mVolts, te lo agradeceria mucho de antemano gracias.

31. carmen said: 11 febrero, 2010 en 3:07 hola me podran ayudar,tengo propbleas con valoracion de la rifampicina, sera que em podran enviar un cromatograma de rifsmpicina para guiarme

32. Anabela said: 26 febrero, 2010 en 17:00 Hola Muy buena la pgina, quisiera saber si alguien de ustedes tiene conocimiento de cmo analizar lactosa en muestras de leche con un detector de infrarrojo, mi inquietud es ms sobre cmo tratar la muestra para separar las protenasu poder analizar solo azcares. Saludos

PACHE said: 16 junio, 2011 en 18:10 Sin duda el manejo del HPLC es sencillo y hasta metodico lo realmente interesante es la preparacion de la muestra. Mira supongo que ya es muy tarde para contestar tu pregunta seguramente ya lo has resuelto si es asi por favor cuentanos que hiciste. A mi se me ocurre hacer una hidrolisis acida (puede ser acido clorhidrico) para hidrolizar las proteinas mas aun si aades temperatura para desnaturalizar las proteinas (en terminos vulgares seria cortar la leche, jiji). Obviamente estas precipitarian y tendrias que filtrar y tratar el sobrenadante. Se me ocurren mas cosas si aun no resulves el problema, escribeme a eclipsed22000@yahoo.com.mx saludines

33. jorge said: 1 marzo, 2010 en 15:56

Sabe alguien un metodo para determinacion de nitroxinil por HPLC, ya sea por UV o Fluorescencia?

34. Esther said: 29 julio, 2010 en 14:09 Hola, alguin sabe de algn laboratorio que preste servicios para determinar monosacridos mediante HPLC? De preferencia ubicado en: Toluca o D.F. Muchas Gracias!

35. camila r said: 21 septiembre, 2010 en 22:44 tengo una duda, cuando se utilizan acetona, agua o metanol es en que fase, normal o reversa u otra?? responder, gracias

PACHE said: 12 octubre, 2010 en 19:05 Reversa, en la reversa los disolventes son polares (ej. agua) en la normal apolares (ej. hexano)

36. Barbara said:

8 octubre, 2010 en 16:40 La consulta es la siguiente: hace dos dias analise una muestra y el pico salia perfecto, sin defecto y cumplia el tailing. Hoy volvi a correr la misma muestra pero el pico sale como con una panza, me parece raro porque mantengo el mismo tiempo de retencion y practicamente la misma area. No se donde puede estar el problema. Como lo puedo solucionar? muchas gracias!

PACHE said: 12 octubre, 2010 en 19:01 Si ninguna de tus condiciones cambiaron, debe ser la columna o la fase movil, la columna lavala bien hasta que pase linea base y las fases filtradas y desgacificadas, sino mejor puede ser tiempo de 1) regenerar la columna o 2) cambiarla a flujo inverso o ya de plano cambiarla. Saludos espero que te sirva mi respuesta, si quieres escribeme a eclipsed22000@yahoo.com.mx

37. PACHE said: 12 octubre, 2010 en 19:04 Mi pregunta es: baje y sonique todos las valvulas check y tuberias de una bomba LC20AT funciono perfecto porque de no tener flujo ya lo tengo, el detalle es que quedo con mucho ruido aprox 5 a 10 bars, mi presion no estabiliza sino varia bastante comparando con antes de lavar todo, que hago? ojala alguien me pueda ayudar. eclipse d2 2000 arobix yaho comer mex

38. Barbara said: 21 octubre, 2010 en 17:50 Gracias por la respuesta. AHora me pasa con otra columna que se me deforma el pico y la presion esta horrible con la Fase Movil. Le pase agua para limpiar y se estabiliza bien la

presion. Cuando vuelvo a pasar FM sucede lo mismo, se vuelve horrible la presion.Como puedo solucionarlo?

39. Erica said: 9 noviembre, 2010 en 20:42 Hola Juan mi situacin es la siguiente: Como podemos programar al software de HPLC un gradiente lineal con duracin de 60 minutos comformado por dos eluentes A y B en donde al A va de 100% a 0% y B de 0 a 100%.Espero tu respuesta Saludos Erica

PACHE said: 16 junio, 2011 en 18:04 eso depende que que sofware este hablando generalmente tienen una tabla que debes poner tiempo y concentracion de A y B.

40. Francisca said: 25 enero, 2011 en 19:11 Mi pregunta es: cul es el porcentaje de eficiencia mnimo que debo tener para poder usar una columna cromatogrfica de HPLC por favor responderme, gracias.

41.

ERIKA NAJERA said: 12 febrero, 2011 en 15:15 Hola me parece interesante descubrir que a mucha gente le apasiona el tema de al cromatografia como a mi. Saludos a todos

42. Felix Falconi said: 17 febrero, 2011 en 11:09 Hola, a quien pueda ayudarme, me gustaria saber lo relacionado a la deteccion de principios activos con el HPLC. Ademas sobre que solventes debo usar. agregar todo lo necesario. les agradezco mucho

43. PATRICIA said: 2 marzo, 2011 en 12:18 Hola ,estoy trabjando con Hplc para la determinacin de PAH n aguas. En el cromatograma desde hace unos das la lnea base baja bruscamente al llegar a los 15 minutos del tiempo de anlisis. No se por qu se produce esto y por qu no se produca en los primeros cromatogramas. Alguien me puede ayudar por favor?. Gracias.

44. Alba said: 9 marzo, 2011 en 16:19 Hola, a ver si me puede ayudar alguien estoy trabajando con HPLC para la deteccin de nucletidos. El caso es que manejo cantidades muy pequeas. Y ltimamente me pasa que el tiempo de retencin de los standard no me coincide con el tr de mis muestras cuando las enriquezco por qu pude ser? alguien sabe qu sucede y si se puede

solucionar? Gracias

45. Laura said: 9 marzo, 2011 en 19:15 Hola! Necesito ayuda para saber como interpretar un cromatograma y como expresar los resultados obtenidos de la curva estandar y de la muestra analizada, que es 5fluorouracilo. Hay una incgnita en la ecuacin de la recta que no s que es (e). Muchas gracias!! Un saludo!

46. OSCAR said: 7 abril, 2011 en 17:26 Necesito analizar acido propionico por HPLC u otra metodologia en un produto liquido.

47. Alberto Farias bermdez said: 15 abril, 2011 en 15:49 Hola: Por favor necesito conocer quin oferta patrones de ESTEVIOSIDOS y REBAUDIOSIDOS para cromatografa HPLC. Muchas Gracias Alberto

48. Lorena said: 17 mayo, 2011 en 22:25

Hola, por favor alguien que me ayude con una tcnica para Azcares y lactosa por detector Uv-vis. Le agradeceria mucho es mega urgente.

49. jhanet yovana diaz velasquez said: 26 mayo, 2011 en 15:48 interesante que hay un sitio como este para entablar conversaciones sobre HPLC

50. PACHE said: 15 junio, 2011 en 20:26 Por unos lados veo que es correcto lavar el HPLC con HCl 0.1% pero otros dicen que no, lo cierto es que necesito lavarlo sobre todo las tuberias de las FM si alguien tiene una buena propuesta por fa escribir a eclipsed22000@yahoo.com.mx

51. jonathan said: 16 junio, 2011 en 17:57 pero en que consiste el detector de indice de refraccion tipo fresnel porque aca solo esta mencionado pero no indican su funcion sus ventajas y desventajas

52. jonathan said: 16 junio, 2011 en 17:58 y tambein seria bueno que me explicaran tambien las mismas caracteris ticas par el detector de indice de refraccion tipo deflexion

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en pleno TP http://fb.me/13LvwGkIq 2 days ago Nueva adquisicin para el Lab http://fb.me/MNLQfcr5 2 days ago @vickysssst nonono, esas van por MSN o en #porno 2 days ago Pero @vickysssst te olvids que es del lab? ac van guarradas qumicas. Arriba el Viagra! (?!?!?!) 2 days ago @vickysssst por supuesto. Twttr es para poner guarradas y sinsentidos. No te olvides pon cuando te toques xD! Estimul a la gente 2 days ago @vickysssst pon cundo te bas, cundo coms, cundo descargs, cundo f**k and so on... 2 days ago @vickysssst no sabe qu escribir en Twitter. Le doy consejos? 2 days ago

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