UNIVERSIDAD CIENTFICA DEL SUR

FACULTAD DE INGENIERA Y GESTIN AMBIENTAL

MICROBIOLOGA AMBIENTAL

Informe de prcticas Informe N2:Medios de cultivo y mtodos de siembra

Profesor: Elfer Valdivia Rafael Alvis

Fecha de entrega: Viernes 24 de setiembre 2010

Alumnos: CRISTIAN GALINDO CARLA

Lima-Peru

1. INTRODUCCIN

MARCO TERICO Si bien es cierto que los microorganismos cumplen un papel importante en nuestra vida y estn en todos lados que vayamos, y el medio que nos rodea, tambin debemos saber cules son los sistemas ms importantes para la identificacin de estos microorganismos y uno de ellos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l. En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre

completa se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras.

OBJETIVOS 1.- Aislamiento de bacterias mediante los mtodos de siembra 2.- Recuento de bacterias mediante los mtodos de siembra. 3.- Lograr una gran poblacin homognea de bacterias mediante los mtodos de siembra.

2. MATERIALES Y MTODOS Materiales: - Muestra de agua - Muestra de suelo -Agua de cao - Agar solido -Agar licuado-difundido -Microscopio

Mtodos 1.-Para la realizacin del cultivo de bacterias, utilizamos 3 tipos de siembra (estriado, diseminacin y difusin). 2.- La muestra de bacterias que tomamos fueron extradas de la laguna y tierra de la universidad.

3.-La muestra que extrajimos de la tierra la mezclamos con agua para proceder a realizar nuestros cultivos. 4.- Posteriormente realizamos nuestra siembra mediante los 3 procesos: * Estriado; para realizar este mtodo, necesitamos de un Agar slido un asa de siembra. El fin de este mtodo es aislar colonias.
-

Se esteriliza el asa con el fuego del mechero y enfriarla. Tomamos una porcin de las muestras de agua y suelo. Transferimos la muestra a la placa Petri, con ayuda del asa formamos estras, dividiendo la base en cuatro partes, para as obtener colonias cada vez ms reducidas. Flamear el asa y tapar la placa Petri. Ya se debe de haber puesto el Agar.

* Diseminacin; para realizar este mtodo, tambin utilizamos Agar slido, y una esptula de Drigalski. El fin no es aislar microorganismos, si no obtener una gran poblacin homognea. - Tomamos una muestra ya sea de agua de laguna o de tierra mezclada con agua. - Con ayuda de la esptula de Drigalsky expandimos por toda la placa Petri las muetras, tapamos la placa. * Difusin; por ltimo para este mtodo, utilizamos el agar licuadodifundido),y en esta oportunidad usamos una pipeta calibrada con (0.1 mm de agua y de tierra mas agua), esto con el fin de saber con cuantas bacterias empezamos y con cuantas terminamos al final. Este mtodo de siembra lo utilizamos con el fin de hacer un recuento de bacterias. - Realizamos sucesivas diluciones de muestras, para reducir el nmero de microorganismos de la sucesin inicial. - Luego se hace una siembra con 0.1 ml que al distribuir una parte de ella en la placa origina colonias separadas, con un nmero ptimo para su recuento. El rango que tuvimos en cuenta fue de [30 a 300] UFC. Luego las incubamos por 72 horas a 37C.

As al terminar nuestra prctica obtuvimos 6 placas petri con nuestros cultivos de bacterias. Luego de 72 horas, tomamos 4 de las 6 muestras de las colonias que han crecido en nuestros medios de cultivo para hacerles la coloracin Gram. Normalmente, es estas prcticas, se toma la muestra despus de 24 a 48 horas, pero en este caso no fue as, ya que tuvimos que hacerlo en nuestros das de prcticas de laboratorio.

3. RESULTADOS TAMA FORM O A 1 (AGUA ESTRIADO) 2 (DISFUSIN AGUA) 3 (AGUA ESTRIADO) 4 (DISEMINACI N TIERRA) 5mm 10mm 7mm 4mm BOR DE PIGEMEN TO ELEVACI N convexa plana plana plana ASPEC TO

irregul rugos ar o beige irregul ar irregul ar rugos o beige rugos o rojo beige

circula r liso

GRAM Bacilos esporulados rugoso Gram + Bacilos granul esporulados ar Gram + Cocos y bacilos rugoso Gram + Bacilos granul esporulados ar Gram + DISFUSIN AGUA

AGUA ESTRIADO

Muestra 1 Muestra 2

AGUA ESTRIADO

DISEMINACIN TIERRA

Muestra 3 4 4. DISCUSIN

Muestra

En el cultivo de bateras que realizamos en el laboratorio tuvimos que hacer nuevas mediciones con respecto a la tcnica de diseminacin ya que nosotros tomamos 0,1 miligramos de muestra, y esto cambio nuestros datos posteriores. Por otro lado el cultivo de bacterias que estuvieron en la tierra nos sali considerablemente muy desarrollada, y por este motivo ya estaban empezando a formar esporas (esto se debe a que las

bacterias estaban notando que estaban en un medio toxico debido a sus desechos propios y que haba poco alimento). Al parecer esta multiplicacin se debi a que la muestra de tierra que utilizamos no la diluimos con abundante agua. Entonces tuvimos que dividir en 4 partes la placa petri y empezar a contar, teniendo as que haba 35 bacterias en el cuadrante de menor poblacin. Y al final para hacer el recuento total de bacterias tuvimos que multiplicar ese nro. de bacterias por 4, teniendo as: 35 x 4= 140 bacterias en total.

5. CONCLUSIONES
-

De las prcticas realizadas en laboratorio encontramos bacilos y cocos esporulados. Anteriormente realizamos la coloracin Gram. Todas las bacterias obtenidas estaban teidas de color violeta, resultaron Gram positivas. El Agar en el medio de cultivo es uno de los constituyentes ms importantes, ya que le proporciona a los microorganismos los medios adecuados para su crecimiento y formacin de colonias. Se logr el aislamiento de bacterias y tambin se obtuvo una gran poblacin de ellas en medios de cultivos diferentes. Si no se le da a la bacteria todas las condiciones adecuadas como temperatura, grado de humedad, nutrientes; no crecern colonias en la misma cantidad, que si se les brindaran.

6. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS Valdivia, Alvis, Del pino; Microbiologa Ambiental (gua de practicas), Lima, Per 2010 http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm