Curso de Microbiologa y Parasitologa

Escuela de Ciencias de la Salud

Judith Trujillo P

ACCION DE LOS AGENTES FISICOS Y QUIMICOS SOBRE LAS BACTERIAS Introduccin Un aspecto importante del control de las infecciones reside en la comprensin de los principios bsicos de la esterilizacin, la desinfeccin y la antisepsia. La esterilizacin consiste en la destruccin completa de todos los microorganismos, incluidas las formas resistentes como esporas. Se puede conseguir mediante esterilizacin fsica, o qumica o gaseosa. Los esterilizantes fsicos, como el calor hmedo y el calor seco son los ms utilizados para la mayora de los materiales, excepto los termosensibles o los que poseen componentes qumicos o voltiles. Tambin se utiliza con frecuencia la esterilizacin por rayos ultravioleta o radiacin ionizante, la principal limitacin de la esterilizacin con rayos ultravioleta radica en la necesidad de una exposicin directa del material a esterilizar. El esterilizante gaseoso utilizado ms a menudo es el xido de etileno. Aunque es muy eficiente, se trata de una sustancia inflamable, explosiva y cancergena y existen unas estrictas regulaciones que restringen su utilizacin. Tambin es limitada la esterilizacin con formaldehido gaseoso puesto que este compuesto qumico es carcingeno. Los vapores de perxido de hidrgeno tambin constituyen unos esterilizantes eficaces como consecuencia de la naturaleza oxidante del gas. Una variacin de este mtodo es la esterilizacin por plasma gaseoso, en la que el perxido de hidrgeno es vaporizado para producir radicales libres reactivos mediante energa de radiofrecuencia o de microondas. Puesto que este mtodo de esterilizacin es eficiente y no ocasiona la aparicin de productos secundarios txicos, se prev que la esterilizacin mediante plasma gaseoso sustituya en el futuro a muchas de las aplicaciones actuales del xido de etileno. Se han utilizado dos esterilizantes qumicos: el cido paraactico y el glutaraldehdo. El cido paraactico es un agente oxidante con actividad excelente y origina productos secundarios no txicos, por el contrario, la

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utilizacin del glutaraldehdo supone diversos problemas de seguridad, por lo que se deben tomar siempre precauciones al manipular este compuesto qumico. Desinfeccin: es el proceso que elimina la mayora o todos los patgenos en objetos o superficies, pueden sobrevivir algunos microorganismos como los ms resistentes o las esporas. En la prctica el trmino desinfeccin implica por lo general el uso de qumicos antimicrobianos. Los que se usan para desinfectar objetos inanimados se llaman desinfectantes. Los desinfectantes se han dividido en varios grados: alto, intermedio y bajo. La eficacia de la desinfeccin se ve determinada por aspectos como la naturaleza del objeto a desinfectar, el nmero y grado de resistencia de los microorganismos contaminantes, la cantidad de materia orgnica presente, el tipo de desinfectante, la concentracin utilizada y la duracin y la temperatura de la exposicin. Estos desinfectantes se clasifican segn su estructura qumica en grupos: Alcoholes, aldehdos, biguanidas, bisfenoles, liberadores de halgenos, metales pesados, peroxgenos, fenoles, compuestos de amonio cuartenario Antisepsia: es el proceso que se utiliza para destruir o reducir el nmero de microorganismos presentes en la superficie cutnea excepto las esporas. Los compuestos qumicos que se utilizan se llaman antispticos, los ms utilizados son alcoholes y compuestos yodados.

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PRACTICA DE LABORATORIO

Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis son dos bacterias que vamos a utilizar para comprobar la accin de los agentes fsicos y qumicos sobre las bacterias. Como agente fsico usaremos el calor ( 56C, 100C y 121C) y como agentes qumicos el alcohol antisptico (70%) y el hipoclorito de sodio (0.5%). Propsitos :

1.

Comprobar el efecto de compuestos qumicos utilizados como antispticos y desinfectantes.

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2.

Comprobar el efecto del calor hmedo, como agente fsico, sobre los microorganismos. 3. Diferenciar los trminos de antisepsia, desinfeccin y esterilizacin. 4. Comprobar la eficiencia del lavado de manos con jabn cosmtico y con jabn yodado. 5. Controlar el proceso de esterilizacin por mtodos qumicos (cinta adhesiva) y por bioqumicos (ampollas de Bacillus stearotermophillus).

Materiales : Solucin de hipoclorito de sodio al 0.5% Solucin de alcohol etlico al 70% (alcohol antisptico) Caldo BHI (medio de cultivo) Agar nutritivo (medio de cultivo) Agar sangre (medio de cultivo) Cultivo de S. aureus en BHI Cultivo de Bacillus subtillis en BHI Cinta adhesiva para control de autoclaves (esterilmetro) Ampolla con B. stearotermophillus para control de autoclaves (sterikom) Jabn cosmtico Jabn yodado Gasas estriles Pipetas estriles Asas bacteriolgicas Mecheros Incubadora a 37 grados centgrados Bao de agua a 100 grados centgrados Bao de agua a 50 grados centgrados Autoclave Procedimientos :

1.

Agentes fsicos y su efecto sobre los microorganismos (calor hmedo) 1.1. Bao de agua a 56 grados centgrados durante 30 minutos. Tome un caldo BHI que contenga B. subtillis y otra que contenga S. aureus, colquelos en el bao de agua a 56 grados centgrados durante 30 minutos. Proceda con un hisopo a tomar una muestra del caldo con B.

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subtillis y simbrela sobre un agar nutritivo e incube a 37 grados centgrados por 24 horas, ahora haga lo mismo pero con el caldo que contiene S. aureus e incube a 37 grados centgrados por 24 horas. 1.2. Bao de agua a 100 grados centgrados durante 30 minutos. Tome un caldo BHI que contenga B. subtillis y otro con S. aureus, coloque ambos en el bao a ebullicin por 30 minutos. Luego de cada tubo tome una muestra con un hisopo y simbrela en un agar nutritivo cada una de ellas, correctamente marcados e incube a 37 grados centgrados por 24 horas. 1.3. Autoclave por 20 minutos a 15 libras (121 grados centgrados). Al igual que en los dos anteriores, exponga un tubo con B. subtillis y otro con S. aureus. Al finalizar el ciclo tome una muestra con un hisopo de cada tubo y siembrela sobre 2 agares nutritivos, correctamente marcados e incube a 37 grados centgrados por 24 horas.

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1.4. Oservacin de resultados e interpretacin.

Anote la presencia o ausencia de crecimiento bacteriano indicando con positivo el crecimiento y con negativo la ausencia del mismo. Bacteria S. aureus Bacillus subtillis Autoclave Agua hirviendo Bao de Mara 56C

2.

Compuestos qumicos y su efecto sobre los microorganismos. 2.1. Hipoclorito de sodio al 0.5%. A un tubo con 2 ml de la solucin de hipoclorito agrguele 0.5 ml del caldo BHI que contiene B. subtillis, mzclelo y a los 5 minutos con un hisopo tome un poco de esta mezcla y siembrela en un agar nutritivo. Incube en estufa a 37 grados centgrados por 24 horas. Ahora haga lo mismo en otro tubo, y despus de 30 minutos tome una muestra de la mezcla con un hisopo y siembrela en un agar nutritivo. Incube a 37 grados grados centgrados por 24 horas.
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Procediendo de igual manera, pero partiendo de un caldo BHI que contiene S. aureus, prepare 2 tubos similares a los primeros y siembre cada uno en un agar nutritivo. Incube a 37 grados centgrados por 24 horas.

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2.2. Solucin de Alcohol Etlico al 70%.

Tome un tubo con 2 ml de la solucin de alcohol antisptico, agrguele 0.5 ml del caldo BHI que contiene B. subtillis, mzclelo y a los 5 minutos con un hisopo tome un poco de la mezcla y siembrela en un agar nutritivo. Incube a 37 grados centgrados por 24 horas. Ahora en otro tubo con alcohol antisptico haga la mezcla pero espere 30 minutos para proceder a sembrar en otro agar nutritivo e incube a 37 grados centgrados por 24 horas. De igual manera prepare otros 2 tubos pero partiendo del caldo BHI que contiene Staphylococcus aureus y proceda hacer lo mismo y siembrelo en agar nutritivo. Incbelos a 37 grados centgrados por 24 horas.

2.3. Observacin de resultados e interpretacin.

Anote la presencia o ausencia de crecimiento bacteriano indicando con positivo el crecimiento y con negativo la ausencia del mismo. Bacteria Hipoclorito 0.5% 5 minutos S. aureus Bacillus subtillis 30 minutos Alcohol 70% 5 minutos 30 minutos

3.

Lavado de manos.

3.1. Remocin flora transitoria.

Una persona, sin lavarse las manos, tocar con sus dedos la superficie de un agar sangre que luego incubar en cmara con CO2 al 5% a 37
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grados centgrados por 24 horas. Luego se lavar con jabn cosmtico, se secar con una gasa estril que un compaero le prepar aspticamente y repetir el proceso anterior sobre un agar diferente que incubar de igual manera que el anterior.

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3.2. Remocin de flora transitoria y residente.

Una persona diferente a la anterior, sin lavarse las manos tocar la superficie de un agar sangre e incubar en iguales condiciones al procedimiento anterior. Luego se lavar con jabn yodado siguiendo la tcnica descrita, secarse con una gasa estril y proceda a tocar otro agar sangre que se incubar como ya se indic.

Anote sus observaciones. Lavado con jabn perfumado Cultivo de manos sin lavar Lavado con antimicrobiano

4.

Conteste las siguientes preguntas sobre este tema. a. Cul es el mecanismo de accin del calor hmedo para destruir los microorganismos? b. Se destruiran las endosporas al ponerlas a hervir por 30 minutos? Fundamente. c. Enuncie dos ejemplos de desinfectantes de alto nivel y dos de nivel intermedio d. Enuncie dos ejemplos de desinfectantes del grupo de aldehdos y dos del grupo de liberadores de halgenos e. Qu diferencia hay entre un lavado de manos con jabn perfumado y otro con jabn antimicrobiano

Bibliografa: MURRAY, Patrick R. Microbiologa mdica 5. Ed. Madrid : Elsevier Mosby, 2005 Mdulo 1: Generalidades 6

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Escuela de Ciencias de la Salud BROOKS, Geo F. Microbiologa mdica de Jawetz, Melnick y Adelberg. 19. ed. Esp. De 24 ed. Ing. Mxico : Manual Moderno, 2007 828 p. (QW4/B7-07) Manual de Bioseguridad del Ministerio de Proteccin Social

AGENTES FSICOS
Realizar con Sataphylococcus aureus y Bacillus subtilis

Tubo de BHI con crecimiento bacteriano

Tubo de BHI con crecimiento bacteriano

Tubo de BHI con crecimiento bacteriano

Autoclave (121C) por 20 minutos

Bao de agua a 100C por 30 minutos

Bao de agua a 56C por 30 minutos

Mdulo 1: Generalidades Sembrar en Agar Incubar a 37C por Nutritivo

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AGENTES QUIMICOS
Tubo de BHI con Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis

Tomar 0.5 ml y depositarlos en el tubo con Hipoclorito al

Tomar 0.5 ml y depositarlos en el tubo con Hipoclorito al

Tomar 0.5 ml y depositarlos en el tubo con alcohol antisptico

Tomar 0.5 ml y depositarlos en el tubo con alcohol antisptico

Esperar 5

Esperar 30

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Sembrar en agar nutritivo Mdulo 1: Generalidades Incubar a 37C por 24 8