Machine Translated by Google

Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2021) 11:1390–1400

https://doi.org/10.1007/s13346-021-00964-z

ARTIKEL ASLI

Pengiriman toksin ovalbumin dan kolera ke lendir

bukal untuk imunisasi menggunakan jarum mikro
dan perbandingan respon imunologi terhadap pemberian transmukosa

YuÿJeong Oh1 · HyeÿRan Cha2 · Su Jin Hwang2 · DaeÿSung Kim1 · YuÿJi Choi1 · YunÿSeo Kim1 · YuÿRa Shin1 ·
Thuy Trang Nguyen3 · SeongÿO Choi4 · Jae Myun Lee2 · JungÿHwan Park1

Diterima: 11 Maret 2021 / Diterbitkan online: 23 Maret 2021

© Masyarakat Rilis Terkendali 2021

Abstrak
Mukosa mulut merupakan tempat yang efektif untuk vaksinasi. Namun, untuk vaksin mukosa mulut, pemberian dosis vaksin yang
tepat tidak mungkin dilakukan karena lingkungan yang kaya air. Dalam penelitian ini, mukosa bukal, yang mudah diakses
menggunakan rangkaian microneedle di rongga mulut, dipilih sebagai lokasi pemberian. Respon imun terhadap penggunaan
jarum mikro dengan pemberian transmukosa konvensional dibandingkan. Selain itu, efek tambahan dari penambahan toksin
kolera (CT) pada formulasi obat juga diamati. Dua jenis patch disiapkan: (1) Ovalbumin (OVA) dicelupkan hanya pada ujung
microneedles (C-OVA-MN) dan (2) OVA dilapisi pada permukaan substrat patch disk lemak tanpa microneedles ( C-OVA-D).
Sifat penghantaran obat C-OVA-MN dan C-OVA-D diselidiki menggunakan OVA berlabel fluoresen (OVA/FITC). Setiap patch
diberikan kepada tikus dua kali, dengan selang waktu 2 minggu, dan kemudian titer antibodi diukur. Patch microneedle dapat
mengantarkan vaksin ke dalam epitel mukosa bukal dalam waktu yang lebih singkat dibandingkan dengan pemberian
transmukosa. Sistem microneedle C-OVA-MN menunjukkan titer IgG serum yang tinggi. Selain itu, CT memicu respons imun
yang dimediasi sel T CD8+ dan CD4+ . Melalui penelitian ini, kami menyajikan kemungkinan metode baru vaksinasi pada mukosa
bukal menggunakan microneedles dan CT adjuvant.

Kata Kunci Rongga bukal · Imunisasi · Microneedle · Persalinan transmukosa · Adjuvan

Singkatan MN jarum mikro

OVA ovalbumin TPR Asam polilaktat
OVA/FITC Ovalbumin berlabel neon cmc Karboksimetil selulosa
C-MN Tambalan jarum mikro berlapis
C-OVA-MN Patch microneedle dilapisi dengan
Yu-Jeong Oh dan Hye-Ran Cha berkontribusi sama dalam pekerjaan ini. formulasi OVA

* Taman Jung-Hwan
Patch Microneedle C-OVA/CT-MN dilapisi dengan formulasi
pa90201@gachon.ac.kr OVA ditambah toksin kolera
C-OVA-D Patch disk datar dilapisi dengan
Jae Myun Lee
jaemyun@yuhs.ac formulasi OVA

1
Departemen Teknologi Bionano dan Gachon BioNano
Lembaga Penelitian, Universitas Gachon, Gyeonggi-do,
Republik Korea
Perkenalan
2
Departemen Mikrobiologi dan Imunologi, Lembaga Imunologi
dan Penyakit Imunologi, Pascasarjana
Sistem imun meliputi sistem imun sistemik dan mukosa.
Sekolah Ilmu Kedokteran, Proyek Brain Korea 21, Yonsei Sistem kekebalan mukosa mengandung sekitar tiga perempat
Fakultas Kedokteran Universitas, Seoul, Republik Korea dari total limfosit [1].
3
Universitas Teknologi Kota Ho Chi Minh, Ho Chi Minh, Sistem imun mukosa dapat menghasilkan imunitas sistemik
Vietnam dan mukosa melalui jaringan limfatik terkait mukosa (MALT)
4
Pusat Litbang QuadMedicine, QuadMedicine, Inc, Seongnam, [2, 3]. Imunitas mukosa penting karena patogen disekresikan
Republik Korea ke dalam lendir
Machine Translated by Google
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2021) 11:1390–1400
limfosit dapat menetralisir patogen sebelum menyebabkan infeksi.
Selain itu, imunitas sistemik melalui sistem mukosa dapat
menghasilkan sel memori yang tahan lama dengan lebih efisien [4].
Lapisan mukosa luar mengandung sel B, limfosit T, subset sel T,
sel plasma, dan elemen seluler yang terlibat dalam mempertahankan
dan menginduksi berbagai respon imun. Sel efektor utama pada
permukaan mukosa adalah limfosit T dengan fenotip CD8+ dan
CD4+ selain sel B. Limfosit T dengan CD8+ dan CD4+ berjumlah
hingga 80% dari total sel limfoid mukosa [5].
Vaksinasi mukosa dilakukan terutama melalui dua cara.
(1) Vaksin pada lapisan lendir diendositosis oleh sel penyaji antigen,
yang berpindah ke kelenjar getah bening melalui sinyal kemokin,
menyebabkan priming sel T. Akibatnya, limfosit T teraktivasi dan
menghasilkan respons seluler dan humoral secara simultan. (2)
Sel penyaji antigen menginduksi ekspresi reseptor homing seluler
seperti CCR10, menghasilkan pengenalan ligan seperti CCL28,
yang diekspresikan dalam usus, mukosa mulut, dan kelenjar susu
saluran pernapasan. Hal ini menciptakan kemokin di jaringan
mukosa, yang menandakan pergerakan sel efektor kembali ke
permukaan mukosa. Biasanya, IgA+plasma
Sel B menghasilkan IgA untuk mengeluarkan patogen ke permukaan
mukosa [6, 7].
Jenis mekanisme kekebalan dapat berbeda tergantung pada
jalur vaksinasi. Mukosa mulut adalah pilihan yang cocok
rute pemberian untuk menginduksi kekebalan protektif terhadap
mikroorganisme patogen karena rongga mulut merupakan jalur
invasi mikroorganisme patogen. Beberapa penelitian menunjukkan
bahwa populasi sel Langerhans mukosa mulut yang sangat
mengekspresikan MHC dan molekul ko-stimulasi lebih besar
dibandingkan sel Langerhans dermal [8]. Jumlah LC yang relatif
tinggi dan rendahnya jumlah sel mast yang mengandung histamin
di daerah bukal menjadikan mukosa bukal sebagai tempat yang
menarik untuk pemberian vaksin [9]. Rute transmukosa dapat dibagi
menjadi lendir hidung, lendir rektal, lendir vagina, lendir mata, dan
lendir rongga mulut, dan rongga mulut adalah yang paling mudah
diakses untuk vaksinasi. Rongga mulut secara garis besar dapat
dibagi menjadi epitel sublingual, epitel bukal, rongga palatal, bibir,
dan lidah [10, 11]. Epitel bukal merupakan lokasi yang diinginkan
untuk pemberian vaksinasi karena terdapat relatif banyak mukosa
yang tidak bergerak dibandingkan dengan bagian lain dari rongga
mulut [12]. Selain itu, epitel bukal memiliki sel Langerhans 2,5 kali
lebih banyak dibandingkan epitel sublingual, sehingga respons imun
yang lebih efektif dapat dipicu [6]. Rongga bukal juga merupakan
tempat yang cocok untuk pemberian jarum mikro karena merupakan
mukosa bukal
mempunyai epitel yang relatif lebih tebal dibandingkan bagian
rongga mulut lainnya dan pembuluh darah terletak terutama di
bawah epitel tersebut [13]. Mengingat panjangnya yang khas
1391
microneedles farmasi berkisar antara 300 dan 800 ÿm, mukosa
bukal setebal 650 ÿm adalah tempat yang ideal untuk pemberian
microneedles [14].
Vaksinasi mukosa mulut memiliki kelebihan seperti kemudahan
pemberian dan aksesibilitas, namun pemberian vaksin oral sulit
dilakukan karena lingkungan mulut kaya akan air dan enzim. Air liur
yang dikeluarkan setiap hari dari jaringan mulut memiliki kecepatan
0,1 ml/menit dan volume 1-1,5 L, yang dapat menginduksi
pembersihan sebelum vaksin diberikan dengan benar. Selain itu,
berbagai enzim dalam air liur dapat mempengaruhi stabilitas vaksin
selama pemberian [6]. Oleh karena itu, dalam kasus vaksin cair
umum atau vaksin jenis tempel, pemberian dosis vaksin yang tepat
ke dalam lendir sulit dilakukan [15]. Selain itu, penelitian mengenai
pemberian vaksin melalui mukosa masih kurang
rute.
Microneedles adalah metode pemberian invasif minimal dan
tidak menimbulkan rasa sakit untuk mengirimkan vaksin ke posisi
yang telah ditentukan sebelumnya di dalam jaringan [16, 17].
Microneedles untuk pemberian oral telah dikembangkan untuk
pengobatan alergi, stomatitis, dan menghilangkan rasa sakit di
rongga mulut [18]. Tempat pemberian utama vaksin untuk mencapai
kemanjuran imunologis menggunakan jarum mikro di rongga mulut
adalah bibir dan lidah [11]. Bahan pembantu berbasis lipid untuk
microneedles vaksin oral dipelajari untuk mendapatkan peningkatan
respon imun, dan jumlah CD8+ yang tinggi diperoleh dengan
menambahkan bahan pembantu tersebut [19-22]. Namun, belum
ada studi perbandingan mengenai kemanjuran imunologi dan
respon yang disebabkan oleh pemberian transmukosa dan
microneedle di rongga bukal. Selain itu, belum ada penelitian
mengenai kemanjuran imunologi dari vaksin yang digunakan dalam
kombinasi dengan jarum mikro dan bahan pembantu CT. CT
ditemukan meningkatkan respon antibodi mukosa, respon sitokin
Th1 dan Th2 sistemik, dan respon CD8+ [23].
Dalam penelitian ini, microneedles digunakan sebagai metode
alternatif untuk memasukkan OVA dan CT ke dalam mukosa bukal.
Untuk membandingkan respon imun yang diinduksi oleh
microneedles dengan yang diinduksi oleh pengiriman transmukosa,
dua geometri sistem patch disiapkan: (1) OVA hanya dilapisi dengan
celup pada ujung microneedles (C-OVA MN; Gambar 1a) dan (2)
OVA dilapisi pada permukaan substrat disk melingkar tanpa
microneedles (C-OVA D). Tambalan yang telah disiapkan
diterapkan pada tikus, dan respons imun serta kemanjurannya
dibandingkan. Antigen dikirim ke epitel bukal melalui microneedles
(C-OVA-MN; Gambar 1b, c), dan pengiriman antigen transmukosa
dilakukan oleh substrat disk (C-OVA-D; Gambar 1c). CT ditambahkan
sebagai bahan pembantu untuk meningkatkan kemanjuran imunitas
mukosa. Melalui penelitian ini, respon imunologi di rongga bukal
dibandingkan antara pemberian transmukosa dan microneedles.
Juga, efek menggabungkan microneedles dan CT adjuvant (C-OVA/
CT-MN) pada respon imun diperiksa.
Machine Translated by Google

1392 Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2021) 11:1390–1400

Gambar 1 Ilustrasi pemberian

vaksin pada epitel mukosa
mulut menggunakan microneedle
patch. (a) Geometri dari
mikroneedle berlapis (C-MN)
terdiri dari formulasi ujung,
langkah, dan pelapis. (b)
Menargetkan mukosa bukal, yang
mudah diakses di rongga mulut.
(c) Pemberian vaksin pada epitel
bukal secara tepat menggunakan
microneedle patch (gambar kiri)
dan pemberian vaksin melalui
jalur transmukosa menggunakan
disk patch (gambar kanan)

Bahan dan metode informasi tentang geometri tambalan dirangkum dalam

Tabel 1.
Histologi mukosa bukal Untuk menyiapkan cetakan betina dari setiap tambalan,
polidimetil siloksan (PDMS, Sylgard 184, Dow Corning, MI,
Untuk mengetahui struktur anatomi mukosa bukal USA) dituangkan ke atas struktur induk dan diawetkan pada
dimana microneedles diberikan, pewarnaan H&E pada suhu 70°C selama 1 jam. Setelah rongga cetakan betina
mukosa bukal babi dilakukan. Pertama, jaringan mukosa diisi dengan bubuk asam polilaktat (PLA), PLA dicairkan
babi yang telah dipotong ditempatkan dalam larutan malin pada suhu 195°C dalam oven vakum (Eyela VOS 301SD,
10% (larutan formalin, bufer netral, 10%, Sigma-Aldrich, Tokyo, Jepang). Struktur PLA dikeluarkan dari cetakan
Seoul, Korea) dan difiksasi. Jaringan yang diperbaiki setelah didinginkan hingga suhu kamar.
didehidrasi dan dibersihkan masing-masing dengan etil Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2, piringan
mikroneedle yang tidak dilapisi (U-MN) hanya dilapisi pada
alkohol dan xilena, dan tertanam dalam parafn (Lilin parafn,
mp 53–58 °C [ASTM D87], Sigma-Aldrich, Seoul, Korea). ujungnya (Gambar 2a) dan piringan melingkar yang tidak
Setelah dipotong menggunakan mikrotom (RMC Products, dilapisi (UD) dilapisi pada permukaannya (Gambar 2b).
Tuc son, Arizona, USA) dan menempatkan irisan mukosa Sebelum pelapisan, patch U-MN dikenai proses UV/Ozon
bukal pada kaca objek, parafn dikeluarkan dalam oven pada untuk mengubah permukaan PLA hidrofobik menjadi
suhu 60 °C. Pewarnaan mukosa bukal yang diiris dilakukan permukaan jarum mikro hidrofilik untuk meningkatkan
menggunakan Hematoxyline (larutan Hematoxylin, Sigma- proses pembasahan larutan pelapis. Karboksimetil selulosa
Aldrich, Seoul, Korea) dan Eosin (larutan Eosin Y, 5% berat(CMC, Whawon, Gyeonggi do, Korea Selatan) dilarutkan
dalam air, Sigma-Aldrich, Seoul, Korea). Akhirnya, mukosa dalam air suling untuk menyiapkan larutan berair 10% (b/b),
dan kemudian larutan OVA (albumin dari putih telur ayam,
bukal yang ternoda diamati di bawah mikroskop optik (Eclipse
80i, Nikon, Tokyo, Jepang) [24-27]. Sigma Aldrich, Seoul, Korea ) dan CT (dari Vibrio cholera,
Sigma Aldrich, Seoul, Korea) ditambahkan dengan larutan
Persiapan tambalan CMC untuk menyiapkan larutan pelapis dengan perbandingan
2:4:5:89 (OVA:CT:CMC:air, b/b ) untuk U-MN. Larutan
Struktur induk dari dua jenis tambalan (micronee dle array pelapis selanjutnya diencerkan 400 kali untuk UD. Untuk
dan disk melingkar) diproduksi menggunakan penggilingan menyiapkan piringan microneedle berlapis (C-MN), larutan
mikro, dan replikanya dibentuk dengan cetakan mikro. pelapis dimasukkan ke dalam sumur pelapis celup 300 ÿm,
Susunan microneedle yang direplikasi (array microneedle dan jarum mikro yang tidak dilapisi (U-MN) direndam dalam
tidak dilapisi, U-MN) berisi 13 microneedle pada dasar larutan pelapis pada suhu 10 °C selama 1 detik. Untuk
melingkar dengan diameter 3,5 mm, dan jarak antar melapisi 1 ÿg OVA, jumlah OVA yang dilapisi disesuaikan
microneedle adalah 716 ÿm. Struktur cakram melingkar melalui konsentrasi OVA dan jumlah pelapis. Konsentrasi
CMC
gemuk dengan diameter 3,5 mm juga dibuat dengan cetakan mikro. dalam semua larutan pelapis ditetapkan sebesar 8% karena
Terperinci
Machine Translated by Google

Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2021) 11:1390–1400 1393

Tabel 1 Geometri piringan mikroneedle

tidak dilapisi (U-MN) dan
piringan lemak melingkar tidak dilapisi
(UD)

konsentrasi CMC menentukan viskositas larutan pelapis.
Delapan belas kondisi pelapisan berbeda dilakukan (6
konsentrasi OVA berbeda [1, 1,5, 2, 2,5, 3, dan 3,5% (b/b)]
× 3 jumlah pelapis berbeda [2, 3, dan 4]). Jumlah OVA yang
dilapisi diukur dan dikonfirmasi dengan metode Bradford.
Ketika CT ditambahkan, jumlah OVA menjadi dua kali lipat,
dan pelapisan larutan dengan CT dan OVA dilakukan sesuai
dengan kondisi pelapisan yang dipilih melalui percobaan
kondisi pelapisan OVA. Sampel dikeringkan pada suhu 10
°C selama 20 menit [28, 29]. Disk melingkar berlapis dibuat
dengan metode pelapisan tetes. Dua puluh mikroliter larutan
pelapis yang mengandung 1 ÿg OVA, 2 ÿg CT, dan 6 ÿg
CMC disiapkan untuk UD dan dikeringkan pada suhu 25 °
C selama 30 menit.
Jumlah OVA yang dilapisi diukur dengan Bradford
pengujian (Reagen Bradford, Sigma-Aldrich, Seoul, Korea).
Pelepasan OVA dari C-OVA-MN dilakukan berdasarkan
jumlah total OVA dalam C-MN yang ditentukan oleh
pengukuran protein Bradford. Morfologi patch microneedle
dan patch disk diamati dengan mikroskop elektron
pemindaian (SEM, JSM-7001F, JEOL Ltd, Tokyo, Jepang).
Untuk mengamati distribusi antigen pada microneedles
dan kulit setelah pemberian, OVA/
FITC (Thermo Fisher Scientifc, Seoul, Korea) digunakan
sebagai pengganti OVA. Rumusan dan identitasnya sama
proses pembuatan cal digunakan untuk menyiapkan OVA/
Tambalan berlapis FITC. Distribusi OVA/FITC diamati
dengan mikroskop fluoresensi (Eclipse 80i, Nikon, Tokyo,
Jepang).

Gambar 2 Skema proses

pelapisan. (a) Lapisan celup
untuk patch microneedle yang
tidak dilapisi (U-MN) dan (b)
lapisan jatuh untuk patch disk yang tidak dilapisi (UD)
Machine Translated by Google
1394
Kinerja tusukan bukal dari microneedles
berlapis
Microneedles dilapisi dengan formulasi con
pewarnaan tripan biru dan CMC menggunakan metode pelapisan celup
yang sama. Microneedles berlapis biru tripan ditempatkan pada mukosa
bukal babi (CRONEX, Seoul, Korea) dan ditekan dengan kekuatan 5 kg
selama 10 detik. Microneedles juga dilekatkan pada mukosa menggunakan
pita hidrokoloid dan dilepas setelah 5 menit. Jumlah titik biru yang
dihasilkan pada mukosa bukal babi dihitung menggunakan mikroskop
optik (Sv-35,× 40, Sometech, Seoul, Korea), dan kinerja tusukan mukosa
dievaluasi dengan membandingkan jumlah titik biru dengan jumlah jarum
mikro
[30, 31]. Setelah pemberian, kulit babi dibekukan dengan nitrogen cair
dan dipotong menggunakan mikrotom (MR2, RMC Boeckeler, Tucson
AZ) untuk mendapatkan potongan penampang.
Distribusi trypan blue pada mukosa diamati dengan mikroskop optik
(Leica, M125, Jepang).
Sifat penghantaran obat dari patch in vitro
Enam C-OVA/FITC-MN disiapkan, dan dua C-OVA/
FITC-MN dimasukkan ke dalam botol dengan 200 ÿl Phosphate-buf ered
saline (PBS) pada suhu 37 ° C. Larutan berukuran 150 ÿl diambil pada
30 detik, 1 menit, 3 menit, 5 menit, 7 menit, 10 menit, 15 menit, dan 20
menit, dan jumlah PBS yang sama ditambahkan untuk mempertahankan
volume larutan pada 1,7 ml. Intensitas fluoresensi larutan diukur pada
485 nm/535 nm dengan spektrofotometer UV-visibel (Pembaca Pelat
Multi-label, PerkinElmer, Boston, AS). Nilai yang diukur dibandingkan
dengan nilai kalibrasi untuk menghitung jumlah fluoresensi yang terelusi
dalam jangka waktu [32, 33].
Untuk mengamati distribusi OVA pada mukosa setelah pemberian
patch, disiapkan C-OVA/FITC-MN dan C-OVA/FITC-D. C-OVA/FITC-MN
dimasukkan ke dalam mukosa bukal babi dengan kekuatan 50 N,
kemudian distribusi fluoresensi diamati pada panjang gelombang emisi
488 nm dan panjang gelombang eksitasi 509 nm dengan menggunakan
mikroskop confocal (ECLIPSE TE2000- E, Nikon, Osaka, Jepang) pada
waktu penyisipan 0, 3, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, dan 60 menit [ 34].
Distribusi fluoresensi oleh C-OVA/FITC-D diamati dengan metode yang
sama. Perubahan intensitas fluoresensi diamati pada dua wilayah: (I) di
dalam mukosa tempat ujung C-OVA/FITC-MN berada dan (II) 100 ÿm di
bawah permukaan mukosa tempat C-OVA/
FITC-D melakukan kontak. Intensitas pendaran ujung pada 0 menit diatur
ke 100% untuk wilayah I dan dasar pada 0 menit ditetapkan ke 100%
untuk wilayah II. Penurunan intensitas pendaran setiap waktu dinyatakan
dalam persentase. Analisis dilakukan dengan menggunakan analisis
gambar
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2021) 11:1390–1400
perangkat lunak (Gambar J, Institut Kesehatan Nasional, Bethesda, MD,
USA) [35]. Perubahan distribusi fluoresensi di atas ambang batas tertentu
diamati dan ditampilkan dengan menskalakan nilainya seiring waktu.
Gambar disetel ke nilai minimum yang sama. Perubahan profil intensitas
piksel gambar digambarkan dalam arah horizontal dan vertikal dengan
menggunakan Gambar J.
Studi vaksinasi in vivo dari tiga patch
dan bahan pembantu toksin kolera
Tikus BALB/c betina (Orient Bio, Seongnam, Korea), yang berumur 7–8
minggu, dipelihara dalam kondisi bebas patogen tertentu di fasilitas
percobaan di Sekolah Kedokteran Universitas Yonsei, di mana mereka
menerima makanan dan air yang disterilkan ad libitum . Semua percobaan
hewan yang dijelaskan telah disetujui oleh Komite Perawatan dan
Penggunaan Hewan Institusional dari Fakultas Kedokteran Universitas
Yonsei (IACUC #2016–0198, Seoul, Korea).
Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 2, patch dibagi menjadi dua
kelompok besar tergantung pada lokasi formulasinya: (1) OVA hanya
dilapisi pada ujung microneedle dan (2)
OVA dilapisi pada dasar piringan melingkar. Setiap kelompok patch
dibagi lagi menjadi tiga kelompok sesuai dengan komposisi formulasinya:
(1) OVA dan CMC; (2)
OVA, bahan pembantu CT, dan CMC; dan (3) CMC saja. Oleh karena
itu, uji hewan dilakukan dengan enam kelompok sampel (kombinasi
lokasi dan komposisi ditunjukkan pada Tabel 2). Secara spesifik, jumlah
antigen OVA yang digunakan adalah 1 ÿg, dan jumlah bahan pembantu
CT adalah 2 ÿg. Masing-masing kelompok diaplikasikan pada daerah
bukal mulut tikus menggunakan forsep dengan anestesi, dan tambalan
difiksasi dengan klem selama 20 menit. Setiap kelompok tikus divaksinasi
dua kali dengan interval 2 minggu.
Serum dikumpulkan untuk ELISA pada 2 minggu setelah minggu terakhir
imunisasi. Titer antibodi spesifik antigen ditentukan dengan ELISA.
Secara singkat, pelat 96 sumur dilapisi dengan 2 ÿg/ml OVA dalam PBS
dan diinkubasi semalaman pada suhu 4 °C. Setelah
Tabel 2 Informasi tentang patch
Tambalan Lokasi Perumusan
formulasi
Tip Dasar CMC OVA CT
C-OVA-MN (1 ÿg OVA) +ÿ+ +ÿ
C-OVA/CT-MN (1 ÿg OVA/2 ÿg CT) + ++
C-MN + ÿ-
C-OVA-D (1 ÿg OVA) ÿ++ +ÿ
C-OVA/CT-D (1 ÿg OVA/2 ÿg CT) + ++
CD + ÿ-
Machine Translated by Google
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2021) 11:1390–1400
langkah pemblokiran, pengenceran serial koleksi serum dan
sekresi mukosa ditambahkan dalam rangkap dua dan pelat
diinkubasi selama 2 jam pada suhu 37 ° C. Peroksidase lobak (HRP)- Geometri
Abs anti-IgG kambing terkonjugasi (Southern Biotech, Birming
ham, AL, USA) ditambahkan ke setiap sumur pada suhu 37 ° C.
Untuk pengembangan warna ditambahkan larutan substrat
tetrametil benzidin (TMB) dan dihentikan dengan menambahkan
2 N H2SO4. Perkembangan warna diukur pada 450 nm dengan
microplate reader (BioTek, Winooski, VT, USA). Titer titik akhir
dinyatakan sebagai log2 timbal balik dari pengenceran terakhir,
memberikan kerapatan optik 0,1 lebih besar dari latar belakang pada 450
Untuk mendeteksi respons imun yang diperantarai sel, uji
tempat penyerap imun terkait-enzim (ELISPOT) (Mabtech,
Cincinnati, OH, USA) dilakukan sesuai dengan instruksi pabrik
untuk mengukur sel-sel yang mensekresi IFN-ÿ dalam limpa tikus
yang diimunisasi . Pelat 96-sumur yang telah dilapisi sebelumnya
diblokir dengan RPMI 1640 yang ditambah dengan 10% serum
janin sapi, dan 5 × 10 sel dari masing-masing kelompok dilapisi
dan distimulasi dengan peptida (OVA257-264, OVA323-339)
selama 24 jam pada suhu 37 ° C dalam inkubator CO2 5%. Untuk
pengembangan warna, substrat peroksidase (TMB) diadopsi,
dan sel-sel yang mensekresi IFN-ÿ dihitung dan divisualisasikan
menggunakan pembaca ELISPOT (Cellular Technology Lim
ited, Cleveland, OH, USA).
Metode statistik
Rata-rata aritmatika dan kesalahan standar rata-rata adalah
dihitung. Uji t Student dua sisi (ÿ = 0,05) dilakukan ketika
membandingkan dua kondisi berbeda, dan ANOVA digunakan
ketika membandingkan beberapa kelompok. Nilai p <0,05
dianggap signifikan secara statistik.
Gambar 3 (a) Gambar
mukosa babi yang diwarnai
dengan H&E. Epitel EP, lapisan papiler PP.
Garis putus-putus putih
menunjukkan penyisipan
dengan jarum mikro setinggi
300 ÿm. Sel Langerhans (LC)
berada di EP dan sel dendritik
(DC), dan makrofag terletak di PP
(36). (b) Gambar SEM dari patch
microneedle berlapis OVA (C-
OVA MN): (b-1) tampak atas dan
(b-2) tampak lateral. (c)
Gambar SEM dari patch
disk berlapis OVA (C-OVA-D, tampilan atas)
1395
hasil dan Diskusi
tambalan
Seperti ditunjukkan pada Gambar 3 (a), ketebalan epitel mukosa
bukal babi yang diamati (659 µm) mendekati ketebalan epitel
mukosa bukal manusia [14]. Epitel bukal memiliki sistem
kekebalan yang mencakup subset sel Langerhans (LC) dan sel
dendritik (DC), dan pembuluh darah terletak di bawah epitel
mukosa bukal. LC dan DC berperan dalam mengenali antigen
dan nm.
mempresentasikan antigen ke sel T CD8+, CD4+ atau sel B
melalui MHC kelas I dan II [6, 37]. Susunan microneedle memiliki
13 microneedle dalam disk melingkar berdiameter 3,5 mm, yang
memfasilitasi akses patch di dalam mulut mouse. Untuk aplikasi
klinis, ukuran susunan yang lebih besar (diameter lebih dari 1
cm) dimungkinkan [18]. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar
3 (b), untuk C-OVA-MN, tinggi ujung adalah 300 ÿm dan tinggi
langkah adalah 100 ÿm, dengan tinggi total 400 ÿm.
Ketinggian 400 ÿm sesuai untuk menargetkan epitel bukal
manusia, yang tebalnya 500-800 ÿm [12].
Dalam kasus U-MN, langkah diatur ke ketinggian 100 ÿm
untuk mencegah larutan pelapis menyentuh alas selama proses
pelapisan celup. Jika ketinggian anak tangga lebih rendah dari
100 ÿm, maka akan terlapisi dengan formulasi karena gaya
kapiler. Dengan menambahkan 100-
langkah ÿm, formulasi yang mengandung antigen terletak hanya
pada seluruh ujung microneedles. Berbeda dengan microneedles
kulit konvensional, yang hanya dilapisi pada bagian atas ujung
microneedle, formulasinya dilapisi pada seluruh ujung
microneedles untuk mengantarkan antigen ke epitel dari
permukaan mukosa. Karena ketebalan epitel bervariasi
tergantung pada jenis hewan yang digunakan dalam percobaan,
pelapisan seluruh ujungnya menjamin kelengkapan vaksin.
Machine Translated by Google
1396
Gambar 4 Gambar fluoresensi geometri patch microneedle setelah dilapisi
dengan OVA berlabel FITC (C-OVA/FITC-MN): (a) tampak ujung dan (b)
tampak samping
pengiriman ke epitel terlepas dari ketebalannya. Untuk mendapatkan
1 ÿg OVA pada patch disk microneedle, konsentrasi akhir OVA
dalam larutan pelapis akhir adalah 1,5% (b/b) dan pelapisan
diterapkan tiga kali.
Untuk mengamati secara visual distribusi OVA yang dilapisi, dua
jenis tambalan dilapisi menggunakan OVA/FITC, bukan OVA. Seperti
yang ditunjukkan pada Gambar 4, hanya permukaan ujung jarum
mikro yang dilapisi untuk C-OVA/FITC-MN, sedangkan OVA/FITC
dilapisi pada permukaan lemak cakram melingkar.
tambalan tanpa jarum mikro (C-OVA/FITC-D).
Sifat penghantaran obat dari patch
Menerapkan susunan yang terdiri dari 13 jarum mikro ke mukosa
bukal babi menghasilkan 13 titik biru, menunjukkan bahwa semua
jarum mikro dimasukkan ke dalam mukosa dan formulasi yang
dilapisi berhasil dilarutkan dalam mukosa. Gambar 5 a menunjukkan
distribusi awal Trypan blue oleh microneedles. Pemberian
microneedle memungkinkan tripan biru didistribusikan secara merata
di mukosa dalam 250ÿÿ dari permukaan mukosa (Gbr. 5b).
Tingkat pelepasan OVA/FITC dari microneedles dari waktu ke
waktu ditunjukkan pada Gambar 5c. Semua OVA/FITC dulu
Gambar 5 (a) Kinerja penusukan permukaan mukosa: Titik-titik tripan biru
pada mukosa menunjukkan bahwa formulasi pelapis berhasil sepenuhnya
dihasilkan oleh jarum mikro (batang skala: 1 mm). (b) Penampang mukosa
merupakan gambaran bagian tengah yang dipotong secara vertikal
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2021) 11:1390–1400
dilepaskan dalam waktu sekitar 1 menit karena CMC, eksipien
utama larutan pelapis, memiliki kelarutan dalam air yang tinggi.
Namun hasil ini tidak menunjukkan bahwa antigen yang dilapisi pada
microneedles dapat dimasukkan ke dalam mukosa bukal dalam
waktu 1 menit karena formulasi pelapis tersebut larut lebih lambat
secara in vivo dibandingkan dengan in vitro. Penelitian sebelumnya
menunjukkan bahwa ketika diberikan secara sublingual selama
sekitar 60 menit, hanya sebagian vaksin yang diberikan, dan jumlah
pasti yang diberikan tidak diketahui [9]. Penelitian lain melaporkan
bahwa waktu perlekatan 20 menit atau lebih diperlukan untuk
memberikan dosis obat yang tepat ke dalam mukosa mulut
menggunakan sistem tempelan [18]. Kami mengantisipasi bahwa
pemberian vaksin mukosa dengan jarum mikro akan memungkinkan
pengiriman antigen dalam jumlah yang tepat secara cepat ke
lingkungan yang kaya air dibandingkan dengan pengiriman melalui sistem tempel ko
Distribusi OVA/FITC in vitro pada mukosa babi
Menggunakan patch microneedle berlapis OVA/FITC (C-OVA/
FITC-MN) dan patch disk (C-OVA/FITC-D), kami mengamati
perubahan distribusi fluoresensi pada mukosa babi dari waktu ke
waktu. 6a, pada 20 menit setelah pemberian patch microneedle ke
mukosa babi, OVA/FITC difusi ke dalam mukosa. Namun, dalam
kasus disk patch Gambar 6b, bahkan jika tidak ada lapisan keratin
pada mukosa bukal, difusi OVA/FITC melalui permukaan mukosa
terjadi secara perlahan. Kecepatan penyampaian OVA/FITC dapat
bervariasi tergantung pada kadar air jaringan mukosa.
Intensitas fluoresensi di tempat pemberian microneedles menurun
secara eksponensial seiring waktu karena difusi OVA/FITC ke
jaringan sekitarnya (Gambar 6c). Di sisi lain, jumlah OVA/FITC yang
dikirimkan oleh patch disk pada 100 ÿm di bawah permukaan
mukosa meningkat secara linier seiring waktu. Namun, kecepatan
pengiriman patch disk sangat lambat dibandingkan dengan patch
disk
dari deretan titik. Kedalaman penetrasi yang diukur adalah sekitar 250 ÿm
(skala bar: 100 ÿm). (c) Laju disolusi OVA/FITC dalam PBS, menunjukkan
pelepasan lengkap OVA/FITC dalam waktu 3 menit
Machine Translated by Google
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2021) 11:1390–1400
Gambar 6 Setelah patch microneedle dan patch disk dilapisi dengan OVA/
FITC dilanjutkan dengan pemberian ke dalam mukosa bukal babi, perubahan
intensitas fluoresensi pada mukosa diamati dengan mikroskop confocal (a)
pada lokasi administrasi admin microneedle dan (b) pada permukaan
mukosa pada 0 menit dan 20 menit.
Garis putih melambangkan batas kontak antara dasar tempelan dan lapisan
mukosa. Garis putus-putus merah mewakili area di mana intensitas pendaran
diukur. (c) Setelah adminis
microneedle, yang merupakan pola pelepasan bolus. Oleh karena itu,
untuk mengantarkan antigen dalam jumlah yang efektif melalui
pengiriman transmukosa, patch disk harus dipasang selama beberapa jam.permukaan lendir bukal [39], dan oleh karena itu, studi tentang sifat
Hasil ini menunjukkan bahwa jarum mikro lebih efektif untuk
memberikan vaksin secara cepat dan tepat ke lingkungan yang kaya
air seperti rongga bukal [35]. Profil fluoresensi dengan intensitas
minimum ambang batas tertentu ditunjukkan pada Gambar 6d.
Wilayah dengan intensitas ambang batas menyebar ke samping dan
menurun seiring waktu pada kulit babi ex-vivo. Setelah formulasi
dilarutkan dengan fluoresensi, jumlah bahan fluoresen meningkat dari
ujung ke dasar dan jumlah fluoresensi yang lebih besar terdapat di
dekat permukaan mukosa. Bahkan jika intensitas fluoresensi
maksimum pada profil menurun seiring berjalannya waktu, wilayah
fluoresensi dengan intensitas fluoresensi minimum meluas.
Dalam kasus pemberian bukal, keberadaan air liur yang konstan
mencegah retensi formulasi dalam rongga mulut, sehingga waktu
kontak menjadi lebih singkat [38]. Dalam penelitian ini, formulasi
vaksin langsung diberikan ke dalam lapisan epitel mukosa dan basa
PLA bertindak sebagai lapisan pendukung yang menghambat
pencucian oleh air liur selama perlekatan. Juga, penambahan polimer
yang larut dalam air dalam formulasi pelapis
1397
Ketika menggunakan C-OVA/FITC-MN dan C-OVA/FITC-D pada mukosa
bukal babi, terjadi perubahan intensitas fluoresensi seiring berjalannya waktu
di tempat pemberian tempelan dan permukaan mukosa. Garis putus-putus
berwarna biru menunjukkan 20 menit, yang merupakan waktu untuk
memasang patch pada percobaan in vivo. (d) Perubahan profil fluoresensi
dengan intensitas minimum di atas ambang batas tertentu pada mukosa
babi pada menit ke-0, 5, 15, 30, dan 60
dapat bekerja sebagai penghambat enzim yang kuat [39]. Sulit bagi
zat dengan berat molekul lebih dari 700 Da untuk menembus
farmakokinetik zat dalam mukosa bukal dengan berat molekul tinggi
tidak mencukupi.
Namun, dalam kasus penelitian penggunaan jarum mikro untuk
memasukkan albumin serum sapi ke dalam kulit, sinyal fluoresensi
19% tetap pada 72 jam [40]. Dengan demikian, OVA dapat dianggap
tinggal di mukosa untuk waktu yang sama atau lebih pendek
dibandingkan di lapisan kulit. Ketika microneedles menembus kulit,
pemulihan membutuhkan waktu sekitar 2-40 jam, tergantung pada
apakah kulit tersumbat atau tidak [41]. Dalam beberapa kasus,
mukosa pulih lebih cepat dibandingkan kulit karena vaskularisasi aktif
[42], sehingga diharapkan pemulihan lebih cepat.
Studi vaksinasi in vivo
Uji coba pada hewan dilakukan pada tikus menggunakan rangkaian
jarum mikro berdiameter 3,5 mm. Sistem microneedle (C-OVA MN)
cocok untuk imunisasi mukosa bukal pada hewan.
Karena patch disk dipasang selama 20 menit, patch micronee dle
diterapkan selama 20 menit dengan cara yang sama. Waktu adhesi
yang lebih pendek, kurang dari 5 menit, dimungkinkan untuk C-OVA-MN.
Machine Translated by Google

1398 Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2021) 11:1390–1400

Gambar 7 (a) Titer antibodi (A) 25 (B) 25

berdasarkan patch disk dengan OVA atau OVA/ hanya OVA saja

CT (lingkaran C-OVA-D, persegi C- 20 OVA+CT 20

OVA/CT-D, segitiga CD) dan (b) titer
hanya MN
antibodi dengan patch 15 15
Titer Titer

microneedle dengan OVA atau OVA/CT.

10 10
(lingkaran C-OVA-MN, persegi C-OVA/
CT-MN, segitiga C-MN). (c) Uji ELISPOT
5 5
mengukur sekresi IFN-ÿ tikus dengan
sel efektor yang distimulasi dengan 0 0
penambahan CT pada micronee dle
patch. (lingkaran C-OVA-MN, persegi C- serum IgG serum IgG1 serum IgG serum IgG1
serum IgG2a serum IgG2a
OVA/CT-MN, segitiga C-MN)

Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 7a, adhesi mukosa C-OVA D atau
C-OVA/CT-D selama 20 menit tidak menginduksi respon imun mukosa yang
efektif. Pengiriman OVA menggunakan respon imun spesifik antigen yang
diinduksi C-OVA MN dibandingkan dengan C-OVA-D (Gambar 7b), dan hasil
ini menunjukkan bahwa patch microneedle adalah metode pengiriman yang
efisien untuk vaksinasi bukal. Perekatan patch disk pada permukaan mukosa
selama 20 menit tidak menghasilkan cukup anti gen dengan berat molekul
tinggi untuk menginduksi imunogenisitas.
antigen MHC kelas II mengantarkan antigen ke sel T CD4+ atau sel B untuk
memicu respons imun seluler atau humoral. Diperkirakan bahwa sel T CD8+
dan CD4+ yang distimulasi oleh MHC kelas I dan II akan diaktifkan dan
melepaskan sitokin, dan sel yang mensekresi gamma IFN diamati menggunakan
uji ELIS POT (Gambar 7b). Terlihat dari hasil ELISPOT, vaksinasi bukal
dengan C-MN-coated OVA plus CT (C-OVA/CT-MN) dapat menginduksi respon
imun seluler yang lebih besar dibandingkan dengan respon yang dihasilkan
oleh kelompok OVA only (C-OVA). -M N).

Kemanjuran imunologi CT yang digunakan sebagai bahan pembantu diamati.

Peningkatan titer antibodi diinduksi ketika CT ditambahkan ke OVA. Secara
khusus, peningkatan IgG2a dengan penambahan CT ditemukan karena CT
menginduksi imunitas seluler Th1. Oleh karena itu, CT merupakan adjuvan
yang tepat untuk vaksinasi dimana imunitas seluler penting.
Untuk lebih memvalidasi C-OVA-MN, kami menguji apakah injeksi bukal
dengan C-OVA-MN dapat menginduksi respon imun yang dimediasi sel pada
tikus terhadap epitop terbatas MHC kelas I dan kelas II yang disajikan
menggunakan OVA257-264
dan OVA323-339, secara representatif. Setelah imunisasi dengan C-OVA-MN,
tikus dianalisis untuk induksi respon imun seluler spesifik OVA melalui sekresi
interferon-gamma dengan uji ELISPOT (Gambar 7c). Fragmen tein OVA
dikenali oleh MHC kelas I, dan OVA merupakan fragmen 257–264 adalah seorang profesional
protein yang dikenali oleh MHC kelas II. Sel yang diberi label antigen 323–339
MHC kelas I menstimulasi sel T CD8+ untuk menginduksi imunitas seluler, dan
sel yang diberi label dengan antigen MHC kelas I merangsang sel T CD8+
untuk menginduksi imunitas seluler, dan sel yang diberi label dengan antigen MHC kelas I
Kesimpulan
OVA dikirim ke mukosa bukal menggunakan dua sistem tempelan yang berbeda
—microneedle dan disk—dan respons imunologisnya diamati. Efek imunologis
dari bahan pembantu CT juga diamati ketika vaksin dimasukkan ke dalam
epitel menggunakan jarum mikro.
Patch microneedle sepanjang 400 ÿm mampu dengan cepat mengantarkan
antigen ke mukosa bukal. Microneedles menunjukkan pengiriman antigen
secara bolus, dan dalam kasus pengiriman transmukosa dari basis, antigen
dikirimkan secara perlahan dalam jangka waktu yang lama. Antigen yang
dimasukkan ke dalam rongga mulut melalui microneedle patch berhasil
menginduksi imunitas, sedangkan antibodi tidak dapat dibentuk dengan
menempelkan disk patch ke permukaan mukosa.
Machine Translated by Google

Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2021) 11:1390–1400 1399

selama 20 menit. Ketika bahan pembantu CT digunakan Ketersediaan data Data tersedia berdasarkan permintaan dari penulis.

bersama dengan OVA, respons imun seluler dan sistemik

diinduksi, yang menunjukkan peningkatan imunitas.
Vaksinasi bukal menggunakan jarum mikro merupakan rute
pemberian vaksin mukosa yang ideal. Namun, untuk
memfasilitasi produksi komersial dari lebih banyak vaksin
mukosa, perlu untuk memahami lingkungan jaringan mukosa
dan melakukan lebih banyak upaya dalam penelitian tentang
berbagai formulasi yang dapat memberikan pengiriman vaksin
yang aman ke lokasi tertentu dan menghindari toleransi imun
terhadap mukosa. tisu. Ada juga kebutuhan untuk
mengembangkan bahan pembantu yang dioptimalkan untuk
jarum mikro guna menginduksi respons imun yang efisien terhadap berbagai
Deklarasi
Persetujuan etis Tikus BALB/c betina dipelihara dalam kondisi bebas patogen
tertentu di fasilitas percobaan di Sekolah Kedokteran Universitas Yonsei, di mana
mereka menerima makanan dan air yang disterilkan secara ad libitum. Semua
percobaan hewan yang dijelaskan telah disetujui oleh Komite Perawatan dan
Penggunaan Hewan Institusional dari Fakultas Kedokteran Universitas Yonsei
(IACUC #2016-0198, Seoul, Korea).
Persetujuan untuk berpartisipasi Kami secara sukarela setuju untuk berpartisipasi
dalam penelitian ini.
Persetujuan untuk Publikasi Penulis mengalihkan kepada Springer hak publikasi
penyakit.
non-eksklusif dan jaminannya.

Ucapan Terima Kasih Pekerjaan ini didukung oleh Program Pengembangan

Teknologi Strategis Industri (10067809: Pengembangan formulasi vaksin dan Benturan Kepentingan PJH merupakan penemu hak paten yang telah dilisensikan
microneedle vaksin yang nyaman bagi pasien), yang didanai oleh Kementerian kepada perusahaan yang mengembangkan produk berbasis microneedle dan merupakan
Perdagangan, Industri & Energi (MOTIE, Korea Selatan), dan oleh Kementerian pemegang saham pada perusahaan yang mengembangkan produk berbasis microneedle.
Kesehatan Korea. Proyek Litbang Teknologi melalui Korea Health Industry
Development Institute (KHIDI), yang didanai oleh Kementerian Kesehatan &
Kesejahteraan, Republik Korea (HI15C2971, HI18C0590).

Kontribusi penulis Yu-Jeong Oh: Sumber Daya, Analisis formal, Penyediaan

Referensi
bahan studi, reagen, bahan, pasien, sampel laboratorium, hewan, instrumentasi,
sumber daya komputasi, dan alat analisis, Penerapan teknik statistik, matematika,
komputasi, atau formal lainnya untuk menganalisis atau mensintesis data penelitian.
Hye-Ran Cha: Sumber Daya, Analisis formal, Penyediaan bahan studi, reagen,
bahan, pasien, sampel laboratorium, hewan, instrumentasi, sumber daya komputasi,
dan alat analisis, Penerapan teknik statistik, matematika, komputasi, atau formal
lainnya untuk menganalisis atau mensintesis data penelitian. Su Jin Hwang: Sumber
Daya, Validasi, Penyediaan bahan kajian, reagen, bahan, pasien, sampel
laboratorium, hewan, dan instrumentasi, Verifikasi, apakah sebagai bagian dari
reproduksibilitas hasil/percobaan. Dae-Sung Kim: Sumber Daya, Validasi,
Penyediaan bahan kajian, reagen, bahan, pasien, sampel laboratorium, hewan, dan
instrumentasi, Verifikasi, baik sebagai bagian dari reproduksibilitas hasil/percobaan.
Yu-Ji Choi: Sumber Daya, Validasi, Penyediaan bahan kajian, reagen, bahan,
pasien, sampel laboratorium, hewan, dan instrumentasi, Verifikasi, apakah sebagai
bagian dari reproduksibilitas hasil/percobaan.
1. Xing L, Zhou TJ, Fan YT, He YJ, Pang T, Cho KH dkk. Imunisasi mukosa yang
efisien dengan sistem pemberian vaksin polimer mukoadhesif dan ph-sensitif.
Makromol Res. 2019;27(3):215–26.
2. Dewangan HK. Penerapan rasional nanoadjuvan untuk sistem pengiriman
vaksin mukosa. J Metode Imunol. 2020:112791.
3. Sharma R, Agrawal U, Mody N, Vyas SP. Pendekatan berbasis nanoteknologi
polimer dalam pemberian vaksin mukosa: tantangan dan peluang. Adv.
Bioteknologi. 2015;33(1):64–79.
4. Shakya AK, Chowdhury MY, Tao W, Gill HS. Pemberian vaksin mukosa:
keadaan saat ini dan perspektif pediatrik. J Rilis Kontrol. 2016;240:394–413.
5. Ogra PL, Faden H, Welliver RC. Strategi vaksinasi bertujuan untuk respon
imun mukosa. Clin Mikrobiol Rev. 2001;14(2):430–45.

6. Creighton RL, Woodrow KA. Pengiriman vaksin yang dimediasi mikroneedle ke

Yun-Seo Kim: Sumber Daya, Validasi, Penyediaan bahan studi, reagen, bahan,
pasien, sampel laboratorium, hewan, dan instrumen, Verifikasi, apakah sebagai
bagian dari reproduksibilitas hasil/
eksperimen. Yu-Ra Shin: Sumber Daya, Validasi, Penyediaan bahan kajian, reagen,
bahan, pasien, sampel laboratorium, hewan, dan instrumentasi, Verifkasi, baik
sebagai bagian dari reproduksi hasil/percobaan. Thuy Trang Nguyen: Sumber
Daya, Penyediaan bahan studi, reagen, bahan, pasien, sampel laboratorium, hewan,
dan instrumentasi. Seong-O Choi: Sumber Daya, Penyediaan bahan studi, reagen,
bahan, pasien, sampel laboratorium, hewan, dan instrumentasi. Jae Myun Lee:
Konseptualisasi, penulisan, Ide; perumusan atau evolusi tujuan dan sasaran
penelitian yang menyeluruh.
mukosa mulut. Materi Kesehatan Adv. 2019;8(4):1801180.
7. Singh B, Maharjan S, Sindurakar P, Cho KH, Choi YJ, Cho CS.
Imunisasi tanpa jarum suntik dengan sistem berbasis kitosan. Int J Mol Sci.
2018;19(11):3639.
8. Guillot AJ, Cordeiro AS, Donnelly RF, Montesinos MC, Garrigues TM, Melero A.
Pengiriman berbasis Microneedle: ikhtisar aplikasi dan tren saat ini. Farmasi.
2020;12(6):569.
9. Kraan H, Vrieling H, Czerkinsky C, Jiskoot W, Kersten G, Amorij JP. Pemberian
vaksin bukal dan sublingual. J Rilis Kontrol. 2014;190:580–92.
10. Squier C. Permeabilitas mukosa mulut. Crit Rev Oral Biol Med. 1991;2(1):13–32.

11. Ma Y, Tao W, Krebs SJ, Sutton WF, Haigwood NL, Gill HS.
Pemberian vaksin ke rongga mulut menggunakan mikroneedle berlapis
Pendanaan Pekerjaan ini didukung oleh Program Pengembangan Teknologi
menginduksi imunitas sistemik dan mukosa. Res Farmasi. 2014;31(9):2393–
Strategis Industri (10067809: Pengembangan vaksin untuk formulasi dan vaksin
403.
yang nyaman bagi pasien), yang didanai oleh Kementerian Perdagangan, Industri
12. Shojaei AH. Mukosa bukal sebagai rute pemberian obat sistemik: tinjauan. J
dan Energi (MOTIE, Korea Selatan), dan oleh Korea Proyek Litbang Teknologi
Farmasi Ilmu Farmasi. 1998;1(1):15–30.
Kesehatan melalui Korea Health Industry Development Institute (KHIDI), yang
13. Jahan N, Archie SR, Shoyaib AA, Kabir N, Cheung K.
didanai oleh Kementerian Kesehatan dan Kesejahteraan, Republik Korea
Pendekatan terkini untuk pemberian vaksin dosis padat. Sains Farmasi.
(HI15C2971, HI18C0590).
2019;87(4):27.
Machine Translated by Google
1400
14. Di Stasio D, Lauritano D, Iquebal H, Romano A, Gentile E, Lucchese A.
Pengukuran ketebalan epitel mulut dengan tomografi koherensi optik.
Diagnostik. 2019;9(3):90.
15. Uddin MN, Allon A, Roni MA, Kouzi S. Gambaran umum dan potensi masa
depan dari lapisan bukal cepat larut sebagai sistem penghantaran obat
untuk vaksin. J Farmasi Ilmu Farmasi. 2019;22:388–406.
16. Kang NW, Kim S, Lee JY, Kim KT, Choi Y, Oh Y dkk. Microneedles untuk
pengiriman obat: kemajuan terkini dalam bahan dan geometri untuk studi
praklinis dan klinis. Pendapat Ahli Pengiriman Obat. 2020.
17. Nguyen TT, Oh Y, Kim Y, Shin Y, Baek SK, Park JH. Kemajuan dalam
microneedle array patch (MAP) untuk pengiriman vaksin. Imun Vaksin Hum.
2020:1–12.
18. Seon-Woo HS, Kim HJ, Roh JY, Park JH. Melarutkan sistem jarum mikro
untuk pengiriman triamcinolone acetonide ke mukosa mulut untuk mengobati
stomatitis aphthous. Makromol Res. 2019;27(3):282–9.
19. Li Z, Zhang L, Sun W, Ding Q, Hou Y, Xu Y. Archaeosomes dengan antigen
yang dienkapsulasi untuk pemberian vaksin oral. Vaksin. 2011;29(32):5260–
6.
20. Nordly P, Agger EM, Andersen P, Nielsen HM, Foged C. Penggabungan lipid
monofosforil agonis TLR4 ke dalam bilayer liposom DDA/TDB: karakterisasi
fisiko-kimia dan induksi respons sel T CD8+ in vivo . Res Farmasi.
2011;28(3):553–62.
21. Cupang DK, Aldwell FE, Beagley KW. Imunisasi oral dengan bahan pembantu
berbasis lipid baru melindungi terhadap infeksi Chlamydia genital. Vaksin.
2010;28(7):1668–72.
22. Wang T, Zhen Y, Ma X, Wei B, Li S, Wang N. Liposom kationik yang
digabungkan dengan mannosilasi dan lipid A yang membentuk susunan
jarum mikro sebagai vaksin HBV mukosa mulut yang efektif yang dapat
diterapkan dalam rantai suhu terkontrol. Koloid Surf B. 2015;126:520–30.
23. Çuburu N, Kweon MN, Hervouet C, Cha HR, Pang YYS, Holmgren J, dkk.
Imunisasi sublingual dengan antigen yang tidak bereplikasi menginduksi sel
pembentuk antibodi dan sel T sitotoksik pada mukosa saluran genital wanita
dan melindungi terhadap infeksi virus papiloma genital. J Imunol.
2009;183(12):7851–9.
24. Gómez-Segura L, Parra A, Calpena-Campmany AC, Gimeno Á, Gómez de
Aranda I, Boix-Montañes A. Permeasi ex vivo carprofen yang dikendarai
oleh nanopartikel PLGA melalui selaput lendir babi dan jaringan mata.
bahan nano. 2020;10(2):355.
25. Thirion-Delalande C, Gervais F, Fisch C, Cuine J, Baron-Bodo V, Moingeon
P, dkk. Analisis komparatif mukosa mulut dari hewan pengerat dan non-
hewan pengerat: penerapan evaluasi nonklinis produk imunoterapi
sublingual. PLoS SATU. 2017;12(9):e0183398.
26. Franz-Montan M, Serpe L, Martinelli CCM, da Silva CB, dos Santos CP,
Novaes PD, dkk. Evaluasi lokasi mukosa mulut babi yang berbeda sebagai
model penghalang permeabilitas untuk studi permeasi obat. Ilmu Farmasi
Eur J. 2016;81:52–9.
27. Kondo M, Yamato M, Takagi R, Murakami D, Namiki H, Okano T. Potensi
proliferasi sel epitel mukosa mulut yang berbeda secara signifikan antara
enam spesies hewan. J Biomed Mater Res A. 2014;102(6):1829–37.
Pengiriman Obat dan Penelitian Translasi (2021) 11:1390–1400
28. Jeong HR, Jun H, Cha HR, Lee JM, Park JH. Microneedles berlapis aman
dengan berkurangnya kejadian tusukan setelah pemberian. mesin mikro.
2020;11(8):710.
29. Shim DH, Nguyen TT, Park PG, Kim MJ, Park BW, Jeong HR, dkk.
Pengembangan jarum mikro berlapis A toksin botulinum untuk mengobati
hiperhidrosis palmar. Mol Farmasi. 2019.
30. Kochhar JS, Soon WJ, Choi J, Zou S, Kang L. Pengaruh geometri micronee
dle dan substrat pendukung pada penetrasi susunan microneedle ke dalam
kulit. J Farmasi Sci. 2013;102(11):4100–8.
31. Lee WJ, Han MR, Kim JS, Park JH. Sistem microneedle pelarutan yang dapat
disobek untuk mempersingkat waktu aplikasi. Pendapat Ahli Pengiriman
Obat. 2019;16(3):199–206.
32. Na YG, Kim M, Han M, Huh HW, Kim JS, Kim JC, dkk. Karakterisasi antigen
permukaan hepatitis B yang memuat mikroneedle berbasis asam polilaktat
dan profil keamanan kulitnya. Farmasi. 2020;12(6):531.
33. Park SC, Kim MJ, Baek SK, Park JH, Choi SO. Jarum mikro polimer berlapis
bentuk semprot untuk penghantaran obat bifasik terkontrol.
Polimer. 2019;11(2):369.
34. Park JH, Kim CB, Lee HJ, Roh JY, Lee JM, Kim HJ dkk. Pengembangan dan
studi klinis penggunaan radiasi infra merah untuk mempercepat laju
disolusi microneedle array patch (MAP).
Obat Memberikan Terjemahan Res. 2020:1–10.
35. Kim DS, Choi JT, Kim CB, Shin YR, Park PG, Kim H, dkk.
Microneedle array patch (MAP) terdiri dari nanopartikel asam hialu ronik
yang berikatan silang untuk kemampuan proses dan pelepasan berkelanjutan.
Res Farmasi. 2020;37(3):50.
36. Wu RQ, Zhang DF, Tu E, Chen QM, Chen W. Sistem kekebalan mukosa di
rongga mulut—sebuah orkestra keanekaragaman sel T.
Ilmu Lisan Int J. 2014;6(3):125–32.
37. Jeong HR, Bae JY, Park JH, Baek SK, Kim G, Park MS, dkk.
Studi praklinis vaksin bivalen influenza yang diberikan dengan susunan
jarum mikro dua kompartemen. J Rilis Kontrol. 2020.
38. Bhati R, Nagrajan RK. Tinjauan rinci tentang sistem penghantaran obat
mukosa mulut. Int J Pharm Sci Res. 2012;3(3):659.
39. Singh R, Singh S, Lillard JW. Teknologi masa lalu, sekarang, dan masa
depan untuk pengiriman protein terapeutik secara oral. J Farmasi Sci.
2008;97(7):2497–523.
40. Kirkby M, Hutton AR, Donnelly RF. Microneedle memediasi pengiriman
transdermal protein, peptida dan antibodi berdasarkan apeutik: status saat
ini dan pertimbangan masa depan. Res Farmasi. 2020;37:1–18.
41. Waghule T, Singhvi G, Dubey SK, Pandey MM, Gupta G, Singh M, dkk.
Microneedles: pendekatan cerdas dan peningkatan potensi sistem
penghantaran obat transdermal. Apoteker Biomed. 2019;109:1249–58.
42. Wong JW, Gallant-Behm C, Wiebe C, Mak K, Hart DA, Larjava H, dkk.
Penyembuhan luka pada mukosa mulut menghasilkan berkurangnya
pembentukan bekas luka dibandingkan dengan kulit: bukti dari model babi
Duroc merah dan manusia. Regen Perbaikan Luka. 2009;17(5):717–29.
Catatan Penerbit Springer Nature tetap netral sehubungan dengan klaim
yurisdiksi dalam peta yang diterbitkan dan afiliasi kelembagaan.