Resumen:

Los problemas de toxicidad sistmica y la resistencia a los frmacos en la quimioterapia del cncer instan al continuo descubrimiento de nuevos agentes anticancergenos. Exploramos la actividad especfica contra el cncer de metabolitos microbianos para encontrar nuevos compuestos de plomo.se evaluaron 394 extractos microbianos contra la actividad proliferativa contra 4 lneas celulares usando el ensayo MTT. De stas, 20 muestras mostraron diversos grados de citotoxicidad, pero especficamente a las lneas celulares de cncer, ya que el crecimiento de las clulas normales no fue significativamente inhibido por 1 mg / ml de cada extractos celulares. Los 4 extractos ms potente exhibieron fuerte inhibicin del crecimiento de cada tipo de clula de cncer fueron seleccionados para estudiar ms a fondo. Cambios morfolgicos de la clula, tales como contraccin de la clula, de perder el contacto con la superficie y burbujeando se observaron en todas las clulas con cncer tratados. Tinte de unin al ADN tincin demostrado condensacin nuclear y la fragmentacin. Divisin cromosmica detectado ADN como patrn en escala del DNA mediante electroforesis en gel incluyendo la activacin de la caspasa-3, la actividad celular, un sello distintivo de la apoptosis, se observaron en todas las lneas celulares del cncer tratado. Estas caractersticas sugirieron el mecanismo de muerte celular inducida por la apoptosis de los extractos. No hay inhibicin del crecimiento y caractersticas de apoptosis se detect en las clulas normales, incluso en alta concentracin utilizada sugiere la citotoxicidad selectiva y candidatos potenciales a desarrollar como agentes contra el cncer. Palabras clave: compuesto contra el cncer, la apoptosis, bioactivos, caspasa, producto microbiano. Apoptosis: deceso celular caracterizado por la ejecucin de un programa de muerte que tienen todas las clulas, y que esta codificado genticamente. Es un proceso innato y evolutivamente conservado, en el cual las clulas se inactivan, se desensamblan y degradan en su propia estructura y componentes de manera coordinada y caracterstica. Este proceso puede ser dividido en tres etapas: la primera es la fase de iniciacin donde la clula recibe el estmulo que la conduce a la muerte; la segunda o de ejecucin, se dan la mayor parte de los cambios morfolgicos y bioqumicos caractersticos de la apoptosis y por ltimo, en la tercera etapa o de eliminacin, los restos celulares son degradados por los macrfagos y clulas adyacentes. Bioactivos: son componentes que tienen una actividad biolgica dentro del organismo, que se traduce en beneficios para la salud. Se encuentran en alimentos tanto de origen animal como vegetal. Algunos nutrientes, como la vitamina C, son adems compuestos bioactivos; y todos ellos previenen trastornos de la salud. Caspasas: son molculas inductoras de apoptosis. Son protenas clave en la transduccin y ejecucin de la seal apoptotica inducida por una diversidad de estimulos. Se encuentran en la celula como precursores inactivos que necesitan ser cortados para iniciar su actividad. Existen dos grandes grupos de caspasas, las denominadas iniciadoras y las ejecutoras. Las caspasas iniciadoras son activasas por autoproteolisis cuando son translocadas a compartimientos especficos o mediante adaptadores/activadores. Las caspasas ajecutoras son activadas mediante el corte especifico

mediado por las caspasas iniciadoras. Estas proteasas son las encargadas de los cortes finalesde sustratos que provocan la morfologa tpica de la apoptosis.

Introduccin:
Los recursos naturales, tales como plantas, microorganismos, vertebrados e invertebrados, son una valiosa fuente de bioactivos. Un gran numero de medicamentos se han desarrollado en el ejercicio de la medicina a partir de productos naturales. Desde el descubrimiento y el xito en el tratamiento de la penicilina, los microorganismos han sido especialmente utilizados como una fuente privilegiada de agentes bioactivos de estructura diversa. La aplicacin teraputica de los metabolitos microbianos brind la oportunidad para el descubrimiento de los antibiticos (por ejemplo la penicilina, eritromicina, la estreptomicina, y anfotericina policetido), inmunosupresores en el transplante de agentes disminuyentes de colesterol (por ejemplo, lovastatina y mevastatina) y el agente contra el cncer (por ejemplo daunorrubicina, doxorrubicina, bleomicina y pentostanina). El cncer parece ser una causa importante de morbilidad y mortalidad y se ejecuta en las tres principales causas de muerte en el mundo, especialmente en los paices desarrollados. La quimioterapia es uno de tratamientos potentes para prolongar la vida del paciente. Casi el 60% de los medicamentos contra el cncer son de origen natural, tales como las plantas (como ejemplo irinotecn, vincristina, camptothecines) y microorganismos ( por ejemplo, doxorrubicina, dactinomicines, mitomicina y bleomicina). Sin embargo, muchos medicamentos quimioteraputicos actualmente se coloca en una situacin de efecto teraputico reducido debido al problema de la resistencia a los medicamentos. Por otra parte, los medicamentos quimioteraputicos tambin ejercen toxicidad para las clulas normales que a su vez provoca los desagradables efectos secundarios a los pacientes. Por estas razones, la investigacin y desarrollo de nuevas clases de agentes contra el cncer que presentan una toxicidad eficiente y selectiva en las clulas tumorales trae una mayor atencin. Entre las diversas fuentes de medicamentos contra el cncer, los microorganismos tienen mas ventajas respecto a los potenciales en la produccin de diversos compuestos y en la manipulacin de la produccin. En este estudio, el objetivo de encontrar una nueva fuente de baja o no toxico contra el cncer natural producida por microorganismos aislados de distintas fuentes y utiliza su extracto de cultivo para la deteccin de citotoxicidad especifica a lneas celulares de cncer. MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-bromuro de difenitetrazolio) ensayo que mide la activida reductasa enzimtica mitocondrial de las clulas viables que podran reducir el MTT a formazn, dando un color purpura, se utiliz para la citotoxicidad de deteccin. Algunos extractos de citotoxicidad mostrarin y demostraron muerte celular inducida apoptosis por las clulas cancerosas que es la propiedad fundamental de un compuesto de plomo contra el cncer.

Materiales y mtodos
Aislamiento de microorganismos y un extracto crudo de preparacin Las bacterias y levaduras fueron aisladas de las muestras recogidas de los suelos contaminados con petrleo, agua, materiales de plantas y muestras clnicas. Los microorganismos puros se cultivaron en medio liquido de petrleo basal (4% de aceite de soya de frijos, el 0,05% de extracto de levadura, 0,3 NH4NO3, KH2PO4 0,02% y 0,02 MgSO4.7H2O%) y se incubaron en una incubadora con agitador a 200 rpm a 37C, 48 horas para las bacterias a 30, 72 horas para la levadura, Los extractos crudos se prepararon a partir de cultivos enteros, que contienen las clulas y los caldos de acetato de etilo, se evapora y se disuelve en metanol y se lav dos veces con hexano. Los extractos crudos de la fraccin de metanol se mantuvieron a 4 C hasta su uso para el ensayo citotxico.

Lneas celulares y condiciones de cultivo (Hela) cncer de cuello uterino, (HepG2) cncer de hgado, (MCF-7) el cncer de mama, (u937) leucemia monocitica y de rion de mono verde africano (Vero) las lneas celulares provienen de la coleccin de tipos de cultivo americano (ATCC). El medio utilizado para HepG2, MCF-7 y lneas de clulas Hela se uso medio dulbecco modificado, para U937 se uso RPMI1640 y para Vero se uso M199. Todas las clulas fueron suplementadas con 10% de suero bobino fetal y 100 U/ ml de penicilina con esptreptomicina y fueron incubadados a 37C y 5%CO2. Toda la sangre fue tomada desde 3 sujetos indubiduales saludables y la sangre perifrica clulas mononucleares (PBMC) fueron separadas por el kit Premium plaga del reactivo ficoll y mantenido en el medio RPMI. Ensayo citotxico: Noventa L conteniendo 1 X104 celulas de la lnea celular en suspensin ( MCF-7, HepG2, Hela,U937, clulas Vero y PBMC) fueron sembradas dentro de posillos de una placa de 96 posillos. Despues de 24 hrs de incubacin, 10 L de extracto crudo disolvido en 0,01% de etanol fueron agregados para una concentracin final de 500 a 1000 g/ml y incubados por otras 48 hrs. El test citotxico a sido determinado por MTT (3-(4,5-Dimetilthiazol-2-il)-2,5difeniltetrazoliubromido) ensayo. En breve 50l de MMT fueron agregados a las placas, las clulas fueron cultivadas por 4 hrs adicionales a 37C. Entonces 100l de SDS fueron agregados a las placas.El formazan solubilizado fue medido a 595 nm usando el espectrofotmetro de microplacas. Cada tratamiento se ensayo por triplicado. Tres prepapraciones de extracto crudo y ensayos MTT fueron llevados a cabo. Doxorrubicina y 0,01%de etanol (control del vehiculo) se usaron como controles positivos y negativos, respectiamente, El anlisis estadstico entre el tratamiento y control se determin usando test students de dos colas valores p <0,05 los que fueron considerados significativamente diferentes del grupo control. La citotoxicidad del extracto crufo fue expresada como IC50 (concentracin mostraron citotoxicidad 50%). La diferencia ms significativa de la IC50 de los extractos crudos en contra de la misma lnea celular se compar con una ANOVA, la prueba post hoc. Anlisis cuantitativo de la actividad del extracto crudo El metanol del extracto crudo preparado desde 100ml de caldos de cultivo paso de los caldos de cultivo gastados de las cepas potentes que fueron disueltas con metanol en una concentracin final 10 mg / ml y ll fue descubierto en gel de slice TLC. La placa de TLC se realiz en el depsito de TLC contiene cloroformo / metanol / agua (65:25:2, v / v). Las bandas se visualizaron por ninhidrina (0,2% en etanol), rodamina 6 G (0,001% en acetona), vapor de yodo y los aerosoles anisaldehido--H2SO4 (0,5% en etanol cido) para detectar la composicin de los grupos activos en los extractos. Observacion de la morfologa de la apoptosis y muerte de las clulas Despus del tratamiento de las clulas microbianas con o sin extractos crudos luego de 48 Hrs los medios fueron removidos y lavados 3 veces con PBS. Las clulas fueron observadas bajo el microscopio de contraste invertido. Por tincin de ADN, 50L de 100g/ml HOECHST 33342 fueron agregados, incubados a 37C por 10 minutoa y examinados bajo microscopio de emisin de fluorecencia invertida en la emisin de longitud deonda de 461 nm. Ensayo de ADN a escala. Clulas cancergenas desde 3X106 celulas fueron tratadas con extractos con concentraciones que inducen el 70% de citotoxicidad y incubadas a 37 C de CO2 durante 24 horas. En el tiempo de encubacion se determino, el ADN cromosmico de las clulas cancerosas se preparo con el kit de apoptosis de ADN Ladder. Las clulas fueron cultivadas y lisadas con buffer de lisis durante 10 minutos. A continuacin, las muestras se mesclaron con isopropanol antes de pasar por el filtro y se lavaron. El aADN se eluye del filtro y se trato con ARNasas a 37C durante 30 minutoss antes de su embarque en electroforesis en gel de agarosa al 2% a 50 V durante 3 horas. Las clulas normales

tratadas con extractos microbianos a 500 mg/ml tambin fueron examinadas. Las clulas de cncer sin tratamiento y los efectos positivos de la apoptosis celular se extrajeron y se ejecutaron en paralelo. Ensayo de la actividad de la caspasa 3 La actividad de la caspasa 3 fue ensayada mediante el sistema de ensayo colorimetrico CaspACE, 3X106 celulas de las clulas cancerosas o clulas normales fueron tratadas con o sin los extractos a 37C 5% CO2 durante 24 horas fueron centrifugadas y se resuspendio el pellet con tampn de lisis. El lisado celular se incubo en hielo durante 10 minutos antes de la centrifugacin (15000 rpm, por minuto). El tampn de reacion, con DTT 10 m M fueron introducidos en el sobrenadante del lisado celular y se incubo 30 minutos mas en el hielo. El control se preparo mediante la adicion de 1L de 1m M Z-VAD-FMK (inhibidor de la caspasa-pan) a la muestra de clulas tratadas con los extractos. Cinco L de la caspasa 3 sustrato (Ac-DEVD-Pna) se aadi a todos los tubos y se incubaron a 37C durante 1 hora.El producto p-nitroanilida se midi a 450nm por espectrofotometra. El anlisis estadstico entre el tratamiento con y sin inhibidor de determino usando test student de dos colas con valores p <0,05 fueron considerados como una diferencia significativa.

Resultados y discusin
Proyeccin de extractos microbianos que muestran la toxicidad especifica de las clulas cancergenas: Un total de 394 microorganismos de bacteria y levaduras fueron aislados de diversas fuentes, incluido el aceite de suelos contaminados, materiales vegetales, agua y muestras clnicas. El medio liquido de petrleo basal que se utiliza generalmente para la produccin de biosurfactante en nuestro laboratorio se utilizan para el cultivo de microbios. Para la seleccin preliminar, el caldo de cultivo entero se utiliza para la preparacin de extracto crudo por el fraccionamiento de disolventes orgnicos tales como acetato de etilo, metanol y hexano. La actividad citotoxica de los extractos crudos microbianos se determin en contra de cuatro lneas celulares de cncer MCF-7, HepG2, Hela y clulas U937y clulas Vero como representante de la lnea celular normal. Llos extractos de clulas que mostraron mayor citotoxicidad a cada tipo de celula de cncer han sido seleccionados. A travs de esta prueba, treinta y cinco extractos contables de 9,8% del total de muestras examinadas mostraron efecto citotxico y la mayora de estas muestras se obtuvieron de extractos bacterianos (31 de 35 aislamientos). D e estas 20 muestras presentaban citotoxicidad especficamente las lneas celulares de cncer ( 5% del total de muestras). Llos valores de IC 50 de estos extractos contra lneas celulares de cncer estaban en el rango de 21 a 438 mg/ml de cada extracto de clulas (tabla 1). Los 26S y los 16s rRNA anlisis de secuencias de estas cepas sugiri que Ys102, B92, B151y B100 pertenecen a candida tropicalis, acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa y Bacilus sp; respectivamente. Los efectos citotoxicos de los extractos fueron de una manera dosis dependientes (figura1). Doxorrubicina, un medicamento contra el cncer de 0,66-2,5l /ml (tabla 1) y 25,7l/ml a las clulas normales (datos no mostrados) mientras que el tratamiento de las clulas normales con 1000 ug/ml de extractos de microorganismos no mostro efecto anti- proliferativo (valor p hasta 0,05) (figura 1). Las clulas normales y cancerosas tratadas con 0,01% de etanol (el control del vehiculo) no tubo ningn efecto citotxico en todas las clulas cancerosas y clulas normales de prueba(datos no mostrados). Hubo algunos informes sobre P.aeruginosas y bacilus sp. En la produccin de algunos compuestos biolgicamente activos contra lneas celulares de cncer, pero nunguno de candida tropicalis y acinetobacter baumannii. Estos dos microorganismos son lo tanto de nuestro inters.

Tabla 1. Los valores de IC50 de los extractos positivos. Todos estos extractos crudos nos mostr el efecto inhibitorio del crecimiento de las clulas normales (Vero) a 500 mg ml-1. El menor IC50 paracada tipo de cncer estaban representados en negrita. ()Significa que no hay citotoxicidad se encontr a 500 ug ml-1. Los diferentes alfabetos superndice mostr la gran diferencia de los tratamientos en la lnea de cncer de la misma clula.
Microorgan ism/ extract MCF-7 Ys102 B92 B151 B100 B89 BFW9 B136 B110 B120 B129 BCM6 B111 B91 Y12 B189 Y238 B107 B105 S. marcescens B. subtilis Doxorubici n IC50 (g/ml)

HepG2 130.7 1.05d 21.18 1.40 162.4 0.7f 168.6 0.44g 331.7 0.71j 239.7 1.41h 438.7 1.4m 155.9 0.74e 219.5 0.8i 202.1 0.7h 372.92.0 k 52.2 0.71b 409.1 1.07l 88.51 0.41c --

HeLa 110.3 1.8e

93.68 1.07a 79.3 1.52a 89.86 1.08d 86.2 0.78c 138.9 1.45f 81.08 0.77b 2.40 0.8 1930.45b --

U937 23.22 1.78a 43.26 0.16b 75.85 1.52d 83.66 0.77e 186.44 0.78f 45.02 1.18c --

0.66 0.22

1.41 0.47

2.47 0.08

Fig.1 Una curva dosis-respuesta de los extractos crudos activos derivados de la B151, B100, B92, y las tensiones Ys102, respectivamente, despus de 48 horas de incubacin en contra (a). Lneas celulares de cncer: HepG2 (1), MCF-7 (2), HeLa (3) y el U937 (4), (b). Clulas Vero y (c). PBMC. Los resultados son la media SD de tres experimentos independientes.

TLC anlisis de extractos celulares. Como un estudio preliminar sobre los componentes de los extractos, se compar la composicin de los extractos de clulas del gel de slice TLC anlisis seguido por la visualizacin con los aerosoles de deteccin de varios. Ninhidrina se utiliza para la deteccin de aminocidos y aminas. -anisaldehido, vapores de yodo, y rodamina 6 G se utiliza para la deteccin de compuestos oxigenados como el azcar y los lpidos. Todos los potentes extractos fueron positivos con yodo -anisaldehido-H2SO4 (Figura 2), y rodamina 6 G (datos no mostrados), lo que sugiere la presencia de azcar y lpidos que contienen restos de compuestos. Por -anisaldehido-tincin, las manchas aparecieron en verde, azul y prpura, lo que sugiere que los restos de azcar pueden ser ramnosa, ribosa o manosa. A medida que el aceite de cocina se utiliza como nica fuente de carbono para el cultivo, es posible que algunos componentes del aceite puede haber contribuido a la sntesis de los compuestosbioactivos. Para probar esta posibilidad, se compararon las actividades producidas por el cultivo en el medio del petrleo a los producidos en los medios de comunicacin completa, como levaduras y mohos (YM) y caldo de cultivo. Por todas estas cepas, las actividades citotxicas producidas en el medio completo fueron mucho menores que las producidas en el medio suplementado con aceite (datos no mostrados). Por lo tanto, es posible que los compuestos activos puedan contener un componente de los lpidos o glicolpidos como constituyente. De hecho, se inform de que algunos microorganismos cultivados en e medio basal de petrleo producido glicolipido que mostraron efecto anti-proliferatico de las clulas cancerosas. Fig. 2 TLC cromatograma de 10mg de potente extracto crudo de manchas en una placa de gel de slice, desarrollado por el sistema disolvente de cloroformo / metanol / agua (65:25:2, v/v) y se visualizan mediante spray anisaldehido. G: verde, B: Azul; P: prpura. Efectos morfolgicos de extractos de clulas en las clulas cancerosas Para la caracterizacin preliminar de la citotoxicidad inducida por los extractos de microbios en las clulas cancerosas, lo primero que se examin fueron los cambios en la morfologa celular inducida por el tratamiento con un microscopio de contraste de fase. En todas las lneas celulares de cncer, clula sobreredondeada, contraccin de la clula, la membrana vesiculacin y la prdida de adhesin celular fueron inducidas por los extractos de microorganismos (Figura 3). Estos cambios celulares son las caractersticas de la induccin de muerte celular apopttica. Para caracterizar la muerte celular inducida por los extractos microbianos, la morfologa nuclear se determin mediante la tincin con el colorante de unin al ADN Hoechst33342, en presencia y en ausencia de los extractos crudos de microbios. Los resultados revelaron que todos estos extractos de clulas inducida por la condensacin nuclear y la fragmentacin celular en cuerpos apoptticos, las caractersticas

distintivas del proceso de apoptosis, en todos los tipos de cncer de clulas (Figura 3, panel de tratados). Por lo tanto, se sugiri que la forma de muerte celular provocada por extracto microbiano podra ser el proceso de la apoptosis, que es reconocida como una nueva estrategia para la identificacin de los medicamentos contra el cncer. Por el contrario, la no anormalidad morfolgica de las clulas y fragmentacin de ADN de las clulas normales tratados con todos los extractos a 500 ug / ml fueron observadas (Figura 3) indicando un efecto txico de estos extractos de las clulas normales. Fig. 3. La morfologa celular y tincin de ADN de las clulas normales (Vero y CMSP) y varias clulas de cncer despus de 48 horas de tratamiento con 500 mg / ml ofYs102, B92, B151 yB100 extractos crudos (tratado), que va desde la parte superior y0,01% de etanol (el control del vehculo , sin tratar) observaciones al microscopio de contraste de fases (izquierda) y un microscopio de fluorescencia invertido (panel derecho) en la ampliacin de 400X.

El anlisis de ADN fragmentacin Seguidamente, examin los daos del ADN inducidos por los extractos mediante la

realizacin de la electroforesis de ADN cromosmico de las clulas cancerosas en gel. Como se demuestra en la Figura 4, el patrn de escalamiento se observ claramente slo en las muestras tratadas, pero ninguno en las clulas tratadas normal. Esta caracterstica se asocia con el proceso de apoptosis, en la que se rompe el ADN en fragmentos de 180 unidades nucleosomal por las endonucleasas endgenas, pero no con otra forma de muerte celular, necrosis, en el que un patrn de bandas se produce manchas. Fig. 4 electroforesis en gel de agarosa de ADN cromosmico de3 x 106 clulas de (A) las clulas variouscancer y (B) las clulas normales tratados con los extractos a 37 C durante 24 horas en5% de CO2. (A) M = marcador de peso molecular, P = control positivo, calle 1, las clulas U937 tratadas; carril 2, U937 tratadas con extracto de Ys102, calle 3, HeLa tratadas; carril 4, HeLa conextracto de B92, calle 5, HepG2 sin tratar; carril 6, las clulas HepG2 con B151 extracto; carril 7, sin tratar MCF-7 y de 8 carriles, MCF7 tratadas con extracto de B100. (B) M = marcador de peso molecular, carril 1, CMSP tratadas con extracto deYs102; carril 2, las clulas Vero tratadas con extracto de Ys102,calle 3, CMSP tratadas con extracto de B92, de 4 carriles, clulas Vero tratadas con extracto de B92, calle 5, CMSP tratadas conextracto de B151, de 6 carriles, clulas Vero tratadas con extracto de B151, calle 7, CMSP tratadas con extracto de B100, de 8 carriles, clulas Vero tratadas con extracto de B100.

Actividad caspasa-3 ensayo La actividad de las caspasas (cistena-aspartato dependen especficos proteinasa) que se conoce como una caracterstica importante en la bioqumica de la sealizacin apopttica Se determin adems que investigue si la apoptosis fue inducida por los extractos. Dado que la caspasa-3 es el principal efector caspasa aguas abajo que est presente en la mayora de los tipos de clulas y juega un papel importante en la ejecucin de la muerte de la apoptosis celular por rotura de los sustratos celulares, que luego se compara su actividad en

el control de tratados y no tratados las clulas. El resultado demostr que la caspasa-3 se ha activado de manera significativa en las clulas tratadas (Figura 5). Por otra parte, la actividad fue bloqueada por la amplia gama inhibidor de la caspasa Z-VAD-FMK, lo que sugiere que la apoptosis inducida por la sealizacin de los extractos fue una va de la caspasa-dependiente. Tanto Vero y PBMC tratados con los extractos microbianos no mostraron activacin de la caspasa-3 (Figura 5). Nuestros resultados demuestran claramente que el crudo microbiana extractos de la apoptosis inducida detectada por las caractersticas de la apoptosis, la fragmentacin del ADN y la activacin de la caspasa-3 en clulas de cncer diferentes, que parecen dar cuenta de la actividad anti-proliferativa determinada por el ensayo MTT. Las respuestas citotxica de las clulas del cncer a todos los extractos fueron dosisdependientes. Adems, los extractos mostr la especificidad de los tipos de clulas cancerosas. En clulas normales, ninguna actividad anti-proliferativa se observ incluso en 12-50 veces la concentracin de los productos microbianos fueron utilizados. Adems, los microbios extractos se vern especficamente afectados tanto la lenta y rpida divisin de las clulas cancerosas, pero no se ve afectado tanto a las clulas normales lentas y de rpido crecimiento; PBMC y las clulas Vero, respectivamente. No slo el efecto citotxico especfico a las clulas cancerosas que los hizo como un buen candidato para desarrollar como agente antitumoral, sino tambin la preliminar demostr la induccin de apoptosis de las clulas cancerosas. Es bien sabido que el defecto en el proceso de apoptosis hace que las clulas normales se conviertan en clulas cancerosas inmortalizadas. Por lo tanto, para inducir la apoptosis en clulas de cncer es una caracterstica importante que se espera de un compuesto de plomo contra el cncer nuevo. La utilizacin de los productos de la fermentacin microbiana, como agentes contra el cncer es una aplicacin de las ventajas de la produccin de compuestos bioactivos como su capacidad para controlar las condiciones en las escalas de laboratorio e industriales. Sin embargo, nuevas investigaciones sobre la estructura y el mecanismo de accin de los compuestos bioactivos debe ser dilucidado an. Fig. 5 ensayo colorimtrico de la caspasa-3 actividad de las clulas cancerosas, U937, HeLa, HepG2 y MCF-7 y las clulas normales (abajo) tratados con o sin los extractos microbianos en la concentracin de 40 ul/ml Ys102, 125 ul /ml B92; 100 ul /ml B151 y 40 ul/ml B100 extractos, respectivamente, a 37 C durante 24 horas. ZVAD-FMK es un inhibidor de la caspasa amplia gama. Los resultados mostrados son los representantes de tres experimentos independientes. La muestra tratada mostraron significativamente mayor (*) en la actividad dela caspasa en comparacin con los no tratados y adems deinhibidores de las caspasas (P <0,05).