Anda di halaman 1dari 14

MIKROSKOP

KELOMPOK V : N A M A

K L P

MIKROSKOP

Mikroskop (bahasa Yunani: micros = kecil dan scopein = melihat) adalah sebuah alat untuk melihat objek yang terlalu kecil untuk dilihat dengan mata kasar. Ilmu yang mempelajari benda kecil dengan menggunakan alat ini disebut mikroskopi, dan kata mikroskopik berarti sangat kecil, tidak mudah terlihat oleh mata. JENIS-JENIS MIKROSKOP

1. MIKROSKOP BIASA 2. MIKROSKOP LAPANGAN GELAP


Mikroskop lapangan gelap (mikroskop tanah gelap) menggambarkan metode mikroskop, dalam mikroskop cahaya dan elektron kedua, yang mengecualikan sinar unscattered dari gambar. As a result, the field around the specimen (ie where there is no specimen to scatter the beam) is generally dark. Akibatnya, lapangan sekitar spesimen (yaitu dimana tidak ada spesimen untuk menyebarkan balok) umumnya gelap.

Dalam mikroskop optik , darkfield menggambarkan iluminasi teknik yang digunakan untuk meningkatkan kontras dalam ternoda sampel . Ia bekerja dengan menerangi sampel dengan cahaya yang tidak akan dikumpulkan oleh lensa objektif, dan dengan demikian tidak akan membentuk bagian dari gambar.Ini menghasilkan penampilan klasik latar belakang gelap, hampir hitam, dengan benda-benda terang di atasnya.

Jalan cahaya itu


Langkah-langkah diilustrasikan dalam gambar di mana mikroskop tegak digunakan. yang menggambarkan jalan cahaya melalui mikroskop lapangan gelap.

1. memasuki mikroskop untuk penerangan sampel. 2. Sebuah disk berukuran khusus, halte patch (lihat gambar) blok beberapa cahaya dari sumber cahaya, meninggalkan sebuah cincin luar iluminasi.Sebuah fase anulus lebar juga dapat cukup diganti pada perbesaran rendah. 3. Para lensa kondensor memfokuskan cahaya menuju sampel. 4. Cahaya memasuki sampel.Kebanyakan langsung dikirim, sementara beberapa yang tersebar dari sampel. 5. Cahaya yang tersebar memasuki lensa objektif, sedangkan cahaya secara langsung ditransmisikan hanya merindukan lensa dan tidak dikumpulkan karena blok pencahayaan langsung (lihat gambar). 6. Hanya cahaya tersebar terus untuk menghasilkan gambar, sedangkan cahaya secara langsung ditransmisikan dihilangkan.

Keuntungan dan kerugian

Mikroskop lapangan gelap menghasilkan gambar dengan latar belakang gelap. Mikroskop lapangan gelap adalah teknik yang sangat sederhana namun efektif dan cocok untuk menggunakan yang melibatkan hidup dan tak bercacat sampel biologis, seperti Pap dari kultur jaringan atau individu yang terbawa air organisme bersel tunggal.Mengingat kesederhanaan setup, kualitas gambar yang diperoleh dari teknik ini sangat mengesankan. Keterbatasan utama dari mikroskop lapangan gelap adalah tingkat cahaya rendah terlihat pada gambar akhir. Ini berarti sampel harus sangat kuat diterangi, yang dapat menyebabkan kerusakan pada sampel. Teknik lapangan gelap mikroskop hampir sepenuhnya bebas dari artefak, karena sifat proses. Namun interpretasi bidang gambar gelap harus dilakukan dengan hati-hati sebagai fitur gelap umum dari mikroskop lapangan terang gambar mungkin tidak terlihat, dan sebaliknya. Sementara field gambar gelap mungkin pertama kali muncul untuk menjadi negatif dari gambar bidang cerah, efek yang berbeda terlihat di masing-masing. Dalam bidang mikroskop cerah, fitur yang terlihat di mana baik bayangan yang dilemparkan pada permukaan oleh cahaya kejadian, atau sebagian dari permukaan kurang reflektif, mungkin dengan adanya lubang atau goresan. Dibesarkan fitur yang terlalu halus untuk bayangan tidak akan muncul dalam bidang gambar yang terang, tapi cahaya yang mencerminkan dari sisi fitur akan terlihat dalam bidang gambar gelap.

Perbandingan teknik transilumination digunakan untuk menghasilkan kontras dalam sampel kertas tisu . 1.559 m/pixel. 1,559 um / piksel.

Lapangan yang terang pencahayaan, kontras sampel berasal dari absorbansi cahaya dalam sampel.

Cross-terpolarisasi cahaya pencahayaan, kontras sampel berasal dari rotasi terpolarisasi cahaya melalui sampel.

Bidang gelap pencahayaan, kontras sampel berasal dari cahaya yang tersebar oleh sampel.

Fase kontras pencahayaan, kontras sampel berasal dari gangguan dari jalan panjang cahaya yang berbeda melalui sampel.

3. MIKROSKOP FLUORESEN
Sebuah mikroskop fluoresensi adalah mikroskop optik digunakan untuk mempelajari sifatsifat zat organik atau anorganik dengan menggunakan fenomena fluoresensi dan pendar bukan, atau di samping, refleksi dan penyerapan . The "mikroskop fluoresensi" istilah bahasa sehari-hari sinonim dengan mikroskop epifluorescence tetapi juga mengacu pada desain mikroskop seperti mikroskop confocal yang juga menggunakan fluoresensi untuk menghasilkan gambar. Semua metode mikroskop fluoresensi berbagi prinsip yang sama. Sampel adalah diterangi dengan cahaya dari panjang gelombang yang menyebabkan fluoresensi dalam sampel. Cahaya yang dipancarkan oleh fluoresensi, yang pada panjang gelombang, lebih lama, berbeda dari iluminasi, kemudian dideteksi melalui mikroskop obyektif. Dua filter biasanya digunakan dalam teknik ini, sebuah iluminasi (atau eksitasi) filter yang menjamin iluminasi dekat monokromatik dan pada panjang gelombang yang tepat, dan emisi kedua (atau deteksi) filter yang menjamin tidak ada sumber cahaya eksitasi mencapai detektor. Mikroskop fluoresensi fundamental mengambil pendekatan yang berbeda untuk menghasilkan gambar mikroskop cahaya dibandingkan dengan teknik ditransmisikan atau dipantulkan cahaya putih seperti fase kontras dan gangguan diferensial . Kedua metode mikroskop optik kontras memberikan data yang sangat berbeda namun saling melengkapi.

Prinsip
Spesimen diterangi dengan cahaya tertentu panjang gelombang (atau panjang gelombang) yang diserap oleh fluorophores, menyebabkan mereka untuk memancarkan cahaya dari panjang gelombang lebih panjang (yaitu, sebuah warna yang berbeda dari cahaya diserap). Lampu iluminasi dipisahkan dari fluoresensi dipancarkan jauh lebih lemah melalui penggunaan filter emisi spektral. Komponen Khas mikroskop fluoresensi adalah sumber cahaya ( lampu xenon arc atau merkuri-lampu uap ), yang menyaring eksitasi , yang cermin dichroic (atau beamsplitter dichroic ), dan menyaring emisi (lihat gambar di bawah). Filter dan dichroic yang dipilih sesuai dengan karakteristik eksitasi dan emisi spektral dari fluorophore digunakan untuk label spesimen. Dengan cara ini, distribusi dari fluorophore tunggal (warna) yang dicitrakan pada suatu waktu. Multi-warna gambar beberapa jenis fluorophores harus terdiri dengan menggabungkan beberapa single-warna gambar. Mikroskop fluoresensi Kebanyakan yang digunakan adalah mikroskop epifluorescence (yaitu, eksitasi dan pengamatan fluoresensi adalah dari atas (epi-) spesimen). Mikroskop ini telah menjadi bagian penting di bidang biologi, membuka pintu untuk lebih desain mikroskop canggih, seperti mikroskop confocal dan mikroskop fluoresensi refleksi total internal yang (TIRF).

mikroskop epifluorescence

Mayoritas mikroskop fluoresensi, terutama dalam ilmu kehidupan , adalah mikroskop epifluorescence. Lampu rangsang dilewatkan dari atas (atau, untuk mikroskop terbalik, dari bawah), melalui obyektif lensa dan kemudian ke spesimen bukan lewat itu pertama melalui spesimen. Para fluoresensi dalam spesimen menimbulkan cahaya yang dipancarkan yang difokuskan untuk detektor oleh tujuan yang sama yang digunakan untuk eksitasi. Karena sebagian dari cahaya rangsang ditularkan melalui spesimen, cahaya rangsang hanya tercermin mencapai tujuan bersama-sama dengan cahaya yang dipancarkan dan metode ini karena memberikan sinyal peningkatan untuk rasio kebisingan. Tambahan Filter dichroic antara tujuan dan detektor dapat menyaring cahaya eksitasi yang tersisa dari lampu neon.

Sumber Cahaya
Mikroskop fluoresensi memerlukan intens, dekat-monokromatik, pencahayaan yang beberapa sumber cahaya yang meluas, seperti lampu halogen tidak dapat menyediakan. Ada dua jenis utama sumber cahaya yang digunakan; xenon lampu busur atau merkuri-lampu uap dengan saringan eksitasi dan laser . Laser yang paling banyak digunakan untuk yang lebih kompleks teknik mikroskop fluoresensi seperti mikroskop confocal dan mikroskop Total fluoresensi refleksi internal yang sementara xenon dan lampu merkuri dengan filter eksitasi biasanya digunakan untuk mikroskop widefield epifluorescence

Preparasi sampel
Agar sampel cocok untuk mikroskopi fluoresensi itu harus neon. Ada beberapa metode menciptakan sampel neon; teknik utama adalah pelabelan dengan noda fluorescent atau, dalam kasus sampel biologis, ekspresi dari protein fluorescent . Atau fluoresensi intrinsik dari sampel (yaitu,

autofluorescence ) dapat digunakan. [1] Dalam mikroskop fluoresensi ilmu kehidupan adalah alat yang ampuh yang memungkinkan pewarnaan spesifik dan sensitif dari spesimen untuk mendeteksi distribusi protein atau molekul lain kepentingan. Akibatnya ada beragam teknik untuk pewarnaan fluoresen sampel biologis.

Keterbatasan

Fluorophores kehilangan kemampuan mereka untuk berpendar karena mereka diterangi dalam proses yang disebut photobleaching . Photobleaching sangat dapat membatasi waktu di mana sampel dapat diamati dengan mikroskop fluoresen. Beberapa teknik yang ada untuk mengurangi photobleaching seperti penggunaan fluorophores yang lebih kuat, dengan meminimalkan pencahayaan, atau dengan menggunakan photoprotective pemulung bahan kimia. Mikroskop fluoresensi dengan protein fluorescent wartawan telah memungkinkan analisis sel hidup dengan mikroskop fluoresensi, namun sel-sel yang rentan terhadap fototoksisitas, terutama dengan cahaya panjang gelombang pendek. Selanjutnya molekul neon memiliki kecenderungan untuk menghasilkan spesies kimia reaktif ketika berada di bawah pencahayaan yang meningkatkan efek fototoksik. Tidak seperti ditransmisikan dan tercermin teknik mikroskop cahaya mikroskop fluoresensi hanya memungkinkan pengamatan struktur tertentu yang telah fluorescently berlabel. Misalnya mengamati sampel jaringan siap dengan DNA neon dengan mikroskop fluoresen noda hanya mengungkapkan organisasi DNA di dalam sel dan mengungkapkan apa-apa lagi tentang morfologi sel.

4. MIKROSKOP FASE KONTRAS

Mikroskop fase kontras adalah mikroskop optik iluminasi teknik di mana kecil fase pergeseran dalam melewati cahaya melalui spesimen transparan diubah menjadi amplitudo atau kontras perubahan dalam gambar. Sebuah fase kontras mikroskop tidak memerlukan pewarnaan untuk melihat slide. Jenis mikroskop memungkinkan untuk mempelajari siklus sel . Seperti perjalanan cahaya melalui media selain vakum , interaksi dengan media ini penyebab amplitudo dan fase untuk mengubah dengan cara yang tergantung pada sifat dari media. Perubahan amplitudo menimbulkan penyerapan akrab cahaya, panjang gelombang yang tergantung dan menimbulkan warna. Mata manusia hanya mengukur energi cahaya yang tiba pada retina, sehingga perubahan dalam fase yang tidak mudah diamati, namun sering perubahan-perubahan dalam fase membawa sejumlah besar informasi. Hal yang sama berlaku dalam mikroskop khas, yaitu, meskipun berbagai variasi fase diperkenalkan oleh sampel yang diawetkan oleh instrumen (setidaknya dalam batas instrumen pencitraan yang sempurna) informasi ini hilang dalam proses yang mengukur cahaya. Dalam rangka untuk membuat variasi fase diamati, perlu untuk menggabungkan sinar yang melewati sampel dengan referensi sehingga gangguan yang dihasilkan mengungkapkan struktur fase sampel.

Ini pertama kali disadari oleh Frits Zernike selama studi tentang kisi-kisi difraksi . Selama penelitian ini dia menghargai kedua bahwa perlu mengganggu dengan balok referensi, dan bahwa untuk memaksimalkan kontras dicapai dengan teknik ini, perlu untuk memperkenalkan pergeseran fasa untuk referensi ini sehingga kondisi tidak ada perubahan fase menimbulkan gangguan benar-benar merusak. Dia kemudian menyadari bahwa teknik yang sama dapat diterapkan pada mikroskop optik. Pergeseran fasa yang diperlukan diperkenalkan oleh cincin terukir akurat ke piring kaca sehingga mereka memperkenalkan pergeseran fasa diperlukan bila dimasukkan ke dalam jalur optik mikroskop. Ketika digunakan, teknik ini memungkinkan fase melewati cahaya melalui objek yang diteliti harus disimpulkan dari intensitas gambar yang dihasilkan oleh mikroskop. Di obyek mikroskop optik banyak seperti bagian sel dalam protozoa, bakteri dan ekor sperma dasarnya sepenuhnya transparan kecuali ternoda. ( Pewarnaan adalah prosedur sulit dan memakan waktu yang kadang-kadang, tetapi tidak selalu, menghancurkan atau mengubah spesimen.) Perbedaan kepadatan dan komposisi dalam objek dicitrakan namun sering menimbulkan perubahan dalam fase cahaya melewati mereka, maka mereka kadang-kadang disebut "objek fase". Menggunakan teknik fase-kontras membuat struktur ini terlihat dan memungkinkan studi mereka dengan spesimen yang masih hidup. Teknik fase kontras terbukti seperti kemajuan dalam mikroskop yang Zernike dianugerahi hadiah Nobel (fisika) pada tahun 1953.

Latar Belakang
Teknik ini diciptakan oleh Frits Zernike pada tahun 1930 yang ia menerima hadiah Nobel dalam fisika pada tahun 1953. Mikroskop fase kontras adalah mode yang tersedia pada cahaya yang paling maju mikroskop dan ini paling sering digunakan untuk memberikan kontras spesimen transparan seperti sel-sel hidup atau organisme kecil.

Deskripsi

Sebuah implementasi praktis dari fase-kontras pencahayaan terdiri dari sebuah cincin fase (terletak di terkonjugasi aperture pesawat di suatu tempat di belakang elemen lensa depan tujuan) dan pencocokan melingkar cincin, yang terletak di primer aperture pesawat (lokasi aperture kondensor yang ). Dua sinar cahaya yang dipilih, yang dipancarkan dari satu titik di dalam filamen lampu, mendapatkan difokuskan oleh lensa lapangan persis di dalam pembukaan kondensor cincin annular. Karena lokasi ini justru di bidang fokus depan kondensor, dua sinar cahaya kemudian membias sedemikian rupa sehingga mereka keluar kondensor sebagai paralel sinar. Dengan asumsi bahwa dua sinar yang dimaksud adalah tidak membias atau difraksi pada bidang spesimen (lokasi slide mikroskop), mereka memasuki tujuan sebagaimana sinar paralel. Karena semua sinar sejajar difokuskan di belakang bidang fokus tujuan, pesawat kembali fokus adalah pesawat aperture terkonjugasi ke pesawat bagian depan fokus kondensor (juga lokasi anulus kondensor). Untuk melengkapi setup fase, fase piring diposisikan di dalam bagian belakang bidang fokus sedemikian rupa sehingga garis-garis dengan bagian anulus kondensor. Hanya melalui dengan benar berpusat dua elemen bisa fase kontras pencahayaan dibentuk. Sebuah fase berpusat teleskop yang sementara menggantikan salah satu okuler yang digunakan, pertama untuk fokus pesawat fase elemen dan kemudian pusat cincin annular iluminasi dengan cincin yang sesuai dari pelat fase. Sebuah varian yang menarik dalam desain fase kontras pernah dilaksanakan (oleh mikroskop pembuat C. Baker, London) di mana bentuk annular konvensional dari dua elemen digantikan oleh celah transmisi berbentuk salib di Sub dan sesuai berbentuk salib piring fase pada bidang konjugat dalam tujuan. Keuntungan mengklaim di sini adalah bahwa hanya aperture celah tunggal yang dibutuhkan untuk semua fase perbesaran objektif. Recentring keselarasan dan rotasi salib dengan cara teleskop itu tetap dibutuhkan untuk setiap perubahan dalam pembesaran.

5. MIKROSKOP ELEKTRON

Mikroskop elektron adalah sebuah mikroskop yang mampu untuk melakukan pembesaran objek sampai 2 juta kali, yang menggunakan elektro statik dan elektro magnetik untuk mengontrol pencahayaan dan tampilan gambar serta memiliki kemampuan pembesaran objek serta resolusi yang jauh lebih bagus daripada mikroskop cahaya. Mikroskop elektron ini menggunakan jauh lebih banyak energi dan radiasi elektromagnetik yang lebih pendek dibandingkan mikroskop cahaya.

FENOMENA ELEKTRON Pada tahun 1920 ditemukan suatu fenomena di mana elektron yang dipercepat dalam suatu kolom [elektromagnet], dalam suasana hampa udara (vakum) berkarakter seperti cahaya, dengan panjang gelombang yang 100.000 kali lebih kecil dari cahaya. Selanjutnya ditemukan juga bahwa medan listrik dan medan magnet dapat berperan sebagai lensa dan cermin seperti pada lensa gelas dalam mikroskop cahaya.

Jenis-jenis mikroskop elektron

Mikroskop transmisi elektron (TEM)


Mikroskop transmisi elektron (Transmission electron microscope-TEM)adalah sebuah mikroskop elektron yang cara kerjanya mirip dengan cara kerja proyektor slide, di mana elektron ditembuskan ke dalam obyek pengamatan dan pengamat mengamati hasil tembusannya pada layar.
Sejarah penemuan

Seorang ilmuwan dari universitas Berlin yaitu Dr. Ernst Ruska [1] menggabungkan penemuan ini dan membangun mikroskop transmisi elektron (TEM) yang pertama pada tahun 1931. Untuk hasil karyanya ini maka dunia ilmu pengetahuan menganugerahinya hadiah Penghargaan Nobel dalam fisika pada tahun 1986. Mikroskop yang pertama kali diciptakannya adalah dengan menggunakan dua lensa medan magnet, namun tiga tahun kemudian ia menyempurnakan karyanya tersebut dengan menambahkan lensa ketiga dan mendemonstrasikan kinerjanya yang menghasilkan resolusi hingga 100 nanometer (nm) (dua kali lebih baik dari mikroskop cahaya pada masa itu).
Cara kerja

Mikroskop transmisi eletron saat ini telah mengalami peningkatan kinerja hingga mampu menghasilkan resolusi hingga 0,1 nm (atau 1 angstrom) atau sama dengan pembesaran sampai satu juta kali. Meskipun banyak bidang-bidang ilmu pengetahuan yang berkembang pesat dengan bantuan mikroskop transmisi elektron ini. Adanya persyaratan bahwa "obyek pengamatan harus setipis mungkin" ini kembali membuat sebagian peneliti tidak terpuaskan, terutama yang memiliki obyek yang tidak dapat dengan serta merta dipertipis. Karena itu pengembangan metode baru mikroskop elektron terus dilakukan.
Preparasi sediaan

Agar pengamat dapat mengamati preparat dengan baik, diperlukan persiapan sediaan dengan tahap sebagai berikut : 1. melakukan fiksasi, yang bertujuan untuk mematikan sel tanpa mengubah struktur sel yang akan diamati. fiksasi dapat dilakukan dengan menggunakan senyawa glutaraldehida atau osmium tetroksida. 2. pembuatan sayatan, yang bertujuan untuk memotong sayatan hingga setipis mungkin agar mudah diamati di bawah mikroskop. Preparat dilapisi dengan monomer resin melalui proses pemanasan, kemudian dilanjutkan dengan pemotongan menggunakan mikrotom. Umumnya mata pisau mikrotom terbuat dari berlian karena berlian tersusun dari atom karbon yang padat. Oleh karena itu, sayatan yang terbentuk lebih rapi. Sayatan yang telah terbentuk diletakkan di atas cincin berpetak untuk diamati. 3. pelapisan/pewarnaan, bertujuan untuk memperbesar kontras antara preparat yang akan

diamati dengan lingkungan sekitarnya. Pelapisan/pewarnaan dapat menggunakan logam berat seperti uranium dan timbal.

Mikroskop pemindai transmisi elektron (STEM)


Mikroskop pemindai transmisi elektron (STEM)adalah merupakan salah satu tipe yang merupakan hasil pengembangan dari mikroskop transmisi elektron (TEM). Pada sistem STEM ini, electron menembus spesimen namun sebagaimana halnya dengan cara kerja SEM, optik elektron terfokus langsung pada sudut yang sempit dengan memindai obyek menggunakan pola pemindaian dimana obyek tersebut dipindai dari satu sisi ke sisi lainnya (raster) yang menghasilkan lajur-lajur titik (dots)yang membentuk gambar seperti yang dihasilkan oleh CRT pada televisi / monitor.

Mikroskop pemindai elektron (SEM)


Mikroskop pemindai elektron (SEM) yang digunakan untuk studi detail arsitektur permukaan sel (atau struktur jasad renik lainnya), dan obyek diamati secara tiga dimensi.
Sejarah penemuan

Tidak diketahui secara persis siapa sebenarnya penemu Mikroskop pemindai elektron (Scanning Electron Microscope-SEM) ini. Publikasi pertama kali yang mendiskripsikan teori SEM dilakukan oleh fisikawan Jerman dR. Max Knoll pada 1935, meskipun fisikawan Jerman lainnya Dr. Manfred von Ardenne mengklaim dirinya telah melakukan penelitian suatu fenomena yang kemudian disebut SEM hingga tahun 1937. Mungkin karena itu, tidak satu pun dari keduanya mendapatkan hadiah nobel untuk penemuan itu. Pada 1942 tiga orang ilmuwan Amerika yaitu Dr. Vladimir Kosma Zworykin[2], Dr. James Hillier, dan Dr. Snijder, benar-benar membangun sebuah mikroskop elektron metode pemindaian (SEM) dengan resolusi hingga 50 nm atau magnifikasi 8.000 kali. Sebagai perbandingan SEM modern sekarang ini mempunyai resolusi hingga 1 nm atau pembesaran 400.000 kali. Mikroskop elektron cara ini memfokuskan sinar elektron (electron beam) di permukaan obyek dan mengambil gambarnya dengan mendeteksi elektron yang muncul dari permukaan obyek.
Cara kerja

Cara terbentuknya gambar pada SEM berbeda dengan apa yang terjadi pada mikroskop optic dan TEM. Pada SEM, gambar dibuat berdasarkan deteksi elektron baru (elektron sekunder) atau elektron pantul yang muncul dari permukaan sampel ketika permukaan sampel tersebut dipindai dengan sinar elektron. Elektron sekunder atau elektron pantul yang terdeteksi selanjutnya diperkuat sinyalnya, kemudian besar amplitudonya ditampilkan dalam gradasi gelap-terang pada layar monitor CRT (cathode ray tube). Di layar CRT inilah gambar struktur obyek yang sudah diperbesar bisa dilihat. Pada proses operasinya, SEM tidak memerlukan sampel yang ditipiskan, sehingga bisa digunakan untuk melihat obyek dari sudut pandang 3 dimensi.
Preparasi sediaan

Agar pengamat dapat mengamati preparat dengan baik, diperlukan persiapan sediaan dengan tahap sebagai berikut : 1. melakukan fiksasi, yang bertujuan untuk mematikan sel tanpa mengubah struktur sel yang akan diamati. fiksasi dapat dilakukan dengan menggunakan senyawa glutaraldehida atau osmium tetroksida. 2. dehidrasi, yang bertujuan untuk

memperendah kadar air dalam sayatan sehingga tidak mengganggu proses pengamatan. 3. pelapisan/pewarnaan, bertujuan untuk memperbesar kontras antara preparat yang akan diamati dengan lingkungan sekitarnya. Pelapisan/pewarnaan dapat menggunakan logam mulia seperti emas dan platina.

Mikroskop pemindai lingkungan elektron (ESEM)


Mikroskop ini adalah merupakan pengembangan dari SEM, yang dalam bahasa Inggrisnya disebut Environmental SEM (ESEM) yang dikembangkan guna mengatasi obyek pengamatan yang tidak memenuhi syarat sebagai obyek TEM maupun SEM. Obyek yang tidak memenuhi syarat seperti ini biasanya adalah bahan alami yang ingin diamati secara detail tanpa merusak atau menambah perlakuan yang tidak perlu terhadap obyek yang apabila menggunakat alat SEM konvensional perlu ditambahkan beberapa trik yang memungkinkan hal tersebut bisa terlaksana.
Sejarah penemuan

Teknologi ESEM ini dirintis oleh Gerasimos D. Danilatos, seorang kelahiran Yunani yang bermigrasi ke Australia pada akhir tahun 1972 dan memperoleh gelar Ph.D dari Universitas New South Wales (UNSW) pada tahun 1977 dengan judul disertasi Dynamic Mechanical Properties of Keratin Fibres . Dr. Danilatos ini dikenal sebagai pionir dari teknologi ESEM, yang merupakan suatu inovasi besar bagi dunia mikroskop elektron serta merupakan kemajuan fundamental dari ilmu mikroskopi. Deengan teknologi ESEM ini maka dimungkinkan bagi seorang peneliti untuk meneliti sebuah objek yang berada pada lingkungan yang menyerupai gas yang betekanan rendah (low-pressure gaseous environments) misalnya pada 10-50 Torr serta tingkat humiditas diatas 100%. Dalam arti kata lain ESEM ini memungkinkan dilakukannya penelitian obyek baik dalam keadaan kering maupun basah. Sebuah perusahaan di Boston yaitu Electro Scan Corporation pada tahun 1988 ( perusahaan ini diambil alih oleh Philips pada tahun 1996- sekarang bernama FEI Company [3] telah menemukan suatu cara guna menangkap elektron dari obyek untuk mendapatkan gambar dan memproduksi muatan positif dengan cara mendesain sebuah detektor yang dapat menangkap elektron dari suatu obyek dalam suasana tidak vakum sekaligus menjadi produsen ion positif yang akan dihantarkan oleh gas dalam ruang obyek ke permukaan obyek. Beberapa jenis gas telah dicoba untuk menguji teori ini, di antaranya adalah beberapa gas ideal, gas , dan lain lain. Namun, yang memberikan hasil gambar yang terbaik hanyalah uap air. Untuk sample dengan karakteristik tertentu uap air kadang kurang memberikan hasil yang maksimum. Pada beberapa tahun terakhir ini peralatan ESEM mulai dipasarkan oleh para produsennya dengan mengiklankan gambar-gambar jasad renik dalam keadaan hidup yang selama ini tidak dapat terlihat dengan mikroskop elektron.
Cara kerja

Pertama-tama dilakukan suatu upaya untuk menghilangkan penumpukan elektron (charging) di permukaan obyek, dengan membuat suasana dalam ruang sample tidak vakum tetapi diisi dengan sedikit gas yang akan mengantarkan muatan positif ke permukaan obyek, sehingga penumpukan elektron dapat dihindari.

Hal ini menimbulkan masalah karena kolom tempat elektron dipercepat dan ruang filamen di mana elektron yang dihasilkan memerlukan tingkat vakum yang tinggi. Permasalahan ini dapat diselesaikan dengan memisahkan sistem pompa vakum ruang obyek dan ruang kolom serta filamen, dengan menggunakan sistem pompa untuk masing-masing ruang. Di antaranya kemudian dipasang satu atau lebih piringan logam platina yang biasa disebut (aperture) berlubang dengan diameter antara 200 hingga 500 mikrometer yang digunakan hanya untuk melewatkan elektron , sementara tingkat kevakuman yang berbeda dari tiap ruangan tetap terjaga.

Tipe-tipe pengembangan
Mikroskop refleksi elektron (REM)

Yang dalam bahasa Inggrisnya disebut Reflection electron microscope (REM), adalah mikroskop elektron yang memiliki cara kerja yang serupa sebagaimana halnya dengan cara kerja TEM namun sistem ini menggunakan deteksi pantulan elektron pada permukaan objek. Tehnik ini secara khusus digunakan dengan menggabungkannya dengan tehnik Refleksi difraksi elektron energi tinggi (Reflection High Energy Electron Diffraction) dan tehnik Refleksi pelepasan spektrum energi tinggi (reflection high-energy loss spectrum - RHELS)
Spin-Polarized Low-Energy Electron Microscopy (SPLEEM)

Spin-Polarized Low-Energy Electron Microscopy (SPLEEM) ini adalah merupakan Variasi lain yang dikembangkan dari teknik yang sudah ada sebelumnya, yang digunakan untuk melihat struktur mikro dari medan magnet (en:magnetic domains).

Teknik pembuatan preparat yang digunakan pada mikroskop elektron


Materi yang akan dijadikan objek pemantauan dengan menggunakan mikroskop elektron ini harus diproses sedemikian rupa sehingga menghasilkan suatu sampel yang memenuhi syarat untuk dapat digunakan sebagai preparat pada mikroskop elektron. Teknik yang digunakan dalam pembuatan preparat ada berbagai macam tergantung pada spesimen dan penelitian yang dibutuhkan, antara lain :

Kriofiksasi yaitu suatu metode persiapan dengan menggunakan teknik pembekuan spesimen dengan cepat yang menggunakan nitrogen cair ataupun helium cair, dimana air yang ada akan membentuk kristal-kristal yang menyerupai kaca. Suatu bidang ilmu yang disebut mikroskopi cryo-elektron (cryo-electron microscopy) telah dikembangkan berdasarkan tehnik ini. Dengan pengembangan dari Mikroskopi cryo-elektron dari potongan menyerupai kaca (vitreous) atau disebut cryo-electron microscopy of vitreous sections (CEMOVIS), maka sekarang telah dimungkinkan untuk melakukan penelitian secara virtual terhadap specimen biologi dalam keadaan aslinya. Fiksasi - yaitu suatu metode persiapan untuk menyiapkan suatu sampel agar tampak realistik (seperti kenyataannya ) dengan menggunakan glutaraldehid dan osmium tetroksida. Dehidrasi - yaitu suatu metode persiapan dengan cara menggantikan air dengan bahan pelarut organik seperti misalnya ethanol atau aceton. Penanaman (Embedding) - yaitu suatu metode persiapan dengan cara menginfiltrasi jaringan dengan resin seperti misalnya araldit atau epoksi untuk pemisahan bagian. Pembelahan (Sectioning)- yaitu suatu metode persiapan untuk mendapatkan potongan tipis dari spesimen sehingga menjadikannya semi transparan terhadap elektron. Pemotongan ini bisa dilakukan dengan ultramicrotome dengan menggunakan pisau berlian untuk menghasilkan potongan yang tipis sekali. Pisau kaca juga biasa digunakan oleh karena harganya lebih murah.

Pewarnaan (Staining) - yaitu suatu metode persiapan dengan menggunakan metal berat seperti timah, uranium, atau tungsten untuk menguraikan elektron gambar sehingga menghasilkan kontras antara struktur yang berlainan di mana khususnya materi biologikal banyak yang warnanya nyaris transparan terhadap elektron (objek fase lemah). Pembekuan fraktur (Freeze-fracture) - yaitu suatu metode persiapan yang biasanya digunakan untuk menguji membran lipid. Jaringan atau sel segar didinginkan dengan cepat (cryofixed) kemudian dipatah-patahkan atau dengan menggunakan microtome sewaktu masih berada dalam keadaan suhu nitrogen ( hingga mencapai -100% Celsius).

Patahan beku tersebut lalu diuapi dengan uap platinum atau emas dengan sudut 45 derajat pada sebuah alat evaporator en:evaporator tekanan tinggi.

Ion Beam Milling - yaitu suatu metode mempersiapkan sebuah sampel hingga menjadi transparan terhadap elektron dengan menggunakan cara pembakaran ion( biasanya digunakan argon) pada permukaan dari suatu sudut hingga memercikkan material dari permukaannya. Kategori yang lebih rendah dari metode Ion Beam Milling ini adalah metode berikutnya adalah metode Focused ion beam milling, dimana galium ion digunakan untuk menghasilkan selaput elektron transparan pada suatu bagian spesifik pada sampel. Pelapisan konduktif (Conductive Coating) - yaitu suatu metode mempersiapkan lapisan ultra tipis dari suatu material electrically-conducting . Ini dilakukan untuk mencegah terjadinya akumulasi dari medan elektrik statis pada spesimen sehubungan dengan elektron irradiasi sewaktu proses penggambaran sampel. Beberapa bahan pelapis termasuk emas, palladium (emas putih), platinum, tungsten, graphite dan lain-lain, secara khusus sangatlah penting bagi penelitian spesimen dengan SEM.