http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2003000100010 Aislamiento de especies termotolerantes de Campylobacter de aguas fluviales utilizando dos mtodos de colecta.

INTRODUCCIN Las especies termotolerantes de Campylobacter, C. jejuni y C. coli son considerados como importantes agentes de la infeccin intestinal por todo el mundo (Allos y Blaser, 1995; Fernndez, 1992;. Friedman et al, 2000). Muchos animales domsticos y salvajes que se conoce como reservas naturales que, junto con las aguas residuales, puede contaminar los cuerpos de agua. Ambas especies pueden sobrevivir en agua de varios das a varias semanas, dependiendo de la temperatura del agua (Anderson et al, 1997;. Pickert y Bozenhart, 1985). Varios brotes de gastroenteritis por Campylobacter asociados al consumo de agua contaminada se han reportado (Anderson et al, 1997;. Sacks et al, 1986;. Skerjve y Brennhovd, 1992; Jacobs-Reitsma, 2000). Varios mtodos han sido descritos con el fin de determinar la presencia de bacterias enteropatgenas en el agua, siendo los procedimientos de enriquecimiento y filtracin a travs de las membranas de los ms utilizados (Bolton et al, 1987;. Mathewson et al, 1983).. El hisopo de Moore es un mtodo de concentracin descrito en 1948 para aislar Salmonella y Vibrio cholerae a partir de agua (Barret et al., 1980). Sin embargo, hay poca informacin disponible en relacin con el aislamiento de las especies de Campylobacter en los cuerpos de agua con este mtodo. El hisopo de Moore fue utilizado previamente en un estudio piloto en nuestro laboratorio (Fernndez et al., 1990). En este estudio se compar el desempeo de la torunda de Moore (MSM) y la filtracin a travs de la membrana (MFM) mtodos para el aislamiento de especies termotolerantes de Campylobacter de muestras de agua obtenidas en el ro Calle-Calle, Valdivia, Chile (39 47? latitud sur, 73 15? latitud Oeste). MATERIAL Y MTODOS Se obtuvieron muestras de agua duplicado (181 para los HSH y 181 de MFM) desde diferentes puntos del curso urbano del ro Calle-Calle (26 Km de largo, 297 m de ancho promedio), de acuerdo con los siguientes mtodos: Moore mtodo Swab (HSH) (Fernndez et al, 1990.): Consiste en un trozo de gasa de 70x22 cm, doblado varias veces para formar rollos cilndricos que estaban envueltos en papel grueso y autoclave. Cada hisopo, atado a una cuerda de nylon de 5 m de largo, se dej durante 24 horas en el ro. Cuando se retiran, cada hisopo se coloc en un frasco que contiene 125 ml de caldo de enriquecimiento con una formulacin de dos veces superior a la normal, para compensar la dilucin producida por el agua absorbida por la gasa. Este medio consiste en caldo Brucella, suplemento FBP (sulfato ferroso, metabissulfite sodio y piruvato de sodio al 0,5 g / L de cada uno), vancomicina (20 mg / L), polimixina B (5.000 UI / L), trimetoprim (10 mg / L) , cephalotine (20 mg / L) y anphotericin

(4 mg / L). Los matraces se incubaron a 42 C durante 48 horas bajo una atmsfera de microaerbicas, y 200 microlitros fueron sembradas en un medio selectivo Butzler incuba como se describi anteriormente. Mtodo de filtracin por membrana (MFM) (Mathewson et al, 1983). Cuatro litros de agua se hace pasar por un estril de 47 mm de filtro de membrana (Millipore) con 0,45 m de tamao de poro, utilizando una bomba de vaco. El filtro se colocarn aspticamente en un frasco que contiene 100 ml de caldo de enriquecimiento se ha descrito anteriormente. El resto del procedimiento fue similar a la utilizada con los HSH. Sospecho colonias de Campylobacter fueron sembradas en agar sangre con el fin de obtener un cultivo puro y entonces, se identificaron y biotyped por sus caractersticas morfolgicas, la susceptibilidad a cephalotine y cido nalidxico y por su capacidad de producir hypuricase, desulfhydrase y DNAsa (Fernndez et al. , 1990). RESULTADOS Y DISCUSIN Como se muestra en el cuadro I, el 24,3% de las muestras fueron positivas para Campylobacter utilizando el mtodo de los HSH que, con la MFM, slo en el 7,2% estos microorganismos fueron aislados, siendo esta diferencia estadsticamente significativa (chi-cuadrado). La tasa de aislamiento ms altos obtenidos con el MSM podra ser debido al hecho de que las esponjas de permanecer durante 24 horas en el agua, lo que permite la filtracin de una gran cantidad de agua y la captura de clulas de Campylobacter, as como otros microorganismos, suspendido en el agua. El volumen de muestra de agua utilizada para el MFM fue de 4 L, una cantidad que, en comparacin con los HSH, podra ser insuficiente para permitir una mayor tasa de aislamiento. Tabla I. tasas de aislamiento de las especies de Campylobacter con un hisopo de Moore y los mtodos de filtracin de membrana. Aislamiento de Especies de Campylobacter utilizando la trula de Moore y El Mtodo de Filtracin Por Membrana.

N = nmero de muestras positivas, n = nmero total de muestras; * p <0,01 Contrario a informes anteriores (Bolton et al, 1987;. Skerjve y Brennhovd, 1992), C. coli fue aislado con mayor frecuencia (77,3%) de C. jejuni (22,7%). Se obtuvieron resultados similares con ambos mtodos (MASM y MFM). Una tasa superior de aislamiento de C. coli en muestras de aguas residuales fue observado por Hller (1988) y en muestras de agua de los ros por Fernndez et al. (1990). Algunos autores sugieren que C. coli podra ser ms resistente que el C. jejuni a las condiciones ambientales (Tresierra-Ayala et al., 1999). Eso podra explicar las diferencias observadas en las tasas de aislamiento entre

ambas especies. En la actualidad, los estudios experimentales se llevan a cabo en nuestro laboratorio con el fin de establecer si C. coli es ms resistente que el C. jejuni a las condiciones ambientales. A pesar de esta diferencia, es necesario tener en cuenta que ambas especies se consideran como importantes agentes de las enfermedades diarreicas, y el agua contaminada son reconocidos como una fuente epidemiolgica de los brotes, as como casos espordicos de campylobacteriosis intestinal. Nuestros resultados muestran que el MSM es un mtodo eficaz para aislar a las especies de Campylobacter. Recientemente empezamos a utilizar los principales medios para aislar Arcobacter especies del mismo tipo de muestras, con buenos resultados (datos no mostrados). En base a estos resultados se propone el uso de los HSH como un mtodo adecuado, fcil y barata para el aislamiento de Campylobacter especies de muestras de agua del ro.