Aislamiento y Seleccin de Microorganismos en forma celulolipica.

Aislamiento, seleccin y mantencin de Microorganismos

Fuentes de obtencin de Microorganismos:

Fuentes de obtencin de Microorganismos:

Fuente de obtencin de microorganismos:

Aislamiento de Microorganismo Se realizan por tcnicas microbiolgicas convencionales. Muestreo. Tratamiento de la muestra. Enriquecimiento. Aislamiento Ejemplo: Muestra de Suelo Se toma en una bolsa estril con guantes y esptula una muestra del suelo. La muestra de suelo se re suspende en agua estril. El sobrenadante se diluye 10-1 a 10-10 veces. Muestras de estas series de diluciones (100 L) se siembran sobre varios medios de cultivo (dependiendo del tipo de microorganismos que queramos aislar) y luego se incuban. Se aslan colonias separadas de distinta morfologa y se purifican por resiembra. Los cultivos puros se mantienen en tubos de ensayo como cultivos en medio slido listos para realizar las pruebas de seleccin.

Seleccin de Microorganismo: 1. La cepa a utilizar debe ser genticamente estable. 2. Su velocidad de crecimiento debera ser alta. 3. La cepa debe estar libre de contaminantes, incluidos fagos. 4. Sus requerimientos nutricionales deberan ser satisfechos a partir de medios de cultivo de costo reducido. 5. Debe-ser de fcil conservacin por largos perodos de tiempo, sin prdida de sus caractersticas particulares. 6. Debera llevar a cabo el proceso fermentativo completo en un tiempo corto. 7. Si el objetivo del proceso es un producto, ste debera ser de alto rendimiento y de fcil extraccin del medio de cultivo.

Seleccin de microorganismos productores de antibiticos y otros agentes inhibidores del crecimiento Temperatura: Hongos 20-22C. Actinomicetos 28C PH: Hongos pH cido. Bacterias pH neutro. Oxgeno: Todos los productores son aerobios Carbono: Actinomicetos glicerol, quitina, almidn Nitrgeno: Actinomicetos casena, arginina, asparragina En general amonio o nitrato.

Mantencin y preservacin de Microorganismos: a) Preservar la pureza gentica del cultivo sin prdida de ninguna de sus propiedades bioqumicas. b) Preservar los niveles de su productividad inicial. c) Lograr que el cultivo pueda ser transportado y manejado con facilidad. Subcultivos: a) Mtodo comn de conservacin, que consiste en el repique peridico del cultivo en un medio nutritivo fresco. b) El intervalo de transferencia vara con el microorganismo, debiendo considerarse el medio adecuado para cada especie. c) Una vez desarrollados los cultivos se mantienen a 4 C durante lapsos que oscilan entre 15 das y 2 meses.

Desventajas: Incremento de la posibilidad de mutacin con cada transferencia, con prdida de las caractersticas del organismo. Riesgo de contaminacin. Alteraciones en el medio de cultivo, durante la estada en fro, en la cual se produce una desecacin gradual del mismo. Mantenimiento bajo capa de aceite: o Cubrir completamente el cultivo despus de su desarrollo en medio slido, con una capa de aceite mineral o vaselina estril. o Los cultivos en esta forma se pueden conservar a temperatura ambiente. Desventajas: Se sostienen que en estas condiciones los microorganismos pueden continuar reproducindose, con posibilidades de aparicin de mutantes. Sin embargo se acepta que estas alteraciones no se observan hasta los tres aos de mantenimiento.

Congelamiento: Una baja drstica de T disminuye o anula el metabolismo. Cultivo en fase estacionaria (alta resistencia a daos). Densidad Celular Elevada. Agentes crioprotectores. (glicerol 10%, DMSO 10%). Ampollas de plstico en Nitrgeno lquido.

Desventajas Velocidades de congelamiento y descongelamiento. Como criterio general, es el enfriamiento a 1 C min-1 (ya que una rpida congelacin causa ruptura de membranas) hasta -20 C y luego un rpido descenso. -30C: Congelador de frigorfico. No se recomienda debido a la formacin de eutcticos (suspensin

con distintos puntos de congelacin debido a los solutos que pueden daar a las clulas). -70C: Nieve carbnica (CO2 slido) o ultracongeladores. Es el mtodo ms utilizado en los laboratorios de microbiologa. -196C: Nitrgeno lquido. Se utiliza para la conservacin de bacterias, virus y lneas celulares. Liofilizacin: o Congelar rpidamente una suspensin de microorganismos y eliminar el agua como vapor de agua directamente del hielo sin pasar por el estado intermedio lquido. o Los lifilos se conservan entre 0 y 5C durante muchos aos. o Para su recuperacin se resuspende el lifilo en el medio de cultivo adecuado y se incuban a la temperatura adecuada.