Practica 2

Ftima Sarai Lpez Hernndez, Mnica Adriana Rodrguez Zavala, Sarai Ziga Estupian, Abraham Lpez Arellano

26/08/2011

Universidad Autnoma de Zacatecas Francisco Garca Salinas rea de Ciencias de la Salud Unidad Acadmica de Ciencias Qumicas Qumico Farmacutico Bilogo
LABORATORIO DE INMUNOLOGIA DIAGNOSTICA

PRACTICA 2

REACCIONES FEBRILES
* Ftima Sarai Lpez Hernndez, Mnica Adriana Rodrguez Zavala, Sarai Ziga Estupian, Abraham Lpez Arellano Docente: Aracely Gmez Corvera

*7Semestre Grupo C Programa educativo Q.F.B. UACQ, ACS, Campus

UAZ Siglo XXI, carretera Zacatecas-Guadalajara Km 6 s/n ejido La Escondida Cp. 98160 Zacatecas Zac. Agosto-Diciembre 2011 OBJETIVO Realizaremos en el laboratorio las pruebas, con el fin de identificar la presencia de anticuerpos y dar el diagnstico serolgico de algunas enfermedades bacterianas que causan reacciones febriles.

INTRODUCCIN Y FUNDAMENTO Los antgenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella, Brucella y Rickettisia (reaccin cruzada con Proteus OX-19.
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Salmonella. La reaccin de Widal en un mtodo serolgico usado comnmente en el diagnstico de las fiebres tifoideas, entrica y ondulante, la reaccin mide el ttulo del suero contra una suspensin de microorganismo conocidos. La Salmonella son bacilos no esporulados aerobios gramnegativos. Hay tres especies clnicamente importantes de Salmonella: enteritidis, choleraeauis y typhi. Tres sndromes principales, resultan de la infeccin por Salmonella. 1. Gastroenteritis (la forma ms comn). 2. Fiebre tifoidea. 3. Septicemia. Brucella. En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella, casi todas las infecciones humanas por Brucella, se deben a B abortus, B suis o B melitensis. La brucelosis es una enfermedad aguda o crnica que se manifiesta principalmente por escalofros, fiebre y debilidad, ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de fiebre ondulante de la enfermedad. Rickettsias. Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antgenos idiotpicos con Proteus ( OX-19, OX-2 OX-K), esta relacin se us en el diagnstico de tifo. Las especies de Rickettsia son cocobacilos pequeos pleomorfos que funcionan como parsitos intracelulares. La inmunidad por lo general es de larga duracin, con algunas excepciones. El tifus endmico puede causar recadas 10 o 20 aos despus de la aparente recuperacin (enfermedad de Grill Zinseer). La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recadas. FUNDAMENTO Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos, responde produciendo anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo Campus UAZ Siglo XXI | ACS, UACQ, QFB, Sptimo Semestre grupo C Laboratorio de Inmunologa Diagnostica
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especfico. El ttulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad. Para que los resultados tengan un valor diagnstico el ttulo de ellos debe aumentar. MATERIAL 1. Placa de vidrio con divisiones 2. Micropipeta con punta de 0.1ml 3.-Aplicadores de madera 4. Recipiente para residuos 5. Gradilla MATERIAL BIOLGICO. Muestra de suero REACTIVOS 1. Antgeno O Salmonella typhi 2. Antgeno paratyphi A 3. Antgeno H Salmonella typhi 4. Antgeno Paratyphi B 5. Antgeno Brucella abortus 6. Antgeno Proteus OX-19
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PROCEDIMIENTO Mtodo de aglutinacin rpida en placa.

2. Depositar en cada cuadro 0.04ml de suero del paciente para cada uno de los antgenos que se vayan a utilizar

1. Anotar el antgeno correspondiente en la placa de vidrio.

3. A cada gota de suero aadir una gota de cada antgeno.

6. Observar la aglutinacin con ayuda de un microscopio ptico

5. Agitar suavemente la placa por rotacin manual durante 2 3 minutos.

4. Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antgeno)

7. De los antigenos que aglutinen realizar la prueba nuevamente con menor cantidad de suero.

9.Realizar mismo procedimiento si se presenta aglutinacion, reduciendo el suero por mitad en cada ocasion.

8.Interpretar resultados

OBSERVACIONES Y RESULTADOS

Cuando hay reaccin positiva se repite la tcnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma:
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TABLA 1. Representacin del portaobjetos y la correlacin con los ttulos de anticuerpos obtenidos BA
Brucella abortus

H(flagelar) O(somtico)
Salmonella typhi Salmonella typhi

A
paratyphi

B
Paratyphi

OX
Proteus OX-19

Titulo

40l de suero + 1 gota de Ag 20l de suero + 1 gota de Ag 10l de suero + 1 gota de Ag

1:40

1:80

1:160

5l de suero + 1 gota de Ag Los Resultados para el Paciente Marcelo Campos Paratfico O: Positivo 1:40 OX-19 : Positivo 1:80 INTERPRETACION

1:320

El informe del resultado de la prueba se hace tomando en consideracin la dilucin ms alta (ttulos de Ac) aglutinacin. Que en este caso fue 1:40 para antgeno O somtico tfico (Nota 1) y1:80 para antgeno de Proteus OX-19 lo que indica una rickettsiosis. En los dems espacios circulares no se presento evidencia de aglutinacin alguna. Es necesario tener en cuenta que la presencia de ttulos bajos puede ser debida a vacunaciones o infecciones pasadas o subclnicas. Campus UAZ Siglo XXI | ACS, UACQ, QFB, Sptimo Semestre grupo C Laboratorio de Inmunologa Diagnostica
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que se observ en la reaccin positiva donde se

presenta

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Nota 1 Los anticuerpos contra el antgeno O aparecen luego de 6 a 8 das de iniciada la enfermedad y desaparecen posteriormente entre 3 y 6 meses. En general, se recomienda tener en cuenta la fiebre tifoidea con ttulos Anti-O mayor o igual a 1:160-200 y/o H mayor o igual a 1:160- 200 en zonas endmicas en zonas no endmicas se debe pensar con ttulos ms bajos Anti-O 1:50-100.

DISCUSIONES Es conveniente estudiar varias muestras de suero del enfermo con diferencia de cinco a siete das en los casos dudosos, pero en este caso no ser posible realizarlo de esta manera. Aunque es recomendable el uso de controles tanto positivos como negativos para asegurar la validez de los resultados en esta ocasin no lo hicimos. La presencia de Ac anti O se puede explicar porque en tifoideas los anticuerpos llegan a tener ttulos diagnsticos hasta los 8 das despus de la fiebre. Tambin hay que considerar los falsos negativos como toda prueba de laboratorio, entre sus causas tenemos: 1. Antibioticoterapia temprana, la cual, retrasa la aparicin de anticuerpos (descrito principalmente con cloranfenicol 2. Utilizacin de corticosteroides 3. Medicin temprana de anticuerpos (primera semana) 4. Inmunodeficiencias adquiridas y congnitas. 5. Portadores crnicos de Salmonella typhi.

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CONCLUSION La importancia de la aglutinacin en reacciones febriles radica en ser un mtodo serolgico, rpido, barato, y ampliamente conocido para el diagnstico de la fiebre tifoidea; brucelosis y rickettsiosis sin embargo, tiene grandes limitaciones por reacciones antignicas cruzadas con otras bacterias (principalmente enterobacterias, incluyendo Salmonellas no typhi), parsitos, virus y hongos, llevando con frecuencia al clnico a sobre diagnosticar sndromes febriles como fiebre tifoidea por lo que no es determinante su uso como prueba nica al momento de diagnosticar y se tendran que hacer otras pruebas para dar un buen diagnostico y posterior tratamiento correcto.

REFERENCIAS

Abraham E. Katime Ziga, Reaccin de Widal - interpretacin clnica Rev. Panam. Infectol. 2006;8(2):40-44 Pumarola, A. Salmonella. Microbiologia y Parasitologa Mdica.2da edicin. Salvat Editores 1987:37:422-430. Braunwald, fauci, kasper, Longo, Jameson, editores.Harrison: principios de Medicina Interna 15. Ed. Madrid, Mcgraw-hill-Interamericana, 2002, p.2164-36. Heber Orlando Siachoque ,Inmunologa Diagnostico e interpretacin de pruebas de laboratorio Centro editorial Universidad del Rosario Bogot primera edicin 2006

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