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ENZIMAS
1. Introduccin
En las clulas ocurren millares de reacciones qumicas controladas y organizadas. El conjunto de todas las reacciones qumicas de la clula que permiten su crecimiento, conservacin y reparacin recibe el nombre de Metabolismo. Se trata de una actividad celular muy coordinada, desempeando funciones concretas y que en definitiva produce una corriente de energa dentro de la clula, lo que constituye la esencia de la vida. Cuando una substancia entra en la clula se moviliza dentro de ella para participar en el metabolismo y, normalmente, va sufriendo reacciones sucesivas que originan diferentes substancias llamadas metabolitos intermedios, hasta llegar finalmente a una substancia que se almacenar o eliminar al exterior. Las enzimas son biocatalizadores, es decir, substancias que aumentan la velocidad de las reacciones qumicas del metabolismo de los ser vivos (sin aumentar la temperatura). Desde el punto de vista qumico, son protenas globulares, solubles en agua y difunden con facilidad en los lquidos orgnicos.

2. Catlisis
Para que una reaccin cualquiera de tipo A ---------- P (donde A son los reactivos y P los productos) se lleve a cabo, es necesario que las molculas reaccionantes (molculas de A) entren en contacto, es decir, choquen. El choque produce reaccin (es decir, se formarn los productos) si las molculas tienen suficiente energa como para que se puedan relajar o romper algunos enlaces y formarse otros nuevos. Esta energa mnima necesaria para que se produzca la reaccin se denomina energa de activacin y lleva a los reactivos a conseguir el estado de transicin o estado activado, a partir del cual, proseguir la reaccin y se formarn los productos de la misma. Se define la energa de activacin como la cantidad de energa, expresada en caloras, necesaria para que todas las molculas de un mol de reactivo, a una determinada T, puedan alcanzar el estado de transicin. La energa de activacin puede conseguirse en un laboratorio por medios fsicos (con un aumento de la temperatura o con descargas elctricas) o bien por medios qumicos (empleo de catalizadores). Las clulas resuelven este problema empleando las enzimas. Estas son biocatalizadores o catalizadores biolgicos, molculas de naturaleza proteica que se unen de manera pasajera al sustrato (nombre que recibe el reactivo de una reaccin metablica) y que disminuyen la energa de activacin, permitiendo que gran parte de las molculas de sustrato puedan reaccionar al mismo tiempo, y por lo tanto conseguir antes el estado activado.

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El resultado es que la reaccin se produce ms rpidamente, la enzima no sufre ninguna alteracin en el proceso y se puede volver a utilizar repetidamente (no se consume en la reaccin). Las enzimas no alteran el equilibrio de la reaccin, aunque aceleran su consecucin.

3. Estructura y composicin de las enzimas

Las enzimas son protenas globulares constituidas por una o varias cadenas polipeptdicas. Estas cadenas se pliegan de modo que forman huecos y cavidades en la superficie de la molcula (son protenas globulares). Las substancias que van a ser transformadas, los sustratos, encajan en estas cavidades de la enzima donde ocurrir la formacin de los productos. Esta parte de la molcula se denomina centro activo. De todos los aminocidos que constituyen la protena enzimtica, slo unos pocos forman parte del centro activo. Entre ellos podemos diferenciar dos tipos: - Aminocidos de fijacin. Encargados de establecer enlaces transitorios con el sustrato. - Aminocidos catalizadores. Se necesitan para desarrollar la actividad cataltica, obligando al sustrato a conseguir el estado de transicin. Los dems aminocidos de la protena son los llamados aminocidos estructurales. Aunque no forman parte del centro activo, sirven de esqueleto estructural para mantener la conformacin y disposicin en el espacio del centro activo. Algunas enzimas estn constituidas slo por protenas (una o varias cadenas polipeptdicas), pero otras enzimas (holoenzimas) estn formadas por una protena (apoenzima) y precisan de algn componente adicional que tambin se une al sitio activo para facilitar la catlisis. Esta molcula se denomina cofactor, y puede ser: - Un in metlico como Fe2+, Mg2+, Zn2+, etc. - Una molcula orgnica de naturaleza muy variada. Cuando se trata de substancias que se unen a ellas de modo transitorio, (enlaces no covalentes), como ATP, FAD, Coenzima A, etc., se denominan coenzimas. Si el cofactor orgnico est permanentemente unido a la enzima por un enlace covalente, recibe entonces el nombre de grupo prosttico.

4. Mecanismo de accin enzimtica

En una reaccin enzimtica podemos distinguir: la enzima E que permanece inalterada hasta el final del proceso; los substratos S o substancias que van ser modificadas; y los productos P que resultan de la reaccin. Adems tambin debemos considerar el complejo formado por la unin transitoria entre la enzima e y su substrato, el llamado complexo ES. E + S --- ES ------ E + P

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Si la interaccin entre la enzima y el sustrato se hace con una orientacin idnea, pronto se forman enlaces dbiles entre ambos que mantendrn la molcula en esa posicin, para originar el complejo ES. A continuacin tiene lugar a catlisis con la formacin de los productos, que se desprendern de la enzima, quedando sta de nuevo dispuesta para una nueva molcula de sustrato. Las enzimas actan en muy pequeas cantidades, se recuperan al final de la reaccin, y aumentan la velocidad de la reaccin hasta 106 veces ms que sin catalizador.

5. Propiedades de las enzimas

Las enzimas presentan todas las propiedades de las protenas (desnaturalizacin, especificidad, etc) y, adems, tienen caractersticas particulares que las convierten en los mejores catalizadores que existen. Las ms importantes son: especificidad, gran actividad cataltica y actuar en condiciones suaves de pH y T.

5.1 Especificidad.
Las caractersticas del centro activo y la necesaria complementariedad con el substrato determinan la elevada especificidad de la accin enzimtica, que se establece a dos niveles: de accin y de substrato Especificidad de accin. Una enzima slo realiza una transformacin de todas las que puede sufrir un substrato; otra enzima, con una especificidad diferente, provocar otra reaccin en el mismo substrato. Especificidad de substrato. Cada enzima acta sobre un substrato o sobre un grupo reducido de substratos. La especificidad de substrato puede ser: - Absoluta. La enzima acta sobre un nico substrato. Por ejemplo, la enzima ureasa slo acta sobre la urea, a la que desdobla en CO2 y NH3. - De grupo. La enzima reconoce a un determinado grupo de molculas. Por ejemplo, la glucosidasa que acta sobre todas las molculas que pertenecen al grupo de los glucsidos. - De clase. La actuacin de la enzima depende del tipo de enlace y no del tipo de molcula. Por ejemplo, las fosfatasas separan grupos fosfato de cualquier tipo de molculas. - Estereoqumica. La enzima acta sobre uno de los ismeros pticos pero no sobre el otro. Por ejemplo, la aspartasa acta sobre el L Aspartato, pero no sobre su forma D. Fisher en 1894, compar la complementariedad existente entre el substrato y la enzima con la existente entre la llave y su cerradura correspondiente. A este modelo se le llama modelo de la llavecerradura. Ms tarde, en el 1958, Khosland, propuso que lo anterior no es exacto. Segn l, muchas veces el centro activo, aunque presenta una alta complementariedad con el sustrato, slo se adapta

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totalmente a l en el momento en que se establece el contacto entre ambos. Sera comparable a lo que sucede entre un guante y la mano que le corresponde; el guante vaco tiene una forma semejante a la de la mano, aunque la forma exacta slo la adquirir cuando la mano se introduzca en l. Este modelo recibe el nombre de modelo del encaje inducido.

5.2 Gran actividad cataltica

Mayor que cualquier otro catalizador; actan en muy pequeas cantidades y aumentan muchsimo la velocidad de la reaccin. Aceleran las reacciones qumicas sin alterar su equilibrio y quedan libres despus de la transformacin para actuar sobre otro substrato; por lo tanto se recuperan y no dejan subproductos

5.3 Actan en condiciones suaves de pH y T

Tal es el estado en el que se encuentran las disoluciones (hialoplasma, nucleoplasma, etc.) de los seres vivos (hay algunas excepciones, por ejemplo, las enzimas presentes en el jugo gstrico actan a pH = 2).

6. Cintica enzimtica
La cintica enzimtica es el estudio de la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. Existen distintos factores que modifican dicha velocidad. Los ms importantes son: concentracin de sustrato, pH, T y presencia de inhibidores. a. Concentracin de substrato Si en una reaccin qumica, la concentracin de la enzima se mantiene constante y vamos aumentando la concentracin de sustrato, la velocidad de reaccin aumenta de manera proporcional a ese incremento de concentracin de sustrato. El proceso contina hasta que en un determinado momento, aunque aumente la concentracin de sustrato, la velocidad de la reaccin no aumenta ms. Decimos entonces que la enzima se encuentra saturada por su sustrato. Esto llev la Michaelis y Menten a formular una teora general sobre la accin enzimtica proponiendo la siguiente reaccin: v mx es la velocidad a la que todas las molculas de E estn combinadas con molculas de S Km es la constante de Michaelis-Menten, y es la concentracin de substrato a la que la enzima alcanza la mitad de su velocidad mx. Km indica la afinidad de la enzima por su substrato. A mayor Km menor ser dicha afinidad, ya que ser mayor la concentracin de S necesario para conseguir un aumento de la velocidad de la reaccin.

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b. Temperatura Para todas las enzimas existe una T ptima, a la cual su actividad es mxima. A muy bajas temperaturas no son activas. A T un poco ms baja de la ptima, su actividad es menor, ya que las enzimas se hallan muy rgidas. A T un poco mayores de la ptima su actividad disminuye ya que la movilidad de los tomos dificulta la unin de la enzima con su substrato. A T mayores de 55C la enzima se desnaturaliza. c. pH Para la mayora de las enzimas existen un pH mnimo y un pH mximo entre los cuales son activas, adems de un pH ptimo, para el cul su actividad es mxima. Hay tambin algunas enzimas a las que no les afectan las variaciones de pH. A qu se debe? Si los aminocidos del centro activo, u otros aminocidos de la enzima tienen grupos que se ionizan segn el pH del medio, las variaciones de pH afectarn a la actividad de la enzima. Si los aminocidos de la enzima no poseen grupos susceptibles de ionizarse segn las variaciones de pH no les afectarn a las variaciones del mismo. d. Presencia de inhibidores La mayor parte de las enzimas se pueden inhibir mediante substancias especficas que, en algunos casos, disminuyen su actividad y en otros la impiden completamente. Los inhibidores pueden ser perjudiciales o buenos; por ejemplo el AZT es un inhibidor de la transcriptasa inversa (enzima que acta en la replicacin del RNA del VIH) y retrasa por lo tanto el desarrollo del SIDA. Existen dos tipos de inhibidores: Irreversibles. El inhibidor o veneno se combina con la enzima de manera covalente y la modifica o destruye. La enzima ya no recupera su forma activa. Esto ocurre, por ejemplo, con algunos insecticidas que inhiben a la enzima encargada de sintetizar un neurotransmisor; ciertos antibiticos como la penicilina que inhibe la transpeptidasa que participa en la construccin de la pared bacteriana; o el cianuro que inhibe a la citocromo oxidasa, enzima que participa enla respiracin celular. Reversibles. El inhibidor establece una unin con la enzima que no es permanente y la enzima se recupera cuando la molcula inhibidora se desprende. Puede ser: Inhibicin competitiva si el inhibidor compite con el substrato por la unin con el centro activo, por ser una molcula parecida al substrato. El inhibidor competitivo disminuye la cantidad de molculas de E que se pueden unir al S. Esta inhibicin puede superarse si aumenta la concentracin de S. Inhibicin no competitiva si la unin de la substancia inhibidora se produce fuera del
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centro activo de la enzima. La unin del inhibidor con la enzima modifica la conformacin de esta e impide su unin con el S. La presencia de inhibidores puede considerarse como un mecanismo de regulacin de la actividad enzimtica.

7. Regulacin de la actividad enzimtica

Necesidad de regulacin de la actividad enzimtica. En una clula estn ocurriendo en un determinado momento millares de reacciones qumicas que forman parte del metabolismo. El normal funcionamiento de una clula depende en gran medida de la capacidad de esta para controlar y regular la actividad que realizan sus enzimas en cada momento y circunstancia segn las necesidades de la clula. Mtodos de regulacin: a. Control gentico b. Regulacin alostrica c. Regulacin por modificaciones covalentes. a. Control gentico Una reaccin enzimtica ser ms rpida cuanto mayor sea el nmero de molculas de enzimas que la realizan. Este nmero depende de la intensidad con la que se est transcribiendo la informacin del ADN para obtener nuevas molculas de enzima. Por lo tanto, la regulacin de la transcripcin es el mecanismo bsico de control de las reacciones enzimticas. El control gentico por lo tanto es un mecanismo muy econmico para la clula pues evita tener que gastar recursos en la obtencin de enzimas que no precisa. Sin embargo es un mecanismo relativamente lento. b. Regulacin alostrica Este tipo de regulacin incluye dos mecanismos: las enzimas alostricas y los sistemas multienzimticos en rutas metablicas. b. 1. Enzimas alostricas Las enzimas alostricas son enzimas que presentan dos conformaciones, una activa y otra inactiva y que adems tienen ms de un centro de actividad: un centro activo para la unin con el substrato y otro centro, denominado centro alostrico (que pueden ser ms de uno) para la unin con el modulador o efector que, puede ser negativo o inhibidor o positivo o activador. Caractersticas de las enzimas alostricas: - Poseen ms de una cadena polipeptdica, o sea, tienen estructura cuaternaria. - No siguen la cintica de Michaelis- Menten (la velocidad de las reacciones catalizadas por estas enzimas no es hiperblica sino sigmoidea), ya que por la interaccin de otras molculas el aumento inicial de la concentracin de S provoca un aumento menor de la velocidad. Las enzimas alostricas permiten la autorregulacin de la actividad enzimtica de dos maneras: - Regulacin por retroinhibicin o inhibicin feed back. En enzimas que estn en la conformacin activa. El producto de la reaccin acta como modulador (-) o inhibidor, se
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une al centro alostrico y provoca el cambio de conformacin de la enzima a la forma inactiva. - Regulacin por induccin enzimtica. En enzimas que se encuentran en la conformacin inactiva. Alguno de los reactivos acta como modulador (+) o activador, se une al centro alostrico y provoca el cambio de la forma inactiva de la enzima a la forma activa. b. 2 Sistemas multienzimticos en rutas metablicas. Va o ruta metablica es una sucesin de reacciones qumicas que conduce desde una substancia inicial, S, a travs de diferentes compuestos intermedios, los metabolitos intermedios, hasta una substancia final, P. En estas rutas el producto de una reaccin es el substrato de la siguiente. Ejemplo: S -----------A ------------ B ------------------ C -------------------P

Metabolitos intermedios (tambin intermediarios metablicos) La mayor parte de las enzimas de una clula actan en rutas metablicas, donde cada enzima realiza una tarea metablica especfica. Muchas veces estas enzimas estn fsicamente unidas en un complejo multienzimtico para facilitar la transferencia de sustratos. En estos sistemas multienzimticos, la primera enzima de la secuencia es de tipo alostrico y acta cmo reguladora de la velocidad del conjunto. Por otra parte, suele ser la enzima de menor velocidad mxima, para evitar que se acumulen metabolitos intermedios y que se detenga la ruta.

Las enzimas reguladoras presentan una actividad que vara segn ciertas seales moleculares que reciben, aumentando o disminuyendo la velocidad general de la secuencia. En muchas ocasiones la molcula que influye en la actividad de esta primera enzima es el producto final de la ruta: si la cantidad del mismo es excesiva, este acta como inhibidor de la enzima alostrica, para que el sistema disminuya la velocidad; es el mecanismo denominado retroinhibicin o inhibicin feed-back.

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c. Regulacin por modificaciones covalentes. Una forma muy frecuente de controlar la actividad enzimtica es producir molculas de enzima en su forma inactiva, en forma de unos precursores denominados zimgenos o proenzimas. As, por ejemplo: - Por hidrlisis parcial, el zimgeno o proenzima se vuelve funcional. Es el caso de muchas enzimas digestivas, que se segregan como pepsingeno, tripsingeno, etc. y sern activadas en el tubo digestivo en presencia de otro componente hidroltico. - Una forma muy frecuente de activacin consiste en introducir un grupo funcional en la enzima inactiva. Por ejemplo ciertas enzimas pueden fosforilar a otra que entonces se vuelve activa al aadirle un grupo fosfato.

8. Nomenclatura y clasificacin de las enzimas

La nomenclatura ms habitual se basa en su especificidad de substrato y de reaccin. Por eso, el nombre de las enzimas viene determinado por el substrato principal al que se unen, junto a la reaccin que catalizan y finalizado con el sufijo asa (Ejemplo: piruvato carboxilasa). Sin embargo, no siempre ocurre as, y algunas enzimas tienen nombres especficos que conservan porque se emplean habitualmente, como la tripsina y la pepsina. El sistema actual de clasificacin, dado por la Comisin Internacional de las Enzimas, las agrupa en seis clases basndose en el tipo de reaccin que catalizan: 1. Oxidorreductasas (catalizan reacciones de oxidacin y reduccin de los substratos. Las ms importantes son las oxidasas que oxidan los substratos al aceptar sus electrones y las deshidrogenasas, que separan tomos de H de los substratos): AH + O2 ------ A + H2O (AH se oxida; O2 se reduce) 2. Transferasas (catalizan reacciones de transferencia de grupos, como las quinasas): AX + B --------- A + BX 3. Hidrolasas (hidrlisis: rotura de enlaces covalentes por introduccin de una molcula de agua: lipasas, proteasas, carbohidrasas, etc.): A-B + H2O --------- AH + BOH 4. Liasas (se produce la rotura de una molcula sin la incorporacin de agua: desaminasas y descarboxilasas): R-CO-COOH ---------- R-CHO + CO2 5. Isomerasas (reordenacin de grupos dentro de la misma molcula para dar ismeros): Glicosa-6-P --------- Fructosa 6-P 6. Ligasas (formacin de enlaces covalentes usando ATP): A + B + ATP ---------- ADP + P + AB

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9. Coenzimas y vitaminas
Las coenzimas son cofactores de naturaleza orgnica que se unen a las enzimas por interacciones dbiles y, actan como transportadoras transitorias de grupos qumicos, que ceden o reciben los diferentes sustratos. Algunos intervienen en la transferencia de grupos fosfato, en reacciones de oxidacin-reduccin, o en la transferencia de otros grupos qumicos. Muchas coenzimas, imprescindibles para una gran cantidad de procesos metablicos, no se sintetizan en la propia clula (sta no puede sintetizarlas) sino que deben ser ingeridas con la dieta como micronutrientes (pues las cantidades en las que se encuentran en los alimentos son muy bajas) para el normal funcionamiento del organismo; por eso muchas coenzimas o precursores de coenzimas son vitaminas. Actualmente se conocen las siguientes vitaminas, que se dividen en das clases: Hidrosolubles. Solubles en agua. Tienen principalmente funciones de coenzimas o son precursores de las mismas. o Vitamina B1. En el hgado se transforma en una coenzima que participa en las reacciones de transferencia de grupos relacionados con los glcidos. Su carencia provoca beri-beri con degeneracin neuronal y debilidad muscular. o Vitamina B2. Forma parte de coenzimas que intervienen en reacciones de oxidorreduccin (FAD). Su falta causa alteraciones en la piel, ojos, etc. o Vitamina B3 (PP). Tambin forma parte de coenzimas de enzimas deshidrogenasas (NAD). La carencia produce trastornos cutneos y nerviosos. o Vitamina B6. Forma parte de las coenzimas que participan especialmente en el metabolismo de las protenas. Su falta ocasiona anemia y alteraciones nerviosas. o Vitamina B12. Coenzima que transporta grupos funcionales, como en la formacin de los glbulos rojos. Su carencia produce anemia. o Vitamina C. (cido ascrbico). Interviene en la formacin de nuevos tejidos o en el metabolismo del Fe. Tambin funciona como antioxidante celular. Su falta origina escorbuto (hemorragias espontneas, menor proliferacin celular, etc.). Liposolubles. Son insolubles en agua, pues corresponden a terpenos o esteroides. Normalmente no funcionan como coenzimas. - Vitamina A. Interviene en la regeneracin de los epitelios y en los procesos de percepcin de la luz. La carencia provoca ceguera nocturna, y debilidad en piel y mucosas. - Vitamina D. Regula la absorcin de Ca y P. Su carencia produce raquitismo. - Vitamina E. Participa en el metabolismo de lpidos y tambin como es antioxidante. Su falta se relaciona con trastornos musculares e intestinales. - Vitamina K. Interviene en la coagulacin sangunea. Su carencia provoca hemorragias.

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Principales coenzimas FAD (flavn-adenn dinucletido): transferencia de electrones y protones. FMN (Flavn mononucletido): transferencia de electrones y protones. NAD+(nicotn-adenn dinucletido): transferencia de electrones y protones. NADP+ (nicotn-adenn dinucletido fosfato): transferencia de electrones y protones. Coenzima A: transferencia de grupos acetilo (por ejemplo, en la descarboxilacin del cido pirvico) y de grupos acilo en general. Coenzima Q: transferencia de electrones en la cadena respiratoria. Coenzima B12: transferencia de grupos metilo o hidrgenos entre molculas. TPP (Pirofosfato de tiamina): transferencia de grupos aldehdo; forma parte, entre otros, del complejo piruvato deshidrogenasa. Vitamina C PLP (fosfato de piridoxal): transferencia de grupos amino. PMP (fosfato de piridoxamina): transferencia de grupos amino. FH4 (cido tetrahidroflico): transferencia de grupos formilo, metenilo e metileno. Biocitina: transferencia de dixido de carbono. cido lipoico: transferencia de hidrgenos, grupos acilo y metilamina. Coenzimas y vitaminas. Muchas vitaminas, o sus derivados, actan como coenzimas: Vitamina B1 o tiamina: su derivado, el pirofosfato de tiamina es esencial para el metabolismo energtico de los glcidos. Vitamina B2 o riboflavina: sus derivados son nucletidos coenzimticos con gran poder reductor como el FAD y el FMN. Vitamina B3 o niacina: sus derivados son nucletidos coenzimticos con gran poder reductor como el NAD+ y el NADP+. Vitamina B5 o cido pantotnico: su principal derivado es la coenzima A (Co-A), con gran importancia en diversos procesos metablicos. Vitamina B6 o piridoxina. Sus principales derivados son los coenzimas PLP (fosfato de piridoxal) y PMP (fosfato de piridoxamina), esenciales en el metabolismo de los aminocidos. Vitamina B7 o biotina (vitamina H). Su derivado, la biocitina, es esencial para el funcionamiento de numerosas carboxilasas (enzimas). Vitamina B9 o cido flico (vitamina M). Su derivado, el FH4 es esencial en la sntesis de purinas. Vitamina B12 o cianocobalamina: coenzima B12. Vitamina E y Vitamina K: qumicamente similares a la coenzima Q.

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