HEMOCENTRO DE CAMPINAS Servio de Transfuso do Laboratrio de Compatibilidade 2010

A amostra e a requisio transfusional: o primeiro passo antes de inicar os testes imunohematolgicos de uma rotina transfusional....

A conferncia das amostras e dos pedidos...

Aceitar se: - Corresponder ao impresso padronizado para o procedimento solicitado: Requisio de Procedimento Transfusional - Impresso grfico Apresentar campos obrigatrios preenchidos e legveis (caneta esferogrfica azul ou preta): - Nome do paciente completo e sem abreviaes; - Nmero de registro hospitalar; - Localizao: hospital, enfermaria e leito; - Sexo, idade, peso; - Diagnstico, indicao de transfuso (deve conter os resultados de exames laboratoriais: concentrado de hemcias = HB; concentrado de plaquetas = contagem plaquetas; plasma fresco congelado = RNI); - Rotina para atendimento (programada, rotina, urgncia ou emergncia); - Componente e quantidade ou volume desejado; - Data, nome / assinatura do mdico e CRM; - No estiver rasurada e/ou carbonada; As amostras usadas para os testes transfusionais, devem ser coletadas para este fim especfico. Aceitar as amostras, se forem obedecidos todos os critrios abaixo relacionados: - Cada amostra deve estar rotulada individualmente (uma etiqueta para cada tubo) e a identificao deve estar legvel; - O rtulo da amostra deve estar com nome e registro do paciente concordantes com os que constam na RPT; O rtulo da amostra deve conter a data da coleta da amostra e o nome de quem coletou . 01 tubo de sangue coletado com anticoagulante (tubo para tipagem) 01 tubo de sangue coletado sem anticoagulante (tubo seco) Se: Qualquer um dos critrios no estiverem conformes com os estabelecidos acima: Reter a amostra no conforme no laboratrio,(em local devidamente especificado),devolver a RPT e solicitar novas amostras; Assim que chegar as novas amostras solicitadas (e estando conformes com os critrios de aceitao, desprezar amostras no conformes.)

*Modelo do impresso e amostras

TESTES IMUNOHEMATOLGICOS PR- TRANSFUSIONAIS Os testes imunhematolgicos pr- transfusionais, tem por finalidade assegurar os melhores resultados possveis de uma transfuso sangunea, propiciando a mxima segurana ao paciente e preveno de reaes transfusionais hemolticas. Quais os testes imunohematolgicos obrigatrios na rotina transfusional? O servio de hemoterapia deve realizar os testes imunohematolgicos pr-transfusionais, segundo os critrios estabelecidos pelo Ministrio da Sade, sendo obrigatrios: - Tipagem ABO / Rh; - Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI); - Prova de compatibilidade; - Reclassificao ABO/Rh do doador e receptor. fundamental o acompanhamento das publicaes do Ministrio da Sade com as normas tcnicas que definem os critrios para a atividade hemoterpica no Brasil. Quais os procedimentos bsicos necessrios antes de executar os testes imunohematolgicos? 1- Limpe a bancada e providencie todos os materiais e equipamentos necessrios para a realizao do teste. 2- Antes de iniciar o procedimento, verifique se os equipamentos esto em condies adequadas para uso. 3- Organize a bancada; 4- Retire os reagentes utilizados em cada teste da geladeira e verifique se eles esto em condies de uso e o prazo da validade, pois reagentes vencidos possibilitam resultados falso- positivo e falsonegativo. 5- Faa a inspeo visual dos reagentes de hemcias observando se existe hemlise, grumos, alterao de cor, pois qualquer alterao torna o reagente imprprio para o uso; 6- Confira a amostra e o pedido transfusional e inicie a rotina seguindo os procedimentos detalhados de cada teste. No se esqueam de identificar os tubos... Ateno: Proteja-se dos riscos de contaminao, para isso utilize sempre equipamentos de proteo individual (avental, luvas, culos e mscara ou protetor facial) e manipule as amostras como material potencialmente infectante.

Classificao para os Sistemas ABO/Rh Por que o sistema ABO considerado o mais importante na medicina transfusional? A importncia do sistema ABO na prtica transfusional est relacionada gravidade das reaes transfusionais hemolticas devido presena regular no plasma do receptor de anticorpos "naturais" contra os antgenos A e B. Os anticorpos "naturais" causam hemlise predominantemente intravascular podendo levar o receptor morte. Qual a importncia do sistema Rh? O sistema Rh o maior e mais complexo sistema de grupos sangneos, representando um dos sistemas de maior interesse clnico, por seu envolvimento na doena hemoltica perinatal, reaes transfusionais hemolticas e nas anemias hemolticas auto-imunes. Os principais antgenos do Sistema Rh so: D, C/c, E/e. Esses cinco antgenos so os que mais induzem a produo dos anticorpos que esto relacionados com a maioria dos problemas associados a aloimunizao por transfuso e gestao. Quais as provas realizadas para definir a tipagem ABO? A tipagem ABO definida atravs das provas direta e reversa. Na prova direta pesquisa-se os antgenos do sistema ABO que esto presentes nas hemcias do indivduo, enquanto que, na prova reversa procura-se determinar os anticorpos do sistema ABO que esto presentes no soro ou no plasma do indivduo.

PROCEDIMENTOS PARA TIPAGEM ABO/ RH O procedimento de tipagem ABO/Rh determina o grupo sangneo ABO/Rh em doadores de sangue, gestantes, recm-nascidos e pacientes.

DESCRIO DA TCNICA: 1- Identificar um tubo com o nmero da amostra do paciente e preparar uma suspenso de hemcias a 5% (19 gotas de salina + 1 gota do concentrado de hemcia). 2- Identificar 7 tubos com o nmero da amostra do paciente e as seguintes identificaes AntiAB, AntiA, AntiB, AntiD, Controle(Ctrl), ReversaA (RA), RervesaB(RB). 3- Colocar uma gota dos anti-soros correspondentes Anti-AB, Anti-A, Anti-B, Anti-Rho(D), Ctrl Rh em cada tubo. 4- Adicionar uma gota da suspenso de hemcias do paciente aos tubos com os anti-soros.

5- Nos tubos RA e RB, colocar duas gotas de soro/plasma em cada e adicionar uma gota de suspenso do reagente de hemcias A1 e B, respectivamente.

6- Homogeneizar todos os tubos e centrifug-los por 15 segundos de 3000 a 3600 rpm. Agitar levemente os tubos, realizando a leitura, um a um, sobre um fundo branco ou aglutinoscpio. Ler e anotar a intensidade da aglutinao (de 0 a 4+).

7- Comparar os resultados de aglutinao obtidos nas provas direta e reversa e classific-los conforme tabela abaixo:

Prova Direta AB + + + + + + O O A + + O O + + O O B O O + + + + O O D + O + O + O + O C. Rh O O O O O O O O

Reversa HA1 O O + + O O + + HB + + O O O O + +

Interpretao A+ AB+ BAB + AB O+ O-

= A+

= B+

= O+

= AB+

= OObservaes: os resultados das provas direta e reversa devem ser concordantes, caso eles se apresentem discrepante, deve-se repetir o procedimento completo. Se a discrepncia no for solucionada, comunicar o laboratrio de referncia. O controle (-C) do reagente deve ser feito em paralelo com o teste de tipagem Rh (inclusive ambos devero ser do mesmo fabricante), para evitar falsos resultados Rh positivos. Se o controle for positivo, o resultado da tipagem Rh deve ser revisto. Normalmente indivduos que possuem anticorpos aderidos s hemcias (Coombs Direto positivo) apresentam controles positivos. As amostras com discrepncia ABO devero ser encaminhadas aos centros de pesquisa. Em relao ao Rh, os indivduos podem ser: Rh positivo/ Rh negativo CDE positivo/ Rh negativo CDE negativo. todos os resultados de Tipagem Rh D negativo se aplica a pesquisa de D fraco.

INVESTIGAO DO ANTGENO D FRACO A pesquisa do antgeno D fraco realizada em amostras que apresentam reaes fracas/nulas em testes de aglutinao direta com soro anti-D. O antgeno D fraco se apresenta como uma expresso enfraquecida de D, reagindo de maneira varivel com os antisoros anti-D comerciais. Ele normalmente determinado atravs do teste indireto da antiglobulina humana (AGH).

DESCRIO DA TCNICA: 1- Rotular 3 tubos: anti-D, anti-CDE, anti-Ctrh (anotar em cada tubo o nmero da amostra do paciente); 2- Colocar uma gota da suspenso a 5% (a mesma suspenso preparada para a determinao do grupo sanguneo) nos tubos e adicionar 1 gota dos soros correspondentes; 3- Homogeneizar e centrifugar os tubos por 15 segundos (3000 a 3600 rpm); 4- Agitar levemente os tubos, realizando a leitura, um a um, sobre um fundo branco ou aglutinoscpio; 5- Ler e anotar a intensidade da aglutinao (de 0 a 4+). 6- Em seguida, incubar todos os tubos a 37oC durante 20 minutos ou conforme instruo de cada fabricante do reagente; 7- Lavar 3 vezes em salina e decantar totalmente o sobrenadante; 8- Adicionar 1 gota de soro anti-IgG e centrifugar por 15 segundos de 3000 a 3600 rpm; 9- Agitar levemente os tubos, realizando a leitura, um a um, sobre um fundo branco ou aglutinoscpio. Ler e anotar a intensidade da aglutinao (de 0 a 4+); 10- Interpretar resultados conforme a tabela. Anti- CDE 0 + + * Anti-D 0 0 + * Controle Rh 0 0 0 + Resultado Rh- CDE- DFRh- CDE+ DFRh+ Teste invlido

Realizar o controle de coombs aos tubos com resultados negativos, adicionando 1 gota de Controcel. Centrifugar por 15 segundos de 3000 a 3600 rpm. Ler e observar se houve aglutinao. Este procedimento obrigatrio a presena de aglutinao, pois significa que o soro antiglobulina est reagindo.

Observaes: as reaes positivas tm geralmente intensidade de aglutinao de 2+ ou mais. Se ocorrer reao mais fraca, outros estudos (utilizao de uma bateria de soros anti-D policlonais e monoclonais de lotes e procedncias diferentes, adsoro ou eluio) precisam ser realizados antes da concluso final. Os resultados positivos no anti-D so considerado como "D fraco". O antgeno Rh D fraco deve ser interpretado como Rh positivo. Quando o controle do Rh se apresentar positivo, o teste no pode ser interpretado e um teste de coombs direto deve ser realizado.

Se a tipagem Rh do receptor no puder ser definida e a transfuso for essencial, deve ser administrado sangue Rh negativo.

PESQUISA DE ANTICORPOS IRREGULARES (PAI OU COOMBS INDIRETO) O P.A.I. tem como objetivo pesquisar no soro do paciente a presena de aloanticorpos irregulares voltados contra antgenos clinicamente significantes de importncia transfusional e/ou gestacional. Os anticorpos clinicamente significantes so os anticorpos contra antgenos eritrocitrios (principalmente contra os sistemas Rh, Kell, Duffy, Kidd, Lewis, MNSs), estando eles associados diminuio da sobrevida de hemcias transfundidas e reaes transfusionais. A PAI pode impedir de um receptor com um anticorpo clinicamente significante seja transfundido com hemcias que apresentam o antgeno correspondente. Esta tcnica deve ser feita no soro de todos os pacientes antes de qualquer transfuso. As tcnicas de rotina normalmente utilizadas podem ser realizadas em tubo ou gel e em diferentes meios como LISS, PEG e ENZIMAS, os quais tm por finalidade aumentar a sensibilidade do teste. Geralmente, a deteco de anticorpos realizada testando o soro do paciente contra 2 e/ou 3 clulas de hemcias de reagentes de doadores fenotipados para a maioria dos antgenos comuns, preparadas comercialmente. P.A.I. em Polietilenoglicol - (Bio PEG) - tubo Bio PEG (polietilenoglicol) uma macromolcula que retira a gua do meio de suspenso das hemcias permitindo uma maior concentrao dos anticorpos ao redor das hemcias em suspenso, favorecendo a aglutinao. DESCRIO DA TCNICA: 1- Marcar dois tubos: I, II (ambos devem ser identificados com o nmero da amostra teste); 2- Em cada tubo, adicionar 2 gotas de soro do paciente + 1 gota do reagente de hemcia de triagem I e II, respectivamente; 3- Acrescentar 2 gotas de Bio PEG, homogeneizar e no centrifugar; 4- Incubar a 370C por 15 minutos; 5- NO centrifugar (pois este potencializador forma um precipitado de protenas que impede a observao da aglutinao antes da lavagem); 6- Lavar as hemcias 3 vezes com salina (sempre que desprezar os sobrenadantes, agitar os tubos para que ocorra o desprendimento total do boto formado no fundo do tubo; s depois acrescentar novamente a salina); 7- Decantar completamente o sobrenadante final, desprender o boto formado e adicionar 1 gota de soro antigamaglobulina anti-IgG; 8- Homogeneizar e centrifugar por 15 segundos a 3400 rpm; 9- Examinar a aglutinao das hemcias e registrar os resultados de acordo com a ausncia ou presena de aglutinao, anotando sempre a intensidade de aglutinao.

Ao resultado negativo preciso realizar a validao da reao com controle de Coombs: - Controle de Coombs positivo valida o resultado negativo da PAI; - Controle de Coombs negativo invalida a reao e indica que o resultado da PAI falsonegativo. Nesse caso preciso repetir a PAI. Os testes positivos devem ser encaminhados para laboratrio especializado para realizao da identificao(s) do(s) anticorpo(s). Neste caso, a transfuso de hemcias deve ser clula antgeno(s) - negativo(s) para o anticorpo identificado. No se esquecer... ao encaminhar as amostras para o laboratrio especializado, enviar tambm o histrico do paciente (idade, diagnstico, antecedentes transfusionais, gestao/aborto, medicao, etc.); Observaes: para se evitar reaes falso-positivas melhor utilizar o soro Anti-IgG do que o soro antiglobulina poliespecfico.

TESTE DIRETO DA ANTIGLOBULINA (TDA) ou COOMBS DIRETO O TDA tem por finalidade a deteco de anticorpos ou componentes do complemento fixados s hemcias in vivo ou in vitro".

DESCRIO DA TCNICA: 1- Lavar as hemcias teste 3 4 vezes em salina preparar uma suspenso de 3 5% em salina. 2- Identificar dois tubos ( IgG, Poli) e acrescentar 1 gota de suspenso de hemcias em cada tubo; 3- Adicionar de 1 a 2 gotas do soro antiglobulina correspondente a cada tubo; 4- Misturar e centrifugar de 3000 a 3600 rpm por 15-20 segundos; 5- Ressuspender gentilmente e examinar a aglutinao. Registrar os resultados. Quando o Coombs direto for negativo com a leitura imediata, deixar 15 minutos em temperatura ambiente, centrifugar e ler novamente. Os resultados negativos devero ser confirmados adicionando o controle de Coombs, centrifugando e observando a aglutinao: - controle de Coombs positivo valida o resultado negativo do Coombs direto; - controle de Coombs negativo invalida a reao e indica que o resultado do Coombs direto falso-negativo. Neste caso necessrio repetir a tcnica.

Os testes positivos devem ser encaminhados para laboratrio especializado para realizao de estudos. A presena de aglutinao indica que as hemcias podem estar sensibilizadas por anticorpos ou por componentes do complemento. Para se definir a especificidade do anticorpo deve ser aplicado testes de eluio.

Observao: As amostras de sangue de cordo devem ser lavadas 6-8 vezes antes da realizao do TDA, para a retirada da gelia de Wharton que pode interferir no resultado do teste.

PROVA DE COMPATIBILIDADE (PROVA CRUZADA) A prova de compatibilidade consiste na mistura do soro do receptor com as hemcias do doador, com a finalidade de investigar no soro ou plasma do receptor, a presena de anticorpos contra os antgenos de grupos sangneos presentes nas hemcias do doador.

Qual a importncia da realizao da Prova Cruzada na rotina pr-transfusional? A Prova Cruzada importante porque atravs dela que se pode detectar: - Erros nas tipagens ABO do doador e do receptor; - Anticorpos irregulares clinicamente significantes no detectados na PAI do receptor; - Anticorpos contra antgenos de baixa freqncia presentes nas hemcias do doador. A prova cruzada no previne a imunizao, nem acusa todos os erros de tipagem. Determinaes erradas de tipagem ABO geralmente resultaro em prova cruzada incompatvel devido s isoaglutininas naturais (A e B), mas em relao ao sistema Rh, isto naturalmente no acontece. Por isso, o sangue de um doador Rh positivo tipado erroneamente como Rh negativo, ser compatvel com um paciente Rh negativo resultando em aloimunizao ao antgeno D, devido alta antigenicidade do antgeno D. A prova cruzada, assim como a PAI, pode ser realizada com a adio de substncias potencializadoras. Geralmente utiliza-se soluo de PEG a 20%. Quais os procedimentos para a realizao da prova cruzada com Bio PEG a 20%? Etapa 1 (fase temperatura ambiente): 1- Retirar da cmara de conservao o CH que dever ser cruzado com o receptor; 2- Homogeneizar com muito cuidado o sangue contido no espaguete, evitando assim, os cogulos e amostra hemolisada; 3- Retirar uma amostra de hemcias do segmento do espaguete do CH e colocar em um tubo de ensaio devidamente identificado; 4- Lavar as hemcias 3 vezes em salina 0,9% (Teste de Hemlise), decantando bem o sobrenadante da ltima lavagem; 5- Fazer uma suspenso aproximadamente 5%; 6- Identificar o tubo de ensaio onde ser realizada a Prova de Compatibilidade; 7- Colocar no tubo 2 gotas de soro do paciente e 1 gota da suspenso de hemcias do CH; 8- Centrifugar por 15 segundos 3000 rpm; 9- Realizar a Leitura Imediata da reao para descartar a imcompatibilidade ABO;

A observao de aglutinao ou hemlise, resultado positivo, indica a presena de anticorpo frio na amostra ou erro de classificao ABO do doador ou receptor. Etapa 2 (fase da AGH - teste indireto): 1- Acrescentar ao tubo 2 gotas de Bio PEG; 2- Homogeneizar e incubar 37C por 15 minutos; 3- Lavar 3 vezes em salina 0,9% decantando muito bem o sobrenadante da ltima lavagem; 4- Acrescentar no tubo 1 gota de Soro de Coombs e homogeneizar; 5- Centrifugar por 15 segundos 3000 rpm; 6- Realizar a Leitura final da Prova de Compatibilidade;

Resolvendo incompatibilidade na Prova Cruzada: Um resultado positivo na prova cruzada requer maiores estudos, sendo que o paciente no dever ser transfundido at que a causa da incompatibilidade tenha sido completamente esclarecida. As principais causas dos resultados positivos em uma prova cruzada so: * Tipagem ABO incorreta do paciente ou doador; * Aloanticorpo no soro do paciente reagindo com antgeno correspondente nas hemcias do doador; * Autoanticorpo no soro do paciente que reage com antgeno correspondente nos eritrcitos doadores; * Anticorpos aderidos aos eritrcitos do doador; * Anormalidades no soro do paciente; * Contaminao dos reagentes, amostras, vidrarias.

RECLASSIFICAO ABO/RHO (D) DO DOADOR E RECEPTOR O elo final da cadeia de eventos que conduz a uma transfuso segura o restabelecimento da identidade do doador e o receptor atravs de uma rpida reclassificao ABO/RH do paciente e doador (no caso de Concentrado de Hemcias), evitando a incompatibilidade ABO. A redeterminao do grupo sanguneo do paciente dever acontecer a cada nova transfuso e no apenas quando colhido nova amostra.

ORIENTAES IMPORTANTES INTERPRETAO DAS REAES DE AGLUTINAO Todas as reaes devem ser graduadas de acordo com um sistema padro familiar a todos aqueles que trabalham no laboratrio. Sistema de Graduao Numrico para Hemaglutinao: Aglutinao macroscpica Aglutinao microscpica Aglutinao completa nenhuma hemcia livre Aglutinao quase completa grandes aglutinados aglutinao forte grandes e pequenos aglutinados com hemcias livres pequenas aglutinaes numerosos aglutinados com hemcias livres pequenos aglutinados granulares nenhum aglutinado presente ausncia de aglutinao nenhum aglutinado presente

Intensidade 4+ 3+ 2+ 1+ (+) 0

TRANSFUSO DE CONCENTRADO DE HEMCIAS (CH) Armazenamento: 2oC a 6oC em cmaras de conservao especficas para esta finalidade. Lembrando: todo concentrado de hemcias que for ser transfundido, deve-se realizar a redeterminao do grupo sanguneo do concentrado de hemcia e a prova de compatibilidade (amostra do concentrado de hemcia x soro do paciente). Para realizar a prova de compatibilidade, selecionar e preparar bolsas de sangue do mesmo grupo sanguneo do paciente ou compatvel. Sempre observar a data de coleta e de validade do rtulo do CH, e tambm realizar o teste de hemlise no concentrado de hemcia (aps a terceira lavagem com soro fisiolgico, o sobrenadante dever ser lmpido). A transfuso s dever ser liberada se os testes forem concordantes e a prova de compatibilidade for negativa. Caso o sangue ABO-especfico no estiver disponvel, grupos sangneos alternativos podem ser escolhidos conforme o quadro a seguir: Escolha de grupos sangneos alternativos quando doadores ABO idnticos no esto disponveis GRUPO SANGUNEO DO GRUPO SANGUNEO HEMOLISINA A e B PACIENTE ALTERNATIVO (para CH) O no existe A O A negativa B O B negativa AB A, B e O A e B negativas OBS: Paciente Rh negativo, sempre transfundir Rh negativo.....

TRANSFUSO DE PLASMA FRESCO CONGELADO (PFC) Armazenamento: < -20 -30oC em cmaras de conservao especficas para esta finalidade. Dever ser descongelado 37oC e protegido da exposio da gua do banho-maria O PFC apresenta trs funes bsicas: manter o efeito onctico do sangue, mediar a coagulao e fibrinlise e propriedades anti-spticas. Para fins transfusionais, selecionar plasma do doador do mesmo grupo sanguneo do paciente receptor (no obrigatrio ser do mesmo Rh).

TRANSFUSO DE CRIOPRECIPITADO Armazenamento: < -20 -30oC em cmaras de conservao especficas para esta finalidade. Dever ser descongelado 37oC (protegido da exposio da gua do banho-maria) e administrado em at 2 horas aps o descongelamento. Suas principais funes so reposies de fibrinognio, fator VIII e fator XIII. No necessrio seguir a tipagem ABO/ Rh do paciente, exceto em recm nascidos, crianas e mulheres em idade frtil (nestes casos, deve ser ABO compatveis).

TRANSFUSO DE PLAQUETAS Armazenamento: temperatura ambiente (20oC a 24oC) em agitao contnua. Procura-se selecionar plaquetas do mesmo grupo sanguneo do paciente.

TRANSFUSO DE HEMOCOMPONENTES IRRADIADOS O uso de hemocomponentes celulares irradiados tem por finalidade inativar clulas imunocompetentes viveis dos CHs e CPs para evitar a doena do transplante versus hospedeiro associada transfuso. A irradiao est indicada para pacientes com imunodeficincias congnitas do tipo celular (exemplos: hipoplasia de timo, sndrome de di George), transfuses intra-uterinas, transfuses de recm nascidos (RNs) prematuros (menos de 28 semanas e/ ou < 1500g), exsanguneotransfuses de RNs, paciente aps incio de condicionamento para transplante de medula ssea (TMO) at a completa suspenso da imunossupresso, pacientes portadores de anemia aplsica, pacientes em quimioterapia, pacientes ps transplante de rgos slidos (rim, fgado, corao, pulmo). CONSIDERAES IMPORTANTES Equipamentos para conservao: As cmaras de conservao em que se armazenam os hemocomponentes devem ser apropriados para esta finalidade e ser de uso exclusivo. Em servios de pequeno porte, permitido a utilizao da mesma cmara de conservao para o armazenamento dos hemocomponentes e de reagentes e amostras envolvidos nos testes pr- transfusionais. Nestas situaes, a localizao e identificao dos compartimentos devem ser evidentes e distintas dentro da cmara. Liberao de sangue para transfuso: A etiqueta de liberao do hemocomponente que ser transfundido, deve conter: nome completo do paciente, registro do paciente, enfermaria, leito, tipagem ABO/ Rh do receptor, nmero da bolsa do hemocomponente com sua tipagem ABO/ Rh, resultado da concluso do teste de compatibilidade, data e nome do responsvel pela realizao dos testes pr- transfusionais e pela liberao.

Hemocomponentes preparados mas no transfundidos- reintegrao ao estoque Estes hemocomponentes podem ser integrados ao estoque se as condies de transporte e armazenamento forem conhecidas e adequadas devendo, os mesmos, serem submetidos inspeo visual antes da reintegrao.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS: Manual de Orientaes em Hemoterapia- Hemocentro de Campinas. Verso 2008. Patrcia T. Pisciotto,MD. Teraputica Transfusional para mdicos. 3a ed. AABB (Associao Americana de Bancos de Sangue). 1993. Guia para uso de hemocomponentes. Ministrio da Sade.Braslia, 2009. Immunohematology Methods and Procedures. First Edition. 1993 by The American National Red Cross.