Quim. Nova, Vol. 31, No.

8, 2190-2193, 2008 ExpErimEnto didtico sobrE cromatografia gasosa: uma abordagEm analtica E ambiEntal Jos carlos p. penteado*, dulce magalhes e Jorge c. masini Instituto de Qumica, Universidade de So Paulo, CP 26077, 05513-970 So Paulo - SP, Brasil Recebido em 16/10/07; aceito em 16/4/08; publicado na web em 3/10/08

Educao

DIDACTIC EXPERIMENT ON GAS CHROMATOGRAPHY: AN ENVIRONMENTAL AND ANALYTICAL APPROACH. This paper describes an experiment to teach the principles of gas chromatography exploring the boiling points and polarities to explain the elution order of a series of alcohols, benzene and n-propanone, as well as to teach the response factor concept and the internal standard addition method. Retention times and response factors are used for qualitative identification and quantitative analysis of a hypothetical contamination source in a simulated water sample. The internal standard n-propanol is further used for quantification of benzene and n-butanol in the water sample. This experiment has been taught in the instrumental analysis course offered to chemistry and oceanography students.

Keywords: benzene; internal standard; contamination.

introduo Entre os mtodos de separao, a cromatografia tem grande aplicabilidade em reas to diversas como ambiental, farmacutica, anlises clnicas, medicina legal e outras. A cromatografia permite separar e quantificar componentes com caractersticas fsico-qumicas muito semelhantes, tais como dioxinas e furanos, 1 em misturas complexas. O limite de deteco obtido pela cromatografia pode ser cerca de 100 a 1000 vezes menor que aquele obtido por outros mtodos de separao.2 O processo de separao ocorre atravs da distribuio dos componentes da amostra entre duas fases: uma fase fixa de grande rea superficial (fase estacionria), que percolada por um fluido (fase mvel) em uma direo definida.3 A fase mvel pode ser um gs inerte, um lquido ou um fluido supercrtico, dependendo do tipo de cromatografia utilizada. A fase estacionria deve ser imiscvel com a fase mvel, podendo ser colocada numa coluna ou depositada em uma superfcie plana. As fases mvel e estacionria so escolhidas de modo que os componentes da amostra se distribuam entre elas de modo distinto. Os analitos fortemente retidos pela fase estacionria movem-se mais lentamente na fase mvel e, conseqentemente, so eludos posteriormente aos componentes com baixa interao com a fase estacionria. Essa reteno seletiva dos componentes da amostra pela fase estacionria uma importante caracterstica e resulta em migraes diferenciadas dos compostos de interesse. De acordo com o estado fsico da fase mvel utilizada, a cromatografia em coluna pode ser classificada em cromatografia gasosa (gs inerte), cromatografia lquida4 (lquido) ou cromatografia com fluido supercrtico (fluido no estado supercrtico).3,5 Com mais de um sculo de existncia, a cromatografia, iniciada por Michael S. Tswett,6 participou direta ou indiretamente de pesquisas que foram laureadas com 12 prmios Nobel (1937 a 1972).3 cromatografia gasosa A cromatografia gasosa8,9 uma das mais importantes tcnicas analticas disponveis atualmente. Em curto espao de tempo tornou*e-mail: jocapen@iq.usp.br

se a principal tcnica para separao e determinao de compostos volteis e/ou volatilizveis. O poder de resoluo excelente alcanado permite a determinao de dezenas de compostos diferentes em matrizes complexas.10 Outro diferencial da tcnica vem a ser sua grande sensibilidade e elevada detectabilidade. Por exemplo, o limite de deteco para o pesticida halogenado Lindane pode atingir valores to baixos quanto 10-16 mol mL-1 empregando-se o detector de captura de eltrons.11 A cromatografia gasosa pode ser aplicada em amostras gasosas, lquidas ou slidas, desde que os analitos sejam volteis ou possam ser volatilizados sem sofrer decomposio trmica. A cromatografia gasosa classifica-se, de acordo com a natureza da fase estacionria, em cromatografia gs-slido (CGS) e cromatografia gs-lquido (CGL). A fase estacionria pode ser um slido (CGS) ou um lquido imobilizado sobre um suporte inerte (CGL), sendo que a CGL a mais verstil e seletiva forma de cromatografia a gs, devido grande diversidade de fases lquidas disponveis. Em linhas gerais, os principais componentes de um cromatgrafo a gs so: cilindro de gs, injetor, forno, coluna, detector, sistema de controle do instrumento e aquisio de dados. Inicialmente a amostra introduzida no injetor aquecido (com o auxlio de uma micro-seringa), onde vaporizada e transferida com o auxlio do gs de arraste para a coluna cromatogrfica colocada dentro de um forno pr-aquecido. Os componentes da amostras so eludos e conduzidos para o detector conectado na sada da coluna. O detector emite um sinal eltrico que registrado graficamente sob a forma de picos. Trabalhos didticos envolvendo cromatografia gasosa redigidos em lngua portuguesa tm sido pouco explorados neste peridico. Com o intuito de colaborar com a divulgao e ensino da cromatografia, apresentamos uma proposta de experimento para a disciplina de anlise instrumental com enfoque na introduo cromatografia gasosa para alunos de graduao em Qumica e reas correlatas. Este experimento explora a investigao da contaminao por solventes orgnicos em guas. Para isso, os alunos devero investigar quatro fontes de contaminao em duas amostras de gua. Entre os solventes adicionados destaca-se o benzeno, uma substncia reconhecidamente carcinognica, considerada a quinta substncia de maior risco, segundo os critrios do programa das Naes Unidas.7

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partE ExpErimEntal instrumentao Foi utilizado o cromatgrafo a gs modelo Varian GC-3800 (Palo Alto, CA, USA) com detector de ionizao em chama (250 C), injetor (250 C) com diviso de fluxo na razo 1:25, coluna capilar HP-Innowax (30 m x 0,25 mm x 0,25 m) (J&W, USA) empregando N2 como gs de arraste, com fluxo constante de 1 mL min-1. A temperatura inicial foi de 80 C (1 min), seguida por taxa de aquecimento de 10 C min-1 at 120 C, com tempo total de corrida de 6 min. O volume de injeo foi igual a 1,0 L. A aquisio e o processamento de dados foram feitos com o programa Star Advanced verso 4.52 da Varian. reagentes e solues Todos os reagentes utilizados (isobutanol, n-propanol, n-propanona, benzeno, n-pentanol) foram procedentes da Merck Brasil (Rio de Janeiro, RJ, Brasil) com teores maiores que 98%. A gua desionizada foi obtida pelo sistema Milli-Q, apresentando resistividade maior que 18 M cm-1. Foram preparadas as seguintes misturas de solues de referncia, conforme mostrado na Tabela 1: A isobutanol (500 mg L-1) e n-pentanol (500 mg L-1); B n-propanona (500 mg L-1) e n-pentanol (500 mg L-1); C - benzeno (350 mg L-1 ) e n-butanol (81 mg L-1); D - benzeno (88 mg L-1) e n-butanol (324 mg L-1); padro interno (PI) n-propanol (500 mg L-1) e as amostras W - benzeno (175 mg L-1) e n-butanol (40 mg L-1) e H - benzeno (44 mg L-1) e n-butanol (162 mg L-1). tabela 1. Tempos de reteno (tr), pontos de ebulio13 (PE) e constante dieltrica () dos analitos presentes nas solues A, B, C, D, W e H Analitos n-propanona benzeno n-propanol isobutanol n-butanol n- pentanol tr (min) PE (C) 2,319 56,05 2,734 80,09 3,147 97,20 3,562 107,89 4,089 117,73 5,449 137,98 21,01 2,28 20,80 17,93 17,84 15,13 A B C D W H x x x x x

H. Um volume de 1,0 L de cada uma destas solues foi injetado seqencialmente no cromatgrafo a gs para a determinao das reas de pico correspondentes a cada um dos analitos, previamente identificados pelos respectivos tempos de reteno. rEsultados E discusso Etapa qualitativa Os resultados de tempo de reteno mdios obtidos na etapa qualitativa so apresentados na Tabela 1 em comparao com a composio das solues, bem como com os pontos de ebulio e constantes dieltricas dos componentes das misturas. Observa-se que a cromatografia gasosa uma tcnica com grande aplicao na determinao simultnea de compostos volteis e semi-volteis, tais como lcoois,12 cetonas e hidrocarbonetos. A separao cromatogrfica das diferentes famlias de compostos orgnicos foi possvel devido s caractersticas fsico-qumicas dos analitos, tais como ponto de ebulio e constante dieltrica,13 parmetro este que relacionado com a polaridade das substncias e que determina a afinidade pela fase estacionria (polar, no presente experimento). Entre todos os componentes, a n-propanona o primeiro componente a ser eludo apesar de apresentar a constante dieltrica mais elevada. Este fato ocorre devido principalmente a sua alta volatilidade (56,05 C). O segundo componente o benzeno, que, entre os compostos estudados, o mais apolar ( 2,28). Essa caracterstica faz com que tenha baixa afinidade pela fase estacionria (polar), sendo eludo rapidamente. A partir do benzeno, temos o grupo dos alcois com 3 a 5 tomos de carbono na cadeia principal. Esses alcois tm caractersticas polares ( 15,13 20,8), sofrendo uma maior interao com a fase estacionria. Entretanto, para estes alcois, o ponto de ebulio vem ser a caracterstica dominante na ordem de eluio. Na soluo A (isobutanol e n-pentanol), o primeiro componente a ser eludo o isobutanol. O isobutanol apresenta maior constante dieltrica que o n-pentanol, de modo que, baseando-se apenas nos dados de polaridade, se esperaria que o isobutanol fosse o ltimo composto a ser eludo da coluna. Entretanto, o ponto de ebulio do isobutanol cerca de 30 oC menor que o n-pentanol, de modo que para compostos cuja diferena de polaridade no seja elevada, a volatilidade se torna o principal parmetro que define a ordem de eluio. No caso da soluo B (n-propanona e n-pentanol), a n- propanona o primeiro componente a ser eludo, seguido pelo n-pentanol. Com base apenas na polaridade, a n-propanona deveria ser eluda por ltimo, pois apresenta uma constante dieltrica maior que o n-pentanol e, portanto, possui uma maior afinidade com a fase estacionria. No entanto, eluda primeiro, pois seu ponto de ebulio cerca de trs vezes menor que o do n-pentanol. Em relao s solues C, D, W e H (benzeno e n-butanol), o benzeno eludo antes do n-butanol. Nesse caso os valores de constante dieltrica e ponto de ebulio justificam a ordem de eluio, pois o benzeno menos polar e tem ponto de ebulio menor que o n-butanol. O princpio do funcionamento do detector de ionizao de chama (DIC) baseia-se na combusto dos compostos na chama. Os compostos no suscetveis combusto, como gua, CO2 e compostos inorgnicos em geral, no apresentam sinal mensurvel neste detetor.3 O sinal eltrico enviado pelo detector registrado graficamente sob a forma de pico, cuja rea proporcional concentrao do analito. O perfil cromatogrfico da soluo C e da amostra W, bem como da soluo D e amostra H so semelhantes (Figura 1). Na Figura 1a, o pico com maior intensidade vem a ser o benzeno (soluo C e amostra W), enquanto que na Figura 1b isso ocorre com o n-butanol (soluo D e amostra H). Essa observao pode ser constatada numericamente na Tabela 2, onde esto descritos os resultados das reas obtidas nos cromatogramas e as relaes de reas entre benzeno e n-butanol para as solues C e D e as amostras W e H.

x x x x x x x

procedimentos Este experimento se compe das etapas qualitativa e quantitativa, sendo que a primeira se baseia na identificao dos compostos utilizando o tempo de reteno, enquanto a segunda etapa consiste na determinao da concentrao dos analitos a partir das reas de pico. Etapa qualitativa Foram injetadas, seqencialmente, 1,0 L das solues A, B, C, D, W e H diludas na razo de 1:10 em gua desionizada. A seguir foram atribudos os picos observados nos cromatogramas de cada soluo. A identificao de cada componente foi realizada pelos seus respectivos tempos de reteno (tr), que representam o tempo gasto desde o momento da injeo at a sada do ponto mximo do pico. Etapa quantitativa Com auxlio de uma pipeta volumtrica transferiu-se 1,00 mL da soluo C e 1,00 mL da soluo de PI (500 mg L-1) para um balo volumtrico de 10 mL, completando o volume com gua desionizada. O mesmo procedimento foi repetido para as solues D, W e

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Concentraes nas amostras W e H A determinao das concentraes de benzeno e n-butanol foi feita a partir da adio de padro interno, no caso n-propanol, na concentrao de 500 mg L-1. Para isso, a primeira etapa envolve a obteno do chamado fator de resposta (F) do detector para os dois analitos, o qual definido como:18

(1)

onde AP e CP so a rea de pico e concentrao de um padro do analito (benzeno ou n-butanol), obtidos com os cromatogramas das solues C ou D, enquanto API e CPI so a rea de pico e concentrao do padro interno (n-propanol 500 mg L-1), respectivamente. De posse do fator de resposta, e reescrevendo a Equao 1, a concentrao do analito na amostra pode ser calculada a partir da Equao 2:

(2)

Figura 1. Cromatogramas obtidos da amostra W em comparao com a soluo de referncia C (1a) e amostra da amostra H em comparao com a soluo de referncia D (1b)

Uma vez que a relao de rea entre o benzeno e o n-butanol da soluo C 7,49, pode-se inferir que esta a fonte de contaminao da amostra W, para a qual a relao de rea destes dois compostos de 7,53. De modo similar, pode se inferir que a soluo D (relao 0,47) a fonte de contaminao da amostra H (relao 0,40). Etapa quantitativa A quantificao dos analitos foi feita pelo mtodo de adio de padro interno, que consiste em adicionar uma quantidade conhecida de uma substncia (padro interno) na amostra a ser analisada e no padro, relacionando ento as duas reas obtidas.14 O padro interno aumenta a preciso dos resultados ao minimizar as incertezas introduzidas especialmente pela injeo da amostra, mas tambm por variaes de vazo e das condies da coluna.15-17 Neste experimento o padro interno selecionado foi o n-propanol cujo tempo de reteno est depois do benzeno e n-butanol. A Tabela 2 mostra os resultados obtidos dos fatores de resposta dos analitos benzeno e n-butanol para os padres C e D e as concentraes calculadas para as amostras W e H.

onde Cx a concentrao do analito X na amostra desconhecida, FX o fator de resposta para este analito e AX a sua respectiva rea de pico, obtida dos cromatogramas das solues W ou H. Embora teoricamente os fatores de respostas obtidos nas solues padres C e D devessem ser os mesmos, na prtica houve uma diferena para o benzeno e n-butanol (Tabela 2). Essa variao ocorreu provavelmente devido a diferenas entre as concentraes dos analitos nas solues C e D. Assim, o clculo das concentraes dos analitos nas solues das amostras W e H foi feito empregando os fatores de resposta das solues de referncia C e D, respectivamente. As concentraes obtidas de benzeno e n-butanol nas amostras W e H foram prximas aos dos valores esperados, conforme mostrado na Tabela 2, indicando que o mtodo de padronizao interna foi eficiente na quantificao dos analitos. As concentraes de benzeno encontradas neste experimento so elevadas quando comparadas com alguns valores reportados na literatura.20 Porm, recentemente foram divulgados acidentes desastrosos no Rio Songhua (China), onde ocorreram vazamentos de enormes quantidades de benzeno e nitrobenzeno.21 Este acidente afetou o abastecimento de milhes de habitantes tendo um custo estimado de remediao de US$ 3,8 bilhes.22 conclusEs O experimento proposto pode ser facilmente implementado em laboratrios de ensino de graduao em Qumica e reas correlatas. Os pontos discutidos fornecem ao docente flexibilidade na abordagem didtica e despertam o interesse dos alunos na aplicabilidade

tabela 2. Resultados de reas e suas relaes, bem como as concentraes obtidas dos analitos benzeno e n-butanol Soluo reas Relao benzeno/n-butanol Fator de Resposta Concentrao das amostrasa (mg L-1) benzeno n- butanol

benzeno PI benzeno n-butanol n- butanol C 3328 444 241 7,49 19,7273 11,3724 W 1429 190 210 7,53 172,5 0,2 39,7 0,1 D 649 1377 196 0,47 18,8138 10,8418 H 304 741 191 0,40 42,3 0,3 178,9 0,5 a -1 -1 As concentraes esperadas de benzeno e n-butanol eram, respectivamente, 175 e 39,7 mg L na amostra W e 44 e 162 mg L na amostra H.

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da cromatografia gasosa. Neste experimento foi feita uma simulao de contaminao de benzeno em gua, pois em condies reais a concentrao mxima de benzeno em gua potvel permitida pela legislao de 5 g L-1 (CETESB).19 agradEcimEntos Os autores agradecem FAPESP pelo apoio financeiro. rEfErncias
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