1

Introduccin

2

El presente material docente denominado apuntes de clase sobre algunas tcnicas cromatogrficas para
los estudiantes de la asignatura Anlisis Instrumental II de los Programas en Tecnologa Qumica y Qumica
Industrial de la Escuela de Tecnologa Qumica de la Facultad de Tecnologa de la Universidad Tecnolgica de
Pereira; no pretende ser una obra original del profesor con relacin a sus contenidos, es sencillamente un
resumen y ordenamiento didctico sobre las tcnicas cromatogrficas enfatizando en la cromatografa de gases .

En los temas tratados se encuentra una adaptacin personal para su desarrollo, llevando una secuencia que le
permita al estudiante ver objetivamente la relacin de los mismos para su estudio y aprendizaje. Algunos son
transcripciones mientras que otras son cortas traducciones y adaptaciones de muchos textos, catlogos y
artculos, de diferentes autores y casas productoras de equipos cromatogrficos.

El profesor espera con la preparacin de este material facilitar al estudiante y a otras personas que les pueda
ser de utilidad, una informacin y metodologa que fundamente los conceptos, principios, leyes, instrumentacin
y aplicaciones de las tcnicas analticas tratadas.

La complejidad de la gran cantidad de informacin existente sobre los temas tratados en diferentes publicaciones
y textos con distintos enfoques, hace que el estudiante no tenga acceso a unos contenidos bsicos de las
tcnicas cromatogrficas; se estima que con base en estos fundamentos pueda posteriormente analizar los
temas con mayor profundidad en los diferentes documentos de estudio.

Tambin pretende el profesor que con el desarrollo de estos contenidos temticos, el estudiante pueda dedicar
mayor tiempo de su atencin en la clase a las explicaciones que a la toma de apuntes y a la elaboracin de
esquemas y grficas.

Los Temas tratados estn ordenados en Unidades siguiendo la misma secuencia del programa y la extensin y
profundidad de los contenidos de la cromatografa gas lquido adaptados a los objetivos, metodologa,
intensidad horaria de la asignatura y a la valoracin acadmica en horas crdito.

Adems, si se presentaran imprevistos en el desarrollo normal del curso por situaciones de anormalidad
acadmica durante el semestre, no pudindose cumplir con el programa en el cien por ciento, el estudiante tiene
disponibilidad de los materiales que le permiten apropiarse de estos conocimientos.

Los diagramas de los cromatgrafos y sus instrucciones de manejo corresponden a algunos de los equipos
existentes en los laboratorios de la escuela de tecnologa qumica de la UTP.

Al final se informa la bibliografa consultada. Dado que todos los temas son tratados en la mayora de l os libros
de Qumica Analtica, anlisis Instrumental, y especficos de cromatografa, no se hace uso de bibliografa
indexada.

El profesor agradece a sus compaeros profesores y alumnos sus comentarios y aportes para el mejoramiento
del material.


Cordialmente
Federmn Castro E
Profesor Febrero 2011


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PRIMERA UNIDAD


1. GENERALIDADES DE LA CROMATOGRAFIA

OBJETIVO GENERAL

Presentar al estudiante una visin general sobre los orgenes, desarrollo, fundamentos, procesos,
clasificacin, semejanzas, aplicaciones y limitaciones de las diferentes tcnicas de separacin
cromatogrficas slido lquido, lquido lquido, intercambio inico y electrocromatografa; para que haga uso
adecuado de ellas en el trabajo de laboratorio.

Objetivos especficos

1. Terminada la unidad, el estudiante ser capaz de:

1. Determinar los principios fsicos que gobiernan los procesos de separacin por cromatografa slido
lquido, lquido lquido, cromatografa de intercambio inico y electrocromatografa.

2. Reconocer las tcnicas cromatogrficas slido lquido: en papel, capa fina y columna.

3. Reconocer los trminos utilizados en cromatografa slido lquido, lquido lquido, lquido al vaco,
intercambio inico y electrocromatografa.

4. Describir las aplicaciones en la separacin por medio de las tcnicas de cromatografa en papel, capa
fina y columna, como tambin en las tcnicas cromatogrficas: lquido lquido, lquido al vaco,
cromatografa Flash, intercambio inico y electrocromatografa.

5. Conocer las aplicaciones cualitativas y cuantitativas de las tcnicas cromatogrficas slido lquido,
liquido lquido, lquido al vaco, cromatografa Flash, intercambio inico y electrocromatografa.

6. Conocer las limitaciones de las tcnicas cromatogrficas slido lquido, lquido lquido, lquido al vaco,
cromatografa Flash, intercambio inico y electrocromatografa.






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1.1 RESEA HISTORICA
1


La qumica analtica desde sus inicios, ha requerido de tcnicas de separacin para aislar los compuestos
de inters objeto de estudio en una muestra, tanto para su cualificacin como para su cuantificacin.

Las tcnicas tradicionales de separacin para los diferentes constituyentes de una muestra varan
dependiendo del estado en que se encuentra. Para la separacin de slidos de lquidos se utilizan tcnicas
como: La filtracin, centrifugacin, evaporacin, cristalizacin, decantacin. Y en la separacin de mezclas
lquidas se han usado comnmente las tcnicas de extraccin, destilacin. Mientras que en la separacin
de gases, tanto de slidos como de lquidos se cuenta con la sublimacin, la adsorcin y la absorcin.

Pues bien, muchos componentes de diferentes mezclas, era difcil separarlos, haciendo uso de las tcnicas
anteriores, como es el caso de algunos lquidos que forman azeotropos, o tienen puntos de ebullicin muy
cercanos, o se descomponen por el calor; para cuya separacin la destilacin es inadecuada. As como,
para la situacin anterior, las otras tcnicas tambin presentaron sus limitaciones en la separacin de
compuestos; por lo cual, se hizo necesario encontrar otras tcnicas de separacin ms apropiadas.

En el desarrollo de nuevas tcnicas, surgieron los procedimientos en mltiples etapas y con ellas la
cromatografa, nombre con el que se designan a varias tcnicas de separacin.

Estas tcnicas cromatogrficas se consideran como iniciadas en el ao de 1834, con los trabajos realizados
por RUNGE, F.F. en la separacin de mezclas de tinturas y extractos de plantas, usando tiras de papel.

A partir de este ao, suceden cronolgicamente, los siguientes avances de inters en el desarrollo de la
cromatografa:

GOPPELSROEDER, F. en 1868, realiz separacin de: tinturas, hidrocarburos, alcoholes, leche, cerveza,
coloides, aguas, minerales y pigmentos de plantas y animales a travs de anlisis capilar utilizando tiras de
papel.

En 1878 SCHONBEIN, us tiras de papel para el anlisis de soluciones. DAY, D.T. en 1897 analiz
muestras de petrleo crudo en columnas empacadas finamente con tierra de fulleres (silicatos de aluminio y
magnesio), haciendo pasar la muestra completamente mediante un flujo ascendente.

Una correcta interpretacin de los trabajos realizados hasta el momento fue dada por el botnico ruso
MIKAHIL, TSWETT. En 1901 Tswett describi la absorcin de pigmentos de plantas sobre protenas y en
1906, l explic con todo detalle este mtodo, dando sus principios y procedi a nombrar este proceso.

As, este investigador ruso se conoce como Padre de la Cromatografa. Tswett, realiz su experimento

1
Informacin recopilada y organizada por el profesor Federmn Castro E para la asignatura Anlisis Instrumental II.

5
como sigue: Utiliz una columna empacada con carbonato de calcio, para separar las sustancias colorantes

de las hojas verdes de las plantas.

Para su experimento, someti las hojas desecadas a extraccin con ter de petrleo y produjo un extracto
de color intenso que puso en la parte superior de un tubo de vidrio colocado en posicin vertical y el cual
estaba relleno con carbonato de calcio en polvo. Los colorantes fueron absorbidos por el carbonato de
calcio y quedaron formando una banda de color oscuro en la parte superior de la columna. Luego introdujo
ms ter de petrleo el cual, al descender por el tubo fue lavando gradualmente y arrastrando a los
colorantes, pero cada uno a una velocidad diferente, produciendo al avanzar por delante de las otras
sustancias una banda de color caracterstico. Por encima de esta sustancia desplazndose ms
lentamente, apareci una banda amarilla de xantofila, y ms atrs dos bandas verdes de clorofila. El
conjunto de las zonas o bandas coloreadas se denomin "CROMATOGRAFIA".

TSWEET, encontr que el desplazamiento de las zonas era ms rpido si se mezclaba algo de etanol con
ter de petrleo. Si se continuaba agregando ms disolvente, los colorantes salan ms separados, de uno
en uno, por el extremo inferior de la columna, emergiendo en primer lugar el caroteno rojo anaranjado,
seguidamente la xantofila de color amarillo y posteriormente la clorofila de color verde. De modo que se
podan recoger aisladamente en diferentes recipientes.

De all deriva el nombre de cromatografa que viene del griego KROMATOS (color) y GRAPHOS
(escritura); por lo cual etimolgicamente significa escritura en color.
La tcnica cromatogrfica toma verdadero inters en 1931, cuando fue utilizada por KUHN y LEDERER, en
anlisis orgnico y bioqumico para la separacin de la xantofila de la yema de huevo utilizando silicagel y
almina como materiales absorbentes.

En 1940 el cientfico sueco TISELIUS aplic la cromatografa en el anlisis de protenas y propiedades
electroqumicas de las enzimas haciendo uso de la electrlisis. En 1948 recibi el premio NOBEL de
qumica por los trabajos realizados.

WILSON, J.N. presenta en 1940 la primera teora sobre cromatografa de papel, asumiendo un equilibrio
completo y una isoterma de absorcin lineal.

En 1941 el cientfico ingls A.J. MARTIN y su colaborador R.L.M. SYNGE, desarrollaron la cromatografa
de particin lquido; presentaron el primer modelo que puede describir la eficiencia de una columna y
sentaron las bases de la cromatografa de gases. En 1952 les fue otorgado el premio NOBEL de qumica.
CONSDEN, R.; GORDON, A.H.; MARTIN, A.J.P., desarrollaron en 1944 la tcnica cromatogrfica en
papel.

En 1949 MARTIN contribuye con la relacin de transporte entre la retencin y la constante de equilibrio
termodinmica.

6

CREMER, en 1951 desarroll la cromatografa gas slido por elucin. En 1952 JAMES, A.T. y MARTIN,
A.J.P; introducen la cromatografa gas lquido.

VAN DEEMPTER, en 1956 plantea las teoras sobre la eficiencia de las columnas cromatogrficas a travs
de una ecuacin y la distribucin gaussiana.

En 1965 GIDDINGS, J.C., revisa y extiende las teoras cromatogrficas.

Las tcnicas cromatogrficas en sus diferentes formas, han sido aplicadas para la separacin de un gran
nmero de compuestos, no slo con fines analticos, sino tambin en la separacin y purificacin de
solventes orgnicos a nivel industrial.

Se han escrito gran cantidad de artculos en las revistas y publicaciones cientficas sobre la aplicacin de la
cromatografa en el anlisis de la ms diversa variedad de muestras.

La tcnica ha tenido un desarrollo vertiginoso y se han diseado gran cantidad de equipos, aplicando en
ellos las formas ms funcionales y simplificadas, mediante los avances de la electrnica y los
microcontroladores para automatizarlos y manejar los datos.

El desarrollo la cromatografa lquida de alta eficiencia, ha ofrecido ciertas ventajas sobre la cromatografa
de gases para determinados anlisis. Tambin se ha venido desarrollando la cromatografa de intercambio
inico obtenindose una gran sensibilidad y rapidez en la separacin selectiva y simultnea de aniones y
cationes en el rango de microgramos por litro.

Durante las dos ltimas dcadas el trabajo sobre nuevas y prometedoras tcnicas de separacin
cromatogrfica ha tomado como base el empleo de fluidos supercrticos para el anlisis de muestras
ambientales, biomdicas y de alimentos dando origen a la cromatografa de fluidos supercrticos y la
extraccin con fluidos supercrticos.

A nivel latinoamericano, se ha organizado la Federacin de Usuarios de la cromatografa (COLACRO), que
rene los ms prestigiosos profesionales de la cromatografa y ciencias afines de Latinoamrica y el
mundo; la cual ha realizado peridicamente hasta el presente 11 congresos en diversos pases: El I en
1.988 en Buenos aires Argentina y el XI en junio de 2006 en Yucatn Mxico; Teniendo estos encuentros
como objetivo principal proporcionar actualizacin y mostrar el estado de las distintas tcnicas
cromatogrficas, as como sus diferentes aplicaciones. El XII, ltimo congreso celebrado se realiz en
Florianpolis (SC), Brasil del 28 al 30 de octubre del 2008 cumplindose as 20 aos de sus
celebraciones.

En Colombia, existe el Comit Colombiano de Cromatografa, integrado por profesionales de la qumica,

7
quienes coordinan y organizan encuentros tcnicos y cursos a fin de consolidar el intercambio y
actualizacin de conocimientos tanto de sus miembros como de todo el personal que hace uso de esta
valiosa tcnica; Permitiendo que las tcnicas cromatogrficas puedan ser usadas en conjunto con otras
tcnicas analticas, como las fotomtricas; mediante el acople con equipos de RMN., IR., UV, y
espectrmetros de masas, refractmetros, conductmetros, etc. dndole especial importancia en el anlisis
qumico tanto a nivel investigativo como del control de calidad, y poder detectar e identificar sustancias
presentes en diferentes tipos de muestras hasta el nivel de pico y nano gramos. Son mltiples sus
aplicaciones en el anlisis de los contaminantes del medio ambiente, en el control de calidad de
medicamentos y diagnsticos en medicina forense, estudio de aromas tales como los del caf detectados
por esta tcnica alrededor de 350, control de calidad de aceites esenciales, perfumes, solventes
industriales, alimentos, productos agroqumicos, el petrleo y sus derivados, etc.

La Universidad Industrial de Santander (UIS),en su Escuela de Qumica ha creado la Escuela Nacional
de Cromatografa para ofrecer un soporte cientfico y prctico a los usuarios de cromatografa en Colombia
a travs de la realizacin de pasantas para entrenamiento personalizado, cursos terico prcticos a
diferentes niveles, asesoras, montaje de mtodos y servicios de anlisis.
























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1.2 FUNDAMENTOS DE LAS TECNICAS DE SEPARACION POR CROMATROGRAFIA

La separacin se consigue a travs de una gran variedad de tcnicas cuyas bases moleculares tienen
diferencias muy diversas, se pueden separar molculas en funcin de sus cargas moleculares, sus
tamaos moleculares, sus masas moleculares, sus potenciales redox, sus constantes de ionizacin,
disposicin de sus enlaces, que determina su estructura ismera o su quiralidad y en funcin de su
polaridad, por lo cual resultan una gran variedad de tcnicas para efectuar la separacin de una
sustancia. Se considerarn las separaciones que tienen lugar en funcin de la polaridad en la cual se
fundamenta la solubilidad, segn la ley los semejantes disuelven a los semejantes.

Los procedimientos de separacin en mltiples etapas tienen en comn la distribucin de los componentes
de una mezcla entre dos fases que posteriormente pueden separarse mecnicamente cuando la razn de
la cantidad de un compuesto dado presente en cada fase difiere considerablemente de la otra, siendo
posible potencialmente una separacin. La complejidad del procedimiento depende entonces, de la
diferencia de las razones de distribucin de los componentes.

Una separacin cromatogrfica puede verse como una sucesin de extracciones, una tras de otra. Es
de importancia recordar y comprender el proceso de extraccin para entender desde este punto de vista
la base qumica de la cromatografa as como el origen de la terminologa cromatogrfica.




Diagrama 1.1

Una extraccin lquido - lquido es una tcnica que tiene como base la utilizacin de dos lquidos que no
son solubles entre s, son inmiscibles, suponiendo que los dos lquidos utilizados en la ilustracin del
diagrama 1.1 son agua (H2O) y tetracloruro de carbono (CCl4). Como el CCl4 es ms denso, compone
la capa ms baja. En el agua hay un soluto disuelto: en este caso se trata de ioduro. La mezcla se

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agita vigorosamente y luego reposa mientras los dos lquidos forman las dos capas separadas como se
observa en el diagrama 1.1. Si la concentracin de ioduro es suficientemente alta, se puede ver su
color morado en la fase orgnica. Despus de la extraccin, se puede determinar las concentraciones
de ioduro en la fase acuosa y orgnica. Por ejemplo, el ioduro de cada fase se puede determinar
mediante una valoracin redox). Si repetimos este experimento varias veces utilizando diferentes
concentraciones iniciales de ioduro, pero a una misma temperatura, se observa que los resultados
vienen descritos por la siguiente expresin:

| |
| |
2
2
2
10 7
2
4
= =
O H
CCl
D
I
I
K ,
D
K es la constante de equilibrio denominada coeficiente de particin o
coeficiente de distribucin y algunas veces factor de reparto.

Tambin se puede escribir como
2
1
2 , 2
4 , 2
C
C
C
C
K
O H I
CCl I
D
= =

Donde C es la concertacin expresada en mol / unidad de volumen en las respectivas fases. Por
convenio la fase orgnica es la 1. As el coeficiente de distribucin es una relacin de
concentraciones, el cual es constante a unas determinadas condiciones de temperatura y presin.

Para determinar la cantidad de materia contenida en cada fase es necesario conocer el volumen de
cada fase. Suponiendo que el volumen de la fase i es Vi para el caso de ioduro que se reparte entre el
H2O y el CCl4,

el nmero de moles totales es =moles en el H2O + moles en el CCl4 = | | | |
4 4 2 2
2 2 CC CCl O H O H
V I V I + ,
generalizando el reparto de un soluto entre dos fases tenemos:
nmero de moles totales =
2 2 1 1
V C V C + .

En las separaciones cromatogrficas un, coeficiente de distribucin es til incluso si una de las
fases es un slido con el analito absorbido en su superficie, esto es, incluso cuando el volumen es
extremadamente pequeo. El producto matemtico entre las concentracin de la superficie y el
volumen de la superficie,
s s
V C , se supone definido incluso si el volumen y la concentracin por
separado no se pueden determinar. En otros trminos, se utiliza el mismo anlisis para la distribucin
de solutos en interfases entre cualquier combinacin de gases, lquidos y slidos.

En las ecuaciones anteriores se considera que los volmenes de las dos fases son suficientemente
grandes para ser capaces de disolver todo el ioduro que se les aade. Si se aadiere demasiado
ioduro, las soluciones en las dos fases se pueden saturar o sobre saturar quedando algn residuo
slido. En esta situacin, el nmero total de moles de ioduro ya no estara definido por la expresin
2 2 1 1
V C V C + . Cuando en cromatografa ocurre una situacin similar, se dice que el sistema esta
sobrecargado (columna sobre cargada), por lo cual en cualquier sistema cromatogrfico la carga
correcta de la muestra es muy importante para obtener una buena separacin cromatogrfica. La
masa total de muestra sometida a una separacin cromatogrfica debe ser limitada para que las

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fases no se saturen y se sobre carguen; esto es, su capacidad no se exceda.

Todas las tcnicas de separacin consideradas en la clasificacin del cuadro 1.1, presentan como
caracterstica una interaccin entre los compuestos a separar con una fase fija y una fase mvil.

La fase fija denominada tambin fase estacionaria, puede ser un slido o un lquido dispuesto en forma
de una pelcula sobre un soporte slido. La fase mvil puede ser un lquido, un gas o un fluido
supercrtico.

El aspecto fundamental considerado en el proceso de separacin seguido por estas tcnicas, radica en la
distribucin de los solutos (componentes de las mezclas), en las diferentes fases. Esta razn conocida
como coeficiente de distribucin o factor de particin (K) viene expresado matemticamente por la
ecuacin:


m
s
C
C
K =

Donde
s
C es la concentracin del soluto en la fase estacionaria y
m
C la concentracin del mismo soluto
en la fase mvil; podemos decir que si
S
C es directamente proporcional a Cm, (Cs o Cm), tendramos el
comportamiento ideal. K aparece como constante de proporcionalidad Cs = KCm y despejando
obtenemos K = Cs/Cm. Por lo tanto K puede ser igual, mayor o menor que la unidad (K =1, K>1, K<1).

En el caso ideal, una representacin grfica (isoterma) de la concentracin del soluto en la fase
estacionaria, versus la concentracin del soluto en la fase mvil, nos dara una lnea recta C, en la Figura
1.1.

1.3. PRINCIPIOS DE LA CROMATOGRAFIA

Bajo el trmino cromatografa, se designan procedimientos y/o tcnicas de separacin que se fundamentan
en los mismos principios pero difieren en la forma como la fase estacionaria se encuentre dispuesta y el
estado fsico tanto de la fase fija como de la fase mvil.

Todas las tcnicas cromatogrficas se fundamentan en principios fsicos, exceptuando la cromatografa
de intercambio inico que se encuentra gobernada ms por un principio qumico que fsico. Definir
entonces, cromatografa es difcil por la cantidad de procedimientos y/o tcnicas que existen. Sin
embargo, en un sentido amplio designa procesos basados en diferencias de velocidades con las
cuales los componentes individuales de una mezcla migran por un medio estacionario bajo la
influencia de una fase mvil.


11



Figura 1.1. Curvas tpicas de distribucin

La cromatografa, en general, es una tcnica analtica de separacin y con la cual, adems se puede,
cualificar y cuantificar los componentes de una mezcla. La cualificacin se puede realizar mediante el uso
de la misma tcnica o utilizando otras como las tcnicas espectroscpicas. La R.M.N. y la espectrometra
de masas.

1.4. CROMATOGRAFIA SLIDO-LIQUIDO

La cromatografa slido-lquido comprende un conjunto de tcnicas de separacin en las cuales la fase
estacionaria es un slido y la fase mvil un lquido. Lo que hace diferentes estas tcnicas, es la forma en
que la fase estacionaria se encuentra dispuesta, bien sea en papel, superficie plana o columna. Estas
disposiciones permiten trabajar con mayor o menor cantidad de muestra, usar los recolectores apropiados
segn el caso, como tambin, utilizar otras propiedades fsicas para acelerar el proceso o detectar los
compuestos, como en los casos de aplicar una diferencia de potencial en la electrocromatografa o medir
una conductividad en la cromatografa de intercambio inico.

El uso frecuente de estas tcnicas en el laboratorio, deriva de la facilidad con la cual se pueden separar
compuestos de peso molecular o puntos de ebullicin bastante elevados los cuales es difcil
transformarlos en vapores bien sea porque son inestables, se isomerizan o se descomponen por
efectos de la temperatura para ser separados por otras tcnicas.

1.4.1 Cromatografa en papel. En la Figura 1.2. se muestra una ordenacin tpica para una cromatografa
de papel. El papel es la fase estacionaria y el disolvente que fluye sobre l, la fase mvil. Como en casos



12
Cuadro 1.1 Clasificacin de las tcnicas cromatogrficas.

anteriores el fundamento de la separacin es el distinto tiempo que cada compuesto gasta entre la fase
mvil y en la fase estacionaria.

En la prctica, se suspende por un extremo una tira de papel de espesor uniforme y el otro extremo se
introduce en el disolvente. Llmese a esta cromatografa, cromatografa ascendente. En estas
condiciones el disolvente fluye hacia arriba, a velocidad constante, por la accin capilar de las fibras de
papel. En este movimiento, el disolvente entra en contacto con la muestra, cuyos componentes se
disolvern y se desplazarn a lo largo del papel con una velocidad proporcional a la velocidad de fluj o
del disolvente y al tiempo que cada componente gasta en la fase estacionaria. En definitiva, los
distintos componentes fluyen a diferentes velocidades y se separan.



Figura 1.2. Separacin por cromatografa de papel.
Tambin es posible disponer el sistema de tal forma que el disolvente fluya hacia abajo. Esta ordenacin
no siempre es aconsejable ya que, por accin de la gravedad, el flujo es ms rpido. (Se conoce esta
cromatografa como descendente).
Nombre del proceso Tipo de fases Fase fija Fase mvil
Cromatografa de absorcin Slido lquido Absorbente slido Solvente o mezcla de solventes
Cromatografa en capa delgada Slido lquido Polvo fino sostenido Sobre placa de
vidrio o metal
Solvente o mezcla de solventes
Cromatografa de intercambio de iones Slido lquido Resina de intercambio inico Solucin
Cromatografa de particin lquido -lquido Lquido absorbido en un slido poroso Solventes inmiscibles
Cromatografa en papel lquido -lquido Disolvente inmiscible sobre matriz de papel
Cromatografa de gel lquido -lquido Liquido sostenido en los intersticios de un
polmero Slido
Solvente
Cromatografa gas slido Slido- Gas - Adsorbente slido Gas inerte
Cromatografa gas Liquido Liquido-gas Disolvente sobre matriz slida Gas inerte
Cromatografa de fluidos supercrticos Lquido-fluido
supercrtico
liquido Fluido supercrtico

13
En ambos la posicin de cada componente se pone de manifiesto por teido de la muestra, esto es,
tratndola con un reactivo que la coloree y, de esta forma, revele su posicin.




Figura 1.3. Esquema de la situacin de los componentes (a) antes de la separacin (b) despus de la separacin
cromatogrfica

La identidad de cada componente se obtiene comparando la velocidad de flujo con la de muestras
conocidas. Por ejemplo, si se sabe que una muestra contiene tres componentes, A, B y C, para
identificarlos se aaden al papel muestras separadas de A, B y C, como muestra la Figura 1.3. y se
procede al revelado una vez conseguida la separacin. El componente A de la muestra ser aquel que
haya recorrido la misma distancia que la muestra conocida, A. El mismo razonamiento sirve para la
identificacin de los otros componentes.

Si no se conoce la identidad de los compuestos de la muestra, deben ser identificados despus de su
separacin por tcnicas espectroscpicas (IR. UV, RMN y/o EM), o por medio de reacciones qumicas.

1.4.2. Cromatografa en Capa Fina. Es similar a la cromatografa de papel excepto que en lugar de
papel utiliza como substrato una fina capa (2.5 mm de espesor) de un material inerte, tal como Al2O3, MgO
o SiO2. Estas capas se preparan manualmente. Para ello, se forma una pasta con el xido y un disolvente
adecuado, se extiende uniformemente sobre una superficie plana (generalmente vidrio o aluminio) y se
seca. La operacin de extender la pasta sobre el vidrio o aluminio puede hacerse manual o
mecnicamente. La ventaja de operar con un substrato inerte es que pueden utilizarse para el revelado
sustancias qumicamente ms reactivas, tales como cidos fuertes, que destruiran el papel.

El revelado de molculas o iones en cromatografa de papel o de capa fina puede ser un problema. Si las
molculas son coloreadas la deteccin se hace por su observacin directa. Sin embargo, es el caso menos
frecuente. Para algunos compuestos, existen reactivos especficos que reaccionan para dar un compuesto
coloreado de observacin directa.

14
En la mayora de los casos, el compuesto muestra es transparente y no puede localizarse visualmente. En
esta circunstancia se utiliza un reactivo comn que es el cido sulfrico, el cual carboniza el compuesto
dejando una mancha marrn. La posicin de las manchas indica la situacin de los distintos compuestos.

La desventaja del mtodo es que se destruye el compuesto. Se utiliza en cromatografa de capa fina,
donde el substrato es inerte frente al cido sulfrico, pero no en la de papel, que se descompondra. Existen
compuestos orgnicos cuyas molculas fluorescen bajo la luz UV.

Algunos compuestos de peso molecular elevado no fluorescen ni pueden ser detectados con reactivos
especficos. En este caso, se emplea un soporte modificado, que contiene un material fluorescente de
forma que toda la placa produzca fluorescencia al irradiarla con luz UV. Si sobre la placa as preparada se
coloca la muestra y se provoca la separacin, la fluorescencia del material base es absorbida o bloqueada
fsicamente en aquellas zonas donde no existen compuestos fluorescentes. En definitiva, los distintos
componentes de la muestra ocuparn las zonas no fluorescentes. Un material adecuado para este fin es la
1, 2, 3 indantina monohidrato, conocido comercialmente bajo el nombre de Ninhydrin.

El mayor inters de la cromatografa de capa fina reside en la determinacin cualitativa de compuestos de
peso molecular elevado, especialmente en los campos de la investigacin mdica y biolgica. El
fundamento de la investigacin cualitativa es la velocidad a la que el compuesto fluye a lo largo de la placa.

Si no se conocen los componentes de la muestra su identificacin se consigue como se indic
anteriormente (Observar Figura 1.3.). Un mtodo consiste en utilizar el valor
f
R (factor de retardo) de la
muestra. El
f
R de un compuesto, para un disolvente y substrato determinados, es constante (a
temperatura constante) y se define como la relacin de la velocidad del compuesto a la del disolvente.

vente daporelsol ciarecorri Dis
puesto daporelcom ciarecorri Dis
t
D
t
D
V
V
R
Solvente
Compuesto
Solvente
compuesto
f
tan
tan
= = =

Determinado, pues, el valor
f
R de un compuesto desconocido se reduce considerablemente el nmero de
compuestos que pueden presentarlo y, en consecuencia, su identificacin es mucho ms fcil.

En cromatografa de capa fina, el anlisis cuantitativo se lleva a cabo midiendo el rea de la zona ocupada
por cada componente separado; con este dato y un calibrado previo, se obtiene la cantidad de compuesto
en la zona. Si se pretenden resultados ms seguros, se retira cuidadosamente de la placa la zona del
compuesto (con substrato); ste se separa del substrato por disolucin en un volumen conocido de un
solvente adecuado y posteriormente se hace la determinacin cuantitativa por absorcin al UV.; IR y/o
cualquier otro mtodo analtico.

1.4.3. Cromatografa en Columna. La separacin de muestras grandes exige la utilizacin de una

15
columna de substrato. Las dimensiones de una columna normal son del orden de 90 cms de largo. por 1.5
cms de dimetro, aunque pueden variar considerablemente segn las necesidades. La muestra
(aproximadamente, 1 gramo) se disuelve en el disolvente adecuado y se vierte sobre el substrato
(generalmente 30g) por la parte superior de la columna. A continuacin, se aade disolvente y los
componentes descienden, a travs de la fase estacionaria, a distintas velocidades, que dependen del
tiempo gastado en la fase mvil y en la estacionaria. De esta forma se separan y se recogen, a la salida, las
distintas fracciones. La gran cantidad de disolvente utilizado puede evaporarse de cada una de las
fracciones y obtenerse as los componentes en estado puro de la muestra (Observar Figura 1.4.)

Para recoger el disolvente y la muestra disuelta que salen de la columna puede utilizarse un colector de
fracciones. Consta de un gran nmero (hasta 100) de pequeos tubos situados en la periferia de un disco
circular. Se coloca uno de los tubos debajo de la columna y se recogen unos 5 ml. de eluyente (este
volumen puede ser distinto); se gira el disco y recogen otros 5 ml. en el tubo siguiente. Esta operacin se
repite hasta que todo el eluyente se ha recogido en numerosas fracciones pequeas.

Posteriormente, se examinan por separado cada una de estas fracciones para identificar los distintos
componentes de la muestra. A veces, es conveniente mezclar todas las fracciones que contienen el
mismo componente para recuperarlo en estado puro.

Otra posibilidad es hacer pasar el eluyente de la columna a travs de un aparato IR. o UV. De esta forma
se ejerce un control continuo sobre el eluyente, que puede separarse en distintas fracciones conteniendo
cada una de ellas un componente de la muestra. Cada fraccin ser posteriormente, examinada de la
forma ms adecuada.

Entre los materiales que se han utilizado como fase estacionaria pueden citarse: Al2O3, SiO2, MgO,
silicagel y resinas. Solventes tpicos son, Hexano, Benceno, Cloroformo, Acetato de Etilo, agua, ter o
mezcla de solventes. La solubilidad de los componentes de la muestra debe ser distinta, con objeto de
obtener una buena separacin.

Con mezclas complejas puede ser necesario utilizar varias mezclas de solventes. As por ejemplo, un
determinado solvente acta solamente sobre un grupo de compuestos tales como hidrocarburos, dejando
el resto de compuestos, sin disolver, en la superficie de la columna. Cuando los compuestos solubles han
eludo de la columna, puede aadirse un nuevo solvente para separar un segundo grupo de compuestos.

El primer solvente a utilizar debe ser el hexano, que separa las parafinas de la muestra. A su vez, estas
parafinas se separan mediante una segunda columna cromatogrfica por cromatografa gaseosa o por
alguna otra tcnica adecuada. Una vez separadas las parafinas se puede proceder a eluir los compuestos
aromticos, con benceno como disolvente. Despus puede tratarse con otro disolvente de caractersticas
distintas, como el ter dietlico. Cada solvente provoca la elucin de un grupo distinto de compuestos
orgnicos, lo que hace posible la separacin de la muestra en compuestos con grupos funcionales
comunes. Tambin puede utilizarse, mezclas de solventes, con incremento de la polaridad de stos. Cada
una de las fracciones separadas puede estudiarse por una nueva cromatografa, espectroscopa de

16
absorcin IR. o UV., o bien por RMN (resonancia magntica nuclear) o E.M. (espectrometra de masas). De
esta forma se llevan a cabo los anlisis cualitativo y cuantitativo de los componentes de la muestra.




Figura 1.4. Partes de una cromatografa de columna (forma abierta)


En general, los solventes se aaden en orden creciente de polaridad o constante dielctrica para disolver
los compuestos en orden de polaridad tambin, creciente, como los que ilustra la Tabla 1.1.

Este mtodo es muy utilizado en la identificacin de mezclas complejas de compuestos orgnico de
elevado peso molecular. Es frecuente operar en conjuncin con alguna otra tcnica que permita la
identificacin de los compuestos eludos.

No siempre es conveniente o necesario llevar a cabo una cromatografa en los trminos descritos. A
veces, es suficiente realizar un anlisis frontal. Para ello, se elige un solvente que disuelva fcilmente a la
muestra y la disolucin formada se aade por la parte superior de la columna. Los componentes de la
muestra sern retenidos, junto con algo de solvente en las zonas superiores de la fase estacionaria, el
resto del solvente es recogido por el extremo inferior de la columna. A continuacin, se aade un segundo
solvente que posea una elevada afinidad hacia la fase estacionaria para que desplace todos los
componentes de la muestra de la superficie de la fase estacionaria. Los compuestos que muestren menos
afinidad por la fase estacionaria descendern ms rpidamente por la columna y formarn el frente de la
muestra; los de ms afinidad y, por tanto, de movimiento ms lento constituirn la ltima fraccin. La
muestra en conjunto no es separada pero s ordenada en el sentido de que los componentes emergen en
orden inverso a su afinidad por la fase.

Este mtodo hace posible la manipulacin de muestras de gran tamao, evita la necesidad de grandes
cantidades de solventes y asegura la separacin en un corto perodo de tiempo. Aunque la separacin de
componentes no es completa, permite un rpido anlisis semicuantitativo.


17
La diferencia fundamental entre la cromatografa lquida clsica de columna abierta (C.C), y la
cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), es nicamente de tecnologa, conocimiento y aplicacin de
los parmetros que gobiernan la separacin:

a. En la cromatografa clsica, C.C;el relleno de la columna se utiliza una vez por anlisis. Esto representa
una gran perdida de material y tiempo. En HPLC la columna se puede utilizar muchas veces.

b. En cromatografa C.C. El solvente fluye por gravedad, por lo tanto para separar una mezcla de
compuestos se pueden gastar varias horas.

En la HPLC el solvente pasa por presin a travs de una bomba, manteniendo un flujo constante,
lograndose la separacin en pocos minutos.

c. El problema principal de la cromatografa de la C.C. Es la deteccin y cuantificacin de los compuestos
que eluyen de la columna. En general, se usa alguna tcnica auxiliar, como espectrofotometra, anlisis
qumico o, simplemente, un registro gravimtrico, para evaluar el contenido de cada componente en las
fracciones recolectadas.

La HPLC realiza los dos procesos automticamente, presentando los resultados en un registrador.

Existen adems otras diferencias, tales como la dimensin de la columna, el material de relleno, el sistema
de aplicacin de las muestras y el sistema de recoleccin de fracciones entre otras.

















18
Tabla 1.1. Solventes para cromatografa.


Solvente Polaridad Pebc D
20
Viscosidad

Isooctano 7.0 99.2 0.692 0.54
Eter Isoproplico 7.0 68.5 0.724 3.37
n-Pentano 7.5 36.0 0.626 0.23
n-Hexano 7.3 68.7 0.659 0.32
Eter etlico 7.4 34.6 0.713 0.32
Cicloexano 8.2 80.7 0.779 1.00
Tetracloruro de carbono 8.6 76.7 1.594 0.97
Acetato de etilo 8.6 76.1 0.900 0.45
m-Xileno 8.8 139.0 0.864 0.61
Tolueno 8.9 110.6 0.867 0.52
Cloroformo 9.1 61.2 1.481 0.57
Acetato de metileno 9.2 57.0 0.928 0.37
Benceno 9.2 80.1 0.879 0.65
Acetona 9.4 56.1 0.791 0.32
Cloruro de Metileno 9.6 39.8 1.325 0.44
Alcohol n-proplico 10.2 97.1 0.804 2.30
Piridina 10.4 115.2 0.982 0.94
Etanol ahihidro 11.2 78.5 0.789 1.20
Acetonitrilo 11.8 81.6 0.783 1.26
Acido actico glacial 12.4 118.5 1.050 0.37
Metanol 12.9 64.6 0.791 0.60
Agua 21.0 100.0 1.000 1.00


1.4.4. Cromatografa de Intercambio Inico. Desde hace muchos aos se sabe que las arcillas
(Al2O3SiO2xH2O) contienen iones metlicos capaces de intercambiarse con otros iones situados en sus
proximidades. Esta observacin ha sido de gran importancia para el conocimiento de la Qumica del Suelo.

Con este fundamento, las zeolitas naturales y artificiales han sido muy utilizadas en el ablandamiento de
aguas por intercambio de Ca
2+
y Mg
2+
del agua con Na
+
de la zeolita.

Las zeolitas (silicatos de aluminio y sodio) tienen propiedades similares a las arcillas. Recientemente se
han desarrollado cambiadores inicos de propiedades parecidas a las zeolitas, con una estructura de
polmero y un grupo funcional. Pueden ser catinicos o aninicos; en ambos casos, se utiliza una resina
como soporte inerte insoluble, aunque distinto grupo funcional.

1.4.4.1 Estructura de la resina. Como ejemplo de resina puede citarse la que se obtiene en la

19
polimerizacin del estireno con divinilbenceno:


El polmero contiene cientos de tomos de carbono que forman una rgida matriz molecular tridimensional
sobre la que se aaden, posteriormente, los grupos funcionales tal como se indica a continuacin:

1.4.4.2. Resina de intercambio catinico. En estas resinas el grupo funcional suele ser un cido. Por
sulfonacin, se puede introducir un grupo cido, generalmente: SO3H en todos los anillos bencnicos de la
resina. Se obtiene as un cambiador catinico de frmula RES-SO3H, donde RES representa la matriz y
(SO3H) el grupo cido introducido. Tambin con cidos carboxlicos, pueden obtenerse resinas similares
de frmula RES-COOH.

En los dos casos, el catin intercambiable es el hidrgeno cido (H
+
), dbilmente unido al grupo funcional
que, a su vez, est qumicamente unido a la resina. Si una disolucin que contiene iones sodio se hace
pasar a travs de una resina cida se produce el desplazamiento de los H
+
de la resina por Na
+
. El efecto
neto sera:

RES-COOH + Na
+
-----> RES-COONa + H
+


Si el grupo cido fuera el sulfnico, la reaccin de intercambio sera:

RES-SO3H + Na
+
----> RES-SO3

Na + H
+


En las mismas condiciones, la casi totalidad de iones metlicos experimentaran las mismas reacciones. Es
evidente que, al producirse el intercambio, la disolucin se va haciendo ms cida. Si el in intercambiable
es el hidrgeno, se dice que la resina est en forma cida; si es el sodio, en forma sdica.

El proceso de intercambio de iones entre la resina y la solucin es general cualquiera que sea la forma de
la resina. Eligiendo una resina en forma correcta pueden llevarse a cabo intercambios selectivos. As por
ejemplo, una resina en la forma sdica puede utilizarse para intercambiar otros metales pero no iones
sodio. En este sentido, una resina en la forma sdica podra utilizarse para extraer iones metlicos del
agua del mar sin que interfirieran los iones sodio que se intercambian por estar contenidos en el agua
original. El intercambio de in cobre se produce segn la reaccin:

Res(SO3Na)2 + Cu
2+
----> Res(SO3)2 Cu + 2Na
+


20

donde el cobre que se fija en la resina es sustituido por iones sodio en la disolucin.

1.4.4.3. Resinas aninicas. Se rige por el mismo mecanismo que las de intercambio catinico. En
general, los grupos funcionales son aminas o sales de amonio cuaternario. La frmula de una resina
aninica puede ser RES-NH3OH y la reaccin de intercambio.

RES NH3OH + Cl
-


RES-NH3Cl

+ OH
-

de esta forma se eliminan aniones de soluciones acuosas, que son sustituidas por OH
-
Utilizando una
resina que sea una mezcla de resinas catinica y aninica es posible intercambiar los cationes y aniones
del agua por H
+
y OH
-
respectivamente. De esta forma se obtiene agua, con frecuencia, ms pura que la
destilada.

1.4.4.4 Principios que gobiernan el intercambio. La velocidad del intercambio de un in est
controlada por la ley de la accin de masas. As por ejemplo, si a travs de una resina en forma sdica
(total o parcialmente) se hace pasar un cido muy fuerte, la elevada concentracin de H
+
provoca la
eliminacin de Na+ que son sustituidos por H
+
. Este proceso se ajusta al concepto de la ley de accin de
masas.

Todos los iones presentes en la columna compiten por los grupos funcionales; a igualdad de
concentracin, los grupos funcionales son saturados por aquellos iones que poseen ms afinidad por el
grupo. La afinidad de los distintos iones puede obtenerse de las reglas siguientes: El in de carga ms
elevada posee la mayor afinidad, es decir, Na
+
< Ca
2+
< La
3+
. El in de mayor tamao tiene la afinidad
ms elevada; esto es, Li
+
< Na
+
< K
+
< Cs
+
< Be
2+
<Mg
2+
< Sn
2+
. Si el in fuera demasiado grande
podra distorsionar la estructura y la regla deja de cumplirse.

1.4.4.5. Resinas de intercambio inico como mtodo de separacin cromatogrfica. La separacin
de iones en una columna de resina de intercambio inico sigue reglas similares a las que se aplican a la
cromatografa en general (cromatografa de columna). La diferencia fundamental entre los dos procesos es
que as como en cromatografa existe un equilibrio en la distribucin de la muestra entre la fase estacionaria
y la fase mvil: que es controlado por las propiedades fsicas de los componentes, en una columna de
intercambio inico, la distribucin entre las dos fases depende de propiedades qumicas.

A
-
(estacionaria) + B
-
(mvil) ------> A
-
(mvil)+B
-
(estacionaria)
<------
[A
-
mvil] x [B
-
estacionaria]
K = --------------------------------------------------
[A
-
estacionaria] x [B
-
mvil]
K: Constante de equilibrio

21
A: In en fase mvil-muestra
B: In Inicialmente en fase estacionaria

La separacin de dos componentes inicos en una columna de resina se ajusta a la ecuacin de Van
Deempter. Las bandas anchas son debidas a efectos (tales como difusin y corrientes turbulentas)
similares a los encontrados en cromatografa gaseosa. De las principales ventajas de esta cromatografa,
es la regeneracin de la resina, se puede regenerar empleando cido o base segn el tipo de resina usada
(catinica o aninica).

1.4.4.6 Aplicaciones analticas de la cromatografa de intercambio inico. Anteriormente se cit
como ejemplo de aplicacin la eliminacin en el agua de cationes y aniones utilizando una mezcla de
resinas de intercambio catinica y aninica. Este mtodo, que es bastante barato, rpido y que requiere
poca atencin, suministra un agua muy pura y es ampliamente utilizado en Qumica Analtica; presenta el
inconveniente de que no elimina las impurezas orgnicas (no inicas). Si desea un agua de elevada
pureza deben eliminarse por otro mtodo.

Las columnas de intercambio inico pueden utilizarse para concentrar los componentes inicos que
interesan de una muestra. As por ejemplo, si un agua que contiene 10 partes por milln de iones oro se
hace pasar a travs de una columna adecuada, los iones oro son retenidos. Si las disponibilidades de esta
agua son grandes, pueden tratarse varios galones con la misma columna. Para recuperar el oro, se trata
la columna con una pequea cantidad de cido fuerte como el HCl. As pues, el oro que inicialmente se
encontraba disuelto en varios galones de agua, se encuentra ahora concentrado en 100 ml. de cido. En
estas condiciones, el oro concentrado puede determinarse por algn mtodo adecuado.

El contenido total catinico de la muestra puede conocerse con un cambiador en forma cida valorando los
H
+
que intercambian con los iones metlicos presentes. Igualmente puede conocerse el contenido aninico
total con un cambiador que libere OH
-
y posterior valoracin de los mismos.

En el rea de la Qumica Orgnica, es de destacar la posibilidad de separar aminocidos utilizando una
resina apropiada. Aadiendo cido o base se ajusta el pH de la disolucin de cada grupo. De esta forma
se cambia la carga de las molculas y, por tanto, la afinidad de los aminocidos hacia la resina. Tratando
de nuevo cada una de las disoluciones con resina, pueden separarse los grupos y obtener los aminocidos
individuales.

En la prctica, las resinas se regeneran rpida y fcilmente. As por ejemplo, una resina catinica (cida)
puede llegar a saturarse con otros iones metlicos segn la reaccin:

RES-SO3H + M
+
----> RES-SO3 M
+
+ H
+


Si una vez agotada la resina (RES-SO3M) se hace pasar un cido fuerte, la resina se regenera y los iones
metlicos pasan a la solucin cida de acuerdo con la ecuacin:

22
RES-SO3M + H
+
RES-SO3H + M
+


De forma similar, las resinas aninicas se regeneran aadiendo NaOH para provocar la reaccin:

RES NH3X + OH
-
------> RES NH3OH + X
-


Los aniones X
-
se encuentran en la solucin que emerge de la columna.

Si se trata de una mezcla de resinas catinicas y aninica, la ltima debe separarse (por ejemplo, por
flotacin) antes de proceder a la regeneracin. Si sto no es posible, se pierde la mitad de la resina. Por
ejemplo, si la mezcla se trata con un cido fuerte, se regenera la resina catinica pero no la aninica, que
permanece saturada. Sin embargo, si previamente se ha separado por flotacin o por algun otro mtodo,
las resinas pueden tratarse individualmente y, posteriormente, mezcladas, para nuevo uso.



Figura 1.5. Equipo para cromatografa de intercambio inico.

Instrumentacin: Un equipo para anlisis mediante cromatografa de intercambio inico (C.I.I.) est
constituido bsicamente por los componentes siguientes: Un inyector, una vlvula para la inyeccin, un
compartimiento para la columna, una o varias columnas, una bomba un sistema de deteccin
conductimtrico, un sistema de registro o de integracin, un automuestrador, un microprocesador para
automatizar operaciones y un computador para manejar y almacenar informacin (observar Figura 1.5.).

El diseo de un equipo con estas caractersticas, permite aplicaciones analticas cualitativas y cuantitativas
rpidas, selectivas y simultneas principalmente de especies inicas inorgnicas en el rango de
microgramos por litro en muestras de aguas, contaminantes ambientales, industria de alimentos, bebidas,
productos farmacuticos, recubrimientos, productos agrcolas, laboratorios clnicos, laboratorios de
control de calidad y anlisis en general.

Las determinaciones de aniones y cationes ms frecuentes son: Cloruros, bromuros, fluoruros, nitritos,

23
nitratos , sulfatos, fosfatos, boratos, sulfocianuro, silicatos, litio, sodio, potasio, calcio, magnesio, estroncio,
bario, zinc, cobalto, manganeso, amonio, cidos carboxlicos (tartratos, lactato, acetato) y aminas (metil
amina, dimetil amina, trimetil amina).

1.5. Cromatografa Lquido-lquido

La cromatografa lquido-lquido (CLL) pertenece al grupo de las cromatografas de particin, ya que los
componentes de la muestra se separan por desintegracin entre las fases mviles y estacionarias (la cual
est ligada a un soporte por adsorcin) y difiere poco de la tradicional cromatografa lquida (CL); como se
explic anteriormente para el caso de las cromatografas lquidas y se ilustr en el Cuadro 1.1.

La separacin de la muestra se efecta segn como la fase estacionaria sea presentada; y hay dos formas
generalmente. La primera se desarrolla en forma anloga a la de cromatografa de gases-lquido, que ser
ampliamente presentado en este tratado, en la prxima unidad, la cual es su propsito central: Adicionando
una solucin de la fase estacionaria a un soporte y luego evaporando el solvente, distribuyndose as, la
fase estacionaria sobre el soporte. Y la segunda se conoce como de fase ligada o enlazada (CFL y/o CFE),
donde la fase estacionaria ha sido ligada a una matriz, que comnmente es el octadecilsileno -ODS-, como
se muestra seguidamente:
R
|
---- Si ---- o ---- Si -C18H37
|
R
Enlace silileter -ODS-

De acuerdo a lo anterior, la cromatografa lquido- lquido, se clasifica en normal y en fase inversa.

El uso de la fase ligada, como fase estacionaria, le permiti a la CLL, ms utilidad, ya que tiene varias
ventajas sobre la normal, como las siguientes:

- Mayor estabilidad entre la fase estacionaria y el soporte.
- Utilizar solventes polares.
- Reproducibilidad de las cromatografas.
- An as, las limitaciones de utilizar la CLL, con respecto a otras tcnicas cromatrogrficas siguen
siendo grandes.
Todava no se ha eliminado:
- La saturacin de la fase mvil por la fase estacionaria.
- El no poder efectuar gradiantes de elucin.


24
1.6. Tcnicas Especiales.

El desarrollo de las tcnicas especiales ha surgido por la necesidad en tener una mayor rapidez de
separacin, utilizar solventes polares y separar cantidades grandes de muestras, buscando alternativas y/o
variantes de las tcnicas normales cromatogrficas. Es as, como hoy, se emplean en diversas actividades
industriales e investigativas, tcnicas como la cromatografa flash, delgada en fase inversa, flujo
contracorriente (Droplet countercurrent chromatography)
*
y cromatografa lquida al vaco.

1.6.1. Cromatografa FLASH. Este mtodo de cromatografa fue descrito por Still y colaboradores en
1978. Es una alternativa, de la cromatografa normal de columna, para separar rpida y eficientemente
compuestos orgnicos no voltiles.

En este procedimiento, se necesita bsicamente, la utilizacin de aire o un gas inerte a presin, con el
objeto de aumentar el flujo y dar rpidas separaciones, usando silica gel 40 de dimetro y eluyendo con
solventes no polares (0.1 s Rf s 0.35).

La Figura 1.6. ilustra el equipo diseado por Still y colaboradores para hacer la separacin, de dos
alcaloides 2 epinricos:
-----------


Figura 1.6. Equipo paralizar cromatografa FLASH.


Un equipo semejante hoy se consigue comercialmente* y con el objeto de que este procedimiento, pueda
hacerse a bajo costo y utilizar en los cursos de qumica orgnica general, THOMPSON Y HANSON (1984)
y JACOBSON (1988) han presentado modificaciones que lo facilitan.
Usando este procedimiento, se pueden separar muestras con peso entre 0.1 a 10 gr. consumiendo poco

2 Scince,167, 1970. p. 281

25
solvente y silica en un tiempo de 10-30 minutos

1.6.2 Cromatografa de capa delgada en fase inversa. (CCD-FI ). La cromatografa de capa delgada o
de papel, fu la tcnica cromatogrfica ms difundida, en los primeros aos de estudios de la ciencia
qumica y afines, dada su versatilidad e informacin sobre los compuestos de una mezcla.

En esta tcnica tambin los compuestos podemos decir que se separan por particin, ya que la silica gel
utilizada contiene agua, por lo cual la separacin ocurre por particin lquido-lquido (CLL). Con la
introduccin de las fases ligadas (se origina la tcnica cromatogrfica en fase inversa), esta tcnica ampli
su radio de accin, denominndose cromotagrafa de capa delgada en fase inversa. Y si junto con la fase
estacionaria (fase ligada) usamos solventes polares se logra que los compuestos polares migren ms
rpidamente que los no polares de una muestra: Principio semejante al de la cromatografa HPLC.

La ventaja que se obtiene con la CCD-FI, es su facilidad de operacin, ya que la fase ligada se puede
obtener fcilmente, tratando la silica gel con aceite de parafina al 10% en ter, se obtiene una buena fase
estacionaria ligada.

1.6.3. Cromatografa lquida al vaco (CLV).

Procedimiento descrito por COLL y BOWDEN3, es ms una tcnica cromatogrfica preparativa, donde la
elucin es ayudada por vaco. En la aplicacin ms generalizada de esta cromatografa, se hace
empleando el equipo que se muestra en la Figura 1.7, Usando como adsorbente silica gel 60H o





Figura 1.7. Equipo para la cromatografa lquida al vaco.

Almina 60H (en relacin 1/50; muestra adsorbente, hasta una altura de 5 cms. del adsorbente) y eluyendo

3 Chem,j. ED. 58, 1981 p.997-1003
a.Adsorbente
b.Vidrio sinterizado
c. Tapn de caucho perforado
d.Erlenmeyer de filtracin
e. Tubo de ensayo
F. Algodn
g. Vacio


a. Adsorbente
b. Vidrio sinterizado
c. Tapn de caucho perforado
d. Erlenmeyer de filtracin
e. Tubo de ensayo
F. Algodn
g. Vaco

26
en orden creciente de polaridad con los solventes ms comunes para los trabajos en cromatografa de capa
delgada: Hexano, ter de petrleo, diclorometano, acetato de etilo, acetona y metanol.

Procedimiento que ha dado resultados satisfactorios para fragmentacin de extractos brutos en trabajos
fitoqumicos recientes de extraccin de metabolitos secundarios en pasto Braquiaria decumbus y altamisa
(Partheniun hysterophorus).

1.6.4. Electrocromatografa: Es una combinacin de la cromatografa slido-lquido y del efecto de un
campo elctrico sobre una partcula cargada. Como soporte para la muestra y el disolvente se emplea una
lmina de papel y una fase estacionaria. Los componentes de la muestra se separan por desplazamiento
hacia abajo, como en una cromatografa normal. Simultneamente, se aplica un campo elctrico
perpendicular a la direccin de desplazamiento. El efecto neto resultante es que los componentes
describen trayectorias como las que se muestran en el esquema de la Figura 1.8. Estas trayectorias
dependen de las velocidades de desplazamiento lateral y hacia abajo. As por ejemplo, supongamos que
en el equipo de la Figura 1.8. los componentes han de recorrer una distancia de 40 cm. en sentido
descendente: El tiempo que tardar cada uno de ellos en alcanzar el colector depender de su velocidad
en este sentido.

As el componente A recorre 10 cm. hacia el nodo mientras recorre 40 cm. hacia abajo; el B, 7.5 cm.
hacia el nodo y 40 cm. hacia abajo; C no se desplaza lateralmente y el D, 10 cm. hacia el ctodo durante
un recorrido de 10 cm. en sentido descendente. En definitiva, el resultado neto es una separacin clara de
los componentes cuando alcanzan la base del papel.

- Anlisis electrocromatogrfico contino. En un anlisis electrocromatogrfico, la velocidad de
flujo descendente de cada componente depende de los mismos factores que controlan la separacin
en una cromatografa slido-lquido.



Figura 1.8. Esquema del equipo utilizado para electrocromatografra.
Estos factores, que se han considerado anteriormente (1) la solubilidad de cada componente en el

27
disolvente que se desplaza y (2) la tendencia de stos a ser retenidos en la superficie del substrato. Si las
fuerzas atractivas entre el componente y la fase estacionaria son importantes (fuerza de absorcin), la
velocidad de flujo descendente por el papel ser pequea.

El mismo efecto se observa si se aumenta el rea superficial de la fase estacionaria. El movimiento lateral
de los componentes depende del campo aplicado. Segn que el componente est cargado positiva o
negativamente, el desplazamiento lateral ser hacia el ctodo o hacia el nodo, respectivamente; si no
posee carga elctrica no experimentar desviacin alguna. As pues, la carga del componente controla el
desplazamiento horizontal. La distancia lateral recorrida por cada componente depende del tiempo que
tarde en alcanzar la base del papel, la velocidad del movimiento lateral depende del campo aplicado y de la
carga elctrica. Cuanto mayores son la carga y el campo aplicado, mayor es la fuerza atractiva y ms
rpido el movimiento. As mismo, cuanto mayor es el tamao de la molcula ms lento es el movimiento,
ya que las molculas grandes gastan ms tiempo en la superficie de la fase estacionaria. El efecto neto de
este factor es variable.

1.6.4.1. Aplicaciones analticas. La aplicacin ms importante de la electrocromatografa, al igual que
todas las formas de cromatografa, es la separacin de los componentes de una muestra. Una vez
separados, los componentes pueden ser identificados y determinados por algn mtodo adecuado (tal
como espectroscopa de absorcin IR, o atmica). En general, la electrocromatografa es ms utilizada con
muestras acuosas aunque tambin ha encontrado aplicaciones con disolventes orgnicos. El mtodo es
continuo; una vez en marcha el equipo. La muestra puede ser aadida de forma continua a la superficie del
papel y recogida en la base. Por otra parte, el proceso de separacin no es destructivo y los componentes
se recogen inalterados.

Con esta tcnica pueden detectarse cambios en la composicin del suero humano (que se altera en una
persona enferma). Tambin puede utilizarse para separar colorantes o purificarlos.

La electrocromatografa permite la separacin de mezclas de iones metlicos as como de aniones. Es
necesario un cuidadoso control de pH, ya que los cambios de pH afectan sensiblemente la carga sobre los
iones metlicos.

Por otra parte, los agentes acomplejantes modifican las caractersticas de flujo de los componentes. As
por ejemplo, la separacin de dos metales que en condiciones normales, sean difciles de separar puede
lograrse acomplejando uno de ellos y dejando el otro en su estado normal. Aunque el mtodo no est muy
divulgado, para algunas aplicaciones especiales, es superior a cualquiera otro.

Electroforesis capilar: La investigacin y aplicacin de la electroforesis en tubos capilares al final de la
dcada de los aos ochenta del siglo pasado, dio origen a varios instrumentos comerciales para producir
separaciones a altas velocidades y gran resolucin con volmenes de muestras extremadamente pequeas
por el orden de 0.1 a 10 nanolitros (nL), en contraste con la electroforesis ordinaria que emplea volmenes
por el orden de microlitros (L). Las especies separadas son eluidas desde uno de los extremos del capilar,
por lo cual se puede hacer uso de detectores cuantitativos como los utilizados en cromatografa lquida de

28
alta resolucin en lugar de las tcnicas de coloracin de la electroforesis comn.

La electroforesis capilar ha permitido solucionar una gran cantidad de problemas analticos mediante su
aplicacin en varias modalidades como la electroforesis capilar en gel utilizada en las separaciones de
macromolculas, como protenas, fragmentos de ADN y ologonucletidos que tienen en esencia la misma
carga pero distinto tamao. Una de sus mayores aplicaciones ha sido en la investigacin del genoma
humano en la secuencializacin del ADN.

2. Cromatografa de Gases: En la cromatografa de gases los componentes de una muestra vaporizada
se separan como consecuencia del reparto entre una fase gaseosa y una fase estacionaria Contenida en
una columna. Al efectuar una separacin cromatogrfica de gases, la muestra se vaporiza y se inyecta en
la cabeza de la columna. La elucin se lleva a cabo mediante el flujo de una fase mvil de gas inerte. A
diferencia de la mayora de las otras tcnicas cromatogrficas la fase mvil no interacta con las molculas
de los compuestos a separar su nica funcin es transportar los compuestos a travs de la columna. La
cromatografa de gases en sus modalidades gas slido, gas liquido es aplicada en la separacin y anlisis
qumico de compuestos voltiles. La cromatografa gas slido se basa en una fase estacionaria slida en la
cual la retencin de los analitos ocurre por que hay adsorcin y su aplicacin es limitada a la separacin
de ciertos compuestos gaseosos de bajo peso molecular.

La adsorcin es la adherencia de los tomos iones o molculas de un gas o lquido a la superficie de otra
sustancia denominada adsorbente, los sistemas ms comunes son gas slido y lquido slido. Los
materiales finamente divididos (carbn activado, almina activa, silicagel) o microporosos con una gran
rea de superficie activa son fuertes adsorbentes por lo cual son utilizados como fases estacionarias en la
cromatografa gas slido ya que cuando estn presentes las molculas de dos o ms sustancias, las de
una sustancia pueden ser adsorbidas ms fcilmente que las de las otras, fenmeno conocido como
adsorcin preferente. Tambin son usadas como soportes de de la fase lquida estacionaria en la
cromatografa gas lquido.

La quimioadsorcin es la formacin de enlaces entre las molculas superficiales de una sustancia con
gran energa superficial y otra sustancia gaseosa o lquida que entra en contacto con ella. Los enlaces as
formados son comparables, en fuerzas a los enlaces qumicos corrientes y mucho ms fuertes que los
enlaces de Vander Waals que caracterizan la adsorcin fsica. La quimiadsorcin es aprovechada en la
cromatografa gas lquido en el desarrollo de fases lquidas estacionarias enlazadas o ligadas al soporte
slido.

La absorcin es la penetracin de una sustancia en la estructura interna de otra. Puede ser fisicoqumica
como, en el caso de un lquido que toma molculas de un gas o vapor y es muy importante en el proceso
de separacin por cromatografa gas lquido.

La cromatografa Gas lquido tiene gran aplicacin en todos los campos de la ciencia, es de las ms
utilizadas en la qumica analtica por ser una tcnica donde se trabaja con cantidades de muestra muy
pequeas, por el orden de dcimas de microlitros y menores, es una Tcnica de alta sensibilidad, bajos

29
lmites de deteccin y cuantificacin ( por el orden de 10
-14
g), gran exactitud y precisin, es muy selectiva
con pocas interferencias permitiendo la separacin de mezclas muy complejas, se obtienen datos analticos
reproducibles de alta confiabilidad, por lo cual es objeto de estudio en la segunda unidad de estos
apuntes.

3. Cromatografa de fluidos supercrticos: Es un hibrido de la unin de la cromatografa de gases y
cromatografa de lquidos, en la cual se tienen en cuenta algunas de las mejores caractersticas de cada
una.

En ciertas aplicaciones es superior a la cromatografa de gases y a la cromatografa lquido lquido de alta
eficiencia o HPLC. La cromatografa de fluidos supercrticos es importante por que permite la
separacin y determinacin de un grupo de compuestos que no son manejados convenientemente ni por la
cromatografa de gases ni por la de lquidos. Estos compuestos son 1) no voltiles o trmicamente
inestable por lo cual la cromatografa de gases es inaplicable 2) no contienen grupos funcionales que
permitan la deteccin mediante tcnicas espectroscpicas o electroqumicas que se utilizan en
cromatografa de lquidos de alta resolucin.

En la cromatografa de fluidos supercrticos la fase estacionaria es lquida y la fase mvil es un fluido
supercrtico. Un fluido supercrtico se forma siempre que una sustancia se calienta por encima de su
temperatura crtica. La temperatura crtica de una sustancia es aquella por encima de la cual no puede
existir en fase lquida independientemente de la presin. La presin de vapor de una sustancia a su
temperatura crtica es una presin crtica. Una sustancia a temperaturas y presiones por encima de su
temperatura y presin crticas (punto crtico) se denomina fluido supercrtico. La densidad, viscosidad y
otras propiedades de los fluidos supercrticos son intermedias entre las propiedades de esa sustancia en
estado gaseoso y en estado lquido. Una propiedad de los fluidos supercrticos que est relacionada con
sus densidades elevadas (0.2 a 0.5 g/cm
3
, es su capacidad para disolver molculas grandes no voltiles.
El dixido de carbono (Co2) supercrtico por su capacidad de disolver fcilmente hidrocarburos alifticos
con un gran nmero de tomos de carbono es una de las fases mviles ms utilizada en esta tcnica
cromatogrfica y procesos industriales de extraccin.












30







UNIDAD 2

2. CROMATOGRAFIA DE GASES
4


Objetivo General

Presentar al estudiante los principios generales de la cromatografa gas lquido, para su aplicacin en el
anlisis cualitativo y cuantitativo de mezclas de lquidos orgnicos.

Objetivos Especficos

Terminada la unidad, el estudiante ser capaz de:

1. Determinar los principios fsicos que gobiernan los procesos de separacin por cromatografa gas lquido.

2. Definir los trminos utilizados en cromatografa gas lquido.

3. Reconocer, clasificar y describir la funcin de cada uno de los componentes de una columna
cromatogrfica y medir su eficiencia.

4. Reconocer y describir la funcin de cada una de las partes que integran un cromatgrafo de gases.

5. Diferenciar la cromatografa gas-lquido de la cromatografa lquida de alta eficiencia.













4 Materiales didcticos recopilados y organizados por el profesor Federmn Castro Eusse para la
asignatura anlisis Instrumental II.

31





2. Cromatografa de gases

2.1. Cromatografa Gas-slido

En cromatografa Gas-Slido la fase estacionaria es un slido y la fase mvil un gas, el proceso de particin
se opera en equilibrios de adsorcin gaseosa.

La cromatografa Gas Slido ha sido de limitada aplicacin debido a las dificultades que presenta para
reproducir las reas superficiales, por dejar colas en los picos de elucin y por la retencin semipermanente
de gases activos sobre la superficie slida.

En la cromatografa Gas Lquido la fase fija est constituida por un lquido, sostenido sobre una matriz
slida inerte y el proceso de separacin se da mediante equilibrios lquido-vapor. Es el proceso de
separacin por fraccionamiento ms importante y de mayor uso por los qumicos.

2.2. Cromatografa Gas-lquido. La cromatografa Gas-Lquido puede definirse como una tcnica
analtica til en la separacin, identificacin y cuantificacin de los compuestos de una mezcla. Se
fundamenta en la diferencia de velocidades de migracin de sus compuestos individuales al ser arrastrados
por un gas inerte a travs de un tubo relleno de un material adecuado que soporta un medio lquido fijo o
estacionario.

2.2.1 Descripcin del proceso de separacin por cromatografa gas lquido.

1) se inicia con la introduccin de la muestra en fase gaseosa por la parte superior de la columna, cuando la
muestra es lquida se debe pasar a la fase de vapor.

2) Los componentes que tienen buena solubilidad en la fase estacionaria se distribuyen entre sta y la fase
mvil gaseosa segn la ley del equilibrio (liquido- vapor).

3) La elucin se hace por medio de un gas inerte que se hace pasar a travs de la columna denominado
gas de arrastre o portador.

4) La velocidad de movimiento de los distintos compuestos de la mezcla a lo largo de la columna depende
de su tendencia a disolverse en la fase lquida estacionaria, la diferencia en la energa libre de Gibbs
RT
G
K
g
0
ln
A
= para la evaporacin de los diferentes compuestos de la fase estacionaria, da como
resultado tiempos de retencin diferentes para cada compuesto.

5). Si el coeficiente de particin favorece la fase lquida estacionaria la cual es el disolvente, se obtendr

32
una baja velocidad, pero para aquellos compuestos cuya solubilidad es baja en la fase lquida la velocidad
de desplazamiento a lo largo de la columna ser ms rpida.

6) Cada componente de la muestra gasta una parte de su tiempo en la fase estacionaria ( debido a las
fuerzas de retencin) y otra en la fase mvil ( debido a las fuerzas de elucin),que es cuando se desplaza
hacia la parte final de la columna. (Si en una columna se colocan dos tipos de molculas diferentes como
un hidrocarburo aliftico y un compuesto aromtico, es muy probable que el tiempo que permanezcan en la
fase mvil sea distinto).

7) El compuesto que tiene menor afinidad por la fase estacionaria llegar ms rpidamente al final de la
columna de tal manera que es detectado por un instrumento que convierte la presencia del compuesto en
una seal elctrica proporcional a la cantidad o concentracin del mismo.

8) La seal anloga dada por el detector es amplificada y convertida en una seal digital la cual es
procesada para dar un registro grfico.

9) El registro grfico de la elucin de cada compuesto viene dado por curvas en forma de campana de
Gauss o picos, recibe el nombre de cromatograma; usado para el anlisis cualitativo y cuantitativo.

10) La identidad de los compuestos se hace con base en el tiempo que cada compuesto es retenido por la
fase estacionaria de la columna y en trminos cromatogrficos se denomina tiempo de retencin
simbolizado como tr .La identificacin tambin puede hacerse acoplando el cromatgrafo con otras tcnicas
analticas como la E.IR, E.UV, EM, RMN. Etc.

11) La cuantificacin se hace midiendo el rea bajo la curva o pico correspondiente a cada compuesto y
relacionndola con la cantidad o la concentracin; tomando como base que el rea es directamente
proporcional a la cantidad o a la concentracin del compuesto. Dependiendo de la forma de los picos
(simetra) tambin se puede cuantificar mediante una relacin directa de la altura del pico con la cantidad o
la concentracin.

2.2.2 Mediante algunos datos supuestos se tratar de ilustrar el anlisis cromatogrfico.

Tomemos un gas Z y supongamos que fluye con una velocidad constante de 30 cm/minuto a determinadas
condiciones de temperatura y presin a travs de un tubo vaco de 120 cm de largo y 1 cm de dimetro,
tardara 4 minutos en pasar. Si el tubo lo llenamos de arena y hacemos pasar nuevamente el gas Z que
suceder? Por supuesto que fluira ms lentamente, si su velocidad fuera de 20 cm/minuto, tardara 6
minutos para atravesar el tubo.

En estas condiciones el tubo con arena es similar a una columna de cromatografa gaseosa, en la cual la
arena ser la fase estacionaria y el gas que fluye la fase mvil.

Complementemos esta analoga considerando algunas propiedades de los gases y vapores solubles:

Coloquemos en un recipiente un lquido no voltil A, a condiciones constantes de temperatura y presin, se
introduce en el recipiente el gas Z que hemos considerado anteriormente y que es soluble en el lquido no

33
voltil A. Cerremos hermticamente el recipiente. Qu suceder despus de transcurrido algn tiempo?
Lgicamente que el gas sobre el lquido se encuentra en equilibrio con el gas disuelto, es decir, se ha
establecido un equilibrio, lo que indica que la distribucin de molculas gaseosas en el lquido y en el gas
permanece constante. No obstante, se presenta un equilibrio dinmico dndose un intercambio entre las
molculas gaseosas en los dos estados, as pues, las molculas gaseosas se disuelven a la misma
velocidad con la cual las molculas de gas disuelto abandonan el lquido. Cada molcula del gas Z gasta
una parte constante de su tiempo en el lquido A y el resto en la fase gaseosa.

Saquemos la arena del tubo, empapmosla con el solvente A en una forma homognea y volvamos a
ubicarla en el tubo. Aqu ya existe una mayor analoga con una columna para cromatografa Gas Lquido.

La arena ser el soporte de la fase estacionaria, el lquido no voltil A ser la fase lquida y el gas Z ser la
fase mvil.

Supongamos que el Gas Z pasa un 40% de su tiempo en el lquido A y un 60% en estado gaseoso.

Hagamos pasar nuevamente el gas Z a travs del tubo, Qu suceder con el tiempo que gasta para
atravesarlo? Aumentar? Disminuir? Evidentemente aumenta, pues el gas ser retenido por la fase
estacionaria y slo se mover cuando se encuentre en estado gaseoso. El tiempo que demora el gas en
atravesar la columna se denomina en trminos cromatogrficos tiempo de retencin y se simboliza por
r
t .
Anteriormente hicimos el supuesto de que el gas Z cuando el tubo se encontraba lleno de arena lo
atravesaba con una velocidad de 20 cm/min demorndose 6 minutos, ahora el gas en presencia del lquido
no podr hacerlo con el 100% de su velocidad sino que lo har con una velocidad media de:
60/100 x 20 cm/min = 12 cm/min, denominada velocidad lineal Demorndose para atravesar el tubo 10
minutos.

Si sustituyramos el gas Z por un segundo gas Y observamos que en igualdad de condiciones el gas Y
gasta slo un 20% de su tiempo en el lquido, y un 80% de su tiempo en estado gaseoso si lo hacemos fluir
a travs del tubo con arena humedecida con el lquido A, su velocidad media sera:
80/100 x 20 cm/min = 16 cm/min y tardara para atravesar el tubo 7.5 minutos.

Si hiciera pasar a travs del tubo lleno de arena embebida en el lquido A una mezcla del gas Z y Y, en
igualdad de condiciones a los casos anteriores, Qu suceder? Que el gas Y saldra a los 7.5 y el Z a los
12 minutos obtenindose su separacin. Usando un gas inerte como fase mvil para arrastrar el gas Z y el
gas Y se logra ms rpida y mejor la separacin.

Qu fraccin de tiempo pasa un compuesto en la fase mvil?. Cuando se encuentran en la fase mvil,
las molculas de soluto se transportan a la velocidad de la fase mvil. Cuando una molcula se asocia
a la fase estacionaria, no se mueve. Por tanto se puede enunciar una ley como base de todas las
separaciones cromatogrficas: La velocidad media de una sola molcula depende del tiempo
medio que permanece asociada a la fase estacionaria comparado con el tiempo en que se mueve
con la fase mvil

Esta ley puede expresarse por medio de una ecuacin. La ecuacin contiene la velocidad lineal la cual

34
representa la velocidad media a la que fluye la fase mvil a lo largo de la columna.

Por lo tanto: Velocidad media de desplazamiento = velocidad de la fase mvil X fraccin de tiempo de la molcula
en la fase mvil + velocidad lineal de la fase estacionaria X fraccin de tiempo de la molcula en la fase estacionaria.

Debido a que la velocidad lineal de la fase estacionaria es cero, el segundo trmino no contribuye a la
medida. Si se llama V a la media de la velocidad lineal de la fase mvil, entonces: velocidad media de
desplazamiento = V X fraccin de tiempo de la molcula en la fase mvil.

Podemos relacionar el coeficiente de particin
g
K con el tiempo de retencin
r
t considerando la
fraccin de tiempo que la molcula est en la fase mvil es igual a la fraccin de especies que se
encuentran en la fase mvil. Escrito en forma de ecuacin para un compuesto la idea se puede
expresar as:

Nmero de moles del compuesto en la fase mvil
Fraccin de tiempo de un compuesto en la fase mvil = __________________________________________________________________

Nmero total de moles del compuesto en la fase mvil y en la fase estacionaria


El nmero de moles del compuesto es igual al producto algebraico de la concentracin molar y el
volumen por lo tanto los subndices m y s, se refieren a la fase mvil y estacionaria respectivamente:

Fraccin de tiempo en la fase mvil=
s s m m
m m
V C V C
V C
+
La ecuacin anterior se puede expresar en
trminos de coeficiente de distribucin,
m
s
g
C
C
K = , haciendo las respectivas sustituciones.
En la grfica de la figura 2.1 , la extraccin sucede a medida que la fase mvil se mueve a travs de la
fase estacionaria, la idea de que la separacin es equivalente a una extraccin de un nico equilibrio,
ocurre a travs de una longitud especfica entre dos fronteras conceptuales, est incluida en este
modelo. La longitud (o altura) entre estas fronteras conceptuales es un plato terico.




35

Figura 2.1 Grafica que muestra la idea de la cromatografa como una extraccin.




2.2.3. Glosario de trminos y frmulas
5
.

Cromatograma: Representacin grfica de los picos de elucin de una mezcla en un plano de
coordenadas, en cuya abscisa se encuentra el tiempo o el volumen de retencin y en ordenadas la seal
del detector en mv. Es el registro obtenido al representar grficamente la salida de los distintos
componentes de la mezcla.

Lnea Base: Lnea dibujada por el registrador o monitor de un Cromatgrafo en ausencia de muestra.

Punto de Inyeccin: Momento en que se introduce la muestra al sistema cromatogrfico.




5
Stanbuk,Jorge
Walter,J.Q. Jackson, Jr.M.T. And MaynardJ.B. Ed Chromatographic System.maintenance and
troubleshooting. 2a. Edition, Academic press. New York.


36


Figura 2.2. Representacin grfica de un pico cromatogrfico y un cromatograma de tres compuestos.
Campana de Gauss: Curva normal, forma ideal de un pico cromatogrfico de elucin. La base del
tringulo obtenido al trazar tangentes a los puntos de mximo pendiente, tiene una longitud de cuatro
veces la desviacin tpica estndar. La cual tomada como longitud o como tiempo es la base para los
clculos cuantitativos y relacionados con la eficiencia de la columna y tiempo de retencin.

Altura h: Altura del pico, la distancia perpendicular desde la lnea base y la mxima deflexin del pico.

Ancho de la base W: La distancia entre las intersecciones de las tangentes a los puntos de inflexin con la
lnea base.

Wh: Ancho a la mitad de altura.

Tiempo de retencin tr: Tiempo requerido para que el mximo de un pico de soluto llegue al detector en
una columna cromatogrfica.

Tiempo muerto tg: Tiempo de retencin de un gas o de un componente cuya solubilidad en la fase lquida
es muy baja, (ejemplo: oxgeno, aire), y su velocidad se aproxima a la velocidad del gas portador.

Tiempo de retencin corregido

r
t : Equivale al tiempo de retencin menos el tiempo muerto (tiempo de
retencin del aire).

Volumen de retencin Vr: Volumen de gas requerido para llevar un mximo de componente a travs de la
columna.

Volumen muerto Vg: Volumen de retencin para un componente que no interacta con la fase lquida.

Volumen de retencin corregido a la presin media de la columna

r
v : Corresponde a Vr - Vg .

37

Resolucin R: Es el grado de separacin entre dos picos. Es funcin del ancho y la distancia entre los
picos.


2 1
2
W W
d
R
+
=


d : Distancia entre dos picos adyacentes.

1
W : Ancho de base del pico 1

2
W : Ancho de la base del pico 2

Cuando R = 1.5, la separacin es completa.

Factor de retencin o: Medida de la capacidad de una fase estacionaria de separar dos compuestos.

Esta es la relacin de los tiempos de retencin corregidos (relativos) entre los componentes, o la relacin
entre los coeficientes de particin.


y
x
K
K
= o
ry
rx
t
t
= o

Factor de capacidad k': Es un trmino que depende de las propiedades de la columna y del soluto. Es la
relacin entre tiempo de retencin corregido de un compuesto y el tiempo muerto.

K'
g
g r
t
t t
=
Factor de retardo Rf: Razn entre las velocidades de movimiento de un compuesto y el gas portador, a
travs de la columna.

Coeficiente de particin Kg: La relacin de concentracin de soluto en la fase estacionaria con relacin a
la concentracin de soluto en la fase mvil (Gas de arrastre o gas portador).

Concentracin de soluto en la fase lquida (peso/ml)
Kg = ----------------------------------------------------------------
Concentracin de soluto en la fase gaseosa (peso/ml)

Columna: Tubo de (metal, vidrio tefln o slice) que contiene la fase estacionaria.

Columna rellena empacada o analtica: Tubo de vidrio o metal que contiene en su interior tanto el
soporte slido como la fase lquida o estacionaria.

Columna capilar: Columna de dimetro pequeo (0.5 a 0.25 mm de dimetro), de longitud relativamente

38
apreciable (45 a 90 metros), puede contener nicamente la fase estacionaria depositada slo en las
paredes internas. (WCOT - wall coat open tubuler) y la fase estacionaria qumicamente ligada a la pared
(WBOT - wall bond open tubular). Se denomina tambin columna de Golay.

Eficiencia N: La capacidad de una columna para mantener la forma aguda de los picos. Este es el primer
criterio para evaluar la calidad de una columna.



2
16 |
.
|

\
|
=
Y
X
N o
2
16
|
|
.
|

\
|
=

W
t
N
r

r
t = Tiempo de retencin corregido
W = Anchura del pico en la base. Tiempo que gasta el compuesto en atravesar el detector.
N = Nmero de platos

Soporte slido: Slido poroso e inerte que va dentro de la columna y en el cual se empapa o se liga
qumicamente la fase lquida o estacionaria.

Sustrato: Superficie recubierta por la fase lquida.

Fase lquida: Llamada tambin fase estacionaria; es un lquido poco voltil a la temperatura de operacin
de la columna, el cual se encuentra distribuido uniformemente sobre el soporte slido.

Fase ligada: Fase estacionaria unida qumicamente al soporte

Gas de arrastre: Gas inerte que lleva a travs de la columna los componentes de la muestra. Los ms
comunes son: Helio, Nitrgeno, Argn y Argn/Metano.

Flujo Fc: Es el flujo volumtrico del gas de arrastre medido a la temperatura de la columna y a la presin de
salida. Determinado en volumen por unidad de tiempo (mL/s)

Velocidad lineal de flujo: relacin entre la longitud de la columna y el tiempo que demora un compuesto
para recorrerla.

Rotmetro: Medidor del flujo de gas, consistente en una esfera pequea contenida en un tubo de vidrio.
La velocidad de flujo es funcin del peso de la esfera en el tubo.

Medidor de flujo de burbuja: Es un medidor de flujo de gas conformado por un tubo de vidrio graduado,
una pera de caucho y una solucin de jabn. El flujo se determina midiendo el tiempo que gasta una
burbuja en desplazarse un rango seleccionado de la graduacin.

Elucin: Es la salida al final de la columna de un componente de la muestra.

Splitter: Divisor fijo o variable del volumen de muestra inyectada.

39

Teora de platos
1
: De acuerdo con la definicin de coeficiente de particin una sustancia que entra en
una columna junto con el gas de arrastre se disolver en la fase lquida hasta que se establezca un
equilibrio de acuerdo con los valores de la concentracin en la fase estacionaria y en la fase mvil.

Durante el paso de la sustancia a lo largo de la columna, este equilibrio se rompe por efectos del transporte
y debe restablecerse consecutivamente. Desde el punto de vista terico es conveniente considerar este
proceso en varios pasos continuos de equilibrio, es como si se dividiera la columna en un nmero de
secciones iguales entre s; en cada una de estas secciones el equilibrio vapor lquido debe restablecerse.

Se ha denominado a cada una de estas secciones plato terico; en forma similar al trmino empleado en
la destilacin (Equilibrio lquido-Vapor en las columnas de destilacin).

Ln Kg = -AG/RT: Expresin general matemtica que describe que la retencin es funcin de la
temperatura columna y la volatilidad del soluto mientras esta disuelto en la fase estacionaria, las diferencias
en la energa libre de Gibbs para la evaporacin de los solutos de la fase estacionaria, resulta en tiempos
de retencin diferentes para los distintos solutos. Donde:
KD: Constante de distribucin, factor de reparto o coeficiente de distribucin.

AG: Cambio en la energa libre de Gibbs para la evaporacin del compuesto en la fase estacionaria.

T: Temperatura de la columna en grados Kelvin.

R: Constante de los gases ideales.

Detector: Dispositivo que convierte la presencia de un componente de la muestra en una seal elctrica al
final de la columna. Los detectores monitorean por medio del cambio en alguna de las propiedades fsicas
de los gases.

Amplificador: Parte del sistema electrnico que amplifica la seal producida en el detector cuando un
componente de la muestra es eludo.

Selectividad: Es la tendencia de un detector o columna a responder o separar ms a cierta clase de
compuestos que a otros.
Sensibilidad: cambios en la seal producidos por cambios en la concentracin.

Atenuacin: Parte del sistema electrnico que atena o reduce la seal ha ser llevada al registrador o
monitor.

Monitor: Parte del hardware del computador donde se presenta el cromatograma y dems informacin.

Registrador: Instrumento que grafica los picos de los componentes eludos de una muestra conformando
el cromatograma.


40
Integrador: Instrumento usado para determinar el rea bajo la curva de cada pico cromatogrfico. Se
puede hacer en forma mecnica o electrnica.

Pico: Representacin grfica de la elucin de un compuesto de la muestra.

Pico principal: Pico caracterizado por una gradual elevacin y por un rpido regreso a la lnea base.

Pico fantasma: Picos inesperados en el cromatograma, generalmente causados por la contaminacin en
el sistema y/o la muestra.

Software para cromatografa: Conjunto de programas que facilitan la programacin de parmetros, la
cualificacin, cuantificacin, reporte de datos y resultados en los anlisis cromatogrficos.

Relacin entre TR', VR', RF' Y KG

(1) Vr= trFC

(2) VG = tg FC

Tc
(3) FC = F'C ---
Ta

F'C = Velocidad de flujo del gas medido a la temperatura de la columna y a la presin de salida
FC = Velocidad observada
Tc = Temperatura de la columna
Ta = Temperatura ambiente

(4) V
o
r = J tr FC

(5) V
o
g = J tG FC

3 [(P1/P0)
2
- 1]
(6) J = -------------------
2 [(P1/P0)
3
- 1]

P1 = Presin de entrada del gas a la columna
P0 = Presin del gas a la salida de la columna

L/tr tG
(7) Rf = -------- = ------
L/tg tr

Velocidad del componente = L/tr
Velocidad del gas portador = L/tg

41


V
o
r V
o
g
Despejando la ecuacin (4) y (5) tr = ------ y tg = -------
J FC J FC

Reemplazando estos valores en la ecuacin (7)


tg V
o
g/J FC J FC (V
o
g) V
o
g
Rf = ----- = ---------------- = ------------------ = --------
tr V
o
r/J FC J FC (V
o
r) V
o
r
Luego,

V
o
g
(8) Rf = --------
V
o
r
Para un sistema lquido, puede aplicarse la ecuacin (9):

Para relacionar V
o
g y V
o
r con el coeficiente de particin (Kg)

Am
(9) Rf = ---------------
Am + Kg As

Con las bajas concentraciones utilizadas en la cromatografa gas lquido Kg es a menudo independiente
de la concentracin. Para la cromatografa gas lquido es conveniente expresar Rf en volmenes de fase
gaseosa y fase lquida, de donde en la ecuacin (9):

Am = rea transversal de la fase gaseosa

As = rea transversal de la fase lquida

Kg = Coeficiente de particin

Siendo:

Vl = Volumen total de lquido contenido en la columna

V
o
g = Volumen corregido de la fase gaseosa

L = Longitud de la columna Luego:

V
o
g
V
o
g = AmL entonces, Am = -----

42
L
Vl
Vl = AsL As = -----
L

Sustituyendo estos valores en la ecuacin (9),

V
o
g
(10) Rf = ----------------
V
o
g + Kg Vl

Observando la ecuacin (8)

V
o
g
Rf = ------ y comparndola con (10), tenemos:
V
o
r


V
o
g V
o
g
---- = ---------------- Se puede decir que:
V
o
r V
o
g + Kg Vl



V
o
g (V
o
g + Kg Vl)
V
o
r = ----------------------- simplificando V
o
g, tenemos:
V
o
g

(11) V
o
r = V
o
g + Kg Vl V
o
r en la ecuacin (4) es igual a Jtr FC Reemplazando este valor en la ecuacin

(11) JtrFC = V
o
g + Kg Vl

V
o
g + Kg Vl
Luego: (12) tr = ----------------
JFC

El tiempo de retencin depende del volumen de la fase lquida y gaseosa (Vl y V
o
g), contenidas en la
columna rellena; y del coeficiente de particin. Como puede verse tr se hace menor al aumentar el flujo FC
del gas eluyente.

Para los tiempos de retencin relativos de una mezcla de dos componentes b, c se tiene:

V
o
g + Kgb Vl V
o
g + Kgc Vl
trb = --------------- trc = -------------------
JFC JFC

43

Dividiendo miembro a miembro obtenemos:

trb V
o
g + Kgb Vl
---- = ---------------
trc V
o
g + Kgc Vl

Que es el tiempo de retencin relativo denominado tambin factor de separacin o selectividad:

trb
o = -----
trc

Ejercicio: En un anlisis cromatogrfico, se obtuvieron los siguientes datos para una columna (gas-lquido):

1. Temperatura de la columna 40
o
C
2. Presin del gas a la entrada de la columna 1.120 mm Hg
3. Presin del gas a la salida de la columna 620 mm Hg
4. Volumen de fase lquida estacionaria a 40
o
C 3.5 C.C.
5. Velocidad de flujo del gas a 22
o
C 14.2 CC/min
6. Tiempo de retencin del aire 0.25 minutos
7. Tiempo de retencin para el N-Hexano 2.75 minutos
8. Tiempo de retencin para el N-Heptano 3.9 minutos

Calcular:

1. Volumen de retencin del aire

2. Volumen de retencin corregido del N-Hexano

3. Volumen de retencin corregido del N-Heptano

4. Rf para n-Hexano
Rf para n-Heptano

5. Coeficiente de particin a 40
o
C para el n-Hexano y para
el n-Heptano

6. Factor de capacidad K
,


7. Factor de separacin o

Nota: Considerar la temperatura absoluta.


44


















2.2.4 Partes bsicas de un cromatgrafo gas lquido.

La cromatografa de gas permite una rpida separacin de mezclas complejas en compuestos individuales
y permite una identificacin y determinacin cuantitativa de cada compuesto como se indica en la Figura
2.3, se inyecta una muestra (1) a una cmara de inyeccin calorfica (2) y a travs de una corriente
constante de un gas inerte (Nitrgeno, Helio, Argn) (3) fluye a travs del inyector, llevando la muestra a la
columna (4) que puede ser rellena o capilar, la rellena est empacada con un material de revestimiento
polvoroso que soporta un lquido, la capilar solo contiene el lquido como revestimiento en las paredes,
ubicada en un recinto termostato u horno (5).



45


Figura 2.3 Diagrama de un cromatgrafo de gases

La muestra se separa en la columna, y el gas portador y componentes separados emergen de la columna y
entran al detector (6) Seales emitidas por el detector y amplificadas (7) activan al registrador (8) el que
deja un registro permanente de la separacin al trazar una serie de picos, cromatograma (9) con el tiempo
de retencin tr se identifica el compuesto y con el rea bajo el pico se determina la cantidad o
concentracin. Si la seal es digitalizada por el convertidor anlogo digital (10), se lleva a un procesador
(11) para ser exhibida en un monitor o una pantalla de cristal liquido.

2.2.4.1. Muestra: Tcnica de la jeringa e inyeccin. La introduccin de la muestra se hace mediante una
Microjeringa graduada en microlitros (1 micro-litro= 10
-6
litros) provista de una aguja hipodrmica con la cual
se atraviesa un tapn de caucho (septum). Al presionar el mbolo la muestra es depositada en la cmara
de inyeccin, la muestra se puede introducir mediante vlvulas, circuitos cerrados y en forma automatizada
para minimizar errores en la cantidad inyectada.

Para hacer una buena inyeccin deben seguirse los siguientes pasos:

a. Se toma en la jeringa un poco de la muestra a analizar y se eliminan las burbujas de aire.

b. Se mide la cantidad de muestra a inyectar

c. Se limpia la aguja y se introduce en la cmara, perforando el septum.

46



Figura 2.4. Diferentes modelos de microjeringas.


d. Se presiona el mbolo, de tal manera que el vaciado sea rpido.
e. Se marca el punto de inyeccin en la carta o se oprime el botn start al mismo tiempo que se retira la
aguja de la cmara.

Para uso posterior de la Microjeringa, sta se lava con ter preferiblemente, o con otro solvente voltil.


Precauciones en el uso de las Microjeringas:

a. Evitar que la aguja o el mbolo de la microjeringa se doble. Esto hace que la inyeccin no sea precisa y
se dificulte o se haga imposible la inyeccin.

b. Ni la aguja ni el mbolo se deben tocar con las manos, la mugre y la grasa de los dedos contaminan la
aguja y crean dificultad para la introduccin del mbolo en el cuerpo de la jeringa.

c. La jeringa se debe guardar siempre en su estuche para evitar que se contamine con el polvo y los

47
reactivos qumicos.

2.2.4.2. Inyector: El inyector es un pequeo recinto Calentado elctricamente y forrado en material
refractario que lo mantiene a una temperatura elevada, por lo cual la muestra se vaporiza inmediatamente,
conectado en serie con el circuito del gas portador que se encuentra separado del exterior por un tapn de
un material perforable (caucho) denominado septum el cual recupera su impermeabilidad inicial despus de
la perforacin ocasionada por la aguja de la Microjeringa, una vez sta ha sido retirada.

La cmara de inyeccin est constituida por un bloque metlico, Adems se puede ubicar en su interior un
tubo capilar de vidrio, para la retencin de los slidos que pueda poseer la muestra y as proteger la
columna de posibles contaminantes. A la salida del sistema de inyeccin, la muestra en fase de vapor,
encuentra el gas portador y junto con l entra en la columna.

Tabla 2..1. Sistema de muestreo.
6

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Tipo Tipo Para columnas rellenas usar un sistema de muestreo
de muestreo, con con volumen pequeo y flujo laminar.

Para columnas capilares usar inyector con
sistema divisor de flujo y flujo turbulento.
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Tama Tamao de muestra Detector de conductividad:
1 - 10 ul (liq)
1 - 10 ml (gas)
---------------------------------------------------
Ionizacin: 0,1 - 1 ul (liq)
--------------------------------------------------
Captura de electrones: 0,1 - 1 ul, (liq)
-------------------------------------------------------------
Temp Temperatura

Ligeramente superior Ligeramente superior a la temperatura de ebullicin
del compuesto menos voltil de la muestra.
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
2.2.4.3. Gas Portador: Es necesario disponer de una fuente de gas portador, que puede ser un cilindro,
un depsito o un gasmetro. Generalmente los gases que cumplen este fin son suministrados
comercialmente en cilindros a alta presin (de 1500 a 1800 PSI. libras por pulgada cuadrada).

Disponen de manmetros y reductores para bajar la presin. Generalmente uno de dichos manmetros
marca la presin interna del cilindro y en el otro se selecciona la presin de salida. Las escalas graduadas
de estos medidores usualmente vienen en P.S.I (libras por pulgada cuadrada).

Para medir la velocidad de flujo del gas de arrastre, se dispone en algunos equipos de un fluxmetro que

6
Stambuck, j obra citada

48
suele ser del tipo "Rotmetro", constituido por un tubo de vidrio dispuesto verticalmente, de seccin en
forma de V, ms amplia hacia la parte superior que hacia la parte inferior, dentro del cual hay una esfera o
una pequea pieza metlica en forma cnica que es arrastrada por la corriente gaseosa, la cual la eleva a
lo largo del tubo tanto ms cuanto ms rpida es dicha corriente. El nivel al que flota la esfera indica la
velocidad del gas. Un instrumento sencillo para medir el flujo es el medidor de pompas jabn observar
figura 2.3.

Los gases de mayor uso como portadores son: N2, He, Ar, Ar ms metano, CO2, H2. El gas portador para
cumplir su funcin debe reunir los siguientes requisitos:

a. Pureza: Cualquier impureza presente en el gas de arrastre
equivale a la presencia de una muestra adicional, distinta a la deseada y viene a producir una seal
ms en el detector.

Tabla 2..2.
7
Velocidades lineales promedios aconsejables.

------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Tipo de columna Gas de arrastre
-------------------------------------------------------------
Argn Helio
Nitrgeno Hidrgeno
cm/sg. cm/sg con
-------------------------------------------------------------
Columna rellena 1/4" 1/8" 3-4 6-7
Columna Gollay 0.010
Columna Scot 5-7 18-20
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

b. Sensibilidad: Dado que el gas de arrastre fluye constantemente por el sistema, producir una seal de
fondo la cual influir sobre la sensibilidad de acuerdo con el detector empleado.

c. Velocidad: La velocidad del anlisis depende de la velocidad de difusin de los componentes de la
mezcla en el gas portador.

Para mejorar la pureza del gas portador se recomienda un filtro en la tubera, el cual, est compuesto por
silicagel y un tamiz molecular. La slica elimina la humedad del gas y el tamiz los contaminantes orgnicos
para el caso del Nitrgeno, que es el ms utilizado por su fcil adquisicin y bajo costo, el contenido de
oxgeno no debe superar las 20 p.p.m. ya que existe el peligro de que ste al estar en contacto con la
muestra durante un tiempo y a una temperatura alta, se pueda producir descomposicin o combinacin de
la muestra.

Tabla 2..3. Seleccin del gas de arrastre.


7
Stambuck, j obra citada

49
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Pureza Pureza Usar siempre gas de arrastre de 99% pureza y se aconseja el empleo de un
empleo de un filtro antes de la entrada del gas al instrumento.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Detectores:

Conductividad trmica (H.W.D.)

Use helio o hidrgeno con excepcin de los anlisis en los cuales debe determinarse
hidrgeno o helio. Para determinar hidrgeno use helio con hidrgeno (8 a 10% de
. hidrgeno)
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Ionizacin por llama (F.I.D.)


Use helio, nitrgeno o argn. El helio permite anlisis ms rpidos. Con nitrgeno o
argn a igual eficiencia que con helio la velocidad del anlisis ser menor.
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Captura de electrones (E.C.D.)

Al trabajar en corriente continua use N2. Trabajando en modal de corriente pulsante usar
con 5% de metano.
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Veloci Velocidad del gas
Seleccione la velocidad lineal del gas (o el flujo) segn el gas, columna y problema.
Se debe tener en cuenta que al no trabajar a la velocidad ptima se aumenta la
velocidad pero se disminuye la eficiencia. Con nitrgeno o argn la eficiencia disminuye
ms rpidamente que con helio.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Control Control

En trabajos isotrmicos o con columnas capilares usar simplemente regulacin isobrica

Trabajando con temperatura programada usar control de flujo.



Propiedades del gas:

a. Debe ser inerte respecto a la fase estacionaria y los componentes de la muestra.

b. Debe ser trmicamente estable.

c. La escogencia del gas de arrastre depender de:

a. Disponibilidad del gas
b. Pureza del gas
c. Consideraciones respecto al tiempo del anlisis y al detector empleado.


2.2.4.4. Columna. Es el corazn del cromatgrafo y en la cual se realiza la separacin. Dentro de ella se

50
encuentra la fase estacionaria lquida, dispuesta bien sea sobre un relleno slido denominado soporte o
sobre el lado interior de la pared del propio tubo. El tubo de la columna puede ser vidrio o metal que sea
inatacable por los componentes de la mezcla. Las columnas son a menudo de diferentes longitudes (de 2 a
6 m) y (dimetros variados de 3 a 6 mm), el metal de mayor uso para la construccin de columnas
cromatogrficas es el acero inoxidable pero tambin es utilizado el Cobre y el Aluminio; acero y silicio en
columnas capilares.

Las columnas de vidrio se pueden disponer en varios tramos conectados convenientemente para reducir el
espacio de la cmara donde se alojan, las columnas metlicas, presentan la ventaja que se pueden plegar
o enrollar una vez rellena con el soporte y la fase estacionaria, con lo cual pueden ser colocadas en un
espacio de pequeas dimensiones. La columna se encuentra ubicada dentro de un horno o recinto
termostatado, ya que la temperatura influye de modo importante en la retencin de los componentes por la
columna, y por tanto en la separacin de los mismos; por ello, interesa que la temperatura sea constante a
lo largo de toda la columna, por lo cual la temperatura debe ser fcilmente controlable. Se consigue que la
temperatura sea uniforme en el interior de la cmara donde se encuentra la columna, haciendo circular aire
caliente por medio de un ventilador. En la mayora de los equipos la temperatura se puede regular de un
modo continuo a cualquier valor deseado, pero en algunos equipos de precio ms reducido slo existen
algunas pocas posiciones de ajuste a ciertos valores prefijados de temperatura.

Igualmente existen equipos a los cuales se puede acoplar un programador lineal de temperatura, el cual
permite calentar la columna con una o varias ratas o rampas de calentamiento predeterminada.

2.2.4.4.1. Soporte Slido: Las sustancias usadas como soportes slidos inertes son muy diversas, entre
las cuales se pueden citar desde pequeas esferas de vidrio, resinas plsticas, grafito o metal, hasta
diferentes clases de sustancias silicadas entre las que tienen mayor importancia son las tierras
diatomceas.

El soporte slido tiene como finalidad la de aumentar la superficie efectiva de contacto entre el vapor
de la muestra y la fase estacionaria a la cual sirve de apoyo.

Un soporte slido debe tener las siguientes caractersticas:

a. Superficie especfica grande (de 1 a 20 m
2
/g)

b. Estructura porosa con dimetro uniforme igual o inferior a 10 um por poro.

c. Debe ser inerte, no tener interaccin qumica absorcin por la muestra.
d. Las partculas deben ser de tamao y forma uniforme

e. Debe tener resistencia mecnica y no romperse fcilmente.

El soporte slido ideal que cumpla todos estos requisitos no se ha encontrado; generalmente habr una de
las caractersticas que determine finalmente el tipo de soporte a emplear.

Las sustancias empleadas como soporte slido en cromatografa son de tres tipos: Tierra de diatomceas,

51
esferas de vidrio y tefln.

La tierra de diatomceas es el soporte ms empleado, recibe varios nombres segn el fabricante as:
Chromosorb, Gas-Chrom, Anakrom, Celite, etc. llevando adems un sufijo que indica el tipo de tratamiento
que ha recibido con objeto de mejorar alguna de las caractersticas antes mencionadas. Los tratamientos
qumicos pueden ser: Lavado con cido (AW), silanizado (HMDS) o (DMCS); o ambos.




Figura 2.5 Diferentes modelos de columnas rellena y capilares.









Tabla 2.4. Seleccin de columnas.

------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Material
Para muestras biolgicas y pesticidas: VI DRIO.
En general: METAL
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Dimetro
3 mm Para aplicaciones generales

52
6 mm Anlisis de trazas
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
L Longitud
Hasta 6 m para columnas rellenas y dependiente de
la resolucin deseada.


Fase estacionaria
De acuerdo con la Tabla 2.6 Similar en caractersticas a la
muestra.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
S Soporte slido

Anlisis generales Chromosorb W. Pesticidas
y esteroides Chromosorb G. Hidrocarburos:
Chromosorb P. Muestras polares:
Tratamiento de lavado con cido y silanizado.
Muestras semipolares lavado con cidos.
Muestras no polares sin tratamiento

---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Tamao de las Partculas del soporte
Columnas de 3 mm: 80-100 mesh. (mallas)
Columnas de 6mm: 60-80 mesh (mallas)
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Porcentaje de fase estacionaria

Columnas de 3 mm: Hasta 10%
Columnas de 6mm: Hasta 20%
Muestras poco voltiles: Hasta 3%
Muestras muy voltiles: Hasta 30%
Soportes tratados: Hasta 3%
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Columnas capilares
Alta resolucin - poca cada de presin, rpidas - anlisis de muestras reducidas.
Usar columnas SCOT para muestras con tiempos de retencin cortos o para
anlisis muy rpidos.

Silanizado: La tierra de diatomceas es una forma de slice hidratada que contiene muchos grupos
Hidroxilos libres en su superficie. Estos pueden servir de sitios donde las molculas de soluto se absorben,
este efecto es indeseable porque retarda el paso de soluto de la pelcula lquida al gas portador, observable
en la asimetra de los picos presentados en el cromatograma. Sin embargo se reduce al usar una fase
lquida polar que sea fuertemente absorbida en la superficie del slido, pero es ms efectivo el tratamiento
del slido con un agente silanizante como el HMDS (Hexametil disilizano)[(CH3)3Si]2 NH que convierte a los
grupos Si - o - H en compuestos inactivos Si - o - Si (CH3)3 mediante la siguiente reaccin:



53
[(CH3)3 Si]2 NH
Si O Si + ---------------------> Si O Si + NH3
HMDS
OH OH
O O

Grupo activo de Si Si
silice hidratado


CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3


compuesto inactivo Con la cual se
reemplaza el H del OH por:


Si



CH3 CH3 CH3


Las recomendaciones en cuanto a la seleccin del soporte son las siguientes: Si se emplea el soporte para
recubrirlo con una fase estacionaria no polar (muestras no polares), el soporte no precisa tratamiento pero
s la silanizacin. As mismo si el % de fase estacionaria es inferior al 5% se recomienda silanizar la
columna.

Si se va a recubrir el soporte con fase estacionaria semipolar se recomienda el tratamiento con cido y si el
porcentaje de recubrimiento es inferior al 5% se recomienda adems el silanizado.

Cuando el recubrimiento es con fase estacionaria polar se recomienda el empleo de soporte lavado con
cido y silanizado.

Chromosorb A: - Se usa en cromatografa preparativa, puede emplearse hasta con 25% de fase
estacionaria, no es frgil ni absorbente.

Caractersticas de algunos soportes slidos:

Chromosorb G: - Para compuestos polares, tiene ms resistencia mecnica que el Chromosorb W. El
rea especfica no es muy grande, se emplea con un porcentaje muy bajo de fase lquida.

Chromosorb P: - Tiene mayor absorcin que los dems, se emplea sobre todo para hidrocarburos, rea
especfica grande.

54

Chromosorb T: - Muy inerte, se recomienda para compuestos muy polares o reactivos como agua, SO2,
hidrazna, halgenos. Es poco eficiente y slo se debe usar cuando se requiere un soporte inerte.

Chromosorb W: - Similar al Celite 545, es frgil pero de muy alta eficiencia. Uso general.

Tefln: - Se emplea sobre todo con detectores de conductividad trmica para separaciones de H2O,
amonaco, etc. Es muy difcil de recubrir y el porcentaje de fase estacionaria no debe ser mayor al 10%.
Est siendo reemplazada por polmeros porosos.

Esfera de vidrio - Debido a que el vidrio es prcticamente inerte, se ha empleado para compuestos muy
polares. El recubrimiento es muy bajo (mximo 3%).

Al seleccionar el tamao de las partculas del soporte se debe llegar a un compromiso entre eficiencia
(tamao pequeo de partculas) y baja cada de presin (tamao grande de partculas). El dimetro
promedio de las partculas se da en unidades de malla (mesh) correspondiendo nmeros mayores a
dimetros menores. Para columnas de 1/8" se recomienda 80-100 mesh, en tanto que para columnas de
1/4" se recomienda 60-80 mesh. Al no disponerse de soporte con estas caractersticas de tamao de
partcula se puede aplicar la regla de Purnell: El dimetro interno de la columna debe ser por lo menos 8
veces mayor que el dimetro de las partculas del soporte slido.

El porcentaje de fase estacionaria con que se va a recubrir el soporte indica la relacin en peso de fase
estacionaria con relacin al relleno. As, para 15% de fase estacionaria se necesitar 15g. de fase
estacionaria y 85 gramos de soporte slido. La cantidad de recubrimiento en la columna influir sobre la
eficiencia de la columna y capacidad de muestra. Tambin al seleccionar el porcentaje adecuado se debe
llegar a un compromiso entre estas dos variables. Aumentando la proporcin de fase lquida se aumenta la
capacidad de muestra y por tanto se baja la concentracin mnima detectable, pero al mismo tiempo el
espesor del recubrimiento para un soporte slido dado aumentar la transferencia entre vapor de muestra y
fase lquida disminuyendo eficiencia.

Algunas reglas son las siguientes:

Columnas de 1/8" con soporte 80-100 mesh (excepto en los casos indicados posteriormente) usar 8-10%
de fase lquida.
Columnas de 1/4" con soporte 60-80 mesh usar 15-20%.

Anlisis de esteroides (exceptuando como soporte el Chromosorb G usar 3-4%)

Columnas con Tefln: Usar menos del 10%.

Columnas con esferas de vidrio, menos del 3%, los valores tpicos con este soporte son de 0.05 - 0.2%

Para columnas preparadas con Chromosorb G se deben reducir los valores dados anteriormente a la mitad.

Chromosorb A: - Se usa en cromatografa preparativa, puede emplearse hasta con 25% de fase

55
estacionaria, no es frgil ni absorbente.

Tabla 2..5. Relacin de solventes/soporte slido.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Soporte ml. de solventes/gramo de soporte
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Chromosorb p 1.5
Chromosorb w 2.0
Chromosorb g 0.5
Chromosorb t 1.0
Fluoropack 0.8

Chromosorb A: - Se usa en cromatografa preparativa, puede emplearse hasta con 25% de fase
estacionaria, no es frgil ni absorbente. Se han empleado un sin nmero de sustancias como fase
estacionaria y la literatura al respecto es una de las ms abundantes dentro del tema de cromatografa de
gases.

2.2.4.4.2 Fase lquida

La regla de oro en cuanto a la seleccin adecuada del material es: "La fase lquida debe tener
caractersticas fisicoqumicas semejantes a la muestra a analizar". As para analizar hidrocarburos
saturados escogeremos un hidrocarburo saturado como fase lquida, un ester orgnico se podr analizar en
un polister. Es conveniente relacionar esta semejanza con base a polaridades, analizando una muestra
polar en una fase lquida polar, una muestra semipolar en una fase semipolar.

La fase lquida adems de ser semejante a la muestra debe tener una composicin qumica definida deben
ser lquidas y lo menos viscosa posible; no deben reaccionar qumicamente con: el soporte, con los
componentes a separar, ni con el gas de arrastre; no debe descomponerse trmicamente ni evaporarse;
deben formar una pelcula que se adhiera uniformemente y deben garantizar una selectividad
suficientemente alta y por tanto propiedades separadoras altas.

Entre las ms importantes de estas cualidades estn:

a. Viscosidad: No deber ser muy alta a la temperatura de operacin, para facilitar la velocidad de
establecimiento de los equilibrios de reparto entre las fases.

b. Tensin Superficial: La fase estacionaria lquida deber mojar bien el soporte, sea relleno o sea pared
interior de tubo, asegurndose en lo posible que la adherencia soporte-liquido sea suficiente para evitar que
la fase mvil arrastre a la fase estacionaria, provocando una mala distribucin de la misma en la columna.

c. Tensin de Vapor: Deber ser mnima, con el fin de que una evaporacin de la fase estacionaria lquida
no provoque el paso de la misma a la fase mvil, lo cual presentara perturbaciones en la separacin y en
el anlisis posterior.

d. Selectividad respecto a los componentes de la fase mvil: Esta condicin es la que define en s a la

56
cromatografa de gases. Las constantes de reparto de los componentes a separar entre la fase mvil y la
estacionaria debern ser suficientemente diferentes para que la fase estacionaria oponga resistencias
distintas al paso de cada componente a travs de la columna, proporcionando as una buena separacin de
los componentes a la salida de la misma.

e. Reversibilidad del reparto: El reparto de cada componente entre las fases deber ser reversible, para
favorecer que los procesos consecutivos de absorcin y desabsorcin, que se realizan a lo largo de la
columna, sean rpidos y completos en alcanzar el equilibrio. Esta condicin excluye implcitamente
cualquier reaccin qumica entre los componentes a separar y la fase estacionaria.

f. Estabilidad Trmica: Es de gran importancia que la fase estacionaria sea estable, en s misma y
respecto de los componentes de la mezcla a resolver, a la temperatura de trabajo. Esta condicin limita
algunas veces la aplicacin de un lquido dado como fase estacionaria.

Divisin de las fases estacionarias lquidas segn su polaridad:

a. No polares: Parafinas (escualeno, grasa Apiezon L y M, metil siliconas, etc.), hidrocarburos de alto peso
molecular, dialquilsiloxanos como el dimetil polysiloxano.Con estas fases se separan: Hidrocarburos de
alto punto de ebullicin, cidos grasos, aromticos polinucleares, alcaloides, esteroides, etc.

b. Ligeramente polares: Cyanopropyl phenyl 6% y dimetilpolisiloxano 94%, 20% de diphenyl y 80% de
dimetilpolisiloxano.

c. Polaridad Media: teres, cetonas, aldehidos,esteres de cidos carboxlicos (ftalato de dinonilo,
sebacato de neopentil glicol). Polisteres (succinato de dietilenglicol, polisteres aromticos), 35% de
diphenyl y 65% de dimetilpolisiloxano, 14% Cyanaopropylphenyl y 86% de dimetilpolisiloxano.

Con estas fases se pueden separar: Carbohidratos, aminocidos, esteroides, alcoholes, halogenados, etc.

c. Polares: cidos, aminas, alcoholes, polietilenglicoles, fractonitrilos. Con estas fases se separan: cidos
grasos y en general cidos, alcoholes, steres y productos naturales aromticos, olefinas y cicloparafinas.

d. Altamente polares: Polisteres, 90% Biscyanoproppyl-10%cyanopropylphenylpolisiloxano,



2.2.4.4.3. Empaquetamiento de la columna.

a. Se define el material del tubo con el cual se va a construir la columna segn sea vidrio o metal.

b. Se define el dimetro y la longitud de la columna.

c. Dependiendo de la muestra, de compuestos a separar se selecciona el soporte y la fase estacionaria.

d. Se define la relacin en peso de fase estacionaria con relacin al relleno.

57

e. Se toma la cantidad previamente pesada de fase lquida disuelta en un volumen adecuado de solvente y
se aade lentamente a un recipiente plano (cristalizador) en el cual se tiene el soporte slido previamente
pesado. La cantidad de solvente es la suficiente para mojar sin exceso el soporte slido. Se deja evaporar
el solvente agitando el cristalizador cuidadosamente (no se debe agitar el soporte para evitar que las
partculas se rompan). Se puede calentar ligeramente la mezcla para acelerar la evaporacin.

Luego que el material de relleno est seco se toma la tubera sin doblar y se tapona sin ajustar uno de sus
extremos con lana de vidrio o un tapn de metal poroso. Se coloca un embudo por el otro extremo y se va
introduciendo lentamente el relleno usando en lo posible un vibrador para asegurar que el relleno sea
uniforme.

Una vez llena la columna se tapona el otro extremo y se dobla o enrolla dndole la forma deseada.

f. Envejecimiento de la columna. Una columna recin preparada se debe envejecer, para lo cual se debe
ir calentando lentamente y con flujo de gas de arrastre estando la columna desconectada del detector hasta
una temperatura 15
o
C por debajo de la temperatura mxima de operacin de la misma, se mantiene a esta
temperatura entre 10 y 15 horas y luego de 3 a 5 horas a la mxima temperatura.

Despus de este procedimiento la columna puede ser empleada para el anlisis. A manera de ejemplo
puede citarse la forma de preparar una columna de Chromosorb W al 10% sabiendo que se necesitan 30
grs. de relleno. Se toman tres gramos de fase lquida, se disuelven en 54 mL de solvente (cloruro de
metileno o cloroformo) y se echan sobre 27 grs. de soporte slido; se sigue el procedimiento anterior. (Ver
Tabla 2.6.)


























58
Tabla 2.6. Fases lquidas ms empleadas.

Tipo Fase lquida Actividad temperatura. Mxima Aplicaciones
Rellena Capilar

Hidrocarburo Esqualeno NP 150 130 C5 - C10 parafinas y cicloparafinas.
Apiezon L NP 75-225 75-200 Uso general para altas temperaturas.


Eteres m-bis (m-fenoxifenoxi) benceno P 180 180 Aromticos; es muy polar Para metil,
etil benceno.
Polieteres OS-138 polofenileter P 75225 75-200 Aromticos, substancias polares poco
voltiles.

Dodectil ftalato SP 150 140 General, muestras ligeramente
polares.
Di-2 etilhexisebacato SP 125 125
bis-2(2-metoxietil) P 65 Hidrocarburos alifticos C2 C5

Succinato de di-etilen P 135 185 teres metlicos de cidos
Glicol (DEGS) Grasos.
steres
Polisteres Succinato butanodiol P 70-200 70-190
(BDS)

Adipato de neopentil P 70-200 70-200
Glicol (NPGA)

Succinato de neopentil-
glicol (NPGS) P 70-200 70-200
Tri-metilopropano P 180 Cresoles, xilenoles.
Tripelargonato (Ester
C9 de Celanese)

Carbowax 400 P 100 75 Metilaminas
Carbowax 600 P 125 100 Substancias polares bajo punto
de ebullicin.
Poliglicoles
Carbowax 1540 P 150 140 General. Muestras polares

Carbowax 20M P 200 200 Polares alto punto de
ebullicin.

Ucon LB 550 X
Poliglicoles (Polipropilenglicol) P 180 160 General muestras polares
Ucon 50 HB 2000
(Polietilen-polipropilen
glicol) P 180 160
Igepal CO-880
(Nonilfenoxi polietile-
noxi-etanol) P 60-200 60-185



59
Continuacin Tabla 2.6.


Tipo Fase lquida Actividad Temperat. Maxim Aplicaciones
rellena Capilar

Aminas Poliamida versamid P 70 Substancias oxigenadas

Nitrilos B,B oxidipropionitrilo P 175-280 Substancias polares, Alto Punto de
ebullicin.

Metilsilicona DC-200 NP 200 160 General
(viscosidad:100 cts)
Metil silicona DC-200
( ancias ad 12.500 cts) NP 225 175 Anlisis de pesticidas
SE-30 NP 50-280 80-200 Esteroides, substancias Punto de ebullicin

OV-1 NP 50-280 80-200

DC 550 (Metil-fenil-
Silicona) SP 200 160 Uso general. Temperatu ras intermedias
, subs ancias polares y ligera mente
polares.

Siliconas OV-17 SP 250 200 Esteroides, substancias de alto punto de
ebullicin.
FS-1265(QF-1) P 50-250 50-200 Esteroides, substancias de alto punto
De ebullicin
SE-52 SP 250 200 Substancias polares alta temperatura.


XE-60 P 250 200 Substancias polares alta temperatura.

Varios Dimetil sulfolano (DMS) P 50 Hidrocarburos alifticos C2-C5

Hexametil fosforamida P 25 Gas natural, Hidrocarburos CO2



Acido pcrico + fluoreno P 80-125 Hidrocarburos aromticos

AgNO3 + dietilen-glicol P 50 Gases livianos del petrleo ismeros olefinicos.

m-bis (m-fenoxilenoxi)
benceno + esqualeno P 150 130 Aromticos. Separacin de metil y etil bencenos








60
Continuacin Tabla 2.6

Tipo Fase lquida actividad temperat. Maxim Aplicaciones
rellena Capilar

Mezclas m-bis (m-fenoxilenoxi)
Benceno + apiezon L. P 210 175 Aromticos. Separacin de metil y etil
bencenos

7,8 Benzoquinolina +
Esqualeno P 90 Ismeros del xileno

Bentone 34 + DC 200 + Celita P 200 Separacin de metil y etil bencenos.



Chromosorb 101 300 Substancias de bajo peso molculas muy
Chromosorb 102 250 polares: H2O Alcoholes, aminas, esteres,
cetonas, aldehdos y con limitaciones
gases
limitaciones gases livianos.
Los tiempos de retencin de chromosorb
101
Polmeros microporosos Son aproximadamente la del 102. Se
prefiere el 102 para gases livianos.

Columnas recomendadas para varias clases de muestras

Tipo de compuestos Fases estacionarias ms comunes



Comparacin entre caractersticas tcnicas de columnas empacadas y columnas capilares

Empacadas WCOT SCOT PLOT




61
Continuacin tabla 2.6

Comparacin de estructuras, polaridades propiedades y uso de algunas columnas capilares en orden de sus
polaridades.




62
Continuacin tabla 2.6





63
Continuacin tabla 6.2
Adsorbentes slidos




2.2.4.4.3 Medida de la eficiencia de la columna

El Plato Terico: La unidad utilizada para medir la eficiencia de una columna cromatogrfica es el PLATO
TEORICO, trmino que deriva de los procesos de destilacin. Cuando se calienta una mezcla de dos
componentes, hierve primero el de menor temperatura de ebullicin. Sin embargo, el otro componente,
aunque menos voltil, presenta a esa temperatura una presin de vapor finita y, en consecuencia, parte del
mismo se vaporiza junto al ms voltil. En estas condiciones, no se efecta una separacin completa y la
destilacin se conoce como destilacin de plato sencillo. El producto destilado estar enriquecido en el
componente ms voltil.

Si este producto fuera destilado de nuevo, se producira un enriquecimiento en el componente ms voltil y
el proceso total sera equivalente a una destilacin con dos platos. As pues, por destilacin sucesivas se
obtiene un producto cada vez ms puro. Modificando el diseo del equipo de destilacin (por ejemplo,
permitiendo algo de reflujo) se aumenta el nmero de platos de una destilacin sencilla y la separacin es
ms eficaz.

Una separacin cromatogrfica es, en muchos aspectos, similar a una destilacin y por ello su eficiencia fue
medida por AJP Martn en platos tericos figura 2.6. En este caso, es posible determinar el nmero de
platos tericos inyectando en la columna un compuesto sencillo junto con una pequea burbuja de aire En
la Figura 2.7. aparece el cromatograma correspondiente. Tiempo de emergencia del aire = T minutos
(desde la inyeccin hasta el mximo del pico de aire).

64


Figura 2.6 Separacin de dos componentes; a) Buena separacin. b) Mala separacin



Tiempo mximo para la muestra = tr + X minutos (desde la inyeccin hasta el mximo del pico de la
muestra).

Tiempo para que el pico de la muestra pase el detector = Y minutos.




Figura 2.7 Cromatograma de un compuesto que permite ilustrar los tiempos que requiere la muestra y el aire para dar
sus propios picos, x es el tiempo en minutos.

El nmero de platos tericos (N) viene dado por la ecuacin:

2
16 |
.
|

\
|
=
Y
X
N o
2
16
|
|
.
|

\
|
=

W
t
N
r

g rc r
t t t =

Se supone que el aire no interacciona con el substrato lquido y, por tanto, fluye a travs de la columna en
un tiempo mnimo. Este perodo llamado tiempo muerto (tg o trm), es una medida del tiempo que tardara
una muestra en fluir, si no interaccionara con el substrato. As pues, el tiempo X es una medida del tiempo

65
extra que invierte un compuesto de la muestra en la columna, concretamente en la fase estacionaria, Y es
el tiempo que tarda la muestra en pasar el detector, es decir, una medida directa de cunto se ha extendido
o difundido la muestra en la columna durante su recorrido.

El clculo de N debe hacerse experimentalmente para cada columna, ya que no es posible llenar dos
columnas con substrato en condiciones exactamente iguales. As por ejemplo, con una columna de 2
metros de longitud se obtuvieron los siguientes datos:

Tiempo de salida del mximo del pico de aire, 1 minuto; tiempo de salida del mximo del pico de la
muestra, 5 minutos; tiempo de paso del pico muestra por el detector, 1/2 minuto; calcular el nmero de
platos tericos y la altura de un plato terico.

( ) cos 1024 64 16
2
1
4
16
2
1
1 5
16 16
2 2
2
i platoster
Y
X
N = =
|
|
|
|
.
|

\
|
=
|
|
|
|
.
|

\
|

= |
.
|

\
|
=

En la prctica, es ms significativo hablar de la altura de cada plato terico, H, que viene dada por:


( ) HEPT H =
cos atosteri Nmerodepl
umna taldelacol Longitudto
H = ,en el ejercicio anterior:

co platoteri mm
i platoster
m mm mX
H / 95 . 1
cos 1024
/ 1000 2
= =

2.2.4.4.4 Ecuacin de Van Deempter

Comparando la altura de los platos tericos de dos columnas se obtiene una medida directa de sus
eficiencias relativas. Conviene hacer constar que no se tiene en cuenta la longitud de la columna, ya que
es una variable que se elimina al indicar las condiciones de mxima eficiencia en el funcionamiento de una
columna dada.

Entre los factores que afectan al tiempo que tarda un componente en atravesar una columna puede citarse
la relacin de tiempos invertidos en la fase mvil y en la fase estacionaria. Esta relacin se encuentra, a su
vez, afectada por la afinidad entre componentes y substrato, peso molecular del componente, velocidad de
flujo del gas portador y longitud de columna.

En principio podra suponerse que aumentando suficientemente la longitud de la columna podra separarse
cualquier pareja de componentes, independientemente de su afinidad. Sin embargo, aunque todo aumento
en la longitud de la columna implica un incremento en el nmero de platos tericos tambin se produce una
mayor difusin y solapamiento de los componentes, hasta el punto de que, a veces, no se consigue
aumentar su eficiencia.

66

Entre los factores que influyen en la cantidad de componentes esparcidos durante su flujo a travs de la
columna deben citarse la difusin en la fase de gas y en la fase lquida, las corrientes parsitas, la
geometra del relleno y la velocidad de flujo del portador gaseoso. La relacin entre estas variables y la
eficiencia de la columna viene dada por la ecuacin de Van Deempter, que tiene la forma:

H = A + B/V + CV H = (H.E.P.T)) = Altura equivalente a un plato terico.

A = Una constante que depende de las corrientes parsitas en el flujo gaseoso, y por tanto, de la
geometra del relleno y las paredes de la columna, as como la turbulencia o laminaridad del flujo.

B = Una constante que depende de la difusin de la muestra en la fase gaseosa y lquida. Esta velocidad
depende de la temperatura y de la rapidez con que las molculas de muestra difunden en el gas portador o
substrato. An cuando la mezcla no fluya, difundir y se extender a lo largo de la columna.

C = Una constante que depende de la transferencia de materia entre las molculas de la muestra en fase
gaseosa y lquida.

V = Velocidad de flujo del gas portador.

Esta ecuacin bsica ha sido refinada por numerosos investigadores y es objeto, todava, de una
investigacin considerable.

Las constantes A, B y C son caractersticas de cada columna. Por ejemplo la constante A es proporcional
a 2dp, donde es una constante de geometra y dp el dimetro medio de la partcula. El valor de A
depende de las corrientes parsitas que se forman en el gas que fluye. Si el relleno de la columna fuera
perfecto y el flujo gaseoso suficientemente lento, no se producira turbulencia y A sera cero; sin embargo,
en la prctica, existen irregularidades en el relleno que provocan la turbulencia. Las pequeas corrientes
parsitas son responsables del esparcimiento de la muestra a lo largo de la columna y, por tanto, de la
superposicin de las dos especies. Es, pues, muy importante un relleno adecuado de la columna, ya que
cuanto peor sea ste ms intensa ser la turbulencia y peor la separacin.

La constante B est relacionada con la difusin fsica de la muestra en la corriente de gas portador.
Supngase que se inyecta una muestra en el gas portador y que su desplazamiento inicial en la columna es
de 2.5 mm. Si se supone, adems que el gas portador no fluye, la muestra difundir lentamente en dicho
gas. Despus de cinco minutos su desplazamiento en la columna es de 25 mm, despus de 10 minutos 45
mm, y as sucesivamente. Es evidente que no se formarn corrientes parsitas y, por tanto, la muestra se
esparcir lentamente en el gas portador.



67


Figura 2.8 Corrientes parsitas en un gas que fluye.

Como ya se expuso anteriormente, la muestra se esparce, fluya o no el gas portador. Si no fluye, y la
muestra se mantiene en la columna durante cinco minutos, avanzar, como mnimo, 25mm.

La velocidad de difusin es independiente de las corrientes parsitas pero depende de las propiedades
fsicas de la muestra. La ley de Graham sobre la velocidad difusin de los gases plantea que "Las
velocidades de difusin de los gases estn en relacin inversa de las races cuadradas de sus densidades
o de sus pesos moleculares"
2
1
2
1
d
d
V
V
= o
M
M
V
V
=
2
1
. Molculas que difunden rpidamente, tales
como hidrgeno o metano, se extienden rpidamente en la columna y su separacin es difcil. Sin
embargo, molculas de peso molecular elevado que se mueven lentamente en la fase gaseosa difunden,
tambin, lentamente durante su flujo a travs de la columna. Conviene tener en cuenta que al hablar de
difusin se hace referencia a la velocidad de difusin de la muestra a la temperatura de la columna.




Figura 2.9 Difusin de muestra en el gas portador dentro de la columna: (a) En el instante de la inyeccin; (b)
Despus de 5 minutos; (c) Despus de 10 minutos.

La velocidad de difusin aumenta rpidamente con temperaturas crecientes y, por ello, las muestras de
peso molecular elevado se analizan en columnas calientes.

En estas condiciones, su velocidad de difusin es comparable a la de muestras de pesos moleculares ms
bajos a temperaturas inferiores. De forma similar, con molculas de muy bajo peso molecular, puede ser
necesario enfriarlas antes de su separacin para reducir, de esta forma, su velocidad de difusin.

Consideraciones anlogas pueden hacerse respecto a la velocidad de difusin de la muestra en la fase

68
lquida. Si la velocidad de flujo es muy pequea, la muestra permanece en la columna demasiado tiempo y
la difusin es muy grande. Por otra parte, si la velocidad de flujo es demasiado rpida, aumenta la
turbulencia en la columna.

Las condiciones ptimas deben establecerse experimentalmente utilizando la relacin de Van Deempter. El
trmino C representa la resistencia a las transferencias de las molculas de la muestra entre la fase
gaseosa y la lquida.

Tal como predice la ecuacin de Van Deempter, si cambia la velocidad del gas portador, cambia la altura
del plato terico. La mxima eficiencia de la columna corresponde al mnimo valor de H. El valor ptimo de
V (Velocidad de flujo del gas portador) para obtener el H mnimo puede determinarse experimentalmente,
inyectando una parte alcuota de muestra en la columna con el gas portador fluyendo a una determinada
velocidad V, y calculando H de las ecuaciones.

Repitiendo la determinacin con diferentes velocidades de flujo del gas portador se calcula el valor mnimo
de H.


Figura 2.10 Relacin entre la altura de un plato terico y H, y la velocidad lineal, V, del gas portador.


2.2.4.5. Detectores: Los detectores empleados en cromatografa de gases son, en realidad, transductores
de concentracin. La propiedad fsica que mide es la variacin de concentracin de las sustancias eludas
en el seno del gas portador, y la mayora de ellos ofrecen una seal elctrica proporcional, fcilmente
medible y registrable en funcin del tiempo.

2.2.4.5.1 Caractersticas generales de un detector. Para que un detector (transductor de concentracin)
sea til en cromatografa de gases, debe obedecer una serie de requisitos impuestos por la propia

69
naturaleza del fenmeno cromatogrfico y por las prestaciones, en cierto modo exigibles, a esta tcnica
separativa. En primer lugar, el detector debe ser un transductor de concentracin en fase vapor y, adems
poseer una sensibilidad adecuada junto con un bajo nivel de ruido, buena estabilidad y reproducibilidad, alta
fiabilidad y manejo sencillo, no destructivo y de volumen pequeo.

Por otra parte, el detector debe ser rpido, capaz de revelar casi instantneamente variaciones de
concentracin en el gas portador que emerge de la columna cromatogrfica; esta rapidez de respuesta es
inherente a la naturaleza del detector, pero puede disminuir si el volumen interno del mismo es grande. Por
tanto, para conseguir una rpida respuesta y tambin para evitar prdida de resolucin de las sustancias
separadas en la columna, el volumen interno del detector debe ser lo ms pequeo posible.

En orden a obtener informacin cuantitativa es evidente que la respuesta del detector debe ser lineal y con
un margen de linealidad lo ms amplio posible.

En resumen, al comparar la calidad de los detectores en cromatografa de gases, hay que tener en cuenta
estos tres conceptos primordiales: Sensibilidad, linealidad y una rapidez de respuesta adecuada, como
tambin bajo nivel de ruido.

a. Detectores integrales y diferenciales: La primera clasificacin general de los diversos tipos de
detectores puede efectuarse segn la modalidad en que ofrecen la seal, y son varios los autores que
aceptan esta primera distincin como fundamental.

Los detectores tipo integral ofrecen una seal, en funcin del tiempo proporcional a la cantidad total que ha
pasado por el detector; la seal se mantiene en el valor que indica el total de sustancia detectada, incluso
cuando sta ya ha salido del detector y cuando aparece una segunda sustancia, la seal correspondiente
se adiciona a la anterior. Con este tipo de detectores se obtiene un registro en el cual a cada sustancia le
corresponde un peldao. Y la altura de cada uno de ellos es proporcional a la cantidad de la sustancia
correspondiente (Figura 2.11a.)

Los detectores diferenciales presentan la informacin en forma curva, que en realidad es la derivada del
registro integral, pues registra la relacin ( A s/ A t), bien ( A s/ A v). En efecto: El punto de inflexin, en
el registro integral, corresponder a un mximo en el diferencial y la lnea de registro volver a cero (o el
valor de seal a cero) entre dos sustancias que estn perfectamente separadas (Figura 2.11b.) En este
caso se obtendrn registros cuya forma refleja la distribucin de concentraciones, en el seno del gas
portador, de las sustancias eludas a la salida de la columna; y as la seal es proporcional a la
concentracin de sustancia, la cantidad total de la misma ser proporcional al rea del pico.

Los detectores diferenciales son los empleados en la mayora de los casos y los que se aplican a los
aparatos comerciales; por ello se hace referencia siempre a los detectores diferenciales cuando se emplea
el trmino detector.

b. Detectores universales y especficos. Al estudiar los detectores utilizados en la cromatografa
gaseosa es conveniente hacer esta distincin, de acuerdo con el tipo de sustancias capaces de detectar y
tambin segn la especificidad de su respuesta.


70
Se considera como detectores universales aquellos capaces de detectar cualquier sustancia de un modo
lineal cuya respuesta especfica es independiente de la naturaleza de la sustancia a detectar. En realidad,
no existe an ningn detector rigurosamente universal; pues si bien existen detectores, como el de
conductividad trmica, capaz de dar una seal aceptablemente lineal, la respuesta especfica depende de
la naturaleza de cada sustancia en grado ms o menos importante segn el tipo de detector.



Figura 2.11 Representacin de la seal por un registrador cuando la recibe: a) De un detector integral, b) De un
detector diferencial.

c. Detectores destructivos y no destructivos. Entre la gran diversidad de tipos de detectores cabe an
otra clasificacin que agrupa a los detectores desde un punto de vista no exento de inters para el qumico;
especialmente cuando debe acudir a tcnicas auxiliares de identificacin cualitativa. Se denomina
detectores no destructivos aquellos capaces de detectar la sustancia sin modificarla qumicamente:
Detectores de conductividad trmica y balanza de gases.

Por el contrario, cuando la sustancia queda alterada, el detector es de tipo destructivo: Detectores de
ionizacin de llama, por ejemplo.

Es importante tener en cuenta que con el empleo del detector destructivo la muestra detectada ya no puede
pasar posteriormente a un instrumento o tcnica de identificacin cualitativa. Por ejemplo: Espectroscopa
infrarroja o espectrometra de masas. Esta dificultad puede solventarse mediante un divisor de flujo, que
tome parte de la muestra a detectar inmediatamente antes del detector y la conduzca a la salida.

2.2.4.5.2 Detector de Conductividad Trmica

Este tipo de detectores o catarmetros, en sus dos versiones (hilo caliente o termistores),han sido de
aplicacin muy amplia en cromatografa de gases. Son detectores de una gran universalidad, buena
linealidad, sensibilidad aceptable para la mayora de casos y de manejo relativamente simple.

71

Fundamento Fsico. Cuando un gas se mezcla con otra sustancia gaseosa, su conductividad trmica
vara respecto a la que poseera cuando estaba puro. Por otra parte, al variar la temperatura de un
filamento metlico o de un termistor, se cambia el valor de su resistencia.

a. Estos dos hechos fsicos son la base del detector de conductividad trmica. Si en el interior de una
clula, cuyas paredes se mantienen a temperatura constante, hay el elemento caliente (filamento o
termistor) calentado elctricamente y por dicha clula circula a flujo constante un gas puro, la
disipacin de calor por parte del elemento caliente es constante

Tabla 2.7. Lmite de deteccin de algunos detectores.
-------------------------------------------------------------------------------------------------------
Detector Sensibilidad
(Peso mnimo detectable g seg
-1
)
--------------------------------------------------------------------------------------------------------
Conductividad trmica 10
-5

Seccin transversal 10
-6

Ionizacin de llama 10
-11

Ionizacin de argn 10
-12

Captura electrnica 10
-14

Ionizacin llama alcalina 3x10
-15

Fotomtrico de llama 2x10
-12
para azufre
1.7x10
-12
para fsforo
---------------------------------------------------------------------------------------------------------

y, en consecuencia, tambin lo ser su temperatura y resistencia; en el momento en que aparezca un vapor
de distinta naturaleza, junto con el gas, en el interior de la clula, la disipacin trmica del elemento caliente
ser distinta y se modificar la temperatura del mismo y por tanto su resistencia, por haber variado la
conductividad trmica del gas. La variacin de esta resistencia puede ofrecernos una seal elctrica
adecuada y proporcional a la cantidad de muestra (vapor) que ha entrado en la clula junto con el gas que
circulaba por ella.

b. Esquema Bsico. Para poder utilizar adecuadamente el principio fsico antes descrito, es necesario
aplicarlo en forma diferencial. Para ello se emplean dos elementos sensibles idnticos situados cada uno
de ellos en dos cavidades o clulas independientes que se encuentran a la misma temperatura en un
mismo bloque metlico mantenido a temperatura constante. Los dos elementos sensibles constituyen dos
ramas de un puente de Wheatstone. Por una de las clulas circula siempre gas portador puro (clula de
referencia), y por la otra, gas portador y las sustancias (clula de medida).

Inicialmente se ajusta a cero el puente y la seal de desequilibrio, cuando el vapor de sustancia eluda llega
a la clula de medida, es la que se utiliza para su percepcin y cuantificacin.

El esquema de la figura 2.12 es evidentemente simplificado, aunque obedece, en su parte fundamental, a
los que se utilizan en el diseo de detectores de conductividad trmica en la actualidad.


72


Figura 2.12 Esquema simplificado de un detector de conductividad trmica

2.2.4.5.3 Detector de Ionizacin de LLama

Una llama de hidrgeno y aire da lugar a una corriente de ionizacin muy dbil, pero capaz de ser puesta
de manifiesto mediante un diseo electrnico adecuado. La llama de hidrgeno aire genera un medio-
ionizante de gran eficacia para las sustancias orgnicas y, por tanto, un sensor que con los complementos
electrnicos adecuados, constituye un transductor de elevada sensibilidad.

a. Fundamento Fsico. La corriente de ionizacin de la llama de hidrgeno aire, en ausencia de cualquier
sustancia, se debe a la presencia de iones H3O
+
acompaado de trazas de iones NO
+
y NH4
+
. Esta
corriente de fondo, se establece al someter la llama a una diferencia de potencial. Al aparecer en la llama
una sustancia extraa se dar una variacin en la corriente de fondo debida a la aparicin de nuevas
especies inicas o, incluso, modificacin de las que haba.

La aparicin de una sustancia orgnica en la llama de hidrgeno aire provoca un fuerte aumento de la
corriente de ionizacin, siempre que el compuesto orgnico contenga unidades C-H en su molcula.

b. Esquema bsico: El detector de llama de hidrgeno tiene dos partes fundamentales: El sistema para
producir una llama adecuada y la parte electrnica (electrodos filiformes, fuente de tensin y amplificador de
seal). El conjunto constituye el transductor o detector y la llama es propiamente el sensor.

La Figura 2.13. es un esquema simplificado de un detector de llama hidrgeno. La fuente de tensin
continua debe ser perfectamente estable; en muchos aparatos se emplea incluso una batera. Los voltajes
aplicados a los electrodos oscilan entre 80 y 250 V. La resistencia R tiene como misin el dar lugar a una
cada de voltaje, proporcional a la corriente ionizacin.

73
Esta resistencia es la resistencia de entrada al amplificador y su magnitud es de 10
12
ohmios, pues las
corrientes de ionizacin son muy pequeas, entre 10
-7
a 10
-12
amperios.





Figura 2.13 Esquema simplificado de un detector de ionizacin de llama.

El amplificador de corriente continua es, en realidad, un electrmetro. Una sustancia orgnica en la llama
produce una corriente de ionizacin Ii que, a travs de los electrodos, llega a la resistencia R, donde da
lugar a una cada de tensin IiR que es amplificada mediante el electrmetro. El voltaje a la salida del
electrmetro es la seal que ofrece este transductor.

El detector de ionizacin por llama es sensible a la mayora de los compuestos orgnicos, pero es
insensible al agua, aire y dems gases inorgnicos. Es ideal para anlisis en que no se desee registrar el
agua o gases inertes como en el caso de las bebidas alcohlicas.

2.2.4.5.4 Detector de Captura Electrnica

Como su nombre lo indica, los compuestos que entran en el detector capturan electrones, provocando una
disminucin de la intensidad de la corriente que circula por l. El efecto es similar al de la absorcin de
cuntos de luz por las sustancias coloreadas y sigue una ecuacin del tipo de la Ley de Beer. Este sistema
de deteccin se utiliza cuando se desea conseguir una elevada sensibilidad y selectividad con compuestos
halogenados, de fsforo o nitrogenados.


74


Figura 2.14 Esquema de un detector de captura electrnica.

Como fuentes de electrones o rayos gamma se emplea tritio. El tritio que es un gas, se encuentra
absorbido saturando un hilo de tntalo. Los rayos gamma o electrones son transversales al gas que fluye
de la columna. Muchos compuestos, como parafinas o hidrocarburos sencillos, son prcticamente
transparentes a los electrones, que, sin embargo, son captados por derivados halogenados y por
compuestos de nitrgeno y fsforo. En este caso se producir un cambio abrupto en electrones que
alcanzan el colector y, por tanto, en la seal del detector.

Hidrgeno y nitrgeno son los gases que presentan un comportamiento ms satisfactorio, como portadores,
con este detector. Los gases nobles no son adecuados porque se ionizan; actan de la misma manera que
un detector de ionizacin de argn. Cuando se utilice hidrgeno como gas portador hay que tener en
cuenta la posibilidad de que reaccione con los componentes de la muestra. En este caso, los resultados
obtenidos seran errneos.

2.2.4.5.5 Detector Fotomtrico de LLama (DFLL)

a. Descripcin: El detector fotomtrico de llama ha recibido considerable atencin desde su introduccin
en 1.966, es el primer detector espectroscpico econmico desarrollado para determinar la pareja de azufre
y fsforo contenidos en diferentes compuestos orgnicos, lo cual es la primera razn de su popularidad
como un detector especfico que requiere especial consideracin y atencin para su distincin por el
analista.

La figura 2.15 muestra una representacin esquemtica de sus partes esenciales. Un quemador de chorro,
un espejo reflexivo, un filtro de paso de banda estrecho (394 nm para azufre, 526 nm para fsforo), y un
fototubo multiplicador.

b. Fundamento fsico de operacin: Cuando una sustancia contiene fsforo o azufre y es llevada al
quemador en una llama rica en hidrgeno, hay una emisin caracterstica de luz a las longitudes de onda

75
de 526 y 394 nm respectivamente. La luz producida por encima de la llama es aprovechada por la posicin
que




Figura 2.15 Esquema de un detector fotomtrico de llama FPD

ocupa el detector. La luz procedente de esta rea es recolectada por un espejo, luego pasa por el filtro
apropiado y es monitoreada por el fotomultiplicador. Comnmente se aplica al fototubo una diferencia de
potencial de 750 V de corriente directa. El mximo rendimiento es obtenido llevando la seal hacia un
electrmetro. Se ha utilizado para el anlisis de contaminantes del aire y del agua como los pesticidas y los
hidrocarburos.

2.2.4.5.6 Detector NPD

El detector NPD pertenece a la familia de detectores de ionizacin y dentro de stos al grupo de los
detectores selectivos. Se trata de un sistema que puede responder selectivamente a los compuestos org-
nicos que poseen grupos funcionales que contengan nitrgeno o fsforo.

El principal campo de aplicacin de ste detector es el anlisis de compuestos con actividad biolgica
(pesticidas, frmacos, etc) en matrices complejas donde el uso de un detector selectivo evita el problema
de interferencia de otros compuestos.

Se trata de un detector muy sensible y la obtencin de buenos resultados esta muy afectada por la correcta
manipulacin del sistema.

Una caracterstica del detector NPD es su compatibilidad con el detector FID, sta se puede definir en dos
aspectos. Por un lado el mdulo amplificador del detector NPD puede actuar tambin como electrmetro
del detector FID de forma que un equipo configurado con estos dos detectores nicamente necesitar el
mdulo amplificador para NPD.

76

Tabla 2.8. Detectores.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Conductividad Trmica
Usos: Universal, particularmente empleado en anlisis de gases inorgnicos, agua, hidrocarburos.
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Sensibilidad: Moderada, dependiente de la concentracin de muestra en el gas de arrastre.

LINEALIDAD: Li nealidad: Buena, pero necesita de factores de correccin para clculos cuantitativos.

------------ -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
PROBLEMAS: problemas: Puede quemarse por exceso de aire u oxgeno en la muestra, difcil limpiar.


Ionizacin p Ionizacin por llama de H2
USOS: Anlisis de alta sensibilidad; anlisis en que no se desee registrar el agua o gases
inertes. (Bebidas alcohlicas).
------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
SENSIBILIDAD Sensibilidad: Alta, excepto para gases inorgnicos y agua.
------------ ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
LINEALIDAD: Linealidad: Buena, los factores de correccin para anlisis cuantitativos son casi constantes para
sustancias similares
------------ ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

PROBLEMAS: C Problemas: contaminacin.

Captura de electrones

USOS: Anlisis de pesticidas y productos halogenados.
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
SENSIBILIDAD Sensibilidad: Muy alta para algunos compuestos, en particular los halogenados.
------------ ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
LINEALIDAD: Linealidad: Rango de linealidad muy bajo.
------------ -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
PROBLEMAS: Problemas: Contaminacin.
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


a. Principio de funcionamiento:

Su funcionamiento se fundamenta en la recoleccin de iones negativos que se producen en el entorno de
una perla alcalina termostatizada a alta temperatura sobre la cual esta incidiendo una corriente de
hidrgeno mezclada con el gas portador eludo de la columna y otra de aire. La corriente inica de fondo
aumenta bruscamente con la presencia de compuestos nitrogenados o fosforados que favorecen la
formacin de estos iones. El mecanismo de formacin de estos iones y por lo tanto la selectividad es un
hecho que an hoy suscita una controversia. Se especula con un mecanismo cataltico por parte de la
superficie de la perla. Esta est formada por sales alcalinas depositadas sobre una matriz de slice, el
conjunto esta soportado por un hilo de platino que a su vez acta de elemento controlador de temperatura
de la perla.

77
La coleccin de los iones formados se produce al igual que en otros detectores inicos (FID) por la
aplicacin de un voltaje sobre la superficie de la perla que desplaza los iones hacia un elemento colector.

La amplificacin de la corriente elctrica detectada por parte de un mdulo electrnico nos da la seal
exterior sobre la cual se conectar el sistema de tratamiento de datos.

Las dos variables que inciden fundamentalmente sobre el nivel de respuesta obtenido son el caudal de
hidrgeno aportado y la temperatura de la perla. Ambos se deben conjugar adecuadamente para obtener
una respuesta satisfactoria.

Dado el fenmeno cataltico que ocurre en la superficie de la perla, sta tiene una actividad que ir
disminuyendo y es un elemento fungible que se debe reemplazar en el momento que no consiga la sensi-
bilidad adecuada.




Figura 2.16 esquema de un detector NPD


2.2.4.5.7 Detector de Espectrometra de Masas

La combinacin de la cromatografa de gases acoplada con espectrometra de masas se conoce por las
siglas GC-MS en la actualidad muchas compaas fabrican estos instrumentos con este potente sistema de
deteccin.

En el CG-EM, los solutos que eluyen de la columna pasan directamente a la cmara de ionizacin de un
espectrmetro de masas, de forma tal que la mayor parte del gas portador se elimina. En la cmara de
ionizacin todas las molculas, (resto del gas portador, disolvente y solutos ) se ionizan y los iones se
separan segn su relacin masa-carga. Como cada soluto sufre una fragmentacin caracterstica a iones
ms pequeos, su espectro de masas de intensidad de in en funcin de la relacin masa-carga
proporciona informacin cualitativa que puede utilizarse para identificar el soluto.

Como detector de cromatografa de gases, la corriente inica total de todos los iones que llegan al detector

78
suele usarse para obtener el cromatograma de masas (observar figura 2.17 a). La selectividad se logra
controlando solo determinadas relaciones masa-carga (observar figura 2.17 b), proceso denominado
control selectivo de iones (SIM). Los lmites de deteccin del espectrmetro de masas son excelentes, en
general de 25 fg a 100 pg, con una respuesta lineal que abarca cinco rdenes de magnitud.




Figura 2.17 (a). Cromatograma inico total de una muestra de 10 compuestos. (b) Registro cromatogrfico utilizando un
control selectivo de iones SIM para las relaciones masa carga 93 y 95, que son los iones caractersticos de los
monoterpenos pineno (tr=5.087 min), pineno (tr=5.81 min), alcanfor (tr=8.51 min) y metanol (tr=8.93 min)

Los instrumentos para cromatografa de masas CG-EM se utilizan para identificar miles de componentes
presentes en sistemas naturales y biolgicos (observar figura 2.17). Por ejemplo estos procedimientos han
permitido identificar los componentes que causan el olor y sabor en los alimentos, identificar contaminantes
del agua, llevar a cabo diagnsticos mdicos basados en los componentes del aliento y estudios sobre
metabolitos de frmacos.


Figura 2.18 Cromatograma caracterstico de la corriente iones total de una mezcla de cinco componentes: 1) N-
nitrosodimetilamina, 2) bis(2-cloroetil)ter, 3) bis(2-cloroisopropil)ter, 4) N-nitrosodi-n-propilamina y 5) bis(2-
cloroetoxi)metano.



79

2.2.4.5.8 Detector Espectrofotomtrico Infrarrojo de transformada de Fourier (IR-TF)

En la cromatografa de gases acoplada con espectroscopia infrarroja de transformada de Fourier,
abreviada como (CG-IR-FT), el eluyente de columna pasa a travs de una celda ptica fabricada con tubo
pirex de 10 a 40 cm y con un dimetro interno de 1 a 3 mm. La superficie interior de la celda est revestida
por una capa reflectante de oro. Las mltiples reflexiones de la radiacin a medida que se transmite a
travs de la celda aumentan la longitud del paso de luz ( b ) a travs de la muestra por lo cual se produce
un aumento en la absorbancia segn la ley de Beer expresada como bC A c = hacindose ms fcil la
deteccin para la obtencin del espectro IR.

2.2.4.5.9 Otros Detectores: Con frecuencia, la cromatografa de gases se combina con otras tcnicas
selectivas como la espectroscopa y la electroqumica para generar poderosas herramientas con las que se
pueden separar e identificar compuestos en muestras complejas mediante el acoplamiento del
cromatografo de gases con espectroscopa magntica nuclear y mtodos electroanalticos.

2.2.5 Cromatografa de Gases versus Cromatografa de Alta Resolucin (HPLC).

En un principio HPLC Significaba "High pressure liquid cromatography ", pero hoy se entiende ms bien
como "High performance liquid cromatography", cromatografa lquida de alta resolucin denominada
tambin con la sigla CLAR.

Debido a su rpido desarrollo en los ltimos aos, la HPLC presenta hoy un procedimiento eficaz del
anlisis moderno. La calidad de los materiales de relleno de columnas y de columnas preparadas, as como
las condiciones instrumentales posibilitan las siguientes cualidades: Selectividad ptima, tiempos de
anlisis cortos, gran sensibilidad de deteccin.

La diferencia bsica entre la HPLC y la CG. Esta en cuanto a su utilidad y fenmeno fsico de separacin:

a. La cromatografa de gases est limitada a muestras voltiles, mientras que la HPLC es aplicable a
sustancias de peso molecular medio o grande, sin la condicin de ser voltiles, y a todas aquellas
sustancias susceptibles de alterarse lumnica o trmicamente.

b. Solo el 15 o 20% de los compuestos orgnicos conocidos, pueden separarse por cromatografa de gases
sin previa modificacin qumica. En contraste, la cromatografa lquida requiere que la muestra sea soluble
en la fase mvil, y por esto hace posible el anlisis de compuestos de alto peso molecular, orgnicos e
inorgnicos, inicos o covalentes.

c. En general por HPLC se pueden resolver problemas de separacin de compuestos que normalmente no
se separan por cromatografa de gases debido a :

- En cromatografa lquida hay una interaccin selectiva de la muestra con dos fases, mvil y estacionaria.
En cromatografa de gas la fase mvil es un gas inerte.

- En cromatografa lquida hay una mayor variedad de fases estacionarias y muchas fases mviles.

80

- Las bajas temperaturas favorecen la separacin debido a que las interacciones moleculares son ms
efectivas. En HPLC normalmente se trabaja a temperatura ambiente.

- En cromatografa lquida cuando en el proceso de separacin se usa un solo solvente se denomina
isocrtica, cuando se utiliza una mezcla de solventes y se varia su composicin porcentual se denomina por
gradiente.

- Cuando en cromatografa gas lquido en el proceso se utiliza una temperatura constante se denomina
isotrmica y cuando se programan los rangos de temperatura es una cromatografa con programacin
lineal de temperatura o rampas.

En cromatografa HPLC cuando la fase estacionaria es no polar y la mvil polar se denomina cromatografa
en fase normal; pero cuando la fase estacionaria es polar y la fase mvil no polar se denomina
cromatografa en fase inversa como los pesticidas y los hidrocarburos.

En cuanto a la instrumentacin el esquema de un cromatgrafo lquido, (observar figura 2.19) es similar al
de un cromatgrafo de gases, con la diferencia de sustituir el cilindro de gas a presin, por una bomba
impulsora de lquido. El inyector en gases es una cmara de vaporizacin y en lquidos es un simple
introductor de muestras.



Figura 2.19 equipo para cromatografa lquida de alta eficiencia (HPLC)

En comn tienen, columna permanente y reutilizable de alta eficiencia, sistema de termostatizacin de la
columna, aunque con finalidad distinta; circulacin continua de la fase mvil, deteccin continua, alta
sensibilidad, visualizacin grfica de resultados en forma de cromatograma. Posibilidades de integracin
etc.

El cromatgrafo Lquido tiene como componente bsicos una bomba o sistema de bombas para impulsar el
solvente o eluente; un sistema de inyeccin para la aplicacin de muestras; la columna para realizar la
separacin; y un detector que indica la secuencia como eluyen los componentes.

Adicionalmente los aparatos cuentan con otros accesorios que simplifican el proceso y aumentan la

81
eficiencia del mismo. Entre los accesorios se cuentan los colectores de fracciones, sistemas para progra-
macin de gradientes, hornos de termostatizacin, registrador grfico, integrador, muestreador automtico,
computador etc.

La bomba se considera despus de la columna el componente ms importante en HPLC. Conociendo las
ventajas y desventajas del tipo de bomba, se cuenta con una gran ayuda para realizar la cromatografa.

Bsicamente se tienen dos tipos de bombas, la de presin constante y la de flujo constante.

La principal ventaja de la primera es su sencillez y libertad en las pulsaciones lo cual produce una lnea
base muy uniforme; sin embargo las alteraciones del flujo por cambios de viscosidad causan problemas en
el anlisis.

Las bombas de flujo constante, facilitan la reproducibilidad de los volmenes de retencin del anlisis,
prescindiendo de cambios en la viscosidad y de posibles obstrucciones en la columna.

Los detectores ms utilizados son fundamentalmente dos, que son, los ultravioleta (ya sea de longitud de
onda fija o variable) y los de ndice de refraccin. Existen otros tales como los de fluorescencia,
electroqumicos, de absorcin trmica, de ionizacin de llama etc.

La HPLC, como tcnica analtica de extraordinario desarrollo, se debe en parte a los diversos campos de
aplicacin en ambiental, polmeros, farmacia, qumica, bioqumica, etc. Y para alcanzar ese lugar que
ocupa hoy, la columna, elemento central del sistema, ha sido la parte de mayor investigacin y desarrollo.

Los programas de productos para el relleno de columnas HPLC, se orientan en los criterios de calidad
necesarios para separaciones ptimas y abarca por lo tanto una gama de productos muy diversos y que se
complementan entre s:

-Materiales de relleno de forma irregular, totalmente porosos-Licsob.

-Materiales de relleno de forma esfrica, totalmente porosos-Lichrospher.

-Materiales de relleno de forma esfrica, superficialmente porosos-perisorb.

Estos materiales de relleno de columnas estn disponibles como silicagel sin modificar y modificados
qumicamente con grupos orgnicos diferentes y por tanto con comportamiento de selectividad. Se cuenta
tambin con rellenos a base de xido de aluminio, especialmente adecuado para separaciones que
requieren un absorbente bsico.

El analista que ha de trabajar con HPLC, podr obtener los mejores resultados conociendo los diferentes
materiales y relacionando la estructura qumica de la partcula, la molcula y el solvente, por una parte, con
el dimetro, porosidad y superficie especfica por la otra.

Los disolventes para HPLC exigen ciertos criterios de calidad entre los cuales se deben considerar los
siguientes:

82

Alto grado de pureza, componentes que influyen en la polaridad del disolvente tales como contenido de
agua, de cido libre y de posibles estabilizadores.

La pureza ptica es de gran importancia cuando se utiliza detector ultravioleta, igualmente el ndice de
refraccin cuando en la deteccin se hace uso de este parmetro.
Interesa tambin la viscosidad que tiene relacin con la velocidad de elucin y presin previa en la
columna.






































83



UNIDAD 3

3. ANALISIS CROMATOGRAFICO
8


OBJETIVO GENERAL

Presentar al estudiante las consideraciones generales, parmetros de control y relaciones que se deben
tener en cuenta en la separacin Y realizacin de un anlisis tanto cualitativo como cuantitativo por
cromatografa Gas-lquido.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Terminada la unidad el estudiante ser capaz de:

1. Seleccionar la columna, el soporte, Fase lquida, gas portador, detector, temperaturas del detector,
bloque de inyeccin, la columna, velocidad de flujo del gas portador, amplificacin y cantidad de muestra a
inyectar en un anlisis por cromatografa Gas-lquido.

2. Interpretar la informacin reportada por el cromatograma obtenido.

3. Analizar cualitativamente una mezcla, identificando cada uno de sus componentes; hacer uso adecuado
del ndice de Kovats y sus relaciones con otros parmetros fsicos.

4. Aplicar las diferentes tcnicas para cuantificacin de los componentes de una mezcla.

5. Reconocer las aplicaciones y limitaciones de la cromatografa Gas-lquido.














8 Materiales recopilados y organizados por el profesor Federmn Castro Eusse para la asignatura anlisis instrumental II de los programas en Qumica
Industrial y Tecnologa Qumica de la UTP.

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3.1 Muestra

La diversidad de muestras que llegan al laboratorio con fines analticos es muy variada y las
determinaciones requeridas pueden ser muy diferentes de una a otra; por tanto el Qumico Analista debe
tener los criterios suficientes que le permitan definir si la cromatografa le es til en el anlisis a realizar y
que tipo de cromatografa es la ms adecuada. Con la cromatografa de gas liquido se analizan mezclas
de sustancias que se puedan volatilizar entre la temperatura ambiente y los 400C. En un anlisis por
cromatografa de gas - lquido se debe seguir la siguiente secuencia:

3.1.1. Indagar Sobre la Muestra. Toda informacin que se pueda obtener sobre la muestra ser de gran
utilidad; se debe conocer su procedencia lo cual da una idea general sobre los posibles compuestos que la
constituyen, para definir si la muestra requiere tratamiento previo para su conservacin o anlisis.

3.1.2. Tratamiento de la Muestra. Una gran cantidad de muestras no pueden inyectarse al cromatgrafo
tal como se presentan, stas deben recibir un tratamiento preliminar que puede consistir en una separacin,
desecado, pirlisis, esterificacin, acilacin o un silanizado, extraccin en fase slida, uso del espacio de
cabeza.

3.1.3. Seleccin de Condiciones para el Anlisis. Los posibles compuestos constituyentes de la
muestra, permiten suponer: grupos funcionales presentes, polaridad, pesos moleculares, puntos de
ebullicin, presin de vapor; que son propiedades necesarias para definir: tipo de columna, soporte, fase
lquida estacionaria, temperatura del inyector, temperatura de la columna, gas portador, velocidad del gas,
detector, amplificacin y cantidad de muestra para realizar la primera inyeccin.

3.1.4. Condiciones Instrumentales. Calibracin y operacin del equipo de acuerdo con las instrucciones
y normas de seguridad recomendadas por el fabricante segn la marca y modelo del cromatgrafo
disponible.

3.1.5. Inyeccin de la Muestra.

Ver instruccin 2.2.4.1 Pgina 43

3.1.6. Interpretacin del Cromatograma Obtenido. El cromatograma es una representacin grfica de
los picos de elucin de una mezcla de diferentes compuestos, en un plano de coordenadas en cuyo eje de
ordenadas se encuentra la seal del detector, y en el eje de abscisas el tiempo o el volumen de retencin.

La forma ideal del pico es una campana de Gauss cuya rea bajo la curva o la altura h del compuesto es
proporcional a la cantidad o concentracin permitiendo su cuantificacin. El tiempo o volumen de retencin
gastado para salir el pico, medido en el eje de abscisas, es un parmetro til para su cualificacin.

El cromatograma depende de variables tales como: velocidad de la carta, si se usa un registrador,
amplificacin, poder de resolucin de la columna, cantidad de muestra inyectada, temperatura, presin,
velocidad flujo, etc.


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El cromatograma nos presenta la informacin sobre el comportamiento termodinmica de los compuestos
dentro de la columna y de su anlisis e interpretacin depende la informacin para realizar un buen anlisis
cualitativo y cuantitativo.

No siempre sucede que el resultado de una primera inyeccin sea un cromatograma perfecto, por lo cual es
necesario interpretarlo, variar condiciones para optimizarlo y hacerlo til para los fines analticos. Con tal
propsito se deben considerar los siguientes factores que afectan los picos:

1. Presin del gas de arrastre

En una columna cromatogrfica para gas las partculas de empaquetamiento ofrecen una resistencia al flujo
del gas de arrastre debido a la viscosidad finita del gas por lo cual hay un gradiente de presin a lo largo de
la longitud de la columna. Este gradiente no tendr efecto sobre el volumen de retencin pero si sobre el
tiempo de retencin debido al hecho de que el gas es compresible por tanto la rata volumtrica de flujo es
ms grande a la salida que a la entrada. As el gradiente de velocidad es inevitable cuando hay un
gradiente de presin en la columna.

Cul de los siguientes factores no ayuda a minimizar el gradiente de velocidad?

a. Un empaquetamiento fino
b. Una columna ms larga
c. Una rata de flujo lenta del gas de arrastre

El gradiente de velocidad puede minimizarse usando un empaquetamiento ms suave, una baja velocidad
de flujo y columnas cortas, por lo tanto una columna ms larga no sera til para este propsito.
(Respuesta b).

Se ha demostrado que una relacin de presin muy grande entre la entrada y salida de la columna (Pi/Po)
tiene un efecto adverso en el trabajo de la columna y lo ms deseable para el diseo de las columnas es
que la relacin de presiones se aproxime a la unidad.

Esta es la razn por la cual las columnas trabajan mejor con presiones en exceso de atmsferas que bajo
vaco. (Nota: es conveniente anotar que la cromatografa a alta presin resulta ser ms eficiente y dar
mejores resultados por este motivo).

2. Temperatura

Un cambio en la temperatura afecta: a) El coeficiente de particin, b) La rata de flujo volumtrico para una
relacin dada de Pi/Po.

Como resultado de estos factores, se puede demostrar que los tiempos de retencin relativos son ms
grandes a bajas temperaturas que a altas temperaturas y as la reduccin en la temperatura aumenta la
eficiencia de la columna. Por otro lado el uso de las bajas temperaturas resulta en un tiempo de anlisis
mayor y fcilmente se sobrecarga la columna, siendo necesario inyectar cantidades pequeas de muestra.


86
La escogencia de la temperatura de operacin adecuada, entonces, depende de un balance de estos
factores para obtener los resultados deseados.
En un anlisis cromatogrfico de una mezcla de m-xileno (p.Eb 139C) y p-xileno (p.Eb 138C) llevado a
cabo usando una fase estacionaria semipolar: Di-nonil-ftalato a 120C. No se obtuvo separacin alguna.
Cul de los siguientes factores se debe adoptar para efectuar la separacin?

a. Aumentar la temperatura de la columna alrededor de 140C
b. Disminuir la temperatura de la columna a 100C
c. Cambiar la fase estacionaria.

Un cambio en la temperatura afecta:

a. El coeficiente de particin.
b. La rata de flujo del gas (velocidad) en la columna para una determinada relacin (Pi/Po).

Se debe recordar que la eficiencia de la columna como regla es: Conforme la temperatura aumenta, la
eficiencia de la columna disminuye. Hay necesidad en este caso de aumentar la eficiencia de la columna.

Por lo tanto, hay que disminuir la temperatura. Los tiempos de retencin relativos son ms grandes a ms
bajas temperaturas y la eficiencia de la columna aumenta. Puesto que en este caso se pueden ignorar los
efectos de polaridad, bajando la temperatura a 100C se efecta la separacin. (Respuesta b).

Habr otras fases estacionarias selectivas que podrn ser mejores para separar el m-xilano y el p-xilano (ej.
cresilfosfato). Sin embargo una vez que la fase estacionaria ha sido escogida, la fase se deber cambiar
solamente si despus de hacer los ensayos a bajas temperaturas no ha habido separacin.


---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
No. FACTOR TIEMPO DE RETENCION
Corto Largo
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
1. Rata volumtrica de flujo de gas de arrastre (velocidad) Alta Baja

2. Concentracin de la fase estacionaria sobre el material soporte Baja Alta

3. Solubilidad del componente en la fase estacionaria Baja Alta

4. Volatilidad Alta Baja

5. Temperatura de la columna Alta Baja

6. Longitud de la columna Corta Larga
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

La Tabla No. 3.1 resume los principales factores que afectan el tiempo de retencin para el anlisis de un
Cromatograma.


87
Estos factores se deben considerar cuidadosamente.

Usualmente alguna informacin acerca de la muestra es suministrada antes del anlisis y a partir de esto se
pueden escoger las condiciones instrumentales. Despus de observar el cromatograma de la primera
inyeccin puede ser necesario alterar algunos o todo el conjunto de condiciones varias veces, hasta
obtener un resultado satisfactorio.

Cuando en un cromatograma, no se seala el punto de inyeccin ste se puede identificar observando que
los picos normalmente salen de izquierda a derecha y el primer pico es el de punta ms aguda, el cual est
cerca del punto de inyeccin.

He aqu un cromatograma (observar Figura 3.1) obtenido de una primera inyeccin, y la temperatura de la
columna ha sido considerablemente ms alta que la temperatura ambiente. Los picos estn sin resolver y
aparecen en un tiempo muy corto despus de la inyeccin.


Figura 3.1 Cromatograma con baja resolucin


Cul de los siguientes factores se debe cambiar en primer lugar para mejorar considerablemente la
resolucin de los picos en el cromatograma?

a. Reducir la presin del gas de arrastre
b. Reducir la temperatura de la columna
c. Cambiar la fase estacionaria
d. Incrementar la longitud de la columna.

Se podra pensar en aumentar la longitud de la columna, lo cual mejorara la resolucin. El tiempo del
anlisis se alargara, pero lo importante es que el tiempo de anlisis sera muy corto de todas maneras.

Pero en C.L.G. El diseo se ha hecho para aumentar la precisin de los resultados, rpidamente. Hay que
pensar en los inconvenientes de hacer la columna ms larga, la fijacin en el horno, etc.


88
Hay muchas ms formas convenientes de producir una considerable mejora en la resolucin. El cambio de
fase estacionaria puede mejorar la resolucin teniendo en cuenta la afinidad y polaridad antes de hacer la
columna. Una equivocacin en la escogencia de la fase estacionaria se traduce en un fracaso para separar
los componentes de inters. El cambiar la fase estacionaria implica un trabajo mayor que el cambio de la
columna con todos sus inconvenientes. Adems puesto que el cromatograma muestra que los picos son
distintos visiblemente, indica que la fase estacionaria lo est separando.

Una reduccin en la presin del gas de arrastre puede mejorar ligeramente la resolucin, si es que la
presin est por encima de su valor original ptimo. Lo mejor es cambiar la temperatura de la columna
(respuesta b) puesto que esta reduccin de la temperatura de la columna (horno) har que:

a. Cambie el coeficiente de particin.

b. Baje la rata volumtrica de flujo (velocidad) en la columna para una relacin dada de Pi/Po.

Ahora tenemos otro caso, y es un cromatograma que se ha obtenido de una inyeccin y se ilustra en la
Figura 3.2.




Figura 3.2 Cromatograma con pobre resolucin

La resolucin es pobre y los picos estn muy confusos aunque el tiempo de anlisis y los tiempos de
retencin son razonables. Una causa de una resolucin muy pobre es la falta de selectividad en el proceso
cromatogrfico.

Para mejorar la resolucin en este caso, para incrementar la separacin de los picos, qu seria lo
aconsejable?

a. Reducir la presin del gas de arrastre.
b. Reducir la temperatura de la columna.
c. Usar una columna con una fase estacionaria diferente.

El tiempo de anlisis fue razonable, pero la resolucin pobre, reduciendo la presin del gas de arrastre, no
ayudar a mejorar la resolucin en este caso. Es la selectividad en el proceso cromatogrfico lo que falla.

89

Una reduccin en la temperatura de la columna simplemente aumentara el tiempo del anlisis y se ha
dicho que es razonable. Como es la selectividad la que falla, y no el tiempo de anlisis, el error est en la
fase estacionaria. Se debe tener en cuenta la afinidad qumica y los efectos de polaridad en la escogencia
de la columna (respuesta c).

Consideremos el cromatograma presentado en la Figura 3.3.

La resolucin todava no es suficiente para dar completamente una separacin de los dos picos mayores,
un mejoramiento en la eficiencia de la columna ayudar a este efecto. Esto se puede lograr bajando la
temperatura del horno y encontrando una nueva rata de flujo de gas por ensayo y error (haciendo ensayos
de exceso y defecto en la presin del gas). Una columna ms larga mejorara las cosas an ms.

Desafortunadamente estos pasos prolongan el tiempo de anlisis que de por s ya es largo.


Figura 3.3 Cromatograma con resolucin insuficiente

Para el caso en descripcin, puesto que conocemos el rea de cada pico que representa la cantidad de
cada componente particular en la mezcla, cul sera una alternativa para mejorar la resolucin?

a. Usar menos muestra en la inyeccin
b. Usar ms muestra en la inyeccin
c. Usar una columna conteniendo menor fase estacionaria.

Se ha dicho que la resolucin no es buena y hay que mejorarla. Como el rea del pico es proporcional a la
cantidad del componente, se puede pensar en la cantidad inyectada, pero antes consideremos el caso de la
fase estacionaria.

Si se utiliza menos fase estacionaria el efecto sera igual que inyectar ms muestra en la columna o reducir
la longitud de la misma.

Se puede demostrar que previendo que la columna no est sobrecargada, el tamao de la muestra es
proporcional a la raz cuadrada de la longitud de la columna.

90

Para una resolucin determinada. Si se inyecta el doble de cantidad de muestra, proporcionalmente se
requiere una mayor longitud de la columna.
Por lo tanto, una reduccin en la cantidad inyectada reducir el rea de los picos y la resolucin se
mejorar (Respuesta a).

Algunas veces los picos en el primer cromatograma aparecen en forma asimtrica como en la Figura 3.4. y
tambin la asimetra puede ser tal que la parte posterior del pico es ms inclinada que la parte anterior.



Figura 3.4 Cromatograma con picos asimtricos

Este tipo de asimetra resulta cuando se usa una columna conteniendo muy pocos platos. Otras causas de
asimetra pueden ser:

1. Una columna sobre cargada, la cual se puede corregir inyectando menos muestra.
2. Por descomposicin trmica de la muestra en la columna.

Cmo podra rectificarse la descomposicin trmica de la muestra?

a. Bajando la temperatura del horno.
b. Aumentando la rata volumtrica (velocidad de flujo) del gas de arrastre.
c. Disminuyendo la cantidad de fase estacionaria.

Si se piensa que una disminucin en la cantidad de fase estacionaria rectificara la descomposicin trmica
de la muestra, ello ayudar por supuesto para dar como resultado tiempos de elucin ms cortos, para que
los componentes reduzcan su contacto entre la muestra y la columna caliente. Desafortunadamente la
descomposicin trmica de la muestra podra ocurrir en corto tiempo.

Pensando aumentar la rata volumtrica del gas de arrastre (velocidad del gas), ayudar a rectificar la
asimetra y esta accin resultar en tiempos de elucin ms cortos para los componentes. Esto significa
que los componentes estarn en contacto con la columna caliente durante un tiempo menor, pero la
descomposicin trmica podra presentarse an.

91

Al bajar la temperatura del horno, esto rectificar la asimetra del pico causado por descomposicin trmica
de la muestra, (Respuesta a). Un incremento en la rata volumtrica del flujo del gas de arrastre (velocidad)
y una reduccin en la cantidad de fase estacionaria alrededor de 3% en peso ayudarn juntos a disminuir
los tiempos de elucin. (Nota: Tambin la temperatura del bloque de inyeccin deber reducirse).

La asimetra de los picos no deber confundirse con la cola de los picos como en la Figura 3.5



Figura 3.5 Cromatograma con colas de elucin

Esto puede interferir con el anlisis, y puede con frecuencia ser eliminado por uso de un eliminador de
cola, y/o usarse una columna conteniendo ms material inerte de soporte.

La causa de la cola puede ser:

a. Temperatura muy alta
b. Uso de fase estacionaria incorrecta (equivocada)
c. Inyeccin de mucha muestra.

Este tipo de asimetra resulta cuando se usa una columna conteniendo muy pocos platos. Otras causas de
asimetra pueden ser:

d. Una columna sobrecargada, lo cual se puede corregir inyectando menos muestra.

e. Por descomposicin trmica de la muestra en la columna.

La descomposicin trmica de la muestra se puede rectificar:

- Bajando la temperatura de la columna?
- Aumentando la rata volumtrica (velocidad) del gas de arrastre?
- Disminuyendo la cantidad de fase estacionaria?

92
- Ninguna de las anteriores?
Si se piensa en la inyeccin de mucha muestra, se puede pensar en su efecto sobre la forma de los picos, y
sobre si la resolucin es adecuada en este cromatograma. Si se piensa en que la cola es causada por
temperatura muy alta, en realidad bajando la temperatura de la columna se logra eliminar la cola.

Las colas pueden resultar de una muy baja temperatura causando indebida condensacin de la muestra.

Si la temperatura fuera alta lo suficiente para causar la descomposicin de la muestra, entonces la
asimetra de los picos podra producirse en el cromatograma. No se debe confundir las colas con la
asimetra.

El uso de una fase estacionaria equivocada es una de las causas de que se presenten las colas
(Respuesta b).

Columnas fuertemente polares pueden ser su causa, o esto podra causarse por una muestra fuertemente
polar, producindose "auto asociacin" por puentes de Hidrgeno.

Veamos ahora el siguiente cromatograma, Figura 3.6

Los picos estn bien separados, el tiempo de retencin de cada pico resulta ser ms grande que lo
necesario, para dar la adecuada resolucin.



Figura 3.6 Cromatograma con ptima resolucin

Si podemos acortar estos tiempos de retencin, el cromatograma ser ideal para todos los propsitos.

Aunque el uso de una columna ms corta tiene sus ventajas, el cambio de una columna consume tiempo.

Cual ser la forma ms rpida de acortar los tiempos de retencin para reducir el tiempo del anlisis.

a. Aumentar la temperatura de la columna y la rata de volumtrica de flujo de gas de arrastre (velocidad).
b. Aumentar la temperatura de la columna solamente.
c. Aumentar la rata volumtrica de flujo de gas de arrastre solamente.

93

Respuesta b.
3.1.7. Optimizacin del cromatograma mediante variacin de las condiciones iniciales, si el
cromatograma obtenido no es bueno para fines analticos.

3.1.8. Anotar o grabar en la memoria del computador las condiciones instrumentales con las cuales se
obtuvieron resultados satisfactorios, para reproducirlas cuando se requieran.

3.1.9. Anlisis Cualitativo. Realizados los anteriores pasos, el anlisis cualitativo puede hacerse
mediante la aplicacin de diferentes tcnicas:

3.1.9.1. Si el detector no destruye la muestra, se pueden recolectar los compuestos y tomar espectros de
masas (E.M.) o infrarrojo (E.IR.); tambin se pueden acoplar estos equipos al cromatgrafo y hacer los
anlisis directamente.

3.1.9.2. Si no se dispone de los equipos de E.M. o IR. Identificar el compuesto o compuestos de inters en
la muestra con base en los tiempos de retencin de la siguiente forma: Inyectar el compuesto puro que sea
de inters en la muestra, en igualdad de condiciones en la cual se tomo el cromatograma, si su tiempo de
retencin coincide con el del compuesto en la muestra, segn A tr podemos concluir que se encuentra
presente.

Para confirmar su presencia podemos agregar a la muestra problema una cantidad X del compuesto e
inyectar igual cantidad de muestra en igualdad de condiciones al cromatograma anterior. Se confirma su
presencia si da un pico ms grande en igual tiempo de retencin.

Si esto no sucede debe salir un pico ms o algn otro pico aumentado si el compuesto adicionado se
encuentra en la mezcla.

Para tener mayor confiabilidad en el anlisis, se deben variar las condiciones para hacer que el tiempo de
retencin cambie para los compuestos y repetir de nuevo la inyeccin o inyecciones de los compuestos
presumiblemente presentes y que son de inters, si los tiempos de retencin coinciden se asegura su
presencia.

3.1.9.3. Adicionando un estndar para hacer el anlisis segn los tiempos de retencin relativos.

El estndar debe reunir los siguientes requisitos:

a. Ser miscible con la mezcla que se va a analizar.

b. No debe reaccionar con ninguno de los componentes de la mezcla.

c. Debe dar solamente un pico y ste no debe solapar o cubrir parcialmente ninguno de los picos de los
componentes de la muestra.

d. Su tiempo de retencin debe estar prximo al compuesto de la muestra que es de inters.

94


trb - tra trc - tra
trbtrs = ---------------- trctrs = -------------
trs - tra trs - tra


trbtrs = Tiempo de retencin del compuesto trctrs = Tiempo de retencin del compuesto
b con relacin al estndar c con relacin al estndar

tra = Tiempo de retencin del aire

Inyectada la muestra con el estndar, se calcula el tiempo de retencin relativos para el compuesto de
inters, luego en igualdad de condiciones se inyecta con el estndar el compuesto que se supone es de
inters, calculando nuevamente el tiempo de retencin relativo y comparando el tiempo de retencin
relativo con el de la muestra, si corresponde se confirma la presencia del compuesto.

La relacin de los tiempos de retencin, permite minimizar errores cometidos al hacer la inyeccin y
colocar en funcionamiento el registrador o puesta en marcha del programa. Accin que debe ser si-
multnea.

3.1.9.4. Para analizar series homlogas de Hidrocarburos, se pueden construir grficas del logaritmo del
tiempo de retencin contra nmero de carbonos o contra puntos de ebullicin. Tambin representa gran
utilidad el uso del ndice de Kovats.

3.1.9.5. ndice de kovats. Para proporcionar un medio fcil de identificar un compuesto desconocido,
Kovats propuso un sistema de ndices basado en los n-alcanos como sustancias de referencia, puesto que
estos compuestos son qumicamente inertes, solubles en las fases estacionarias comunes y son no
polares.

El ndice de Kovats, se calcula de la siguiente ecuacin:



(

+
|
|
.
|

\
|
+

= z
LogRz n LogRz
LogRz LogRx
n I 100

Donde:

Rx es el tiempo de retencin de la sustancia
desconocida X

Rz es el tiempo de retencin del alcano normal
que tiene z tomos de Carbono


95
Rz+n es el tiempo de retencin de un alcano
normal teniendo Z+n tomos de Carbn

n es la diferencia de tomos de Carbono
existente entre los alcanos normales
(z+n)-z = n

Ejemplo: Una sustancia X se supone que tiene 7 carbonos. Se mezcla con hexano (C6H14) y con octano
(C8H18) y se obtuvo el cromatograma de la Figura 3.7.

R6 = 210 segundos
R8 = 795 segundos
Rx = 470 segundos
n = 8-6 = 2
Z = 6


Figura 3.7 Cromatograma ilustrativo del ndice de Kovats



Entonces:


(

+ |
.
|

\
|

= 6
3222 , 2 9004 , 2
3222 , 2 6721 , 2
2 100 I =
(

+ |
.
|

\
|
6
5782 . 0
3500 . 0
2 100 = ) 6 21 . 1 ( 100 + =721

721 = I



96
Ejemplo: En un experimento similar al descrito, pentano (C5H12) y hexano (C6H14) fueron usados como
estndares. Los tiempos de retencin fueron Rx=90 segundos C6=210 segundos; C5=79 segundos. Cul
es el valor calculado para el ndice de retencin?

Respuesta: Segn la ecuacin de Kovats:


513 5
8976 , 1 3222 , 2
8976 , 1 9542 , 1
1 100 =
(

+ |
.
|

\
|

= I

Para mantener el ndice I como un nmero entero, el ndice se define como:
I = 100 n

Lo cual significa que para el metano I=100, etano I=200, etc. En el caso del ejemplo significa que para esa
fase estacionaria el compuesto desconocido es elucidado entre pentano y hexano. Si la fase estacionaria
cambia el nmero del ndice tambin cambia (existe un mtodo para calcular I usando un monograma).

Ahora se puede ver que el nmero de Kovats nos puede ayudar cuando se escoge un estndar
internacional IUPAC.

Conforme la fase estacionaria sea la misma, y la mezcla sea inyectada al mismo tiempo, entonces a partir
del nmero de ndice se puede ver en qu orden son elucidados los componentes, aquellos con el menor
nmero de carbones son elucidados primero y los de mayor nmero de ltimo.

3.1.10. Anlisis Cuantitativo.

La cromatografa de gas lquido es una tcnica que para el anlisis cuantitativo presenta las siguiente
ventajas: Se requiere cantidades de muestra muy pequeas por el orden L
7
10

, es de aclarar que
L l
6
10 1

= , presenta limites de deteccin muy bajos, con algunos detectores por el orden de g
14
10

,
los limites de cuantificacin y el rango de linealidad de las grficas de calibracin son sumamente
confiables y los reproducibles de los datos si se conservan las condiciones del anlisis.

La cantidad o concentracin de los compuestos se puede calcular mediante diferentes tcnicas:

3.1.10.1. Relacionando las reas de los picos: para medir las reas se pueden emplear varios mtodos:

a. Triangulacin

Se construye el tringulo correspondiente a cada pico trazando tangentes a los puntos de inflexin del pico
y tomando la base como la interseccin de esas tangentes con la lnea base del cromatograma (observar
la figura 3.8). La altura es medida desde la base al punto en el que se cruzan las tangentes. Se calcula la
superficie de cada pico con la frmula:
b.h

97
A = ------- y se relaciona para obtener el % aproximado, de cada compuesto en la muestra con una
2 exactitud del 97%.


a. Triangulacin


b. Altura por ancho de base a media altura


c. Planimetra


98
Figura 3.8 Mtodos para medir las reas de cada pico.

bx . hx by . hy bz . hz
Ax = ----------, Ay = -----------, Az = ----------
2 2 2


Ax + Ay + Az + ....... An = At = 100%

Ax Ay
% x = ------- x 100, % y = -------- x 100
At At
At = rea total = E reas.

La exactitud aplicando este mtodo depende de la claridad de resolucin del pico, de la precisin del
trazado de las tangentes.

b. Tomando el rea como la altura x ancho de base a media altura (Figura 3.8 b) esta rea as obtenida no
es igual al rea del tringulo pero si aproximado. Se puede aplicar este mtodo para relacionar todos los
picos del cromatograma, cuando se presentan colas y bases poco netas en los mismos y as evitar errores.

El error es mayor para picos muy angostos. La exactitud ser razonable para picos netos y bien simtricos.

Las relaciones matemticas para determinar los porcentajes de cada componente se hacen de igual
manera que en a.

c. Planimetra (Figura 3.8 c). Consiste en medir el rea de cada uno de los picos del cromatograma
siguiendo los permetros de los picos mediante un planmetro provisto de un dispositivo mecnico.

Es necesario repetir varias veces el trazado y sacar promedio de las reas. Las relaciones matemticas
para determinar la composicin porcentual de la mezcla se hace de igual manera que en a.

d. Integradores

Existen integradores de diversos sistemas (electrnicos, a bolillo y disco, a voltaje) agregados al registrador
del cromatgrafo, de manera que simultneamente con el registro se obtiene la integracin de cada pico
(Figura 3.9a). Uno de los sistemas usados es el de bolillo y disco. El integrador digital electrnico
representa uno de los mayores avances tecnolgicos incorporados al cromatgrafo para realizar la
cuantificacin de los compuestos.

Con este dispositivo electrnico el mtodo consiste en transformar la seal interna del detector en un voltaje
que genera unas pulsaciones proporcionales al rea de cada pico que es registrado.

La exactitud depende de la sensibilidad del integrador y de la capacidad de registro y conteo. El software
del computador reporta automticamente mediante previa programacin, el nombre de los compuestos, el

99
tiempo de retencin y el porcentaje de cada uno de ellos en la muestra si as se desea.

3. 1.10.2 Relacionando alturas (Figura 3.9 b.)

Se utiliza este mtodo cuando los picos son angostos, simtricos, bien definidos y poseen ancho de base
muy iguales.

Se mide la altura de cada pico desde la base hasta la cspide. La sumatoria de las alturas se hace igual al
100% de la mezcla y luego se hacen las relaciones matemticas para determinar el % de cada compuesto,
de tal forma que para una mezcla de 3 compuestos a, b y c cuyas alturas son: para a=90mm, b=110mm,
c=50mm la sumatoria de las alturas ser igual a 250mm y el porcentaje de un compuesto como a est dado
por:

ha ha
% a = ----------------- X 100 = ------- X 100
ha + hb + hc Eh


90
% a = -------- X 100 = 36
250

Igual relacin se aplica para los dems compuestos teniendo en cuenta sus alturas.


3.1.10.3 Relacionando pesos (Figura 3.9 c.)

Consiste en recortar y pesar cada pico en la balanza analtica. La sumatoria de los pesos se hace igual al
100% de la mezcla. Para determinar el porcentaje de cada compuesto se hacen relaciones matemticas
similares a las anteriores pero en lugar de alturas se consideran los pesos.

La exactitud del mtodo depende de la homogeneidad del papel de registro y del seguimiento del trazo para
obtener un recorte preciso de cada pico. Tiene la desventaja que se destruye el cromatograma. Esto
puede evitarse tomando previamente una fotocopia.












100





a. Integradores



b. Alturas



c. Corte del pico

Figura 3.9 a. Integradores, b. Alturas, C. Pesos

101


3.1.10.4. Factor de Respuesta

Es un mtodo que permite cuantificar rpidamente un compuesto de inters en una mezcla, evitando que
sea necesario medir reas, alturas o pesos para todos los compuestos.

El factor de respuesta se determina inyectando en el cromatgrafo una cantidad conocida del compuesto
de inters, en igualdad de condiciones en las cuales se inyect la mezcla. Se analiza la forma del pico
tanto en la inyeccin sola del compuesto como en la mezcla y se define si se calcula con factor de
respuesta considerando la altura, el rea o el peso.

El factor de respuesta vendr dado por la relacin ms conveniente entre uno de estos parmetros y el
volumen o peso del compuesto inyectado y ser igual a la altura o rea o peso del pico del compuesto
sobre el peso o volumen de la cantidad de compuesto inyectado. Las unidades del factor de respuesta
sern entonces: altura en milmetros o centmetros por unidad del compuesto en peso o volumen (g, mg, o
mL, L ). rea en mm
2
o cm
2
por unidad del compuesto en peso o volumen. Peso en g o mg por unidad
del compuesto en peso o volumen.

El siguiente ejemplo ilustra cmo en la prctica se opera con este mtodo.

Se inyect al cromatgrafo 5 X 10
-3
miligramos de una mezcla de acetona, metiletilcetona e isobutilcetona,
el pico de la acetona di un rea de 5 cm. En igualdad de condiciones se inyect 1 X 10
-3
miligramos de
acetona y el pico dio un rea de 2 cm. Cul; es el % de acetona en la mezcla. Desarrollo:

1. Se calcula el Factor de respuesta (Fr)


1 mg
Fr = 2 cm X ------------------ = 2000 cm/mg
1x10-
3
mg



5 cm 5 cm
2. mg de acetona =-------------- = ------------------- = 2.5 X 10
-3
mg
Fr 2000cm
2
/mg


2.5 X 10
-3
mg
3. % de acetona = ------------------------- --------X 100 = 50%
5 X 10
-3
mg de muestra


3.1.10.5. Curva de Calibracin.


102
Para obtener la mayor precisin en la determinacin de un compuesto de inters en una mezcla, una curva
de calibracin de alturas, reas o pesos de los patrones con relacin a un estndar, contra algn parmetro
de concentracin (mg/l, % en volumen, % en peso, fraccin molar, etc) representa el mejor mtodo.

Procedimiento:

1. Se prepara una serie de patrones (mnimo 4) de diferente concentracin y a cada uno se le adiciona una
cantidad igual del estndar. El estndar interno debe cumplir los mismos requisitos que un estndar
utilizado para anlisis cualitativo (Ver Pgina 88, numeral 3.1.9.3)

2. Se toma un alcuota de la muestra, se le adiciona igual cantidad de estndar que a los patrones y se
afora al mismo volumen de estos.

3. En idnticas condiciones instrumentales se inyecta al cromatgrafo una cantidad igual de cada patrn y
de la muestra.

4. Se mide la altura, el rea o se determina el peso del pico de cada patrn y del estndar y se calculan las
alturas, reas o pesos relativos, igual procedimiento se hace con el pico del compuesto de inters en la
muestra y el estndar.

5. Se construye una tabla de datos la cual nos da una idea aproximada del rango de concentracin en el
cual se encuentra el compuesto en la muestra.

6. Si se requiere mayor precisin se construye una curva de calibracin en cuyo eje de abscisas (eje x) se
coloca la concentracin relativa y en el eje de ordenadas (eje y) las alturas, reas o pesos relativos. Se
ubica cada punto, se traza la grfica y se extrapola a cero. Si quedan puntos por fuera de la lnea, se
puede realizar un ajuste por mnimos cuadrados. Se interpola el valor relativo obtenido para el
compuesto en la muestra problema y se determina su concentracin. La concentracin real del compuesto
en la muestra ser igual a la concentracin leda en la grfica multiplicada por el Factor de dilucin (Fd).

La escogencia de la altura, rea o peso como parmetro relativo depende de la forma del pico y su
tratamiento debe ser igual para todos los patrones y la muestra.

El rango de concentracin para preparar los patrones depende la linealidad de respuesta que presente el
detector para el compuesto de inters, sea el caso de la acetona, utilizando como estndar metiletilcetona y
que se describe en la Tabla 3.2.

La columna 3 (volumen de A en mL) representa el volumen que es necesario tomar de un patrn de 100
mg/l de acetona para preparar 100 mL de cada patrn.

La columna 4 (volumen de B en mL) representa el volumen que es necesario adicionar a cada patrn de
un estndar de 500 mg/l de metil etil cetona, para que la concentracin del estndar en cada patrn sea
de 50 mg/l.

La columna 5 (aforo final) presenta el volumen final al cual se afora cada patrn y el alcuota tomado de la

103
muestra problema.
La columna 6 indica que se inyecta 1 microlitros de cada uno de los patrones y muestra problema al
cromatgrafo.

Observando la tabla de datos podemos concluir que la concentracin de la acetona en la muestra problema
se encuentra en un rango entre 40 y 80 mg/l que resulta de multiplicar el rango entre 20 y 40 mg/l que
nos da las reas relativas del pico de la acetona y el estndar en la muestra multiplicadas por 2 que es el
factor de dilucin de la muestra.

Si requiere mayor precisin se construye la curva de calibracin as: (observar figura 3.10)

--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
No. Concent. Vol.de Vol.de Aforo Cantidad rea de patrn rea Estndar reas Concent.
Patrn mg/l A en ml B en ml Final inyectada en cm
2
en cm
2
Relativas Relativas
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
1 20 20 10 100mL 1 L 10 25 10/25 =0.4 20/50=0.4
2 40 40 10 100mL 1 L 20 25 20/25 =0.8 40/50=0.8
3 60 60 10 100mL 1 L 30 25 30/25 = 1.2 60/50=1.2
4 80 80 10 100mL 1 L 40 25 40/25 = 1.6 80/50=1.6
mp 50 ml muestra 10 100mL 1 L 15 25 15/25 = 0.6 x/50=?
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Tabla 3.2. Datos para construir una curva de calibracin para determinar la acetona contenida en una solucin
utilizando como estndar metil etil cetona

Segn la curva de calibracin la concentracin de acetona en la solucin es de 30 mg/L la cual se debe
multiplicar por un factor de dilucin de 2 para obtener la concentracin real:

30 mg/l X 2 = 60 mg/L concentracin real ya que se tomaron 50 mL de la solucin muestra, se le adi-
cionaron 10 mL del estndar y se afor a 100. Luego:

Vf 100
Ci = Cf------ = 30 mg X ------ = 60 mg/ L
Vi 50

En anlisis de rutina cuando se obtienen grficas lineales y el valor de concentracin de la muestra
problema cae en el rango de patrones, no es necesario construir curva de calibracin, ya que se puede
aplicar directamente la siguiente relacin:


s
m
s
m
s
p
s
p
C
C
A
A
C
C
A
A
=

donde
p
A representa el rea del pico del patrn,
s
A el rea del pico del estndar,
p
C concentracin del
patrn,
s
C concentracin del estndar,
m
A rea del pico en la muestra,
s
A rea del pico del estndar en

104
la muestra y Cm concentracin de la muestra la cual podemos despejar al conocer los dems datos.



Figura 3.10 Curva de calibracin para la determinacin de acetona por cromatografa de gases.


Tambin se puede hacer uso de la siguiente relacin:
s
s
s
s
m
m
p
P
C
A
C
A
=

Siendo
s
p
A = al rea de patrn con relacin al estndar,
s
p
C = concentracin del patrn con relacin al
estndar,
s
m
A = rea de la muestra con relacin al estndar,
s
m
C = concentracin del patrn con relacin al
estndar.

Para la estandarizacin de un anlisis, se deben aplicar Diferentes mtodos, hacer un tratamiento
estadstico de los datos y determinar cual es el mtodo cuantitativo por cromatografa ms rpido, exacto y
preciso.








105


Unidad 4


4. Instrumentacin para cromatografa gas lquido.

Objetivo General: Presentar al estudiante la informacin sobre las caractersticas tcnicas y aspectos
comerciales de los equipos, accesorios y mantenimiento relacionados con la cromatografa gas lquido y
por medio de una demostracin en los equipos existentes en el laboratorio observe su funcionamiento y la
realizacin de un anlisis completo mediante el uso de la tcnica.

Objetivos Especficos: Terminada la unidad el estudiante ser capaz de:

1. Reconocer las diferentes casas productoras, marcas, caractersticas tcnicas de cromatgrafos gas
lquido.

2. Reconocer la configuracin de los cromatgrafos de gases tanto en la parte neumtica como en
inyectores, columnas y detectores para diferentes fines analticos.

3. Reconocer el software para el manejo y presentacin de la informacin analtica en cromatografa gas
lquida.

4. Reconocer las caractersticas tcnicas y las fuentes de informacin sobre columnas para cromatografa
gas lquido.

5. Reconocer mediante una demostracin en el cromatgrafo de gases como se llevan a la prctica
las instrucciones, normas de seguridad y precauciones en el manejo del equipo en la realizacin de un
anlisis.

6. Aplicar y proyectar los conocimientos adquiridos sobre cromatografa de gases en la realizacin de
un taller terico, una consulta bibliogrfica y un trabajo prctico mediante la ejecucin de una
determinacin analtica orientada por un monitor.













106


4. Generalidades

La instrumentacin para cromatografa gas lquido es ofrecida a nivel mundial por ms de 25 casas
fabricantes con unos 125 modelos de equipos diseados para tal fin.

Los modelos ms recientes presentan configuraciones muy verstiles para la incorporacin de inyectores,
detectores, columnas, automuestradores y sistemas de micro controladores para el manejo automtico de
las diferentes variables que intervienen en el anlisis y autodiagnstico del funcionamiento del equipo.

Tambin es importante destacar la incorporacin del PC con el software desarrollado para el manejo y
presentacin de la informacin analtica.

Los costos de incorporacin de estas nuevas tecnologas en la instrumentacin para cromatografa de
gases dependen de la configuracin del equipo y pueden oscilar entre 2.000 45.000 dollares.

Entre los fabricantes ms acreditados en nuestro medio se encuentran: Hewlett Packard, Perkin Elmer,
Phillips, Varian techtron, Chimadzu, Konik Instrument.

La configuracin de un cromatgrafo gas lquido esta constituida por zonas y mdulos fcilmente
intercambiables:

1. Zona neumtica de inyectores
2. Modulo de inyectores
3. Zona de horno para columnas
4. Modulo de detectores
5. Zona neumtica de detectores
6. Modulo de amplificadores
7. Modulo del microprocesador
8. Canales
9. PC con el software y hardware necesario

4.1. Caractersticas tcnicas del cromatgrafo de gases

HRGC-3000C DE KONIK INSTRUMENT

Casa fabricante: Konik Instrument S.A
Nacionalidad: Espaola
Configuracin por bloques:
_ Zona neumtica de inyectores
_ Modulo de inyectores
_ Zona de Horno para columnas
_ Modulo de detectores
_ Zona neumtica de detectores

107
_ modulo de amplificadores
_ Modulo de microprocesador
- Canales
-Computador

4.2 Caractersticas Generales:

- Conexin a la red :
220 V con fusible de proteccin de 10 A
110 V con fusible de proteccin de 20 A
Indispensable la conexin a tierra
Estabilizador de voltaje de ncleo saturado

- Manmetros y vlvulas para controlar las presiones de los diferentes gases
- Medidor de flujo de burbuja
- Inyeccin manual o automtica
Se puede configurar con los siguientes inyectores:
Inyector convencional para columnas empaquetadas de 1/8" y semicapilares.
Inyector " on column" para columnas de 1/4".
Inyector multimodo "split/splitless".
Vlvulas de inyeccin.
Inyector "on column" para columnas capilares.
Cmara de desorbcin.

- Se puede configurar con 4 detectores:

4.2.1 Detector de Ionizacin de llama

Especificaciones:
Sensibilidad............0.018 Coulombs/gramo para hidrocarburos
Rango dinmico lineal.......................10
7

Temperatura de funcionamiento mxima..... 400
o
C
Voltaje de polarizacin ................ 200V DC
Voltaje de ignitor......................1.5V Ac o Dc y 4A
Calefactor..............................125W 220V

4.2..2 Detector de Conductividad Trmica

Especificaciones:
Tipo.......hilo caliente con 4 filamentos de

Renio/tungsteno en puente de Weahtstone y flujo continuo.
Tiempo de respuesta ................0.5 seg.
Ruido mximo ......................... 10 V.
Deriva mxima......................... 40 V/hora

108
Corriente mxima...................... 360 mA
Tensin mxima ....................... 45 V
Sensibilidad ......................... mejor que 5 ppm.
Electrmetro.......................... Fuente de corriente constante con amplificador.
Posibilidad de conmutar la polaridad automticamente.

4.2.3 Detector Captura electrnica

Especificaciones:
Detector: Fuente de
63
Ni milicuries
Temperatura mxima: 400
o
C
Gas portador argon con 5% de metano.
Nitrgeno puro (alternativo)

Linearizador: Anchura de pulso: 0.75 seg. para Ar/CH4
4.0 seg para N2 como gas portador.
.
Salida: Integrador: 1 voltio f.s. sin atenuador
Registrador: 1 mv fondo de escala y atenuador de 11 posiciones.

Otras caractersticas:

Selector de anchura de pulso en funcin del gas portador (N2 o Ar/CH4)
Selector de modo de operacin.
Autocero con ajuste manual. Que acta nicamente en el modo linearizado.


4.2.4 Detector NPD
Especificaciones:
Lmite deteccin 0.2-0.4 pg/de N/seg
0.2-0.4 pg/de P/seg

Selectividad P:Hidroc; 2-20 x 10
5

N:Hidroc; 5-40 x 10
4


Linealidad 10
4
a 10
5
para N y P

Voltaje de vaporizacin Hight:-150V
Low:- 20V


- Columnas: se pueden acoplar capilares, semicapilares, o analticas rellenas.
- Amplificacin: modulo compatible para varios detectores
- Microprocesador con las siguientes caractersticas:


109
Control y regulacin de temperatura de 6 zonas del equipo:

Inyeccin, deteccin (control individual para los dos detectores), horno de columnas, y dos controles
auxiliares para elementos auxiliares, (vlvulas, autoinyectores, interfases, etc). Cinco Rampas: Para la
programacin de temperaturas del horno a velocidades desde 0.5 hasta 40
o
C/min.

Cronmetro para control de tiempos de anlisis, tiempos de retencin, inicio y final de ciclos y clculo de
flujo.

Reloj calendario con batera de nquel - cadmio Seis funciones de tiempos para actuaciones automticas,
tres fijas para "splitless", vlvula inyectora y ciclo automtico. Tres para aplicaciones generales con seis
modos operativos de cada una, automatizan operacin con inyector automtico, espacio de cabeza,
cmara de absorcin, sistema de conmutacin de columnas, retrocesin de flujo, conmutacin de seales,
conexin automtica con otros equipos y sistemas auxiliares. Sistema de enfriamiento en el horno de
columnas rpido, (automtico de 250
o
C a 50
o
C en menos de 6 minutos) o manual programable por el
usuario.

Funciones de tiempo: cubren el rango de 0 a 99,9 min. programables en dcimas y entre 100 y 999
programables de minuto en minuto.

Visualizacin en pantalla de parmetros, de estados y de evolucin del programa.
Sistema de proteccin de temperatura lmite del horno (columnas) programable y con desconexin
automtica.

Seleccin hasta de 8 idiomas para programacin y dialogo.

Sistema de auto diagnstico y aviso de avera: con parada automtica del equipo.

Almacenamiento de 5 mtodos para programas de aplicaciones generales y especficos en memoria
soportada por batera (expandible opcionalmente).

Interfase bidereccional RS-232 para comunicacin con integradores, compatibles PC-KONIK y otros
ordenadores compatibles (opcional).

Flexibilidad en la programacin que incluye la posibilidad de cambiar cualquier parmetro de un programa
durante la ejecucin del mismo, lo cual supone una total interaccin del usuario con el cromatgrafo durante
el curso del anlisis.

Interrupcin del programa a voluntad.


4.3 Instrucciones resumidas para la operacin del cromatografo de gases
HRGC-3000 C de Konik Instrument

1. de acuerdo con el tipo de detector que va utilizar seleccione los gases respectivos tanto portador como

110
para el detector.

2. Cercirese que el manmetro que marca la presin interna del cilindro le marque una presin mnima de
120 P.S.I que le permita sostener la presin de trabajo durante un tiempo razonable.

3. Para el suministro de los gases ubique la presin de los manmetros de salida de los cilindros segn la
siguiente tabla:


Tabla 4.1 Presin recomendable en los manmetros de salida de los cilindros.

Presin
Gas Kg/cm
2
P.S.I.
N2 4 60
He 4 60
Ar+CH4 4 60
Ar+aire 4 60
H2 2 30
Aire 5 70

4. Mediante la vlvula VM identificada como carrier ajuste la presin del gas de arrastre en el respectivo
manmetro.

La vlvula VM posee un dial que registra numricamente la apertura, en posicin cerrada registrar 999 y
abre a medida que la numeracin disminuye.

Espere unos 2 minutos para garantizar que el gas ha recorrido la columna.

5. Conecte el estabilizador a la red 110V, conecte el cable de conexin del cromatgrafo en el estabilizador,
ubique el interruptor del estabilizador en ON, el piloto indicador debe lucir rojo.

6. Para puesta en marcha del equipo presione durante unos segundos el botn start (arranque), que se
encuentra en la parte trasera baja lado derecho. Se debe escuchar el arranque de los ventiladores y
visualizarse encendida la pantalla del microprocesador. Para la parada del equipo presione el botn stop.

7. Seleccione y encienda el detector que requiere de acuerdo con la instruccin siguiente:

7.1 Para el detector de ionizacin de llama (FID) siga los siguientes pasos:

7.1.1 Oprima la tecla DET TEMP, en la pantalla observar la pregunta: Qu detector? oprima la tecla
on/yes 1, en la pantalla observar la pregunta: temperatura deseada? introduzca mediante el teclado la
temperatura deseada ( mximo 400
o
C ) oprima la tecla enter. En la pantalla al lado derecho observar la
temperatura actual y al lado izquierdo la programada.

7.1.2 Hale el manorreductor del aire. Grelo hacia la derecha hasta que la aguja del manmetro coincida

111
con la marca (raya negra). Aproximadamente 32 P.S.I.

De igual forma ajuste la presin del hidrgeno.
Precaucin: Abra primero el aire y luego el hidrgeno. para apagar el detector haga lo contrario cierre
primero el hidrgeno y luego el aire.

Nota: Si va hacer uso de columnas capilares debe ajustar la presin del make-up A de igual manera que lo
hizo con el aire y el hidrgeno.

7.1.3 Ubique el interruptor del amplificador del detector de ionizacin de llama en la posicin ON, el
amplificador se encuentra ubicado en la parte frontal lado derecho y corresponde al segundo de arriba
hacia abajo.

7.1.4 Oprima el botn del ignitor (se encuentra ubicado al lado derecho del manorreductor del aire), se debe
producir una suave explosin. Si no fuera as se puede aumentar ligeramente la presin del hidrgeno, y se
presiona nuevamente el ignitor.

Una vez encendido el detector se debe bajar la presin hasta la marca.

Precaucin: Confirme que el detector quede encendido observando que el vapor de agua que sale por la
chimenea se condensa sobre una superficie reflexiva para tal efecto puede ser til un vidrio de reloj, un
espejo o una superficie metlica brillante. S esto no sucede el detector se encuentra apagado.

Durante la sesin de trabajo monitoree de igual manera que el detector permanezca encendido.

7.1.5 Identifique y use los controles del amplificador de acuerdo con la siguiente informacin:

Nombre Funcin

Rango Permite seleccionar la ganancia del amplificador. Hay 4 posiciones
de menos sensible (10
-9
) a ms sensible (10
-12
). Cada paso supone
multiplicar por 10
.

Supresor Permite ajustar el offset del amplificador. Lnea base en la pantalla.


Cero y atenuacin solo se utilizan cuando hay incorporado un registrador.

On-Off Permite prender y apagar el amplificador.


A-B, A+B, -A+B Permite seleccionar la polaridad positiva o negativa de los detectores.



112
7.2 Para el detector de conductividad trmica proceda as:

7.2.1 Siga la instruccin 7.1 identificando el detector de conductividad trmica como 2..

7.2.2 Asegrese de que por las chimeneas del detector este saliendo gas de arrastre y compruebe que los
flujos son los deseados e iguales en ambos canales.

Precaucin: Si no hay flujo de gas de arrastre a travs de las chimeneas, no debe encender el detector
porque se queman los filamentos.

7.2.3 Site el mando de corriente del filamento en la posicin 1 (intensidad mnima), ubique el interruptor del
amplificador en la posicin ON.

7.2.4 Establezca la intensidad de corriente de los filamentos en forma adecuada en funcin de la
sensibilidad que desee teniendo en cuenta la tabla 4.2.


Tabla 4.2 Posicin del control y corriente para T.C.D

Posicin: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Corriente en mA: 0 35 65 100 135 165 200 235 265 300 335 365

8. Prenda el computador primero el monitor, luego el pc por ltimo la impresora.

Una vez este en c:\> escriba cd windows dle enter win enter, debe aparecer el administrador de
programas. Haga doble clic en el icono de chromatography, aparece la ventana chromatography y el icono
konikrom, haga doble clic en el icono Konikrom, debe aparecer en la pantalla el sistema de datos de la
versin 6.5 de konikrom chromatography, haga clic en OK para abrir la ventana.

Haga clic en el icono identificado como 1 CHRGC 3000 C, en user name escriba demo y dele enter.
Si trabaja bajo windous 95 simplemente haga doble clic en el icono Konikrom para entrar al programa.














113

Figura 4.1

114


Figura 4.

115
4.4 Formato gua para el seguimiento de las demostraciones sobre la Tcnica Analtica
Cromatografa de gases.

Objetivos:

Que el estudiante reconozca las partes que conforman un cromatgrafo gas lquido y la funcin de
cada una.

Observe como se llevan a la prctica las instrucciones, normas de seguridad y precauciones en el
manejo del equipo.

Confirme la influencia en el tiempo de retencin de los compuestos de la mezcla y la resolucin de los
picos en el cromatograma con los cambios en las variables: Temperatura, velocidad de flujo, presin,
cantidad de muestra inyectada, tipo de columna.

Conozca como se establecen las condiciones ptimas de funcionamiento del equipo en la
estandarizacin de un buen cromatograma para un anlisis especfico.

Analice como se interpreta la informacin que reporta un cromatograma y observe como
se cualifica y se cuantifica mediante dicho registro.

Observe una aplicacin de la cromatografa gas lquido en el control de la composicin y calidad de una
mezcla de solventes industriales para uso como disolvente. Y el control del contenido de metanol en un
licor.

Desarrollo: Llene los espacios del formato de acuerdo con sus observaciones e instrucciones dadas
por el monitor o el profesor.


Equipo: ____________________________

Marca: ____________________________

Modelo: ____________________________



4.4.1 Configuracin del equipo

Zona neumtica: Cilindros para gases H2 _____, N2_____, He _____, Ar ______. Ar + CH4 _________

Manmetros ________, reguladores de presin _______,

vlvulas _______, medidores de Flujo: Fluximetro de burbujas ______, Rotmetro _____.

116


Zona de inyectores: loop _____, Microjeringa ______, Inyeccin automtica _____.

Rango de temperatura de los inyectores de: ______ Hasta _______C

Zona de columnas: Horno (recinto termostatado) _______

Rango de temperatura del horno de _____ Hasta _____ C

Programacin de temperatura: Nmero de rampas _________

Temperatura mxima de operacin ________C

Proteccin trmica para columnas programable _______

Velocidad de enfriamiento ____________ C/minuto

Zona de detectores:

Nmero de detectores ______

Tipo de detectores que se encuentran en el equipo:

Detector de conductividad trmica ______

Detector de ionizacin de llama ______

Detector de captura electrnica ______

Detector para nitrgeno y fsforo ______

Zona de amplificadores:

Amplificador para DCT ______

Amplificador para DILL ______

Microcontrolador ______

Computador ______

Muestreador automtico ______


117
4.4.2 Seleccin de condiciones iniciales para el anlisis

Temperatura del bloque de inyeccin ________ C

Detector ______________________

Temperatura del detector _______ C

Gas portador __________

Presin del gas portador _________ psi

Velocidad de flujo del gas portador en la columna ________ mL / minuto

Velocidad lineal del gas portador _______ cm / minuto

Posicin de la vlvula de control _______

Presin del make up _____ psi

Velocidad de flujo del gas portador en el detector (make up) ______ mL / minuto

Caractersticas de la columna:

Tipo de columna ___________ longitud _____ m, dimetro ______ mm, espesor de la pelcula de la
fase estacionaria ________m

Referencia ________ Fase lquida estacionaria _______________________________
________________________________

Mxima temperatura de operacin ________ C

Mezcla a inyectar: _____________________________________

Nmero de compuestos de la mezcla a inyectar _____________

Lista de los compuestos:
1_______________, 2_______________, 3_______________, 4________________.
5_______________, 6_______________, 7_______________, 8 _______________
9 _______________, 10______________,11______________, 12________________
13_______________, 14______________,15_____________ , 16________________


Cantidad de muestra a inyectar ______________L

118


Programacin de la temperatura de la columna





Tiempo de programacin total _______ minutos

Mximo valor de mV _______

Caractersticas del cromatograma:

Resolucin: ptima ________, Buena ________, Regular ________, Mala ________.

Informacin sobre el comportamiento termodinmico de los compuestos en el interior de la
columna.

Se observa:

Contaminacin en la columna? ________

Difusin de los compuestos? ________

Colas en los picos? ________, Condensacin de los compuestos? ________

Descomposicin trmica de los compuestos? ________

Nmero de picos? ________, Linealidad de la lnea base? ________

119
Simetra en los picos? ________, Asimetra? ________

Tiempos de retencin razonables? ________

Es ptimo el cromatograma para cuantificar y cualificar? ________

Requiere optimizacin? ________

Para su optimizacin cambiaria en primer lugar:

La programacin de la temperatura de la columna? ________

La velocidad de flujo del gas portador? ________

La presin del gas portador? ________

La columna? ________

El detector? ________




120

Cromatograma patrn hidrocarburos alifticos C5 a C10

Figura 4.3

121






Cromatgrafos de gases ubicados en la sala de cromatografa en el laboratorios Q127

Figura 4.5


122
4.5 Taller y consulta sobre cromtogrfia de gases


1. Consultar el tratamiento de derivatizacin que requieren los siguientes compuestos para su estudio
cromatogrfico: Aminocidos, carbohidratos, esteroides, vitaminas, cidos biliares, cidos grasos.

2. Consultar cul es el tipo de columna requerida para realizar la separacin de los siguientes
compuestos :Fenoles, gases (H2, O2, N2, CH4), pesticidas clorados, pesticidas fosforados, drogas
(anfetaminas, alcaloides, barbitricos), triglicridos, hidrocarburos alifticos, hidrocarburos
aromticos, aromas, sabores en que condiciones se deben operar y para cada grupo de
compuestos cul es el detector adecuado.

3. Para la identificacin de virus y bacterias Se ha empleado la cromatografa de gases. Cmo
considera Usted que ha sido posible utilizar esta tcnica?

4. Al examinar cromatograficamente dos muestras estndar y una muestra desconocida, se obtuvieron
los siguientes cromatogramas:




Velocidad de la carta 2.5 mm / minuto


a. Calcular el nmero de platos tericos con respecto al componente C, calcular
tiempo de retencin para cada componente del estndar, calcular la resolucin de los picos C y D en
la muestra, calcular la altura equivalente de un plato terico si la longitud de la columna es de 7.5 m.

123
b. Estimar la composicin cualitativa de la muestra desconocida.

c. Consultar qu es el ndice de Kovats y que utilidad analtica tiene.

5. Para evaluar la eficiencia en el proceso de la obtencin de un ester se trabajo con los siguientes
datos:

H
+

Reaccin implicada: CH3COOH + C2H5OH ===== CH3COOC2H5 + H2O


Se hicieron reaccionar 75 mL de cido actico puro con 80 mL de etanol puro para producir acetato
de etilo, a los 45 minutos de iniciada la Reaccin se tom una muestra de 2.5 mL se le adicion 0.5
mL de metanol como estndar y 7.0 mL de agua. En las condiciones de operacin NN. Se inyect
al cromatgrafo 1 microlitro obtenindose el siguiente cromatgrama con un detector de
iotizacin de llama:



Para valorar los datos reportados por el cromatgrama se prepararon los siguientes patrones
usando como estndar interno metanol y solvente agua.


Patrn Metanol Etanol cido actico Etilo acetato Solvente Cantidad Inyectada
No. mL mL mL mL mL L
1 0.5 0.25 0.25 0.25 8.75 1.00
2 0.5 0.50 0.50 0.50 8.0 1.00
3 0.5 0.75 0.75 0.75 7.25 1.00
4 0.5 1.00 1.00 1.00 6.50 1.00
5 0.5 1.25 1.25 1.25 5.75 1.00


En igualdad de condiciones en las cuales se inyect la muestra y con el mismo detector, Se inyecta
al cromatgrafo un microlitro de cada patrn, el clculo de las reas correspondientes a los picos

124
de los compuestos de cada patrn se consignaron en la siguiente tabla:

Patrn Metanol Etanol cido actico Etilo acetato
No. rea en cm
2
rea en cm
2
rea en cm
2
rea en cm
2

1 0.95 0.4 0.51 0.36
2 0.98 0.74 1.08 0.69
3 1.00 1.25 1.47 1.12
4 1.02 1.61 2.10 1.39
5 0.96 2.08 2.48 1.78

Construya las siguientes curvas de calibracin relativas:


rea etanol Vs %V/V etanol
rea metanol %V/V metanol


rea cido actico Vs % V/V cido actico
rea metanol %V/V metanol


rea etilo acetato Vs %V/V etilo acetato
rea metanol %V/V metanol

5.1 Evaluacin previa del proceso:

a. si la Reaccin se diera con el 100% de eficiencia cuntas mL acetato de etilo se obtendran?

b. Cuntos mL de etanol reaccionaran?

c. Cuntos mL cido actico reaccionaran?

d. Cul es el reactivo limitante de la reaccin?


5.2 Con la evaluacin de los resultados obtenidos para la muestra en el Cromatograma y con las
grficas construidas resuelva los siguientes interrogantes tomando como base los 2.5 mL de
muestra teniendo en cuenta la dilucin:

125
a. Cules son los porcentajes de: Etilo acetato, etanol, cido actico.

b. Con los datos anteriores haga una evaluacin de la eficiencia del proceso hasta el momento de
toma de la muestra.

c. Por qu el rea del estndar vara en cada patrn?

d. Qu ventajas presenta en el anlisis el uso del estndar interno y la construccin de curvas de
calibracin con base en parmetros relativos?

e. Qu ventaja presenta para el anlisis la utilizacin de un detector de ionizacin de llama?

6. Analogas

6.1 Consulte: qu es y qu propiedades presentan los fluidos supercrticos y sus aplicaciones en la
en la tcnica cromatogrfica.

6.2 Haga una comparacin entre las tcnicas cromatogrficas gas liquido, liquida de alta eficiencia
y fluidos supercrticos. Considere: fundamentos, instrumentacin, aplicaciones y limitaciones.

6.3 En que consiste la extraccin en fase slida y que ventajas presenta en el pretratamiento de las
muestras para su separacin cromatogrfica.

7. Relacin entre tr', Vr', Rf' y Kg

Con base en las ecuaciones desarrolladas en las pginas 35, 36, 37 y 38 resuelva el ejercicio de la
pgina 38.

8. Desarrollar el trabajo particularmente asignado, preferiblemente si las condiciones lo permiten hacerlo
prctico.

Posibles determinaciones a realizar: Alcoholes en licores, aromas en perfumes, sabores en alimentos,
colesterol en orina, alcohol en sangre. Anlisis de analgsicos y antipirticos, vitaminas, antibiticos,
anfetaminas, triglicridos, protenas, carbohidratos.












126

Bibliografa

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David Harvey, Qumica Analtica Moderna (1.Ed). Espaa. ED Mcgraw-Hill 2002.

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Monografas: 10, 16, 23 sobre cromatografas: Liquida de alta presin, en papel y en capa delgada, de
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M.V. Dabrio. Cromatografa de gases tomos I Y II (1a. ed). Madrid: ED, Alambra S.A. 1971.

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SKOOG, Douglas A. ,LEARY, James J. Anlisis Instrumental (4a. ed ) Espaa: ED, McGraw-Hill 1.994.

SKOOG, Douglas A; Holler F James; Nieman Timothy A. Principios de Anlisis Instrumental (5. Ed).
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SKOOG, Douglas A. WEST Donald M. HOLLER F. James. Crouch Stanley R. Qumica Analtica (8a.
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SKOOG, Douglas A; Holler F James; Crouch, Stanley R. Principios de Anlisis Instrumental (6. Ed).
Mxico: ED Cengage Learning 2008.

STROBEL, Haward A. Instrumentacin Qumica (1a. ed.). Mxico: Limusa, S.A., 1988

WILLARD, Hobart H., Merritt, Lynnel., y Dean John A. Mtodos Instrumentales de Anlisis (7a. ed
).Mxico: ED, Grupo Editorial Iberoamrica, 1.99 1.





128
Tabla de contenido
No. Pg
Introduccin 1
Primera unidad 2

1. generalidades de la cromatografa 2
1.1 Resea Histrica 3
1.2 Fundamentos de las tcnicas de separacin por cromatografa 7
1.3 Principios de la cromatografa 7
1.4 Cromatografa slido lquido 8
1.4.1 Cromatografa en papel 9
1.4.2 Cromatografa en capa fina 11
1.4.3 Cromatografa en columna 12
1.4.4 Cromatografa de intercambio inico 15
1.5 Cromatografa Lquido Lquido 20
1.6 Tcnicas especiales 20
1.6.1 Cromatografa Flash 21
1.6.2 Cromatografa de capa delgada en fase inversa 21
1.6.3 Cromatografa lquida al vaco 22
1.6.4 Electro-cromatografa 23
1.6.4.1 Electroforesis capilar (Resumen) 24
1.6.4.2Cromatografa de fluidos supercrticos (resumen) 25

Segunda unidad 27

2. Cromatografa de Gases 28
2.1 Cromatografa gas slido 28
2.2 Cromatografa gas liquido 28
2.2.1 Descripcin del proceso de separacin 28
2.2.2 Ilustracin del anlisis por cromatografa gas lquido 28

129
2.2.3 Glosario de trminos y frmulas 30
2.2.4 Partes bsicas de un cromatgrafo gas lquido 41
2.2.4.1 Muestra (Tcnica de la inyeccin) 41
2.2.4.2 Inyector 42
2.2.4.3 Gas portador 43
2.2.4.4 Columna 45
2.2.4.4.1 Soporte slido 45
2.2.4.4.2 Fase lquida estacionaria 50
2.2.4.4.3 Medida de la eficiencia de la columna 59
2.2.4.4.4 Ecuacin de Van Deempter 61
2.2.4.5 Detectores 64
2.2.4-5.1 Caractersticas generales de un detector 64
2.2.4.5.2 Detector de conductividad trmica 66
2.2.4.5.3 Detector de ionizacin de llama 68
2.2.4.5.4 Detector de captura electrnica 69
2.2.4.5.5 Detector fotomtrico de llama 70
2.2.4.5.6 Detector NPD 71
2.2.4.5.7 Detector de espectrometra de masas 73
2.2.4.5.8 Detector espectrofotomtrico infrarrojo de transformada de fourier (FTIR) 75
2.2.5 Cromatografa de gases versus cromatografa de alta resolucin (HPLC) 75

Tercera Unidad 79
3.1 Muestra 80
3.1.1 Indagar sobre la muestra 80
3.1.2 Tratamiento de la muestra 80
3.1.3 Seleccin de condiciones para el anlisis 80
3.1.4 Condiciones instrumentales 80
3.1.5 Inyeccin de la muestra (ver instrucciones 2.2.2.1 Pg 40) 80
3.1.6 Interpretacin del cromatograma obtenido 80
3.1.7 Optimizacin del cromatograma 89

130
3.1.8 Anotar o grabar condiciones 89
3.1.9 Anlisis cualitativo 89
3.1.10 Anlisis Cuantitativo 90
3.1.10.1 Relacionando reas 92
3.1.10.2 Relacionando Alturas 94
3.1.10.3 Relacionando Pesos 95
3.1.10.4 Factor de respuesta 97
3.1.10.5 Curvas de calibracin 97

Cuarta unidad 101
4. Generalidades 102
Instrumentacin para cromatografa gas lquido 102
4.1. Caractersticas tcnicas del cromatgrafo de gases
HRGC-3000C DE KONIK INSTRUMENT
4.2 Caractersticas Generales: 103
4.2.1 Detector de Ionizacin de llama 103
4.2.2 Detector de Conductividad Trmica 103
4.2.3 Detector Captura electrnica 104
4.2.4 Detector NPD 104
4.3 Instrucciones resumidas para la operacin del cromatgrafo de gases
HRGC-3000 C de Konik Instrument 105
4.4 Formato gua para el seguimiento de las demostraciones sobre
la Tcnica Analtica Cromatografa de gases. 111
4.5 Taller y consulta sobre cromatografa de gases 118

Bibliografa 122