Cultivo de Tejidos de Clulas Animales

Dr. Rolando Garca Gonzlez Universidad de Talca

Contenidos
Marco Conceptual El laboratorio de Cultivo Celular Tipos de cultivo celular Aplicaciones

Cultivo de Tejidos
Se refiere al cultivo asptico de clulas, tejidos, rganos u organismos en condiciones nutricionales y ambientales controladas.

Cultivo de Tejidos
Objetivos: Mantenimiento de clulas, tejidos animales y vegetales) u rganos in vitro. Preservar y mantener sus propiedades fisiolgicas, metablicas y genticas. Aplicaciones: Aprovechar la maquinaria celular para estudios sobre metabolismo, regulacin gnica y fisiologa. Transplante de rganos y tejidos. Clonacin. Produccin de protenas Recombinates.

 Totipotencia

Capacidad genticamente retenida que tienen todas las clulas de dividirse, diferenciarse y dar lugar a un individuo idntico al que le dio origen.

Plasticidad celular

Capacidad de las clulas para modificar su metabolismo, su fisiologa y en ltima instancia su estructura para adaptarse a las condiciones del medio.

El Lab de Cultivo Celular

El Reto: Mantener altas condiciones de asepsia y control de los parmetros ambientales.

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Incubadoras

Ambiente interior

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Las condiciones de Cultivo

1. El sustrato Materiales Recipientes 2. La fase gaseosa Oxgeno Dixido de carbono 3. Condiciones fsico-qumicas, nutricionales y fisiolgicas pH, osmolaridad, temperatura, viscosidad Composicin del medio : Bss, AA, vitaminas, glcidos, hormonas, factores de crecimiento, antibiticos, antifngicos,suero.

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El sustrato
Brinda a las clulas, tejidos u rganos en Cultivo el soporte fsico necesario para realizar sus reacciones metablicas, desarrollar su metabolismo y desarrollar sus procesos morfognicos.
Vidrio Plstico (poliestireno) Microsoportes Sustratos metlicos Superficies tratadas Feeder layers Matrices tridimensionales Interfases Haces microcapilares permeables Nuevos dispositivos (p. Ej. Opticell)

Recipiente o soporte

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Medio de Cultivo

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Ejemplos de medios de cultivo y su aplicacin

www.sigmaaldrich.com

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El suero aporta al medio : Hormonas, protenas de adhesin y de matriz, factores de crecimiento. Composicin compleja y desconocida?. Coste elevado.
Problemas en la obtencin : esterilidad, tica, Problemas en la homogeneizacin entre lotes Problemas de seguridad biolgica (BSE, virus,)

Adems,

Suero bovino: Fetal (terneras no-natas), adulto, adulto irradiado. Suero equino. Suero humano: AB pools, inactivado por calor, irradiado. Suero ovino. Suero porcino.

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Cultivo de Clulas Animales

Roux (1885) - embrin de pollo en solucin salina Harrison (1907) - mdula espinal embrionaria de anfibios Burrows y Carrel (1910) - plasma de pollo para explantes Rous y Jones (1916) - tripsina en disociacin tisular ...Los cultivos como una mezcla de arte y ciencia

40s

1948 Sanford y col.- lnea celular L929 1950 Dulbecco tripsina como agente disgregador 1952 Gry y col. - primera linea celular continua (HeLa) 1954 Levi-Montalcini -factor de crecimiento nervioso 1955 Eagle - definicin de requerimientos nutricionales 1961 Hayflick - empleo de antibiticos anti-microbianos 1965 Ham - medio libre de suero 1969 Augusti / Sacco - lnea neuroblastoma, lneas diferenc. 1975 Kohler /Milstein - anticuerpos monoclonales 1976 Sato - requerimientos hormonales de los cultivo...

Cultivos primarios y/o especializados (diferenciados). Biotecnologa de tejidos. Clulas madre como precursores indiferenciados. Transfeccin

Actualidad

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Ventajas del cultivo de clulas animales

Freshney, Culture of Animal Cells, 5th edit

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 Y las desventajas?.

Freshney, Culture of Animal Cells, 5th edit

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Dinmica del Cultivo de Clulas animales

Cultivar todo tipo de clulas

Multiplicar solo clulas que proliferan

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Tipos de cultivos celulares Cultivo de rganos (Organ culture): Cultivo de tejido ntegro que retiene las propiedades histolgicas del tejido in vivo. Cultivo Celular (Cell culture): Cultivo de clulas derivado de clulas desagregadas mediante mtodos fsicos, qumicos o enzimticos y que han sido aisladas de un tejido donante, una lnea celular primaria o una cepa celular. Cultivo histotpico (Histotypic culture): Cultivo de clulas que han sido reorganizadas para crear una estructura similar a los tejidos en densidad, propiedades y estructura funcional. Cultivos organotpicos (Organotypic culture): Es un tipo de cultivo histotpico pero que hace uso de la recombinacin de linajes celulares para generar tejidos equivalentes.

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