Survei Vector Malaria

SURVEI VEKTOR
MALARIA
DIREKTORAT JENDERAL PENCEGAHAN DAN PENGENDALIAN PENYAKIT

DIREKTORAT PENCEGAHAN DAN PENGENDALIAN PENYAKIT TULAR VEKTOR DAN ZOONOTIK
TAHUN 2018
TIM PENYUSUN
Penasehat : Direktur Jenderal Pencegahan dan Pengendalian

Penyakit
Penanggung Jawab : Direktur Pencegahan dan Pengendalian Penyakit
Tular Vektor dan Zoonotik
Editor : Dr. Suwito, SKM, M.Kes (Kasubdit Vektor dan
Binatang Pembawa Penyakit)
Tim Penyusun :
1. Dra. Widiarti, M.Kes
2. Triwibowo Ambar Garjito, S.Si., M.Kes
3. Riyani Setyaningsih, S.Si., MSc.
4. Siti Alfiah, SKM,M.Sc
5. Lulus susanti, SKM, MPH
6. Yusnita Mirna Anggraeni, S.Si., M.Biotech.
7. Muhammad Choirul Hidajat, SKM, M.Kes
8. Dhian Prastowo, S.Si., M.Biotech.
9. Sidiq Setyo Nugroho, S.Si, M.Sc.
10. Mujiyono
11. Ary Oktsari Yanti, SKM
12. Fahmay Dwi Ayuningrum, S.ST.
13. Mega Tyas Prihatin, Amd.AK
14. Bambang Siswanto, SKM, M.Kes
15. Yahidin Selian, SKM, MPH
16. Dra. Fitri Riyanti, M.Si
17. Dra. Vivi Widarsih
18. Sarjono
19. Cecep Dani Sucipto, SKM, MPH
20. Yuliarni, S.SiT, MPH
21. Dahlia Hutagaol, SKM
22. Shelvia Nova, SKM
23. Palge Hutagaol, SKM, MPH
II PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

KATA PENGANTAR
Malaria hingga saat ini masih menjadi permasalahan kesehatan

di Indonesia, terutama di Indonesia bagian timur, yaitu Papua, Papua
Barat, Maluku, Maluku Utara dan Nusa Tenggara Timur. Pemerintah
telah menetapkan pengendalian malaria menjadi salah satu perioritas
nasional, dengan target Indonesia bebas malaria pada tahun 2030.
Hingga saat ini, upaya utama pengendalian malaria yaitu dengan
cara pengendalian vektor melalui penggunaan kelambu berinsektisida,
penyemprotan insektisida, penggunaan larvasida dan pengelolaan
tempat perkembangbiakan nyamuk Anopheles. Pengendalian vektor
malaria harus dilakukan secara efektif dan tepat sasaran. Untuk
menghasilkan pengendalian yang terarah dan tepat sasaran maka
diperlukan surveilan vektor malaria.
Buku Survei Vektor Malaria ini berisikan materi siklus hidup dan
cara identifikasi nyamuk Anopheles, cara surveilans vektor di lapangan
dan dilaboratorium, serta cara analisis hasil surveilans vektor. Buku ini
dapat menuntun petugas di lapangan dalam melakukan surveilans
vektor yang benar, juga dapat menuntun pengambil kebijakan dalam
menganalisis keputusan pengendalian vektor yang tepat sasaran.
Ucapan terima kasih Saya sampaikan kepada Tim Penyusun,
yang telah meluangkan waktu sehingga Buku Pedoman ini dapat
diselesaikan dengan tepat waktu. Harapan besar buku dapat digunakan
oleh pengelola program pengendalian vektor dan pengendalian
malaria, serta pengendalian penyakit pada umumnya. Semoga Buku ini
bermanfaat bagi Kita Semua.

Jakarta, September 2018
Direktur P2PTVZ,
dr. Elizabeth Jane Soepardi, MPH, D.Sc

NIP 195809231983112001
KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA III

DAFTAR ISI
TIM PENYUSUN................................................................................................... II
KATA PENGANTAR.............................................................................................. III
DAFTAR ISI............................................................................................................. IV
DAFTAR TABEL...................................................................................................... VI
DAFTAR GAMBAR............................................................................................... VII
DAFTAR LAMPIRAN............................................................................................ IX
I. PENDAHULUAN............................................................................... 1
1.1. Siklus hidup Plasmodium.......................................................... 2
1.2. Siklus hidup Anopheles.............................................................. 4
II. IDENTIFIKASI VEKTOR MALARIA................................................. 9
2.1. Tujuan .............................................................................................. 9
2.2. Identifikasi Nyamuk..................................................................... 9
III. METODE SURVAI MALARIA................................................................ 22
3.1. Tujuan .............................................................................................. 22
3.2. Surveilans Entomologi Malaria............................................... 22
3.3. Metode Survai Jentik dan Pupa............................................. 25
3.4. Metode Pengumpulan Nyamuk Dewasa............................ 26
3.5. Metode untuk mengumpulkan jentik dan pupa.............. 43
IV. INKRIMINASI VEKTOR MALARIA...................................................... 51
4.1. Tujuan .............................................................................................. 51
4.2. Pendahuluan.................................................................................. 51
4.3. Teknik inkriminasi vektor...................................................... 51
4.4. Elisa sporozoit Plasmodium................................................. 59
IV PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

4.5. Deteksi Molekuler Plasmodium Menggunakan
Nested PCR.............................................................................. 63
V. INDIKATOR ENTOMOLOGI MALARIA............................................. 72

5.1. Tujuan .............................................................................................. 72
5.2. Kepadatan Nyamuk dan Jentik.............................................. 72
5.3. Perilaku Menggigit ..................................................................... 73
5.4. Indikator Entomolog Untuk Monitoring Penularan
Malaria.............................................................................................. 74
DAFTAR PUSTAKA............................................................................................... 76
KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA V

DAFTAR TABEL
Tabel 1. Distribusi spesies Anopheles sebagai vektor malaria

di Indonesia (Elyazar et al., 2013)..................................................... 2
VI PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

DAFTAR GAMBAR
Gambar 1.. Siklus hidup Plasmodium pada tubuh manusia dan nyamuk
. (CDC, 2018).............................................................................................. 3
Gambar 2. . Siklus hidup Anopheles (WHO dalam Rozendaal, 1997)......5
Gambar 3. . Telur Anopheles (MR4, 2015)............................................................ 5
Gambar 4. . Bagian tubuh utama nyamuk dewasa. Empat karakter yang
dapat digunakan untuk mengenali nyamuk dewasa yaitu:
hanya memiliki sepasang sayap, proboscis yang panjang,
palpus, tubuh tertutup oleh sisik, dan sayap dengan urat
yang menunjukkan pola khusus...................................................... 10
Gambar 5. . Perbandingan antara nyamuk anopheline dan culicine......... 13
Gambar 6.. Kepala nyamuk jantan dan betina culicine dan
.anopheline................................................................................................ 14
Gambar 7.. Sayap Anopheles (urat utama)......................................................... 16
Gambar 8.. Kaki nyamuk Anopheles...................................................................... 17
Gambar 9. . (a) bagian tubuh jentik dan (b) kepala jentik
.anopheline................................................................................................ 18
Gambar 10.. Thoraks jentik anopheline.................................................................. 19
Gambar 11.. Abdomen jentik anopheline.............................................................. 20
Gambar 12.. Aspiratos dan cup kertas (WHO, 2013)......................................... 27
Gambar 13.. Koleksi nyamuk dewasa resting indoore (WHO, 2013)........... 29
Gambar 14.. Alat semprot (spray sheet)................................................................. 31
Gambar 15.. Pengumpulan lembar semprot untuk pengambilan
.sampel nyamuk....................................................................................... 33
KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA VII

Gambar 16. .Perangkap jendela................................................................................. 34
Gambar 17.. (a) Penampungan Pit dengan atap dan
. (b) Penampungan Pit alami (WHO, 2013).................................... 35
Gambar 18.. Jaring serangga (insect net), (WHO, 2013).................................. 36
Gambar 19.. Penangkapan nyamuk dengan umpan orang malam hari.... 38
Gambar 20.. Koleksi nyamuk dengan umpan hewan........................................ 39
Gambar 21.. Jaring perangkap dengan umpan manusia
. (WHO, 2013)............................................................................................ 41
Gambar 22.. Light trap (WHO, 2013; Rikhus Vektora, 2018)........................... 42
Gambar 23.. Jaring perangkap dengan umpan hewan
. (WHO, 2013; Rikhus Vektora, 2018)................................................ 43
Gambar 24. .Dipper (WHO, 2013)............................................................................. 46
Gambar 25.. Koleksi jentik di tempat perindukan
. (Rikhus Vektora, 2018)......................................................................... 47
Gambar 26. .Jaring jentik.............................................................................................. 48
Gambar 27.. Pengawetan jentik dalam vial (WHO, 2013)................................ 50
Gambar 28. .Gambaran skema siklus hidup vektor malaria
.(WHO, 2013)............................................................................................ 50
Gambar 29.. Anatomi nyamuk betina...................................................................... 52
Gambar 30. .Kondisi abdomen nyamuk betina (WHO, 2013)........................ 53
Gambar 31.. Pembedahan ovarium.......................................................................... 54
Gambar 32. .Penampakan ovarium.......................................................................... 55
Gambar 33.. Prosedur pembedahan kalenjar ludah untuk
. identifikasi sporozoit............................................................................ 58
VIII PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

I. PENDAHULUAN
Malaria masih menjadi salah satu masalah di Indonesia. Meskipun

tren annual parasite incidence (API) pada tahun 2011-2015 mengalami
penurunan dari 1,75 menjadi 0,85, namun wilayah timur Indonesia
masih memiliki API tertinggi. Nilai API menunjukkan jumlah kasus
positif per 1000 penduduk dalam 1 tahun (Ministry of Health, 2016)
Malaria merupakan penyakit yang disebabkan oleh parasit dari
genus Plasmodium dan ditularkan oleh nyamuk Anopheles. Ada lima
(5) spesies Plasmodium yang diketahui berperan sebagai penyebab
malaria di Indonesia, yaitu P. falciparum, P. vivax, P. ovale, P. malariae,
dan P. knowlesi (Elyazar et al., 2011; Elyazar et al., 2012; Surjadjaja et al.,
2016; Setiadi et al., 2016)
Anopheles diketahui bertanggung jawab dalam penularan malaria
sejak tahun 1897. Identifikasi Anopheles di Indonesia yang dilakukan
oleh O’Connor dan Sopa pada tahun 1981 berhasil mengidentifikasi
80 spesies Anopheles, sedangkan O’Connor dan Soepanto pada
tahun 1999 berhasil mengidentifikasi 66 spesies dengan 1 subspesies
dan 4 varietas (B2P2VRP, 2014). Dari total Anopheles tersebut, 20
spesies telah terkonfirmasi menjadi vektor malaria baik vektor primer
maupun sekunder/insidental sedangkan 4 spesies lain (An. annularis,
An. hyrcanus, An. indefinitus dan An. umbrosus) merupakan spesies
terduga vektor (Elyazar et al., 2013)
KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA 1

Tabel 1. Distribusi spesies Anopheles sebagai vektor malaria
No Spesies Distribusi
1 An. aconitus Jawa
2 An. balabacensis Jawa, Kalimantan, Nusa Tenggara
3 An. bancroftii Papua
4 An. barbirostris Sulawesi, Nusa Tenggara
5 An. barbumbrosus Sulawesi
6 An. farauti s.l. Papua
7 An. flavirostris Jawa, Sulawesi
8 An. karwari Papua
9 An. kochi Sumatera, Jawa, Sulawesi
10 An. koliensis Papua
11 An. leucosphyrus Kalimantan
12 An. maculatus s.l. Sumatera, Jawa
13 An. nigerrimus Sumatera, Sulawesi
14 An. parangensis Sulawesi
15 An. punctulatus Papua
16 An. sinensis Sumatera, Sulawesi
17 An. subpictus s.l. Jawa, Sulawesi, Nusa Tenggara
18 An. sundaicus Sumatera, Jawa, Nusa Tenggara
19 An. tesselatus Sumatera
20 An. vagus Jawa, Nusa Tenggara
1.1. Siklus hidup Plasmodium

Siklus hidup Plasmodium diketahui melibatkan dua (2) organisme
(nyamuk Anopheles betina dan manusia) melalui tiga (3) fase, yaitu
fase sporogonik pada tubuh nyamuk, fase eritrositik pada sel darah
manusia, dan fase ekso-eritrositik di luar sel darah manusia (World
Health Organization, 2013).
2 PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

Gambar 1.Siklus hidup Plasmodium pada
tubuh manusia dan nyamuk (CDC, 2018)
Plasmodium tumbuh dan berkembang pada sel hati dan sel darah
merah manusia. Parasit yang berhasil berkembang biak akan memecah
sel darah merah, melepaskan merozoit dan menginvasi sel darah
merah lain. Pada tahap ini, gejala malaria timbul. Fase sporogonik
dimulai saat gametosit dihisap Anopheles betina bersamaan dengan
mengisap darah. Di dalam perut nyamuk, sel darah manusia pecah dan
melepaskan gametosit. Gamet jantan dan betina bersatu membentuk
zigot dan berkembang menjadi ookinet. Ookinet menembus dinding
perut nyamuk dan menjadi ookista. Perbanyakan sporozoit mulai
terjadi di dalam tubuh nyamuk seiring dengan membesarnya ookista.

Ketika ookista pecah, sporozoit dilepaskan ke dalam rongga tubuh
nyamuk dan bermigrasi ke dalam kelenjar ludah. Proses perkembangan
sporozoit secara umum membutuhkan waktu 8-15 hari meskipun
sangat dipengaruhi oleh suhu, jenis Plasmodium, maupun kelembaban.
Ketika nyamuk mengisap darah manusia lain, sporozoit “disuntikkan”
masuk ke dalam tubuh manusia melalui aliran darah dan masuk ke
sel hati. Sporozoit memperbanyak diri di dalam sel hati (hepatosit)
selama 7-12 hari hingga sel hati pecah (fase non-eritrositik). Merozoit
dilepaskan dari sel hati dan masuk ke dalam sel darah merah kemudian
kembali memperbanyak diri dan menginvasi sel darah merah lain (fase
eritrositik).
Nyamuk betina sangat memerlukan pakan darah untuk pematangan
sel telurnya. Produksi telur terjadi beberapa kali sepanjang hidup
nyamuk sehingga nyamuk betina berpotensi sebagai vektor penular
malaria (CDC, 2018; World Health Organization, 2013).
1.2. Siklus hidup Anopheles

Seperti halnya nyamuk pada umumnya, nyamuk Anopheles memiliki
4 stadium: telur, jentik, pupa, dan dewasa. Selain stadium dewasa,
kehidupan lebih banyak dihabiskan di dalam air (fase akuatik) dan
berlangsung selama 5-14 hari, tergantung spesies dan kondisi
lingkungan (suhu, nutrisi) (CDC, 2018; World Health Organization,
2013).

Gambar 2. Siklus hidup Anopheles (WHO dalam Rozendaal, 1997)
1.2.1. Telur
Telur Anopheles dapat dibedakan dari genus lain karena diletakkan
satu persatu di permukaan air. Telur dilengkapi dengan pelampung
di kedua sisinya sehingga membentuk formasi seperti bintang, telur
satu dengan lainnya menempel di bagian ujung (Gambar 3). Telur tidak
dapat bertahan lama pada kondisi kering (CDC, 2018; MR4, 2015).
Gambar 3. Telur Anopheles (MR4, 2015)

Sekali oviposisi, nyamuk betina akan menghasilkan 50-200 butir.
Beberapa spesies seperti An. barbirostris dan An. maculatus dapat
bertelur hingga 300 butir (CDC, 2018; Heriyanto et al., 2011).
1.2.2. Jentik
Tubuh jentik tidak memiliki kaki dan terbagi menjadi tiga (3) bagian
utama, yaitu kepala, toraks, dan abdomen. Bagian kepala terdiri
dilengkapi dengan mulut, mata, dan antena. Bagian abdomen terdiri
dari tujuh (7) segmen yang hampir indentik dan tiga (3) segmen
posterior. Lubang spirakular sebagai alat pernafasan terletak pada
segmen abdomen VIII. Ketiadaan sifon digantikan dengan lubang
spirakular menyebabkan posisi istirahat jentik Anopheles sejajar dengan
permukaan air (Becker et al., 2010; CDC, 2018).
Jentik mengalami empat (4) instar, dengan mengalami molting
(pergantian eksoskeleton) di akhir masing-masing instar. Jentik
kemudian berubah menjadi pupa pasca instar ke-4 (CDC, 2018).
Lingkungan sangat berpengaruh terhadap kelangsungan hidup
nyamuk, terutama pada fase akuatik. Faktor lingkungan tersebut di
antaranya adalah suhu, cahaya, salinitas, kondisi dan bentuk perairan,
kondisi vegetasi, perubahan fungsi lahan, keberadaan sumber makanan
dan asam lemak esensial, kepadatan jentik, serta interaksi dengan
spesies lain (dalam bentuk predasi maupun kompetisi) (Rejmánková et
al., 2013; MR4, 2015).
1.2.3. Pupa
Pupa berbentuk koma: kepala dan toraks bersatu membentuk
cephalothorax, sedangkan bagian abdomen melengkung ke bawah.

Proses pernafasan masih tetap berlangsung menggunakan semacam
struktur terompet pada bagian cephalothorax (CDC, 2018).
Selama stadium pupa berlangsung, proses metamorfosis masih terjadi
dengan pembentukan organ-organ nyamuk dewasa. Lemak tubuh
jentik akan dipindahkan pada tubuh dewasanya di antaranya untuk
pembentukan telur. Setelah 2-3 hari, umumnya nyamuk dewasa akan
muncul dari pupa (Becker et al., 2010; World Health Organization, 2013).
1.2.4. Nyamuk Dewasa

Serupa dengan nyamuk pada umumnya, tubuh Anopheles terbagi
menjadi tiga (3) bagian besar, yaitu kepala, toraks, dan abdomen. Bagian
kepala didesain sebagai alat sensorik (dengan adanya mata, antena,
dan palpi) dan untuk memasukkan makanan (dengan adanya probosis).
Toraks membantu sistem pergerakan karena keberadaan tiga pasang
kaki dan sepasang sayap fungsional. Bagian perut berperan dalam
pencernaan makanan (termasuk pakan darah) dan perkembangan telur
betina (CDC, 2018).
Ciri pembeda Anopheles dari genus lain di antaranya panjang palpi
yang hampir sama dengan probosis, keberadaan pola unik gelap
dan terang pada sayap, serta posisi istirahat yang membentuk sudut
dengan permukaan. (CDC, 2018; Becker et al., 2010)
Waktu yang dibutuhkan nyamuk jantan dan betina untuk mencapai
kematangan seksual sedikit berbeda. Nyamuk jantan tidak segera
matang secara seksual setelah muncul dari pupa, membutuhkan waktu
setidaknya satu (1) hari. Pada populasi, nyamuk jantan umumnya
muncul 1-2 hari lebih dahulu daripada nyamuk betina agar dapat
mencapai tahapan dewasa bersama-sama. Nyamuk jantan dapat hidup
hingga sekitar satu (1) minggu dengan sumber energi dari nektar

dan sumber gula lainnya. Pakan nyamuk betina berasal dari sumber
yang serupa dengan pakan nyamuk jantan. Yang membedakan,
nyamuk betina membutuhkan sumber pakan darah untuk proses
pematangan telur. Lama waktu yang dibutuhkan bagi nyamuk betina
mencerna darah dan menggunakan proteinnya untuk produksi telur
bisa bervariasi, umumnya di daerah tropis sekitar 2-3 hari. Siklus ini
dapat terjadi beberapa kali selama kehidupan nyamuk betina. Di alam,
nyamuk betina dapat bertahan hidup selama 1-2 minggu, atau bahkan
1 bulan (Becker et al., 2010; CDC, 2018).

II. IDENTIFIKASI VEKTOR MALARIA
2.1. Tujuan
• Membedakan nyamuk dari serangga lainnya berdasarkan morfologi
luarnya.
• Menjelaskan anatomi nyamuk dewasa dan jentik vektor malaria.
• Menjelaskan fitur utama morfologi luar nyamuk dewasa dan jentik
anopheline yang digunakan dalam identifikasi spesies.
• Membedakan antara nyamuk jantan dan betina.
• Membedakan telur, jentik, pupa dan nyamuk dewasa antara
anopheline dan culicine.
• Menggunakan kunci identifikasi spesies.
• Menjelaskan metode biokimia dan molekuler yang umum
digunakan dalam identifikasi nyamuk vektor.
2.2. Identifikasi Nyamuk

2.2.1. Membedakan nyamuk dari serangga lain
Nyamuk termasuk ke dalam filum Arthropoda, kelas Insecta
dan ordo Diptera. Anggota filum Arthropoda diantaranya laba-laba,
kumbang, kutu, kupu-kupu, lalat, dan nyamuk. Mereka dapat dikenali
dari karakter berikut ini:
Tubuh Arthropoda:
• Tersusun dari sejumlah bagian atau segmen, beberapa diantaranya
memiliki sendi.
• Tertutup kulit yang kokoh disebut eksoskeleton.

• Umumnya memiliki kaki dan antena yang berpasangan dan
bersendi.
• Dalam filum Arthopoda terdapat beberapa kelas, termasuk di
dalamnya kelas Insecta – nyamuk adalah bagian dari kelompok ini.
Serangga memiliki karakter berikut ini:
• Tubuhnya terbagi menjadi tiga bagian – kepala, thoraks dan
abdomen.
• Kepala terdapat sepasang antenna, dan sepasang mata majemuk.
• Thoraks terdapat tiga pasang kaki.
• Kelas Insecta meliputi beberapa ordo; nyamuk termasuk ke dalam
ordo Diptera. Serangga yang termasuk dalam ordo Diptera memiliki
karakter berikut:
• Thoraks terdapat sepasang sayap yang terlihat.
• Sayap belakang vestigial (menyusut), merupakan filamen kecil yang
dapat digerakkan, dinamakan halter, fungsi utamanya sebagai alat
keseimbangan.
ProboscisP
alpus Gambar 4. Bagian tubuh
Antenna
Kaki
utama nyamuk dewasa.
Kepala Kaki
Empat karakter yang dapat
Mata majemuk digunakan untuk mengenali
Thoraks Sayap nyamuk dewasa yaitu: hanya
memiliki sepasang sayap,
proboscis yang panjang,
Abdomen palpus, tubuh tertutup oleh
sisik, dan sayap dengan urat
yang menunjukkan pola
khusus.

Kompleks spesies (spesies sibling)
Banyak serangga vektor yang merupakan anggota dari kompleks
spesies yang terdiri dari spesies sibling. Spesies-spesies tersebut sering
identik secara morfologi namun memiliki perbedaan dalam perilaku dan
ekologinya. Sedikitnya separuh dari vektor penting malaria termasuk
dalam kompleks spesies sibling (atau kriptik) yang anggotanya
isomorfik atau mirip. Pengetahuan bahwa anggota kompleks spesies
kriptik sering berbeda dalam kapasitasnya menularkan malaria telah
mendorong sebuah keharusan untuk mengembangkan metode
identifikasi selain menggunakan kriteria morfologi. Metode yang ideal
seharusnya cepat, hemat biaya, mudah diterapkan, dan berlaku untuk
kedua jenis kelamin dalam semua tahap perkembangan.
2.2.2. Taksonomi nyamuk anopheline di Indonesia

Terdapat dua genus nyamuk anopheline di Indonesia yaitu Anopheles
dan Bironella. Bironella sejauh ini bukan merupakan vektor penyakit.
Sedangkan Anopheles merupakan vektor tunggal untuk malaria.
Beberapa spesies Anopheles adalah vektor efektif untuk mikrofilaria
dan beberapa spesies juga terlibat penularan ensefalitis. Genus
Anopheles di Indonesia terdiri dari dua subgenus yaitu Anopheles dan
Cellia. Terdapat tiga Series dari subgenus Anopheles di Indonesia yaitu
Anopheles Series, Lophoscelomyia Series dan Myzorhynchus Series.
Semua spesies dalam subgenus Anopheles yang berperan sebagai
vektor termasuk dalam Myzorhynchus Series (An. bancroftii, An.
barbirostris, An. barbumbrosus, An. nigerrimus, An. peditaeniatus, dan
An. sinensis). Sedangkan subgenus Cellia di Indonesia terdapat empat
Series yang semuanya memiliki anggota spesies yang berperan sebagai
vektor malaria di Indonesia. Empat Series tersebut yaitu Myzomyia
Series (An. aconitus, An. flavirostris, An. minimus), Neocellia Series (An.

karwari, An. maculatus), Neomyzomyia Series (An. balabacensis, An.
farauti, An. kochi, An. koliensis, An. leucosphyrus, An. punctulatus, An.
tessellatus) dan Pyretophorus Series (An. ludlowae, An. parangensis, An.
subpictus, An. sundaicus, An. vagus).
2.2.3. Membedakan nyamuk anopheline dan culicine

Nyamuk anopheline dan culicine dapat dibedakan dengan karakter
yang dijelaskan pada Gambar 2.2 dan 2.3.
Telur
Telur nyamuk culicine bergerombol membentuk semacam “rakit” (Culex)
atau mengapung secara terpisah (Aedes); telur anopheline mengapung
secara terpisah dan masing-masing telur memiliki “pelampung”.
Jentik
Jentik culicine memiliki tabung pernafasan (sifon) yang juga digunakan
untuk menggantung pada permukaan air. Sedangkan jentik anopheline
tidak memiliki sifon dan mengapung di dalam air sejajar dengan
permukaan air. Sifon milik jentik Culex lebih panjang daripada sifon
jentik Aedes.
Pupa
Pupa anopheline dan culicine berbentuk koma dan mengapung di bawah
permukaan air. Pupa akan berenang ketika merasa terganggu. Terompet
pernafasan pada pupa anopheline pendek dan memiliki bukaan yang
lebar. Sedangkan pada pupa culicine terompet pernafasannya ramping
panjang dengan bukaan yang sempit. Namun karena membedakan
pupa anopheline dan culicine di lapangan sulit untuk dilakukan, maka
lebih mudah untuk memeliharanya di insektarium, sehingga nyamuk
dewasanya dapat diidentifikasi.

Nyamuk dewasa
Ketika masih hidup, nyamuk dewasa anopheline dan culicine dapat
dibedakan dengan mengamati postur hinggapnya. Nyamuk anopheline
hinggap dengan membentuk sudut 50° hingga 90° terhadap permukaan
tempat hinggapnya. Sedangkan nyamuk culicine hinggap kurang lebih
sejajar dengan permukaan hinggapnya (Gambar 2.2).
Nyamuk anopheline Nyamuk culicine

Jentik Permukaan air
Pupa Permukaan air
Nyamuk dewasa
Gambar 5. Perbandingan antara nyamuk anopheline dan culicine
Nyamuk anopheline dan culicine dapat dibedakan dari ukuran dan

bentuk palpusnya. Perbedaan palpusnya adalah berikut ini:
• Pada nyamuk betina culicine, palpus jauh lebih pendek daripada
proboscis.

• Pada nyamuk betina anopheline, palpus sama panjangnya dengan
proboscis.
• Pada nyamuk jantan culicine, palpus lebih panjang daripada
proboscis, dengan bentuk ujung palpus meruncing.
• Pada nyamuk jantan anopheline, palpus lebih panjang daripada
proboscis, dengan bantuk ujung palpus seperti stik golf (Gambar
2.3).
Nyamuk culicine Nyamuk anopheline
Proboscis Palpus sama
panjang dengan
proboscis
Antenna tidak
berbulu lebat Palpus sangat
pendek
Nyamuk betina culicine Nyamuk betina anopheline
Palpus
Palpus tidak seperti stik
seperti stik golf golf
Antenna
berbulu lebat
Nyamuk jantan culicine Nyamuk jantan anopheline
Gambar 6. Kepala nyamuk jantan dan betina culicine dan anopheline
2.2.4. Membedakan nyamuk Anopheles jantan dan betina

Penting untuk mampu membedakan antara nyamuk betina dan jantan
karena hanya nyamuk betina Anopheles yang mengisap darah dan
menularkan malaria.

Pada antenna nyamuk betina terdapat relatif sedikit bulu yang pendek.
Sebaliknya pada nyamuk jantan memiliki bulu yang panjang pada
antenna, menyebabkan penampilan nyamuk jantan seperti memiliki
“kumis” lebat.
2.2.5. Mengidentifikasi spesies nyamuk anopheline

Identifikasi spesies vektor yang umum ditemui di suatu daerah dapat
dilakukan dengan menggunakan kunci identifikasi. Informasi yang
dikumpulkan selama survei hanya dapat digunakan ketika nyamuk
yang diperoleh dapat diidentifikasi dengan tepat. Maka penting untuk
mampu melakukan identifikasi terhadap nyamuk dewasa dan jentiknya.
Identifikasi terhadap pupa sangat sulit dilakukan. Ketika diperoleh
pupa dari lapangan sebaiknya disimpan hidup hingga muncul menjadi
nyamuk dewasa, karena nyamuk dewasa dapat diidentifikasi dengan
lebih mudah. Beberapa karakter eksternal nyamuk dewasa dan jentik
anopheline yang berguna untuk identifikasi spesies akan disampaikan
berikut.
2.2.6. Morfologi nyamuk Anopheles dewasa

Kepala
Kepala terdapat sepasang mata majemuk yang besar. Sepasang
antenna terdapat di antara mata. Sepasang palpus di bawah antenna
pada nyamuk anopheline tersusun oleh lima bagian. Palpus tertutup
sisik yang mungkin berbeda warna dan dapat digunakan untuk
identifikasi spesies. Proboscis memanjang dari bagian ventral kepada
dan mengarah ke depan.

Thoraks
Thoraks memiliki sepasang sayap dan sepasang halter pada permukaan
atas dan tiga pasang kaki/kaki pada permukaan bawah (ventral).
Sayap terdapat beberapa urat; masing-masing urat memiliki nomor
dan/atau nama (Gambar 2.4). Urat di sepanjang tepi depan sayap
disebut costa dan urat pendek di belakangnya disebut subcosta.
Terdapat enam urat lainnya yang diberi nomor 1-6, urat nomor 2,4
dan 5 bercabang. Urat sayap tersebut tertutup oleh sisik. Sisik sayap
biasanya berwarna coklat, hitam, putih atau krem. Tepi belakang sayap
terdapat sisik halus. Kebanyakan anopheline memiliki sayap dengan
bercak gelap dan pucat, bersama dengan karakter lain digunakan
untuk identifikasi spesies.
Costa
Subcosta
Gambar 7.Sayap Anopheles (urat utama)

Kaki berbentuk panjang dan tersusun atas coxa pendek yang terhubung
dengan thoraks, diikuti dengan trochanter pendek, kemudian femur
panjang, tibia panjang, dan tarsus panjang yang terdiri atas lima
bagian. Kelima bagian tersebut diberi nomor 1-5 dengan segmen 1
adalah yang paling dekat dengan tubuh. Ujung kaki terdapat sepasang
kuku. Kaki juga tertutup sisik yang mungkin berbeda warna dan dapat
digunanakan untuk identifikasi spesies.

Coxa
Trochanter
Femur
Tibia
Tarsi
Gambar 8.Kaki nyamuk Anopheles

Abdomen
Abdomen nyamuk memiliki delapan segmen yang terlihat. Bagian atas
dikenal sebagai tergit, dan bagian bawah disebut sternit. Kedua bagian
tersebut dihubungkan oleh membran yang memungkinkan abdomen
merentang ketika nyamuk betina mengisap darah.
Morfologi jentik Anopheles
Tubuh jentik terbagi menjadi tiga bagian; kepala, thoraks dan abdomen.
Semua bagian tubuh jentik ditumbuhi oleh rambut.
Kepala
Kepala terdapat sepasang antenna, satu di setiap sisi. Batang antenna
terdapat rambut di akhir dan di sisinya. Sepasang sikat mulut (mouth
brushes) terletak di depan kepala. Permukaan atas kepala terdapat
beberapa rambut; letak dan bentuk rambut tersebut penting sebagai
karakter untuk identifikasi.

Sikat mulut
Rambut clypeal
Kepala Antenna
Rambut antenna
Thoraks
Rambut frontal
Mata
Rambut trans-sutura
Rambut sutura
Sutura/lekukan
Abdomen
Rambut
preclypeal Rambut clypeal dalam
Rambut Rambut clypeal luar
postclypeal
Gambar 9. (a) bagian tubuh jentik dan (b) kepala jentik anopheline
Thoraks
Thoraks terbentuk dari tiga bagian; prothoraks, mesothoraks dan
metathoraks (Gambar 2.7). Rambut yang terdapat pada bagian thoraks
dikenal sebagai rambut prothorasik, mesothorasik, dan metathorasik.
Permukaan atas dan bawah sama-sama terdapat rambut. Pada
permukaan bawah pada bagian ventral thoraks terdapat beberapa
rambut meliputi tiga kelompok pada setiap sisi dengan empat rambut
per kelompoknya. Kelompok rambut ini adalah kelompok plura
prothorasik, kelompok pleura mesothorasik dan kelompok pleura
metathorasik. Rambut-rambut tersebut juga penting untuk identifikasi
spesies.

Tampak dorsal Tampak ventral
Gambar 10. Thoraks jentik anopheline
Abdomen
Abdomen terdapat delapan segmen yang mirip dan dua segmen
termodifikasi (Gambar 2.8): segmen ke-9 memiliki sepasang spirakel
dan segmen ke-10 adalah bagian anal. Rambut yang berkembang
dengan baik dan berbentuk kipas disebut rambut palmate (palmate
hairs), terdapat pada segmen 4-6 dan terkadang juga pada segmen 1-3.
Setiap segmen memiliki hingga empat lempeng terga (tergal plates)
pada sisi dorsalnya. Biasanya ada sepasang di anterior dan sepasang
lagi di posterior pada setiap segmen, selain itu juga terdapat dua
lempeng akesoris (accessory plates). Segmen abdomen ke-9 bersatu
dengan segmen ke-8 dan membawa spirakel, alat pernafasan jentik.
Pada kedua sisi segmen ke-9 terdapat pekten (pectene), yaitu suatu
bentuk segitiga dengan gigi mirip sisir. Sebagian besar permukaan atas
segmen anal tertutup oleh lempeng terga yang disebut sadel (saddle).
Pada sadel atau segmen anal bisa terdapat rambut. Pada permukaan
bawah segmen anal terdapat serangkaian rambut yang disebut sikat
ventral (ventral brush). Empat pial anal (anal gills) memanjang dari
segmen anal tersebut.

Gambar 11.Abdomen jentik anopheline
2.2.8. Kunci untuk identifikasi secara morfologi

nyamuk dewasa Anopheles
Kunci untuk identifikasi nyamuk dewasa dan jentik Anopheles telah
dikembangkan untuk sebagian besar wilayah di dunia. Petugas pertama
harus memilih kunci taksonomi yang dikembangkan untuk wilayah
geografi yang disurvei atau sedekat mungkin.

Jenis kunci identifikasi yang paling umum digunakan terdiri dari
pasangan pernyataan dan disebut sebagai kunci dikotomus atau kunci
dua bait. Pada jenis kunci identifikasi ini hanya satu dari sepasang
pernyataan yang sesuai dengan keadaan spesimen. Petugas harus
menentukan pernyataan mana yang sesuai dengan spesimen. Pada
akhir pernyataan akan dicantumkan nomor yang mengindikasikan
bait mana yang selanjutnya digunakan atau nama yang tepat untuk
spesimen yang diidentifikasi. Ketika melanjutkan ke bait yang lain, pilih
jawaban yang tepat dalam bait tersebut dan lanjutkan terus hingga
nama spesimen berhasil diidentikasi.
Contoh
Suatu spesimen nyamuk memiliki sayap dengan sisik berwarna gelap
dan pucat, kakinya berbintik pucat dan separuh ujung proboscis
berwarna pucat, maka akan diidentifikasi sebagai Spesies E.
1. Sayap bersisik gelap seluruhnya …………………………………....... 2
Sayap dengan sisik gelap dan pucat ………………………………… 3
2. Kaki berwarna gelap seluruhnya ………………………….… Spesies A
Kaki berbintik pucat …………………………………................ Spesies B
3. Kaki berwarna gelap seluruhnya ……………………….…… Spesies C
Kaki berbintik pucat ………………………………………..……….........… 4
4. Proboscis berwarna gelap seluruhnya ……………….…. Spesies D
Proboscis dengan separuh ujungnya
berwarna pucat ……..........................................................…. Spesies E

III. METODE SURVAI ENTOMOLOGI MALARIA
3.1. Tujuan
• Memahami pentingnya pembakuan metode survai entomologi
vektor malaria
• Memahami dan mampu melakukan berbagai metode koleksi
nyamuk dewasa
• Mengidentifikasi tempat istirahat nyamuk Anopheles dewasa
• Mampu mengidentifikasi tempat perkembangbiakan potensial
vektor malaria
• Memahami cara membawa transport jentik dan pupa yang telah
dikoleksi dari lapangan ke laboratorium
• Memahami cara menawetkan spesimen nyamuk
3.2. Surveilans Entomologi Malaria

Survai entomologi meupakan salah satu komponen yan penting dalam
program pengendalian vektor malaria, aktifitas operasional dan riset.
Secara umum, empat tipe survai yang paling sering digunakan dalam
studi vektor: Survai pendahuluan, survai rutin (Longitudinal survai),
survai sewaktu (Spot survai), dan investigasi fokal.
Tujuan dari surveilans entomologi adakah untuk mengumpulkan data
dasar untuk perencanaan pengendalian vektor, yaitu :
• Dapat membedakan Anopheles dari nyamuk lainnya
• Mampu melakukan identifikasi spesies vektor malaria
• Mengetahui kepadatan vektor
• Mengetahui angka infeksi (sporozoite rate, oocyst rate)

• Mengetahui panjang hidup nyamuk (parous, nulliparous)
• Perilaku (eksofilik, endofilik, eksofagik, endofagik)
• Aktifitas musiman
• Habitat jentik
• Tipe tempat perkembangbiakan
• Status kerentanan terhadap insektisida
• Efek residu insektisida
3.2.1. Survai Pendahuluan

Survai yang dilakukan pada permulaan sebelum diadakan pengendalian
vektor. Tujuannya untuk mengumpulkan data dasar keadaan vektor
secara cermat, guna menyusun perencaan pengendalian vektor. Data
dasar adalah semua data yang ada kaitannya dengan vektor, yang
tujuannya untuk memutuskan rantai penularan. Dengan adanya dasar
dasar dapat disusun perencaan pengendalian vektor yang tepat dan
dapat digunakan untuk evaluasi.
Data dasar dapat dikelompokkan kepada data :
• Data yang tidak bisa dibandingkan
Data ini hanya diperlukan untuk perencanaan pengendalian vektor,
dan tidak dilakukan lagi setelah pengendalian vektor dimulai. Data
dasar ini mencakup fauna nyamuk Anopheles, konfirmasi vektor
dan “infection rate”. Peta penyebaran vektor, musim kepadatan
vektor, nyamuk hinggap istirahat di dalam rumah.
• Data yang dibandingkan
Data ini dapat dipergunakan untuk melakukan penilaian. Data
dasar ini mencakup lokasi pengamatan, penangkapan nyamuk
hinggap, penangkapan nyamuk dengan umpan orang, konfirmasi
vektor, kerentanan vektor terhadap insektisida

Bila data dasar vektor penyakit sudah cukup di daerah tersebut,
maka tidak diperlukan lagi survai pendahuluan. Bila informasi
mengenai vektor belum ada, maka perlu dilakukan survai ini.
3.2.2. Survai longitudinal/operasional

Survai yang dilakukan dengan observasi jangka panjang yang dilakukan
secara rutin, yaitu per dua minggu, per-bulan, per-setengah tahun,
dengan tujuan melakukan monitoring permasalahan operasional dan
teknis yang terjadi. Penerapan dan evaluasi dampak pengendalian
vektor yang telah dilakukan. Survai ini akan dapat memberikan
informasi mengenai fluktuasi kepadatan vektor, perubahan bionomik
vektor, umur vektor, indeks sporozoit, angka infeksi, perilaku, dan
kerentanan vektor terhadap insektisida. Penerapan survai ini harus
terintegrasi dengn penilaian epidemiologi, karena survai entomologi
hanya menentukan apakah penularan telah terputus atau masih
berlangsung
3.2.3. Survai sewaktu (Spot survai)

Survai dilakukan di lokasi yang dipilih secara acak. Survai ini dilakukan
di wilayah terpilih sebagai pendukung survai rution atau untuk
mendapatkan indikator yang jelas terkait dampak pengendalian vektor
yang telah dilakukan.
3.2.4. Survai intensif/survai khusus

Survai khusus hanya dilakukan di daerah yang terjadi masalah atau
daerah kejadian luar biasa (KLB). Tujuannya adalah untuk mengatasi
masalah yang terjadi karena ada kegiatan pengendalian vektor, namun
kepadatan vektor/kasus tidak menurun.

Survai sewaktu mencakup kegiatan survai-survai antara lain
sebagai berikut :
• Survai penentuan daerah potensial kejadian luar biasa (KLB)
• Survai penentuan penghentian penyemprotan
• Survai daerah penyemprotan bermasalah
• Survai penentuan daerah potensi KLB malaria
• Evaluasi dampak entomologi/vektor terhadap vektor
• Pemetaan Tempat Perkembangbiakan
3.2.5. Investigasi fokal

Investigasi fokal dilakukan di wilayah baru atau daerah dengan penularan
malaria yang berlangsung terus-menerus untuk mengetahui mengapa
terjadi penularan di wilayah tersebut, atau mengapa pengendalian
malaria tidak berhasil dilakukan, serta untuk mengidentifikasi
pendekatan terbaik dalam pengendalian.
3.3. Metode survai jentik dan pupa

3.3.1. Lokasi survai jentik dan pupa
Lokasi survai adalah suatu wilayah di pedesaan, dusun, kampong atau
wilayah lainnya yang ada di kabupaten / kota dengan kriteria:
1. Daerah endemis malaria atau daerah yang pernah terjadi KLB
Malaria.
2. Daerah lain yang diperkirakan dapat terjadi penularan penyakit
malaria dengan kepadatan populasi nyamuk tinggi.
3. Daerah yang dilakukan pengendalian vektor malaria.

3.4. Berbagai metode koleksi nyamuk dewasa
3.4.1. Koleksi nyamuk istirahat di dalam rumah/ruangan

Banyak dari spesies anopheles yang merupakan vektor malaria
beristirahat di dalam rumah. Koleksi nyamuk di dalam rumah/ruangan
akan memberikan informasi tentang tempat istirahat nyamuk, kepadatan
waktu istirahat, dan perubahan kepadatan musiman. Koleksi nyamuk
di dalam ruangan ini juga dapat dimanfaatkan untuk mendapatkan
spesimen hidup untuk pengujian kerentanan dan bioassay dan untuk
pengamatan kematian nyamuk dari rumah-rumah di mana telah
diberikan insektisida di kelambu atau di dinding rumah.
Peralatan yang dipergunakan untuk koleksi nyamuk meliputi aspirator
atau tabung penghisap, senter, gelas kertas dengan penutup kain
kassa, kapas, karet gelang, kandang nyamuk, kotak kardus kontainer
atau container box, kloroform dan handuk.
Cara menggunakan aspirator/tube penghisap:

- Masukkan corong di mulut, pegang tabung pengisap dengan celah
sekitar 1-2 cm dan dekatkan ke arah nyamuk.
- Gerakkan ujung tabung pengisap lebih dekat ke arah nyamuk,
pada saat yang sama, hisap perlahan tetapi cepat sehingga dapat
menarik nyamuk masuk ke dalam tabung.
- Tempatkan jari-jari di atas lubang tabung untuk menutup lubang
tabung dan mencegah nyamuk terbang lepas keluar.
- Tempatkan ujung tabung, dengan jari-jari masih dalam posisi
pada lubang, dekatkan pada kain kassa yang menutupi cup kertas.
Pindahkan jari-jari dan cepat masukkan tabung ke dalam lubang
cup kertas.

- Tiup lembut ke corong aspirator sehingga dapat memindahkan
nyamuk masuk ke dalam cup kertas, ketuk tabung dengan jari-jari
untuk memindahkan nyamuk.
Gambar 12. Aspirator dan cup kertas untuk pengumpulan

nyamuk dewasa (WHO, 2013)
Koleksi nyamuk istirahat pada pagi hari di dalam ruangan

Nyamuk dikumpulkan pada pagi hari. Di setiap desa atau lokasi
setidaknya 10 rumah harus dicari untuk memberikan sampel yang
representatif. Kesepakatan rumah yang harus di survai diperoleh
sebelum pencarian, seperti malam sebelumnya. Penghuni tidak
diharuskan membuka jendela.
Nyamuk yang tertangkap hidup di rumah dapat disimpan selama 24
jam. Ini akan dapat memungkinkan pemeriksaan tingkat kematian 24
jam nyamuk dari rumah-rumah dengan kelambu berinsektisida atau
dikumpulkan dari rumah-rumah yang disemprot.

Seluruh rumah harus diperiksa dengan lama waktu sekitar 15 menit di
setiap rumah. Berikan perhatian khusus ke kamar di mana orang tidur
pada malam sebelumnya. Cari nyamuk di dinding, di langit-langit, di
belakang dan di bawah perabotan, di dalam pot besar dan guci, dan di
bawah tempat tidur. Lakukan pencarian sistematis pada setiap rumah
dimulai di pintu utama dan bergerak ke kiri searah jarum jam di sekitar
bagian dalam rumah.
Gunakan gelas kertas yang ditutupi kain kassa secara terpisah untuk
setiap rumah. Gelas kertas tersebut harus diberi label yang jelas dengan
pensil dengan informasi berikut :
• tempat pengumpulan;
• tanggal dan waktu pengumpulan;
• waktu yang dihabiskan untuk mengumpulkan;
• nomor rumah atau nama rumah tangga;
• jenis rumah (rumah, kost, gudang, toko, dll.);
• apakah pernah disemprot insektisida dan kapan waktunya;
• jumlah orang dan / atau hewan di dalam ruangan selama malam
sebelumnya;
• nama kolektor pengumpul nyamuk.
Selain itu, label diberi keterangan lokasi pengumpulan nyamuk, tanggal,
nomor rumah dan nama pengumpul, dan formulir pengumpulan yang
digunakan (cup kertas) untuk mengisi informasi lengkap.

Gambar 13. Koleksi nyamuk dewasa resting indoor (WHO, 2013)
Pemeliharaan nyamuk di lapangan

Jika nyamuk harus disimpan selama beberapa waktu di lapangan
atau selama proses perjalanan ke laboratorium, perlu dilakukan
pemeliharaan untuk menjaga nyamuk agar tetap dalam kondisi baik :
- potongan kapas direndam dalam larutan gula 5-8%, kemudian
diperas dan diletakkan di atas kain kassa penutup gelas kertas
tempat nyamuk dipelihara.
- Gelas kertas yang berisi nyamuk kemudian diletakkan dan dijaga
tetap tegak di dalam kotak kardus, atau kotak es (cool box) dan
dikondisikan sejuk (misalnya, dilapisi dan atau ditutupi dengan
handuk basah) agar nyamuk tidak menjadi kepanasan.
- Handuk penutup tempat nyamuk diusahakan tetap basah sampai
nyamuk mencapai laboratorium.
- Pastikan bahwa nyamuk disimpan di tempat yang bebas dari
kontaminasi insektisida dan terhindar dari serangga.
- Sebelum dibawa dengan alat transportasi, ertas koran atau bahan
lain yang memungkinkan perlu dilektakkan di antara cup untuk
meminimalkan goncangan dan berkendara secara hati-hati.

Prosedur mematikan nyamuk hasil koleksi
Tambahkan beberapa tetes kloroform dan atau etil asetat ke kapas
dan letakkan di atas kain kassa yang menutupi gelas kertas yang
telah berisi nyamuk hidup. Tutupi gelas kertas dengan cawan petri
kaca untuk mencegah kloroform menguap. Jangan gunakan cawan
petri plastik karena akan bereaksi dengan kloroform. Meskipun daya
bunuh kloroform lebih baik daripada ethil asetat, namun saat ini
lebih direkomendasikan menggunakan ethil asetat karena dampak
terhadap kesehatan yang ditimbulkannya. Apabila tetap menggunakan
kloroform, perlu dilakukan tindakan pengamanan saat penggunaannya
sesuai standar bahan kimia berbahaya sebagaimana lainnya.
3.4.3. Koleksi Nyamuk Istirahat dalam Rumah dengan

Spray Sheet
Pengumpulan nyamuk dengan spray sheet melibatkan penggunaan
insektisida pyrethrin untuk melumpuhkan nyamuk yang beristirahat di
dalam rumah dan mengumpulkannya di atas lembaran kain putih yang
diletakkan di lantai atau di permukaan di dalam rumah.
Semua nyamuk yang beristirahat di rumah tidak mungkin akan
tertangkap dengan koleksi menggunakan aspirator. Dengan
menggunakan metode pengumpulan spray sheet, memungkinkan
untuk mengumpulkan hampir semua nyamuk dari ruang dalam rumah
yang disemprotkan dengan larutan pyrethrin. Metode ini adalah
metode pengumpulan nyamuk yang memungkinkan untuk penelitian
kuantitatif, yaitu untuk :
• pengukuran kepadatan istirahat dalam ruangan (jumlah nyamuk
yang beristirahat di dalam ruangan pada siang hari)
• kepadatan menggigit manusia (secara tidak langsung)

• perubahan musiman dalam kepadatan istirahat dalam ruangan
• jumlah nyamuk yang tersisa di ruangan tertentu setelah koleksi
menggunakan aspirator
Peralatan yang digunakan

Lemabaran kain warna putih berukuran: 2 x 1 m, 2 x 2 m dan 2 x 3 m;
penyemprot tangan/spray sheet; insektisida aerosol; larutan pyrethrin;
minyak tanah; cawan petri kecil; cup kertas; lensa; pinset; sebuah
wadah (kotak dingin) untuk membawa nyamuk; kapas ; kertas saring
dan senter.
Alat penyemprot harus dari tipe double-action dengan katup udara.
Larutan pyrethrin disiapkan pada konsentrasi 0,2% -0,3% dalam
minyak tanah. Lakukan tindakan pengamanan yang diperlukan saat
menggunakan pyrethrin, dan jauhkan dari jangkauan anak-anak.
Gambar 14. Alat semprot (spray sheet) (WHO, 2013)

Persiapan ruangan untuk koleksi spray sheet
Pekerjaan ini biasanya dilakukan oleh tim yang terdiri dari tiga atau
empat orang sehingga koleksi nyamuk dapat dibuat di 8 – 10 ruangan
pada suatu tempat.
Pastikan bahwa nyamuk yang beristirahat dapat tertangkap semudah
mungkin, siapkan ruangan untuk penyemprotan sebagai berikut:
• Pastikan tidak ada orang dan binatang.
• Tutup semua makanan, air dan peralatan.
• Tutupi semua barang-barang.
• Tutupi semua bukaan dan atap dengan kain atau kelambu.
• Sebarkan kain lembaran putih sehingga benar-benar menutupi
lantai dan semua di permukaan lantai yang tersisa; kain juga harus
disebarkan di bawah meja, tempat tidur dan tempat lain di mana
nyamuk dapat bersembunyi.
• Tutup semua jendela dan pintu.
Melakukan penyemprotan ruangan dan koleksi nyamuk

Salah satu anggota tim berjalan di bagian luar ruangan dan
menyemprot di ruang terbuka atau lubang di dinding dan atap. Orang
yang sama atau anggota tim yang lain memasuki ruangan, menutup
pintu dan bergerak searah jarum jam, semprotkan ke langit - langit
sampai ruangan penuh dengan kabut. Operator kemudian harus
segera meninggalkan ruangan dan memastikan bahwa pintunya tetap
tertutup setidaknya selama 10 menit.
Mulai dari pintu, kain diambil satu per satu. Bawa kain ke luar ruangan.
Kumpulkan nyamuk yang jatuh diatas lembaran kain menggunakan
pinset. Nyamuk kemudian dikumpulkan dalam cawan petri berlabel
dengan lapisan kapas basah dan kertas saring di atas kapas. Gunakan

cawan petri yang terpisah untuk setiap rumah, dan beri label dengan
semua data informasi yang penting.
Gambar 15. Pengumpulan lembar semprot digunakan untuk

pengambilan sampel nyamuk di dalam ruangan (WHO, 2013)
3.4.4. Koleksi Perangkap Jendela (Exit Traps)
Beberapa spesies nyamuk vektor akan menggigit di dalam ruangan,
namun kemudian segera meninggalkan rumah segera setelah menggigit
(endophagic dan exophilic). Jebakan atau perangkap jendela biasanya
digunakan untuk menangkap nyamuk yang keluar meninggalkan
rumah melalui jendela.
Peralatan yang digunakan

Jebakan/perangkap jendela, aspirator, cup kertas dengan penutup
bersih, handuk, kotak box berisolasi dan kain gelap atau alas untuk
menutup celah terbuka di kamar.
Jebakan/perangkap jendela
Perangkap jendela (keluar) hanya cocok untuk ruangan yang tertutup
dengan baik dan memiliki sedikit titik keluar untuk nyamuk. Biasanya

ruang tidur dipilih dan perangkapnya harus diletakkan di jendela
kamar tidur. Bagian-bagian jendela yang tidak ditutupi oleh perangkap
harus ditutupi dengan kain gelap. Perangkap harus diletakkan dengan
cara mengarah ke luar. Perhatikan juga untuk memasang perangkap di
posisi yang tepat sebelum matahari terbenam.
Gambar 16. Perangkap Jendela (WHO, 2013)

3.4.5. Koleksi Nyamuk Dewasa Luar Rumah
Beberapa spesies nyamuk tidak memasuki dalam rumah tetapi
memiliki aktifitas menggigit di luar rumah dan kemudian beristirahat di
luar seperti di vegetasi atau pada permukaan padat di tempat-tempat
terlindung seperti tepi sungai dan parit, lubang di bebatuan, gorong-
gorong, retakan di dinding batu, gua, liang hewan, pada batang atau
batang pohon yang lebih besar, dan di gundukan rayap tua.
Data dari koleksi luar rumah atau ruangan penting dalam mengevaluasi
dampak dari tindakan pengendalian vektor. Hal ini memberikan
informasi tentang :
• spesies nyamuk yang beristirahat di luar rumah
• jumlah relatif nyamuk yang beristirahat di luar rumah
• tempat istirahat nyamuk di luar rumah

Peralatan
Peralatan yang diperlukan untuk pengumpulan di luar ruangan sama
dengan peralatan yang digunakan sebelumnya ditambah jaring
serangga (insect net) penangkap nyamuk. Persiapan tempat koleksi
nyamuk dapat dilakukan selama di lapangan.
Metode koleksi nyamuk luar ruangan

Metode umum yang digunakan untuk koleksi nyamuk luar rumah
seperti yang terdapat pada vegetasi adalah penggunaan aspirator,
jaring serangga (insect net), atau jaring (drop net). Spesies anopheline
yang biasanya terdapat pada permukaan dinding/tanah dikumpulkan
dengan bantuan aspirator dari habitatnya. Penampungan artifisial dapat
terdiri dari tong besar atau kotak, dapat dipasang di tepi sungai, atau
lubang yang digali di tanah. Tempat penampungan yang ditempatkan
dengan baik biasanya menghasilkan lebih banyak nyamuk daripada
lingkungan alam.
Gambar 17. (a) Penampungan Pit dengan atap dan

(b) Penampungan pit alami (WHO, 2013)
Jaring serangga (insect net) atau jaring (drop net) digunakan untuk
mengumpulkan nyamuk yang terdapat pada vegetasi. Metode yang

digunakan adalah dengan mengibas-ibaskan jaring serangga (insect
net) di atas rumput atau dekat dengan tanah di sekitar semak-semak.
Pastikan bahwa jenis tempat berlindung, jumlah koleksi dicatat dengan
baik.
Gambar 18. Jaring serangga (insect net) (WHO, 2013;

Rikhus Vektora, 2018)
3.4.6. Koleksi nyamuk dengan umpan
Nyamuk betina tertarik pada manusia dan/atau hewan untuk
mendapatkan pakan darah. Jumlah vektor yang menggigit manusia
merupakan penentu utama penularan malaria. Koleksi nyamuk dengan
umpan orang/ternak penting dilakukan untuk mengetahui :
• Kesukaan menggigit spesies Anopheles, khususnya nyamuk vektor
Malaria (lebih suka menggigit manusia atau hewan)
• seberapa sering seseorang digigit oleh vektor,
• apakah vektor yang menggigit terdapat di dalam ruangan atau di
luar ruangan,
• waktu puncak menggigit vektor,
• variasi musiman dalam kaitannya dengan jumlah nyamuk yang
menggigit manusia.

Peralatan
Aspirator, senter, gelas kertas dengan penutup bersih, jam alarm, pasak
kayu dan tali (untuk menambatkan hewan yang digunakan sebagai
umpan), pasak kayu (untuk penambat), palu, kapas, handuk, kotak box
wadah atau kotak container.
a. Koleksi nyamuk menggunakan umpan orang

Meskipun koleksi nyamuk umpan orang sangat berguna untuk
mengukur frekuensi menggigit nyamuk vektor pada manusia, namun
ada kekhawatiran karena individu yang terlibat koleksi nyamuk berisiko
terkena infeksi parasit malaria. Dengan pertimbangan ini, untuk
menghindari kekhawatiran, maka perlu dilakukan pengurusan izin kode
etik sebelum menggunakan metode ini. Disarankan untuk menghindari
menggunakan metode ini, kecuali benar-benar penting, terutama jika
ada metode lain yang tersedia lebih aman untuk memberikan perkiraan
frekuensi menggigit pada manusia. Dalam metode ini, semua kolektor
harus dilatih cara koleksi nyamuk.
Petugas yang bertugas sebagai umpan orang direkomendasikan untuk
meminum obat profilaksis antimalaria yang tepat terlebih dahulu untuk
menghindari tertular malaria selama koleksi nyamuk berlangsung. Pada
saat koleksi, nyamuk harus segera dikoleksi begitu nyamuk hinggap,
sebelum nyamuk menggigit kolektor.
Lokasi tempat penangkapan nyamuk harus dipilih dengan tepat, baik
di dalam maupun di luar rumah. Rumah yang dipilih sebagai lokasi
penangkapan merupakan rumah yang terletak pada desa dengan
jumlah kasus malaria terbanyak. Beberapa kolektor diposisikan duduk
di dalam rumah, sedangkan beberapa yang lain duduk di luar rumah.
Dalam beberapa situasi, perlu dipersiapkan kolektor cadangan, baik di

dalam maupun di luar rumah untuk mengurangi kemungkinan kolektor
tertidur di malam hari. Pengumpul nyamuk dilakukan bergantian pada
setiap jam. Koleksi-koleksi nyamuk ini dibuat sepanjang malam (12
jam) atau selama sebagian malam (6 jam), tergantung dari kebutuhan.
Secara umum, koleksi nyamuk menggunakan umpan orang baik di
dalam maupun di luar rumah dilakukan selama 40 menit pada setiap
jam.
Kolektor yang bertindak sebagai umpan orang sebaiknya menyesuaikan
dalam hal berpakaian. Apabila menggunakan celana panjang, sebaiknya
celana dilipat hingga sebatas lutut dan duduk dengan tenang selama
koleksi berlangsung. Ketika nyamuk terasa hinggap, cepat nyalakan
senter, nyamuk kemudian dikoleksi dengan menggunakan aspirator
dan dipindahkan ke dalam gelas kertas yang ditutupi kain kassa.
Gunakan satu gelas kertas untuk setiap jam pengumpulan. Merokok
sebaiknya dihindari oleh kolektor selama koleksi nyamuk berlangsung.
Selama koleksi nyamuk berlangsung, perlu diperhatikan waktu
tidur dari penduduk setempat, informasi ini akan digunakan untuk
mempelajari apakah sebagian besar kontak vektor terhadap manusia
terjadi di dalam atau di luar rumah, termasuk jumlah rata-rata gigitan
yang diterima penduduk desa di setiap waktu dan tempat pada malam
hari.
Gambar 19. Penangkapan nyamuk dengan umpan orang malam hari

(Rikhus Vektora, 2018)

b. Koleksi nyamuk menggunakan umpan ternak
Koleksi nyamuk dengan umpan ternak biasanya dilakukan di lokasi
dan waktu yang sama dengan koleksi nyamuk menggunakan umpan
orang. Sebelum matahari terbenam, pilih hewan ternak yang jinak di
desa lokasi, biasanya seekor sapi. Lokasi koleksi nyamuk sebaiknya
berada di dekat tempat di mana hewan biasanya diikat/dikandangkan
pada malam hari. Ikat hewan dengan aman. Nyamuk dikoleksi setiap
10 menit/jam dalam gelas kertas yang terpisah di setiap jamnya.
Gambar 20. Koleksi nyamuk dengan umpan hewan (WHO, 2013)
c. Koleksi nyamuk dengan jaring perangkap berumpan

Tujuan pengumpulan nyamuk dengan metode ini sama dengan
pengumpulan dengan umpan orang/hewan secara langsung. Jebakan
perangkap yang diberi umpan umumnya menghasilkan lebih banyak
nyamuk daripada nyamuk yang dikumpulkan dengan penangkapan
langsung dari hewan, tetapi sebaliknya, untuk jaring perangkap dengan
umpan manusia.

Peralatan
Aspirator (tabung penghisap), senter, gelas kertas dengan penutup
bersih, kapas, handuk, container box berisolasi, jam alarm, dua tempat
tidur camp, dua kelambu kecil dengan bingkai untuk tempat tidur
camp, dua jaring perangkap untuk umpan manusia, satu jaring untuk
perangkap umpan hewan, pasak kayu dan tali (untuk menambatkan
hewan), palu, pasak dan tali (untuk mengamankan jaring perangkap),
dan jarum dan benang (untuk memperbaiki jaring perangkap yang
rusak).
Koleksi nyamuk dengan jaring perangkap berumpan manusia
Seperti disebutkan sebelumnya, penangkapan langsung nyamuk
menggunakan umpan manusia umumnya tidak dianjurkan karena
kekhawatiran atas paparan kolektor penangkap nyamuk terhadap
infeksi malaria. Dalam hal ini metode pengumpulan alternatif harus
digunakan yang memberikan sampel representatif dari populasi vektor
yang akan menggigit manusia.
Salah satu metode alternatif yang digunakan untuk menggantikan koleksi
nyamuk dengan umpan orang saat ini adalah dengan menggunakan
dua jaring perangkap, sehingga yang satu menutupi area tempat
tidur dan yang lainnya membentuk jaring perangkap nyamuk di luar.
Jaring bagian dalam dipasang di sekitar tempat tidur untuk melindungi
orang yang bertindak sebagai umpan. Di bagian bawah dari jaring luar
direntangkan erat dan diikat ke pasak di tanah, beri jarak 15-20 cm
antara tanah dan tepi bawah jaring. Saat matahari terbenam, kolektor
memasuki perangkap dan berbaring di tempat tidur dan mengatur
jam alarm selama satu jam. Ketika alarm berdering, semua nyamuk
anopheles dalam jaring perangkap dikumpulkan. Periode pengumpulan
tidak boleh melebihi 10 menit. Kolektor kemudian kembali ke tempat

tidur dan mengatur alarm seperti sebelumnya. Prosedur ini diulangi
tiap jam sepanjang malam.
Gambar 21. Jaring perangkap dengan umpan manusia (WHO, 2013)

Koleksi nyamuk dengan perangkap cahaya CDC (CDC light trap)
dengan umpan manusia
Perangkap lampu CDC dipasang di kamar tidur di samping tempat
tidur dengan kelambu. Umpan manusia tidur di bawah kelambu, fungsi
cahaya untuk menjebak anopheles betina yang telah memasuki ruangan
untuk menggigit orang di bawah kelambu. Nyamuk yang terperangkap
dapat digunakan sebagai gambaran untuk memperkirakan tingkat rata
– rata gigitan nyamuk. Di dalam rumah, satu orang bertindak sebagai
umpan manusia tidur sendiri di malam hari. Satu perangkap cahaya
CDC diposisikan di dalam ruangan, dilengkapi dengan lampu pijar,
dan ditempatkan dekat dengan umpan orang yang tidur di bawah
kelambu di tempat tidurnya. Perangkap cahaya dipasang sekitar 1,5 m
di atas lantai di sebelah kaki tempat tidur. Nyamuk yang terperangkap
kemudian dipindahkan dari light trap ke gelas kertas keesokan paginya
untuk analisis lebih lanjut.

Gambar 22. Light trap (WHO, 2013; rikhus Vektora, 2018)
Koleksi nyamuk dengan jaring perangkap menggunakan umpan
binatang (Animal baited trap net)
Jebakan perangkap berumpan hewan diletakkan dekat dengan
tempat hewan itu biasanya semalam. Perangkap berumpan biasanya
digunakan di luar ruangan. Jebakan perangkap jaring serupa dengan
yang digunakan untuk mengumpulkan nyamuk oleh umpan manusia.
Hewan harus ditambatkan dengan aman sehingga tidak dapat lepas
dan merusak perangkap atau membahayakan.
Jika ada pengulangan di lokasi, kandang kecil dapat dibangun untuk
tempat hewan. Tempatkan hewan dalam perangkap saat matahari
terbenam dan kumpulkan nyamuk setiap jam selama beberapa menit
(misalnya 10-15 menit/jam).

Gambar 23 Jaring perangkap dengan umpan hewan (WHO, 2013;
Rikhus Vektora, 2018)
3.5. Berbagai metode untuk mengumpulkan jentik dan pupa
3.5.1. Koleksi jentik dan pupa Anopheles
Setiap jenis nyamuk memiliki kecenderungan untuk meletakkan
telurnya pada tempat perkembangbiakan tertentu. Beberapa jenis
nyamuk akan meletakkan telur pada habitat tertentu, seperti misalnya
di air tawar, air jernih, genangan air/kolam ternaungi kanopi, ataupun
di air payau. Beberapa jenis nyamuk bahkan mampu meletakkan telur

pada tempat perkembangbiakan yang sempit, seperti bekas cakaran
kuku binatang di tanah atau pohon.
Tempat perkembangbiakan nyamuk Anopheles beserta kepadatan dan
sangat penting diketahui di daerah yang sedang terjadi penularan
malaria. Hal ini dapat memberikan gambaran potensi penularan saat
koleksi dilakukan dan faktor risiko penularan malaria selanjutnya.
Koleksi jentik dan pupa dari berbagai tipe tempat perkembangbiakan
akan dapat bermanfaat dalam:
• Menentukan keberadaan spesies vektor
• Memastikan tempat perkembangbiakan yang sesuai bagi setiap
spesies vektor
• Menyusun perencanaan program pengendalian vektor secara
efektif dan efisien
Untuk mengidentifikasi tempat perkembangbiakan yang sesuai, sangat
penting dilakukan pengamatan secara sistematis dan mengecek
seluruh tempat perkembangbiakan yang memungkinkan, bahkan yang
sulit dicapai sekalipun.
3.5.2. Tempat perkembangbiakan potensial

• Genangan air hujan, bekas cakaran/tapak binatang, saluran air dan
parit
• Air payau (percampuran air tawar dengan air laut)
• Sungai kecil, terutama di bagian tepi dengan vegetasi dan air yang
bergerak perlahan
• Kolam, danau dan rawa dimana jentik biasa diperoleh diantara
vegetasi di bagian tepian, meskipun seringkali ditemukan jauh dari
tepi danau/kolam diantara vegetasi yang terapung.

• Lokasi khusus, seperti sumur dan kontainer buatan dari semen.
Seluruh permukaannya sebaiknya dilakukan pemeriksaan.
Apapun metode koleksi jentik/pupa yang dipergunakan, pada saat
akan melakukan sampling jentik/pupa, sebaiknya dilakukan dengan
hati-hati, menghadap matahari. Apabila jentik terganggu oleh
bayangan ataupun gerakan, jentik akan berenang ke dasar tempat
perkembangbiakan dan menghilang dari pandangan. Dalam kondisi
demikian, sebaiknya kita tunggu beberapa menit sampai jentik/pupa
tersebut kembali ke permukaan air. Metode sampling Anopheles
secara khusus juga dilakukan ketika terdapat kotoran terapung pada
permukaan air/adanya tanaman air yang muncul dipermukaan air. Baik
air bersih maupun air terpolusi perlu dilakukan survai, karena beberapa
studi sebelumnya menyebutkan Anopheline juga mampu berkembang
biak pada air terpolusi.
Peralatan
Dipper/gayung, jaring jentik, nampan besar, pipet, tabung spesimen
(vial), larutan alkohol 70%, kapas, pensil, dan atau kertas label. Jika
spesimen hidup diperlukan untuk pengujian insektisida, perlu botol
yang lebih besar.
Penggunaan cidukan (dipper)
Dipper biasanya menggunakan mangkok enamel atau gayung plastik,
karena memungkinkan jentik dapat terlihat dengan mudah. Turunkan
dipper ke dalam air dengan sudut sekitar 45º, sampai satu sisi tepat di
bawah permukaan.
• Dalam mencelupkan dipper, dilakukan secara perlahan supaya
jentik tidak terganggu dan tidak bergerak ke bawah, apabila jentik
bergerak ke bawah maka tunggu satu atau dua menit sampai

jentik bergerak naik ke permukaan lagi, dan kemudian lanjutkan
mencelupkan dipper.
• Gerakkan dipper sepanjang lokasi perkembangbiakan, saring
permukaan air dengan gayung.
• Angkat dipper keluar dari air, pastikan bahwa air yang mengandung
jentik dan pupa tidak tumpah.
• Pegang gayung dengan stabil sampai jentik dan pupa naik ke
permukaan air.
• Kumpulkan jentik dan pupa dengan menggunakan pippet dan
pindahkan ke dalam botol penampungan.
• Jangan membuang kembali air sisa ke tempat perkembangbiakan
karena ini dapat mengganggu jentik dan pupa.
• Pastikan untuk mencatat stadium jentik yang belum dewasa (instar
1 dan 2) atau jentik yang dewasa (instar 3 dan 4). Jentik dewasa
lebih diprioritaskan dalam program larvisida.
Gambar 24. Dipper (WHO, 2013)

Perkiraan kepadatan jentik Anopheles
Perkiraan kepadatan jentik dihitung dari jumlah pengambilan dengan
dipper pada setiap jenis tempat perkembangbiakan. Kepadatan jentik
di setiap lokasi perkembangbiakan dapat dihitung dengan instar atau
instar 3 dan 4 jentik dari setiap spesies yang dikumpulkan per cidukan
atau per 10 cidukan (atau per 100 cidukan apabila kepadatannya terlalu
rendah). Perhatikan juga waktu yang digunakan untuk survai jentik
dalam hitungan menit sambil mengumpulkan jentik di setiap tempat
perkembangbiakan jentik.
Gambar 25. Koleksi jentik di tempat perindukan (Rikhus Vektora, 2018)
Penggunaan jaring jentik

Jaring jentik digunakan untuk mengumpulkan jentik dan pupa di kolam
dan danau. Jaring jentik terdiri dari jaring jaring halus yang dipasang
pada gagang kayu dan plastik atau tabung yang diikat pada salah satu
ujungnya. Untuk mengumpulkan jentik dan pupa, sapu permukaan air
dengan memegang jaring pada tangkainya dan gerakkan di air. Jentik
dan pupa di permukaan air akan disapu bersih dan akan masuk dalam
tabung plastik atau tabung pada jarring jentik.

Gambar 26. Jaring jentik (WHO, 2013)
Jaring yang dapat digunakan yaitu jaring sederhana tanpa botol atau
tabung. Setelah menyaring tempat perkembangbiakan, jaring harus
dibalik ke dalam mangkuk air dan tuangkan isinya. Air dalam mangkuk
kemudian diambil jentik dan pupa, pindahkan ke dalam botol atau vial
dengan pipet.
Jaring yang digunakan untuk pengambilan sampel dari sumur mirip
dengan jaring jentik tetapi tidak memiliki pegangan kayu; pada sudut
ditempatkan empat tali yang panjang untuk pegangan pada waktu
menggerakkan jaring.
Koleksi jentik dengan pipet

Dalam beberapa keadaan di mana tempat perkembangbiakan tidak
luas dan dangkal, pipet dapat digunakan untuk koleksi jentik.
Membawa jentik dan pupa dalam keadaan hidup ke laboratorium

Tempatkan semua spesimen dari tempat perkembangbiakan tertentu
dalam satu botol yang telah diberi label. Label harus ditulis dengan
pensil di selembar kertas berstiker dan ditempelkan ke botol spesimen.

Jangan gunakan bolpoin karena tinta larut dalam air.Tutup botol dengan
kuat agar air tidak tumpah. Pastikan ada udara di bagian atas 1–2 cm
sehingga jentik dan pupa dapat bernafas selama beberapa jam. Jika
ruang udara yang lebih besar dibiarkan, air akan bergoyang-goyang
selama transportasi dan jentik/pupa akan mengalami kerusakan,
terutama kehilangan rambut.
Jika perjalanan ke laboratorium memakan waktu lebih dari 2–3 jam, tutup
botol sebaiknya dibuka setiap 2 jam untuk memberikan kesempatan
jentik mendapatkan udara segar. Botol sebaiknya dikemas dengan
hati-hati dan rapi agar tidak terguncang selama pengangkutan. Jika
jentik harus digunakan dalam uji kerentanan insektisida, jentik tersebut
harus diangkut dalam air dalam tabung hampa udara besar atau wadah
besar lainnya.
Cara mematikan dan mengawetkan jentik dan pupa
• Botol yang berisi jentik diberi kapas yang telah dibasahi dengan
alkohol 70% dan diletakkan di atas botol selama sekitar 30-60
detik. Alternatif lain, jentik dapat dipindahkan ke dalam air panas
(50 ° C – 70 ° C) menggunakan pipet.
• Air dari dalam botol dituangdengan hati-hati sampai air sebanyak
mungkin dikeluarkan dari botol.
• 70% alkohol (etanol) ditambahkan ke dalam botol.
• kapas ditambahkan ke dalam botol.
• Label disiapkan dengan semua informasi yang ditulis dengan pensil
(jangan gunakan pena): lokasi, jenis tempat perkembangbiakan,
jumlah dip yang diambil, waktu yang digunakan dalam menit,
tanggal pengumpulan, dan nama kolektor.
• Label ditempelak pada botol.
• Tutup botol erat-erat

Gambar 27. Pengawetan jentik dalam vial (WHO, 2013)
Gambar 28. Gambaran skema siklus hidup vektor malaria (WHO,

2013)

IV. INKRIMINASI VEKTOR MALARIA
4.1. Tujuan
• Memahami metode yang digunakan untuk inkriminasi vektor
• Memahami metode identifikasi umur nyamuk
• Memahami metode pembedahan kelenjar ludah
4.2. Pendahuluan
Entomologi Malaria merupakan studi biologi dan ekologi dari
nyamuk penular malaria. Tujuan dari inkriminasi ini adalah untuk
dapat memahami hubungan antar vektor, ekologi, perilaku, parasit
dan hospes sebagai dasar dalam pengembangan dan pelaksanaan
strategi pengendalian vektor yang efektif dan efisien. Ada beberapa
data entomologi yang digunakan untuk inkriminasi vektor, diantaranya
meliputi :
• Keberadaan, kemelimpahan dan proporsi nyamuk dari spesies
yang terinfeksi sporozoit
• Umur atau parousitas dari vektor
• Perilaku menggigit vektor (dimana dan kapan nyamuk menggigit,
serta hospes apa yang disukai digigit)
4.3. Teknik inkriminasi vektor

Dalam penghitungan kapasitas vektorial nyamuk untuk menularkan
malaria, sangat penting dilakukan penghitungan sejumlah parameter
kunci yang dibutuhkan untuk mengujian vektor. Beberapa diantaranya

meliputi identifikasi kondisi abdomen atau stadium pakan darah,
yang dapat digunakan untuk mengetahui seberapa sering nyamuk
menghisap darah. Pembedahan dan identifikasi ovarium dibutuhkan
dengan tujuan untuk memperkirakan umur dari populasi vektor.
Parameter-parameter tersebut sangat penting didalam penghitungan
kapasitas vektorial.
Inkriminasi vektor malaria juga dapat dilakukan dengan pendekatan
lain, diantaranya dengan mengunakan sandwich Elisa dan PCR.
Sandwich Elisa digunakan untuk mendeteksi adanya circumsporozoite
protein pada nyamuk di duga vektor sedangkan PCR mendeteksi
adanya DNA plasmodium di tubuh nyamuk di duga Vektor.
a. Struktur organ nyamuk betina

Sebelum dilakukan pembedahan pada nyamuk, sangat penting
untuk mengetahui posisi berbagai organ nyamuk di dalam
tubuhnya. Gambar berikut menunjukkan struktur organ di dalam
tubuh nyamuk betina dari bagian kepala hingga abdomen.
Gambar 29. Anatomi nyamuk betina

b. Identifikasi stadium pencernakan darah
Stadium pakan darah merupakan gambaran abdomen nyamuk
Anopheles setelah menghisap darah dan perkembangan ovarium.
Pada Anopheline, pemasakan ovarium (perkembangan telur) terjadi
pada waktu yang sama dengan pencernakan darah. Berdasarkan pada
stadium pencernakan darah ataupun kondisi abdomen, Anopheles
dapat dikelompokkan menjadi unfed, freshly fed, hlaf-gravid dan gravid.
a. Unfed – kondisi abdomen rata
b. Freshly fed – Sebagian besar/hampir seluruh abdomen berwarna
merah terang atau gelap yang disebabkan oleh darah yang dihisap
sebelumnya dari hospes. Warna merah tersebut terdapat pada
2 segmen abdomen bagian permukaan ventral dan 5 segmen
abdomen pada bagian permukaan dorsal. Ovarium terdapat
dibagian ujung abdomen dan bagian tersebut tidak berwarna
merah.
c. Half-gravid – Sebagian abdomen berwarna merah tua, mendekati
hitam, terdapat pada segmen ke 3-4 pada permukaan vental
abdomen, dan 3-7 pada bagian dorsal abdomen
d. Gravid – Darah mereduksi menjadi bagian kecil berwarna gelap
pada permukaan ventral abdomen, ataupun seluruhnya telah
dicerna.Ovarium terletak di seluruh abdomen.
Gambar 30. Kondisi abdomen nyamuk betina (WHO, 2013)

c. Pembedahan ovarium dan penentuan parousitas
Alat yang dibutuhkan untuk pembedahan ovarium meliputi : mikroskop
stereoskopik (dissecting microscope), mikroskop compound, jarum
bedah, pinset tajam, slide preparat, piper dan ddH20
Penentuan parousitas dilakukan dengan pembedahan ovarium pada
abdomen dan mengamatinya apakah parous (nyamuk telah mencerna
darah hospes minimal satu kali dan telah meletakkan telurnya minimal
1 kali), ataupun nulliparous (nyamuk yang belum pernah mencerna
darah dan belum pernah bertelur)
Untuk pemeriksaan parousitas, hanya dilakukan pada nyamuk betina.
Adapun prosedur pembedahan ovarium adalah sebagai berikut :
• Nyamuk dimatikan dan dibersihkan kaki dan sayapnya
• Nyamuk ditempatkan pada slide preparat yang telah ditetesi
dengan ddH2O
• Kemudian tusuk 1 jarum serangga pada thoraks, kemudian dengan
jarum diseksi lainnya, tarik persambungan abdomen ke-7 menjauhi
tubuh nyamuk. Ovarium akan keluar dari abdomen.
• Potong bagian oviduct dan pisahkan ovarium dari tubuh nyamuk
• Biarkan mengering dan amati kondisi ovariumnya
Gambar 31. Pembedahan ovarium (WHO, 2013)

Mengamati perbedaan ovarium parous dan nulliparous
• Ovarium yang telah dikeringkan diamati dibawah mikroskop
compoun menggunakan lensa obyektif dengan perbesaran 10x,
dan apabila diperlukan, dapat dikonfirmasi dengan perbesaran
lensa obyektif 40x.
• Ovarium nyamuk betina yang trakeolar dari ovariumnya membentuk
gulungan melingkar merupakan nulliparous
Gambar 32. Penampakan ovarium nulliparous (a), parous (b)

dan ovarium yang baru dibedah (c) (WHO, 2013)
• Ovarium dengan trakeola yang telah memanjang (tidak
menggulung) merupakan parous
• Pada beberapa nyamuk betina tidak seluruh telur yang telah
berkembang telah dikeluarkan. Apabila beberapa telur (biasanya
kurang dari 5) tertahan di ovarium, nyamuk tersebut tetap
merupakan parous.
d. Parousitas sebagai indikator umur nyamuk

Dengan menghitung proporsi parous nyamuk di dalam suatu populasi
vektor, perubahan populasi vektor dapat dimonitoring dan dampak
intervensi dapat evaluasi. Sebagai contoh, apabila populasi nyamuk
meningkat, biasanya nyamuk nulliporous yang lebih banyak muncul,

sedangkan populasi parous menurun. Sebaliknya, apabila populasi
nyamuk semakin tua, dan nyamuk semakin sedikit yang keluar, jumlah
nyamuk parous semakin meningkat.
Tujuan dari penyemprotan insektisida residu adalah untuk menurunkan
penularan malaria dengan membunuh nyamuk yang sedang istirahat
di dinding dari yang masuk ke dalam rumah atau yang baru selesai
menghisap darah. Aplikasi insektisida ini diharapkan dapat menurunkan
panjang hidup nyamuk dan kemampuan nyamuk tersebut untuk
menularkan malaria.
Apabila aplikasi insektisida residu (indoor residual spraying) berjalan
efektif, maka jumlah nyamuk parous akan lebih sedikit bila dibandingkan
dengan nulliparous setelah penyemprotan. Parousitas ovarium ini
juga dapat digunakan untuk membandingkan wilayah yang dilakukan
penyemprotan dan tidak. Parousitas merupakan indikator entomologi
yang digunakan untuk mengetahui apakah penularan malaria dapat
dikendalikan atau tidak.
Nyamuk yang nulliparous tidak adpat menularkan malaria karena
nyamuk tersebut belum pernah menghisap parasit plasmodium
karena belum pernah menghisap darah. Meskipun nyamuk telah
bertelur sekali atau dua kali, namun nyamuk tersebut belum cukup
umur untuk menularkan malaria dikarenakan siklus gonotropik (waktu
yang dibutuhkan mulai dari waktu menghisap darah pertama sampai
dengan waktu menghisap darah selanjutnya) yang rata-rata hanya
membutuhkan waktu 3 hari, sedangkan perkembangan sporozoit
dalam tubuh nyamuk membutuhkan waktu 10-12 hari. Seekor nyamuk
membutuhkan waktu minimal 3 kali siklus gonotropik sebelum nyamuk
tersebur mampu menularkan malaria.
Pembedahan ovarium dan pengamatan parousitas menjadi parameter

yang penting di dalam analisis entomologi dan bahan peniliaun
dampak intervensi pengendalian vektor.
Jumlah nyamuk betina parous
Angka parousitas (Parity rate) = –––––––––––––––––––––––––––––––––– x 100
Jumlah nyamuk betina yang dibedah
Pembedahan dan pemeriksaan kelenjar ludah untuk deteksi

sporozoit
Kelenjar ludah dilakukan pemeriksaan sporozoit dengan maksud untuk
mengetahui spesies nyamuk yang mana yang membawa parasit malaria
dan proporsi dari setiap spesies yang terinfeksi. Pemeriksaan angka
sporozoit dibutuhkan untuk mengkonfirmasi peran dari spesies nyamuk
tertentu sebagai vektor malaria, mengetahui intensitas penularan
malaria dan untuk mengakses dampak intervensi pengendalian vektor.
Teknik pembedahan kelenjar ludah merupakan standar emas untuk
mengetahui apakah nyamuk tersebut merupakan vektor malaria
dengan ditemukannya sporozoit di kelenjar ludah atau tidak. Namun
demikian, teknik ini tidak dapat membedakan spesies dari plasmodium.
Peralatan yang dibutuhkan untuk pembedahan kelenjar ludah meliputi:
mikroskop dissecting, mikroskop compound, jarum bedah, pinset ujung
runcing, slide preparat, pipet, dan 0,65% saline solution.
Prosedur pembedahan kelenjar ludah :
• Matikan nyamuk, identifikasi spesies dan hilangkan kaki dan
sayap. Nyamuk betina yang nulliparous tidak perlu dilakukan
pembedahan kelenjar ludah karena nyamuk nulliparous belum
terinfeksi plasmodium
• Letakkan nyamuk pada slide preparat, posisi dari nyamuk
menyamping dengan kepala berada di sebelah kanan (bagi yang
biasa bekerja dengan tangan kanan), atau kiri (bagi yang biasa
bekerja dengan tangan kiri)

• Teteskan satu tetes saline solution dekat dengan bagian depan
thoraks
• Tusuk thoraks dengan jaruk seksi
• Letakkan jarum bedah diantara kepala dan thoraks. Diusahakan
untuk tidak memotongnya.
• Tarik secara perlahan kepala jauh dari thoraks, kelenjar ludah akan
keluar dari thoraks, keluar bersama kepala nyamuk yang ditarik.
• Kelenjar ludah kemudian dipotong dari kepala nyamuk, selanjutnya
dilakukan pemeriksaan menggunakan mikroskop dengan
perbesaran obyektif 40x. Apabila ditemukan sporozoit, makan
sporozoit yang berbentuk pisang akan ditemukan bergerak-gerak.
• Slide yang mengandung sporozoit dapat diawetkan dengan
pewarnaan giemsa 30 menit menggunakan 5% giemsa solution
Gambar 33. Prosedur pembedahan kelenjar ludah

untuk identifikasi sporozoit

4.4. Elisa sporozoit Plasmodium
4.4.1. Pendahuluan
Enzime link immunosorbent assay (ELISA) di gunakan untuk mendeteksi
adanya Circumsporozoit (CS) protein plasmodium falciparum dan
Plamodium vivax pada nyamuk yang terinfeksi. Metode ini tidak dapat
menggantikan metode konvensional, yaitu pembedahan kalenjar
ludah nyamuk untuk melihat keberadaan sporozoit, hasil Elisa dan
pembedahan kalenjar ludah dapat berbeda, karena keduanya memiliki
pendekatan yang berbeda.
Sampel nyamuk yang akan diuji elisa adalah kepala-thorax nyamuk
yang baru tertangkap (fresh), beku maupun kering pada silica gel.
Prinsip sandwich elisa adalah Penempelan capture Mab dengan plate
elisa, kemudian sisa ruang pada elisa plate, di tutup dengan blocking
buffer. Nyamuk yang akan diuji di homogenkan dengan grinding
solution kemudian di masukan ke plate elisa, positif dan negatif kontrol
dimasukan ke dalam plate yang sama. Jika ada CS protein maka akan
terjadi reaksi antigen-antibody dengan captur Mab. Setelah diinkubasi,
peroxidase-linked Mab di masukan ke dalam plate, yang kemudian
setelah ditambahkan substrate untuk membentuk warna. Apabila
sampel positif CS sporozoit, maka akan terjadi perubahan warna pada
substrat.
4.4.2. Bahan dan Alat

a. Monoclonal Antibody Pv e. Blocking Buffer
b. Peroxidase Conjugate Pv f. Grinding Buffer
c. Monoclonal Antibody Pf g. Washing Buffer (PBS Tween)
d. Peroxidase conjugate Pf h. Kontrol positif

i. Elisa Reader m. Plate Elisa
j. Mikropipet Multichanel n. Reagen Reservoir
k. Mikropipet o. Pelet Pesle
l. Mikropipet tips p. Pelet Pestle Motor
4.4.3. Cara kerja

a. Persiapan reagen :
1.) PBS (Phosphate Buffer Saline)
PBS yang digunakan adalah PBS 1x sterile. Apabila stok yang
dimiliki di Laboratorium adalah PBS 10x, maka encerkan 100ml
PBS 10x, dengan 900ml aquadest sterile. Simpan dalam suhu 4
derajad celcius.
2.) Blocking Buffer (BB) à Waktu simpan 1 minggu pada suhu 4OC:
Untuk membuat 1L Blocking Buffer (BB), Didihkan 0,1N NaOH
kemudian masukan perlahan 5gr Casein (ELISA grade). Setelah
Casein terlarut, dinginkan larutan dan campurkan perlahan
900ml PBS 1x. Atur pH ke ~7,4 dengan HCl. (opsional:
tambahkan 200ul phenol red sebagai indikator pH) .
3.) Grinding buffer à waktu simpan 1 minggu pada suhu 4OC:
Campurkan 25ml BB dengan 125ul non ionic detergent. Vortex
hingga tercampur rata
4.) Wash solution (PBS-Tween) à waktu simpan 2 minggu pada
suhu 4OC
Campuran antara PBS dan 0.05% tween 20. Tambahkan 0,5ml
tween 20 ke 1L PBS 1x. Campur hingga homogen.
5.) Monoclonal atibodies capture dan peroxidase conjugate :
Monoclonal antibody capture dan conjugate dari KPL masih
berbentuk kering. Untuk itu perlu ditambahkan campuran
gliserol dan aquadest dengan perbandingan 1:1. Jumlah gliserol
dan aquadest, akan tertulis pada label MAB dan peroxidase
conjugate
b. Cara Kerja Elisa

1.) Pooling maksimal 10 ekor nyamuk (kepala-thorax) pada tube
1,5ml
2.) Menambahkan 50ul grinding buffer, hancurkan dengan pellet
pestle hingga homogen. Pellet pestle dibilas dengan 200ul
grinding buffer, sehingga volume akhir homogenate adalah
250ul. Sampel siap untuk langsung diuji atau dapat disimpan
beku untuk uji selanjutnya.
3.) Menyiapkan elisa plate, tandai dengan spesies plasmodium
yang akan diuji (setiap plasmodium diuji pada plate yang
terpisah)
4.) Menyiapkan larutan kerja Monoclonal antibody (Mab),
Spesies Mab ug/50ul/well ug/5ml ul Stock/5ml
Pf Capture 0.200ug/50ul 20.0ug 40ul stock+ 5ml PBS
Pv-210 Capture 0.025ug/50ul 2.5ug 5ul stock + 5ml PBS
Pv-247 Capture 0.025ug/50ul 2.5ug 5ul stock + 5ml PBS
Masukan masing-masing 50ul larutan kerja Mab yang telah
dibuat pada step 4 pada setiap sumuran plate.
5.) Plate di tutup dan diinkubasi selama 0.5 Jam pada suhu ruang
6.) Setelah di inkubasi, buang cairan tersisa dan kemudian di
tepuk-tepukan pada kertas tisue untuk menghilangkan residu.
7.) ditambahkan Blocking Buffer 200ul ke dalam sumuran plate.
Tutup plate dan kemudian di inkubasi selama 1 jam pada suhu
ruang

8.) Setelah 1 jam, isi well dibuang dan tepuk-tepukan pada kertas
tissue untuk menghilangkan residu (sebanyak 5x)
9.) Masukan 50ul sampel, kontrol positif pada sumuran. Masukan
8 kontrol negatif pada sumuran B1-H1 plate yang sama. Plate
diinkubasi selama 2jam pada suhu ruang.
10.) Sambil menunggu inkubasi, menyiapkan larutan kerja
peroxidase conjugate.
Spesies ug/50ul/well ug/5ml ul Stock/5ml
Pf 0.050ug/50ul 5.0ug 10ul stok + 5ml BB
Pv-210 0.050ul/50ul 5.0ug 10u stok + 5ml BB
Pv-247 0.050ug/50ul 5.0ug 10ul stok + 5ml BB
Mengecek efektifitas enzim dengan mencampurkan 5ul
peroxidase conjugate dengan 100ul substrat kemudian
di vortex. Akan terjadi perubahan warna yang cepat yang
menunjukan enzim dan substrat masih berfungsi baik.
11.) Setelah 2 jam, cuci plate dengan PBS-tween sebanyak 2x. Tepuk
pada kertas tissue sebanyak 5x pada setiap tahap pencucian
12.) Menambahkan 50ul peroxidase conjugate (tahap 11) pada tiap
sumuran
13.) Menutup dan inkubasi selama 1 jam (jauhkan dari cahaya)
14.) Setelah 1 jam, mencuci kembali dengan PBS-Tween sebanyak
3x. Tepuk pada kertas tissue sebanyak 5x pada setiap tahap
pencucian
15.) menambahkan 100ul ABTS substrat pada setiap sumuran.
Menutup plate dan menginkubasi selama 30menit.
16.) Membaca plate dengan elisa reader panjang gelombang 405-
414nm. Cut off value adalah 2X rata-rata kontrol negatif.
17.) Sampel yang memiliki OD diatas cutoff value disimpulkan

positif Elisa Sporozoit Protein. Jika OD sampel mendekati cut
off Value, maka sampel tersebut harus diulang uji. Apabila
kontrol negatif memiliki data yang tidak seragam dan atau
lebih dari cuttoff value. Maka uji harus diulang.
4.5. Deteksi Molekuler Plasmodium Menggunakan Nested PCR

4.5.1 Pendahuluan
Deteksi molekuler Plasmodium, adalah teknik inkriminasi vektor
plasmodium dengan menggunakan deteksi DNA plasmodium.
Teknik ini tidak untuk menggantikan inkriminasi vektor dengan
metode Elisa Sporozoit. Karena keduanya memiliki target yang
berbeda. Metode ini lebih mudah dan cepat dibanding dengan
Elisa, akan tetapi metode ini mendeteksi DNA plasmodium semua
fase, tidak hanya fase Circumsporozoit protein. Prinsip deteksi
dengan PCR adalah, DNA total nyamuk di ekstraksi total DNA
nya. Kemudian total DNA tersebut di PCR dengan metode nested
PCR menggunakan primer genus spesifik dan spesies spesifik
Plasmodium. Keberadaan DNA Plasmodium, terbaca pada gel
Elektroforesis.
4.5.2. Dokumen terkait :
a. SOP laboratorium Biomol dan Imunologi B2P2VRP Salatiga
b. Buku manual kit master mix
4.5.3. Alat :
a. Thermocycle
b. Vortex
c. Elektroforesis Set
d. Tabung PCR

e. Rak tabung PCR
f. Mikropipet
g. Microsentrifuge
4.5.4. Bahan :
a. DNA kit (Qiagen)
b. Ethanol Absolute
c. Aquades
d. PBS
e. Ethanol 70%
f. Taq polimerase PCR Kit
g. Primer :
i. rPLU1 : TCA AAG ATT AAG CCA TGC AAG TGA
ii. rPLU5 : CCT GTT GTT GCC TTA AAC TCC
iii. rPLU3 : TTT TTA TAA GGA TAA CTA CGG AAA AGC TGT
iv. rPLU4 : TAC CCG TCA TAG CCA TGT TAG GCC AAT ACC
v. rFal 1 : TTA AAC TGG TTT GGG AAA ACC AAA TAT ATT
vi. rFal 2 : ACA CAA TGA ACT CAA TCA TGA CTA CCC GTC
vii. rViv 1 : CGC TTC TAG CTT AAT CCA CAT AAC TGA TAC
viii. rViv 2 : ACT TCC AAG CCG AAG CAA AGA AAG TCC TTA
ix. rMal 1 : ATA ACA TAG TTG TAC GTT AAG AAT AAC CGC
x. rMal 2 : AAA ATT CCC ATG CAT AAA AAA TTA TAC AAA
xi. rOva 1 : ATC TCT TTT GCT ATT TTT TAG TAT TGG AGA
xii. rOva 2 : GGA AAA GGA CAC ATT AAT TGT ATC CTA GTG
xiii. FKnowlesi : CAG AGA TCC GTT CTC ATG ATT TCC ATG G
xiv. RKnowlesi : CTR AAC ACC TCA TGT CGT GGT AG

4.5.5. Cara Kerja :
a. Ekstraksi DNA
1. Nyamuk yang telah dipisahkan berdasarkan spesies dan
metode penangkapan per tube 1,5 ml. Ditambahkan 200ul
PBS 1x. Gerus dengan gerusan (pestle).
2. ditambahkan 180 µl buffer ATL dan 20 µl protein kinase K.
Vortex hingga homogen.
3. Sampel diinkubasikan pada suhu 56⁰C hingga homogen
atau over night
4. Vortex sampel
5. Tambahkan 200ul buffer AL dan 200ul ethanol absolute.
Vortex
6. Masukan ke dalam minicoloumn. Sentrifuge 6000G atau
lebih selama 1 menit, buang supernatan ganti dengan
collection tube yang baru. Ulangi jika masih ada sisa
sampel dari tahap d.
7. Tambahkan 500ul buffer AW1. Sentrifuge 6000G atau
lebih selama 1 menit. Buang supernatan dan ganti dengan
collection tube yang baru
8. Tambahkan 500ul buffer AW2 dan sentrifuge full speed
selama 3 menit
9. Ganti dengan collection tube yang baru, sentrifuge kosong
full speed selama 1 menit
10. Ganti collection tube dengan tube 1,5ml yang baru.
Tambahkan 60ul buffer AE, inkubasi 1 menit dan sentrifuge
6000G 1 menit
11. Simpan DNA pada suhu -20 derajad celcius

b. PCR
1. First step nested PCR dengan primer PLU1 dan PLU5
1) Tabung PCR disiapkan, diberi kode sesuai dengan
kode isolasi DNA yang akan di-PCR.
2) Mix reagent disiapkan sesuai dengan jumlah sampel
yang akan diperiksa seperti tabel di bawah :
Reagen Volume per reaksi
2x reaction Mix 12,5µl
Primer rPLU1 1µl
Primer rPLU5 1µl
ddH2O 5,5µl
Total per reaksi 20 µl
3) mix reagen dibagi per tube PCR 20 µl
4) Template DNA ditambahkan sebanyak 5ul ke masing-
masing tube
5) Kontrol negatif ditambahkan di tube kontrol negatif,
dan kontrol positif di tube kontrol positif
6) Spining down tube PCR hingga tidak ada sampel/
reagen yang tertinggal menempel di dinding tabung.
7) Mesin thermocycle disiapkan untuk proses PCR.
8) Sampel dimasukan ke dalam mesin kemudian
dilaakukan proses PCR dengan suhu thermocycle
sebagai berikut :
1. Hot start
94oC 4 menit

2. Cycle step 35 cycle
94oC 30 detik
55oC 1 menit
72oC 1 menit
3. Final extention
72oC 4 menit
4. Hold
12oC ~
9) Mesin ditunggu hingga selesai bekerja.
10) Sampel dikeluarkan dari mesin untuk kemudian
dilanjutkan ke proses 2nd step PCR dengan primer
PLU3 dan PLU 4.
2. Second step PCR dengan primer PLU3 dan PLU4
yang akan diperiksa seperti tabel dibawah:
2x reaction Mix 12,5 µl
Primer PLU3 1 µl
Primer PLU4 1 µl
ddH2O 7,5 µl
3) Mix reagen dibagi per tube PCR 22 µl
4) Template RNA ditambahkan 3 µl ke masing-masing
tube
5) Kontrol negative ditambahkan di tube kontrol negatif,
dan kontrol positif di tube kontrol positif.

6) dilakukan spining down sampai tidak ada sampel/
sebagai berikut:
1. Hot start
94oC 4 menit
94oC 30 detik
62oC 1 menit
72oC 1 menit
3. Final extention
72oC 4 menit
4. Hold
12oC ~
10) Sampel dikeluarkan untuk kemudian dilanjutkan ke
proses elektroforesis dengan agarose 2% (Hasil
dinyatakan positif apabila target pita hasil elektroforesis
dari produk Nested PCR adalah 240bp).
11) Apabila hasil nested PCR menunjukan genus positif,
maka dilanjutkan analisa spesifik plasmodium.
3. Second step PCR dengan primer Spesies Spesifik
1) Sampel 1st PCR dengan primer PLU 1 dan PLU 5 yang
positif Plasmodium sp, disiapkan. Tabung PCR baru di
beri kode sampel yang sama.
yang akan diperiksa seperti tabel dibawah (mix reagen

spesies spesifik di bedakan tiap pasang primer):
2x reaction Mix 12,5 µl
Primer rViv1/rFal1/rOva1/rMal1 1 µl
Primer rViv2/rFal2/rOva2/rMal2 1 µl
ddH2O 7,5 µl
3) Mix reagen dibagi per tube PCR 22 µl

4) Template RNA ditambahkan 3 µl ke masing-masing
tube
5) Kontrol negative ditambahkan di tube kontrol negatif,
dan kontrol positif di tube kontrol positif.
6) dilakukan spining down sampai tidak ada sampel/
sebagai berikut:
5. Hot start
94oC 4 menit
94oC 30 detik
62oC 1 menit
72oC 1 menit
7. Final extention
72oC 4 menit
8. Hold
12oC ~

10) Sampel dikeluarkan untuk kemudian dilanjutkan ke
proses elektroforesis dengan agarose 2% (Hasil
dinyatakan positif apabila target pita hasil elektroforesis
dari produk Nested PCR adalah P.falciparum :205bp,
P.vivax: 117bp, P.malariae:144bp, P.ovale:787bp ).
4. Deteksi PCR Plasmodium knowlesi

yang akan diperiksa seperti tabel dibawah :
2x reaction Mix 12,5µl
Primer rPLU1 1µl
Primer rPLU5 1µl
ddH2O 5,5µl
3) mix reagen dibagi per tube PCR 20 µl
4) Template DNA ditambahkan sebanyak 5ul ke masing-
masing tube
5) Kontrol negatif ditambahkan di tube kontrol negatif,
dan kontrol positif di tube kontrol positif
6) Spining down tube PCR hingga tidak ada sampel/
dilakukan proses PCR dengan suhu thermocycle
sebagai berikut :

Hot start
94oC menit 4
Cycle step 35 cycle
94oC detik 30
57oC menit 1
72oC menit 1
Final extention
72oC menit 4
Hold
12oC ~
10) Sampel dikeluarkan untuk kemudian dilanjutkan
ke proses elektroforesis (Hasil dinyatakan positif
Plasmodium knowlesi apabila target pita hasil
elektroforesis dari produk PCR adalah 200bp)

V. INDIKATOR ENTOMOLOGI MALARIA
5.1. Tujuan
- Mampu memahami dan mengintepretasikan secara benar informasi
entomologi yang diperoleh dari hasil survai di lapangan
- Mampu mengidentifikasi indikator entomologi penularan malaria
- Dapat menghitung indikator entomologi yang berkaitan dengan
kebiasaan istirahat dan menggigit nyamuk vektor, kontak antara
manusia dengan vektor, serta angka inokulasi entomologi
(entomological inoculation rates) untuk malaria
- Mampu menghitung komponen dari kapasitas vektoral dan
memahami nilai untuk penularan malaria dan pengendaliannya
- Dapat mengintepretasikan penghitungan entomologi dan
dampaknya untuk pengendalian vektor malaria
5.2. Kepadatan nyamuk dan jentik

5.2.1. Kepadatan nyamuk
Merupakan jumlah nyamuk yang mengigit orang per malam atau
ayang lebih dikenal dengan istilah Man bitting rate (MBR) dan
jumlah nyamuk yang mengigit orang per jam atau yang lebih
dikenal dengan istilah Man hour density (MHD).
Jumlah Anopheles per spesies

MBR = ––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––
Jumlah hari (malam) penangkapan x jumlah penangkapan

Jumlah Anopheles per spesies
MHD = –––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––
Jumlah jam penangkapan x jumlah penangkapan
Berdasarkan nilai MBR, maka :

• Angka MBR < 0,025 sesuai angka baku mutu, kondisi relatife
aman
• Angka MBR ≥ 0,025 mempunyai potensi penularan penyakit
malaria
5.2.2 Indeks Habitat

Merupakan persentase habitat perkembangbiakan yang
ditemukan positif larva Anopheles.
Jumlah habitat yang positif larva Anopheles x 100%
Indek Habitat = –––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––
Jumlah seluruh habitat yang diperiksa
Berdasarkan angka indeks habitat, maka :

• Indeks habitat <1% sesuai dengan angka baku mutu, kondisi
relatif aman
• Indeks habitat ≥ 1% mempunyai potensi penularan penyakit
malaria
5.3. Perilaku menggigit

• Antrofofilik : nyamuk lebih memilih mengigit manusia
• Zoofilik : nyamuk lebih memilih mengigit hewan
• Endofagik : nyamuk lebih memilih mengigit di dalam rumah
• Eksofagik : Nyamuk lebih memilih mengigit di luar rumah
• Endofilik : Nyamuk lebih memilih istirahat di dalam rumah
• Eksofilik : Nyamuk lebih memilih istirahat di luar rumah

5.4. Indikator entomolog untuk monitoring penularan malaria
5.4.1. Umur dan tingkat infeksi nyamuk
Merupakan kemampuan bertahan hidup nyamuk betina setelah
menghisap darah (Probabilitas kemampuan bertahan satu hari
setelah menghisap darah (p) dengan interval 2 hari dengan
menghisap darah selanjutnya dapat diestimasi sebagai :
p= (Proporsi parous)
Apabila interval dengan menghisap darah selanjutnya adalah 3
hari, maka p menjadi:
3
p= (Proporsi parous)
Keterangan : p = probabilitas bertahan hidup dalam 1 hari

Pn = probabilitas bertahan hidup dalam n hari
5.4.2. Kapasitas vektorial

Kapasitas vektorial merupakan suatu indeks yang didefinisikan
sebagai suatu kapasitas dari suatu populasi vektor untuk
menularkan malaria. Adapun formulasi dari kapasitas vektorial
adalah :
Keterangan :
m = rerata kepadatan nyamuk Anopheles vektor menggigit orang
a = rerata jumlah orang digigit seekor nyamuk vektor tiap malam
p = harapan hidup/rerata kematian nyamuk vektor setiap hari
n = rentang waktu siklus gonotropik
b = jumlah hari satu siklus gonotropik
d= parity rate (proporsi nyamuk parous)
p = √d

Nilai kapasitas vektorial antarad 0,01 – 0,03 dapat digunakan
sebagai indikator bahwa spesies Anopheles dapat memelihara
endemisitas malaria
5.4.3. Entomological innoculation rates

Merupakan rerata harian jumlah gigitan nyamuk yang
mengandung sporozoit per orang
EIR = MBR x sporozoit rate (%)/100
Perhitungan sederhana (EIR) : s.m
Keterangan :
s = proporsi nyamuk vektor positif mengandung sporozoit, dapat
ditentukan dengan teknik uji ELISA
m= rerata kepadatan vektor menggigit orang
Berdasarkan data EIR, risiko penularan malaria dapat dikategorikan

sebagai berikut :
• Nilai EIR 1-10 = risiko penularan rendah
• Nilai EIR 11 – 100 = risiko penularan sedang
• Nilai EIR 101 – 1000 = risiko penularan tinggi

DAFTAR PUSTAKA
B2P2VRP, 2014. Riset Khusus Vektor dan Reservoir Penyakit ( RIKHUS

VEKTORA ) Pokok-Pokok Hasil Uji Coba Tahun 2014. , pp.1–75.
Becker N, Petrič D, Zgomba M, Boase C, Dahl C, Lane J, et al., 2010.
Mosquitos and their control,
CDC, 2018. Malaria - About Malaria - Biology. , pp.1–3. Available at:
https://www.cdc.gov/malaria/about/biology/index.html%0A
[Accessed August 30, 2018].
Elyazar IRF, Gething PW, Patil AP, Rogayah H, Sariwati E, Palupi NW, et
al., 2011. Plasmodium falciparum Malaria Endemicity in Indonesia
in 2010. PLoS ONE, 6(6), pp.1–13.
Elyazar IRF, Gething PW, Patil AP, Rogayah H, Sariwati E, Palupi NW, et
al., 2012. Plasmodium vivax malaria endemicity in indonesia in
2010. PLoS ONE, 7(5).
Elyazar IRF, Sinka ME, Gething PW, Tarmizi SN, Surya A, Kusriastuti R, et
al., 2013. The Distribution and Bionomics of Anopheles Malaria
Vector Mosquitoes in Indonesia. Advances in Parasitology, 83,
pp.173–266.
Heriyanto B, Boewono DT, Widiarti, Boesri H, Widyastuti U, Pattipeilohy
BC, et al., 2011. Atlas Vektor Penyakit di Indonesia, B2P2VRP.
Ministry of Health, 2016. InfoDatin Malaria. , pp.1–7.
MR4, 2015. Methods in Anopheles Research MR4, ed., Atlanta USA:
CDC. Available at: https://www.beiresources.org/Portals/2/

VectorResources/2016 Methods in Anopheles Research full
manual.pdf.
Rejmánková E, Grieco J, Achee N & Roberts DR, 2013. Ecology of
Jentikl Habitats. Anopheles mosquitoes - New insights into
malaria vectors. Available at: http://www.intechopen.com/books/
anopheles-mosquitoes-new-insights-into-malaria-vectors/
ecology-of-jentikl-habitats.
Rozendaal JA, 1997. Vector Control, Methods for Use by Individual and
Communities. WHO, Geneva.
Setiadi W, Sudoyo H, Trimarsanto H, Sihite BA, Saragih RJ, Juliawaty
R, et al., 2016. A zoonotic human infection with simian malaria,
Plasmodium knowlesi, in Central Kalimantan, Indonesia. Malaria
Journal, 15(1), pp.1–6.
Surjadjaja C, Surya A & Baird JK, 2016. Epidemiology of Plasmodium
vivax in Indonesia. American Journal of Tropical Medicine and
Hygiene, 95(69), pp.121–132.
World Health Organization, 2013. Malaria entomology and vector
control. World Health Organization, (July), p.192.
WHO. Malaria entomology and vector control.GUIDE FOR PARTICIPANTS.
2013


Survei Vector Malaria

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Survei Vector Malaria

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

SURVEI VEKTOR

DIREKTORAT JENDERAL PENCEGAHAN DAN PENGENDALIAN PENYAKIT

Penasehat : Direktur Jenderal Pencegahan dan Pengendalian

II PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

Malaria hingga saat ini masih menjadi permasalahan kesehatan

dr. Elizabeth Jane Soepardi, MPH, D.Sc

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA III

IV PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

V. INDIKATOR ENTOMOLOGI MALARIA............................................. 72

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA V

Tabel 1. Distribusi spesies Anopheles sebagai vektor malaria

VI PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA VII

VIII PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

Malaria masih menjadi salah satu masalah di Indonesia. Meskipun

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA 1

1.1. Siklus hidup Plasmodium

2 PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA 3

1.2. Siklus hidup Anopheles

4 PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

Gambar 3. Telur Anopheles (MR4, 2015)

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA 5

6 PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

1.2.4. Nyamuk Dewasa

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA 7

8 PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

2.2. Identifikasi Nyamuk

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA 9

10 PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

2.2.2. Taksonomi nyamuk anopheline di Indonesia

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA 11

2.2.3. Membedakan nyamuk anopheline dan culicine

12 PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

Nyamuk anopheline Nyamuk culicine

Pupa Permukaan air

Gambar 5. Perbandingan antara nyamuk anopheline dan culicine

Nyamuk anopheline dan culicine dapat dibedakan dari ukuran dan

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA 13

Nyamuk betina culicine Nyamuk betina anopheline

Nyamuk jantan culicine Nyamuk jantan anopheline

Gambar 6. Kepala nyamuk jantan dan betina culicine dan anopheline

2.2.4. Membedakan nyamuk Anopheles jantan dan betina

14 PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

2.2.5. Mengidentifikasi spesies nyamuk anopheline

2.2.6. Morfologi nyamuk Anopheles dewasa

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA 15

Gambar 7.Sayap Anopheles (urat utama)

16 PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

Gambar 8.Kaki nyamuk Anopheles

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA 17

18 PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

Gambar 10. Thoraks jentik anopheline

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA 19

2.2.8. Kunci untuk identifikasi secara morfologi

20 PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA 21

3.2. Surveilans Entomologi Malaria

22 PEDOMAN SURVEI VEKTOR MALARIA

3.2.1. Survai Pendahuluan

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA 23

3.2.2. Survai longitudinal/operasional

3.2.3. Survai sewaktu (Spot survai)

3.2.4. Survai intensif/survai khusus