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ESCUELA POLITECNICA DEL EJRCITO DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA INGENIERA EN BIOTECNOLOGA MICROBIOLOGA II

Nombres: Carla Bastidas, Cristina Caldern, Ana Del Hierro Nivel: Quinto D

Prctica N: 1 Fecha: 2010/10/14

TEMA: Aislamiento de Epfitas, endfitas, rizobacterias y Rhizobium a partir de una planta leguminosa
1. Introduccin:
Los microorganismos asociados con plantas estn presentes en diferentes zonas de las mismas, algunos presentan una gran importancia a nivel agrcola pues se ha encontrado que tienen actividad promotora del crecimiento vegetal en diferentes cultivos y ayudan a la planta a realizar una simbiosis para obtener nutrientes pero tambin existen microorganismos patgenos que causan graves enfermedades (Martnez, 2010). Primero, las bacterias epifitas, tambin llamadas filobacterias estn presentes en el exterior de la planta es decir en la rizsfera o filsfera. La microbiota bacteriana sobre las hojas es predominantemente aerobia, como la bacteria Pseudomona syringae, que est ampliamente distribuida en las superficies foliares. Estas bacterias son capaces de atacar a un determinado husped especfico, comportndose entonces como patgena y causando enfermedad. Pero tambin realizan interacciones en trminos de produccin de siderforos, produccin de antibiticos y bacteriocinas (Cazorla, 2007). Las bacterias endfitas viven en los espacios intercelulares de los tejidos de las plantas y dentro de tejidos vasculares sin causar dao o enfermedad a la planta. Cada uno de los microorganismos presentes en las plantas asociadas tienen caractersticas especficas de acuerdo a sus necesidades y entorno pues pueden estar en frutos, hojas, tubrculos, tallos, etc (Martnez, 2010). Otro tipo de microorganismo asociado a las plantas es Rhizobium o rizobios, estas son bacterias encontradas en el suelo en donde su principal funcin es proveer de nitrgeno a su planta hospedera mediante la fijacin de nitrgeno. Para poder realizar este proceso la bacteria establece una simbiosis dentro de los ndulos radiculares de las plantas leguminosas (Snchez, 2004). El objetivo planteado para este laboratorio es aislar Epfitas de una hoja, endfitas a partir del tallo, rizobacterias de la raz y Rhizobium de ndulos de la raz de una planta de frjol. La hiptesis del trabajo es: Se puede aislar bacterias, hongos y actinomicetos presentes en diferentes partes de la planta.

2. Materiales y Procedimiento:
2.1 Aislamiento de epfitas: 2.2 Aislamiento de Endfitas:
Se seleccion un tallo de frijol y se cort en algunos pedazos que no superaron los 2cm de largo. Posteriormente, se esteriliz la superficie de la muestra en etanol 70% durante 30 segundos y despus en una solucin de hipoclorito de sodio al 3% por 30 segundos. Se tom la muestra con pinzas estriles y se coloc el etanol, hipoclorito de sodio y agua destilada estril. Luego, se realiz tres lavados con agua destilada estril y se dej reposar la muestra durante un minuto en cada paso. Se coloc la muestra en un tubo de ensayo con 1 ml de agua estril y se macer la muestra. Se prepar dos cajas Petri con medios diferentes. La una con agar TSA (tripticasa soya agar) y se inocul el extracto en la misma. En la segunda caja Petri se realiz la inoculacin pero en agar PDA (agar papa dextrosa). o Finalmente, se incubaron las dos Cajas Petri a 28 C y se observ el crecimiento en la siguiente clase.

2.3 Aislamiento de Rizobacterias 2.4 Aislamiento de Rizobacterias

3. Resultados:

3.1 Aislamiento de epfitas: 3.2 Aislamiento de Endfitas:


Se obtuvo en cada caja Petri resultados parecidos. En la caja con agar TSA, se observ el crecimiento de un hongo con una coloracin amarilla clara extendido en casi toda la superficie . En el agar papa dextrosa se observ otro hongo de coloracin y morfologa parecida.

Caja Petri

Agar TSA Hongo

Figura : Muestra Caja Petri con aislamiento de endfitas a partir del tallo de frjol, se observa la presencia de hongos en la superficie del agar TSA

3.3 Aislamiento de Rizobacterias 3.4 Aislamiento de Rizobacterias

4. Discusin:
Existe una gran diversidad de bacterias rizofricas, esto genera la competencia por conseguir mayor cantidad de nutrientes y las expone a una serie de factores como ambientales. Por otro lado, las bacterias endfitas tienen algunas ventajas sobre las bacterias rizosfricas debido a que ellas se encuentran en contacto con la planta (Muoz, 2009). El problema que encontramos en la prctica fue que exisista contaminacin al momento de realizar el procedimiento de aislamiento de endfitas pero a pesar de eso se logr observar las diferencias entre los organismos aislados del tallo y pudimos observar que se trataban de hongos y bacterias.

5. Conclusiones:
Las endfitas son microorganismos no patgenos aislados a partir del suelo. Rhizobium tiene en sus races bacterias Gram negativas necesarias para la fijacin del nitrgeno.

6. Bibliografa:
MUOZ, JESS; MELLADO, JESS. Gluconacetobacter diazotrophicus, modelo de bacteria endfita: Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Cuernavaca Morelos. Mxico.2009. <http://www.biblioweb.dgsca.unam.mx/libros/microbios/Cap9/> [Consulta: 13 octubre 2010].

MARTNEZ MOLINA."Microorganismos endfitos amigos o enemigos de las plantas?". Revista Ciencia y Desarrollo, Abril 2010, Vol. 36, no. 242, p. <http://dialnet.unirioja.es/servlet/articulo?codigo=3269742> [Consulta: 14 octubre 2010].

SANCHEZ, JUAN MANUEL; Rhizobium: Universidad Michoacana de San Nicols de Hidalgo, Laboratorio de Microbiologa Ambiental. Edif. B-3, Mxico.2008 [Consulta: 14 octubre 2010].