AMINOCIDOS Y PROTENAS Leidy Mayerli Zambrano Jhon ibarguen Entregado: abril 06 de 2011 _______________________________________________________________________________ RESUMEN En la practica aminocidos y protenas

se demostraron 2 aspectos bsicamente, el primero de ellos como haciendo uso de las propiedades fsicas y qumicas de los aminocidos como son el caso de la carga elctrica podemos separar los aminocidos por medio de la electroforesis, pues estos emigraran hacia el electrodo opuesto a su carga, en este punto se utilizaron la alanina, la leucina y el acido asprtico, utilizando la cromatografa los podemos separar de acuerdo a la distancia de migracin que cada uno realice con respecto a la distancia de migracin efectuado por el disolvente utilizado, se obtuvo que la alanina tiene un Rf de 0.52, el acido aspartico uno de 0.2 y la leucina un Rf de 0.74, otro aspecto tambin importante que se demostr es como estas mismas propiedades nos ayudan a identificarlas como en el caso de la ninhidrina que reacciona con ellos para dar compuestos purpura con excesin de la prolina y la hidroxiprolina, otras tcnicas de identificacin son la prueba de biuret y la xantoproteica que se basan en presencia de enlaces peptdicos y aminoacidos con anillos aromticos en su estructura respectivamente, un aspecto igualmente estudiado fue la coagulacin de las protenas que puede ocasionarse por la desnaturalizacin de las mismas si por ejemplo son calentadas, a reaccionan con acidos fuertes, o pueden deberse a una disminucin de la solubilidad con el agua como ocurre con el sulfato de amonio, Tambin se estudio el efecto salting in. Palabras Claves: Cromatografa, electroforesis, Albmina, Insolubilizacin, Reacciones colorimtricas, aminocidos INTRODUCCIN Las protenas son las biomolculas que desempean uno de los papeles ms importantes para la vida, son muy diversas y verstiles. Por un lado, tienen un gran nmero de funciones en las clulas de todos los seres vivos, formando parte de la estructura bsica de los tejidos; por el otro, son demasiado importantes en las funciones metablicas y reguladoras, participando en funciones vitales para el crecimiento y desarrollo de los organismos. Igualmente, hacen parte del cdigo gentico de cada individuo. Su abundancia es enorme, estn constituidas por muchas unidades estructurales simples que forman cadenas. Estas macromolculas se componen principalmente de C,

O, H y N, muchas de ellas adems, contienen S y P; son complejas y de alto peso molecular (Hart, 2007). Las protenas se componen esencialmente de aminocidos, estos se unen en un nmero pequeo para dar lugar a un pptido; cuando hay hasta 10 de estos encadenados, se considera que se tiene un oligopptido, si el nmero es mayor, se tiene un polipptido, y si se cuenta con ms de 50 pptidos, se est hablando de una protena. En el medio, existen muchas protenas formadas por varios miles de pptidos (Hart, et al. 2007). Los aminocidos, las molculas esenciales de las protenas, se caracterizan por poseer un grupo carboxilo y uno amino. La principal funcin de estos es la regeneracin constante de las protenas, las cuales son consumidas en el metabolismo normal de los seres vivos. Se encuentran en los alimentos, pero no de manera individual sino en cadenas de pptidos, formando protenas. Muchas sustancias las captan y las desdoblan por hidrlisis, facilitando la absorcin de estas en la digestin. Para el ser humano hay 8 aminocidos indispensables, si alguno de estos falta, no ser posible la sntesis de protenas en la que se requiere dicho aminocido y esto causa trastornos en el organismo (Garrido et al, 2005). Los aminocidos pueden clasificarse segn la naturaleza de su grupo R, y por lo tanto, de acuerdo a esta clasificacin, las reacciones que dan son distintivas de los cidos carboxlicos y de aminas, debido a la presencia en su estructura de dichos grupos funcionales. Las diferentes pruebas, como la reaccin con ninhidrina, la de Biuret y la xantoproteica, permiten identificar, la primera, la determinacin cuantitativa de aminicidos, la segunda, la presencia de enlaces peptdicos y la ltima, identificar anillos aromticos (Hart, et al, 2007) La cromatografa sobre papel permite la separacin e identificacin de aminocidos gracias a la migracin que realizan por medio de un solvente. Fundamentalmente, este es un proceso de distribucin entre una fase acuosa estacionaria: agua del solvente ms celulosa y, una fase orgnica mvil: pasa por encima a travs de la celulosa impregnada de agua. El mtodo ascendente es aquel en que la muestra se coloca en la parte baja del papel, que se sumerge en el solvente revelador del fondo del recipiente. Para ello, se usa papel filtro Whatman #1, el cual se compone de celulosa a base de linters de algodn, sin cola ni agregados solubles (tampoco solubles en solventes orgnicos). Es homogneo y corre con lentitud, es decir que se necesita una hora o ms para lograr la ascendencia del solvente (Cramer, 1958; Ayres, 1968). La ninhidrina es muy sensible e ideal para la deteccin de aminocidos en cromatogramas y su determinacin cuantitativa en fracciones de columnas debido a su coloreada reaccin morada con -aminocidos (Plummer, 1978). La mayora de las molculas biolgicas poseen una carga elctrica determinada, y esta depende de la magnitud de la molcula, del pH y de la composicin del medio en el cual se halle. Si a una solucin de molculas cargadas se le aplica un campo elctrico, estas molculas migraran hacia los electrodos de polaridad opuesta a la suya. Este principio se usa en electroforesis para separar molculas que poseen cargas diferentes. La base para llevar a cabo este experimento fue tambin el papel Whatman, humedecido totalmente en la solucin tampn y dispuesto hacia los polos del aparato de electroforesis (Bohinski, 2001).

El objetivo principal de la practica fue separar aminocidos experimentalmente por medio de la aplicacin de tcnicas como la electroforesis y la cromatografa, y conocer el fundamento de dichas tcnicas, tambin identificar aminocidos haciendo uso de sus propiedades fsicas y qumicas. A nivel de protenas determinar y fundamentar cuando una protena puede desnaturalizarse. MATERIALES Y MTODOS Los materiales y el procedimiento de la prctica de laboratorio corresponde con el indicado en: Gua de Laboratorio de Biologa Celular y Bioqumica I, Aminocidos y protenas; Universidad del Valle, Cali. RESULTADOS En la practica de laboratorio se realizaron experimentos que permitieron la identificacin y separacin de aminocidos, y otros donde se evidencio la coagulacin o desnaturalizacin de las protenas. Separacin de aminocidos por medio de la cromatografa de papel: en este punto se utilizo papel Whatman # 1, con el fin de observar que desplazamiento de la alanina, el acido asprtico, la leucina y una mezcla entre los 3 aminocidos. Se mide la distancia de migracin del disolvente y la distancia de migracin de cada uno de los aminocidos se tomo desde el centro de la mancha y se encuentra el Rf para cada uno de ellos, en la tabla N 1 se muestran el valor de Rf para cada aminocido y en la figura N 2 el desplazamiento realizado por los mismos.

La distancia de migracin del solvente fue de 8.5 Cm. Tabla N 1: distancia de migracin y Rf de los aminocidos alanina, leucina y acido asprtico. MIGRACION (Cm) 4,5 1,7 6,3

AMINOACIDO Alanina A. aspartico Leucina

Rf 0,52 0,2 0,74

Figura N 2. Migracin realizada por los aminocidos estudiados. Separacin de aminocidos por medio de electroforesis: para este procedimiento nuevamente se utilizo el papel Whatman # 1, y con la ayuda del aparato de electroforesis se determino la carga electrica de 3 aminocidos (alanina, cido asprtico y lisina), de a cuerdo a su desplazamiento pues cada una migro hacia su electrodo de su polaridad opuesta, los resultados se muestran en la tabla N 3 y en la figura N 4 se muestra el desplazamiento sufrido por cada aminocido. Tabla N 3: aminocidos y la determinacin de su carga elctrica. CARGA ELECTRICA negativa neutra positiva

AMINOACIDO acido aspartico Alanina Lisina

Figura N 4: imagen de la ubicacin de los aminocidos, en el campo elctrico presente en el papel Whatman. Parte derecha polo positivo con el acido asprtico en el, parte izquierda polo negativo con la lisina y la alanina en el.

Reaccin de los aminocidos con la ninhidrina: es este punto se evalu la reaccin de 3 aminocidos con el reactivo de ninhidrina, en un principio el compuesto contenido en los tubos de ensayos era translucido, pero una vez se calentaron estos cambiaron de color. Los resultados obtenidos se muestran en la tabla N 5 y grficamente en la figura N 6. Tabla N 5: coloracin presentada por los tubos despus de haber sido calentados. AMINOACIDO + COLORORACION NINHIDRINA Arginina Glicina Prolina azul oscuro azul oscuro intenso amarilla

Figura N 6: apariencia de los aminocidos mezclados con ninhidrina, despus de haber sido calentados. Coagulacin de una protena: para este punto se dispuso de 5 tubos de ensayo con 3 ml de solucin de albumina al 2%. El primer tubo de ensayo se calent hasta que la albumina comenz a coagularse este momento se pudo identificar porque la albumina comenz a espesarse y a formar pequeas partculas gelatinosas, esto ocurri a una temperatura de 44C. Al segundo tubo de ensayo se le agrego 4 ml de acetona y se observo la formacin de 2 fases, la primera de color blanco y predominante (sedimento), la segunda translucida opaca (sobrenadante), con el paso del tiempo se formo una tercera capa en la parte superior translucida. Esto se muestra en la figura N 7.

Figura N 7: imagen que muestra apariencia de la albumina mezclada con acetona.

Al tercer tubo de ensayo se le aadi 1 ml de HCl 9N y se evidencio la formacin de una solucin homognea de color blanco, muy espumosa y densa, como se muestra en la figura N 8.

Figura N 8: imagen que muestra la apariencia de la albumina mezclada con HCl. Al cuarto tubo de ensayo se le agrego 2 ml de NaCl al 20% y se noto que el contenido del tubo de ensayo permaneci con una sola fase translucida pero mas opaca, esto se muestra en la figura N 9

Imagen N 9: imagen que muestra la apariencia de la albumina mezclada con NaCl. El quinto tubo se utilizo como control para determinar si con los tubos restantes haba o no ocurrido algn tipo de reaccin. Insolubilizacin reversible e irreversible: se tomaron 2 tubos de ensayo con 5 ml de solucin de albumina cada uno. Al primer tubo de ensayo se le agregaron 2.5 g de sulfato de amonio, la manera de hacerlo fue en pequeas porciones y agitando constantemente, el procedimiento seguido y los resultados de dicho procedimiento se muestran en la tabla N 11.

Figura N 10: imagen de la apariencia presentada por la lbumina mezclada con sulfato de amonio.

Tabla N 11 resultados de una insolubilizacin reversible con sulfato de amonio. PROCEDIMIENTO RELIZADO A 5 ML DE SOLUCION DE ALBUMINA Agregar 2,5 g de sulfato de amonio. Centrifugar a 3000 r.p.m por 10 minutos Agregar 4 ml de agua destilada al sedimento RESULTADO OBTENIDO Paso de ser una solucin translucida turbia, a una mezcla homognea color blanco con espuma y densa. se formo un sedimento de color blanco, con apariencia gelatinosa pues aunque era compacto no era muy solido El sedimento se diluyo en el agua y se torno translucida turbia, es decir no hay diferencia entre la solucin original de albumina y esta.

Al tubo N 2 se le agrego 1 ml de acido tricloroacetico al 50%, el procedimiento seguido y los resultados obtenidos se tabulan en la tabla N 12. Tabla N 12 resultados de una insolubilizacin irreversible con acido tricloroacetico. PROCEDIMIENTO RELIZADO A 5 ML DE SOLUCION DE ALBUMINA Agregar 1 ml de acido tricloro acetico Centrifugar a 3000 r.p.m por 10 minutos Agregar 4 ml de agua destilada al sedimento

RESULTADO OBTENIDO se evidencio la formacion de 2 capas, un sobrenadante trnaslucido y un precipitado que contiene la proteina de color blanco muy compacto. se formo un sedimento de color blanco, solido el sedimento se disolvio en el agua, quedando de un color blanco, espeso. En comparacion con la solucion original no son iguales

Figura N 13: imagen de la apariencia presentada por la albumina mezclada con acido tricloroacetico. Algunas reacciones colorimtricas de las protenas: en este punto se llevaron a cabo 2 reacciones la de biuret y la xantoproteica.

La reaccin de biuret es una prueba colorimtrica utilizada para evidenciar la presencia de protenas, para determinar si la prueba es positiva o no el compuesto pasa de un color azul a violeta en presencia de protenas y a rosa en presencia de polipptidos de cadena corta. Para esta prueba se utilizaron 2 tubos de ensayo, el primero con 3 ml de solucin de albumina y el segundo con 3 ml de agua destilada. Los resultados obtenidos se muestran en la tabla N 14. Tabla N 14 resultados obtenidos cuando se llevo a cabo la reaccin de biuret en albumina y agua destilada. TUBO DE ENSAYO 3 ml de NaOH al 20% Solucin translucida turbia, es decir que no ocurri ningn cambio con respecto a la solucin de albumina original. solucin translucida 1 ml de sulfato cprico La solucin se torno de un color violeta intenso homognea. La solucin se torno de un color azul claro con la presencia de una fase.

3 ml de solucin de albumina

3 ml de agua destilada

En la imagen N 15 se muestra la coloracin obtenida en los tubos de ensayo.

Figura N 15: coloracin obtenida con la reaccin de biuret. Parte derecha agua destilada, parte izquierda solucin de albumina. La reaccin xantoproteica es una prueba cualitativa que determina si una protena contiene en su estructura aminocidos con anillos aromticos, si la prueba es neutralizada la solucin se torna de un color amarillo. En esta prueba se utilizaron 2 tubos de ensayo, uno con 3 ml de solucin de albumina y el segundo con 3 ml de agua destilada. Los resultados obtenidos se muestran al la tabla N 16.

Tabla N 16 resultados obtenidos cuando se llevo a cabo la reaccin xantoproteica en albumina y agua destilada. TUBO DE ENSAYO 3 ml de acido nitrico calentar 3 ml de hidroxido de amonio sedimento de color amarillo plido, seguido de una fase acuosa translucida, continua el mismo sedimento de color amarillo , posteriormente una fase de un color amarrillo mas intenso y por ultimo un sobrenadante translucido con grumos amarillos en el. no ocurre nada

3 ml de solucin de albumina

solucin homognea de color blanco

la solucin se torna muy densa, y se forman pequeos grumos de color amarrillo

3 ml de agua destilada

permanece translucida

no ocurre nada

Figura N 17: apariencia del tubo de ensayo que contena originalmente la solucin de albumina y fue sometida a la reaccin xantoproteica. DISCUSIN Para llevar a cabo la separacin de los aminocidos alanina, leucina y acido asprtico, se utilizo la cromatografa ascendente de papel, en la cual la celulosa que conforma las hojas de papel constituye un medio de soporte muy til pues este polisacrido absorbe el agua en medio de sus fibras, formando de esta manera la fase hidrofilica estacionaria (Plummer, 1981). Para identificar los aminocidos que intervinieron en la cromatografa se tiene en cuenta la razn entre la distancia que ha migrado el compuesto y la recorrida por el solvente (Rf), pues este valor es mas o menos constante para un compuesto, sistema de solventes y clase de papel determinados si se controlan condiciones como concentracin de soluto, temperatura y pH. ( Plummer, 1981). La cromatografa ascendente tiene la ventaja de que la separacin se pueda hacer en 2 dimensiones. La cromatografa en papel se utiliza principalmente para separar solutos hidrofilicos, el papel permite que los disolventes polares como el agua se adhieran a los grupos hidroxilos terminales presentes en el polmero formado mediante puentes de oxigeno entre unidades de glucosa anhidra, lo que hace que la celulosa sea un alcohol polihidroxilado (Varcancel, 1988), el papel al contener pequeas cantidades de grupos carboxlicos, lo que confieren al papel un cierto carcter de

cambiador catinico que puede provocar la retencin de solutos macromoleculares. El disolvente utilizado como fase mvil depende de las caractersticas de los solutos a separar, este disolvente sube por capilaridad a travs del papel, desplazando a los solutos a distintas alturas. (Varcancel, 1988). Los aminocidos ms pesados se quedaban abajo debido a que el solvente no los poda arrastrar, los ms livianos fueron hacia la parte superior del papel, siendo as el ms pesado, el cido asprtico y el ms liviano la leucina. La alanina fue trmino medio. Otro mtodo que se uso para la separacin de aminocidos fue la electroforesis, con la cual se separaron e identificaron la alanina, el acido asprtico y la lisina. Esta tcnica se basa en la carga elctrica de las molculas biolgicas que se desean separar, sometidas a un campo elctrico, las cuales migraran hacia los electrodos de polaridad opuesta, en donde la movilidad de la molcula depender de la viscosidad del medio, del tamao, de la forma y de la carga de la molcula, mientras que la movilidad electrofortica depende de los grupos ionizables presentes en la superficie de la partcula, mientras que el signo y la magnitud de la carga que poseen los grupos ionizables dependen de la fuerza ionica y el pH del medio. (Plummer, 1981). En la electroforesis el pH es de suma importancia en la separacin electrofortica, en el punto isoelctrico el aminocido esta como zwitterion, sin carga neta es decir en forma molecular por lo que carece de movilidad ionica. (Varcancel, 1988), en la practica se utilizo un pH de 5.0, pues si el pH elegido es cercano a el PI de alguno de los aminocidos presente en la muestra este tendr una menor velocidad de desplazamiento en comparacin a los dems aminocidos. La alanina es un aminocido no polar, de carcter hidrofobico y neutro por lo cual durante la electroforesis no tubo mayor desplazamiento pues al no estar cargado positiva ni negativamente, ninguno de los electrodos lo atrajo para que tuviera algn tipo de desplazamiento, este conocimiento previo permiti su rpida identificacin, caso contrario ocurri con el acido asprtico que al ser un aminocido cargado negativamente, acido ya que su grupo R posee una carga negativa neta de pH 7.0, se desplazo hacia el electrodo positivo debido a la gran fuerza de atraccin que produjo el campo elctrico, a diferencia del acido asprtico, la lisina que al ser una aminocido bsico, en el cual su grupo R posee una carga positiva neta a pH 7.0 se desplazo lgicamente hacia el electrodo negativo por el mismo motivo que lo hizo el aspartato. Esto se evidencio con la utilizacin del reactivo de ninhidrina sobre el papel Whatman #1, que por el par de electrodos del aparato de electroforesis, adquiri un campo electromagntico. Los aminocidos se observaron como manchas violetas en el papel y efectivamente se comprob que los aminocidos haban migrado hacia el electrodo opuesto a su carga. La ninhidrina (hidrato de tricetohidrinceno), es un agente reductor poderoso, el cual reacciona con todos los -aminocidos a un pH entre 4.0 y 8.0 para dar un compuesto color purpura. Para el caso de la prolina y la hidroxiprolina, ya que al ser iminoacidos la cloracin obtenida no es purpura sino de un color amarillo. (Plummer, 1981), este reactivo un reactivo muy comn para visualizar las manchas o bandas de aminocidos que se han separado por cromatografa o electroforesis. El color violeta intenso se debe al anin estabilizado por resonancia denominado purpura de rubermann, y siempre ser la misma coloracin independiente de cual sea la estructura del aminocido utilizado, pues la cadena lateral del aminocido se pierde en forma de aldehdo. (Wade, 2004)

Figura N 18: imagen de la reaccin de un aminocido con ninhidrina (Wade, 2004) Para observar el proceso de coagulacin de una protena se llevaron a cabo 4 experimentos unos de ellos consisti en calentar la albumina del huevo motivo por el cual sufri una precipitacin irreversible, conocida comnmente como desnaturalizacin, este fenmeno tambin pudo ser causada por cidos o bases fuertes. La desnaturalizacin produjo un cambio fundamental en la albumina, pues destruyo toda su actividad fisiolgica, es decir cambio su estructura secundaria. (Morrison, 1959). La desnaturalizacin de una protena se lleva a cabo mediante la alteracin del equilibrio de las fuerzas dbiles no enlazantes que mantienen la conformacin nativa, una causa de desnaturalizacin como se menciono en el prrafo anterior es el calentamiento pues las propiedades pues las propiedades sensibles desde el punto de vista conformacional, como la rotacin ptica, la viscosidad y la absorcin uv presentes en la albumina, sufren cambios abruptos por encima de un estrecho rango de temperatura. Estos cambios hacen que el polipptido se despliegue o derrita cooperativamente. (Voet, 2006). La disolucin de un solvente orgnico, como la acetona o un alcohol, en una solucin de protena en agua como ocurri en el segundo experimento, para observar la coagulacin de una protena disminuye la constante dielctrica del disolvente, desplaza tambin algunas de las molculas de agua asociados con la protena y reduce la concentracin de agua presente en la solucin. Estos efectos tienden a disminuir la solubilidad de la protena, y ello se utiliza frecuentemente en la adicin de estos disolventes para precipitar protenas de sus soluciones. (Garrido, 2005) El acido clorhdrico al ser un acido muy fuerte ocasiona la precipitacin de una protena, pues la desnaturaliza como ocurri cuando fue calentada. Si se agregan a una solucin de protena en agua pura pequeas cantidades de sal, disminuye el coeficiente de actividad de la protena y su solubilidad aumenta. A este fenmeno se le conoce como salting in y se debe a las fuerzas de atraccin entre los iones de la protena y los iones de la sal. A concentracin baja el aumento en el logaritmo de la solubilidad de la protena es proporcional a la fuerza inica del disolvente. Este fenmeno se aplica por que al aadir una pequea cantidad de iones extraos se aumenta el desorden molecular, con ellos la entropa se hace mayor y no habiendo variacin de entalpia, el cambio de energa libre es negativo y esto supone una tendencia espontanea al aumento de solubilidad. (Garrido, 2005) La albumina se precipita solo cuando la solucin se satura con sulfato de amonio a un pH cercano a su punto isoelctrico (Plummer, 1981). A concentraciones elevadas de sales muy solubles como,

sulfato amnico, se observa precipitacin salina o salting out de las protenas, la cual depende de la disminucin de la actividad del agua, lo que a su vez disminuye las interacciones solubilizantes entre el agua y los grupos de la protena. Es decir, que cuando aumenta mucho la cantidad de iones extraos, la interaccin protena- protena se hace mayor que la interaccin agua- protena, baja la movilidad de las cargas proteicas y las protenas se precipitan. (Garrido, 2005) Es por esto que cuando se agrega mas agua a la solucin la concentracin de sulfato de amonio disminuye, los que hace que las interacciones agua-protena sean mayores que las interacciones protena- protena. Este tipo de precipitacin es reversible debido a que no se desnaturaliza la protena. Por su parte el acido tricloroacetico, al ser un acido muy fuerte tiene el mismo efecto sobre la protena que el acido clorhdrico, o cualquier otro acido fuerte pues la desnaturaliza, causando la precipitacin de la protena en solucin. La coagulacin se produce por la disociacin del ion de cloro y su formacin en el ion acetato, el cual es cido; quienes compiten con los grupos cargados positivamente de las protenas disueltas en las molculas de agua disponibles para su solvatacin. Con esto se disminuye la hidratacin de la albmina y causa un aumento en las interacciones de las protenas. El cambio a un pH cido provoca el quiebre de los enlaces de disulfuro, los cuales determinan la estabilidad de la estructura tridimensional de la albmina, por lo cual es desnaturalizada, perdiendo as su propiedad fsica de solubilidad (Garrido, 2005) Las protenas reflejan las propiedades qumicas de los aminocidos presentes en ellas, por lo que algunas reacciones alteran los enlaces peptdicos presentes en estas; esto fue lo que sucedi con la reaccin xantoprotica. Los resultados de diferentes reacciones permiten identificar, que de acuerdo a la naturaleza de algunos reactivos se puede reconocer algunos aminocidos presentes en algunas protenas, esto se debe a la composicin, estructura, pH, etc. Sin embargo, no solo hay pruebas que reconocen la presencia o ausencia de determinados aminocidos, hay otras, como la reaccin de Biuret, que identifica en una solucin la concentracin de una protena, tiendose la coloracin de acuerdo a la concentracin de las mismas. En la reaccin de Biuret, se observo la aparicin de una coloracin violeta, la cual resulta cuando los iones Cu+2 en medio alcalino se complejan con los electrones desapareados de los tomos de nitrgeno y oxgeno presentes en los enlaces de las protenas. Esta reaccin est dada por aquellas sustancias cuyas molculas contienen dos grupos carbamino (-CO.NH) unidos directamente o a travs de un solo tomo de carbono o nitrgeno. El reactivo de Biuret contiene Cu2SO4 en solucin acuosa alcalina, gracias a la presencia de NaOH. La reaccin se basa en la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu+2 y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos (Campbell, 2007). En la reaccin Xantoproteica, se observ que la coloracin de la solucin pasa de incolora a un color amarillo. Esta prueba sirve para caracterizar a los aminocidos aromticos, debido a que se produce la nitracin del anillo benclico presente en los aminocidos prolina y triptfano presentes en la albmina, obtenindose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en un medio fuertemente alcalino (Smith y Cristol, 1972). La adicin de cido ntrico concentrado a soluciones que contienen protena, generalmente causa la formacin de un precipitado blanco que

cambia a amarillo al calentarlo. El color se empieza a convertir en anaranjado cuando la solucin se vuelve bsica por la formacin de sales, en el caso de la prctica, al agregar hidrxido de sodio se observa que el color amarillo inicial cambi gradualmente a anaranjado, obteniendo un resultado positivo para esta reaccin.

Para concluir podemos decir que los aminocidos al poseer en su estructura un grupo amino y un grupo carboxilo, lo cual les confiere la capacidad de actuar bien sea como cidos o como bases, dependiendo de las condiciones en las cuales se encuentre es un factor muy importante en el momento de separarlos o de identificarlos, esto se demuestra perfectamente en la electroforesis pues donde debido a la carga elctrica que posee cada aminocido migraran a los electrodos de su polo opuesto permitiendo identificarlos si estn en una mezcla o separados. Esta caracterstica de los aminocidos los hace muy reactivos permitiendo el desarrollo de numerosas reacciones que nos permiten identificarlos basndose en la estructura que poseen, como en el caso de la reaccin xantoproteica en la cual se puede identificar si los aminocidos que conforman una protena poseen en sus estructuras anillos aromticos, o si forman entre ellos enlaces peptdicos como ocurre con la reaccin de biuret. Se observo que la desnaturalizacin es el fenmeno por el cual una protena pierde su actividad fisiolgica debido al cambio abrupto de sus propiedades y que esta puede darse por el calentamiento o por la reaccin con cidos fuertes, mientras que la solubilidad de las protenas pueden se reversibles o irreversibles, el primero se puede mencionar el fenmeno presentado cuando interactan con grandes concentraciones de sal y el segunda se debe a la desnaturalizacin. BIBLIOGRAFIA -Campbell, P. 2007. Bioqumica ilustrada: Bioqumica y biologa molecular en la era posgenmica. Editorial Elsevier, Espaa, pp. 242. -Garrido, A; Teijon, R. 2005. Fundamentos de bioqumica estructural. Editorial Tebar. Madrid. 77, 78 p. -Hart, H. Hart, D. 2007. Qumica Orgnica. Editorial McGraw-Hill, Bogot. 212-214, 489-502 p. -Morrison, T. 1959. Qumica organica (5 ed). Editorial Iberoamericana. New york. 1342 p. -Plummer,D. 1981. Bioqumica practica. Editorial mcgraw-hill, bogota, 73,129,141 p. -Smith, L; Cristol, J. 1972. Qumica Orgnica. Editorial Revert, Mxico, 990 p. -Varcancel. 83,109,119,333,401,402 p. -Voet, P. 2008. Fundamentos de bioqumica: la vida a nivel molecular (2 ed). Editorial Panamericana. Espaa. 159 . -Wade, L.G. 2008. Qumica organica (5 ed). Editorial Panamericana. Espaa. 1131 p.