ESTUDO DO POTENCIAL GENOTXICO/MUTAGNICO E ANTIMUTAGNICO DO EXTRATO DE Maytenus robusta EM CLULAS SOMTICAS DE CAMUNDONGOS Mus musculus in vivo.

In vivo GENOTOXIC/MUTAGENIC AND ANTIMUTAGENIC EVALUATION OF THE Maytenus robusta EXTRACT IN Mus musculus MICE SOMATIC CELLS. Taiuani Marquine Raymundo, Marcela Favilla, Edson Luis Maistro. Campus de Marlia, Faculdade de Filosofia e Cincias - edson.maistro@marilia.unesp.br PIBIC/CNPq. Palavras chave: antimutagnese. Maytenus robusta; ensaio cometa; teste do microncleo;

1. INTRODUO Espcies do gnero Maytenus, tem tido ateno especial devido sua atividade anti-lcera. Maytenus ilicifolia tem sido considerada a principal espcie da famlia Celastraceae no que diz respeito a aplicaes fitoterpicas, sendo utilizada para o tratamento de lceras gstricas. Entretanto, devido ao seu uso indiscriminado e sem preocupao com preservao, esta espcie encontra-se em estgio de extino, e, por esta razo, com grande interesse por parte dos pesquisadores em substitu-la por M. robusta, abundante no Brasil, e tambm com atividade anti-lcera sendo comprovada (NIERO et al., 2001).

2. OBJETIVOS Como o extrato de M. robusta nunca teve seu potencial genotxico investigado, elaborou-se este projeto visando analisar duas potencialidades do mesmo: o potencial genotxico/mutagnico, utilizando o ensaio cometa e o teste do microncleo, respectivamente, e o potencial antimutagnico, atravs do teste do microncleo.

3. MATERIAL E MTODOS O extrato hidroalcolico de Maytenus robusta foi obtido no laboratrio de farmacologia da Universidade do Vale do Itaja (UNIVALI). Os experimentos foram desenvolvidos em 8 grupos de camundongos Suos albinos, constitudos cada um por seis animais machos. Foram testadas as concentraes de 50, 250 e 500 mg/kg do extrato de Maytenus robusta. O controle positivo foi feito com a droga Ethyl-nitroso-uria (ENU) e o controle solvente com tween a 1%. Foram utilizados no experimento o Ensaio Cometa e o Teste do Microncleo (SCHMID, 1975).

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Os resultados foram comparados entre si e com o controle negativo utilizando os testes One-Way (ANOVA) e Tukey-Kramer para comparaes mltiplas (SOKAL and ROHLF, 1995),

4. RESULTADOS E DISCUSSO
O Ensaio Cometa Single Cell Gel Electrophoresis (SCGE) envolve a corrida de clulas nicas em gel de eletroforese, sendo um mtodo muito sensvel e de confiana para a deteco de quebras nas fitas de DNA (ROJAS et al., 1999; PIPERAKIS et al., 1999).

Os resultados com os dados obtidos pelo ensaio cometa abrangendo o nmero de clulas com danos e os scores dos grupos de animais tratados com as doses de 50, 250 e 500 mg/kg do extrato, ao lado dos controles negativo e positivo, esto apresentados na Tabela 1. Como esperado, a droga Ethyl-nitroso-uria (ENU), utilizada como controle positivo, mostrou um aumento estatisticamente significativo na migrao do DNA dos
leuccitos (P < 0.001). Um aumento estatisticamente significativo nos danos do DNA dos leuccitos foi observado nas duas maiores concentraes do extrato (P < 0.001). Quando as clulas foram expostas s trs concentraes do extrato, a maioria das clulas no apresentaram danos significativos (classe 0), poucas clulas apresentaram danos mnimos (classe 1) e bem poucas clulas apresentaram grande quantidade de danos (classes 2 e 3). Alm disso, houve diferenas estatisticamente significativas na migrao de DNA entre as duas maiores concentraes e a menor do extrato. Com base no delineamento experimental desenvolvido e nos resultados obtidos, pode-se concluir que o extrato de folhas de P. cattleyanum no apresentou efeito genotxico no genoma de leuccitos de camundongos Suos albinos.

Os resultados da avaliao da mutagenicidade do extrato mostraram que nenhuma das concentraes testadas acarretou aumento significativo de eritrcitos policromticos micronucleados (EPCMN) (Tabela 2). Na anlise da razo de eritrcitos policromticos (EPC) e eritrcitos normocromticos (ENC), foi observado um aumento de EPC na maior dose do extrato. Nos ensaios de antimutagenicidade, as 3 concentraes do extrato diminuram significativamente a mdia de EPCMN nos animais que receberam o ENU.

Tabela 1 - Migrao do DNA no ensaio cometa na avaliao de genotoxicidade do extrato de Maytenus robusta em leuccitos de sangue perifrico (coletados 24 h aps o tratamento) de camundongos Swiss machos (M) in vivo.
Tratamentos Animais M1 M2 M3 M4 M5 M6 Total1 0 1 2 4 1 0 0 100 99 98 96 99 100 Classes do cometa 1 0 1 2 4 1 0 2 0 0 0 0 0 0 3 0 0 0 0 0 0 0 1 2 4 1 0 Scores

Controle solvente (Tween 1%)

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M. robusta extract (50 mg/kg)

M. robusta extract (250 mg/kg)

M. robusta extract (500 mg/kg)

Etil-nitroso -uria (50 mg/kg)

Mdia SD 1.33 1.50 M1 1 M2 0 M3 0 M4 7 M5 0 M6 0 Mdia SD 1.33 2.80 M1 15 M2 12 M3 13 M4 15 M5 21 M6 9 a Mdia SD 14.16 4.02 M1 16 M2 14 M3 8 M4 14 M5 10 M6 15 Mdia SD 11.16a4.21 M1 13 M2 21 M3 22 M4 30 M5 22 M6 15 Mdia SD 20.50a6.02

99 100 100 93 100 100 85 88 87 85 79 91 84 86 92 86 90 85 87 79 78 70 78 85

1 0 0 7 0 0 10 8 10 11 15 8 13 10 7 11 9 12 9 13 13 14 15 11

0 0 0 0 0 0 5 4 3 4 6 1 3 4 1 3 1 3 4 7 7 10 7 4

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 2 6 0 0

1.33 1.50 1 0 0 7 0 0 1.33 2.80 20 16 16 19 27 10 18.00b 5.62 19 18 9 17 11 18 15.33b4.22 17 30 33 52 29 19 30.00a12.5

a b 1

Significantly different from vehicle control (p < 0.001). Significantly different from vehicle control (p < 0.01). Total number of cells with damage (class 1+2+3).

Table 2 Number of micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) observed in the bone marrow cells of male (M) Swiss mice treated with a Maytenus robusta extract, and respective controls. Two thousand cells were analyzed. SD = standard deviation.
Treatments Number of MNPCE per Animal MNPCE Mean SD M1 M2 M3 M4 M5 M6 PCE/NCE Mean SD

Vehicle coltrol (Tween 1%) M. robusta (50 mg/kg) M. robusta (250 mg/kg) M. robusta

5.33 1.63

1.09 0.05

2.83 1.72

1.22 0.23

3.50 2.88

1.29 0.15

1.83 2.13

1.51c 0.12

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(500 mg/kg) Etil-nitroso-uria (ENU) (50 mg/kg) M. robusta+ ENU (50 mg/kg) M. robusta+ ENU (250 mg/kg) M. robusta+ ENU (500 mg/kg) 5 5 2 5 1 3 3.50b 1.76 3 2 3 4 1 3 2.66b 1.03 2 3 3 1 3 5 2.83b 1.32 17 19 12 15 16 19 16.33a 2.13 1.24 0.23

a b c

Significantly different from vehicle control (p < 0.001). Significantly different from Cyclophosphamide alone (p < 0.001). Significantly different from vehicle control (p < 0.01).

5. CONCLUSES Nas condies do experimento, conclui-se que o extrato de M. robusta no apresentou efeito mutagnico, contudo mostrou genotoxicidade nas duas maiores concentraes testadas. Por outro lado, o extrato apresentou efeito protetor contra o ENU, possivelmente por um mecanismo de interao com a droga, denominado efeito desmutagnico.

Referncias Bibliogrficas NIERO, R., MOSER, R., BUSATO, A.C.B., YUNES, R.A., REIS, A., CECHINELFILHO, V. A comparative chemical study of Maytenus ilicifolia Mart. Reiss and Maytenus robusta Reiss (Celastraceae). Zeitschrift fur Naturforschung, v.56c, p.158161. 2001. PIPERAKIS, S.M.; VISCARDIS, E.E. & TASSIOU, A.M. Comet assay for nuclear DNA damage. In: Methods in Enzimology, Academic Press, v.300, p.184-194, 1999. ROJAS, E.; LOPEZ, M.C. & VALVERDE, M. Single cell gel electrophoresis assay: methodology and applications. Jounal Chromatography B, v.722, p.225-254, 1999. SCHMID W. The micronucleus test. Mutation Research, v.31, p.9-15, 1975. SOKAL, R.R., ROHLF, F.J. In: W.H. Freeman (Ed.), Biometry. San Francisco, pp. 175 205; 404 486. 1995.

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