Farmacologa I

Jorge Luis Montao Bustos 14 10 2011

Albumina Srica Humana Marcada Con Tecnecio Como Medio De Diagnostico El tecnecio es un tomo metlico de uso frecuente en frmacos radioactivos, casi el 75% de frmacos contienen este radioistopo; tiene una vida media de 6 horas y forma fotones de 140 keV, deriva de la desintegracin del Molibdeno. La albumina protena que se encuentra en gran proporcin en el plasma sanguneo, siendo la principal protena de la sangre y a su vez la ms abundante en el ser humano. Es sintetizada en el hgado. La albumina srica es obtenida de la placenta o del suero de donantes sanos. La albumina srica es un medicamento inyectable que contiene una solucin acuosa proteica correspondiente a la fraccin electrofortica de la albumina humana marcada con tecnecio, se prepara a partir de albumina y la cantidad necesaria de tecnecio en presencia de estao como agente reductor en medios cidos. Luego de la preparacin se controla la pureza radioqumica a travs de cromatografa liquida para verificar que la reaccin. La albumina marcada con tecnecio esta revelada para estudios gamma grficos estticos del torrente sanguneo y cavidad cardiaca por administracin endovenosa en adultos.

Csar Milstein Naci el 8 de octubre de 1927 en el seno de una familia juda, en la ciudad de Baha Blanca, (Argentina) donde permaneci hasta 1945, cuando se traslad a la Capital Federal para estudiar en la Universidad de Buenos Aires (UBA). Se gradu de Licenciado en Ciencias Qumicas en la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, a los 25 aos de edad, y cuatro aos ms tarde, en 1956, recibi su doctorado en Qumica y un premio especial por parte de la Sociedad Bioqumica Argentina; obtuvo su primer doctorado como qumico, por su tesis sobre enzimas. Fue becado por la Universidad de Cambridge donde consigui su segundo doctorado en 1960, trabajando bajo la direccin del bioqumico molecular Frederick Sanger. Milstein regres a la Argentina en 1961 para hacerse cargo de la Divisin de Biologa Molecular del Instituto Nacional de Microbiologa, pero slo estuvo un ao en el cargo para regresar a Inglaterra tras el golpe militar de 1962.

Estando en Cambridge a los 36 aos, form parte del Laboratorio de Biologa Molecular y trabaj en el estudio de las inmunoglobulinas, adelantando el entendimiento acerca del proceso por el cual la sangre produce anticuerpos (las protenas encargadas de combatir a la presencia de cuerpos extraos o antgenos). Junto a G. Klher desarroll una tcnica para crear anticuerpos con idntica estructura qumica, que denomin anticuerpos monoclonales. En 1993, Milstein fue nombrado jefe y director de la Divisin de Qumica, Protenas y cidos Nucleicos de la Universidad de Cambridge. Por su trabajo en el desarrollo de anticuerpos monoclonales obtuvo el Premio Nobel de Fisiologa o Medicina en 1984. A pesar de que lo hubiera hecho enormemente rico, Milstein no registr ninguna patente por su laureado descubrimiento, pues pensaba que era propiedad intelectual de la humanidad y como tal lo leg. De acuerdo a sus convicciones, su trabajo careca de inters econmico y slo posea inters cientfico. En 1993 recibi el Premio Konex de Brillante junto a Ren Favaloro por su legado a las Ciencias y Tecnologa de la Argentina, otorgado por la Fundacin Konex. Falleci el 24 de marzo de 2002 en Cambridge, Inglaterra, vctima de una afeccin cardaca, a los 74 aos de edad.

Anticuerpos Monoclonales

Un anticuerpo monoclonal es un anticuerpo homogneo producido por una clula hbrida producto de la fusin de un clon de linfocitos B descendiente de una sola y nica clula madre y una clula plasmtica tumoral. Los anticuerpos monoclonales (en acrnimo Mab, de la frase en ingls con indntico significado que en espaol: monoclonal antibody), son anticuerpos idnticos porque son producidos por un solo tipo de clula del sistema inmune, es decir, todos los clones proceden de una sola clula madre. Es posible producir anticuerpos monoclonales que se unan especficamente con cualquier molcula con carcter antignico. Este fenmeno es de gran utilidad en bioqumica, biologa molecular y medicina. Produccin de anticuerpos monoclonales Si una sustancia extraa (antgeno) se inyecta en el cuerpo de un ratn o un humano, alguna de las clulas B de su sistema inmune se transformar en clulas plasmticas y empezarn a producir anticuerpos que se unirn a ese antgeno. Cada clula B produce un solo tipo de anticuerpo, pero diferentes linfocitos B producirn anticuerpos estructuralmente diferentes que se unen a distintas partes del antgeno. Esta mezcla fisiolgica natural de anticuerpos es conocida como 'anticuerpos policlonales'. Para producir anticuerpos monoclonales, primero se extraen clulas B del bazo de un animal que ha sido expuesto al antgeno. Estas clulas B son fusionadas en presencia de PEG (polietilenglicol) con clulas tumorales de mieloma mltiple (un tipo de cncer)

que pueden crecer indefinidamente en cultivo celular. Esta fusin hace a las membranas celulares ms permeables. Estas clulas fusionadas hbridas, llamadas hibridomas pueden multiplicarse rpida e indefinidamente, puesto que son clulas tumorales despus de todo y pueden producir gran cantidad de anticuerpos. Los hibridomas son suficientemente diluidos y cultivados para obtener un nmero diferente de determinadas colonias, las cuales producen slo un tipo de anticuerpo. Los anticuerpos de diferentes colonias son analizados para conocer su capacidad de unirse a un antgeno determinado, por ejemplo con un tipo de test llamado ELISA, y para seleccionarse y aislarse de la manera ms efectiva. El proceso de produccin de anticuerpos monoclonales es complejo. Primero se disgrega el bazo del ratn inmunizado, donde se acumulan los linfocitos B que tienen una escasa viabilidad en cultivo, y se fusionan con clulas de mieloma deficientes en enzimas implicados en la sntesis del nuevo ADN como la timidina quinasa (TK) o la hipoxantina guanina fosforibosil transferasa (HGPRT). Los productos de la fusin celular (hibridomas) son cultivados en medio HAT (de hipoxantina, aminopterina y timidina) donde las clulas mielmicas son eliminadas. Tan slo las clulas producto de la fusin entre un linfocito y una clula de mieloma son capaces de crecer en medio HAT. Las clulas hbridas obtenidas tras el proceso de fusin contienen un nmero elevado de cromosomas (72 del mieloma y 40 del linfocito B) que en las sucesivas divisiones celulares se irn perdiendo hasta oscilar entre los 70 y los 80 cromosomas. Como consecuencia de dicho proceso, algunas clulas pierden la capacidad de secrecin de anticuerpos o bien funciones bsicas para la viabilidad celular. Por ello tan pronto como se identifica como positivo un pocillo se somete a un proceso de clonacin para evitar el crecimiento de clulas no productoras que al ser metablicamente ms eficientes acabaran por dominar el cultivo. Los anticuerpos monoclonales pueden ser producidos en cultivos celulares o en animales. Cuando las clulas de un hibridoma son inyectadas en cultivos de tejidos como el peritoneo (cavidad peritoneal), produce tumores que sintetizan un fluido rico en anticuerpos llamado lquido asctico. Se conoce la tecnologa necesaria para la produccin de anticuerpos en ausencia de inmunizacin del animal. Es la denominada tecnologa de los anticuerpos recombinantes. Los avances en la tecnologa gnica han facilitado en gran medida la manipulacin gentica, produccin, identificacin y conjugacin de fragmentos de anticuerpos recombinantes, obtenindose nuevos anticuerpos multivalentes y multiespecficos. Estas tecnologas han permitido desarrollar estrategias de screening de anticuerpos monoclonales fuera del cuerpo humano. Para ello es necesario disponer, en primer lugar de enormes libreras de genes de anticuerpos, habitualmente mediante amplificacin PCR de cADN de linfocitos, o, alternativamente, mediante sntesis in vitro de genes usando cebadores randomizados ("randomized wobble"). El mtodo de 'screening' de estas libreras debe tener una eficiencia comparable a la del sistema inmune, lo que se puede conseguir exponiendo en la superficie de microorganismos los anticuerpos producidos. Ejemplos de los microorganismos empleados son los fagos filamentosos como M13 o bacterias. Esta presentacin en superficie permite establecer un enlace fsico entre la funcin de unin al antgeno y el gen del anticuerpo, de forma que la afinidad al antgeno permite aislar el microorganismo portador del gen del anticuerpo de

inters entre millones de otros. Una vez aislado el clon especfico se amplifica para la produccin del anticuerpo de inters por ejemplo en E. coli. Descubrimiento de los anticuerpos monoclonales Los investigadores Niels K. Jerne, Georges Khler y Cesar Milstein, describieron la tcnica que permita el cultivo de hibridomas o clulas hbridas de linfocitos B con clulas plasmticas tumorales de mieloma mltiple. Con esta fusin de dos clulas, una programada para producir un anticuerpo especfico pero que no se multiplica indefinidamente (linfocito) y otra inmortal con gran capacidad de crecimiento pero que no produce inmunoglobulina (clula de mieloma), se combina la informacin gentica necesaria para la sntesis del anticuerpo deseado y una capacidad de sntesis proteica, permitiendo su multiplicacin indefinida tanto in vitro como in vivo. Por esta aportacin a la ciencia Jerne, Klher y Milstein recibieron el premio Nobel de Medicina en 1984. Aplicaciones de los anticuerpos monoclonales Una vez que se han producido anticuerpos monoclonales que se unen a determinadas sustancias, estos pueden ser usados para detectar la presencia y cantidad de esta sustancia, gracias a la prueba de Western blot, que detecta una sustancia en una solucin o con una prueba de inmunofluorescencia, que detecta una sustancia en una clula entera. Los anticuerpos monoclonales tambin son usados para purificar una sustancia con tcnicas llamadas inmunoprecipitacin y cromatografa. Los anticuerpos monoclonales muestran una serie de ventajas sobre los anticuerpos policlonales como: 1. Mayor homogeneidad. 2. Reproductibilidad de sus efectos, como consecuencia de su homogeneidad. 3. Mayor capacidad potencial de seleccionar los mejores anticuerpos en afinidad, tipo de reconocimiento. Los anticuerpos monoclonales se utilizan en muchos campos como: 1. La investigacin biomdica, como la identificacin y clonacin de genes, la identificacin y aislamiento de protenas, la activacin de enzimas, conocimiento de la estructura molecular y morfognesis. 2. Diagnstico: En medicina, gracias a la gran especificidad y capacidad prcticamente ilimitada de los anticuerpos monoclonales para reconocer cualquier estructura qumica, permite la deteccin de hormonas, vitaminas, citocinas; la monitorizacin de drogas, deteccin de enfermedades infecciosas en microbiologa; la deteccin de alergenos en alergia, hematologa, marcadores tumorales e infartos de miocardio, aplicaciones forenses, inmunoescintografa. En las tnicas diagnsticas se emplean diversas herramientas de biologa molecular como ELISA, EIA, citometra, inmunohistoqumica, inmufluorescencia. Los anticuerpos monoclonales son unas de las sustancias ms utilizadas en los laboratorios de diagnstico. 3. Catlisis: Los anticuerpos monoclonales se han utilizado como catalizadores de mltiples reacciones qumicas.

4. Biosensores: Los anticuerpos monoclonales acoplados a transductores electrnicos pueden detectar tanto molculas orgnicas como inorgnicas como la contaminacin de metales pesados en alimentos y agua, deteccin de gases txicos, etc. Un biosensor es un instrumento analtico formado por un material biolgico inmovilizado como una enzima, anticuerpo, clula entera, orgnulo o combinaciones de los mismos, en ntimo contacto con un sistema transductor adecuado que convierta la seal bioqumica en una seal elctrica cuantificable. 5. Tratamiento: Las aplicaciones teraputicas constituyen el campo ms importante de los anticuerpos monoclonales, ya que son capaces de erradicar ciertas infecciones y destruir clulas, incluidas las tumorales, mediante distintos mecanismos. Por esta razn, son excelentes sustancias para el tratamiento de enfermedades infecciosas, enfermedades autoinmunes, el cncer o en trasplantes para evitar el rechazo. Existen varios anticuerpos monoclonales aprobados para su uso en determinadas enfermedades.

Bibliografia: http://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A9sar_Milstein http://es.wikipedia.org/wiki/Anticuerpos_monoclonales#Descubrimiento_de_los_anticu erpos_monoclonales

Katzung.B, masters s., Trevor A. 2009. FARMACOLOGIA: Basica y Clinica. Pag977-980. Mexico. Editorial mc Graro-Hill.