Anda di halaman 1dari 6

Isolasi dan bioaktifitas dari glikosida Xanthone dari Peperomia pellucida abstrak Patuloside A (3--D-1,5,6-glucopyranosyloxy-trihidroksi-9H-xanthene-9-satu) adalah glikosida xanthone

yang terisolasi dari Peperomia pelusida menggunakan teknik kromatografi (TLC, PTLC, GC) dan struktur itu dikonfirmasi berdasarkan data spektral (cair kromatografi / elektrospray spektroskopi massa, 1H dan 13C NMR termasuk JMOD, COSY, NOESY, HMBC, HSQC). in vitro antibakteri, antijamur dan kegiatan sitotoksik senyawa dipelajari. Teknik difusi disk digunakan untuk menentukan di vitro antibakteri dan antijamur kegiatan. Sitotoksisitas ditentukan terhadap air garam nauplii udang. Selain itu, penghambatan minim konsentrasi (MIC) ditentukan menggunakan teknik pengenceran serial untuk mencari tahu potensi antibakteri. Senyawa menunjukkan signifikan antibakteri aktivitas terhadap empat bakteri Gram-positif (Bacillus subtilis, Bacillus megaterium, Staphylococcus aureus, Streptococcus -haemolyticus) dan enam bakteri Gram-negatif (Escheichia coli, Shigella dysenteriae, Shigella sonnei, Shigella flexneri, Pseudomonus aeruginosa, Salmonella typhi). Nilai MIC terhadap bakteri ini berkisar 8-64 pg / mL. Senyawa menunjukkan aktivitas antijamur lemah terhadap Aspergillus flavus dan Candida albicans. Dalam penentuan sitotoksisitas, LC50 dari senyawa terhadap air garam nauplii udang adalah 18,24 ug / mL.

Pengantar Frekuensi mengancam kehidupan infeksi yang disebabkan oleh mikroorganisme patogen meningkat di seluruh dunia dan menjadi penyebab penting morbiditas dan mortalitas pada pasien kekebalan-dikompromikan di negara berkembang [1]. Meskipun jumlah besar agen antimikroba telah ditemukan, mikroorganisme patogen yang mengembangkan resistensi terhadap agen ini hari demi hari. Di negara-negara dunia ketiga seperti penggunaan irasional dari Bangladesh agen antimikroba merupakan penyebab utama dari resistensi tersebut [2]. Dalam beberapa tahun terakhir, upaya telah dilakukan untuk menyelidiki adat obat terhadap penyakit menular. Penelitian di bidang tanaman asli adalah aspek yang signifikan untuk mengembangkan Prinsip antimikroba yang lebih aman melalui isolasi, identifikasi karakterisasi, dan studi biologi [3].
Peperomia pellucida (Linn.) HBK (Fam. Piperaceae), secara lokal dikenal sebagai Luchi Pata, adalah ramuan tahunan [4]. Peperomia pelusida secara luas didistribusikan di banyak negara Amerika dan Asia Selatan [5-8]. Tanaman ini refrigeran, daunnya digunakan dalam pengobatan sakit kepala, demam, eksim, sakit perut dan kejang-kejang [4]. Menurut Manila Medis Masyarakat P. pelusida digunakan untuk meredakan nyeri rematik, tetapi dapat menyebabkan depresi SSP [9]. Evaluasi antibakteri, antiinflamasi dan aktivitas analgesik yang dilaporkan untuk P. pelusida [, 8 10, 11]. Isolasi konstituen antijamur seperti sebagai arylpropanoids [12] dan konstituen antikanker seperti peperomins [13] juga dilaporkan untuk tanaman ini. Meskipun, tanaman ini dilaporkan untuk aktivitas antibakteri, konstituen antibakteri belum terisolasi. Karena itu, dalam Penelitian ini upaya yang dilakukan untuk mengisolasi konstituen antibakteri (s) dari pabrik dan untuk mengevaluasi nya antibakteri aktivitas. Sejak isolasi konstituen lain yang memiliki antijamur [12] dan antikanker [13] sifat yang juga melaporkan untuk tanaman ini karena itu kita juga ditentukan aktivitas antijamur dan sitotoksik senyawa terisolasi.

metode tanaman bahan Daun dari tanaman dikumpulkan pada Juli, 2004 dari berbagai bagian dari Lakshmipur distrik Bangladesh dan diidentifikasi oleh Prof ATM Naderuzzaman, Departemen Botani, Universitas Rajshahi, Bangladesh dimana spesimen voucher nya (No KM6543) diendapkan. Daun-daun itu dikeringkan dan ditumbuk menjadi bubuk. Tanaman bahan ekstraksi dan fraksinasi Bahan bubuk (450 g) diekstraksi dengan etanol (3 L) dalam alat Soxhlet (Quickfit, Inggris) pada 650 C untuk 72 h [14]. Ekstrak disaring dan pelarut diuapkan sampai kering di vakum dengan evaporator berputar pada 40-50 derajat celsius untuk membeli massa hijau kehitaman (32 g) yang kemudian diekstraksi dengan petroleum eter (3 x 50 ml), etil asetat (3 x 50 ml) dan metanol (3 x 50 ml) untuk membeli petroleum eter (9 g), etil asetat (7 g) dan metanol (11 g) fraksi, masing-masing [15]. Isolasi senyawa Di antara semua fraksi (petroleum eter, etil asetat dan metanol), metanol fraksi larut diamati untuk lebih baik antibakteri aktivitas. Fraksi metanol larut (3 g) mengalami kromatografi kolom menggunakan kloroform dan metanol dari polaritas meningkat. Kolom kromatografi fraksi eluting dengan kloroform 40-60% dalam metanol menunjukkan aktivitas antibakteri yang baik menjadi sasaran KLT preparatif (Silica gel PF254) dengan sistem pelarut kloroform: metanol (4: 1) untuk membeli senyawa 1 (32,5 mg). Strukturnya telah dikonfirmasi didasarkan pada berbagai metode spektroskopi (IR, kromatografi cair / elektrospray-spektroskopi massa (LC / ES-MS), 1H dan 13C NMR termasuk JMOD, COSY, NOESY, HMBC, dan HSQC). Spektroskopi kromatografi / elektrospray-massa cair (LC / ESMS) dalam modus ion positif dari senyawa 1 telah menunjukkan molekul [M + H] + puncak pada m / z 423,2 sesuai dengan rumus molekul C19H18O11. 1H dan 13C NMR senyawa 1 data yang perjanjian baik dengan 1H NMR 13C dan data dari patuloside A yang diterbitkan dalam literatur [16].
Organisme

Aktivitas antibakteri dan MIC ditentukan terhadap empat bakteri Gram-positif (Bacillus subtilis, Bacillus megaterium, Staphylococcus aureus, Streptococcus -haemolyticus) dan enam bakteri Gram-negatif (Escheichia coli, Shigella dysenteriae, Shigella sonnei, Shigella flexneri, Pseudomonus aeruginosa, Salmonella typhi). organisme ini yang tersedia di Laboratorium Penelitian Mikrobiologi Farmasi Departemen, Universitas Rajshahi, Bangladesh. Para biakan murni bakteri ini dikumpulkan dari Laboratorium Mikrobiologi Institut Nutrisi dan Makanan Ilmu (INFS) dan Departemen Mikrobiologi, University of Dhaka, Bangladesh. Skrining antijamur dilakukan terhadap empat jamur (Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Candida albicans dan Rhizopus aurizae). Organisme ini tersedia di Laboratorium Penelitian Mikrobiologi Farmasi Departemen, Universitas Rajshahi, Bangladesh. yang suci budaya dari jamur dikumpulkan dari Departemen Botani, Universitas Rajshahi, Bangladesh. Sitotoksisitas ditentukan terhadap air garam nauplii udang. Nauplii udang air garam diperoleh oleh telur udang menetas air garam (Carolina Pasokan Perusahaan Biologi, Burlington, NC, USA) dalam air laut buatan (NaCl 3,8% solusi) untuk 48 jam

Media Media agar nutrien (Difco laboratorium, USA) pH 7,2, media kaldu nutrisi (Difco laboratorium, USA) pH 6,8, Sabouraud dekstrosa agar menengah (Biolife Viale Monza, Italia) pH 5,6 dan buatan air laut (3,8% NaCl solusi) pH 8,4digunakan untuk skrining
antibakteri, penentuan MIC, skrining antijamur dan penentuan sitotoksisitas, masing-masing. antibakteri skrining

Skrining in vitro antibakteri dilakukan dengan metode difusi disk [17, 18], yang merupakan kualitatif untuk semi kuantitatif uji. Secara singkat, 20 jumlah mL agar nutrien yang berlapis dalam petridish dengan 0,1 ml pengenceran 10-2 masing-masing bakteri budaya (18 jam tua). Cakram kertas filter (6 mm diameter) diresapi dengan konsentrasi berbagai patuloside Sebuah ditempatkan di piring organisme uji unggulan. Metanol digunakan untuk melarutkan senyawa tersebut dan benar-benar menguap sebelum aplikasi di piring organisme uji unggulan. Disk kosong diresapi dengan metanol pelarut diikuti oleh mengeringkan tubuh digunakan sebagai kontrol negatif. Kegiatan ini ditentukan setelah 12 jam inkubasi pada 370 C. Diameter dari zona inhibisi yang dihasilkan oleh patuloside A kemudian dibandingkan dengan antibiotik kanamisin standar 30 pg / disk. Setiap sampel yang digunakan dalam rangkap tiga untuk penentuan aktivitas antibakteri. Hambat minimal konsentrasi (MIC) penentuan

Teknik pengenceran tabung Serial [2, 19, 20] digunakan untuk menentukan MIC senyawa terhadap bakteri ini. Patuloside A (1,024 mg) dilarutkan dalam 2 mL air suling (beberapa tetes Tween 80 ditambahkan untuk memfasilitasi pembubaran) untuk mendapatkan saham konsentrasi larutan memiliki dari 512 g / mL. Dalam teknik pengenceran serial, 1 mL larutan stok disiapkan dipindahkan untuk menguji tabung berisi 1 mL kaldu nutrisi media untuk memberikan konsentrasi 256 g / mL dari mana 1 mL dipindahkan ke tabung reaksi yang berisi 1 ml kaldu nutrisi media untuk memberikan konsentrasi 128 g / mL dan seterusnya sampai konsentrasi 2 g / mL. Setelah persiapan dari suspensi organisme uji (107 organisme per ml), 1 tetes suspensi (0,02 mL) ditambahkan pada tiap dilusi kaldu. Setelah inkubasi 24 jam pada 370 C, tabung kemudian diperiksa untuk pertumbuhan. MIC dari patuloside Sebuah diambil sebagai konsentrasi terendah yang menunjukkan tidak ada pertumbuhan. Pertumbuhan diamati pada mereka tabung di mana konsentrasi patuloside A di bawah tingkat penghambatan dan media kaldu diamati keruh (mendung). Air suling dengan beberapa tetes Tween 80 dan kanamisin digunakan sebagai negatif dan positif kontrol, masing-masing.

antijamur skrining Dalam skrining anti jamur in vitro dilakukan dengan metode difusi disk [17, 18]. Dalam metode ini, 20 mL jumlah Sabourand dekstrosa yang berlapis dalam petridish dengan 0,2 ml pengenceran 10-2 dari masing-masing budaya jamur (10 jam tua). kertas filter cakram (6 mm diameter) diresapi dengan konsentrasi berbagai patuloside A ditempatkan pada tes organisme unggulan

piring. Metanol digunakan untuk melarutkan senyawa tersebut dan benar-benar menguap sebelum aplikasi pada tes organisme unggulan piring. Disk kosong diresapi dengan metanol pelarut diikuti dengan pengeringan off digunakan sebagai negatif kontrol. Kegiatan ini ditentukan setelah 72 jam inkubasi pada 300 C. Diameter zona penghambatan yang dihasilkan oleh patuloside A, kemudian dibandingkan dengan antibiotik standar disk 30 nistatin ug /. Setiap sampel yang digunakan dalam rangkap tiga untuk penentuan aktivitas antijamur. uji sitotoksisitas Uji sitotoksisitas dilakukan pada udang air garam nauplii menggunakan metode Mayer [21, 22]. Nauplii udang air garam yang diperoleh dengan penetasan telur udang air garam (Carolina Pasokan Perusahaan Biologi, Burlington, NC, USA) dalam air laut buatan (3,8% NaCl solusi) untuk 48 jam Pembubaran dilakukan senyawa dalam air laut buatan menggunakan DMSO. Setiap mL 5 larutan konsentrasi yang berbeda (0,5, 1, 2, 5, 10, 20 dan 40 pg / mL) senyawa itu diambil dalam botol yang berbeda di mana air garam nauplii udang yang diberikan dan kematian mereka diamati selama 24 jam Data yang dihasilkan ditransformasikan analisis probit [20, 23] untuk penentuan nilai LC50 senyawa. Buatan medium yang mengandung air laut DMSO yang digunakan untuk analisis yang digunakan sebagai kontrol. Asam
galat dan sulfat vincristine digunakan sebagai standar dalam pengujian ini. hasil Struktur senyawa tersebut telah ditunjukkan pada gambar 1 dan 1H NMR dan 13C data yang ditunjukkan dalam tabel 1. Hasil aktivitas antibakteri patuloside A terhadap bakteri uji disajikan pada Tabel 2. Sebagai perbandingan untuk referensi standar kanamisin (30 g / cakram), patuloside A menunjukkan aktivitas antibakteri yang signifikan pada 160 g / disk. Sebuah Patuloside menunjukkan aktivitas tertinggi terhadap Streptococcus haemolyticus-dan terendah terhadap Shigella sonnei. Nilai MIC terhadap ini bakteri Gram-positif yang berkisar 8-32 g / mL dan bakteri Gram-negatif yang berkisar 16-32 g / mL (Tabel 3). Patuloside menunjukkan aktivitas antijamur Sebuah sangat lemah terhadap Aspergillus flavus dan Candida albicans (Tabel 4). Hal itu juga mengamati bahwa patuloside Sebuah aktif melawan Rhizopus dan Aspergillus niger aurizae. Dalam uji sitotoksisitas dengan air garam nauplii udang, nilai LC50 dari patuloside A 18,24 ug / mL. Cytotoxicity dari patuloside A dibandingkan dengan sitotoksisitas asam galat standar dan sulfat vincristine mana nilai LC50 adalah 4,23 dan 0,62 pg / mL, masing-masing (Tabel 5). Tidak ada kematian yang ditemukan pada kelompok kontrol. Sebuah korelasi linear perkiraan diamati ketika logaritma konsentrasi dibandingkan persentase mortalitas diplot pada kertas grafik.

diskusi Patuloside A adalah laporan pertama dari isolasi dari genus Peperomia serta dari keluarga Piperaceae. Sebuah Patuloside sebelumnya diisolasi dari akar Hypericum patulum Thunb. (Guttiferae) [16]. Meskipun menunjukkan aktivitas terhadap semua bakteri yang diuji, kegiatan melawan bakteri Gram-positif lebih baik daripada bakteri Gramnegatif. potensi antibakteri dari patuloside A terhadap bakteri ini dinyatakan dalam MIC disajikan pada Tabel 3 juga menunjukkan patuloside A yang efektif terhadap bakteri Gram-positif pada konsentrasi lebih rendah dari itu terhadap bakteri Gramnegatif. Secara keseluruhan, senyawa ini telah menunjukkan aktivitas antibakteri yang signifikan terhadap kedua bakteri Gram-positif dan Gram-negatif. Khan dan Omoloso (2002) melaporkan aktivitas antibakteri ekstrak kasar dari Peperomia pellucida, mendukung temuan antibakteri kegiatan Patuloside A diisolasi dari tanaman. Ini sangat lemah aktivitas antijamur terhadap Aspergillus flavus dan Candida albicans dan aktif melawan Rhizopus aurizae dan Aspergillus niger menunjukkan bahwa aplikasi yang secara klinis tidak signifikan antijamur. Meskipun banyak ilmuwan telah menunjukkan korelasi antara sitotoksisitas dan aktivitas terhadap nauplii udang air garam [24-27], namun karena sangat lemah kegiatan patuloside A terhadap air garam nauplii udang (LC50 18,24) itu adalah aplikasi sitotoksik juga klinis tidak signifikan. Ini, antijamur dan antibakteri studi sitotoksik laporan pertama untuk senyawa ini.
Gambar tabel 1

kesimpulan Hasil yang diperoleh dalam studi ini menunjukkan bahwa patuloside A penting untuk aktivitas antibakteri. Namun, lebih studi diperlukan untuk fokus pada mekanisme aksi, hubungan struktur aktivitas, evaluasi toksikologi dan untuk mengidentifikasi konstituen aktif lainnya dari tanaman Peperomia pellucida. bersaing Minat Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki kepentingan bersaing.
Tabel 2 (Dalam kegiatan in vitro antibakteri patuloside Sebuah terisolasi dari Peperomia pellucida.) Tabel ke 2 keterangan di bawah tabel Disk kontrol yang digunakan untuk pelarut (kering sebelum aplikasi) tidak memiliki zona inhibisi, sehingga data mereka dihilangkan dari atas Data. Data direpresentasikan dalam bentuk rata-rata tiga tes SEM dari kelompok kanamisin standar. 1 = patuloside A.

Penulis 'Kontribusi AK mengembangkan proyek dan mengawasi penyusunan naskah. Pada karya yang tersisa dari artikel ini semua penulis (AK, MR dan MSI) memiliki kontribusi yang sama. Pengakuan Para penulis ingin berterima kasih kepada Profesor ATM Naderuzzaman, Departemen

Botani, Universitas Rajshahi, untuk identifikasi tanaman.


Tabel 3. Konsentrasi penghambatan minimum Patuloside Sebuah terisolasi dari Peperomia pellucida. Kontrol negatif mengandung solvent tidak memiliki nilai MIC, sehingga data mereka dihilangkan dari data di atas. Tabel 4. Aktivitas in vitro antijamur patuloside Sebuah terisolasi Peperomia pellucida. Disk kontrol yang digunakan untuk pelarut (kering sebelum aplikasi) tidak memiliki zona inhibisi, sehingga data mereka dihilangkan dari atas Data. Data direpresentasikan dalam bentuk rata-rata tiga tes SEM dari kelompok nistatin standar. Tabel 5. Sitotoksisitas Patuloside Sebuah terisolasi dari Peperomia pellucida.