Guia Lab. MV 2012 Final

Universidad Iberoamericana de Ciencias Y Tecnologa Facultad de Ciencias
Eritrocitos de mamfero
Vellosidades intestinales
Mitosis en raicillas de cebolla
Programa Biologa General y Celular Medicina Veterinaria Departamento de Biologa 1
TRABAJO PRCTICO N 1 MTODO CIENTFICO

Susana Salas Nez, M V. Jessica Leyton Pealoza, MV
El mtodo cientfico es una serie de pasos o procedimientos ms o menos ordenados que siguen los investigadores para encontrar una respuesta o conocimiento de una porcin de la naturaleza que el hombre quiere entender. Por ejemplo; Imagina que al despertar, sientes un fuerte dolor en el abdomen. Sin duda tu primera reaccin sera preguntarte por qu? Luego, tratando de encontrar una respuesta, precisaras el rea del dolor y trataras de recordar la calidad y cantidad de tus ltimas comidas. Quiz de all surja una explicacin tentativa. Por ejemplo, es probable que tu estmago est resentido por la hora y abundancia de la cena de la noche anterior. Si esto es cierto, dejando descansar a tu estmago, el dolor debera desaparecer durante la maana. As, si a la hora del almuerzo ya no hay molestias, la idea tentativa habra sido confirmada. De no ser as, habra que pensar en otra causa del problema. Lo descrito coincide con el procedimiento que sigue un bilogo o cualquier otro cientfico al enfrentar un problema y procurar resolverlo. Esta forma de proceder es conocida como mtodo cientfico. Objetivo del mtodo cientfico: Es un proceso lgico de pensar y actuar para indagar y alcanzar la verdad sobre algo que el hombre desea saber. para lo cual utiliza la observacin y la experimentacin. Uno de los objetivos principales de este mtodo es evitar la subjetividad de la investigacin. Etapas del mtodo cientfico Cuando se analiza un determinado fenmeno se procede sistemticamente, siguiendo una serie de etapas establecidas en pasos fundamentales (Figura 1). Esta secuencia constituye el denominado mtodo cientfico, o experimental que se estructura de la siguiente forma: 1. La observacin de algn hecho interesante o problemtico, en relacin con los seres vivos es el punto de partida para el trabajo de un cientfico. Del mismo modo en que el problema abdominal se inicia con la bsqueda de una explicacin, la observacin conduce a preguntas que dan origen a problemas de investigacin. 2. Investigacin: antes de proponer una hiptesis se requiere investigar el tema a fondo.
3. Hipotesis: se debe buscar una probable explicacin de lo que estamos observando. En el ejemplo propuesto, Cul es la hiptesis? Puedes distinguir los elementos que ayudaron a plantearla? Sera posible proponer como hiptesis que el dolor abdominal se debera a las pesadillas que tuviste durante la noche?. En ciencias, una hiptesis es til cuando se puede probar si es cierta o no. Para ello es necesario establecer y evaluar una o ms predicciones, ideas o afirmaciones lgicas que surjan de las hiptesis. As, si el estmago est resentido por el exceso de comida de la noche anterior, es posible predecir que el dolor cesar durante la maana. Qu prediccin evaluable puede ser hecha si como hiptesis se plantea que el dolor es debido a las pesadillas? 4. Experimentacin: para saber si una prediccin se cumple, los cientficos deben recolectar datos. Esto significa recoger la mayor informacin y ms precisa, que permita distinguir si la prediccin es correcta o no. As, en nuestro ejemplo anterior, la informacin que obtengamos hacia el fin de la maana podr decirnos si la hiptesis de un estmago resentido era acertada o no. La forma ms comn en que los cientficos recolectan datos es haciendo experimentos; es decir, experiencias en las que repiten las observaciones del hecho o fenmeno inicial, variando y examinando detenidamente los factores que, segn la hiptesis, son responsables de l. Si creemos que la cantidad de comida en la noche es la causa del dolor de la maana siguiente, podramos probarlo cenando cada noche diferentes porciones de alimento y ver lo que ocurre en cada ocasin. Qu experiencia haras si quisieras comprobar que lo importante es la hora de comida? 5. Anlisis y conclusions: La recoleccin de datos entrega frecuentemente una gran cantidad de resultados que los cientficos deben analizar, tratar de entender que dicen respecto de las predicciones. Para esto, los investigadores hacen clculos, tablas y grficos para ordenar y simplificar la interpretacin de la informacin. El anlisis de la informacin lleva al investigador a una de las ms importantes etapas del mtodo: la reflexin. Esto significa considerar cuidadosamente los resultados obtenidos y con ello elaborar conclusiones. La reflexin permite al cientfico no solo confirmar o rechazar sus hiptesis, sino construir otras distintas, si las ha rechazado y hacer nuevas preguntas a partir de las cuales volver a repetir el procedimiento. Siguiendo con nuestro ejemplo, podremos considerar que al examinar despus de un tiempo tu abdomen y comprobar que ha dejado de doler, concluirs que la hiptesis inicial: que el estmago est resentido por el exceso de comida de la noche anterior, es correcta.
ETAPAS
Observaci n realizamos pregunta, planteamos un problema

Figura 1. Etapas del mtodo cientfico.
El mtodo cientfico, se caracteriza por ser: -
Racional - se fundamenta en la lgica, lo cual significa que comienza por conceptos, juicios y razonamientos y vuelve a ellos; por lo tanto, el mtodo cientfico no puede tener su origen en las apariencias producidas por las sensaciones, creencias o preferencias personales. Analtico - trata de entender la situacin total en trminos de sus componentes, intenta descubrirlos y explicar las interrelaciones de estos; por tanto, los problemas son estrechos al comienzo, pero van amplindose a medida que la investigacin avanza. Claro y preciso - Los problemas se formulan de manera clara, se incluyen en ellos los conceptos o categoras fundamentales. El mtodo cientfico inventa lenguajes artificiales utilizando smbolos y signos; a estos smbolos se les atribuye significados determinados por medio de reglas de designacin. Verificable - Todo conocimiento debe aprobar el examen de la experiencia, esto es, observacional y experimental. Explicativo - Intenta explicar los hechos en trminos de leyes, y las leyes en trminos de principios; adems de responder cmo son las cosas, responde tambin a los por qu: por que suceden los hechos, como suceden as y no de otra manera.
Programa Biologa General y Celular Medicina Veterinaria Departamento de Biologa
Experimentaci n
Testeamos la hiptesis a trav s de experimentos u observaci n de

4
El mtodo cientfico se basa en reproducibilidad (la capacidad de repetir un determinado experimento en cualquier lugar y por cualquier persona) y la falsabilidad (toda proposicin cientfica tiene que ser susceptible de ser falsada; esto implica que se pueden disear experimentos que en el caso de dar resultados distintos a los predichos negaran la hiptesis puesta a prueba). Algunos experimentos son tan complejos que deben hacerse entre varios cientficos o bien, en base a equipos interdisciplinarios, (anlisis estadstico, construccin de instrumental e instalaciones, programas informticos, encuestas u observacin de fenmenos sociolgicos, entre otros). Creer es ms fcil que pensar. He ah la razn de que hayan ms creyentes. Albert Einstein ACTIVIDAD N1 ESTRUCTURAR EL MTODO CIENTFICO El profesor les entregar cierta cantidad de distintos estados de Rhipicephalus sanguneus (garrapata caf del perro). Al observar este parsito, usted debe plantearse alguna pregunta o problema. Cmo procedera para resolver su pregunta?. Establezca las etapas ficticias del mtodo cientfico de tal modo que puedan resolver su duda o problema.
1. Observacin observe los animales y plantee una pregunta o un problema: _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________. 2. Investigacin planifique donde buscara informacin adecuada para estudiar el problema: _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________.
3. Hiptesis plantee una hiptesis, es decir, indique cul sera el resultado esperado despus de realizar una experimentacin: _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________. 4. Experimentacin Disee un experimento que pueda resolver su pregunta o Problema:
ACTIVIDAD N2
ANALIZAR LOS RESULTADOS DE LA ACTIVIDAD N1 Discuta con sus pares y con el profesor sobre el problema que plante en la actividad N1 y justifique la estructuracin del mtodo cientfico propuesto. _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________
TRABAJO PRCTICO N 2 ORIGEN DE LA VIDA: COLUMNA DE WINOGRADSKI

MV Susana Salas Nez MV Jessica Leytn Pealoza Bil. Viviana Rada (c) Ms. Sc.
Durante la formacin de la tierra, en los lugares donde la corteza terrestre se comenzaba a enfriar y solidificar, se produjeron las primeras precipitaciones dando lugar a charcas y lagos de un lquido que era una mezcla de agua, amoniaco, metano, cidos y sales en suspensin. Con este fluido ms el continuo aporte de energa solar y calrica de la temperatura interna del planeta, comenzaron las primeras reacciones qumicas que generaban molculas de cierto grado de complejidad (formaldehido, cido prsico, glicina y alcoholes). Poco despus este caldo de tomos se transform en un caldo de molculas de bastante complejidad que por los sucesivos hervores, las erupciones volcnicas, las descargas elctricas de los rayos bombardeando este caldo, hicieron que de vez en cuando muchas de estas molculas fueran destruidas y reorganizadas, el aporte energtico era tan grande que las sustancias simples tendan a reagruparse con tanta o ms rapidez que las complejas en destruirse, por eso a lo largo de millones de aos el caldo fue conteniendo cada vez una mayor proporcin de sustancias complejas. En resumen toda la vida sobre la Tierra podra clasificarse en funcin de las fuentes de carbono y energa de las que depende cada organismo: la energa puede obtenerse de reacciones luminosas (fottrofos) o de oxidaciones qumicas (a partir de compuestos orgnicos o inorgnicos); el carbono para la sntesis celular puede obtenerse del CO2 (auttrofos) o de compuestos orgnicos preformados (hetertrofos). Combinando estas categoras tendremos las cuatro estrategias bsicas de los seres vivos: fotoauttrofos (plantas), quimiohetertrofos (animales, hongos), fotohetertrofos y quimioauttrofos. Slo entre las bacterias se pueden encontrar estas cuatro estrategias bsicas de la vida. Desde una perspectiva bioqumica, cuatro caractersticas distinguen a las clulas vivas de otros sistemas qumicos: La existencia de una membrana que separa a la clula del ambiente circundante y le permite mantener su identidad bioqumica. La presencia de enzimas, protenas complejas esenciales para las reacciones qumicas de las que depende la vida. La capacidad de replicarse generacin tras generacin. La posibilidad de evolucionar a partir de la produccin de descendencia con variacin.
Cmo surgieron entonces estas caractersticas? Cul de ellas apareci primero e hizo posible el desarrollo de las otras? Si bien los trabajos sobre el origen de la vida han
proliferado enormemente, han suscitado muchas controversias que aun no se han dilucidado. Sin embargo, hay consenso en dos aspectos crticos: Haba poco o nada de oxigeno libre (o molecular) presente (la atmosfera era reductora). Los cuatro elementos (Hidrogeno, Oxigeno, Carbono y Nitrgeno) que constituyen ms del 95% de los tejidos vivos estaban disponibles en alguna forma en la atmosfera y en las aguas de la tierra primitiva. Oparin propuso que, en esas condiciones, los gases atmosfricos acumulados en los mares y los lagos de la Tierra se habran condensado formando molculas orgnicas. Como no haba oxigeno libre, estas molculas orgnicas no habran sido degradadas a sustancias simples tal como ocurrira en la actualidad. Por lo tanto el origen de la vida fue precedido por un largo periodo que denominan evolucin qumica, para posteriormente dar paso a la evolucin prebiolgica en la que las molculas formadas habran quedado concentradas en microambientes en los que habran reaccionado entre s para formar molculas ms grandes y complejas. De modo progresivo, estos sistemas plurimoleculares habran sido capaces de intercambiar materia y energa con el ambiente y de optimizar en su interior la eficiencia de ciertas reacciones, y aquellos que tenan una mayor estabilidad qumica o capacidad de duplicarse en las condiciones de la tierra primitiva habran tendido a aumentar su frecuencia a travs del tiempo, respecto a otros sistemas menos eficientes, lo que Oparin denomino protoseleccin natural. Columna de Winogradski La columna de Winogradski es una demostracin clsica de cmo los microorganismos ocupan "microespacios" altamente especficos de acuerdo con sus tolerancias medioambientales y sus necesidades vitales (requerimientos de carbono y energa) y que, adems, ilustra cmo diferentes microorganismos desarrollan sus ciclos, y la interdependencia que llega a existir entre ellos (las actividades de un microorganismo permite crecer a otro y viceversa). Esta columna es un sistema completo y autnomo de reciclamiento, mantenido slo por la energa de la luz, La columna aqu descrita se enfoca sobre todo al ciclo del azufre, pero se podra desarrollar igualmente la reproduccin de otros ciclos biogeoqumicos equivalentes para nitrgeno, carbono y otros elementos
Dos famosos microbilogos fueron pioneros en el estudio de estos procesos: Sergei Winogradsky (1856-1953) y Martinus Willen Beijerinck (1851-1931). En contraste con los estudios sobre cultivos puros de otros microbilogos como Louis Pasteur o Robert Koch, estos investigadores se centraron en estudiar las relaciones entre diferentes tipos de microorganismos en comunidades mixtas.
Entre los seres vivos hay varias formas de obtencin de carbono y energa. Los animales estamos restringidos a usar compuestos orgnicos preformados y respirar oxgeno, mientras que los microorganismos despliegan una diversidad metablica asombrosa. Lo que sustenta la idea de que son los precursores de cualquier tipo de vida sobre la Tierra. Materiales: Probeta de 500 ml o envase plstico de 1 litro abierto en un extremo. Agua y barro procedente de ros, charcas o lagos. Restos orgnicos diferentes; papel de diario, aserrn, resto de plantas o races. 5 Gramos de cascara de huevo (CaCO3). 5 gramos de yema de huevo hervida (CaSO4).
Montaje: Se mezcla la tierra con el resto orgnicos (tiras de papel 2mm de ancho y races de la misma procedencia) y un suplemento de CaCO2 y CaSO4 los cuales van a actuar como buffer y fuente de sulfato respectivamente. Una vez bien incorporados se agrega tierra hasta llenar 1/3 del volumen agregndole ms tierra sin restos orgnicos. La mezcla debe estar bien comprimida y apretada de tal modo que no se observen burbujas en su interior. Por ltimo se llena los 2/3 restantes con agua y se cubre con un trozo de aluminio o plstico. Se ubica el frasco en la ventana donde no le d el sol directo.
Figura 2.-Dibujo esquemtico de la construccin de una columna de Winogradsky.
ACTIVIDAD. Es necesario tener en cuenta que aunque el montaje de la columna de Winogradsky se realice durante este practico, es responsabilidad del grupo realizar observaciones durante las cuatro semanas siguientes y desarrollar completamente esta actividad
Esquema Observaciones y Explicacin. (Prestar atencin a los cambios de Universidad coloracin) Iberoamericana de Ciencias Y Tecnologa Facultad de Ciencias Semana 1.
Semana 2.
Semana 3.
Semana 4.
1. Realice el montaje de la columna de Winogradsky siguiendo las instrucciones de su profesor. Esquematice lo realizado.
2. Indique lo sucedido durante las semanas siguientes. Busque en referencias bibliogrficas (Preferentemente libros de microbiologa) la explicacin y fundamentacin de los cambios observados. 3. Cmo puede relacionar usted este prctico, con las diferentes teoras existentes sobre el origen de la vida?
Bibliografa. Curtis, H.; Sue N.; Schnek, A. y Massarini, A. 2008. Capitulo 1. Origen de la Vida. En: Biologa / Curtis. Sptima edicin. Editorial Mdica Panamericana. Pg. 13-25. Atlas, R.M. y R. Bartha. 2001. Ecologa microbiana y microbiologa ambiental. 4 edicin.Ed. Addison Wesley. Madigan, M.T., J.M. Martinko y J. Parker. 1997. La Herencia de Winogradsky. En Brock: Biologa de los microorganismos. 8 edicin. Prentice Hall. p. 493.
TRABAJO PRCTICO N 3 DIVERSIDAD BIOLOGICA

Bil. Viviana Rada (c) Ms. Sc. MV Jessica Leytn Pealoza MV Susana Salas Nez
Durante siglos, los naturalistas intentaron describir y explicar la inmensa diversidad del mundo natural. Varios trataron tambin de poner orden en el caos de los animales y plantas, cuyo nmero aumentaba da tras da, a medida que nuevos viajero se aventuraban a tierras ms lejanas y traan de vuelta ms ejemplares de seres desconocidos. Desde la antigedad se han propuesto diferentes formas de agrupar a los seres vivos, muchas de las cuales fueron descartadas.
Esta problemtica de determinar y clasificar los organismos con los que compartimos el planeta, se apoya en la sistemtica.
La sistemtica es la disciplina cientfica que estudia la diversidad de los seres vivos en un intento de constituir un sistema ordenado de clasificacin de los organismos.
Estas clasificaciones son hiptesis que los investigadores ponen a prueba continuamente a travs de su trabajo de campo y de laboratorio y se valen de un sistema de clasificacin para nombrar y agrupar a las especies conocidas-alrededor de dos millones- de una manera lgica, objetiva, consistente y no redundante. La unidad bsica de la clasificacin biolgica es la especie, que en latn simplemente significa tipo, por lo que en el sentido ms simple son tipos diferentes de organismos, pero Dnde existe el lmite entre un tipo y otro. Ernst Mayr, propuso en 1940 una definicin rigurosa del concepto de especie, Mayr describi a una especie biolgica como un grupo de poblaciones naturales cuyos individuos se cruzan entre s exitosamente de una manera real o potencial y que estn reproductivamente aislados de otros grupos Ahora si analizamos este concepto, podramos preguntarnos porque la expresin real o potencial, se refiere a que aunque separemos un grupo de insectos de una poblacin y se llevaran a una isla remota, esto no los convertiran automticamente a las dos nuevas poblaciones en especies distintas, ya que ambas potencialmente pueden cruzarse, adems se agrega que los miembros de una especies estn reproductivamente aislados de otros grupos, esto quiere decir que distintas especies no pueden cruzarse entre s, la posibilidad de que algunos individuos de especies diferentes tengan progenie ocasional no es relevante como proceso natural ya que muchos de ellos no conviven en el mismo hbitat natural o simplemente porque la progenie es estril o de vida muy corta, que hace referencia al termino exitosamente reproductiva.
ACTIVIDAD 1.
Una vez que se agrupen de 5 estudiantes, el profesor le entregar cierta cantidad de gusanos y larvas, con los cuales deber trabajar en un sistema de clasificacin
inventado por el grupo, basado en algunos caracteres que sean observables (ej. Tamao, presencia o ausencia de anillos o patas, si pertenecen o no a la misma especie etc.).
CLASIFICACIONES BIOLGICAS.
Jeannette Soto Miranda Ms Sc Dra. Claudia Nez Gonzlez
El filsofo griego Aristteles fue quien aparentemente comenz la discusin sobre la taxonoma. En el siglo XVIII, el botnico sueco, Carlos Linneo clasific todos los organismos conocidos en dos grandes grupos: los reinos Plantae y Animalia. Robert Whittaker en 1969 propuso cinco reinos: Plantae, Animalia, Fungi, Protista, y Monera. Las clasificaciones biolgicas taxonmicas son jerrquicas. La estructura de esta jerarqua no est provista de comentarios descriptivos de los organismos clasificados. Las clasificaciones filogenticas son tratadas como sistemas de palabras usados para comunicar el conocimiento acerca de los patrones inferidos de los descendientes con modificaciones (evolucin).
Estas clasificaciones pueden ser usadas para comunicaciones, por otros investigadores como base para criticar las ideas de los patrones de evolucin del investigador original o para otros investigadores para estudiar procesos o hacer futuras comparaciones basados en las inferencias de los patrones como reflejos de esas clasificaciones. Para el estudio de la clasificacin de los organismos surgi una ciencia llamada taxonoma (de la raz griega taxis que significa ordenacin). La organizacin que establece la taxonoma tiene una estructura arbrea en la que las ramas a su vez se dividen en otras y stas a su vez en otras menores. A cada una de las ramas, ya sean grandes o pequeas, desde su nacimiento hasta el final, incluyendo todas sus ramificaciones, se denomina taxn. La taxonoma tiene por objeto agrupar a los seres vivos que presenten semejanzas entre s y que muestren diferencias con otros seres, estas unidades se clasifican principalmente en ocho categoras jerrquicas que son, por orden decreciente de sus niveles: Dominio Reino Phylum Divisin (Tipo) o Clase Orden Familia Gnero Especie Figura 3. Categoras taxonmicas. En esta secuencia, desde la especie hasta el Dominio, cada grupo incluye mayor cantidad de organismos y una variedad ms amplia de caractersticas que el grupo inmediatamente inferior. As, la reunin de los Dominios abarca todas las formas vivientes y, por lo mismo, la totalidad de los rasgos que caracterizan al mundo biolgico. Cada reino es una agrupacin de organismos que tienen muchas caractersticas comunes, por ejemplo, reino animal o reino vegetal. Estos ocho niveles a veces no son suficientes para clasificar de forma clara a todos los seres vivos, y es necesario en algunas ramas crear subdivisiones intermedias, como superorden, que agrupa varios rdenes, o suborden y superfamilia, que agrupan a varias familias, etc.
ACTIVIDAD 2. A continuacin se les dejar en los mesones individuos de distintas especies representantes de animales y plantas. Seleccione 3 de ellos y realice los dibujos correspondientes y como tarea desarrolle la clasificacin taxonmica completa de los individuos elegidos.
Ejemplo:
Figura 4. Clasificacin taxonmica del Perro.
Dibujo Reino: Filo: Subfilo: Clase: Subclase:
Clasificacin Taxonmica
Infraclase: Orden: Suborden:
Familia: Gnero: Especie: Subespecie :
Dibujo Reino: Filo: Subfilo: Clase: Subclase:
Infraclase: Orden: Suborden: Familia: Gnero: Especie: Subespecie : Dibujo Reino: Filo: Subfilo: Clase: Subclase: Infraclase: Orden: Suborden:
Familia: Gnero: Especie: Subespecie :
Bibliografa. Curtis, H.; Sue N.; Schnek, A. y Massarini, A. 2008. Capitulo 23. La clasificacin de los organismos. En: Biologa / Curtis. Sptima edicin. Editorial Mdica Panamericana. Pg. 441-449.
TRABAJO PRCTICO N4 ECOLOGIA COMUNIDADES E INTERACCIONES INTERESPECFICAS E INTRAESPECIFICAS

MV Jessica Leytn Pealoza MV Susana Salas Nez
La Ecologa estudia las relaciones entre los seres vivos y el ambiente que les rodea. A partir de este trmino podemos definir el concepto de biosfera como la zona del planeta donde se desarrolla la vida. Se considera de forma general a la biosfera como el ecosistema global. Un ecosistema es un sistema natural formado por un conjunto de seres vivos (biocenosis o comunidad bitica o comunidad ecolgica), coexistentes dentro de un
espacio definido (biotopo), el cual ofrece condiciones ambientales necesarias para la supervivencia de los organismos y las relaciones que se establecen entre todos estos elementos. Podemos aadir que la biocenosis est formada con individuos de distintas especies, donde se encuentra fitocenosis, que son el conjunto de plantas, por la zoocenosis, que es el conjunto de animales y finalmente por microbiocenosis, que son el conjunto de los microorganismos. Al conjunto de individuos de la misma especie se le denomina poblacin. Por esta razn podemos decir que la biocenosis es un conjunto de poblaciones. A su vez el lugar fsico en el que vive una especie se denomina hbitat. Por ltimo consideramos que al papel funcional que cumple cada individuo se denomina nicho ecolgico. Se podra decir que el nicho ecolgico es la profesin de una determinada especie.
En otras palabras, la biocenosis es una comunidad o un conjunto de poblaciones de distintas especies, las cuales habitan en una lugar geogrfico determinado y estn influenciados por 2 factores :
1. Factores biticos (relaciones que se establecen entre las especies) Pueden ser relaciones de tipo intraespecfico, cuando se dan entre
individuos de la misma especie. stas pueden ser: Familiares Sociedades Coloniales
Tambin pueden ser de tipo interespecfico cuando se dan entre individuos

de distintas especies. Pueden ser: Competencia Parasitismo Depredacin Mutualismo 2. Factores abiticos (luz, temperatura y humedad)
ACTIVIDAD N 1: El profesor le har entrega de fotos de animales en un determinado ecosistema, elija 2 de ellas y determine dos tipos de relaciones intraespecficas y dos tipos de relaciones interespecficas.
Estructura trfica del ecosistema En los ecosistemas la energa que entra es gracias al Sol, pasando de unos seres vivos a otros, gracias a las relaciones alimenticias entre ellos, para terminar dispersndose en forma de calor. Por este motivo debemos comprender los distintos niveles trficos que hay en un ecosistema, segn su forma de obtener el alimento:
1. Productores: son los organismos que obtienen su alimento gracias a la fotosntesis o quimiosntesis, es decir son los auttrofos. Son los nicos capaces de producir materia orgnica a partir de materia inorgnica. 2. Consumidores primarios: se alimentan de los productores, son los herbvoros. 3. Consumidores secundarios: Son los organismos que se alimentan de los consumidores primarios, son los carnvoros o depredadores. 4. Descomponedores: transforman la materia orgnica, procedente de los cadveres y de los excrementos, en materia inorgnica quedando sta a disposicin de los productores. Ejemplos de descomponedores son muchas bacterias y hongos.
Cadenas, redes y pirmides trficas Los niveles trficos del ecosistema estn relacionados entre s, formando las cadenas trficas. stas no se encuentran aisladas sino que se relacionan unas con otras dando lugar a las redes trficas. Para reflejar la estructura trfica de un ecosistema, se usan grficos en forma de pirmide. Se denominan pirmides trficas. En ellas, cada nivel trfico se muestra como un rectngulo de base ancha con un rea proporcional al valor que representa.
ACTIVIDAD N 2: Realiza un ejemplo de una red trfica de la que se pueden obtener al menos tres cadenas trficas (nombra a cada eslabn segn el papel trfico que desempee)
TRABAJO PRCTICO N5 SELECCIN NATURAL Y EVOLUCION MV Jessica Leytn Pealoza MV Susana Salas Nez
La evolucin es la teora que explica el origen de diversas formas de vida como resultado de su composicin gentica e intenta explicarnos como descendieron los organismos modernos. A mediados del siglo XIX Darwin y Wallace formularon la teora como consecuencia de tres procesos naturales; variacin gentica entre miembros de una poblacin, herencia de esas variaciones por la progenie y seleccin natural, la supervivencia y reproduccin de organismos con variaciones favorables. Los organismos que mejor enfrenten los desafos de su ambiente, son los que dejan ms descendencia. Los descendientes heredan los genes que permitieron tener xito a sus progenitores de esta manera, la seleccin natural preservara los genes que favorecen a los organismos a mejorar en su ambiente. El argumento deductivo que describe el proceso fue propuesto originalmente por Charles Darwin 1859) y puede formularse como sigue; las poblaciones naturales pueden incrementar su densidad a un ritmo geomtrico, pero como los recursos son limitantes, el ambiente impone una presin selectiva que da lugar a una disputa por la existencia. Los organismos muestran variabilidad fenotpica en caracteres que son relevantes para dicha disputa, por lo que dentro de las poblaciones hay mortalidad no aleatoria o diferencial con respecto a esos caracteres (ocurre seleccin natural). Como al menos parte de la variabilidad fenotpica es heredable, el cambio evolutivo resulta cuando procrean los sobrevivientes o se adaptan, es decir, cuando ocurre descendencia con cambios genticos.
Esquema de Seleccin Natural Las estructuras, conducta o procesos fisiolgicos que contribuyen a la supervivencia y reproduccin en un ambiente dado se denominan adaptacin, la que ha sido moldeada por millones de aos de mutaciones y seleccin natural. Sin embargo lo que favorece a un organismo a sobrevivir hoy podra convertirse en una desventaja si el ambiente cambia, obligando a que los organismos que cambiaran con el tiempo. Cuando se presentan nuevas mutaciones que aumenta la adaptabilidad de un organismo permitiendo que este rasgos se disemine en la poblacin
Esquema de evolucin
En algunos casos los organismos no experimentan cambios genticos que les permite adaptarse, porque, los cambios ambientales son ms rpidos que los cambios genticos, provocando la extincin de dicho organismo. Material por equipo: Figura de animales plsticos. Cartulinas de diferente color. Lpiz marcador. Bolsas Oscuras
Actividad N1: Cada uno de los integrantes del equipo elija 10 figuras de animales plsticos de distinta especie y se mezclan en una bolsa oscura. Elegir un color de cartulina y rotular con un ambiente determinado. Luego tomar al azar estos animales y tirarlos sobre las hojas de cartulinas para que queden bien dispersos. Ahora cada integrante del grupo ser un depredador y atacar a los animales dispersos en las diferentes cartulinas. Ahora los integrantes de cada equipo sern depredadores y atacaran los animales que estn dispersos en las cartulinas, por lo cual los integrantes se deben disponer alrededor de las cartulinas dndoles la espalda a los animales. El profesor deber contar hasta 3, momento en el cual los depredadores deben voltearse y capturar un animal al azar lo ms rpido posible para volver a la posicin inicial. Si algn depredador no captura ningn animal deber esperar hasta la siguiente cuenta de tres. Este procedimiento anterior se 8 veces. 1. Registra el nmero de animales que ud captur en la tabla I 2. Calcula el nmero de animales de cada especie que sobrevivi. Recuerde que el nmero inicial de individuos fueron 50. 3. Compara los datos con cada grupo y calcula el nmero total de sobreviviente cada animal RESULTADOS: Dibuje la experiencia realizada con los animales y complete la tabla con los datos obtenidos en la actividad anterior.
Depredador
Animales carnvoros Capturados
Animales herbvoros Capturados
Animales omnvoros Capturados
Total de animales capturados
Haga un anlisis cualitativo de la actividad utilizando las siguientes preguntas. 1. 2. 3. 4. 5. Cules fueron los animales ms y menos capturados? Qu caractersticas poseen los animales ms capturados en el ambiente? Por qu crees que hubo una especie menos capturada? Qu ventajas tuvieron unos animales frente a otro? Cul fue tu xito como depredador con respecto a los otros depredadores?
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TRABAJO PRCTICO N 6 MICROSCOPIA I SISTEMAS, COMPONENTES DEL MICROSCOPIO Y PODERES DEL MICROSCOPIO
Jeannette Soto Miranda Ms Sc Dra. Claudia Nez Gonzlez MV Susana Salas Nez MV Jessica Leyton Pealoza
El conocimiento de las estructuras del ser vivo est basado principalmente en el estudio con el microscopio. El microscopio ptico es un instrumento que permite la observacin de objetos y detalles de estructuras tan pequeas que no podran ser observadas a simple vista. Con l, nuestro grado de visibilidad se ampla en cientos o miles de veces, gracias a un conjunto de lentes, dispuestos estratgicamente. Las principales dificultades en la observacin y estudio de estructuras biolgicas son su reducido tamao y transparencia a la luz visible. Dado que el microscopio permite superar estas dos dificultades, su uso y el conocimiento de los principios y tcnicas en microscopa, resultan fundamentales para el desarrollo de la investigacin en ciencias biolgicas El estudio de la clula a travs del microscopio compuesto se remonta a 1950 gracias a la invencin del microscopio por Johannes y Zacharias Jansen. El descubrimiento de la estructura celular de los organismos fue descubierto por Robert Hooke (1665). Posteriormente, Leeuwenhoek, en 1683 y con un microscopio muy rudimentario descubri un universo enmarcado slo por decenas de micrmetros. Desde aquel entonces, el perfeccionamiento continuo al microscopio ha permitido a la Ciencia profundizar cada vez ms en el conocimiento de la ultraestructura celular y de las relaciones intercelulares.
MICROSCOPIO COMPUESTO El microscopio compuesto est constituido por el SISTEMA MECNICO que sostiene los distintos elementos pticos y los objetos que se van a examinar, el SISTEMA DE ILUMINACIN y por un SISTEMA PTICO destinado a producir una imagen aumentada del objeto. 1.- SISTEMA MECNICO 1.1.- Tubo: Cilndro ahuecado destinado a llevar el ocular en su extremo superior y los objetivos montados en el revlver en su extremo inferior. La longitud del tubo debe ser siempre precisa. 1.2.- Revlver: Pieza metlica giratoria situada en la parte inferior del tubo que por rotacin sita los diferentes objetivos en posicin de trabajo.
1.3.- Platina: Superficie plana con una perforacin central para permitir el paso de la luz hacia preparacin. Posee un carro que sostiene la preparacin y que puede desplazarla hacia delante y hacia el lado izquierdo o hacia el lado derecho. 1.4.- Tornillo Macromtrico: Mecanismo de enfoque de avance rpido. 1.5.- Tornillo Micromtrico: Mecanismo de enfoque de ajuste fino. Este tornillo trae una escala graduada y cada marca indica un avance de dos micrmetros (mm). 1.6.- Base o Pie: Estructura slida y pesada que sostiene y da estabilidad a todo el instrumento. 1.7.- Columna: Vstago vertical que se articula con la base y con el tubo del microscopio y lleva el mecanismo de movimiento del mismo. 2.- SISTEMA DE ILUMINACIN. 2.1.- Condensador: Est formado por un sistema de lentes convergentes que enfoca la luz en el plano superior de la preparacin. Existen condensadores de Abbe compuestos de dos lentes (A.N.=1,20), condensadores de tres lentes (A.N.=1,40) y condensadores acromticos corregidos de sus aberraciones esfricas y cromticas. 2.2.- Diafragma Iris: Es una serie de lminas sobrepuestas que se abren y cierran permitiendo regular la cantidad de luz que llega a la preparacin, est ubicado por debajo del condensador. 2.3.- Fuente de luz: Puede ser natural o artificial (luz blanca, ultravioleta, monocromtica, etc.).
2.4.- Anillo porta filtro: Corresponde a un anillo situado bajo el condensador en el cual puede colocarse un filtro de color. Al usar luz artificial rica en radiaciones rojas y amarillas de mayor longitud de onda, es recomendable el uso de filtros azules o verdes que absorban las radiaciones de mayor longitud de onda aumentando as el poder de resolucin del aparato. 3.- SISTEMA PTICO El sistema ptico est constituido por: 3.1.- Objetivos: sistema de lentes convergentes que acta como una lente que se encuentran montados en el revlver. Lo comn es que cada microscopio tenga cuatro objetivos de diferentes aumentos (4x, 10x, 40x, 100x) los que se clasifican en: - Objetivos en seco: en los que el aire se interpone entre la lente y la preparacin. - Objetivos de inmersin: en el cual un lquido (aceite) se interpone entre la lente y la preparacin. 3.2.- Ocular: El ocular es una lente convergente que recoge la imagen intermedia producida por el objetivo y forma una nueva imagen virtual, derecha, y amplificada un cierto nmero de veces (X veces, segn se indica en el propio ocular). Los aumentos ms comunes son 10X y 16X. ACTIVIDAD: A. Investigue en casa, antes de la realizacin de este practico la equivalencia de las siguientes medidas: Milmetro: Micrmetro: Nanmetro: Angstrom:
B. Averige a cuantos micrmetros (mm) corresponde: 1 mm, 1 cm, 1 mt. 1 mm: ________________________________________________________________________ 1 cm: ________________________________________________________________________ 1 m: _______________________________________________________________________
C.- IDENTIFICAR LAS PARTES DE UN MICROSCOPIO. 1. Rotule la fig. 1.
MICROSCOPIO ELECTRNICO. El microscopio electrnico (ME) funciona bsicamente igual que el microscopio ptico, solo que en este caso la fuente luminosa es un haz de electrones. Estas partculas subatmicas presentan una longitud de onda pequea que es inversamente proporcional a su velocidad, esto es, a medida que la velocidad de los electrones aumenta, disminuye su longitud de onda. Los electrones pueden ser acelerados por una diferencia de voltaje; en un microscopio electrnico con un voltaje de aceleracin de 100.000 volts la longitud de onda de un electrn es de 0,004 nm. Tericamente, el lmite de resolucin de este microscopio sera de 0,002 nm, pero en realidad en el mejor de los casos es de 0,1 nm, pues las aberraciones de las lentes electrnicas son ms difciles de corregir que las de las lentes pticas. En un ME, el haz de electrones es producido por el sobrecalentamiento de un filamento o ctodo que emite electrones en la parte superior de una columna de dos metros de alto. Para evitar que los electrones sean desviados por chocar con las molculas de aire, el interior de la columna est al vaco (en el MO el interior del tubo es negro para evitar la reflexin de la luz). Las lentes de un ME son bobinas electromagnticas que permiten cambiar la trayectoria del haz de electrones enfocndolo hacia la preparacin. Previo a la observacin, la preparacin es teida con sales de metales pesados (ej. Tetroxido de osmio). La preparacin se pone en el camino de los electrones, de modo que hay electrones que pasan y otros son dispersados por el material electrn denso. Algunos de los electrones chocarn con la tincin electrn-densa, y otros atravesarn la muestra y
se enfocarn de modo que formarn una imagen sobre una placa fotogrfica o en una pantalla fluorescente. Como los electrones dispersados se perdern del haz y no llegarn a la pantalla, las regiones densas del espcimen se vern oscuras en la imagen, casi negras. D. Investigue por lo menos otros dos tipos de microscopios, y cules son las principales caractersticas que presentan.
CARACTERSTICAS DEL MICROSCOPIO OPTICO: 1.-Poder de resolucin define su rendimiento ptico, ya que corresponde a su capacidad para mostrar como separados dos puntos que realmente lo estn pero que nuestro ojo slo puede ver como una entidad nica (es decir es su capacidad de entregar imgenes con mucho detalle). El mximo poder de resolucin del microscopio ptico es de 0,2 micrmetros (2mm), debido a que la longitud de onda de la luz utilizada (400-700 nm) es un factor limitante. El ojo humano tiene un poder de resolucin de aproximadamente 200 micrmetros
Figura 6. Longitud de onda de luz visible
Figura 7 Diferentes poderes de resolucin.
Al definir esta capacidad del microscopio, obligadamente debe mencionarse el concepto de Lmite de resolucin (LR). Este se define como la mnima distancia que debe haber entre dos puntos para que stos sean vistos como entidades separados. El LR de un microscopio puede calcularse usando la frmula de Abbe: L.R = K. AN Esta ecuacin es vlida incluso para el ojo. El smbolo es la longitud de onda de la luz usada para iluminar el objeto, K es una constante que depende del ndice de refraccin del medio que hay entre el objeto y la lente objetiva (en la distancia libre de trabajo), y AN es la apertura numrica. Apertura Numrica: Los objetos dispersan la luz. De esta manera, los rayos de luz que chocan con un punto son dispersados, formando un cono de luz.
El ngulo de apertura a, se forma entre el rayo que pasa exactamente por el centro de la lente y el ltimo rayo que entra por la periferia de la lente objetiva. Este ngulo permite medir la cantidad de luz que puede ingresar en el objetivo. Si se observan los valores de AN de las diferentes lentes objetivas de un microscopio dado, podr apreciarse que la AN aumenta con el aumento de cada lente, es as que en la tabla siguiente se muestran los aumentos de las diferentes lentes objetivas y sus respectivas AN. Tabla 1.
La frmula de Abbe muestra que para aumentar la resolucin, es decir disminuir el lmite de resolucin, se pueden manipular slo un pequeo nmero de variables: la longitud de onda de la luz que se usa () y la apertura numrica (AN) del objetivo con que se est realizando la observacin. La AN, est limitada a algo menos que 90, ya que sino la lente y el objeto entraran en contacto. La mxima AN lograda en los buenos microscopios, es de unos 85, pero en la mayora de los casos, la apertura es menor, pues los bordes de los lentes no pueden usarse ya que introducen una distorsin de la imagen.
La longitud de onda de la luz que se usa para la iluminacin, es el rea donde se pueden hacer las mayores mejoras. Segn la frmula de Abbe, cuando la AN no puede ser aumentada, es decir, mejorada, se puede disminuir la longitud de onda de la radiacin usada. Por ejemplo, la luz Ultravioleta (luz UV), mejora la resolucin en un factor de dos, pues su longitud de onda es ms corta que la de la luz blanca. Sin embargo el uso de luz UV, requiere que las lentes sean de cuarzo, pues el vidrio comn, obstaculiza casi totalmente el paso de este tipo de luz. Por otro lado, las observaciones de la imagen no pueden realizarse directamente, pues el ojo no capta la luz UV e incluso puede resultar daado por ella. De esta manera, si se usa luz del extremo del espectro de luz visible que presente menor longitud de onda, es decir, cercano al violeta, el lmite de resolucin es de 0,17 m, esto es, se pueden resolver dos puntos que se encuentran a 0,17m de distancia. Esta resolucin permite ver una cantidad considerable de detalles en la mayora de las clulas, cuyos dimetros van de 10 a 20 m, pero muchas estructuras intracelulares an resultan invisibles. Por ejemplo, los ribosomas y las fibras de cromatina miden unos 0.02 m de dimetro y no son visibles con el microscopio ptico. As, es que en muchas investigaciones se hace necesario un mayor poder de resolucin, el que es logrado por el Microscopio Electrnico. 2.- Poder de aumento se define como la capacidad del microscopio ptico (M.O.) de entregar imgenes aumentadas. El aumento de un M.O est dado por el producto
entre el aumento de la lente objetiva que se est utilizando y el aumento de las lentes oculares Aumento Total = Aumento lente objetivas X Aumento lentes oculares.
Figura 8: Demostracin del poder de aumento del microscopio 3.- Poder de penetracin del microscopio ptico se define como la capacidad del M.O de mostrar a foco dos puntos que estn en distintos planos.
ACTIVIDAD. A.- OBSERVACION DE UN TROZO DE PAPEL DE DIARIO. 1. Ud. recibir un trozo de papel de diario. Proceda a colocarlo en el centro de un portaobjetos, agregue un par de gotas de agua y cubra cuidadosamente con un cubreobjetos. Inicie su trabajo con el objeto de menor aumento (4X). 2. Ponga su muestra en el carro de la platina. 3. Accione la fuente de luz. 4. Suba el condensador hasta casi el tope. 5. Regule la cantidad de luz con el diafragma. 6. Mirando a travs de los lentes oculares, gire el tornillo macromtrico hasta que logre ver la preparacin. 7. Ajuste su enfoque con el tornillo micromtrico. 8. Elija una letra cualquiera (de preferencia una d, una b, o una p y obsrvela a travs del Microscopio. 9. Mueva lentamente el carro con el portaobjetos hacia delante y hacia los dos lados. Qu ocurre al efectuar estos movimientos con la imagen del objeto que Ud. est observando? 10. Gire el revlver y trabaje con el objeto 10X. Enfoque con el tornillo micromtrico Puede Ud. observar todava la letra que eligi? ACTIVIDAD N1: OBSERVACION DE UN TROZO DE PAPEL DE DIARIO
1.- DIBUJE CON OBJETIVO DE 4X. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ __________________________________________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ __________________________________________________________
TRABAJO PRCTICO N7 MICROSCOPIA II FORMACION DE LA IMAGEN

Jeannette Soto Miranda Ms Sc Bil. Viviana Rada (c) Ms. Sc.
Una clula animal tpica mide de 10 a 20 m de dimetro, lo que es unas 5 veces ms pequeo que la partcula ms pequea visible al ojo humano desnudo. Las clulas animales no solo son pequeas, sino que tambin son incoloras y transparentes. La descripcin de sus detalles internos se debe en gran parte, a que durante la ltima parte del siglo XIX, se desarrollaron variadas tinciones, las que permitieron aumentar el contraste lo suficiente como para hacer evidentes a las diferentes estructuras intracelulares.
La mayora de las descripciones de la clula y de sus estructuras internas han sido realizadas con ayuda de los microscopios. El primer microscopio til fue construido a fines del siglo XVI, y Leeuwenhock (1632-1823) ayud a mejorar la calidad de las imgenes obtenidas pues se especializ en el pulido de lentes, particularmente de lentes con distancia focal corta, lo que le permiti describir por primera vez protozoos y bacterias. FORMACIN DE LA IMAGEN. Como ya se ha mencionado anteriormente, la gran contribucin de Leeuwenhock, fue el mejoramiento de la calidad de los lentes que constituan el microscopio, por lo que en la actualidad se han logrado imgenes de estructuras celulares que antiguamente eran imposibles de imaginar. Sin embrago el sistema de lentes perfecto an est por disear, todos los sistemas de lentes tienen un nmero menor o mayor de degradaciones o defectos. Los sistemas de lentes estn compuestos por lentes individuales con superficies esfricas; y una de las caractersticas de las superficies esfricas es que no forman imgenes perfectas. ACTIVIDAD 1. A. Consulte en qu consisten las siguientes degradaciones, que pueden darse en la formacin de una imagen en el microscopio. Difraccin. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________
Aberraciones Cromticas. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ Aberraciones Geomtricas. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ B. De las degradaciones que pueden presentarse en una imagen, escoja una de ellas y realice un esquema para indicar en qu consiste.
LUZ VISIBLE. La luz visible forma parte de una estrecha franja que va desde longitudes de onda de 400nm (violeta) hasta los 700nm (rojo). Posee doble naturaleza, por su forma de propagacin (naturaleza ondulatoria) y por la forma de interactuar con la materia (naturaleza corpuscular).
Figura 7. Espectro de la longitud de onda de la luz.
LENTES. Los lentes son objetos que concentran o hacen divergir los rayos de luz. Existen dos tipos principales de lentes: A. Convergentes: son ms gruesas en el centro que en los extremos. B. Divergentes: Son ms delgadas en la parte central que en los extremos. SISTEMA DE LENTES EN EL MICROSCOPIO OPTICO COMPUESTO. Como vimos en el prctico de microscopia I, el sistema ptico del microscopio ptico compuesto est formado por dos tipos de lentes que permiten la formacin de la imagen obtenida al final por el observador (Figura 8):
Figura 7. Formacin de la imagen (Virtual y Real) en el microscopio ptico. Lentes oculares. Son sistemas pticos ubicados en la parte superior del tubo del microscopio. Consistentes en un cilindro hueco que lleva dos lentes (simples o compuestos). La lente superior se denomina ocular y la inferior, de campo o colectora. A veces se usan tambin los oculares de compensacin, que en combinacin con los objetivos apocromticos corrigen la aberracin cromtica restante de los objetivos. As el objetivo apocromtico corregido concentra ms los rayos azules, en tanto que los oculares compensadores concentran ms los rojos. Como resultado de la interaccin la imagen aparece incolora. Los oculares se designan por su aumento (6X, 8X, 10X, 15X, 20X). Esto es importante por cuanto el aumento del microscopio es igual al producto del aumento del ocular por el del objetivo. En resumen, la funcin de los oculares es aumentar la imagen real e invertida dada por el objetivo y corregir algunos defectos de la misma, de manera que el ocular acta como una lupa formando una imagen virtual, aumentada y derecha de la imagen real dada por el objetivo.
Lentes Objetivas: Corresponden a sistemas de lentes ubicados inmediatamente encima del objeto o preparacin. Estas lentes dan una imagen aumentada, real e invertida. Existen diversos tipos de objetivos, los que se clasifican de acuerdo: El medio interpuesto entre la lente y el objeto:
Objetivos a seco: En estas lentes el medio interpuesto entre la lente y el objeto (preparacin) es aire. Pueden ser apocromticos o corrientemente acromticos. Objetivos de inmersin: El medio interpuesto es un lquido viscoso transparente con un ndice de refraccin mayor que el del aire. Existen lentes de inmersin en agua o aceite (comnmente aceite de cedro; n = 1,515). En general este aceite tiene un n semejante al del
vidrio que cubre la preparacin (cubreobjetos) (n = 1,52). Su funcin es concentrar los rayos que se habran perdido por refraccin en el portaobjetos. Correcciones de degradaciones de la imagen:
Acromticos: Estn compuestos por un juego de lentes que corrigen en gran parte la aberracin cromtica, pero no la curvatura de campo. Son los objetivos ms simples y econmicos. Principalmente se usan para trabajos de campo claro, oscuro y contraste de fase. Planacromticos: Adems de la correccin cromtica, tienen correccin de curvatura de campo, permitiendo observar en el microscopio un campo visual con el centro y periferia simultneamente en el foco. Se utiliza principalmente para exmenes de extensas reas en patologa, citologa, histologa y uso general. Es adecuado para la microfotografa. Apocromticos: tienen una refinada correccin de la aberracin cromtica, produciendo imgenes de alta calidad. Tienen como caracterstica una alta apertura numrica. Se utilizan para microfotografa, citologa y todo tipo de observacin detallada en campo claro y fluorescencia.
Correcciones de degradaciones de la imagen Acromticos
Tipos de Lentes Objetivos

Medio interpuesto entre el lente y el objeto
Apocromtico s Planacromtic os
Seco
Inmersin
Agua Aceite
Figura 8. Tipos de lentes objetivos de un microscopio. ACTIVIDAD. A. Observe con atencin el microscopio que tiene ante usted y realice el dibujo de alguno de los lentes objetivos, incluyendo todas las letras, nmeros o palabras que salgan all e indique que significa cada una de ellas.
B. Complete el siguiente cuadro comparativo entre la imagen virtual y real formadas por el microscopio. Imagen Virtual Imagen Real
Bibliografa. Curso de Microscopia 2010. Lab-Tec. Tecnologa para el laboratorio. Coordinacin de Laboratorios. Departamento de Biologa, Facultad de Ciencias, Universidad Iberoamericana de Ciencias y Tecnologa.
TRABAJO PRCTICO N 8 MICROSCOPIA III MEDICIONES CELULARES

Jeannette Soto Miranda Ms Sc
1. Mediciones celulares: Para un tipo de clula normal que ha alcanzado su completo desarrollo y diferenciacin; es raro encontrar variaciones muy amplias de tamao. Slo en circunstancias muy excepcionales esta variacin es mayor que cinco veces su propio tamao; en esto se fundamenta la importancia del tamao para la identificacin de un tipo celular. Adems, existe un lmite para el crecimiento celular dado por la relacin superficie- volumen que al parecer tienen slo cierto grado de tolerancia para cada tipo
celular. El volumen de la clula es muy variable y oscila entre amplios lmites, tanto en los vegetales como en los animales. La superficie de un preparado que se abarca en la observacin microscpica es siempre reducida y tanto ms pequea cuando ms potente es la combinacin de dos lentes (aumento mayor). En los microscopios los objetivos indican el aumento de cada uno de ellos (3.5x; 10x) y adems el aumento del ocular (5x; 10x) el campo visual de l. La medicin de clulas se puede realizar mediante el uso de un ocular graduado, o sino, enfocando un papel milimetrado con lupa. Cuntos cuadraditos caben en el dimetro del mismo campo? A cuntos micrones equivalen? Enfoque con aumento menor y calcule el dimetro en micrones de dicho campo de observacin
Clculo del dimetro del campo visual: Para calcular el dimetro del campo visual (DCV) de cada uno de los objetivos Ud; deber establecer cuntas veces cabe el aumento del objetivo que Ud desea investigar en el DCV de la lupa multiplicado por el aumento de la lupa. DCV Obj = DCV lupa x aumento lupa Aumento objetivo
De esta manera Ud. obtendr el DCV del lente utilizado en milmetros o micrones dependiendo de la unidad de medicin empleada en el DCV de la lupa. Objetivo 4X 10X 40X Inmersin De acuerdo con los datos obtenidos en la tabla anterior proceda de la siguiente manera para cada una de las preparaciones que se le entregar 1. Cuente el nmero de veces que est contenido cada tipo celular en el DCV. 2. Calcule el tamao aproximado de cada tipo celular, dividiendo el DCV del objetivo por el nmero de clulas obtenidos
Aumento
Aumento ocular
Aumento total
DCV del obj. en micrmetros m
Tamao celular= DCV del objetivo N de clulas Ejercicios. 1. Calcule el tamao celular de clulas de catafilo de cebolla, si el objetivo utilizado para su observacin es de 10x, los oculares de 16x y contabilizaron 12 clulas.
2. Cul es el aumento del objetivo en el que se realizaron las observaciones, si el tamao celular de eritrocitos de ave calculado es de 12,5 m y se contabilizaron 32 clulas en el campo visual?
TRABAJO PRCTICO N 9 DETERMINACION DE BIOMOLECULAS CARBOHIDRATOS Y LIPIDOS

Bil. Viviana Rada (c) Ms. Sc. MV Susana Salas Nez MV Jessica Leytn Pealoza
Las biomolculas, son molculas que conforman a los seres vivos, estn constituidas principalmente por cuatro elementos qumicos, el carbono, el hidrogeno, el oxigeno y el nitrgeno, adems de otros que se encuentran en menor proporcin como el azufre y el fosforo.
Carbohidratos. Los tambin glcidos, osas o compuestos ms ampliamente naturaleza, se tejidos de vegetales, estn Carbono, y a veces pueden contener Nitrgeno (N), Azufre (S), o Fsforo (P). carbohidratos, llamados azcares, sacridos, son los abundantes y distribuidos en la hallan en todos los animales como en formados por Hidrogeno y Oxigeno,
Los monosacridos son los carbohidratos ms simples, con una estructura base (CHO2)n, en que n puede ser igual a 4 (tetrosas), 5 (pentosas), 6 (hexosas) o 7 (heptosas). Todos ellos contienen varios grupos hidroxilos (-OH) y un grupo que puede ser aldehdo (-CHO), o bien, un grupo ceto (-CO). Estos grupos funcionales determinan el alto grado de solubilidad de estas molculas en agua, pues les permiten formar mltiples puentes de H. Los monosacridos se asocian a travs de enlaces covalentes denominados enlaces glicosidicos, con prdida de una molcula de agua por enlace. En el proceso de unin de n-monosacridos para formar un polisacrido se liberan (n-1) molculas de agua, una por cada enlace glucosdico. Si se unen dos monosacridos, se origina un disacrido, la unin de otro monosacrido da origen a un trisacrido, y entre cuatro hasta diez monosacridos obtendremos un oligosacrido. Tambin estas uniones pueden constituir glcidos ms complejos, los polisacridos, que son polmeros de ms de diez monosacridos y que juegan un papel importante en el almacenamiento de energa. Tal es el caso del almidn (polmero de glucosa y fructosa) y del glucgeno (polmero de glucosa). La celulosa, tambin polmero de glucosa, es el principal componente de la pared de las clulas vegetales y tiene una gran importancia estructural, pero tambin funcional. Al igual que la quitina, que est presente en las paredes de las clulas de los hongos y en el exoesqueleto de los artrpodos (arcnidos, crustceos, insectos).
Clasificacin de los glcidos.
ACTIVIDAD. Ensayo con Lugol: El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y yoduro potsico, permite reconocer polisacridos, particularmente el almidn por la formacin de una coloracin azul violeta intensa y el glicgeno y las dextrinas por formacin de coloracin roja. El cambio de coloracin se debe a la formacin de un complejo de inclusin termolbil que se caracteriza por presentar distintos colores segn las ramificaciones que presente la molcula, lo cual no corresponde a una reaccin qumica, ya que los tomos del yodo se introducen entre las espirales de las hlices de la molcula, dndole esa coloracin, y desapareciendo al calentar las disoluciones. Metodologa. 1. En tubos de ensayo coloque 3 ml de las siguientes soluciones: Solucin 1. Almidn diluido. Solucin 2. Macerado de Hgado. Agua
2. Coloque 3 gotas de la solucin de lugol. 3. Realice los dibujos correspondientes y escriba las observaciones. 4. Someta los dos tubos de ensayo a un aumento de temperatura utilizando el mechero, realice este paso hasta hervir las disoluciones. 5. Realice los dibujos correspondientes y escriba las observaciones.
Soluciones + Lugol
Observaciones:
SOLUCION 1
SOLUCION 2
AGUA
Soluciones + Lugol (Aumento de temperatura)
Observaciones:
SOLUCION 1
SOLUCION 2
AGUA
DETERMINACION DE LIPIDOS
MV Susana Salas Nez MV Jessica Leytn Pealoza Lorena Llanos Barra Ms Cs Bil. Viviana Rada (c) Ms. Sc.
Los lpidos son biomolcula orgnicas formadas bsicamente por carbono, hidrgeno y oxgeno, este ltimo en porcentajes mucho ms bajos. Adems pueden contener fsforo, nitrgeno y azufre. Es un grupo de sustancias muy heterogneas que slo tienen en comn estas dos caractersticas: Son insolubles en agua Son solubles en disolventes orgnicos, como ter, cloroformo, benceno, etc. Clasificacin de los lpidos.
Figura 11. Clasificacin General de los Lpidos. Los lpidos se clasifican en dos grupos, atendiendo a que posean en su composicin cidos grasos (Lpidos saponificables) o no lo posean (Lpidos insaponificables).
cidos grasos Los cidos grasos son molculas formadas por una larga cadena hidrocarbonada de tipo lineal, y con un nmero par de tomos de carbono. Tienen en un extremo de la cadena un grupo carboxilo (-COOH). Se conocen unos 70 cidos grasos que se pueden clasificar en dos grupos: Los cidos grasos saturados slo tienen enlaces simples entre los tomos de carbono. Son ejemplos de este tipo de cidos el palmtico (16C) y el esterico (18C). Los cidos grasos insaturados tienen uno o varios enlaces dobles en su cadena, con cambios de direccin en los lugares donde aparece un doble enlace. Son ejemplos el olico (18C, un doble enlace) y el linoleco (18C y dos dobles enlaces). Propiedades fsicas de los cidos grasos Solubilidad. Los cidos grasos poseen una zona hidrfilica, y una zona lipfilica. Por eso las molculas de los cidos grasos son anfipticas, pues por una parte, la cadena aliftica es apolar y por tanto, soluble en disolventes orgnicos (lipfilica), y por otra, el grupo carboxilo es polar y soluble en agua (hidrfilico). Punto de fusin. En los cidos grasos saturados, el punto de fusin aumenta debido al n de carbonos, mostrando tendencia a establecer enlaces dbiles entre las cadenas carbonadas. Los cidos grasos insaturados, por su parte tienen menos interacciones de este tipo debido al codo de su cadena. Almacn de energa. Los lpidos apolares cumplen funciones de almacn de energa metablica, lubricacin y proteccin, mientras que los polares tienen funciones estructurales, o sea, que participan en la composicin de las membranas biolgicas. Adems de stos, otros lpidos cumplen otras funciones ms especficas, como vitaminas, hormonas, etc. Propiedades qumicas de los cidos grasos. Esterificacin. El cido graso se une a un alcohol por enlace covalente formando un ster y liberando una molcula de agua.
Saponificacin. Reaccionan los lcalis o bases dando lugar a una sal de cido graso que se denomina jabn. Tambin tienen un efecto espumante cuando la
monocapa atrapa aire y detergente o emulsionante si contienen pequeas gotas de lpido.
ACTIVIDAD. SAPONIFICACIN. Las grasas reaccionan en caliente con el hidrxido de sodio NaOH descomponindose en: glicerina y cidos grasos. stos se combinan con los iones sodio o potasio del hidrxido para dar jabones, que son en consecuencia las sales sdicas o potsicas de los cidos grasos. En los seres vivos, la hidrlisis de los triglicridos se realiza mediante la accin de enzimas especficos (lipasas) que dan lugar a la formacin de cidos grasos y glicerina. MTODO Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%. Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara que contiene la solucin de NaOH sobrante junto con la glicerina formada, otra intermedia semislida que es el jabn formado y una superior lipdica de aceite inalterado. Esquematice utilizando colores el montaje realizado en el laboratorio para la identificacin de lpidos mediante la reaccin de saponificacin, identifique las tres fases observadas, y escriba las observaciones elaboradas por su grupo al respecto. Esquema Observaciones
Bibliografa. Campbell, Mary K. y Farrell, Shawn. 2004. edicin. TRABAJO PRCTICO N 10
Bioqumica.Thomson. Cuarta
DETERMINACION DE BIOMOLECULAS
PROTEINAS
Lorena Llanos Barra Ms Cs Bil. Viviana Rada (c) Ms. Sc. MV Susana Salas Nez MV Jessica Leytn Pealoza
PROTENAS. Las protenas son macromolculas orgnicas, de elevado peso molecular, constituidas bsicamente por carbono (C), hidrgeno (H), oxgeno (O) y nitrgeno (N); aunque pueden contener tambin azufre (S) y fsforo (P) y, en menor proporcin, hierro (Fe), cobre (Cu), magnesio (Mg), yodo (Y), etc. Son biopolmeros de aminocidos unidos mediante enlaces peptdicos y su presencia en los seres vivos es indispensable para el desarrollo de los mltiples procesos vitales. Las protenas desempean un papel fundamental en los seres vivos y son las biomolculas ms verstiles y ms diversas. Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre ellas funciones estructurales, enzimticas, transportadoras y otras. PPTIDOS. Son cadenas lineales de aminocidos enlazados por enlaces qumicos de tipo amdico a los que se denomina Enlace Peptdico (Figura 9). As pues, para formar pptidos los aminocidos se van enlazando entre s formando cadenas de longitud y secuencia variable.
Figura
9. Enlace Peptdico. Este es un enlace covalente que se establece entre el grupo carboxilo de un aminocido y el grupo amino del siguiente, dando lugar al desprendimiento de una molcula de agua.
Para denominar a estas cadenas se utilizan prefijos convencionales como:

a) Oligopptidos.- si el n de aminocidos es menor 10. Dipptidos.- si el n de aminocidos es 2. Tripptidos.- si el n de aminocidos es 3. Tetrapptidos.- si el n de aminocidos es 4. b) Polipptidos o cadenas polipeptdicas.- si el n de aminocidos es mayor a 10 y menor de 50, ya que a partir de este numero de aminocidos tendramos una protena. ESTRUCTURA DE LAS PROTENAS. Es la manera como se organiza una protena para adquirir cierta forma. Presentan una disposicin caracterstica en condiciones fisiolgicas, pero si se cambian estas condiciones como temperatura, pH, etc. pierde la conformacin y su funcin, proceso denominado desnaturalizacin. La funcin depende de la conformacin y sta viene determinada por la secuencia de aminocidos (Figura 10). Estructura primaria. La secuencia o el ordenamiento de los aminocidos en una protena est determinada genticamente, y constituyen este nivel estructural. Esta estructura lineal no es observable ni definible en situaciones fisiolgicas; solo se obtiene en condiciones denaturantes (variaciones de temperatura, de pH, de fuerza inica), en las que la protena no es funcional. Estructura secundaria. Por el contrario todas las protenas, independientemente de la estructura primaria que tengan tienden a adoptar una estructura regular en el espacio, depende de la composicin aminoacidica y del hecho que muchas uniones en una cadena polipeptdica pueden rotar libremente, esta puede ser en hlice , hlice de colgeno o en conformacin . Es de destacar que las tres son configuraciones en hlice diferencindose en el nmero de aminocidos por vuelta (n) y en el dimetro de la hlice. En la hlice , n=4; en la hlice de colgeno, n=3 y en la conformacin , n=2. Estructura terciaria. Incluye la disposicin tridimensional de todos los tomos de la protena, incluidos los de las cadenas laterales y cualquier grupo prosttico (grupo de tomos que no son aminocidos), adems est determinada por los posibles enlaces disulfuro que pueden establecerse ente aminocidos, generalmente alejados uno del otro. Esta estructura, es estabilizada por uniones dbiles (puentes de hidrogeno, uniones inicas, interacciones hidrofbicas, fuerzas de Van der Waals) que se forman entre grupos qumicos de aminocidos no vecinos. La funcionalidad de una protena es fundamentalmente dependiente de esta conformacin globular, en consecuencia la modificacin de factores que alteren este nivel estructural, muy probablemente alteran su funcin, ya que este nivel facilita la solubilidad en agua y as realizar funciones de transporte, enzimticas, hormonales, etc.
Estructura cuaternaria. Este nivel estructural es una propiedad de las protenas que constan de ms de una cadena polipeptdica. Cada cadena es una subunidad, e
interactan entre s en forma no covalente, mediante atracciones electrostticas, puentes de hidrogeno e interacciones hidrofbicas. El nmero de cadenas puede variar desde dos a ms de doce, y pueden ser idnticas o distintas. Ejemplos comunes son los dmeros, trmeros y tetrmeros, formados por dos, tres y cuatro cadenas polipeptdicas respectivamente. Sin duda, la adquisicin de la estructura cuaternaria depende de la estructura terciaria que tiene cada subunidad polipeptdica, esto es as, ya que debe existir afinidad entre ellas, lo que est determinado bsicamente por la forma tridimensional de la macromolcula, el tipo y distribucin de cargas en su superficie, as como tambin el tipo y distribucin de grupos qumicos en la parte ms externa de la protena.
Figura 10. estructurales PROPIEDADES DE PROTEINAS 1. Especificidad.
Niveles de las protenas.
La especificidad se refiere a la funcin; cada una lleva a cabo una determinada funcin y lo realiza porque posee una determinada estructura primaria y una conformacin espacial propia; por lo que un cambio en la estructura de la protena puede significar una prdida de la funcin.
2.
Desnaturalizacin.
Consiste en la prdida de la estructura terciaria, por romperse los puentes que forman dicha estructura. Todas las protenas desnaturalizadas tienen la misma conformacin, muy abierta y con una interaccin mxima con el solvente, por lo que una protena soluble en agua cuando se desnaturaliza se hace insoluble en agua y precipita. 3. La desnaturalizacin se puede producir por cambios de temperatura, variaciones del pH, etc. En algunos casos, si las condiciones se restablecen, una protena desnaturalizada puede volver a su anterior plegamiento o conformacin, proceso que se denomina renaturalizacin. ACTIVIDAD. Reconocimiento de protenas. Reaccin de Biuret. Este reactivo detecta la presencia de protenas, pptidos cortos y otros compuestos con dos o ms enlaces peptdicos en sustancias de composicin desconocida. El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de protenas, y varia a rosa cuando se combina con polipptidos de cadena corta. La reaccin debe su nombre al Biuret, una molcula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la ms sencilla que da positiva esta reaccin, comn a todos los compuestos que tengan dos o ms enlaces peptdicos consecutivos en sus molculas. El reactivo de Biuret est formado por una disolucin de sulfato de cobre (CuSO4) en medio alcalino (gracias a la presencia de NaOH o KOH), este reconoce el enlace peptdico de las protenas mediante la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos, lo que produce una coloracin violeta.
Protena + Cu2+
Metodologa.
Complejo Cu-Protena (violeta)
1. En tubos de ensayo coloque 3 ml de las siguientes soluciones: Solucin 1. Clara de Huevo. Solucin 2. Leche. Solucin 3. Macerado de Papa. Agua
2. A continuacin agregar Reactivo de Biuret (SO4Cu al 1%+ NaOH al 20%). 3. Realice los dibujos correspondientes y escriba las observaciones.
4. En otros tres tubos de ensayo realice los pasos 1 y 2, y somtalos a un aumento de temperatura en el mechero siguiendo las indicaciones del profesor. 5. Realice los dibujos correspondientes y escriba las observaciones. Soluciones + Reactivo de Biuret Observaciones:
SOLUCION 1
SOLUCION 2
SOLUCION 3
AGUA
Soluciones + Reactivo de Biuret (Aumento de temperatura)
Observaciones:
SOLUCION 1
SOLUCION 2
SOLUCION 3
AGUA
Bibliografa.
Campbell, Mary K. y Farrell, Shawn. 2004. edicin.
Bioqumica.Thomson. Cuarta
TRABAJO PRCTICO N11 CROMATOGRAFIA DE EXCLUSION MOLECULAR

Jeannette Soto Miranda Ms. Sc. MV Susana Salas Nez MV Jessica Leytn Pealoza
1.-FRACCIONAMIENTO SUBCELULAR Para analizar la bioqumica de los componentes celulares se debe romper la clula, lo que debe realizarse de modo que dichos componentes conserven su estructura y funcin. El fraccionamiento subcelular es una de las tcnicas ms valiosas, utilizadas para separar y estudiar los componentes celulares y se basa en la separacin de los organelos (ncleo, mitocondrias, peroxisomas, lisosomas etc.) por centrifugacin de acuerdo a sus tamaos. En esta tcnica el primer paso consiste en homogeneizar del tejido, ya sea por mtodos mecnicos (mortero, juguera, homogenizador de pistn) o mtodos qumicos (detergentes), para asegurar la total ruptura de la membrana plasmtica y la obtencin de una suspensin de organelos, membranas y restos celulares, que se denomina HOMOGENEIZADO (H). La homogenizacin se debe realizar en un medio que conserve la estructura y funcin de los distintos organelos, debiendo poseer una temperatura, pH, fuerza inica y osmolaridad adecuadas. Cuando se estn estudiando clulas animales generalmente se usa Sacarosa 0.25M, pH 7,4. Una vez obtenido el homogeneizado, este se separa en sus distintos componentes aplicando un campo gravitacional centrfugo, lo que se denomina FRACCIONAMIENTO. Este fraccionamiento se puede realizar usando dos mtodos: A. Fraccionamiento Subcelular por centrifugacin diferencial: Consiste en la aplicacin de un campo centrfugo creciente al homogenizado. La primera centrifugacin, a baja velocidad, permite separar un sedimento nuclear (fraccin N) de un sobrenadante (SN) postnuclear que se denomina extracto (fraccin E), que contiene los organelos subcelulares y componentes solubles que posteriormente se irn sedimentando a diferentes velocidades. La centrifugacin del extracto permite separar un sedimento de mitocondrias pesadas (fraccin M) y un sobrenadante, que al ser centrifugado a mayor velocidad sedimenta un sedimento que corresponde a organelos ms pequeos (fraccin L) y un sobrenadante que finalmente se separa en un sedimento de microsomas (fraccin P) y un sobrenadante final que corresponde a la fraccin soluble (fraccin S). B.-Fraccionamiento Subcelular por centrifugacin isopcnica
Consiste en la separacin de los componentes celulares por su densidad. Se requiere de la formacin de una gradiente de densidad en un tubo de centrifuga, para lo que se utilizan distintos medios, como: Sacarosa, Percoll, Metrizamida, etc.
El
extracto se coloca sobre esta gradiente y se somete a centrifugacin, los componentes subcelulares migraran en esta gradiente y se detendrn al alcanzar su densidad de equilibrio, de manera que las distintas fracciones quedan separadas en distintas bandas del gradiente pudiendo ser colectadas individual y separadamente (Figura 12). Figura 12. Esquema de una separacin en un gradiente de densidad. 2.- CROMATOGRAFA. Esta metodologa fue desarrollada en el siglo XIX para separar pigmentos vegetales (a lo que se debe su nombre con la raz kroma), en la actualidad comprende varias tcnicas (Figura 13).
Figura 13. Cromatografa en papel de pigmentos vegetales. Todas se basan en un mismo procedimiento: Los componentes de una muestra, disueltos en una fase mvil, se hacen pasar a travs de un medio estacionario, que al interactuar con los compuestos individuales obstaculiza su flujo o paso, en diferentes grados. De esto resulta que: distintas sustancias migrarn a diferentes velocidades. El tipo de interaccin entre la fase estacionaria y los componentes de la muestra es lo que distingue un tipo de cromatografa de otro. Dicha interaccin se basa en uno de los siguientes principios: Intercambio inico Solubilidad Adsorcin
Comnmente la fase estacionaria se empaca en una columna y luego se permite que la fase mvil fluya a travs de sta, en ocasiones con la aplicacin de cierta presin. Estos mtodos se denominan colectivamente CROMATOGRAFA EN COLUMNA. a.- Cromatografa de exclusin molecular: La cromatografa de exclusin molecular, permite separar las molculas de acuerdo a su tamao y forma. En este caso, las molculas que van a ser separadas, no interactan con la fase estacionaria, la que presenta una porosidad definida que permite discriminar distintos intervalos de peso molecular (tamao) debido a que las molculas penetran por los poros de la matriz y son retenidas diferencialmente. As, molculas de mayor tamao que los poros de la fase estacionaria migrarn ms rpido a travs de la columna, ya que son excluidas de los poros; por su parte las molculas ms pequeas penetrarn libremente los poros y sern retenidas por ms tiempo cuanto ms pequeas sean, razn por lo que su migracin a travs de la columna ser ms lenta.
Figura 11: Esquema de cromatografa de excusin molecular
Los materiales ms usados cmo fase estacionaria en este tipo de cromatografa son Sephadex (polisacridos bacteriano), Sepharosa (agarosa) y Sephacryl (acrilamida polimerizada formando esferas). b.- Cromatografa de afinidad. La cromatografa de afinidad, se basa en la propiedad que tienen algunas molculas de unir especficamente a otras de forma no covalente. En este caso, la fase estacionaria se ha derivatizado covalentemente con una molcula (el ligando) que es reconocida por ejemplo, por una o varias protenas. As todos los dems componentes de una mezcla que no tengan afinidad por el ligando no sern retenidos en la columna. La elucin de las molculas de inters, es decir, la eliminacin de su interaccin con la resina, se hace cambiando la fuerza inica de la fase mvil o agregando el ligando libre en la fase mvil.
Figura 12: Esquema de cromatografa de afinidad
c.- Cromatografa de intercambio inico. Cuando los solutos que se desea separar pueden existir en formas inicas, con carga positiva o negativa, se utiliza la Cromatografa de intercambio inico. La fase estacionaria consiste en una sustancia slida que participa en el proceso interactuando directamente con los componentes de la muestra.
Figura 13: Esquema de cromatografa de intercambio inico
Casi todos son productos sintticos (resinas) fabricados en forma de pequeas esferas. La capacidad de la resina para funcionar como intercambiador inico se debe a la presencia de varios grupos qumicos ionizables, que tambin podrn tener cargas negativas o positivas. Cuando la muestra ingresa a la columna empacada los componentes van a interactuar con los componentes inicos de la resina de acuerdo a su carga, de un modo reversible, mediante asociaciones electroestticas. Como las partculas de resina estn inmviles, el resultado ser retrasar el paso de los solutos inicos, a travs de la columna. La elucin en este caso se hace modificando el pH y/o la fuerza inica de la fase mvil. Entre las resinas ms usadas para este tipo de cromatografa se encuentra la DEAECelulosa (dietilaminoetil-celulosa, intercambiador aninico) y la CM- Celulosa (carboximetilcelulosa, intercambiador catinico). Existen adems otros intercambiadores como DEAESepahadex, CM- Sephadex, Dowex, MonoQ y MonoS (los dos ltimos se emplean en los procedimientos de HPLC). ACTIVIDAD. Coloree la figura que aparece a continuacin de acuerdo a lo realizado en el prctico e identifique cada componente utilizado en el prctico. Explique porque algunas molculas son las primeras en eluir de columna. Observaciones: Fase mvil: Eluato 1.
+ Eluato 2.
Fase estacionaria:
Figura 14. Cromatografa de columna. Montaje realizado en el laboratorio.

TRABAJO PRCTICO N 12 MORFOLOGIA CELULAR I CELULA PROCARIONTE

Jeannette Soto Miranda Ms Sc Dra. Claudia Nez Gonzlez Bil. Viviana Rada (c) Ms. Sc.
Las clulas procariontes o bacterias se caracterizan principalmente por no tener su material gentico rodeado de una membrana. Los procariontes, que comprenden bacterias y cianobacterias (antes llamadas algas verde azules), son clulas pequeas, entre 1 y 5 m de dimetro, y de estructura sencilla; el material gentico (ADN) es un cromosoma circular que est unido a un pliegue de la membrana denominado mesosoma, est regin en la que est concentrado el ADN se conoce como nucleoide, pero no hay ninguna membrana que separe esta regin del resto de la clula. 1. Las bacterias individuales pueden presentar tres formas distintas: - Cocos: esferas - Bacilos: bastones - Espirilos: espirales 2. Cuando se observan al microscopio de luz se aprecia que las bacterias se pueden agrupar. Las principales agrupaciones se denominan: - Estafilo: En forma de racimo. - Estrepto: En forma de cadena. A continuacin se observan algunas agrupaciones y formas bacterianas:
Figura 17. Agrupaciones bacterianas.
3. Tambin es posible clasificar a las bacterias dependiendo de qu color se tien cuando se les aplica el mtodo de tincin de Gram: Gram (+): azules Gram (-): rojas
- El color resultante de este mtodo de tincin va a depender de la estructura externa de la bacteria en estudio. La tincin de Gram Es un tipo de tincin utilizado para observar y diferenciar a las bacterias, generalmente en muestras clnicas. Fue desarrollada por el bacterilogo Christian Gram en 1984, y consiste en una serie de pasos que dan como resultado una tincin distintiva de acuerdo a la morfologa de la bacteria. A continuacin se enumeran los diferentes pasos que debe realizar en el laboratorio para esta tincin. 1. Obtencin de las muestras. 2. Extendido en espiral. 3. Dejar secar a temperatura ambiente. 4. Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.) 5. Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. (Todas las clulas Gram positivas y Gram negativas en este paso se tien de color azulpurpura). 6. Enjuagar con agua (No debe caer directamente sobre el extendido). 7. Agregar lugol y esperar entre 1 minuto (Acta como mordiente. Permite que la coloracin violeta se fije ms fuertemente a la pared de la bacteria). 8. Enjuagar con etanol. 9. Agregar acetona y/o alcohol y esperar 4 segundos (parte crtica de la coloracin). 10.Enjuagar con agua.
11.Tincin de contraste agregando safranina o fucsina bsica y esperar 1-2 min (Este tinte dejar de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas). 12.Enjuagar con agua. La explicacin para el resultado es la siguiente: Al teir con el Cristal Violeta, ambos tipos de bacterias se teirn de color azul. Al aplicar el decolorante, como tambin es un desgrasante va a retirar los lpidos de la membrana externa y por lo tanto decolorar las bacterias Gram -, que luego se teirn de rojo con la Safranina. Por el contrario las bacterias Gram +, no se decolorarn ya que el Cristal Violeta permanecer unido a la gruesa Pared Bacteriana de peptidoglicano, y por lo tanto se quedar de color azul. Actividad. Investiga qu tipo de variables pueden ocasionar que se obtengan resultados no deseables cuando se realiza una tincin de Gram (por ejemplo que una bacteria Gram negativa se colore de violeta). ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ Las bacterias al igual que todas las clulas poseen una membrana plasmtica que las separa del medio externo, pero adems presentan estructuras adicionales, Figura 18.
Figura 18. Esquema de la estructura de la pared en bacterias Gram - ( izq.) y Gram + (derecha).
Pared bacteriana: Formada por Peptidoglicanos carbohidratos) presente en bacterias Gram + y Gram
(protenas
Capa de lipopolisacridos: Presente SOLO en las bacterias Gram y de ubicacin ms externa que la Pared bacteriana.
ACTIVIDADES: 1.- DIBUJE CON OBJETIVO DE 100X.

NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ __________________________________________________________ 2.- DIBUJE CON OBJETIVO DE 100X. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ __________________________________________________________
TRABAJO PRCTICO N 13 MORFOLOGIA CELULAR II CELULA EUCARIONTE: CELULA ANIMAL

Entre las clulas procariticas y eucariticas hay diferencias fundamentales en cuanto a tamao y organizacin interna. Las clulas eucariticas, que forman todos los dems organismos vivos, incluidos protozoos, plantas, hongos y animales, son mucho mayores (entre 10 y 50 m de longitud) y tienen el material gentico envuelto por una membrana formando el ncleo. De hecho, el trmino eucarionte deriva del griego, ncleo verdadero; mientras que procarionte significa: antes del ncleo o ncleo primitivo. En las clulas eucariontes, con la excepcin de unos pocos casos, como por ejemplo los glbulos rojos de la sangre de los mamferos, todas las clulas tienen por lo menos un ncleo. En las clulas eucariotas (con ncleo verdadero), ste se encuentra separado del citoplasma por la membrana nuclear, que lo delimita. OBSEVACION DE CELULAS DE MUCOSA BUCAL Al observar clulas de mucosa bucal al microscopio, se observa un mosaico formado por clulas planas, poligonales, ms o menos irregulares; en el que abundan las clulas aisladas, en cuyas caras se perciben los trazos de insercin de unas clulas con otras. Como el material observado procede de la capa superficial, que corresponde a la capa de descamacin, del epitelio pluriestratificado de la mucosa bucal, son en su mayora clulas muertas o clulas que estn en perodo de degeneracin.
Figura 19. Clulas epiteliales de mucosa bucal.
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ __________________________________________________________ OBSERVACIN DE FROTIS DE SANGRE La sangre es un tipo de tejido conectivo, compuesto por una sustancia intercelular liquida denominada plasma (Matriz) en la que se encuentran suspendidos los elementos figurados, que son variados en tamao, estructura y funcin, y se agrupan en: Las clulas sanguneas, que son los glbulos blancos o leucocitos, clulas que "estn de paso" por la sangre para cumplir su funcin en otros tejidos. Los derivados celulares, que no son clulas estrictamente sino fragmentos celulares; estn representados por los eritrocitos que carecen de ncleo y orgnulos (solo en mamferos, Figura 20 y 21), y las plaquetas; son los nicos componentes sanguneos que cumplen sus funciones estrictamente dentro del espacio vascular.
Figura 20. Frotis de sangre de mamfero (Eritrocitos anucleados).
Figura 21. Frotis de sangre de Ave (Eritrocitos nucleados).
Los leucocitos por su parte se organizan en dos grupos: Granulocitos o clulas polimorfonucleares: son los neutrfilos, basfilos y eosinfilos; poseen un ncleo polimorfo y numerosos grnulos en su citoplasma, con tincin diferencial segn los tipos celulares.
Figura 22. Leucocitos Granulocitos. Agranulocitos o clulas monomorfonucleares: son los linfocitos y los monocitos; carecen de grnulos en el citoplasma y tienen un ncleo redondeado.
Figura 23. Leucocitos Agranulocitos.
2.- DIBUJE CON OBJETIVO DE 4OX. NOMBRE DE LA PREPARACIN: AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ __________________________________________________________
3.- DIBUJE CON OBJETIVO DE 4OX. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ __________________________________________________________
TRABAJO PRCTICO N 14 MORFOLOGIA CELULAR III CELULA EUCARIONTE: CELULA VEGETAL

Aunque las clulas de las plantas como las de los animales son eucariticas y presentan caractersticas comunes, las clulas vegetales poseen algunas caractersticas distintivas como la presencia de una pared celular, de plastidios y en general de vacuolas gran tamao. ACTIVIDAD 1. OBSERVACION DE UN TROZO DE CATFILO DE CEBOLLA 1. Utilice un trozo de catfilo de cebolla (Allium cepa), lo puede obtener de la cara convexa de una de las capas de una cebolla. 2. Colquela en un portaobjetos con una gota de agua y tpela con un cubreobjeto. Observe con diafragma cerrado. Deber observar una imagen semejante a la de la figura 24. Realice un esquema de su observacin con aumento total 100X (160X). 3. A la preparacin anterior agregue 1 gota de colorante verde brillante, levantando el cubreobjetos, y observe a travs del microscopio. Realice un esquema de su observacin con aumento total 400x ( 640x si corresponde a su microscopio). Rotule su esquema. 4. No olvide que para realizar observaciones con aumentos mayores SIEMPRE DEBE ENFOCAR CON LOS AUMENTOS MENORES PRIMERO.
Figura 24. Clulas de catafilo de cebolla. Aumento total 100X.
Figura 25. Clulas de catafilo de cebolla. Aumento total 400X.
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ __________________________________________________________ 2.- DIBUJE CON OBJETIVO DE 40X. NOMBRE DE LA PREPARACIN:
_________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ __________________________________________________________
TRABAJO PRCTICO N 15 MORFOLOGIA CELULAR IV CELULA EUCARIONTE: ORGANELOS

A diferencia de las bacterias, que generalmente consisten en un nico compartimento rodeado por una membrana plasmtica, una CELULA EUCARIONTE esta subdividida en compartimentos membranosos funcionalmente diferentes. Cada uno de estos compartimentos se denomina ORGANELO, los que contiene sus conjuntos de enzimas propios y diferentes, y otras molculas especializadas, lo que los convierte en centro de actividades especficas dentro de la clula. Por ejemplo, el Retculo Endoplsmico (RE), es un organelo membranoso que est subdividido en dos tipos diferentes, el Retculo Liso y el Retculo Rugoso. En el Retculo Liso se realiza la sntesis de membranas de renovacin y en el Retculo Rugoso la Sntesis de protenas de membranas, tanto las de exportacin como las de transmembranas. Otro organelo membranoso es el Aparato de Golgi, que cumple funciones en la destinacin de protenas.
Otros organelos importantes son los encargados de la obtencin de Energa en la clula, es decir con la sntesis de ATP (AdenosinTriFosfato), estos son los Cloroplastos que se encuentran en las clulas vegetales y las Mitocondrias, que se encuentran tanto en las clulas animales como en las vegetales. Se ha propuesto que ambos organelos fueron clulas procariontes (bacterias) de vida libre, que se habran incorporado por endosimbiosis a la clula eucariota primitiva, esto significa que fueron ingresadas por endocitosis. Esta proposicin conocida como Teora Endosimbiotica del origen de Mitocondrias y Cloroplastos, se apoya en que estos organelos presentan algunas caractersticas semejantes a las bacterias como el tamao, la presencia de DNA circular cerrado propio y el tamao de sus Ribosomas que es igual al de los procariontes. ACTIVIDADES A. OBSERVACION DE HOJA DE ELODEA 1. En un portaobjetos coloque una gota de agua y ubique sobre ella una hoja de Elodea. Esquematice con aumento total de 400x (640x).
Figura 26. Planta de Elodea. A.- DIBUJE CON OBJETIVO DE 40X.
Figura 27. Cloroplastos en clulas de Elodea.
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TRABAJO PRCTICO N 16 PREPARACIONES HISTOLOGICAS

Jeannette Soto Miranda Ms Sc Dra. Claudia Nez Gonzlez Bil. Viviana Rada (c) Ms. Sc.
Los tejidos son agrupacin de clulas con una estructura determinada que realizan una funcin especializada, vital para el organismo. El Estudio de los tejidos biolgicos, hace referencia a la histologa, que se basa en la estructura microscpica de la gran variedad de tejidos existentes, su desarrollo y funciones, mediante el uso de tcnicas, mtodos y procedimientos de tincin. TCNICA HISTOLGICA.
Es una serie secuencial de pasos a travs de los cuales una muestra de tejido llega a transformarse en delgados cortes coloreados observables al microscopio. Existen dos tipos de tcnicas para preparar clulas y tejidos para la microscopia: - Observacin in vivo o a fresco. La observacin de clulas o tejidos puede realizarse in vivo o a fresco. Sin embargo, la informacin que es posible obtener a travs de estos mtodos es escasa. Con el fin de poder mejorar el contraste y observar con ms detalles se usan colorantes vitales para teir las clulas vivas. - Preparacin permanente. En la realizacin de una preparacin histolgica permanente es necesario seguir la secuencia de pasos que se describen a continuacin. 1. Obtencin muestra: proveer el material para su estudio. Que puede ser a travs de Biopsia, Reseccin quirrgica o Autopsia. 2. Fijacin: este paso tiene como finalidad preservar la morfologa y composicin qumica de las clulas y los tejidos. La fijacin es un proceso en el que se usan agentes qumicos o fsicos para preservar la estructura celular. Agentes qumicos: los ms usados en Microscopa ptica (M.O) son el formol al 10%, alcohol etlico, bicloruro de Mercurio, bicromato de Potasio, y mezclas fijadoras. Agentes fsicos: los ms usados son la desecacin, el calor o el congelamiento, solo o combinados. Uno de los ms empleados con el fin de detener el metabolismo celular es el congelamiento. Una vez congelado el tejido, se pueden aplicar tcnicas de Histoqumica y cuantificar la presencia de ciertos compuestos realizando algunas reacciones qumicas. Para Microscopa electrnica (M.E.) los fijadores deben reunir condiciones especiales que eviten alteraciones de la estructura fina de la clula, de modo que pueda resistir el bombardeo de electrones del M.E. Los fijadores usados en este caso son el formaldehdo, glutaraldehdo, permanganato de potasio y tetrxido de osmio. 3. Deshidratacin: permitir la eliminacin de agua del tejido. Se realiza en soluciones acuosas de menor a mayor grado de agente deshidratante de Alcohol etlico Acetona. 4. Inclusin: el propsito de este paso es endurecer los tejidos para generar los cortes histolgicos. Una vez que ha sido fijado, el tejido debe tener consistencia, para ello es necesario recambiar el agua intra e intercelular por algn compuesto que se endurezca. Para lograr esto, el tejido se deshidrata y luego se impregna con compuestos que le dan consistencia y dureza para el corte. La muestra es sumergida en un medio fcil de cortar. Los medios ms usados en M.O, son la parafina y la celoidina o colodin, mientras que ME se usan resinas plsticas como Epn, Araldita, Resina Epoxi Dow, Spurr y otros. 5. Corte: el propsito es lograr lminas muy delgadas que sean atravesadas por la luz (5 a 10uM). Los micrtomos (M.O.) o ultramicrtomos (M.E.) son los instrumentos usados para efectuar los cortes finos. Los micrtomos usan cuchillas metlicas mientras que los ultramicrtomos utilizan cuchillas de vidrio o diamante.
6. Tincin: la importancia de este paso es fundamental ya que permite colorear o contrastar los tejidos para visualizarlos e identificar estructuras en ellos. Es necesario recordar que las estructuras celulares son en general bastante refringentes (trasparentes) y para que ellas absorban la luz diferencialmente, suele recurrirse a colorantes que tien algunas estructuras de manera diferencial. Por otro lado para la tincin en ME, el montaje y la tincin son procesos distintos a los realizados para la M.O. El corte obtenido en el ultramicrtomo se monta sobre una lmina circular malla finsima que se denomina grilla. La tincin en este tipo de corte tiene como finalidad el aumento del nmero atmico de los constituyentes celulares y no el aumento de la absorcin diferencial de luz como en M.O. Para dicho objetivo de utilizan sales de metales pesados como citrato de plomo y acetato de uranilo. ACTIVIDAD 1. Investigar sobre el fundamento de la tincin Hematoxilina-Eosina.
________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ TIPOS DE CORTES. Existen tres planos tradicionales que corresponden a las tres dimensiones de espacio. Cada plano es perpendicular a cada uno de los otros dos. Desde la posicin anatmica, podemos trazar estos tres cortes o planos anatmicos: el plano sagital (o anterioposterior), longitudinal y transversal (u horizontal) (Figura 28): El plano sagital, anteroposterior o medial pasa desde la parte anterior del cuerpo (o segmento de ste) hasta la posterior, dividiendo a ste en dos mitades, izquierda y derecha. En sntesis, es un plano vertical que pasa a travs del cuerpo en direccin desde al frente hasta atrs, dividiendo a ste en mitades derecha e izquierda. El plano coronal, lateral o frontal o longitudinal pasa desde un extremo lateral del cuerpo (o segmento de ste) hasta el otro, dividiendo a este en dos mitades, anterior y posterior. En resumen, representa un plano vertical que pasa a travs del cuerpo de lado a lado, dividiendo a ste en porciones anterior y posterior y formando un ngulo recto (perpendicular) con el plano sagital.
El plano transversal pasa horizontalmente el cuerpo (o un segmento de ste), dividindolo en mitades superior e inferior. Por consiguiente, es un plano horizontal que pasa a travs del cuerpo, dividiendo a ste en mitades superior e inferior.
Figura 28. Tres planos anatmicos, esquematizados en el cuerpo humano. ACTIVIDAD 2. Utilizando los materiales dados por el profesor, realice los tres tipos de cortes en el cuerpo del pez dado en el laboratorio y realice cada uno de los pasos para realizar una preparacin permanente. Observe al microscopio en objetivo de 40 X, e indique que diferencias encuentras entre cada corte. A. Corte sagital. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ __________________________________________________________ B. Corte Coronal. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ __________________________________________________________
C. Corte transversal. NOMBRE DE LA PREPARACIN: AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ __________________________________________________________
TRABAJO PRCTICO N 18 PREPARACIONES HISTOLGICAS I

Susana Salas Nez, MV Jessica Leyton Pealoza, MV
Los organismos estn compuestos por clulas, matriz intercelular y el lquido extracelular que integra todos estos componentes. Las clulas al ser la unidad funcional bsica de los organismos complejos, se relacionan entre s y tienen un propsito comn; agruparse para formar tejidos, los que a la vez se organizan para formar rganos, que a su vez constituyen sistemas.
Los cuatro tejidos bsicos son; tejido epitelial, tejido conjuntivo, tejido muscular y tejido nervioso. TEJIDO EPITELIAL El tejido epitelial se origina durante el desarrollo embrionario de las tres capas germinativas endodermo, mesodermo y ectodermo. Es un tejido compuesto por clulas muy prximas entre s, sin sustancia intercelular que las separe, avascular, la cual se nutre por el tejido conectivo subyacente que es rica en vasos sanguneos. Este tejido recubre superficies corporales externas e internas, forman una barrera efectiva entre el cuerpo y su medio ambiente. En algunos casos, como en los rganos sensoriales, las clulas epiteliales cumplen la funcin de responder al estmulo proveniente del ambiente. Otras clulas epiteliales son responsables de la absorcin, secrecin y excrecin. TEJIDO CONJUNTIVO El tejido conectivo, originado del mesodermo embrionario, tambin recibe el nombre de tejido de sostn, ya que representa el esqueleto que sostiene otros tejidos y rganos. Constituido principalmente por clulas y matriz extracelular, este tipo de tejido origina el tejido conjuntivo adiposo, cartilaginoso, seo y sangre. Este tejido tiene como funcin proporcionar soporte estructural, servir como medio de intercambio de sustancias, contribuir a la defensa y proteccin del cuerpo y crear un sitio para el depsito de grasa. TEJIDO MUSCULAR El tejido muscular es un tejido especializado, particularmente diseado para ejercer una funcin contrctil. Constituida por clulas llamadas miocitos las cuales tienen forma alargada con el eje longitudinal orientado en direccin del movimiento. En vertebrados existen tres tipos de musculatura: Musculo Liso, musculo esqueletico y musculo cardiaco. Musculo liso: formado por clulas ahusadas con un ncleo central, se encuentra ubicado en las paredes de las vsceras, ej. Intestino, estomago, tero etc. Y su contractibilidad es involuntaria ya que es inervado por el SNA. Musculo esqueltico: compuesto por clulas muy largas, cilndricas y multinucleados donde generalmente sus ncleos se ubican en la periferia de la clula. Su contractibilidad es voluntaria ya que es inervado por el SNS. Musculo Cardiaco: formado por clulas con ncleo central como el musculo liso, pero con estriado transversal similar a la musculatura esqueltica. Este tipo de musculatura solo se encuentra en corazn y es inervada por el SNA.
TEJIDO NERVIOSO
El tejido nervioso es un tejido especializado que integra los estmulos recibidos del ambiente externo al interno provocando reacciones integradas dirigidas en respuesta. Este tejido formado por clulas y escasa matriz extracelular compuesto por neuronas o clulas nerviosas y clulas de sostn llamadas neuroglia. Sus funciones ms importantes son: Recoge informacin procedente desde receptores sensoriales. Procesa esta informacin, proporcionando un sistema de memoria. Genera seales apropiadas hacia las clulas efectoras.
Este tejido media respuestas ms cortas, precisas y rpidas en comparacin con otros tejidos que poseen caractersticas funcionales similares, pero el tipo de respuesta es ms difusa, lenta y prolongada como es en el caso de el tejido glandular endocrino. ACTIVIDAD. OBSERVACIN DE PREPARACIONES HISTOLGICAS PERMANENTES A. Intestino Delgado: Observaremos un corte transversal de intestino delgado de hmster en el cual se puede observar desde el exterior hacia el lumen: 1. Pared intestinal llamada serosa que cubre y protege el tubo digestivo desde el exterior. 2. En seguida podemos observar la capa muscular lisa que permite los movimientos peristlticos. 3. Submucosa que es la capa intermedia y contiene todo el tejido glandular de este rgano. 4. Por ltimo la mucosa que forma evaginaciones llamadas vellosidades intestinales las cuales permiten tener mayor superficie de absorcin. Una adaptacin de la membrana plasmtica de los enterocitos son las microvellosidades, prolongaciones de esta ltima que hacen ms eficiente el proceso de absorcin de nutrientes.
Figura
29. Intestino delgado de rata. Objetivo 10X. Figura 30. Duodeno. Objetivo 40X.
B. Tejido conjuntivo seo: Hueso compacto Observaremos un corte transversal de Tejido seo Compacto en el cual se puede observar desde el interior al exterior: 1. Canal de Havers: Canal Central que contiene vasos sanguneos y nervios. 2. Lminas o laminillas: laminas de 3 a 7 m de espesor, que se disponen de manera concntrica en torno a una canal de Havers. 3. Lagunas: Espacios dispuestos de manera concntrica al igual que las laminillas, lugar donde se ubican los Osteocitos, que son las clulas del hueso maduro. 4. Canalculos Calcforos: Red de finos conductos que conectan a las lagunas y por consiguiente a los Osteocitos ms alejados con los vasos sanguneos presentes en el canal de havers. 5. Osteona: Es la unidad estructural del hueso compacto, es el conjunto de: Canal de Havers ms laminillas, lagunas y canalculos .
Figura 31. Hueso compacto, Ratn (Mus musculus; mamferos), Tcnica: Desgaste.
Observaciones en objetivo 40 X. A. Intestino Delgado. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ ___________________________________________________________ B. Tejido conjuntivo seo NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ ___________________________________________________________ TRABAJO PRCTICO N 18 PREPARACIONES HISTOLGICAS II
Susana Salas Nez, M V. Jessica Leyton Pealoza, MV
TEJIDO MUSCULAR Dentro de este prctico observaremos 3 preparaciones de tejido muscular: Tejido Muscular Liso, Tejido Muscular estriado cardiaco y tejido Muscular estriado esqueltico I.- Observaremos un corte Longitudinal de Tejido Muscular Liso, en el cual apreciaremos: 1. Clulas largas y fusiformes con un ncleo alargado en posicin central. 2. A ambos lados del ncleo se observan pequeas zonas de citoplasma donde se disponen la mayora de los organlos. El resto del citoplasma muestra un aspecto homogneo y es donde se localiza el aparato contrctil que, al contrario que en el msculo esqueltico o el cardiaco, no se organiza en estructuras regulares visibles con el microscopio ptico. 3. Son clulas cuya longitud vara entre 0,02 y 0,5 mm y su dimetro est entre 8 y 10 m. 4. La organizacin de las clulas musculares lisas es diversa y se adapta a la funcin que desempean. As, pueden aparecer aisladas en el tejido conectivo, formando haces muy pequeos que conectan los bulbos pilosos o formando lminas concntricas en el aparato digestivo.
Figura 32. Msculo liso. Ratn (Mus musculus; mamferos). Tcnica: Hematoxilina-eosina en cortes de 8 micras de parafina.
II.- Observaremos un corte Longitudinal de Tejido Muscular Estriado esqueltico, en el cual apreciaremos: 1. Clulas muy alargadas dispuestas en paralelo, son multinucleados, no ramificadas forman sincicios, y sus ncleos se disponen en la periferia celular. 2. Presentan una longitud que puede ir desde los 10 a los 30 mm, con un dimetro de entre 0,1 y 0,5 mm. Las fibras musculares se asocian entre s para formar los fascculos musculares, y stos a su vez se unen para formar el msculo. No todas las fibras musculares son iguales, sino que existen unas denominadas de contraccin lenta y otras de contraccin rpida. Las primeras son ms pequeas, ms oscuras y poseen ms mitocondrias, mientras que las segundas se caracterizan por ser de mayor tamao, ms claras y poseen menos mitocondrias. La actividad de cada tipo depende de las distintas necesidades motoras. Las de contraccin lenta actan en movimientos prolongados y en el mantenimiento de la postura, mientras que la de contraccin rpida en movimientos breves e intensos. 3. Estras transversales: Se deben a la disposicin especial de los filamentos de actina y miosina de su citoplasma, que se organizan en haces paralelos al eje principal de la clula. Las bandas oscuras corresponden a la superposicin entre filamentos de miosina y actina y las claras slo a filamentos de actina. 4. El msculo esqueltico est rodeado por tejido conjuntivo denso denominado epimisio. Adems, cada clula muscular est rodeada por fibras reticulares y colgenas que forman el endomisio. Por estos tejidos conectivos penetran y se dispersan los vasos sanguneos y ramificaciones nerviosas que controlan la contraccin muscular.
Figura 33. Msculo estriado, Ratn (Mus musculus; mamferos). Tcnica: Hematoxilinaeosina en cortes de 8 micras de parafina. Observaciones en objetivo 40 X. A. Tejido muscular liso. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________ ___________________________________________________________ B. Tejido muscular estriado esqueltico. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ ___________________________________________________________ III.- Observaremos un corte Longitudinal de Tejido Muscular Estriado cardiaco, en el cual apreciaremos: 1. Clulas mononucleadas, con el ncleo central y ramificado. 2. Son ms cortas (unas 80 m) y ms anchas (unos 15 micrmetros aproximadamente) que las esquelticas. 3. Las clulas musculares cardiacas estn unidas entre s por los llamados discos intercalares, que aparecen como bandas oscuras en las preparaciones histolgicas. 4. Estras transversales cuyo patrn es similar al de las clulas musculares esquelticas, con bandas oscuras que se corresponde con la superposicin de los filamentos de actina y miosina de su citoesqueleto, y con bandas claras que corresponden slo a los filamentos de actina.
Figura 34. Msculo cardiaco, Ratn (Mus musculus; mamferos). Tcnica: Hematoxilinaeosina en cortes de 8 micras de parafina.
TEJIDO NERVIOSO Observacin de cerebelo de rata: Al observar el corte del bulbo raqudeo con el lente objetivo de menor aumento o 4X se aprecia en el centro de la imagen y como destacado la presencia de la cubierta menngea denominada en esta zona tienda del cerebelo, adems se observan las diferentes capas que caracterizan a este tejido. Se debe destacar al observar la preparacin con lente objetivo de 40X se puede ver en detalle la transicin de las capas molecular-granular y de purkinje estas ltimas clulas compuestas por su citoplasma bien definido y amplio de aspecto finamente granular con ncleo redondo y fuertemente basfilo.
Figura 35. Crebro de Rata. 1. Capa Molecular. 2. Clula de Purkinje. 3. Capa granulosa. Cerebro de rata. En esta preparacin histolgica observaremos la corteza cerebral perifrica de color rosado y en la parte externa ms transparente corresponde al tejido de las meninges parietales o duramadre, otro tejido importante que se observa en el espacio intermedio son numerosos vasos sanguneos dilatados llamados aracnoides y por ltimo una ligera membrana casi imperceptible ubicada subyacente al parnquima cortical llamado piamadre.
Figura 36. Cerebro de rata 40X.
Figura 37. Cerebro de rata 100X.
Al observar la corteza cerebral con lente objetivo de 40X se puede apreciar la presencia de algunas clulas piramidales con su citoplasma eosinfilo y donde se ve una pequea prolongacin a modo de axn en todas ellas. Presencia de pequeos capilares en el tejido de sustento o gla con ncleos de oligodendrocitos, pequeos y fuertemente basfilo.
Figura 38. Corteza cerebral 400X.
Observaciones en objetivo 40 X. C. Tejido muscular estriado cardiaco. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ ___________________________________________________________ D. Tejido Nervioso. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ ______________________
TRABAJO PRCTICO N 19 TRANSPORTE A TRAVS DE MEMBRANA

Jeannette Soto Miranda Ms Sc. Bil. Viviana Rada (c) Ms. Sc.
Desde el punto de vista de la termodinmica, los seres vivos funcionan como sistemas abiertos, intercambiando continuamente materia y energa con su medio. Este intercambio se realiza particularmente a travs de la membrana plasmtica mediante el fenmeno de traslocacin.
El proceso de traslocacin a travs de membranas puede ocurrir gracias a variados mecanismos, como por ejemplo: flujo producido por una diferencia de presin; difusin debida a una diferencia de potencial electroqumico; migracin a travs de un campo elctrico o por la intervencin directa de la membrana celular a travs del transporte. Las diferentes modalidades de traslocacin de membranas estn resumidas en la tabla I: Tabla 1. Modalidades de transporte a travs de la membrana. Transporte Pasivo Difusin simple Difusin facilitada Dilisis Osmosis Transporte Activo Bombas ATP-asa Endocitosis Exocitosis
I. Difusin. Se define como "Desplazamiento de partculas desde una zona de mayor concentracin a otra de menor concentracin". El CO2 y el O2 pasan a travs de casi todas las membranas por difusin. Otras molculas que ingresan a la clula por difusin simple son la urea, el etanol y las hormonas esteroideas. En la difusin, las molculas se mueven al azar en una solucin. S se establece una diferencia de concentracin de molculas en una zona de la solucin, habr movimiento neto de molculas desde la zona de mayor concentracin a la de menor concentracin, y este movimiento depender de la temperatura. Difusin a travs de membrana. Selectividad. Dependiendo de su tamao, algunas molculas pueden atravesar membranas porosas por difusin. La rapidez del movimiento depender de la diferencia de concentracin entre ambas caras de la membrana, y de la naturaleza fsico-qumica de la sustancia que difunde (tamao, carga elctrica, espesor, superficie, estructura). Para que una molcula atraviese una membrana debe pasar, desde la solucin a la membrana. Luego debe moverse en el espesor de esta membrana y luego salir a la solucin que baa la otra cara de la membrana.
Por ejemplo el papel de celofn es una membrana porosa, por lo que seleccionar las molculas que le atraviesan de acuerdo a su tamao. La selectividad de esta membrana estar dada por el tamao relativo de sus poros con respecto al tamao de la molcula que la atraviesa. En una membrana con estructura ms compleja, como la membrana celular, su estructura qumica ser otro factor que afecta su selectividad. La membrana celular est compuesta de lpidos (en gran porcentaje) y por lo tanto el paso de molculas desde la solucin a la membrana depender de la solubilidad en lpidos de esa molcula y por lo tanto tambin depender de su carga. Actividad N 1
a) Preparacin de una mezcla que contiene 5 ml de Almidn al 0,2% y 5 ml de NaCl 1.0 M b) Tomar 10 cm de bolsa de celofn y hacer un nudo muy apretado en un extremo. c) Llenar la bolsa con la mezcla preparada en a) d) Amarrar el otro extremo de la bolsa primero con pitilla y luego hacer un nudo con la bolsa. e) Colocar la bolsa dentro de un vaso de precipitado de 100 ml con 30 ml de agua destilada f) Esperar 30 min g) Determinar que se detallan a continuacin. Determinacin de Almidn. Tome tres tubos de ensayo, mrquelos y agregue a cada uno las soluciones que se indican en la siguiente tabla. Tubo Solucin interna (Inicial) Solucin externa (Final) Agua Reactivo lugol Resultado (+,-) 1 1 ml 1 gota 2 1 ml 1 gota 3 1 ml 1 gota
Determinacin de Cl-. Tome tres tubos de ensayo, mrquelos y agregue a cada uno las soluciones que se indican en la siguiente tabla. Tubo Solucin interna (Inicial) Solucin externa (Final) Agua AgNO3 Resultado (+,-) 1 1 ml 0,1 ml 2 1 ml 0,1 ml 3 1 ml 0,1 ml
Actividad en casa (Antes de realizar este prctico). 1. Qu es el lugol? ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ 2. En qu se basa el reconocimiento de almidn con lugol? ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ 3. Cul es el objetivo del tubo 3? ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________
4. Analice el resultado obtenido con Lugol. ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ 5. Qu reaccin se produce entre Cl y AgNO3 (Nitrato de plata). Escrbala. ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ 6. Analice el resultado obtenido con AgNO3. ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________
Actividad N 1:
1.- Siga las instrucciones descritas en la pgina anterior y dibuje a continuacin.

Determinacin de Almidn Determinacin de Cloro
S. Int.
S. Ext.
Agua
S. Int.
S. Ext.
Agua
Observaciones. Determinacin de Almidn. _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ Determinacin de Cloro. _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ TRABAJO PRCTICO N 20 OSMOSIS Y TONICIDAD CELULAR.
Se define como: Proceso de difusin de un solvente a travs de una membrana semipermeable, desde una zona de mayor concentracin a otra de menor concentracin". La Osmosis es el proceso por el cual el solvente se mueve espontneamente de una regin en la que su actividad es alta, hacia otra donde la actividad es menor. Este proceso ocurre cuando una membrana semipermeable ideal separa un compartimiento que contiene un solvente puro de otro que contiene una solucin de un soluto a una concentracin determinada (o dos soluciones con distintas concentraciones de soluto). La mayor parte de las membranas presentan permeabilidad selectiva, esto significa que algunas molculas de soluto pueden atravesar la membrana mientras que otras no pueden hacerlo. La presin osmtica en un sistema como el descrito, a una temperatura dada, se define como la presin que debe ejercerse sobre la solucin para impedir que ocurra un movimiento neto de solvente entre la solucin y el solvente puro, cuando ambas estn separadas por una membrana semipermeable ideal. Si los solutos son no-electrolitos, la presin osmtica en este sistema ser directamente proporcional a la suma de las concentraciones molares de todos los solutos. De este modo, sistemas ideales con la misma molaridad sern isosmticos (es decir, poseen la misma presin osmtica). Este potencial osmtico es expresado completamente cuando, a una temperatura dada, la solucin se encuentra separada del solvente puro por una membrana semipermeable ideal. Si la membrana es semipermeable (como en el caso de las membranas biolgicas) y permite el paso del solvente mientras que impide el paso de otros solutos, el sistema expresar slo aquella fraccin del potencial osmtico debido a los solutos para los cuales la membrana es impermeable. Esta fraccin de la presin osmtica total del sistema se conoce como tonicidad. Tonicidad: Trmino Fisiolgico que describe cmo vara el volumen celular al colocar la clula en una solucin. Siempre es comparativo. No tiene unidades (Figura 39 y 40). Isotnico Hipertnico Hipotnico Depende de la naturaleza de los solutos no de la osmolaridad.
Figura 39. Estados de tonicidad en clulas animales Actividad N2. (eritrocitos).
Figura 40. Estados de tonicidad en clulas vegetales.
I.
Osmosis y Tonicidad en Clulas Vegetales.
Haga una preparacin fresca de hojas de Elodea.

a) Con aumento 40X enfoque algunas clulas y observe la distribucin de los cloroplastos en el citoplasma. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _________________________________________________________ b) Ponga algunas gotas de una solucin de NaCl 3% sobre la hoja de Elodea. Observe el efecto que produce dicha solucin sobre estas clulas. Haga esquemas y rotule sus observaciones. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ ____________________ c) Usando el mismo mtodo reemplace la solucin 3% de NaCl por agua destilada. Note los cambios en la clula. Haga esquemas y rotule sus observaciones. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _________________________________________________________ II. Osmosis y Tonicidad en Clulas Animales. Haga una preparacin con la sangre de animal suministrada por su profesor. a) Con aumento 40X enfoque algunas clulas y realice los esquemas correspondientes a lo que observa. NOMBRE DE LA PREPARACIN: AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _________________________________________________________
b) Ponga algunas gotas de una solucin de NaCl 3% sobre la preparacin anterior. Observe el efecto que produce dicha solucin sobre estas clulas. Haga esquemas y rotule sus observaciones. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ ____________________
c) Usando el mismo mtodo reemplace la solucin 3% de NaCl por agua destilada. Note los cambios en la clula. Haga esquemas y rotule sus observaciones. NOMBRE DE LA PREPARACIN: AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________
OBSERVACIONES: ___________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _________________________________________________________
Conteste las siguientes preguntas: 1. Cmo es la solucin de NaCl respecto del citoplasma celular? ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ 2. Qu sucede en las clulas de Elodea y las clulas sanguneas, es diferente la reaccin de la clula al ser de origen animal o vegetal? ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ 3. Al iniciar la actividad prctica, Ud. deber conocer los siguientes trminos: i) Crenacin: ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ii) Plasmlisis: ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ iii) Turgencia: ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ iv) Citlisis: ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________
TRABAJO PRCTICO N21 TRABAJO PRCTICO N22 MOTILIDAD CELULAR, CILIOS Y FLAGELOS Lic. Cs. Rodrigo Barahona S. MV, Jessica leyton P MV, Susana Salas N La motilidad y el movimiento celular se deben a un conjunto de estructuras protecas denominadas Cilios y Flagelos: Son apndices celulares filiformes, que poseen movimientos ondulantes, con un haz de microtbulos en su interior y recubiertos de membrana plasmtica. Los cilios y los flagelos no presentan diferencia en su estructura, sino en su nmero y longitud: los cilios tienen entre 5 a 10 m de longitud y estn en mayor nmero, mientras que los flagelos tienen ms de 50 m y estn en escaso nmero (1 a 2). El movimiento de los cilios puede empujar a las clulas a travs de un fluido (como en el caso del protozoo Paramecium) o puede desplazar un fluido por encima de la superficie de un grupo de clulas de un tejido. En el cuerpo humano, un nmero muy elevado de cilios tapizan el tracto respiratorio, barriendo capas de moco, atrapando partculas de polvo, expulsando bacterias hacia la cavidad bucal, donde son tragadas y posteriormente eliminadas. De la misma forma los cilios del oviducto ayudan al transportar los embriones hasta el tero. En cuanto a los flagelos, su funcin est sometida exclusivamente al movimiento de la clula eucarionte. Protozoos y algunas clulas especializadas como los espermatozoides y algunas esporas en plantas menores son capaces de moverse utilizando este tipo de anexo celular. Ambos tipos de estructuras locomotoras si bien cumplen funciones familiares, se mueven en forma diferente. As, los cilios se mueven como un ltigo, mientras que los Flagelos se mueven de forma sinusoidal, como lo hace una serpiente.
Esquema de movimiento de cilios y flagelos.
Esquema de un cilio o Flagelo El movimiento de un cilio o de un flagelo est producido por el batido de la parte central, llamada Axonema, se compone de microtbulos, que a su vez estn formados de protena tubulina, en conjunto con protenas asociadas. Cada flagelo y cilios esta compuesto de 9 dobletes de esta protena, ms un par central, formando la famosa configuracin 9+2 (Ver Fig. 42). Entre las protenas asociadas que podemos encontrar en los cilios y flagelos se cuentan la nexina, una protena capaz de unir los dobletes entre si y la dinena, una protena que interacta con los dobletes generando la fuerza de movimiento. Esto lo logra hidrolizando ATP. Cuando esta protenas se expresan de forma incorrecta causa algunas enfermedades comunes como la neumona crnica y la infertilidad (Lodish 2000, Alberts 2002). El largo de los cilios y flagelos est controlado por un complejo proteico parecido a los centrolos en cuanto a su estructura, denominados corpsculos basales. Cuando uno de estos anexos locomotores se rompe o se separa, rpidamente, se proyecta uno nuevo a
partir de estos corpsculos. As, las clulas eucariontes especializadas, se aseguran de perder estos apndices fundamentales.
Fig. 42. Composicin molecular de un axonema, mostrando la estructura bsica de cilios y flagelos, ms las protenas accesorias. Algunos organismos protozoarios y unicelulares, presentan este tipo de apndices, como Paramecium, Chlamydomonas y Euglenas (Ver Fig. 43 a, b y c)
Fig. 43. a) Forma tpica de Paramecium spp.; b) Forma tpica de Chlamydomonas spp. y c) Forma tpica de Euglena spp.
Paralelamente, en la clula el movimiento de los organelos y otros componentes celulares no es azaroso. El citoesqueleto acta como un organizador de los movimientos en los distintos organelos. Esta organizacin se complementa con una serie de protenas locomotoras que se unen en un extremo al citoesqueleto y en el extremo opuesto a alguna mitocondria, vescula sinptica, macromolculas o cualquier sustancia que necesite ser desplazada. Estas protenas locomotoras son: Miosina (se une a actina), Quinesina y dinena (ambas se unen a microtbulos), provocando una red de trfico compleja, parecida a un complejo carretero de una ciudad (Ver Fig. 44, Alberts 2002).
Fig. 44. Movimiento de los organelos y vesculas sinpticas a partir de redes microtbulos y protenas locomotoras en clulas nerviosas. Uno de los fenmenos ms conspicuos en el movimiento de los organelos, se denomina Ciclosis. Consiste en el flujo constante del citoplasma en una clula, junto a diferentes molculas y organelos. Este fenmeno puede verse con relativa facilidad en las clulas vegetales, cuando observamos cloroplastos que se distribuyen cerca de la pared celular, pero internamente en la clula. ACTIVIDADES 1. Observacin de organismos unicelulares y sus apndices locomotores: En un porta objeto coloque una gota de agua obtenida de una charca de agua dulce. Monte su preparacin al microscopio observndola en el menor aumento para ubicar los pequeos seres que ah se encuentran. Una vez que localice a algn protozoo o alga, Trate de dibujar y observar al individuo, ponindole nfasis en la estructura que lo mueve (cilios o flagelos). Si es necesario, fije la muestra con alguna tincin como azul de metileno, azul de toloudina o lugol. Dibuje al menos 3 ejemplares distintos en el objetivo 40X. A. Observacin de organismo 1.
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B. Observacin de organismo 2. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
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C. Observacin de organismo 3. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ __________________________________________________________
2.
Observacin del movimiento de los organelos celulares en clulas vegetales.
En una muestra de Elodea spp. puesta al porta objeta, observe el fenmeno de ciclosis que afecta a los cloroplastos de esta planta. Describa como es el movimiento de estos y donde se distribuyen. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________
AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ __________________________________________________________
TRABAJO PRCTICO N 22 MECANISMOS DE DIVISION CELULAR: MITOSIS

Jeannette Soto Miranda Ms Sc.
T.M. Marcelo Espinoza Neumann, (c) Ms Sc.
El ciclo celular en organismos eucariontes culmina con el proceso de divisin celular, denominada Mitosis. Generalmente, la mitosis va acompaada de la divisin del citoplasma o citocinesis. La duracin de cada una de las etapas del ciclo celular, se encuentra en relacin directa con el nmero de clulas que se encuentran en cada etapa en un momento determinado. As, el nmero de clulas observadas en una etapa es alto, indica que el tiempo requerido para que dicha etapa se complete es mayor que aquellas que presentan un menor nmero de clulas. Estos valores pueden medirse de forma que se puede calcular el ndice mittico, que representa el porcentaje de clulas que se encuentran en divisin en un momento determinado. El mismo razonamiento puede aplicarse para el clculo del ndice de Fase que representa el porcentaje de clulas que en un determinado momento se encuentran en cualquier etapa de la mitosis. En los diferentes tejidos, la duracin total del ciclo celular vara de acuerdo con la actividad proliferativa. En tejidos de mucha proliferacin el ciclo celular es de corta duracin, pero en tejidos diferenciados las clulas pueden detenerse indefinidamente en una etapa y tener ciclos celulares muy largos. En la siguiente tabla se muestra valores de tiempo en las etapas del ciclo celular, para diferentes tipos celulares.
Uno de los tejidos ms usados para poder observar las distintas fases de la mitosis es el meristemo apical de las races en crecimiento que es un tejido en proliferacin, donde se encuentran clulas en divisin activa. Actividad I. Preparacin de placas para observar mitosis. Previo a esta actividad se debe tomar una cebolla, envolverla con un papel aluza la totalidad de la cebolla, dejando libre la parte donde encontramos las races, ya que esta parte ser sumergida en agua para que para que la raz se desarrolle. 1.- Elegir una raz de cebolla a unos 5 a 10 mm de longitud. Cortarlas y situarlas sobre un portaobjeto. Estas han sido tratadas previamente con colchicina, un inhibidor de la polimerizacin de la tubulina. 2.- Eliminar la cofia de la raz (capa protectora cuyas clulas no estn en divisin).
3.- Hacer cortes transversales (rodajas) lo ms fino posible. Recoger los cortes 2 o 3, y situarlos en el centro de un portaobjetos nuevo. 4.- Colocar unas gotas de colorante orcena actico-clorhdrica, sobre los cortes. Teir por lo menos durante 10 minutos. 5.- Terminado el perodo de tincin flamear suavemente 2 o 3 veces, sin que el colorante llegue a hervir. 6.- Una vez enfriada la preparacin se ha enfriado se coloca un cubreobjetos y se hace el aplastamiento o squash apretando con fuerza el cubreobjetos contra el portaobjetos, con el pulgar. Con cuidado de que la superficie sobre la cual se realiza esta operacin sea lisa, para no romper la muestra. Retirar el exceso de colorante con un papel absorbente (tratar de no mancharse). 7.- Una vez finalizados los pasos anteriores, ubique la preparacin en el microscopio para observarla detenidamente, ubique clulas en las diferentes etapas de la mitosis y realice los dibujos correspondientes. NOMBRE DE LA PREPARACIN: _________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ ________________________________________________________________
Actividad II.
Calculo de ndice mittico e ndices de fases. Una vez finalizada la actividad anterior, Ud. deber reconocer clulas interfsicas y en diferentes etapas de la mitosis. Adems, calcular el ndice Mittico e ndice de Fases del tejido meristemtico apical de raz de cebolla. Cuente en la preparacin un total aproximado de 250 clulas anotando la etapa del ciclo en que se encuentra cada una de ellas. Anote sus resultados en la Tabla que se encuentra a continuacin.
Calcule el ndice Mittico de acuerdo a la expresin: IM = (N CELULAS EN MITOSIS / N TOTAL DE CELULAS) X 100 Utilizando los mismos datos calcule el ndice de Fases de acuerdo a: IF = (N CELULAS EN LA FASE / N CELULAS EN MITOSIS) X 100 Suponiendo que la duracin del ciclo en el tejido analizado es de 16 horas, calcule el tiempo aproximado de duracin de cada estado en horas y minutos. Compare sus datos con los del total general de su grupo y discuta la discrepancias (si las hubiera) entre los resultados.
TRABAJO PRCTICO N 23
MECANISMOS DE DIVISION CELULAR: MEIOSIS

MV. Susana Salas Nuez Lorena Llanos Barra Ms Cs
Reproduccin sexual Formacin de un nuevo individuo por la combinacin de dos clulas sexuales haploide (gametos). Combinacin de informacin gentica de dos clulas distintas que tienen la mitad de la informacin gentica original. Los gametos para la fertilizacin generalmente vienen de padres distintos. 1. La hembra produce un vulo. 2. El macho produce espermios. Ambos gametos son haploides, con de la dotacin cromosmica. La Meiosis es un proceso para convertir una clula diploide en un gameto haploide, y causar un cambio en la informacin gentica para incrementar la diversidad de los descendientes.
PRIMERA DIVISIN MEITICA PROFASE
La profase I de la primera divisin meitica es la etapa ms compleja del proceso y a su vez se divide en 5 subetapas, que son: Leptoteno o Leptonema: Es el estado inicial de la profase I en la meiosis. Los cromosomas se hacen visibles y a menudo se disponen en una configuracin en ramillete, con uno o ambos extremos de los cromosomas reunidos en un punto de la membrana nuclear interna. Los cromosomas estn formados por dos cromatidas hermanas estrechamente ligadas. Es la etapa donde se produce la duplicacin de la cadena de ADN. Zigoteno: Los cromosomas homlogos comienzan a acercarse hasta quedar apareados en toda su longitud. La disposicin del centrmero a lo largo del cromosoma parece estar determinado genticamente. Los cromosomas homlogos se reconocen entre s gracias a que los telmeros de stos se encuentran anclados en regiones prximas de la membrana nuclear. Adems el eje proteico central observado en el leptoteno pasa a desempear un papel importante en el apareamiento de los homlogos al formar los elementos laterales del complejo sinaptonmico, una estructura proteica con forma de escalera formada por dos elementos laterales y uno central que se van cerrando a modo de cremallera y que garantiza el perfecto apareamiento entre homlogos. En el apareamiento entre homlogos tambin est implicada la secuencia de genes de cada cromosoma, lo cual evita el apareamiento entre cromosomas no homlogos. Adems durante el zigoteno concluye la replicacin del ADN.
Paquiteno: una vez que los cromosomas homlogos puros estn perfectamente apareados formando estructuras que se denominan bivalentes se produce el fenmeno de sobrecruzamiento (crossing-over) con recombinacin gentica, esto es, el intercambio de material gentico entre los cromosomas homlogos de cada pareja. La recombinacin gentica est mediada por la aparicin entre los dos homlogos de una estructura proteica de 90 nm de dimetro llamada ndulo de recombinacin, o complejo sinaptonmico. En l se encuentran las enzimas que median en el proceso de recombinacin. Durante esta fase se produce una pequea sntesis de ADN, que probablemente est relacionada con fenmenos de reparacin de ADN ligados al proceso de recombinacin. Diplonema o diploteno: Luego los cromosomas homlogos se separan entre s deshaciendo de este modo el complejo sinaptonmico que haban formado para el sobrecruzamiento. Se aprecia despus que no quedan separados totalmente, sino que quedan los antiguos ndulos de recombinacin que en esta fase ya pasan a llamarse "quiasmas". Diacinesis: Esta etapa apenas se distingue del diploteno. Podemos observar los cromosomas algo ms condensados y los quiasmas. El final de la Diacinesis y por tanto de la profase I meitica viene marcado por la rotura de la membrana nuclear. Durante toda la profase I continu la sntesis de ARN en el ncleo. Al final de la Diacinesis cesa la sntesis de ARN y desaparece el nuclolo.
Figura 45. Formacin del complejo sinaptonmico. Se observa los principales cambios ocurridos en la profase I, en cada una de sus subfases.
Metafase I
Al llegar a esta etapa la membrana nuclear y los nuclolos han desaparecido y cada pareja de cromosomas homlogos ocupa un lugar en el plano ecuatorial. En esta fase los centrmeros no se dividen; esta ausencia de divisin presenta una diferencia importante
con la meiosis. Los dos centrmeros de una pareja de cromosoma homlogos se unen a fibras del huso de polos opuestos. Anafase I Como en la mitosis la anafase comienza con los cromosomas movindose hacia los polos. Cada miembro de una pareja homologa se dirige a un polo opuesto. Telofase I Esta telofase y la interfase que le sigue, llamada intercinesis, son aspectos variables de la meiosis I. En muchos organismos, estas etapas ni siquiera se producen; no se forma de nuevo la membrana nuclear y las clulas pasan directamente a la meiosis II. En otros organismos la telofase I y la intercinesis duran poco; los cromosomas se alargan y se hacen difusos, y se forma una nueva membrana nuclear. En todo caso, nunca se produce nueva sntesis de DNA y no cambia el estado gentico de los cromosomas. Meiosis II Profase II Esta fase se caracteriza por la presencia de cromosomas compactos en nmero haploide. Los centriolos se desplazan hacia los polos opuestos de las clulas. Metafase II En esta fase, los cromosomas se disponen en el plano ecuatorial. En este caso, las cromtidas aparecen, con frecuencia, parcialmente separadas una de otra en lugar de permanecer perfectamente adosadas, como en la mitosis. Anafase II Los centrmeros se separan y las cromtidas son arrastradas por las fibras del huso acromtico hacia los polos opuestos. Telofase II En los polos, se forman de nuevo los ncleos alrededor de los cromosomas. En suma, podemos considerar que en la meiosis hay una duplicacin del material gentico (fase de sntesis del DNA) y dos divisiones celulares. Inevitablemente, ello tiene como resultado productos meiticos con solo la mitad del material gentico que el original.
ACTIVIDAD. Dibuje con objetivo 40X. NOMBRE DE LA PREPARACIN:

_________________________________________________________________________________ AUMENTO TOTAL: __________________________ TINCIN: _________________________________ OBSERVACIONES: ___________________________
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TRABAJO PRCTICO N 24 CARIOTIPO

Bil. Viviana Rada (c) Ms. Sc.
El cariotipo es el conjunto de cromosomas de cada especie. Poseen una serie de caractersticas, como la forma, el tamao, la posicin del centrmero y las bandas que presentan al teirse. Estas caractersticas permiten identificar a los cromosomas de las distintas especies. Los Tipos de Clulas que pueden utilizarse para realizar un cariotipo, son muy variadas, dentro de ellas las ms utilizadas son: Leucocitos Mdula sea Fetales HeLa
Figura 46. Procedimiento para la obtencin del cariotipo.

CARIOTIPO HUMANO. Los cromosomas se encuentran en el ncleo de todas las clulas del cuerpo. Llevan las caractersticas genticas de cada individuo. Cada cromosoma tiene un brazo corto sealado como "p" y un brazo largo sealado como "q". Los pares de cromosomas humanos se numeran del 1 al 22, con un par 23 desigual, cromosomas X e Y para los varones, y dos cromosomas X para las hembras. Para ordenar los cromosomas, se realiza un cariograma, en el que los cromosomas son agrupados por el tamao, la posicin del centrmero y sus bandas. Los cromosomas se clasifican en 7 grupos, de la A a la G, atendiendo a su longitud relativa y a la posicin del centrmero, que define su morfologa. De esta manera, el cariotipo humano queda formado as: Grupo A: Se encuentran los pares cromosmicos 1, 2 y 3. Se caracterizan por ser cromosomas muy grandes, casi metacntricos. En concreto, 1 y 3 metacntricos; 2 submetacntrico. Grupo B: Se encuentran los pares cromosmicos 4 y 5. Se trata de cromosomas grandes y submetacntricos (con dos brazos muy diferentes en tamao). Grupo C: Se encuentran los pares cromosmicos 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, X. Son cromosomas medianos submetacntricos. Grupo D: Se encuentran los pares cromosmicos 13, 14 y 15. Se caracterizan por ser cromosomas medianos acrocntricos con satlites. Grupo E: Se encuentran los pares cromosmicos 16, 17 y 18. Son cromosomas pequeos, metacntrico el 16 y submetacntricos 17 y 18. Grupo F: Se encuentran los pares cromosmicos 19 y 20. Se trata de cromosomas pequeos y metacntricos. Grupo G: Se encuentran los pares cromosmicos 21, 22, Y. Se caracterizan por ser cromosomas pequeos y acrocntricos (21 y 22 con satlites).
Por acuerdo los cromosomas sexuales X e Y se separan de sus grupos correspondientes y se ponen juntos aparte al final del cariotipo. Mediante el cariograma se pueden analizar anomalas numricas y estructurales, cosa que sera muy difcil de observar mediante gentica mendeliana.
ACTIVIDAD. El objetivo de esta prctica es aprender a reconocer los cromosomas humanos, elaborar un cariotipo a partir de una fotografa y saber determinar las anomalas cromosmicas ms frecuentes. La clula con la que vamos a trabajar se ha obtenido a partir de un cultivo de sangre perifrica, despus se hizo un tratamiento con tripsina y posteriormente tincin con Giemsa para obtener un bandeo G. 1. Recorte cada uno de los cromosomas que salen en la fotografa que esta a continuacin, y realice el procedimiento correcto para su identificacin, agrpelos y pguelos en el lugar correspondiente. GRUPO A.
GRUPO B
GRUPO C
GRUPO D
GRUPO E
GRUPO F
GRUPO G
X/Y O X/X
La lnea puntiaguda es para colocar all los centrmeros, preste atencin a este detalle pues solo as podr clasificarlos de acuerdo a la posicin del centrmeros. 2. Indique a sexo pertenece el individuo y si este presente alguna mutacin cromosmica. Fundamente. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________
Nota: Separe esta pgina de la gua, y recorte cada uno de los cromosomas. Preste mucha atencin, para que no pierda ninguno de ellos.
TRABAJO PRCTICO N 25 LEYES DE MENDEL ESTUDIOS DE CRUZAMIENTOS SIMULADOS

Desde hace 3.800 millones de aos, la reproduccin hace posible la continuidad de la vida. Generacin tras generacin, los progenitores transmiten a sus hijos las instrucciones que les permiten desarrollarse y transformarse, y aunque la herencia biolgica ha sido un tema de gran preocupacin desde los comienzos de la historia humana, el estudio cientfico de la herencia, conocido actualmente como gentica, empez realmente en la segunda mitad del siglo XIX. Fue en el siglo XVIII que comenzaron a realizarse experiencias ms rigurosas de hibridacin de plantas, es decir, de cruzamiento artificial de individuos de especies o variedades diferentes. Pero los resultados de estas experiencias eran muy diferentes entre si. Entro los naturalistas que realizaron este tipo de prcticas se encontraba Gregor Mendel (1822-1884), un monje austriaco, quien inicio los experimentos que ms tarde proporcionaran las primeras respuestas rigurosas a las preguntas sobre la herencia. Mendel contribuyo a demostrar que las caractersticas heredadas se encuentran en unidades discretas que se redistribuyen en cada generacin. Estas unidades discretas que Mendel llamo elemente, podran considerarse el equivalente de las que en la actualidad conocemos como genes. EL MTODO EXPERIMENTAL DE MENDEL. La eleccin de Mendel de la planta de guisantes para sus experiencias no es original, sin embargo, su xito en la formulacin de los principios fundamentales de la herencia, en la que otros haban fracasado, se debi a su enfoque imaginativo del problema y al correcto planteamiento de los pasos que deba realizar. Someti a prueba una hiptesis muy especfica a travs de una serie de experimentos cuidadosamente planeados. Eligio para su estudio solo caractersticas hereditarias con variantes bien definidas y mensurables. No solo estudio la progenie de la primera generacin, sino tambin de la segunda y de las subsiguientes generaciones. Conto los descendientes y luego analizo los resultados matemticamente. Aunque su matemtica era simple, la idea de que un problema biolgico poda estudiarse de manera cuantitativa era sorprendentemente nueva.
Fue as que llegamos a las dos leyes propuestas por Mendel, que rigen aun en la actualidad la herencia de los caracteres:
Primera Ley de Mendel o Ley de la Uniformidad Establece que si se cruzan dos razas puras para un determinado carcter, los descendientes de la primera generacin sern todos iguales entre s (igual fenotipo e igual genotipo) e iguales (en fenotipo) a uno de los progenitores. Segunda Ley de Mendel o Ley de la segregacin Conocida tambin, en ocasiones como la primera Ley de Mendel, de la segregacin equitativa o disyuncin de los alelos. Esta ley establece que durante la formacin de los gametos cada alelo de un par se separa del otro miembro para determinar la constitucin gentica del gameto filial. ACTIVIDAD. Para realizar esta actividad prctica es necesario recordar previamente algunos conceptos de Gentica, como son: gen, alelo, homocigosis, heterocigosis, dominancia, recesividad, codominancia, genotipo y fenotipo. ESTUDIO DE CRUZAMIENTOS SIMULADOS. Se estudiara la transmisin de caracteres de herencia mendeliana. En realidad los cruzamientos no se han realizados de ah que sean simulados. Se han construido modelos utilizando materiales accesibles como son las semillas de diferentes guisantes. 1. Observe y anote las caractersticas de los dos padres y de la F1. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ 2. Cuente las semillas de la F2.
Granos claros: Granos oscuros: Nmero total de granos:
3. Cul es la proporcin de granos claros y oscuros? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ 4. A qu tipo de distribucin terica se asemeja esta distribucin? Fundamente. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________
5. Qu puede decirse acerca de la herencia de este carcter? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ 6. Escrbanse los genotipos de todos los individuos. ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ Bibliografa. Curtis, H.; Sue N.; Schnek, A. y Massarini, A. 2008. Capitulo 8. Los experimentos de Mendel y el nacimiento de la gentica. En: Biologa / Curtis. Sptima edicin. Editorial Mdica Panamericana. Pg. 148-157. Cuello, J.; Hernndez, M.; Josa, J.; Masseg, J. y Salvador, S. 1981. Prcticas de Biologa. Editorial Fontalba. Pg. 133-135.
TRABAJO PRCTICO N 26 ACIDOS NUCLEICOS: EXTRACCION DE ADN

Prof. Ival vila Herrera T.M. Marcelo Espinoza Neumann, (c) Ms Sc. Bil. Viviana Rada (c) Ms. Sc.
El acido nucleico ADN. El ADN es un polmero de alto peso molecular formado por dos cadenas o hebras de monmeros llamados nucletidos. Cada nucletido est conformado por molculas ms pequeas: una base nitrogenada (adenina, guanina, citosina o timina), un hidrato de carbono (desoxirribosa) y un grupo fosfato.
Los cidos Nucleicos son polmeros lineales en los que la unidad repetitiva, llamada nucletido (Figura 15), est constituida por: (1) una pentosa (la ribosa o la desoxirribosa), (2) cido fosfrico y (3) una base nitrogenada (purina o pirimidina). La unin de la pentosa con una base constituye un nuclesido (zona sombreada de la figura). La unin mediante un enlace ster entre el nuclesido y el cido fosfrico da lugar al nucletido.
Fig. 15. Nucletido. Para identificar los componentes y la estructura tridimensional del ADN sus elementos bsicos fueron aislados a partir de ADN purificado sometido a rompimiento por agentes fsicos y qumicos. ACTIVIDAD N. 1 El objetivo fundamental de esta prctica es utilizar sencillas tcnicas (extraccin, filtracin, precipitacin y tincin) para poder extraer el ADN de un tejido animal, por el aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar y a la vez a partir de la longitud enorme de las fibras confirmar que en el ncleo el ADN se encuentra superenrollado o replegado. Procedimiento: Antes de comenzar el experimento dejar tres horas el alcohol en el refrigerador. Colocar 2 gramos de sal en el mortero. Mida en la probeta 9 mL de agua destilada. Mida 1 mL de lavaloza. Moler el trozo de carne en el mortero, junto con los otros reactantes. Formar una mezcla homognea. Agregar 8 mL de ablandador de carne y seguir macerando.
Tome la mezcla macerada y colquela en un tubo de ensayo. En un vaso precipitado vierta 50 mL de agua y colquelo sobre un trpode con rejilla sobre un mechero. Introduzca el tubo de ensayo en este vaso precipitado. Es importante que mantenga la temperatura hasta 60C, porque al aumentar podra degradarse el ADN. Introducir un termmetro para que mantenga controlada la temperatura. Debes calentar tu mezcla solo por 10 minutos. Toma el tubo de ensayo e introducirlo en un recipiente con tubos de hielo por 5 minutos. Luego, toma la mezcla y filtrarla con una gasa. Virtala en un tubo limpio. Vierta con cuidado 10 mL de alcohol fro por el borde del tubo de ensayo. Se debe formar una capa de alcohol sobre la mezcla filtrada. Observar la formacin de burbujas alrededor del ADN. Tomar una varilla y muvala circularmente alrededor del ADN. De esta forma podrs aislarlo del resto de la mezcla. Colocar la muestra en 1 mL de agua destilada estril, en un tubo eppendorf. Almacenar a -20C.
ACTIVIDAD N 2
Figura 16. Diagrama del resultado final de la extraccin de ADN en el laboratorio. Responda: 1. Qu observan?, a qu estructura corresponde? ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ 2. Cmo es posible observar el ADN, si se trata de una molcula que se encuentra dentro de las clulas que son microscpicas? Explica con fundamento.
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3. En base a otras actividades practicas realizadas en el laboratorio qu usara para teir y visualizar claramente el ADN del resto del contenido celular? ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ 4. Qu funcin cumple el detergente en la extraccin de ADN? ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ 5. Qu rol tiene el alcohol en el aislamiento del ADN? ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________
TRABAJO PRCTICO N 27 TECNICAS MOLECULARES I: REACCION EN CADENA POLIMERASA y ELECTROFORESIS

A partir de los aos setenta las tcnicas de anlisis molecular del genoma han revolucionado el conocimiento del nivel molecular de muchos procesos biolgicos normales y patolgicos. Actualmente, es posible localizar, identificar, amplificar y secuenciar los genes que codifican a las protenas esenciales, y los elementos reguladores de su expresin. Tambin, es factible provocar la expresin de genes en sistemas apropiados, para analizar su funcin o producir grandes cantidades de las protenas que codifican. Al igual que han surgido tcnicas que permiten obtener animales de experimentacin, generalmente ratones, en los que se ha anulado selectivamente la funcin de un gen (animales knockout), o se ha incorporado un gen nuevo (animales transgnicos). Todo esto ha permitido un conocimiento ms preciso de las bases moleculares de muchas enfermedades, y de nuevas posibilidades teraputicas. Desde el punto de vista biomdico, las tcnicas moleculares del genoma permiten: Identificar alteraciones genticas asociadas a enfermedades hereditarias. Identificar las mutaciones responsables de desordenes genticos no hereditarios. Proporcionar mtodos extraordinariamente sensibles de diagnostico precoz y diferencial de muchas enfermedades. Producir protenas u otras molculas de inters farmacolgico a un costo razonable. Identificar a los individuos ms susceptibles a una determinada patologa, sentando las bases de una medicina preventiva.
Todas estas posibilidades, incluyen tcnicas como la clonacin, caracterizacin y secuenciacin de genes y amplificacin del DNA mediante la reaccin en cadena polimerasa, entre muchas otras, que dependen del objetivo al que se desea llegar. A continuacin, dentro de estas tcnicas se explicara con detalle la Reaccin en Cadena Polimerasa. Reaccin en Cadena Polimerasa
El PCR es una tcnica enzimtica de amplificacin in vitro del DNA, extraordinariamente verstil por su sensibilidad, especificad y sencillez. En teora, permite amplificar cualquier fragmento de DNA cuya secuencia se conozca parcialmente, hasta el punto de obtener material suficiente para cualquier aplicacin partiendo de una nica copia del DNA. Ello permite analizar muestras tan reducidas como un bulbo piloso, algunas cellas mucosas obtenidas en un lavado bucal, una gota de sangre, o incluso restos fsiles. Principio terico. La PCR se basa en el conocimiento de la maquinaria enzimtica de la replicacin del DNA. Un DNA monocatenario dirige la sntesis de la hebra complementaria, adems de un pH y una fuerza inica adecuados, el medio contiene: a) Un cebador que hibride el extremo 3 de la monohebra, b) un DNA polimerasa, c) los cuatro nucletidos trifosfato y d) iones Mg2+como acten como factor de la polimerasa. En la PCR, se utilizan como cebadores dos oligonucletidos, uno para cada una de las hebras del ADN bicatenario diana, que delimitan la zona a amplificar. La reaccin consta de 3 pasos repetidos cclicamente (Figura 31):
Figura 47. Descripcin del proceso de un PCR en el primer ciclo de reaccin. Comnmente se utilizan 35 ciclos para amplificar el fragmento que se requiere. -Desnaturalizacin, a temperaturas del orden de 95C, que separan las dos hebras del ADN. -Hibridacin de los cebadores, reduciendo la temperatura hasta que se formen hbridos estables de cada cebador. -Elongacin, a temperatura compatible con la accin de la polimerasa, que cataliza la formacin de una monohebra complementaria, en sentido 5 3 a partir del cebador. Como consecuencia aparecen dos dobles hebras por cada molcula inicial. Se emplean polimerasas termoestables, obtenidas de microorganismo termfilo, que resisten las elevadas temperaturas de la fase de desnaturalizacin. Los tres pasos descritos constituyen un ciclo. Un PCR tpico suele constar de unos de 30 ciclos consecutivos, en los que el nmero de copias del DNA diana aumenta
exponencialmente (Figura 32). Aunque los ltimos ciclos suelen tener un rendimiento menor que los primeros, las cantidades de DNA obtenido permiten normalmente la clonacin del producto, o su anlisis directo por electroforesis o secuenciacin.
Figura 48. En una reaccin de PCR los fragmentos se amplifican en forma exponencial. Actividad 1. Investiga que aplicaciones biomdicas tiene la PCR. _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ Actividad 2. A. Con anterioridad a la actividad del laboratorio, investiga y escriba a continuacin un protocolo para la realizacin de un PCR. _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________
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B. A partir del ADN obtenido en el prctico de extraccin de ADN de clulas animales, realice un PCR. Existen diferencias entre el protocolo investigado por usted y el utilizado en el prctico? Explique cules son esas diferencias. _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________
ELECTROFORESIS
Jeannette Soto Miranda Ms Sc Bil. Viviana Rada (c) Ms. Sc.
Electroforesis.
Es un mtodo de laboratorio en el que se utiliza una corriente elctrica controlada con la finalidad de separar biomolculas segn su tamao y carga elctrica a travs de una matriz gelatinosa. El desplazamiento ocurre en un medio lquido sostenido por una sustancia slida inerte, que es la fase estacionaria, mientras que la fase lquida, es una solucin salina amortiguadora con pH y fuerza inica conocidos, y sirve para conducir la electricidad en el momento que se aplica la diferencia de voltaje (V).
El grado de movimiento de cada sustancia cargada (molcula), dentro del campo elctrico formado se denomina movilidad electrofortica.
Las molculas siempre se mueven hacia el electrodo de polaridad opuesta a la carga neta de la molcula (los cationes se mueven hacia el ctodo y los aniones hacia el nodo). El medio necesita estar amortiguado al pH que produce la direccin y taza apropiada de migracin.
Cuando las molculas que se quieren separar tienen un peso molecular alto, como las protenas o cidos nucleicos, la fase estacionaria consiste en un gel semislido y el procedimiento se denomina Electroforesis en gel. Los geles ms usados son los de agarosa y los de poliacrilamida.
Los geles de agarosa estn formados por largos polmeros ligados entre s, de una forma de agar altamente purificado que es producido por un alga, lo que le confiere a la matriz una caracterstica porosa. En el caso de los geles de poliacrilamida, el polmero es la poliacrilamida (el monmero es la acrilamida) y los entrelazos estn dados por otra molcula que es la Bis-acrilamida.
La porosidad de la fase estacionaria va a depender del polmero que se use, los geles de agarosa presentan poros grandes en cambio los poros de los geles de poliacrilamida son ms bien pequeos. Esta caracterstica depender tambin de la concentracin del polmero que se est usando, aunque en ambos casos ocurrir que a mayor concentracin menor ser el tamao de los poros.
Las concentraciones ms usadas en los geles de agarosa fluctan entre el 0,8% para molculas muy grandes, hasta 3% en caso de que las molculas sean ms pequeas que 200 pb, en tanto que en acrilamida las concentraciones van desde 6%-8%, para separar DNA, y de 8% a 15%, e incluso 17%, si lo que se quiere separar son protenas.
En general los geles de acrilamida se usan para separar protenas y fragmentos de DNA entre 50 y 1000 pares de bases (pb), por el contrario los geles de agarosa se utilizan preferentemente para separar fragmentos de DNA de ms de 1000 pb, aunque a concentraciones altas de agarosa (3%) es posible separa fragmentos de DNA ms pequeos que 1000 pb.
La velocidad de migracin de las molculas depender de su:

Peso molecular. Configuracin secundaria y terciaria. Atraccin por una carga elctrica, esto es, la electronegatividad de la molcula.
Estos mtodos son ventajosos ya que los geles se solidifican en forma de barras o como placas delgadas, son firmes y de fcil manipulacin, son transparentes por lo que la observacin de materiales coloreados no es complicada y por ltimo despus de la coloracin se pueden procesar de modo que se conviertan en muestras permanentes que pueden ser guardadas por tiempo indefinido.
Sin importar el tipo de gel que se est usando, o las molculas que se estn separando, siempre debe usarse un Marcador de Peso Molecular. Este consiste en una mezcla de protenas o fragmentos de DNA, de peso molecular conocido, que estn comercialmente disponibles. De esta manera aplicando el mtodo indicado en el ejemplo, ser posible calcular por interpolacin de los datos, el Peso Molecular de una protena o fragmento de DNA que nos interese.
La corriente elctrica se genera poniendo el gel en una cmara de electroforesis, la que se conecta a una fuente de poder que es la encargada de producir una diferencia de potencial entre el polo positivo y el polo negativo. De esta manera las partculas cargadas se movern en este campo elctrico segn su carga, como se dijo anteriormente.
En las cmaras de electroforesis el polo positivo se indica de color rojo, en cambio el color negro indicar la posicin del polo negativo.
Las soluciones de DNA o de protenas que quieran estudiarse son por lo general incoloras, por lo que es muy difcil controlar el avance de las muestras en el gel, por esta razn debe usarse un Marcador de corrida. Con este fin se utilizan sustancias coloreadas, que permiten controlar el avance de las muestras a travs del gel. Las ms usadas son el azul de bromo fenol (azul morado intenso) y el xilen xianol (azul claro, calipso).
Fuentes de error en la electroforesis La electroforesis es una tcnica muy sensible y puede ser afectada por muchos errores experimentales como: 1. Temperatura. 2. Velocidad de la polimerizacin. 3. Niveles de catalizador. 4. Pureza de reactivos. 5. Tiempo de corrida. 6. de los pasos muestras. EsquemaPreparacin de utilizados (Explique el protocolo).
C. Realice una electroforesis en gel de agarosa siguiendo las indicaciones de su profesor. D. Esquematice los principales pasos realizados y equipos utilizados en el laboratorio de este prctico. Rotule indicando cada una de sus partes.
Dibuje los equipos e instrumentos utilizados para realizar la electroforesis.
Bibliografa.
Lozano, J.; Galindo, J.; Garca-Borrn, J.; Martnez, J.; Peafiel, R. y Solano, F. 2002. Bioqumica y biologa molecular para ciencias de la salud. 2 edicin. McGraw-Hill Interamericana. Parkes H. 2003. Food for Thought. http://www.chemsoc.org/ chembytes/ezine/1999/parkes_ may99.htm, accesado 08/03. Vierstraete A. 2001. Principle of the ~avierstr/principles/pcr.html, accesado 01/11. PCR http://allserv.rug.ac.be/
TRABAJO PRCTICO N 27 GENETICA DE POBLACIONES

La gentica de poblaciones se encarga de estudiar la estructura gentica de las poblaciones naturales con el propsito de clarificar los mecanismos que intervienen en el proceso evolutivo, constituyendo una descripcin matemtica de la constitucin gentica de una poblacin y de la forma cmo cambian la frecuencia alelica a travs del tiempo. El principio ms importante en la gentica de poblaciones es la ley de HardyWeinberg, que busca relacionar las frecuencias de alelos y de genotipos localizados en cromosomas nucleares, en poblaciones de individuos 2n, que se reproducen sexualmente, estableciendo que en una poblacin mendeliana, la frecuencia de los genes y de los genotipos permanece constante. En esta prctica se podr comprobar los conceptos tericos vistos sobre gentica de poblaciones para observar y comprender que tales conceptos son aplicables a poblaciones naturales. Equilibrio de de Hardy-Weinberg En gentica de poblaciones, el principio de Hardy-Weinberg (PHW) (tambin equilibrio de Hardy-Weinberg o ley de Hardy-Weinberg) establece que la composicin gentica de una poblacin permanece en equilibrio mientras no acte la seleccin natural ni ningn otro factor y no se produzca ninguna mutacin. Es decir, la herencia mendeliana, por s misma, no engendra cambio evolutivo. Recibe su nombre del matemtico ingls G. H. Hardy y del fsico alemn Wilhelm Weinberg que establecieron el teorema independientemente en 1908 (Cavalli-Sforza y Bodmer, 1981) La ley de Hardy y Weinberg establece lo siguiente:
p2 + 2pq + q2 = 1.0 Donde: p = frecuencia del alelo dominante q = frecuencia del alelo recesivo Por lo tanto aplicando esta ley es posible conocer las frecuencias de los individuos con: Genotipo dominante, que est dado por el trmino p2 Genotipo heterocigoto, que est dado por el trmino 2pq Genotipo homocigoto recesivo, que est dado por el trmino q2
Actividad. El profesor entregara por equipos de trabajo individuos de poblaciones de Nodilittorina peruviana para trabajar durante la sesin de laboratorios. Estos ejemplares deben ser entregados al final de la sesin. Nodilittorina peruviana Nodilittorina peruviana, es uno de los gasterpodos ms comunes en las franjas altas y medias de las plataformas rocosas intermareales del norte y centro de Chile. Una serie de estudios han sugerido, pero no demostrado, que su distribucin espacial y abundancia pueden ser afectadas por las variaciones en la temperatura del agua, roca y aire. Debido a las caractersticas geogrficas de la costa de Chile, desde norte a sur, los individuos de esta especie viven sometidos a diferentes regmenes de temperatura. (Rojas, et, al., 2000). Actividad 1. A. A partir de las observaciones realizadas a los ejemplares suministrados en el laboratorio, complete las siguientes tablas.
Figura 49. Nodilittorina peruviana.
Direccin de lneas presentes en la concha de los caracoles

DIRECCION DE LAS LINEAS EN LOS CARACOLES CERCANOS A LA PLAYA N DE EJEMPLAR LONGITUDINALES TRANSVERSALES QUEBRADAS Sin lneas
TOTAL
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 TOTAL
Los genotipos de estos caracoles de acuerdo al patrn de las lneas presentes en la concha son los siguientes: Lneas longitudinales: AA (Homocigoto dominante) Lneas transversales: aa (Homocigoto recesivo) Lneas quebradas: Aa (Heterocigoto)
B. Realice los dibujos correspondientes a cada fenotipo indicado anteriormente.
C. Realice los siguientes clculos y complete las tablas con la informacin faltante.
Frecuencia fenotpica. Se calculan estimando la proporcin de individuos portadores de cada fenotipo del total de individuos que constituyen la poblacin. Fenotipos Lneas longitudinales Lneas transversales Lneas quebradas Total Frecuencia Fenotpica
Frecuencias Genotpicas
Se refieren a la proporcin de individuos que portan un determinado genotipo en una poblacin mendeliana, como suponemos que estamos frente a un caso de codominancia, cada genotipo se expresa en fenotipos diferentes por lo que son iguales a las frecuencias fenotpicas. Genotipos Lneas longitudinales Lneas transversales Lneas quebradas Programa Biologa General y Celular Medicina Veterinaria
Departamento de Biologa
Frecuencia Genotpica
Total
138
Frecuencias Genticas Si conocemos las frecuencias genotpicas de una poblacin podemos calcular las respectivas frecuencias gnicas. Frecuencias genticas A (p)= AA (p2) + Aa (pq)= a (q)= aa (q2) + Aa (pq)=
Actividad 2. En base a la actividad 1 establezca conclusiones acerca del trabajo realizado. __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________
Bibliografa. L. L. Cavalli-Sforza / W. F. Bodmer, Gentica de poblaciones humanas, Ediciones Omega S. A. Barcelona 1981. ISBN: 84-282-0660-0
Fras, D. Principios de gentica de poblaciones y evolucin: Modelos de especiacin. 2008. Santiago de Chile, ISBN 978-956-319-572-9
Rojas, Jose Miguel; Farina, Jose Miguel; Soto, Rubn E. y Bozinovic, Francisco. Variabilidad geogrfica en la tolerancia trmica y economa hdrica del gastrpodo intermareal Nodilittorina peruviana (Gastropoda: Littorinidae, Lamarck, 1822). Rev. chil. hist. nat. [online]. 2000, vol.73, n.3 [citado 2010-02-01], pp. 543-552.
McQuaid C. D. 1996. Biology of the gastropod family Littorinidae. I Evolutionary aspects. Oceanography and Marine Biology: an Annual Review. 34: 233-262.

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