BIOCATLISIS (INFORMACIN COMPLEMENTARIA)

Cintica de reacciones catalizadas por enzimas La ecuacin de Michaelis-Menten puede reexpresarse de la siguiente forma:

Haciendo de la expresin anterior, una representacin grfica de 1/r vs 1/[S] nos da una representacin lineal con una pendiente = KM/k2[E]T y el corte con el eje y igual a 1/r max. Tal grfica es llamada representacin Lineweaver-Burk (Figura 1).

Figura 1: Representacin Lineweaver-Burk para una reaccin catalizada por enzimas.

EJERCICIO DETERMINACIN DE UNA REACCIN CATALIZADA POR ENZIMAS: Determine los parmetros Michaelis-Menten r mx y KM para la reaccin catalizada por una enzima:

rea

Ureasa

2NH3 + CO2 + H2O

La cintica de reaccin es dada como una funcin de la concentracin de rea (sustrato S) en la tabla 1:

Tabla 1:

Solucin: Se invierte la ecuacin de Michaelis-Menten:

Lo que observamos es que la ecuacin de Michaelis-Menten reescrita representa la ecuacin de una recta, en donde la pendiente b es igual a KM/rmax, mientras que el corte con el eje y, a, es 1/rmax. Con los datos de la tabla anterior se calcula los valores de 1/r y 1/[S]. Los mismos son representados en la tabla 2. Tabla 2.

Resolviendo la ecuacin lineal anterior encontramos que: a = 0,755 b = 0,0207 Entonces, a = 1/rmax = 0,755.

De all, rmax = 1,325 b = 0,0207 = KM/rmax. Despejando KM se tiene que: KM = 0,0207 rmax = 0,0207 x 1,325 = 0,027

Sustituyendo KM y rmax en la ecuacin de Michaelis-Menten:

La siguiente figura muestra la representacin Lineweaver-Burck para la los datos anteriores:

Figura 2: Representacin Lineweaver-Burk para la reaccin de rea catalizada por la ureasa.

ALGUNOS PROCESOS INDUSTRIALES CATALIZADOS POR BIOCATLISIS. Aspartame a travs de sntesis de peptido enzimtico.

Aspartame es un ster dipeptido, -L-aspartil-L-fenilalamina-OMe, 200 veces ms dulce que la sucrosa. El mismo es utilizado como edulcurante bajo en caloras. Uno de la ms exitosa e interesantes sntesis del Aspartame es el proceso enzimtico Toyo Soda, el cual se realiza a escala industrial en la DSM (Dutch State Mines, Geleen, NL). La formacin del enlace pptido es catalizado por la termolisina, una proteasa de zinc neutra. La enzima empleada fue encontrada en el grupo bacterial Bacillus proteolicus/thermoproteolyticus. En este proceso el aminocido fenilalamina y el cido asprtico son acoplados por la enzima. El proceso es mostrado en la figura 3.

La reaccin es limitada por el equilibrio, por lo que el producto tiene que ser removido de la mezcla a fin de lograr altos rendimientos. En exceso del metilester de fenilalamina, el aspartame protegido forma un anin carboxilato pobremente soluble, el cual precipita de la mezcla de reaccin. Esto lo hace fcil de remover por filtracin. El ltimo paso del proceso es remover el grupo protector por hidrogenacin.

Figura 3: Ruta sinttica para la sntesis de Aspartame.

Acrilamida a partir de acrilonitrilo.

Acrilamida es un importante qumico industrial que es procesado en polmeros y copilmeros solubles en agua y el cual encuentra aplicacin como agente adelgazante para pinturas, cubrimiento de superficies, aditivo para el mejoramiento de aceites, etc. La produccin de acrilamida usando clulas inmovilizadas de Rhodococcus rhodochrous es un importante ejemplo de un proceso comercial catalizado por una liasa. La enzima responsable para la adicin de agua al doble enlace del acrilonitrilo es la hidratasa nitrilo.
+ hidratasa nitrilo
H2O H2C CH CONH 2

H2C

CH

L-aminocidos a partir del proceso de aminoacilasa.

El mtodo mejor establecido para la produccin enzimtica de L-aminocidos es la separacin de racematos de N-acetil-DL-aminocidos por aminoacilasa.

El L-aminocido es separado por intercambio inico o por cristalizacin, en el paso siguiente el remanente N-acetil-D-aminocido es reciclado por racemizacin termal bajo condiciones drstica. El proceso aminoacilasa fue comercializado por Tanabe Seiyaku (Japn) en 1969 usando el primer reactor de enzima inmoblizada. Degussa (Frankfurt, Alemana) introdujo en 1982 el reactor de membrana de enzima aplicando L-aminoacilasa enantioselectiva soluble.

Figura 4: Reactor de membrana de enzima escala piloto para la produccin de Laminocidos.